Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Iltimos, 2-qismga bu yerni bosing

Cistanche juda yaxshi neyroprotektiv ta'sirga ega

Gabriel Gonsales 1,2, Jiˇrí Grz 1, Kosimo Valter D'Akunto 1, Petr Ka ˇnovsk2 va Miroslav Strnad1,2,*

1. Chexiya Fanlar akademiyasining Eksperimental botanika instituti o‘sish regulyatorlari laboratoriyasi,

va Fanlar fakulteti, Palacky universiteti, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Chexiya;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. Nevrologiya kafedrasi, Olomouc universiteti kasalxonasi va tibbiyot va stomatologiya fakulteti,

Palacky universiteti Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, Chexiya; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Muloqot: miroslav.strnad@upol.cz; Tel.: plus 420-585-634-850

Abstrakt: Sitokininlaradenin asosidagi fitohormonlar boʻlib, oʻsimliklardagi hujayra boʻlinishi va differentsiatsiyasi, ildiz va kurtaklar oʻsishi, apikal dominantlik, shoxlanish va urugʻning unib chiqishi kabi asosiy jarayonlarni tartibga soladi. Dastlabki tadqiqotlarda ular insonning neyrodegenerativ kasalliklariga qarshi himoya faolligini ham ko'rsatdilar. Ular taklif qiladigan himoya (himoya faoliyati) haqidagi bilimlarni kengaytirish uchun biz tabiiy faoliyatni o'rganib chiqdiksitokininlarsalsolinol (SAL) keltirib chiqaradigan toksiklikka qarshi (aParkinson kasalligimodeli) va glutamat (Glu) sabab bo'lgan o'limneyron-dopaminerjik SH-SY5Y hujayralari kabi. Biz kinetin{3}}glyukozid, sis-zeatin ribozid va N6-izopentenil adenozinning SAL-induktsiyali PD modelida faol ekanligini aniqladik. Bundan tashqari, trans-, cis-zeatin va kinetin temir xelatatori deferoksamin (DFO) va nekroptoz inhibitori nekrostatin 1 (NEC-1) bilan birga Glu-induktsiyalangan modelda hujayra o'lim darajasini sezilarli darajada kamaytirdi. Laktat dehidrogenaza tahlillari shuni ko'rsatdikisitokininlarpastroq taqdim etiladineyroprotektivDFO va NECga qaraganda faollik-1. Bundan tashqari, ular apoptotik kaspaz-3/7 faolligini DFOga qaraganda kamroq darajada kamaytirdilar. Biroq,sitokininlarsuperoksid radikalini ishlab chiqarishda DFO va NEC-1 ga juda o'xshash ta'sir ko'rsatdi. Umuman olganda, ular SAL-induktsiyalangan modelida himoya faolligini ko'rsatdilarparkinsonizmneyronalhujayra o'limi va asosan oksidlovchi stressni kamaytirish orqali oksidlanish shikastlanishining Glu-induktsiya modeli.

Kalit so'zlar: sitokinin; fitohormon; neyroproteksiya; neyronga o'xshash SH-SY5Y hujayralari; sitotoksiklik; salsolinol; glutamat; oksidlovchi stress; Parkinson kasalligi

cistanche o'simligita'siri haqidaNeyroproteksiya

1.Kirish

Parkinson kasalligi(PD) ikkinchi eng keng tarqalgan motor bilan bog'liq neyrodegenerativ kasallik bo'lib, global miqyosda tashxis qo'yilgan holatlar soni 2015 yildagi 6 milliondan 2040 yilga kelib 12 milliondan oshishi kutilmoqda [1]. Bu o'ziga xos degeneratsiya va dopaminerjik (DA) ning taxminan 30-70 foizini yo'qotish bilan bog'liq vosita belgilari bilan tavsiflanadi.neyronlarsubstantia nigra pars compacta da va ularning chiziqqa proyeksiyalari [2,3]. PD ning ko'plab ma'lum molekulyar belgilaridan ba'zilari oksidlovchi va nitrozativ stressning kuchayishi, mitoxondrial disfunktsiya [4-7], eksitotoksiklik [8], ubiquitin / proteazoma tizimining disfunktsiyasi [9] va neyroinflamatsiya [10]. Hozirgi muolajalar turli xil nojo'ya ta'sirlarga ega va faqat simptomatik yengillikni ta'minlaydi [11], shuning uchun degeneratsiyalangan DAga samarali shifobaxsh ta'sir ko'rsatadigan dorilarni ishlab chiqish bo'yicha qizg'in harakatlar olib borilmoqda.neyronlar. Bunday harakatlarga yordam berishi mumkin bo'lgan manbalar orasida kamroq yon ta'sirga ega bo'lgan tabiiy birikmalar kiradi. Jumladan, Ginkgo biloba (ginkgetin, ginkgolid, bilobalid), ginseng (ginsenozidlar) va flavonoidlar (baikalein, kaempferol, rutin va luteolin) tarkibidagi moddalar bir nechta in vitro modellarida (shu jumladan, inson neyroblasti hujayra liniyasida) keng himoya faolligini ko'rsatdi. -SY5Y) va 1,1'-dimetil-4,4'-bipiridinyum dixlorid (paraquat), 1-metil- 4-fenil-1 tomonidan induksiyalangan PD ning in vivo modellari, 2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP), 1-metil{15}}fenilpiridinyum (MPP plyus) va 6-gidroksidopamin (6-OHDA) [12].

Bu erda taqdim etilgan tadqiqot tabiiy fitohormonlar sinfining ta'siriga qaratilgansitokininlar(CK) va ularning metabolitlari o'simliklarda hujayra bo'linishi, o'sishi, differentsiatsiyasi va barg qarishining taniqli regulyatorlari [13]. Strukturaviy jihatdan, CKs N6-pozitsiyasida prenil (izopentenil) yoki aromatik yon zanjir bilan almashtirilgan adenin hosilalaridir. Tabiiy shakllarga 6-(E)-4-gidroksi-3-metil, lekin-2-enilaminopurin (transzeatin, tZ), uning 6-(Z)-izomeri ( cis-zeatin, cZ), N6-izopentenil adenin (iP), 6-benzil aminopurin (BAP), 6-furfurilaminopurin (kinetin, K) va orto-, meta-, va BAP ning para-gidroksillangan yoki metoksillangan hosilalari topolinlar (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT) deb ataladi. 1-jadvalda ko'rsatilganidek, turli xil 9-ribozidlar, 9-nukleotidlar, shuningdek, ushbu shakllarning 7-, 9 va O-glyukozidlari ham keng tarqalgan. O'simliklar, CK'lar reaktiv kislorod turlariga (ROS) nisbatan kuchli antioksidant faollikni ko'rsatdi, bu qarish bilan bog'liq kasalliklarning bir nechta in vitro stress modellarida himoya qilishni ta'minlaydi [14].

1-jadval. ning tuzilmalarisitokininlarva ijobiy nazorat agentlari.

Xususan, H2O{1}} inson fibroblastlarining hujayra nobud boʻlishi [15] va kalamush astrositlarida D-galaktoza sabab boʻlgan glikoksidlovchi stress [16] kabi modellarda CK lar sitoprotektiv faollikka ega. Eng muhimi, bu kontekstda ular ko'rsatdilarneyroprotektivoilaviy PD, proteazoma inhibitori MG 132-induktsiyasi yoki H2O{2}} SH-SY5Y hujayralarida toksiklik [17], HT22 sichqonchaning hipokampalining glyu-induktsiyali oksidlovchi shikastlanishi kabi neyrodegenerativ kasalliklar bilan bog'liq modellarga ta'sirineyronalhujayralar [18] va Huntington kasalligining PC12 hujayra modeli [19]. Boshqa tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, CK ning himoya faoliyati hujayra redoks tizimlarining bevosita [20,21] va bilvosita [15,16,22] modulyatsiyasini o'z ichiga oladi. XKning xarakterli antioksidant faolligiga qo'shimcha ravishda ular mitoxondriyalarda tartibga soluvchi ta'sirga ega bo'lib, ularneyronalhayotiyligi [17]. Bundan tashqari, K mitoxondriyal membrana potentsialini barqarorlashtirishi va ATP ishlab chiqarishni ko'paytirishi mumkin, shu bilan HT22 hujayralarining Glu-induktsiyali o'limini yumshatadi [18]. Biroq, bir nechta modellarda ularning ta'siriga oid topilmalarga qaramasdan, PD ning eng keng tarqalgan (sporadik) shaklida CK ning himoya faoliyati haqida cheklangan ma'lumotlar mavjud.

Yuqorida tavsiflangan bilimlar bo'shlig'ini bartaraf etish uchun biz ikkita in vitro modelda tabiiy CK va ularning metabolitlarining ta'sirini tizimli ravishda baholadik: PD ning salsolinol (SAL) va glutamat (Glu) tufayli kelib chiqqan oksidlovchi shikastlanish modeli.neyron-SH-SY5Y hujayralari kabi. Ushbu chiziq dopaminerjik fenotipi, SAL kabi dopaminerjik toksinlarga sezgirligi va tabaqalashtirilgan populyatsiyalarning nisbatan barqaror shakllanishi uchun ishlatilgan.neyronal10 umM all-trans-retinoik kislota (ATRA) [23-25] ga 48 soat ta'sir qilishdan keyin proliferatsiya tezligi pasaygan hujayralar.

Neyron-o'xshash hujayralar hujayra redoks tizimining disfunktsiyasi orqali PD patologiyasini taqlid qilish uchun endo/ekzotoksin SAL ta'siriga duchor bo'ldi: glutation (GSH) ning kamayishi va antioksidant ferment (Cu / Zn superoksid dismutaza va katalaza) va mitoxondriyal faollikni inhibe qilish. komplekslar (I va II), apoptoz va nekrozga olib keladi [26]. Boshqa modelda Glu oksidlanish-qaytarilish tizimini buzish orqali potentsial o'limga olib keladigan oksidlovchi zararni keltirib chiqaradi. SH-SY5Y hujayra liniyasidagi ikkala model ham ilgari neyroproteksiya ishlarida qo'llanilgan [26,27].

K, iP, BAP, iPR, tZR va ularning erkin asoslarining degenerativ kasalliklari bilan bog'liq sitoprotektiv va / yoki antioksidant faollik sinovdan o'tkazildi va (yuqorida aytib o'tilganidek) ba'zi CK'larning himoya faolligi aniqlandi.neyronalhujayralar. Biroq, ilgari nashr etilgan hech qanday tadqiqotlar strukturani o'rganmagan -neyroprotektivtabiiy CK larning faollik munosabatlari (SAR) (1-jadval). Shuning uchun ushbu tadqiqot o'rganish uchun o'tkazildineyroprotektiv(qarshiparkinsonizm) neyrodegeneratsiyaning tanlangan SAL va Glu-induktsiyali modellarida deyarli barcha ma'lum bo'lgan tabiiy ravishda paydo bo'lgan CK'larning faoliyati. Birinchidan, biz KKning har bir kislorod radikalini yutish qobiliyatini (ORAC) va (xavfsizlik testlarida) sitotoksikligini baholadik.neyron-SH-SY5Y hujayralari kabi. Keyinchalik, superoksid (O2.) ishlab chiqarish (dihidroetidium, DHE tahlili) va apoptotik kaspaza-3,7 faolligini o'lchash orqali birikmalarning neyroprotektiv ta'siri va oksidlovchi stress darajasiga ta'sirini baholadik. Natijalar tabiiy KK tuzilmalari va o'rtasidagi munosabatlarning birinchi xabar qilingan tizimli ko'rsatkichlarini beradi.neyroprotektivtadbirlar.

Cistanche o'tjuda yaxshi xususiyatga eganeyroprotektivta'sir

2. Natijalar va muhokama

2.1. Sitokininlarning kislorodni radikal yutish qobiliyati (ORAC)

Neyrodegenerativ kasalliklar oksidlovchi stressning kuchayishi bilan bog'liq bo'lganligi sababli, antioksidant faollik ularni himoya qilishda muhim rol o'ynaydi.neyronalhujayralar. Bu jihatdan CK larning biologik salohiyatini baholash uchun antioksidant qobiliyati moddalarning antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun keng tarqalgan bo'lib qo'llaniladigan ORAC tomonidan aniqlandi [28]. Antioksidant quvvati Trolox ekvivalentlari (TE) sifatida ifodalangan bo'lib, bu Troloxga qaraganda aralashmalarning samaradorligini (pastdan yuqoriga) ekvimolyar asosda aniqlaydi. 1-jadvalda keltirilgan natijalar shuni ko'rsatadiki, topolinlar (oT, mT va pT) va ularning ribozidlari (oTR, mTR, pTR) yuqori antioksidant faollikka ega, bu ularning C{{ elektronga boy tizimi bilan chambarchas bog'liqdir. 3}}gidroksibenzil aminokislota. Yuqori ORAC qiymatlariga qaramay, topolinlar yuqori emas edineyroprotektivfaoliyat. Biroq, bir nechta geteroaromatik CK, shu jumladan K (N6-furfurilaminopurin) va aromatik bo'lmagan sis-zeatin-O-glyukozid (cZOG), ularda 4-gidroksi-3-metilbut{{7} mavjud. }en{8}}il)amino o'rnini bosuvchi, shuningdek, yuqori antioksidant qobiliyatini ko'rsatdi (2-jadval). Boshqa CK metabolitlari, shu jumladan kinetin glyukozid (K3G), kinetin ribozid 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

Cistanche poyasining foydalariyoqilganAltsgeymer kasalligiga qarshi

2.2. SH-SY5Y hujayralarining differentsiatsiyasi

CK ni o'rganish uchunneyroprotektivta'siri, SH-SY5Y neyroblastoma hujayralari (yuqorida tasvirlangan [23] sabablarga ko'ra tanlangan) ilgari tasvirlanganidek [23,24] 48 soat davomida 10 uM ATRA ta'sirida farqlangan. Keyin ular membranani bo'yash to'plamidan foydalanib, ajratilmagan va differentsiatsiyalangan hujayralar o'rtasidagi morfologik farqlarni tekshirish uchun bo'yalgan. 1A-rasmda ko'rsatilganidek,neyron- o'xshash differentsiatsiyalangan hujayralar kamroq zichroq o'sdi, uzoqroq bo'ldi va differentsiatsiyalanmagan hujayralarga qaraganda ko'proq neyritlar (rasmda sariq o'qlar bilan ko'rsatilgan) hosil qildi. Farqlanish bilan bog'liq bo'lgan bu morfologik o'zgarishlar, hatto ATRA [24,30] ga qisqaroq ta'sir qilishdan keyin ham (24 soat) ilgari kuzatilgan. Eng muhimi, neyritlar soni keskin ko'tarilib, ular neyrit tarmog'ini yaratishi mumkin bo'lgan darajaga etadi. Shu sababli, ajratilmagan va differentsiatsiyalangan SH-SY5Y hujayralarining ko'payish tezligini solishtirish uchun hujayra hayotiyligi o'lchandi. Differentsiatsiyalanmagan SH-SY5Y ning hayotiyligi maksimal tarqalish tezligi sifatida qabul qilindi. Natijalar mavjud

Shakl 1B SH-SY5Y ning ko'payish darajasi (Calcein AM hayotiyligi tahlili bilan baholangan) 48 soatlik ATRA davolashdan so'ng 23 foizga kamaydi.

1-rasm. (A) Neurite o'sish to'plami (Invitrogen™) yordamida bo'yalgan membranalari bo'lgan SH-SY5Y hujayralarining lyuminestsent mikrografigi: Nazorat qiluvchi, ajratilmagan hujayralar (soxta davolash eritmasi bilan ta'sirlangan:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

2-jadval. Sinovdan o'tganlarning kislorodni radikal yutish qobiliyati (ORAC).sitokininlar(CK) ekvimolyar asosda Trolox ekvivalentlari (TE) sifatida ifodalanadi. CK larning nomlari, qisqartmalari va tuzilmalari 1-rasmda keltirilgan.

2.3. Sitokininlarning neyronga o'xshash SH-SY5Y hujayralariga nisbatan sitotoksikligi

Calcein AM yashovchanlik tahlili [31] bilan CK ning potentsial sitotoksisitesini sinovdan o'tkazishda ko'pchilik toksiklikka nisbatan past toksiklikni ko'rsatdi.neyron-SH-SY5Y hujayralari kabi. Hayotiylikning 90 foizdan past bo'lishi neyrotoksik ta'sir uchun chegara sifatida qabul qilindi. Oldingi ma'lumotlarga ko'ra, faqat ikkita istisno KR (11,9 foiz) va pTR (10,5 foiz) edi.sitokininmetabolitlar, xususan, ribozidlar sitotoksik ta'sirga ega bo'lishi mumkin [32]. Boshqa ribozidlar, masalan, cZR, iPR, oTR, mTR, sezilarli kamayishiga olib kelmadi.neyron-SH-SY5Y hujayralarining hayotiyligi kabi (3-jadval). In vitro modelimizda musbat nazorat sifatida foydalanilgan DFO [33,34] va NEC{6}} [35,36] SH-SY5Y hujayralarida toksik emasligi boshqa tadqiqotlar bilan ham isbotlangan. Xulosa qilib aytish mumkinki, asosan KR va pTR hosilalari 90 foizdan past hayotiylikni ko'rsatdi va shuning uchun neyrodejeneratsiyaning ikkala in vitro modellarida keyingi baholash uchun unchalik qiziq bo'lmagan.

3-jadval. Hujayra hayotiyligineyron- ta'sir qilgandan keyin SH-SY5Y hujayralari kabisitokininlar24 soat davomida. Hayotiylik DMSO nazoratining foizi sifatida ifodalanadi.

2.4. PD ning SAL tomonidan qo'zg'atilgan modelida neyroprotektiv sitokininlarni aniqlash

Ushbu testlar uchunneyronalSH-SY5Y xujayralari 48 soat davomida farqlandi, keyin 5{5}}0 uM SAL va har bir CK bilan uchta konsentratsiyada (0,1, 1, 10 uM) birgalikda ishlov berildi. 2A-rasmdagi nuqta chiziq bilan ko'rsatilganidek, neyrotoksin SALni 500 uM da qo'llash Calcein AM tahliliga ko'ra, differentsiatsiyalangan SH-SY5Y hujayralarining hayotiyligini 30 foizga kamaytirdi. N-asetilsistein (NAC) in vitro modelida xuddi shu SH-SY5Y hujayra asosidagi ilgari xabar qilingan neyroprotektiv ta'siri tufayli ushbu testlarda ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan [37]. SAL modelida qisman yoki deyarli to'liq tiklanishni keltirib chiqarish uchun 10, 100 va 1000 uM NAC konsentratsiyasi ishlatilgan. NAC 100 uM va 1 mM konsentratsiyada hujayra hayotiyligini oshirishga muvaffaq bo'ldi, bu mos ravishda 83,39 ± 1,74 foiz va 89,21 ± 2,89 foizga teng. NAC ning 100 uM dagi himoya faolligi (2A-rasmda kesilgan chiziq bilan ko'rsatilgan) keyingi sinovlar uchun CK ni tanlash uchun quvvat chegarasi sifatida ishlatilgan. Ushbu o'rnatishga ko'ra, biologik ahamiyatga ega neyro-himoya faoliyati K3G bilan 10 umM (81,84 ± 2,36 foiz), cZR 0,1 uM (81,14 ± 2,30 foiz) va 1 uM (81,53 ± 2, PR) va 12ii da kuzatilgan. uM (82,43 ± 2,51 foiz). Shunday qilib, iPR va cZR NACga qaraganda pastroq mikro yoki submikromolyar konsentratsiyalarda samarali neyroprotektorlar edi. Thesitokininskrining shuningdek, ko'plab boshqa metabolitlar SAL ta'siriga uchragan differentsiatsiyalangan SH-SY5Y hujayralarining hayotiyligini o'rtacha darajada oshirishi mumkinligini aniqladi. Biroq, ba'zi sinovdan o'tgan CK'lar (jumladan, tZR, tZMP, mT, mTR, pT va pTR) juda kam himoya ta'siriga ega edi.

2-rasm. (A)Neyroprotektivfaoliyatisitokininlarva PD ning SAL-induktsiyali modelida N-asetilsistein (NAC).neyron-SH-SY5Y hujayralari kabi. Chiziqli chiziq NAC effekti chegarasini ko'rsatadisitokininlarkeyingi sinov uchun tanlangan; nuqtali chiziq hujayralarni 500 uM SAL bilan davolashdan keyin Calcein AM tahlilidagi tirik hujayralar sonini hisoblaydi; sog'lom nazorat hujayralari (CTR, DMSO <0,1 foiz).="" kamida="" uch="" ajratilgan="" kun="" ichida="" uch="" marta.="" (b)="" propidium="" yodid="" bo'yalganidan="" keyin="" normallashtirilgan="" sh-sy5y="" hujayra="" o'limi.="" kamida="" besh="" mustaqil="" kun="" ichida="" uch="" marta="" ko'payadi.="" *="" p="" 500="" um="" sal="" bo'lgan="" avtomobil="" bilan="" solishtirganda,="" #="" p="" 500="" um="" sal="" bo'lmagan="" avtomobil="" bilan="">

KKning eng faol tabiiy anti-PD faolligini tasdiqlash uchun umumiy hujayra o'lim darajasi propidiy yodid (PI) bilan bo'yash orqali aniqlandi, bu (hujayra metabolizmiga asoslangan hayotiylik testlaridan farqli o'laroq) faqat membrana yaxlitligi buzilgan hujayralarni, o'layotgan hujayralarni belgilaydi. , va allaqachon o'lik hujayralar [38]. Natijalar faqat SAL bilan davolashdan keyin hujayra o'lim darajasiga nisbatan normallashtirildi (100 foiz sifatida belgilangan). 2B-rasmda ko'rsatilganidek, NAC musbat nazorat moddasi hujayra o'limini 100 va 1000 uM da sezilarli darajada kamaytirdi (mos ravishda 77,3 ± 2,21 foiz va 77,5 ± 4,44 foiz). Umuman olganda, NAC o'zini isbotladineyroprotektivSH-SY5Y hujayralari uchun dozaga bog'liq (5{11}}–500 uM oralig'ida) boshqa tadqiqotlarda qayd etilganlar bilan taqqoslanadigan faollikka ega agent [37]. PI tahlili shuningdek, CKs cZR, K3G va iPR ning himoya faolligiga, ayniqsa cZR ga ega ekanligini ko'rsatdi, bu hujayra o'limini 0,1 uMda 71,6 ± 5,08 foizga kamaytirdi. cZR dan farqli o'laroq, K3G teskari dozaga bog'liq ta'sirga ega bo'lib, maksimal faollik 10 umM (hujayra o'lim darajasini 75,0 ± 3,69 foizga kamaytirish) va NPR faolligi 1 umM (stavkani 73,9 ± 4,99 foizga kamaytirish) bilan eng yuqori ko'rsatkichga etdi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, birgalikda olingan holda, CKlar solishtirish mumkin bo'lganneyroprotektivfaollik va sitotoksiklik tahlillariga ko'ra 100 uM NAC gacha. Bundan tashqari, cZR va iPR kabi CK ning samarali kontsentratsiyasi submikromolyar va mikromolyar diapazonlarda NACga qaraganda ancha past edi. PI va aneksin V/PI bilan ikki marta bo'yashdan keyin olingan oldingi kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, K apoptozni kamaytirishi mumkin [39], shuning uchun biz CK va NAC ning oksidlovchi stress va kaspaza -3,7 faollashuviga ta'sirini ham o'rganib chiqdik. ma'lum apoptoz belgisi).

2.5. Sitokininlar SAL qo'zg'atadigan superoksid radikal shakllanishini kamaytiradi

Oksidlanish stressi (OS) bir nechta neyrodegenerativ kasalliklarning asosiy patologik hissasidir va SAL (> 1{36}}0 uM da) va tetrahidroizokinolinlar kuchli OS induktorlaridir [26,40]. Shunday qilib, biz tanlangan CK yoki NAC bilan va ularsiz SAL borligida superoksid (ROS va muhim OS belgisi) hosil bo'lishini ham o'lchadik. SAL SH-SY5Y hujayralarida javoblarni aniqlash uchun etarli darajada OS zarar etkazganligiga ishonch hosil qilish uchun hujayralar avvalgi ishda bo'lgani kabi [37] va yuqorida keltirilgan natijalarga muvofiq 24 soat davomida 500 uM SAL ta'siriga duchor qilindi. Keyin hujayralar superoksid radikal shakllanishini aniqlash uchun dihidroetidium (DHE) bilan bo'yalgan. 3A-rasmda ko'rinib turibdiki, hujayralar DHE (superoksid bilan reaktsiyadan keyin qizil floresan signallarini ta'minlaydi) bilan etiketlangandan keyin vizual tarzda kuzatilgan. SAL nazorat va NAC bilan ishlov berilgan hujayralardagi darajalarga nisbatan DHE floresansining aniq ko'tarilishiga olib keldi. Bundan tashqari, uchta CK (cZR, K3G va iPR) DHE floresansida NAC (100 uM) ga o'xshash vizual effektlarga ega edi. Bundan tashqari, faqat SAL bilan davolash qilingan hujayralarda aniqlangan darajalarga nisbatan spektrofotometrik miqdoriy aniqlash (100 foiz sifatida belgilangan) mikroskopiya kuzatuviga mos keldi. 3B-rasmda ko'rsatilganidek, sog'lom nazorat hujayralarida (CTR) normallashtirilgan superoksid darajasi 39 foizdan kam edi va ijobiy nazorat moddasi NAC 100 va 1000 umM (76,3 ga) da SAL qo'zg'atadigan ROS ishlab chiqarishni o'rtacha va to'liq kamaytirishni ta'minladi. ± 4,33 va 44,3 ± 5,12 foizni tashkil etdi, bu modelda glutation (GSH) kamayishi asosiy rol o'ynashini ko'rsatadi [26]. Qizig'i shundaki, SAL SH-SY5Y hujayralarining GSH tarkibining keskin kamayishiga olib keldi, bu esa OSning ko'tarilishi bilan birga, ilgari kuzatilgan tadqiqotda kuzatilgan darajalarga o'xshash darajalarga, shuningdek, hujayra hayotiyligi, hujayra o'limi va glutation tarkibiga NAC vositachiligida ta'sir ko'rsatdi [43] . Bu erda keltirilgan natijalar shuni ko'rsatadiki, NAC ham superoksid radikal shakllanishini bazal darajaga (ya'ni, DMSO bilan ishlov berilgan nazoratdagi darajalar) kamaytiradi. CK ribozidlari K3G bilan birga faol konsentratsiyalarda (0,1-1 uM) sinovdan o'tkazildi va hujayralardagi superoksid radikal tarkibini quyidagi darajalarga (faqat SAL bilan ishlov berilgan hujayralarga nisbatan) sezilarli darajada kamaytirdi: 0,1 uM da cZR 80,34 ± 5,99 foiz. ; 10 uM da K3G 77,1 ± 4,89 foiz; iPR 79,2 ± 5,91 foiz 1 uM da, 100 uM NAC ta'siri bilan solishtirish mumkin. Birgalikda, ortogonal namoyishlar kuchli anti-OS faolligi SAL tomonidan qo'zg'atilgan PD modelida NAC va CKlarning himoya ta'sirida asosiy rol o'ynashini aniq ko'rsatadi. OS melioratsiyasi va neyroproteksiya o'rtasidagi bog'liqlik boshqa mualliflar tomonidan ham qayd etilgan [29] va bir nechta tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, K va BAP Cu2 plyus ionlari bilan komplekslar hosil qilish orqali OS faoliyatini to'g'ridan-to'g'ri yaxshilashi mumkin [44], bu superoksid dismutazasini keltirib chiqaradi. faoliyat kabi [45,46]. Shu bilan birga, CK'lar bilvosita antioksidantlar sifatida ham ta'riflangan bo'lib, ular eritroid yadro omili 2-bog'liq bo'lgan 2-faktor (NRF2) antioksidant javob yo'li (iPR) [22] induksiyasi yoki glutation peroksidaza va SOD faolligini qisman tiklash orqali vositachilik qiladi. K) [16]. Bundan tashqari, K.ning xabar berishichaneyroprotektivSH-SY5Y hujayralarida H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan OS shikastlanishiga qarshi faoliyat [17]. CK ning bildirilgan anti-ROS faolligining ikkala turi ham SAL tomonidan qo'zg'atilgan SH-SY5Y hujayra PD modelidagi superoksid radikallarini kamaytirishda cZR, K3G va iPR ta'sirini potentsial ravishda tushuntirishi mumkin [47-50].

Shakl 3. (A) SAL tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stress va oksidlovchi stressni kamaytiradigan faollikni ko'rsatadigan mikrofotosuratlarsitokininlarinsonda farqlanadineyron- SH-SY5Y hujayralariga o'xshash dihidroetidiy (DHE) yorlig'idan so'ng floresan mikroskopda ko'rsatilgan. Barlar=50 um. Rasmlarda DMSO eritmasi (nazorat), faqat 5 00 uM salsolinol (SAL) va 500 uM SAL va 1000 uM NAC (plyus NAC), 0,1 uM cZR (plyus cZR) bilan ishlov berilgan hujayralar ko'rsatilgan; DHE bilan bo'yashdan oldin 24 soat davomida 10 uM K3G (plyus K3G), 1 uM iPR (plyus iPR). (B) SAL-induktsiyali superoksid radikal shakllanishi vasitokininyoki N-asetilsistein (NAC) himoya faoliyati. Grafikda Infinite M200 Pro mikroplata o'quvchi (Tecan, Avstriya) yordamida DHE bo'yalgan hujayralar miqdori ko'rsatilgan. Kamida besh mustaqil kun ichida uch marta ko'payadi. * P 500 uM SAL bo'lgan avtomobil bilan solishtirganda, # P 500 uM SAL bo'lmagan avtomobil bilan solishtirganda.