2-qism: Surunkali buyrak kasalliklari bilan og'rigan bemorlarda yurak-qon tomir kalsifikatsiyasi bilan bog'liq bo'lgan karbamilatlangan sortilin

Aloqa: Audrey Xu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

bosingBu yerga2-qism uchun.

Karbamilatlangan sortilin ligand bog'lanishini o'zgartiradi

Sortilin bir nechta ligandlar uchun yadro retseptoridir.8 Lizinning karbamilatsiyasi lizin yon zanjirining xususiyatlarini sezilarli darajada o'zgartiradi, bunda musbat zaryadlangan aminokislotalar katta hajmli qutbli guruh bilan almashtiriladi, bu ligandlarning bog'lanishiga potentsial ta'sir qiladi. Biz eng tez-tez o'zgartirilgan sortilin lizin yon zanjirlarining o'zaro ta'sirini ko'rib chiqdiksurunkali buyrakkasallik(aminokislotalar ketma-ketligi [kristal tuzilishi ketma-ketligi]), Lys95 (62), Lys205 (172), Lys260 (227) va Lys294 (261), lizin karbamilatsiyasining mumkin bo'lgan struktura-funksiya oqibatlarini bashorat qilish uchun silika modellash orqali. Biz mavjud sortilin ektodomen kristalli strukturasidan neytral pH da neyrotensin bilan bog'langan shakldan (PDB Q24 fayli: 4PO7; 3a-rasm) va kislotali pH da ligandsiz shakldan (PDB fayli: 6EHO; qo'shimcha jadval S5) foydalandik.

Neytral pHda Lys95 (62) Glu609 (576) bilan tuz ko'prigi va Arg90 (57) ning asosiy zanjirli karbonil guruhi bilan vodorod bog'ini hosil qiladi. Kislotali pHda Glu609(576) bilan o'zaro ta'sir kuchliroq, chunki Lys95(62) ning aminokislota guruhi va Glu609(576) karboksil guruhi o'rtasidagi masofa endi vodorod bog'ini hosil qilishga imkon beradi, Arg90(57) bilan o'zaro ta'sir. ) mavjud emas. Shuning uchun Lys95 (62) da karbamilatsiya ikkala sortilin konformatsiyasini ham beqarorlashtirishi mumkin. Shunday qilib, Lys205 da karbamilatsiya sortilinning kislotali pH konformatsiyasiga yordam berishi mumkin. Lys294 (261) neytral va kislotali pH da o'zaro ta'sirga ega emas.

Cistanche ta'siri: buyrak kasalliklarini davolash

Nihoyat, neytral pHda Lys260 (227) sortilinning b-pervanel tunnelidagi ligand-bog'lanish joyida neyrotensin-Tyr11 bilan o'zaro ta'sir qiladi. Kislotali pH sortilin strukturasida ligand yaqinligi yo'qligi sababli, biz ushbu tuzilishda Lys260 (227) yon zanjirining o'zaro ta'sirini topmadik. Neyrotensin Tyr11 bilan o'zaro ta'sir karbamilatsiyaga ta'sir qiladi va neyrotensinga nisbatan pastroq yaqinlikka olib kelishi mumkin. Interleykin 6 (IL{10}}), ma'lum sortilin ligand20, sortilinni C-terminal dumi orqali bog'laydi, unda neyrotensin-Tyr11 ning ekvivalent holatida arginin mavjud. Shunday qilib, Lys260(227) ning karbamilatsiyasi qon tomir kalsifikatsiyasiga potentsial hissa qo'shuvchi IL-6 ga yaqinligini oshirishi mumkin.

Yuzaki plazmon rezonans spektroskopiyasi va SortCo yoki SortCarb yordamida keyingi bog'lanish tadqiqotlari Q25 ni o'zgartirilmagan SortCo (KD ¼ 141 nM) bilan solishtirganda IL{0}} ning SortCarb (KD ¼ 23 nM) bilan samaraliroq bog'lanishini aniqladi, bu esa karbamilatlangan sortilin potentsial ekanligini ko'rsatdi. -6 majburiy sherik (3b va c-rasm). Progranulin, boshqa ma'lum bo'lgan sortilin ligandlari22, SortCo bilan bog'langan, ammo SortCarb bilan bog'lanishni aniqlab bo'lmadi (Qo'shimcha rasm S7A va B). SortCo ham, SortCarb ham GST yorlig'i bilan birlashtirilgan inson retseptorlari bilan bog'liq protein bilan bog'langan, lekin faqat GST bilan emas, balki karbamilatsiya holatidan qat'i nazar sortilinning Q26 strukturaviy yaxlitligini qo'llab-quvvatlaydi va tajribamizning o'ziga xosligini ko'rsatadi (Qo'shimcha rasm S7C- F).

Keyinchalik, IL-6 ga o'zgargan yaqinlik tomirlar kalsifikatsiyasi bilan bog'liq signalizatsiya yo'llariga ta'sir qilishi mumkinligini baholadik. SortCarb ga IL{1}} qo'shilishi hSMClarni kalsifikatsiya qilishda ALPL va RUNX2 mRNK ifodasini (3d va e-rasm) hamda TNAP faolligini (3f-rasm) rag'batlantirdi, holbuki SortCo bilan birgalikda u hech qanday ta'sir ko'rsatmadi. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, sortilin karbamilatsiyasi IL-6 bilan ligand bog'lanish qobiliyatini oshiradi, bu esa silliq mushak hujayralarining kalsifikatsiyasining kuchayishiga olib keladi.

Sortilin karbamilatsiyasi qon tomirlarining kalsifikatsiyasi bilan bog'liqsurunkalibuyrakkasallikbemorlar Bizning ma'lumotlarimiz asosida karbamilatlangan sortilin qoldiqlari bilan bog'liqligi aniqlandi.surunkalibuyrakkasallikva kalsifikatsiya, biz keyingi o'rganib chiqdiksurunkalibuyrakkasallikCARVIDA tadqiqotining ishtirokchilari, ularda kompyuter tomografik tekshiruvi CAC miqdorini aniqladi. CARE FOR HOME tadqiqoti ishtirokchilari singari, CARVIDA ishtirokchilarining ko'pchiligida 2 va 3 ta PTM bo'lgan, lizin qoldiqlari 95 va 260 tez-tez ta'sirlanadi (Qo'shimcha rasm S8A). Karbamilatlangan qoldiqlari bo'lmagan bemorlar bilan solishtirganda, 1 sortilin karbamil-lizin qoldig'i bo'lgan bemorlar kattaroq edi (P ¼ 0.002), pastroq eGFR (P=0,008), ko'proq edi. tez-tez (sobiq) chekuvchilar (P=0,023) va CAC hajmi sezilarli darajada yuqori edi (P <0,001; 4a-rasm="" va="" qo'shimcha="" jadval="">

Ln- (CAC plyus 1) boshlang'ich darajasida post-translatsion karbamilatlangan sortilin mavjudligi va ko'payishi bilan bog'liq (qo'shimcha jadval S7). Bundan tashqari, Ln-(CAC + 1) erkak jinsi, qandli diabet, diabetga qarshi va lipidlarni pasaytiruvchi dorilar, yuqori yosh, sarum IL-6 va gemoglobin A1c, past eGFR va sarum yuqori zichlikdagi lipoprotein bilan ham bog'liq edi. Qo'shimcha jadval S7). Shunga qaramay, karbamilatlangan sortilin qoldiqlari va asosiy Ln-(CAC+1) o'rtasidagi bog'liqlik yuqorida qayd etilgan barcha o'zgaruvchilar uchun moslashtirilgandan so'ng muhimligicha qoldi (P ¼ 0.029; 3-jadval).

Cistanche ta'siri: buyrak kasalliklarini davolash

Keyinchalik, karbamilatlangan qoldiqlarning mavjudligi CAC rivojlanishiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini baholadik. Karbamilatlangan sortilinning mavjudligi (karbamilatsiya qilinmaganga nisbatan) CAC rivojlanishini kuchaytirdi (P ¼ 0.047). batafsil,surunkalibuyrakkasallikkarbamilatlangan sortilin (n ¼ 33) bo'lgan bemorlar o'rtacha 4,4 yillik kuzatuv vaqtida (4b-rasm), o'rtacha CAC hajmining yillik o'sishi bilan 30.32 Q27 (interquartile) davomida CAC progressiyasining sezilarli darajada oshishini ko'rsatdilar. diapazon ¼ 84,0) (4C-rasm). Farqli o'laroq,surunkalibuyrakkasalliksortilin karbamilatsiyasi bo'lmagan bemorlarda (n ¼ 8) o'rtacha CAC hajmining yillik o'zgarishi 1,63 (kvartallar oralig'i ¼ 8,54) va kuzatuv davrida sezilarli CAC progressiyasi kuzatilmadi (4b va c-rasm). CAC rivojlanishi bilan bog'liq bo'lgan kovariatsiyalarni (boshlang'ich CAC hajmi, yoshi, jinsi, tana massasi indeksi, eGFR, diabetes mellitus, sarum IL-6, yuqori zichlikdagi lipoprotein va lipidlarni pasaytiruvchi dorilar) moslashtirgandan so'ng, karbamilatsiya holati endi CAC progressiyasi bilan bog'liq emas (P ¼ 0.286).

Karbamil-lizin qoldig'i 260 bo'lgan bemorlarda karbamilatlangan qoldiq yoki 260 dan boshqa karbamil-lizin qoldiqlari bo'lmagan bemorlarga qaraganda CAC hajmining eng yuqori o'sishi kuzatildi (Qo'shimcha rasm S8B).

Umuman olganda, ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, translatsiyadan keyingi karbamilatlangan sortilin CAC hajmi va uning rivojlanishi bilan bog'liq.surunkalibuyrakkasallik.

MUHOKAZA

Turli xil eksperimental in vitro va in vivo tadqiqotlarda va ikkita mustaqil istiqbolli kogortalarda biz bemorlarningsurunkalibuyrakkasallikqon tomir devorida ham aniqlanishi mumkin bo'lgan aylanishda post-translatsiyadan keyingi karbamilatlangan sortilin lizin qoldiqlarining o'ziga xos namunasini ko'rsatadi. Bundan tashqari, sortilin karbamilatsiyasi CAC bilan bog'liq edisurunkalibuyrakkasallikyoshidan qat'iy nazar bemorlar,buyrakfunktsiyasi va kalsifikatsiya uchun boshqa xavf omillari. Mexanik jihatdan biz sortilin karbamilatsiyasi uning IL-6 ni bog'lash qobiliyatini oshirishini va tomirlarning kalsifikatsiyasini rag'batlantirish uchun bevosita tomir hujayralariga ta'sir qilishini ko'rsatishimiz mumkin (4d-rasm). Birgalikda, ushbu tadqiqot kalsifikatsiya uchun yangi noan'anaviy xavf omilini aniqladi, bu esa yuqori yukni keltirib chiqarishi mumkin.yurak-qon tomirdagi kasalliklarsurunkalibuyrakkasallik.

Protein karbamilatsiyasi karbamidning o'z-o'zidan parchalanishi paytida hosil bo'lgan yoki yallig'lanish joylarida miyeloperoksidaza-katalizlangan tiosiyanat oksidlanishi natijasida hosil bo'lgan siyanat vositasida bo'lishi mumkin.24 Biz buni ko'rsatdik.surunkali buyrakkasallikpasayganligi sababli karbamid darajasi yuqori bo'lgan bemorlarbuyrakfunktsiyasi sog'lom nazoratga qaraganda ko'proq sortilin karbamilatsiya qoldiqlarini ko'rsatdi. Biroq, biz miyeloperoksidaza va sortilin karbamilatsiyasining umumiy darajasi va faolligi o'rtasida hech qanday bog'liqlik topilmadi, bu uremiyani sortilin karbamilatsiyasining asosiy omili sifatida ko'rsatadi.surunkalibuyrakkasallik. Bundan tashqari, bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, yosh, NT-proBNP va aldosteron antagonistlarini kamroq iste'mol qilish ko'proq karbamilatlangan qoldiqlar bilan bog'liq. Bizning ma'lumotlarimiz qarishni oqsil karbamilatsiyasining muhim vositachisi sifatida aniqlagan oldingi hisobotlarga mos keladi.25 Antihipertenziv dorilar gidroxlorotiyazid va amlodipin gomositrulin darajasiga, karbamid sikli bilan bog'liq aminokislota va karbamilatsiyadan olingan mahsulotga ta'sir qilishi ko'rsatilgan.26 Aldosteron antagonistlarini qabul qilish homotsitrulinni pasaytiradimi va shu bilan karbamilatlangan qoldiqlarni kamaytiradimi?surunkalibuyrakkasallikbemorlar, noma'lum. Drechsler va boshqalar. qon zardobidagi karbamilatlangan albumin va NT proBNP o'rtasidagi bog'liqlikni ko'rsatdi, bu dializga bog'liq yurak etishmovchiligi bilan bog'liq edi.surunkalibuyrakkasallikbemorlar.27 Sortilinning karbamilatsiyasi ham yurak etishmovchiligi uchun xavf omili bo'lib xizmat qilishi mumkinmi yoki yo'qmi, noma'lum, ammo yurak faoliyatiga potentsial zararli ta'sir ko'rsatadigan koronar kalsifikatsiyaning kuchayishi bizning tadqiqotimizda karbamilatlangan sortilin qoldiqlari va NT proBNP darajalari o'rtasidagi bog'liqlikni tushuntirishi mumkin.

Cistanche qo'shimchasining ta'siri: buyrak kasalliklarini davolash va immunitetni yaxshilash

So'nggi tadqiqotlar qon tomir va metabolik kasalliklar patogenezida sortilinning rolini aniqladi, lekin asosan eruvchan shakl funktsiyasini o'rganishdan ko'ra sortilinning to'qimalarda ifodalanishiga qaratilgan.7 Aylanib yuruvchi sortilin, in vitroda ko'rsatilgandek, ularning yorug'lik sohasining hujayra to'kilishidan kelib chiqishi mumkin. , 28-30 va ajratilgan sortilin bilan o'ralgan hujayradan tashqari pufakchalardan.9,31 Karbamilatsiya oqsillarning zaryad, struktura va funktsional xususiyatlarining o'zgarishiga olib keladi, funktsiyaning yo'qolishiga vositachilik qiladi va potentsial patofizyologik hujayra va molekulyar javoblar.5 Biz birinchisi uchun o'rnatdik. aylanib yuruvchi sortilinning o'ziga xos lizin qoldig'ining karbamillanish sxemasini vaqtisurunkalibuyrakkasallik, maqsadli MS yondashuvidan foydalangan holda va siliko modellashtirishda funktsional va strukturaviy o'zgarishlarni taxmin qilish. Biz lizin karbamilatsiyasi sortilinning pH ga bog'liq ligand yaqinligiga ta'sir etuvchi kislotali pH konformatsiyasini qo'llab-quvvatlashini taklif qilamiz. Oldingi kristall struktura tadqiqotlari shuni ko'rsatdiki, kech endosomalarga o'xshash muhitni ifodalovchi pH 5,5 da sortilin konformatsion o'zgarishlarga va dimer hosil bo'lishiga olib keladi, bu esa ma'lum bog'lanish joylarini ligandlarni bog'lash uchun mavjud bo'lmaydi.32,33

Lizin 260 b-propeller tunnelidagi tirozin neyrotensin bilan vodorod bog'ini hosil qiladi, bu esa neyrotensin bilan o'xshash bog'langan boshqa ligandlarga ham ta'sir qilishini bildiradi. Bizning tadqiqotimiz IL{2}} ning karbamilatlangan sortilinga yaqinligini aniqladi, bu IL-6 signalizatsiya yo'llarida ishtirok etishni taklif qiladi. Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, IL{4}} qon tomirlarining kalsifikatsiyasiga hissa qo'shishi mumkinsurunkalibuyrakkasallik.22,34,35 Kaltsifik qon tomirlari patologiyasida funktsional rol. Eriydigan karbamilatlangan sortilin in vitro va ex vivo osteogenik maqsadli genlarni, TNAP faolligini va matritsa mineralizatsiyasini oshirish orqali qon tomirlarining kalsifikatsiyasiga yordam berdi. Bundan tashqari, karbamilatlangan sortilinga IL-6 qo'shilishi osteogenik maqsadli genlar va TNAP faolligini yanada oshirdi.

Karbamilatsiya hujayradan tashqari matritsaning o'zgarishi, 36 oksidlovchi stress, 25 endotelial disfunktsiya, 37 va ateroskleroz38 bilan bog'liq bo'lib, ularning barchasi kalsifikatsiyaning boshlanishi va rivojlanishida ishtirok etadi. Garchi Mori va boshqalar. Protein karbamilatsiyasi mitoxondriyal oqsillarni karbamilatsiyasi orqali qon tomirlarining kalsifikatsiyasiga yordam beradi, deb xabar berdi6, hech qanday maxsus maqsadli oqsillar aniqlanmagan. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, uromodulinning karbamilatsiyasi in vitroda uning antikaltsifik xususiyatlarini yo'qotishiga olib keldi. 39 Ikkala tadqiqot ham umumiy karbamilatsiyani aniqlash uchun Western blotdan foydalangan. Biz in vitro karbamilatlangan sortilinning o'ziga xos in vivo lizin modifikatsiyasini taqlid qilishini ko'rsatdik.surunkalibuyrakkasallikMS dan foydalanadigan bemorlar. Shunday qilib, bizning tadqiqotimiz ulanishning muayyan mexanizmlari haqida maslahatlar beradisurunkalibuyrakkasallik, oqsil karbamilatsiyasi, IL-6 va kalsifikatsiya.

Ilgari, yuqori sarum sortilin darajalari ham qorin aortasi kalsifikatsiyasi va ham bog'liq ediyurak-qon tomirevents independent of traditional Framingham risk factors in a community-dwelling cohort of men aged >50 yil.10 Ko'krak qafasidagi og'riqlar xavfi past va o'rta bo'lgan bemorlarda sortilin darajasi koronar arteriya kasalligining og'irligi bilan bog'liq emas.40 Ushbu tadqiqotda biz ko'rsatishimiz mumkinki, bemorlarsurunkalibuyrakkasalliksortilin darajasi odatdagidan yuqori bo'ladibuyrakfunktsiyasi. Sortilin darajasi pasayish bilan oshmadibuyrakbemorda bir marta funktsiyasurunkalibuyrakkasallikeGFR bilan<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2.="" however,="" we="" observed="" an="" increase="" of="" carbamylated="" sortilin="" residues="" with="" decreased="">buyrakfunktsiyasi. Xuddi shunday, Kalim va boshqalar. umumiy va karbamilatlangan albumin darajasi o'rtasida hech qanday bog'liqlik yo'qsurunkalibuyrakkasallikbemorlar.41 Sortilin karbamilatsiyasi, buzilishi natijasidabuyrakfunktsiyasi bilan bog'liq qon tomirlarining kalsifikatsiyasini yanada kuchaytirishi mumkinsurunkalibuyrakkasallik- bog'liq mineral buzilishlar. Bizning tadqiqotimiz bir nechta kuchli va cheklovlarga ega. Kuchli tomonlari in vitro, ex vivo va turli eksperimental yondashuvlardan foydalangan holda bemorlarda olingan ma'lumotlarni tahlil qilishni o'z ichiga oladi. bo'lgan bemorlarni diqqat bilan tavsiflashsurunkalibuyrakkasallik, jumladan, ishtirokchilarning xususiyatlarini baholash uchun standartlashtirilgan so'rovnomalar, o'qitilgan tadqiqot hamshiralari tomonidan o'tkazilgan shaxsan o'rganish tashriflari va ko'plab laboratoriya qiymatlari va kalsifikatsiyani o'lchash tadqiqotning o'ziga xos kuchi hisoblanadi. Kichik kogorta bizning tadqiqotimizni cheklab qo'ygandek tuyulishi mumkin; ammo, biz mustaqil foydalandiksurunkalibuyrakkasallikzahmatkash maqsadli MS tomonidan sortilinning karbamilatsiya holatini tasdiqlash uchun kalsifikatsiya uchun keyingi ma'lumotlarga ega bo'lgan kohortlar. Klinik topilmalar nemis tilida qilingansurunkalibuyrakkasallikbemorlar va shu tariqa boshqa mamlakatlar yoki etnik guruhlar uchun topilmalarning umumlashtirilishini cheklashi mumkin. Va nihoyat, tadqiqot dizayni ko'plab muhim chalkashliklar uchun tuzatishga imkon bergan bo'lsa-da, har qanday kuzatuv tadqiqotida bo'lgani kabi, qoldiq chalkashliklarni butunlay inkor etib bo'lmaydi.

Cistanche ta'siri: buyrak etishmovchiligining oldini olish

Xulosa

Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, bu aylanma sortilinda post-translyatsiya qilingan o'ziga xos aminokislotalarni ko'rsatadigan birinchi tadqiqotdir. Bizning ma'lumotlarimiz mavjudligini ko'rsatadisurunkalibuyrakkasallikaylanma sortilinning karbamilatsiyasiga yordam beradi va karbamilatlangan sortilin in vitro, ex vivo va ohaklangan to'qimalarda mavjudligi bilan ko'rsatilganidek, prokalsifik xususiyatlarni namoyon qiladi. Sortilin karbamilatsiyasi, hatto yoshga qarab, CAC bilan bog'liq edi.buyrakfunktsiyasi va boshqa bir qator xavf omillari, sortilin karbamilatsiyasining oldini olish xavfini kamaytirishi mumkinligini ko'rsatadiyurak-qon tomirkalsifikatsiya va shu tariqayurak-qon tomirbo'lgan bemorlarda asoratlarsurunkalibuyrakkasallik. Shunday qilib, bizning natijalarimiz karbamilatlangan sortilinga hissa qo'shuvchi sifatida ishora qiladiyurak-qon tomirkasallik yukisurunkalibuyrakkasallikbemorlar.

cistanche

ADABIYOTLAR

Bu manba Vera Yankovski, IMCAR, tibbiyot fakulteti, RWTH Aachen universiteti, Aachen, Germaniya va boshqalar.