1-QISM Feniletanol glikozid lipozomasi FAK/PI3K/Akt signalizatsiya yo'lini tartibga solish orqali PDGF-induktsiyalangan HSC faollashuvini inhibe qiladi.
Mar 06, 2022
Shi-Lei Chjan 1, Long Ma 1, Jun Chjao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye va Tao Liu 1,*
1 Toksikologiya kafedrasi, Xalq salomatligi maktabi, Shinjon tibbiyot universiteti, Shinjon Uyg'ur avtonom viloyati, Xinyi yo'li No393, Urumchi 830011, Xitoy
2 Uygʻur tibbiyoti boʻyicha asosiy laboratoriya, Shinjon Materia Medica instituti, Shinjon Uygʻur avtonom rayoni, Tyanshan tumani, Sinxua janubiy yoʻli № 140, Urumchi 830004, Xitoy
Qo'shimcha ma'lumot olish uchun quyidagi manzilga murojaat qiling:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche deserticola juda ko'p effektlarga ega, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing
Annotatsiya: Cistanche tubulosaimmunitetni tartibga solish uchun keng qo'llaniladigan an'anaviy xitoy o'simlik dorisidir vafeniletanoid glikozidlar(CPhGs) ushbu faoliyat uchun mas'ul bo'lgan asosiy komponentlardan biridir. Biroq, CPhGlarni qo'llash ularning yomon so'rilishi va og'iz orqali foydalanishning pastligi tufayli salbiy ta'sir ko'rsatadi. Dori vositalarini maqsadli yetkazib berish farmatsevtikani rivojlantirishning muhim yo‘nalishi hisoblanadi. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CPhGlar TGF-p1 / smaddagi signalizatsiya yo'llarining o'tkazuvchanligini blokirovka qilishi va jigar stellat hujayralarining (HSC) faollashuvini inhibe qilishi mumkin. Ushbu tadqiqotning maqsadi HSC faollashuvini inhibe qilish, apoptozni rag'batlantirish, hujayra siklini blokirovka qilish, fokal adezyon kinaz (FAK) / fosfatidilinositolda signalizatsiya yo'llarining o'tkazuvchanligini bostirish orqali CPhG lipozomalarining jigar fibroziga qarshi ta'sirini baholash edi{3} kinaz (PI3K)/protein kinaz B (Akt) va ularning in vitro gepatoprotektiv faolligini aniqlash. In vitro chiqarish bo'yicha tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CPhG lipozomalari dori CPhGlariga nisbatan barqaror bo'shatish ta'siriga ega. CPhG lipozomalari (29.45,14.72, 7.36 ^ g / ml) bilan davolashdan so'ng HSC proliferatsiyasi inhibe qilindi, MTT tahlilida IC50 qiymatlari 42.54 Rg / ml. CPhG lipozomalarining turli kontsentratsiyasi HSC proliferatsiyasini inhibe qilishi, apoptozni rag'batlantirishi va hujayra siklini blokirovka qilishi mumkin. MTT usuli CPhG lipozomasi va Rekombinant kalamush trombotsitlaridan kelib chiqqan o'sish omili-BB (rrPDGF-BB) bilan davolashdan so'ng HSC proliferatsiyasining aniq inhibisyonini ko'rsatdi. Kollagen-1, metallopeptidaza ingibitori 1 (TIMP-1), silliq mushak aktini (a-SMA) va fosforlangan PI3K/Akt darajasi pasaygan va matritsa metalloproteinaza-1 (MMP{) {23}}) CPhG lipozomalarining turli konsentratsiyasi bilan oldindan ishlov berish orqali yuqori tartibga solindi. Bundan tashqari, 29,45 Rg/ml CPhG lipozomalari FAK genini haddan tashqari ko'paytirish orqali FAK oqsili va fosforlangan PI3K va FAKning quyi oqimidagi Akt oqsili ifodasini kamaytirishi mumkin. Ushbu tajriba shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomalari FAKni inhibe qilish va keyin fosforlangan Akt / PI3K ifodasini kamaytirish orqali HSC faollashishini inhibe qilishi mumkin va shu bilan jigar fibrozi uchun CPhGlarni qo'llash bo'yicha yangi tushunchalar beradi.
Kalit so‘zlar: feniletanoid glikozidlarlipozoma; jigar yulduzsimon hujayralari; tarqalish; apoptoz; hujayra aylanishi; FAK/PI3K/Akt,
TGF-p1, alkogol, toksinlar va steatoz kabi omillar HSC faollashishiga olib kelishi mumkin. PDGF ham HSC larning faollashishiga olib kelishi mumkin [4]. Hozirgi vaqtda jigar fibrozining oldini olish uchun HSClarga qaratilgan terapevtik strategiyalar HSC faollashishini, ko'payishini va hujayra aylanishini inhibe qilishni, shuningdek HSC apoptozini rag'batlantirishni o'z ichiga oladi [5].
Cistanche tubulosa(Orobanchaceae oilasi) parazit oʻsimlik Xitoyning Shinjonning janubiy mintaqasida keng tarqalgan.C. tubulosaorganizm immunitetini oshirish, organizmning chidamliligini oshirish, buyraklarni oziqlantirish, iktidarsizlikni davolash va aqlni oshirish kabi turli xil tadbirlarni taqdim etishi ko'rsatilgan;
1.Kirish
shuningdek, oksidlanishga qarshi va qarishga qarshi xususiyatlarga ega [6]. Bu o'simlikda feniletanoid glikozidlar (CPhG), iridoidlar va polisaxaridlar mavjud bo'lib, ulardan CPhGlar asosiy faol bioaktiv turlardan biridir [7]. Oldingi tadqiqotda biz CPhG'lar TGF-p1 / smaddagi signal yo'llarining o'tkazilishini bloklashi, HSC faollashishini inhibe qilishi va kalamushlarda sigir zardobi albumini keltirib chiqaradigan jigar fibroziga profilaktik ta'sir ko'rsatishi mumkinligini aniqladik [7,8]. Shu bilan birga, CPhGlar yaxshi suvda eruvchanligi va lipidlarning yomon eruvchanligiga ega va CPhGlarning barqarorligi va samaradorligini kamaytiradigan kislotalilik va parchalanish fermentlari kabi tashqi omillarga ta'sir qiladi [9]. Oshqozon ichiga yuborilgandan so'ng, CPhG'lar kalamushlarning oshqozon-ichak traktida beqaror bo'lib, glikozid birikmalarining gidrolizlanishi oson bo'lishi mumkin. Sichqonlarning og'iz orqali bioavailability atigi 0,83 foizni tashkil etdi, shuning uchun uning terapevtik rolini aniqlash qiyin [10]. Shuning uchun biz HSC larning terapevtik samaradorligini oshirish uchun xavfsiz, samarali, barqaror va maqsadli antifibrotik preparatni topishimiz kerak. Nanozarracha dori vositalarini yetkazib berish tizimlari ushbu kamchiliklarni bartaraf etish uchun muqobil strategiyani taqdim etadi, chunki ularning afzalliklari, jumladan, yuqori dori yuklash qobiliyati va uzoq qon aylanishi [11]. Ular jigarga kuchli yaqinlikka ega va endositoz va sintez orqali dorilarni hujayralarga to'g'ridan-to'g'ri etkazib berishi mumkin. O'zgartirilmagan lipozomalar asosan retikuloendotelial tizim (RES) tomonidan ishlab chiqilgan to'qimalar yoki organlarda taqsimlanadi va jigarni passiv nishonga olish funktsiyasiga ega [12]. Shuning uchun, CPhG lipozomalari anti-fibroz ta'sirini ta'minlash uchun membrana dispersiyasi va ikkilamchi inkapsulyatsiya orqali tayyorlangan. Ushbu tadqiqotda biz CPhG lipozomalarining HSC proliferatsiyasi, apoptoz va hujayra aylanishiga ta'sirini, shuningdek uning mexanizmlarini o'rganishni maqsad qildik.
2. Natijalar
2.1. CPhG lipozomasining fizik xususiyatlari
Tayyorlangan CPhG lipozomalarining fizik xususiyatlari quyidagicha edi: zarracha hajmi (216,7 ± 3,47) nm, Zeta potentsiali (-55,6 ± 1,3) mV edi. 1-rasmda ko'rsatilganidek, zarrachalar yumaloq bo'lib, sirtda bir xil qalinlik bilan qoplangan va zarrachalar hajmining taqsimlanishi bir xil edi. CPhG lipozomalarining dori yuklash va inkapsulyatsiya samaradorligi (3,71 ± 0, 32) foiz va (38,46 y 7,85) foizni tashkil etdi.
2.2. CPhG lipozomalari va CPhGlardan in vitro chiqarilishi
CPhG lipozomalari va CPhGlar uchun vaqt funktsiyasi sifatida hisoblangan kümülatif chiqarish tezligi hisoblab chiqilgan va chizilgan (2-rasm). Ushbu tadqiqotda; CPhG ning 12 soatdan keyin ajralib chiqish darajasi 100 foizga normallashtirildi, CPhG lipozomalariniki esa 24 soatdan keyin 100 foizga yaqin edi va vaqt o'tishi bilan CPhGlarning ajralib chiqish tezligi oshdi. Ma'lumotlar boshqariladigan bo'shatish mexanizmlari, shu jumladan nol tartibli, birinchi darajali va Higuchi tenglamalari uchun turli xil moslama modellari yordamida tahlil qilindi. Uchta reliz modeli uchun o'rnatilgan tenglamalar va korrelyatsiya koeffitsientlari 1-jadvalda keltirilgan.
CPhG va CPhG lipozomalari uchun eng mos model Higuchi va birinchi tartibli tenglamalardir. CPhG lipozomalarining in vitro chiqarilishini o'rganish hech qanday portlash ta'sirini ko'rsatmadi. T50 erish parametrlarini hisoblash uchun eng mos taqsimlash funktsiyasi tanlangan (eritma 50 foiz). Natijalar shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomalarining o'rtacha ushlab turish vaqti CPhGlarga qaraganda uzoqroq va CPhG liposomalarining T50 9,39 soat. CPhG'lar uchun 1,69 soat bilan solishtirganda, CPhG lipozomalari aniq barqaror ta'sir ko'rsatadi (2-jadval).
Biz birinchi navbatda CPhG lipozomalarining HSClarga sitotoksik ta'sirini in vitro MTT tahlili bilan tekshirdik. HSC'lar 24 soat davomida 0 dan 117,79 g/ml gacha bo'lgan CPhG lipozomalarining turli konsentratsiyasiga ta'sir qilishdi. CPhG lipozomalari HSClarning hayotiyligini dozaga bog'liq holda pasaytirdi va ularning IC50 qiymati 42,535 (masalan, / ml. CPhG lipozomalarining (29,45, 14,72 va 7,36 ^ g / ml) hujayralarga ta'siri) 24, 48 va 72 soat 3-rasmda ko'rsatilgan. CPhG lipozomalari bilan davolashdan so'ng, HSClarning ko'payishi turli vaqt nuqtalarida sezilarli darajada inhibe qilindi (3-rasm).
HSClarning laktat dehidrogenaza (LDH) chiqarilishi CPhG lipozomasining turli konsentratsiyasi bilan 24 soatlik davolashdan keyin aniqlandi. Natijalar 3-jadvalda ko'rsatilgan. CPhG lipozomalari bilan ishlov berilgan HSClar LDH chiqishiga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi.
2.4. CPhG lipozomalari HSC apoptozini qo'zg'atadi va hujayra aylanishini to'xtatadi
HSC'lar 24 soat davomida CPhG lipozomalariga (29,45,14,72,7,36 g / ml) ta'sir ko'rsatdi va 4a-rasmda ko'rsatilganidek, oqim sitometriyasi orqali apoptozni aniqlash uchun annexin-V-FITC / PE ikki marta bo'yash amalga oshirildi. Hujayralarning umumiy apoptozi nazorat guruhiga nisbatan statistik ravishda oshdi (p < 0.05).="" har="" bir="" doza="" guruhi="" uchun="" hsclarda="" 24="" soatlik="" davolashdan="" so'ng,="" cphg="" lipozomalari="" (29,45="" ^="" g="" ml)="" hsclarning="" kech="" apoptozini="" keltirib="" chiqarishi="" mumkin="" va="" kech="" apoptotik="" hujayralar="" ulushi="" erta="" apoptotik="" hujayralarga="" qaraganda="" yuqori="" edi.="" erta="" apoptotik="" hujayralar="" ulushi="" cphg="" lipozomasi="" (14,72="" va="" 7,36|^="" g="" ml)="" bilan="" davolash="" qilingan="" guruhlardagi="" kech="" apoptotik="" hujayralarga="" qaraganda="" ancha="" yuqori="" edi.="" ushbu="" natijalar="" aniq="" ko'rsatadiki,="" cphg="" lipozomalari="" gepatotsitlar="" apoptozini="" qo'zg'atadi,="" ayniqsa="" hsclarning="" kech="" bosqichlarida.="" bundan="" tashqari,="" umumiy="" apoptoz="" cphg="" lipozomalarining="" dozasi="" bilan="" ortdi.="" ushbu="" natijalar="" cphg="" lipozomalari="" hsc="" apoptozini="" qo'zg'atish="" orqali="" hsc="" va="" jigar="" fibrozining="" faollashuvini="" inhibe="" qilishi="" mumkinligini="">
CPhG lipozomalarining HSC larning hujayra sikliga ta'sirini aniqlash uchun HSC'lar CPhG lipozomalari bilan 29,45, 14,72 va 7,36 y/ml konsentratsiyalarda 24 soat davomida ishlandi va oqim sitometriyasi bilan tahlil qilindi (4b-rasm). Natijalar shuni ko'rsatdiki, G0/G1 fazasidagi hujayralar ulushi sezilarli darajada oshdi (p < {{0}}.05),="" s="" fazasidagi="" hujayralar="" ulushi="" esa="" sezilarli="" darajada="" oshdi.="" kamayadi="" (p=""><0,05). bundan="" tashqari,="" nazorat="" guruhiga="" nisbatan="" g2/m="" fazasidagi="" hujayralar="" ulushi="" sezilarli="" darajada="" kamaydi=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">
2.5. In Vitroda C PhG lipozomalarining ta'sir qilish mexanizm(lar)i haqida ma'lumot
2.5.1. CPhG lipozomalari rrPDGF-BB stimulyatsiyasi bilan HSCs proliferatsiyasini inhibe qiladi
CPhG lipozomalarining HSClarning rrPDGF-BB tomonidan rag'batlantirilgan proliferatsiyasiga ta'sirini qo'shimcha tekshirish uchun 24, 48 va 72 soat davomida CPhG lipozomalarining oldindan belgilangan konsentratsiyasi bilan ishlov berilgan HSClarning hayotiyligini o'lchash uchun MTT tahlili o'tkazildi ( 5-rasm).
rrPDGF-BB va 29,45,14,721 va 7,36 m/mL CPhG lipozomalari tomonidan qo'zg'atilgan HSC bilan 24 soatlik davolashdan so'ng, har bir doza guruhidagi hujayralarning omon qolish darajasi mos ravishda 67,5 foiz, 75,3 foiz va 89 foizni tashkil etdi. 48 soatdan keyin hujayralarda omon qolish darajasi mos ravishda 49,2 foiz, 58,6 foiz va 73,5 foizni tashkil etdi.
har bir doza guruhi uchun. 72 soatlik davolanishdan so'ng, har bir doza guruhidagi hujayralarning omon qolish darajasi mos ravishda 45,3 foiz, 59,2 foiz va 79,2 foizni tashkil etdi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CPhG lipozomalari rrPDGF-BB tomonidan qo'zg'atilgan HSC'larga sezilarli inhibitiv ta'sir ko'rsatdi va bu inhibitiv ta'sir dozani oshirgandan so'ng yanada aniqroq bo'ldi. CPhG lipozomalarining HSClarga inhibitiv ta'siri CPhGliposomo proliferatsiyasiga qarshi faollikka hissa qo'shishi taklif etiladi.
2.5.2. CPhG lipozomalari HSC faollashuvini in vitroda inhibe qiladi
Disse maydonidagi HSClar kollagen-1,(s-SMA va kollagen III kabi ECM komponentlarini ishlab chiqaradi. MMP va TIMP kabi ECM rivojlanishini tartibga soluvchi boshqa omillar ham HSClar tomonidan ishlab chiqariladi [5]. HSClarda rrPDGF-BB qo'zg'atadigan mexanizmlarni qo'shimcha tekshirish uchun biz ECM bilan bog'liq oqsillarni, jumladan kollagen-1, Cosma, kollagen III, MMP-1 va TIMP{{8} ifodasini baholadik. }. 6a-rasmda CPhG lipozomalari (29.45,14.72, 7.36 4g/mL) guruhlari kollagen-1, a-SMA va TIMP{{18} mRNK ifoda darajasini kamaytirishi mumkinligini koʻrsatadi. } va MMP ning mRNK ifoda darajasini-1 rrPDGF-BB guruhiga qaraganda ko'proq oshiradi.
6-rasm. CPhG lipozomalarining HSClarda kollagen-1, a-SMA, TIMP-1 va MMP-1 ifodalariga ta'siri. (a ) HSClarda kollagen-1, a-SMA, TIMP-1 va MMP-1ning mRNK ifodasi (RT-PCR tahlili). (b) Kollagen{{10}} va a-SMA ning oqsil ifodasi. A, nazorat guruhi; B, rrPDGF-BB bilan davolash qilingan guruh; C, rrPDGF-BB plyus CPhG lipozomasi 29,45 g / ml davolash qilingan guruh; D, rrPDGF-BB plyus CPhG lipozoma 14,72(_ig/mL bilan ishlov berilgan guruh; E, rrPDGF-BB plyus CPhG liposoma 7.3 6 rrPDGF-BB plyus CPhG lipozoma d guruhi; Ma’lumotlar ifodalangan o'rtacha SD sifatida. ** p < 0.01,="" rrpdgf-bb="" faollashtirilgan="" hsc="" guruhiga="" nisbatan="" sezilarli="" darajada="" farq="" qiladi.="" #="" p="">< 0,05,="" nazorat="" guruhiga="" nisbatan="" sezilarli="" darajada="" farq="" qiladi.="" 6-aktin="" ichki="" nazorat="" sifatida="">
CPhG lipozomalari MMP-1 ning mRNK darajasini ham oshirdi. a-SMA va kollagen -1 darajalari rrPDGF-BB bilan faollashtirilgan HSClarda yuqori darajada ifodalangan. Aksincha, CPhG lipozomalari a-SMA va kollagen darajasini pasaytirdi-1 (6b-rasm). Ayniqsa, yuqori konsentratsiyada (29,45 ^g/ml) CPhG lipozomasi rrPDGF-BB orqali ortib borayotgan kollagen-1 va a-SMA ifodasini kamaytirdi.
2.53 CPhG lipozomalari PI3K/Akt signalizatsiya yo‘lini inhibe qiladi
PI3K / Akt tirozin kinaz retseptorlari vositachiligida muhim signal uzatish yo'lidir. PI3K/Akt signalizatsiya yo‘li hujayradan tashqari stimullarga javob beruvchi sensor vazifasini bajaradi va hujayra signallariga vositachilik qiladi, shu bilan quyi oqim effektor molekulalarining faolligiga ta’sir qilib, hujayra apoptozi va proliferatsiyasida muhim rol o‘ynaydi [13]. PI3K / Akt yo'li CPhG lipozomalarining HSC'larga antiproliferatsiya ta'sirida ishtirok etadimi yoki yo'qligini tekshirish uchun PI3K / Aktning ekspressiyasi va fosforillanish darajalari western blot tahlili bilan o'rganildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, p-PI3K va p-Akt darajalari CPhG lipozomalari bilan 24 soatlik davolashdan so'ng HSClarda doimiy ravishda pasaygan, bu CPhG lipozomalarining HSC'larga qarshi proliferatsiyaga qarshi ta'siri PI3K / Akt yo'lining o'chirilishi bilan bog'liqligini ko'rsatadi. , 7-rasmda ko'rsatilganidek.
2.5.4. CPhG liiposomalari rrPDGF-BB vositachiligidagi FAK haddan tashqari ekspression plazmidining HSClarida PI3K/Akt yo'li oqsillarining ifodasini kamaytirishi mumkin.
FAK PI3K/Akt signalizatsiya yo'lini tartibga soluvchi muhim gendir. Faollashtirilgan FAK PI3K ni fosforlashi mumkin, bu esa Aktning fosforlanishiga olib keladi. FAK tirozin-protein kinaz retseptorlari, integrin va hujayralarga boshqa yo'llarning signal uzatilishida vositachilik qiladi, bu HSC faollashishi paytida bir nechta hujayra ichidagi yo'llarning birlashmasi va markazidir. Shuning uchun biz taxmin qildik
CPhG lipozomalari FAK faollashuvini buzish orqali PI3K/Akt signalizatsiya yo'lining faolligini bostirishi mumkin. Keyinchalik biz FAK genining haddan tashqari ifodalanishini ko'rsatib, bu gipotezani tasdiqladik.
(pEX{0}}NC) plus CPhG lipozoma 29,45 Lg/mL guruhi sezilarli darajada kamaydi (p <0,01).
o'ziga xos birlamchi antikorlar bilan estern blotting. ** p < 0.01,="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="" darajada="" farq="">
rrPDGF-BB stimulyatsiyasi va pEX-3-FAK guruhi. p < 0.05,="" rrpdgf-bb="" bilan="" davolash="" qilingan="" guruh="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="" darajada="" farq="" qiladi.="" &="" p=""><0,01, rrpdgf-bb="" stimulyatsiyasi="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="" darajada="" farq="">
pEX-3-NC guruhi. -aktin ichki nazorat sifatida ishlatilgan.
cistanche saratonga qarshi kurashadi
3. Munozara
CPhG'larning turli xil biologik faolliklari, jumladan, yallig'lanishga qarshi faollik [14,15], osteoporozga qarshi faollik [16,17], tinchlantiruvchi ta'sir [18], charchoqqa qarshi faollik [19], neyroprotektiv ta'sir ko'rsatildi. 20] va gepatoprotektiv faollik [21,22]. Yang va boshqalar. ning ekstrakti ekanligini aniqladiC. tubulosakollagen sintezini inhibe qilish va oksidlovchi stressni kamaytirish orqali eksperimental kimyoviy jigar fibrozining rivojlanishini sezilarli darajada kechiktirishi mumkin [22]. Biroq, CPhGs samaradorligi sifatida
issiqlikdan himoya qiluvchi moddalar o'zlarining yomon o'tkazuvchanligi va past bioavailability bilan chegaralanadi [23]. Shu sababli, ushbu muvaffaqiyatsizliklarni bartaraf etish uchun samarali etkazib berish tizimini ishlab chiqish orqali CPhGlarni qo'llashni kengaytirish kerak.
So'nggi yillarda dori tadqiqotlari ham, klinik tadqiqotlar ham nanozarrachalardan dori tashuvchisi sifatida foydalanish in vivo jonli ravishda dori samaradorligini oshirishi mumkinligini tasdiqladi. Liposomalar eng muhim nanozarrachalardan biridir [24].
Liposomalar yallig'lanishga qarshi dorilar, saratonga qarshi dorilar, antibiotiklar, antifungal dorilar va boshqa turli toifadagi dorilarni muvaffaqiyatli etkazib berish uchun dori tashuvchisi sifatida ishlatilishi mumkin [25]. Liposomalar shuningdek, dori barqarorligini yaxshilashi, dori eruvchanligini oshirishi va biomoslashuvni oshirishi mumkin [26]. Boshqa tomondan, tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, qattiq nanozarrachalarning dori vositalarini etkazib berish tizimi (10-1000 nm oralig'ida) dori dozasining 80 foizini jigarda to'plashi mumkin, bu esa preparatning qonga kirishiga imkon beradi. jigar hujayralari [27]. Jing Zhu va boshqalar. galanin-lipozomalar yaxshi jigar maqsadli ta'sirga ega ekanligini aniqladilar [28]. Shuning uchun nano-xitoy dori vositalarining passiv maqsadli ta'siri jigar kasalliklari yoki boshqa kasalliklarni davolash uchun ishlatilishi mumkin. Ma'lum darajada jigarni nishonga olgan ushbu tadqiqotda tayyorlangan CPhG lipozomalarining zarracha hajmi (216,7 ± 3,47) nm. Giyohvand moddalarni chiqarish harakati nano-dorilarni etkazib berish tizimlarining muhim xususiyatidir. CPhGlar yaxshi suvda eruvchanligiga ega bo'lganligi sababli, ajratuvchi vosita sifatida PBS bufer eritmasi (pH=6.0) ishlatiladi. Chiqarish egri chizig'idan ko'rinib turibdiki, 2 soatdan oldin CPhG lipozomalarining chiqarilish ulushi 40 foizdan kam bo'lgan, to'satdan ajralib chiqmagan va CPhG'larning chiqarilishi bilan solishtirganda ma'lum bir barqaror bo'shatish effekti mavjud edi. Oʻrnatilgan egri chiziq tenglamasidan CPhG lipozomalarining pH=6.0 da fosfat bufer eritmasida chiqishi Higuchi tenglamasiga mos keladi.
cistanchemumkinapoptozga qarshi
Surunkali jigar kasalliklarida HSClarning uzluksiz faollashishi jigar fibroziga olib keladi [29]. Shuning uchun HSC ning faollashishi, ko'payishi va hujayra aylanishini inhibe qilish yoki HSC apoptozini qo'zg'atish jigar fibrozining maqsadli terapiyasi uchun yangi boshlanish nuqtasi bo'lishi mumkin [30-33]. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, apoptoz apoptozni rag'batlantirish orqali jigar fibrozini qaytarishning kalitidir [34]. Jigar fibrozining rivojlanishi HSC faollashuviga bog'liq bo'lib, u HSC faollashuvini inhibe qilish va jigar fibrozining oldini olish yoki davolash uchun apoptozni keltirib chiqarishi mumkin [35,36]. LDH hujayra sitozolidagi ferment bo'lib, hujayra membranasi shikastlanganda madaniy muhitda chiqariladi. Shu sabablarga ko'ra biz hujayra hayotiylik darajasi, hujayralardagi LDH tarkibi va CPhG lipozomalariga ta'sir qilgan HSClarning apoptozisi va hujayra aylanishi bo'yicha in vitro tadqiqotlar o'tkazdik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CPhG lipozomalari HSClarning hayotiyligi va proliferatsiyasini kuchli inhibe qiladi va konsentratsiyaga bog'liq holda apoptotik hujayralar foizini oshiradi. Bundan tashqari, hujayra siklining natijalari shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomalari G1 fazasida hujayra siklini to'xtatishga olib kelishi mumkin. Natijalar shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomalari uchun jigar fibrozining oldini olish va davolash uchun kalit hujayra proliferatsiyasi, apoptoz va hujayra aylanishini tartibga solishdir. Bo'sh nazorat guruhi bilan solishtirganda, har bir guruh orasidagi LDH tarkibi asta-sekin o'sib borayotgan tendentsiyaga ega. Biroq, sezilarli farq yo'q edi (p > 0.05), bu CPhG lipozomalari ta'sirlangan HSC'lar uchun faollik pasaygan bo'lsa-da, hujayra membranalarining aksariyati buzilmaganligini ko'rsatadi. CPhG lipozomalari tomonidan HSClarning ko'payishini inhibe qilish dorilarning hujayralarga toksikligi bilan bog'liq emas.
PDGF HSClarning ko'payishiga ta'sir qiluvchi eng muhim omil hisoblanadi. PDGF-retseptorlari (PDGF-Ra va -p) tirozin kinaz retseptorlari oilasiga tegishli. PDGF-AA faqat PDGF-Ra bilan bog'lanadi, PDGF-B zanjirlari esa PDGF-Ra va -p bilan bog'lanadi va dimerlanadi [37]. Ligand PDGF-R bilan bog'langandan so'ng, retseptorlar dimerlanadi, bu keyinchalik ichki tirozin qoldig'ining fosforlanishiga va bir nechta quyi oqim signalizatsiya yo'llarining faollashishiga olib keladi, natijada faollashtirilgan HSClarning ko'payishi va migratsiyasini keltirib chiqaradi. Bu jarayon kollagen va boshqa ECMlarning haddan tashqari ishlab chiqarilishi va cho'kishiga olib keladi va shu bilan jigar fibrozining rivojlanishi va rivojlanishiga yordam beradi [38]. Breitkopf va boshqalar. PDGF-BB ning jigarda haddan tashqari ko'payishi HSC proliferatsiyasiga va jigar fibroziga olib kelishini ko'rsatdi [39]. Tadqiqotimizda biz rrPDGF-BB ni HSClarni faollashtirish uchun stimulyator sifatida ishlatdik va har bir dozalangan CPhG lipozoma guruhi HSClarning ko'payishini inhibe qilishi va aniq doza-ta'sir munosabatlarini taqdim etishi mumkin. CPhG lipozomalarining HSClarga inhibitiv ta'siri CPhG lipozomalarining proliferatsiyaga qarshi faolligiga yordam beradi.
HSC faollashuvi hujayralarning gen ekspressiyasidagi ko'plab o'zgarishlar bilan bog'liq. Xususan, kollagen-1 va a-SMA gen ekspresyonidagi o'zgarishlar faollashtirilgan HSC larning fibroz xususiyatlari bilan ko'proq bog'liqdir [40]. MMPlar sinkga bog'liq endopeptidazalar bo'lib, fiziologik va patologik sharoitlarda barcha ECM oqsil komponentlarini parchalanishida muhim rol o'ynaydi. MMP va TIMP mos ravishda ECM sintezi va degradatsiyasiga vositachilik qiladi. MMPlar ECM degradatsiyasiga yordam berishi mumkin. MMP va TIMP o'rtasidagi nozik muvozanat jigar fibrozining paydo bo'lishini aniqlaydi [29]. RrPDGF-BB guruhi bilan solishtirganda, CPhG lipozoma guruhlarida TIMP-1, a-SMA va kollagen-1 ifodasi sezilarli darajada oshdi, MMP-9 ifodasi esa kamaydi. CPhG lipozoma bilan davolash HSClarda rrPDGF-BB tomonidan qo'zg'atilgan g'ayritabiiy ifodalarni sezilarli darajada o'zgartirdi. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomalari MMP va TIMP o'rtasidagi muvozanatni tiklash orqali ECM hosil bo'lishini inhibe qilishi va shu bilan MMP-1 darajasini oshirishi va TIMP-1, a-SMA va ifodalanishini kamaytirishi mumkin. kollagen-1 va potentsial hujayradan tashqari matritsa degradatsiyasiga yordam beradi.
FAK o'ziga xos fokal adezyon kompleksidir. PDGF, shuningdek, integrin [41] orqali ECM oqsili bilan o'zaro ta'sir qilish orqali FAKni faollashtirishi mumkin. Fokal adezyon kompleksi hujayradan tashqari muhitning yaxlitligi uchun to'g'ridan-to'g'ri sensorni ta'minlaydi. FAK ning faollashishi PI3K ning faollashishiga olib keladi. PI3K bir nechta hujayra turlarining ko'payishida ishtirok etishi ko'rsatilgan [42]. Uning HSCdagi hal qiluvchi roli PDGF retseptorlari avtofosforilatsiyasiga ta'sir qilmasdan PDGF tomonidan qo'zg'atilgan mitogenez va kemotaksisni blokirovka qilish uchun PI3K-ga xos inhibitorlar LY294002 va wortmanninni qo'llash orqali ko'rsatildi [43]. PI3K protein kinaz C (PKC), Akt va p70S6 kinazalarini (p70S6K) faollashtiradigan dimerlangan fosforlangan PDGF retseptorlariga jalb qilinadi [44]. Dominant-salbiy FAK (Ad-FAKCD) FAK faolligini blokirovka qilish va PDGF bilan davolashdan keyin PDGF va HSC proliferatsiyasi natijasida kelib chiqqan PI3K faollashuvini inhibe qilish uchun ishlatilganligi xabar qilingan [45]. Shuning uchun biz FAK/PI3K/Akt yo'li CPhG lipozomalari uchun mumkin bo'lgan maqsad deb taxmin qildik.
Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, rrPDGF-BB stimulyatsiyasi va X-3-FAK guruhi bilan solishtirganda, FAK, fosforlangan PI3K va fosforlangan Aktning oqsillarni ifodalash darajalari rrPDGF-BB stimulyatsiyasi va X-3-FAKda pastga tushirilgan. ortiqcha CPhG lipozoma 29,45 Lg / ml guruhi. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, CPhG lipozomasi 29,45 Lg / ml bilan davolash FAK oqsili va fosforlangan PI3K va FAKning quyi oqimidagi Akt oqsillari ifodasini kamaytirishi mumkin.
An'anaviy xitoy dori-darmonlarining kimyosi va farmakologiyasi bo'yicha tadqiqotlar chuqurlashishi bilan an'anaviy xitoy dori vositalarining faol moddalari ko'proq topildi va tasdiqlandi. Paklitaksel, artemisinin va boshqa dorilar butun dunyo bo'ylab tegishli kasalliklarni davolashda birinchi darajali dorilar sifatida keng e'tirof etilgan. Biroq, shu bilan birga, ko'plab xitoylik tibbiy ingredientlarning in vitro farmakologik ta'siri juda kuchli bo'lsa-da, ular suvda eruvchanligi, yarimparchalanish davri qisqa, barqarorligi past, bioavailability, toksik yon ta'siri va ko'plab ularning tibbiy va klinik qo'llanilishini jiddiy cheklaydigan boshqa muammolar. Nano-dorilarni etkazib berish tizimi rivojlanish uchun katta salohiyatga ega bo'lgan yangi dori vositalarini etkazib berish tizimi bo'lib, zamonaviy farmatsevtika tadqiqotlarining faol nuqtasi hisoblanadi. Uning an'anaviy xitoy dori-darmonlarining yangi shakllarini tadqiq qilish va ishlab chiqishda qo'llanilishi nafaqat xitoylik dori vositalarining an'anaviy shakllarini yaxshilaydi, balki an'anaviy xitoy dori vositalarining shifobaxsh ta'sirini ma'lum darajada yaxshilaydi va in vivo dori vositalarining barqarorligini oshiradi. Bundan tashqari, o'zgartirilmagan lipozomalar zarracha hajmi, sirt xususiyatlari va boshqa omillarga qarab, asosan RES tomonidan so'riladi. Ular, shuningdek, passiv ravishda jigarga qaratilgan. Oddiy lipozomalarning jigar maqsadli samaradorligini oshirish uchun maqsadli to'qimalarning kontsentratsiyasini maxsus ligandlar yoki muayyan funktsional guruhlarni ulash orqali oshirish mumkin.
Shuning uchun kelajakdagi tadqiqotlarda biz CPhG ekstraktsiyasi va tozalashning eruvchanligi, barqarorligi, kislotaliligi va ishqoriyligi kabi fizik-kimyoviy xususiyatlariga, shuningdek, biofarmatsevtika va farmakokinetikani o'rganishga ahamiyat berishimiz kerak. Biz CPhG'lar uchun noyob formulali dizayn nazariyasini, tayyorlash texnologiyasi platformasini va sifatni baholash usulini yaratishimiz kerak, shuningdek, CPhG'lardan iloji boricha to'liq foydalanishni ta'minlash uchun CPhG'lar uchun turli xil nano-dorilarni yuklash tizimlarini ishlab chiqishimiz kerak. Bu afzalliklardan to‘liq foydalanish kelgusidagi tadqiqotlarimizning yo‘nalishi bo‘ladi.
