Herba Cistanche-dan olingan feniletanol glikozidlari gipoksik o'sma mikro muhitini yaxshilaydi va HIF-1 signalizatsiya yo'li orqali Oksaliplatin ta'sirini kuchaytiradi

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

LIMEI WEN, JUNPING XU, JIAWEI ZHANG va JIANHUA YANG

Abstrakt.

Jigar saratoni xavfli o'smalarning eng keng tarqalgan turlaridan biri bo'lib, yuqori xavfli o'smalari, tez rivojlanishi, yuqori kasallanish va o'lim bilan tavsiflanadi. Oksaliplatin (OXA) bardoshli toksikligi bilan rivojlangan jigar saratoniga qarshi sezilarli samaradorlikka ega ekanligi xabar qilingan. Qattiq o'smalarda gipoksik mikro-muhit epitelial-mezenximal o'tishni (EMT) rag'batlantiradi, bu ham jigar saratonining platina dorilariga chidamliligini keltirib chiqarishi mumkin. HerbaCistanche (Cistanche tubulosa) an'anaviy xitoy tibbiyotida va Herba'dan feniletanoid glikozidlarida tez-tez ishlatilganCistanche(CPhGs) asosiy faol komponentlardir. Ushbu tadqiqot CPhGlarning jigar saratoni hujayralarining hayotiyligi, apoptozi, migratsiyasi va invaziyasiga ta'sirini o'rganishga qaratilgan. HepG2 jigar saraton hujayralari nazorat, DMSO, CoCl2, OXA, OXA plus CoCl2 va CPhGs plus OXA plus CoCl2 guruhlariga bo'lingan. Keyinchalik, gipoksiya qo'zg'atuvchi omil 1 (HIF-1), lizil oksidaza o'xshash 2 (LOXL2) va EMT bilan bog'liq genlar va oqsillarning (ya'ni, E) ifoda darajalarini aniqlash uchun teskari transkripsiya-miqdoriy PCR va western blot tahlili o'tkazildi. -kaderin va Twist), CPhGlarning jigar saratoniga ta'sirini o'rganish uchun. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CPhGs OXA ning jigar saratoniga ta'sirini kuchaytirishi va jigar saratoni hujayralarining migratsiyasini, invaziyasini va apoptotik tezligini inhibe qilishi mumkin. Bundan tashqari, CPhGlarni davolash HIF-1, LOXL2 va Twistning pastga regulyatsiyasini va E-kaderinning yuqori regulyatsiyasini samarali ravishda keltirib chiqardi. Mavjud topilmalar shuni ko'rsatdiki, CPhGs OXA ga sezuvchanlikning sezilarli darajada oshishiga va jigarda gipoksiyadan kelib chiqqan EMTni bostirishga sabab bo'lgan.

cistanche foydasi: anti-Jigar saratoni

Kirish

Liver cancer is a malignant tumor that usually involves the digestive system, and consists of primary and secondary types. Primary liver cancer is divided into hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma (1,2). Notably, liver cancer is associated with a high incidence and mortality rate worldwide (3). According to the World Health Organization, it is predicted that there will be >2030 yilga kelib 1,000,000 jigar saratoni bilan bog'liq o'limlar va yangi tasdiqlangan holatlarning 46,6 foizi materik Xitoyda bo'ladi.

Oksaliplatin (OXA) klinik sharoitda bardoshli toksikligi bilan jigar saratoni o'sishiga inhibitiv ta'sir ko'rsatishi haqida xabar berilgan. Shunga qaramay, platina asosidagi dori terapiyasining umumiy samaradorligi o'simta hujayralarining qarshiligi bilan to'sqinlik qiladi (4). Ma'lumki, jigar saratoni boshqa saraton turlari bilan solishtirganda kimyoterapiyaga nisbatan past sezuvchanlikni namoyon qiladi. Jigar saratonining ko'p dori-darmonlarga chidamliligi uning ko'plab terapevtik agentlarga chidamliligiga yordam berdi (5). Oldingi tadqiqotda Xie va Zhong (6) HepG2 xujayralari gipoksik sharoitda adriamitsin, 5-fluorourasil va sisplatinga zaif sezuvchanlik ko'rsatganligini xabar qilishdi. Platinaga asoslangan kimyoterapiya agentlari saraton kasalligini davolashning asosiy usullari bo'lishiga qaramay, bemorlarda ushbu dorilarga qarshilik mavjud. Bundan tashqari, jigar saratoni bilan og'rigan bemorlarning prognozi yomonligicha qolmoqda (7,8). Bugungi kunga kelib, jigar saratoni bilan og'rigan bemorlarning dori vositalariga chidamliligini tekshirish va dori sezgirligini oshirish bo'yicha keng ko'lamli harakatlar amalga oshirildi.

Gipoksik sharoitda saraton hujayralarida revaskulyarizatsiya sodir bo'ladi, bu epiteliya-mezenximaga o'tishga (EMT) va tomir mimikriyasiga (VM) olib kelishi mumkin. EMT va VM keyinchalik invaziya va uzoq metastazni kuchaytirishi mumkin. Bundan tashqari, EMT saraton rivojlanishining harakatlantiruvchi kuchi sifatida rol o'ynashi taxmin qilingan (9). Bundan tashqari, gipoksiya qo'zg'atuvchi omillar (HIFs) yangi tomirlarning shakllanishi, energiya almashinuvi, hujayra proliferatsiyasi, invaziya va metastazda ishtirok etadi (10).

Lizil oksidaza (LOX) o'xshash 2 (LOXL2) oqsili LOX oilasining a'zosi bo'lib, kollagen va elastinning kovalent o'zaro bog'lanishi bilan chambarchas bog'liq bo'lib, bu fibrozga olib kelishi mumkin va hujayradan tashqari matritsaning yaxlitligi uchun juda muhimdir ( 11). Oldingi tadqiqotda LOXL2 saraton hujayralarining metastazlari bilan chambarchas bog'liq deb hisoblangan (12). Bundan tashqari, LOXL2 yomon prognozni baholash uchun muhim ko'rsatkichlar bo'lgan ekstra- va hujayra ichidagi yo'llar orqali ko'plab xavfli saraton turlarining patogenezi va rivojlanishini modulyatsiya qilish uchun ko'rsatildi (13,14).Herba Cistanchean'anaviy xitoy tabobatida tez-tez qo'llanilgan cho'l hududlarida keng tarqalgan tonik o't (15,16).Cistanche tubulosa(C. tubulosa)Shinjon avtonom tumanida keng tarqalgan tabiiy o'simlik dori. Herba Cistanche (CPhGs) dan olingan feniletanoid glikozidlar Herba Cistanche ning asosiy faol komponentlaridan biri bo'lib xizmat qiladi. Ilgari Xu va boshqalar (17) CPhG'lar H22 o'simtasi bo'lgan sichqonlarda jigar shikastlanishini susaytirishi va saraton hujayralarining o'sishini inhibe qilishi mumkinligini ko'rsatdi. Asosiy mexanizm qon zardobidagi fetoproteinning kamayishi bilan bog'liq bo'lishi va sichqonlarda immunitetni oshirishi mumkinligi taxmin qilingan.

Ushbu tadqiqotda CoCl2 yordamida HepG2 jigar saratoni hujayralarining gipoksik modeli yaratildi. Shu asosda, ushbu tadqiqot OXA ning gipoksik sharoitda CPhG mavjudligida saraton hujayralarining ko'payishi, apoptozi, migratsiyasi va invaziyasiga ta'sirini o'rganishga qaratilgan. Bundan tashqari, HIF‑1, LOXL2, E-kaderin va Twistning mRNK va oqsil ifoda darajalari aniqlandi. Bundan tashqari, CPhGlarning jigar saratoni patogeneziga ta'siri ostida yotgan aniq mexanizmlar o'rganildi.

Cistanche ekstraktining foydasi: jigar saratonini davolash

Materiallar va uslublar

Hujayra chizig'i. STR usuli yordamida aniqlangan HepG2 jigar saratoni hujayra liniyasi Shinjon tibbiyot universitetining birinchi filiali kasalxonasi (Urumchi, Xitoy) Klinik tadqiqot instituti tomonidan taqdim etilgan. Hujayralar yuqori glyukozali DMEM (HyClone; Cytiva) tarkibida 10 foiz xomilalik sigir zardobida (FBS; Hyclone; Cytiva) 37˚C da 5 foiz CO2 bo'lgan inkubatorda yetishtirildi.

Preparation of CPhGs. C. tubulosa extraction (CPhGs) was obtained from Hetian Dichen Biotech Co., Ltd.. The content of CPhGs was >80 foizni tashkil etdi, ular orasida echinacoside va verbascose tarkibi mos ravishda 44,5 va 16,1 foizni tashkil etdi. C. tubulosa (Schrenk) Wight poyalari 2016 yil oktyabr oyida Xitoyning Shinjon shahridan yig'ilgan. Zavodni doktor Junping Xu aniqlagan. Ushbu vaucher namunalarining barchasi (№ 201610) Shinjon tibbiyot universiteti, Shinjon, Xitoy, O'simlik gerbariysi, farmatsiya maktabida saqlangan.

Eksperimental dizayn. HepG2 hujayralari (5x104/ml) turli konsentrasiyalarda CPhG (5, 25, 50, 100, 200 va 500 mkg/ml) bilan 37˚C da 48 soat davomida (ekishdan 24 soat keyin) ishlov berildi. CPhGs‑L/M/H dozasini skrining qilish uchun. HepG2 hujayralari (5x104/ml) quyidagi guruhlarga bo'lingan: i) yuqori glyukozali DMEMda yetishtirilgan nazorat guruhi; ii) DMSO guruhi, 0,1 foiz DMSO (v/v) da yetishtirilgan; iii) 100 mkM CoCl2 ni o'z ichiga olgan sarumsiz DMEMda yetishtirilgan CoCl2 guruhi (gipoksiya model guruhi); iv) OXA

guruh (ijobiy nazorat guruhi), 5 µM OXA (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.); v) 100 mkM CoCl2 bilan birlashtirilgan 5 mkM OXA da yetishtirilgan OXA plyus CoCl2 guruhi; va vi) CPhGs‑L/M/H (mos ravishda 25, 50 va 100 µg/ml) 5 µM OXA va 100 µM CoCl2 bilan birlashtirilgan CPhGs guruhlari.

Hujayra hayotiyligini tahlil qilish. Hujayra hayotiyligi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) muvofiq va avval tavsiflanganidek (18) Hujayralarni hisoblash to'plami‑8 (CCK‑8) tahlili yordamida aniqlandi. Hujayralar (2.0x103 hujayra/quduq) 96-quduqli plitalarga ekilgan. Keyinchalik, ekishdan ~ 24 soat o'tgach, hujayralar har bir guruhdagi davolash shartlariga muvofiq 48 soat davomida davolandi. Keyin muhit 100 µl yuqori glyukoza DMEM bilan almashtirildi, so‘ngra 10 µl CCK‑8 reaktivi qo‘shildi; hujayralar 37˚C da 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Optik zichlik 450 nm da multi-detektorli mikroplastinka o'quvchi (Thermo Fisher Scientific, Inc.) yordamida o'lchandi. Har bir shart uchun oltita replikatsiya tayyorlangan.

Apoptoz tezligini aniqlash. Apoptotik darajasi Annexin V/PI apoptotik aniqlash to'plami (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) yordamida aniqlangan. HepG2 xujayralari (5x105) 6-quduqli plastinkalarda 37˚C haroratda 5 foiz CO2 ga ekilgan. Keyinchalik, davolanishdan ~ 24 soat o'tgach, hujayralar 4 soat davomida sarumsiz DMEMda o'stirildi. Keyin hujayralar 0,25 foiz tripsinlangan (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) yordamida hazm qilindi, so'ngra oldindan sovutilgan PBS bilan kamida uchta yuvish amalga oshirildi. 4˚C da 5 daqiqa davomida 167,7 xg santrifüjdan so'ng, hujayralar 1X bog'lovchi bufer bilan qayta suspenziya qilindi va konsentratsiyasi 1 ~ 5x106/ml ga o'rnatildi, so'ngra 5 µl Annexin V‑FITC va 5 µl PI bilan 15 daqiqa davomida bo‘yaldi. xona haroratida. Keyin hujayralar BD LSRFortessa oqim sitometri (BD Biosciences) va FlowJo yordamida oqim sitometriyasidan o'tkazildi.

10.6.2 dasturiy ta'minot (Tree Star, Inc.).

Yarani davolash tahlili. CPhGlarning hujayra migratsiyasiga inhibitiv ta'siri yarani davolash tahlili bilan tekshirildi (19). Hujayralar 100 foiz birlashtiruvchi monoqatlam olinmaguncha, 6-quduqli plitalarga ekilgan. Keyinchalik, hujayralar 200 µl pipetka uchi yordamida yaralangan, PBS bilan yuvilgan va sarumsiz muhitda muolajalar bilan inkubatsiya qilingan. Giyohvand moddalarni davolashdan so'ng yarani davolash tezligi mos ravishda 0, 12, 24 va 48 soatlarda o'lchandi. Yara tasvirlari lyuminestsent mikroskop (Nikon Ti‑S, Yaponiya) yordamida x10 kattalashtirish ostida olingan. Yaraning yopilishi har bir davrdagi yara masofasi bilan o'lchandi va 0 soatdagi dastlabki yara masofasining foizi sifatida ifodalandi.

Transwell tahlillari. Hujayra invaziyasi Transwell tahlillari bilan baholandi. Hujayralar (1x105 hujayra/ml) 200 mkl yuqori glyukozali DMEMda FBSsiz suspenziya qilindi. Keyin hujayralar polietilen tereftalat filtrli membrana bilan qoplangan Matrigel bilan qoplangan ustki quduqlarga ekilgan (g'ovak o'lchami, 8,0 mikron). Pastki kameraga 10% FBS o'z ichiga olgan jami 500 µl yuqori glyukozali DMEM joylashtirildi. Paxta tayoqchalari 37˚C da 48 soatdan keyin filtrning yuqori yuzasidagi hujayralarni olib tashlash uchun ishlatilgan. Membrana orqali kirib kelgan hujayralar 30 daqiqa davomida 4 foizli paraformaldegid bilan mahkamlangan. Keyinchalik, hujayralar xona haroratida 15 daqiqa davomida 0,1 foizli kristalli binafsha rang bilan bo'yalgan. Bosqinchi hujayralar floresan mikroskop (Nikon Ti‑S) ostida x100 kattalashtirishda kuzatildi.

Teskari transkripsiya-miqdoriy PCR (RT‑qPCR). Jami RNK HepG2 hujayralaridan TRIzol® reagenti (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) yordamida ajratildi va cDNK sintezi ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq PrimeScript RT reagent to'plami (Takara Bio, Inc.) yordamida amalga oshirildi. qPCR 7500 Real-Time PCR tizimida (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq TB green™ Premix Ex Taq™ (Takara Bio, Inc.) yordamida amalga oshirildi. qPCR uchun ishlatiladigan primerlar I-jadvalda keltirilgan. PCR shartlari 95˚C da 30 soniya davomida denatürasyondan, keyin 5 soniya davomida 95˚C da 40 denaturatsiya siklidan va 30 soniya davomida 60˚C da tavlanishdan iborat. Nihoyat, kuchaytirish natijalari 2‑DDCq usuli yordamida tahlil qilindi (20).

Western blot tahlili. Proteinlar proteaz va fosfataza inhibitörlerini o'z ichiga olgan RIPA lizis tamponida (Thermo Fisher Scientific, Inc.) gomogenlash orqali 48 soat davomida davolangan hujayralardan olingan. Hujayra oqsili tarkibi BCA usuli yordamida aniqlandi. Keyin oqsillar (4{33}} mkg) SDS‑PAGE orqali 10 foizli jelda ajratildi va PVDF membranasiga o'tkazildi. Membrana 4˚C da 1 soat davomida 5 foizli yog‘siz sutda bloklangan va quyidagi asosiy antikorlar bilan inkubatsiya qilingan: ‑aktin (1:5,000; kat. № bs‑0061R; BIOSS), HIF ‑1 (1:1,000; kat. № ab179483; Abcam), LOXL2 (1:500; kat. № ab179810; Abcam), E-kaderin (1:1,000 ; cat. № bs‑10009R; BIOSS) va Twist1 (1:500; cat. no. bs‑2441R; BIOSS) 4˚C da tunda. Keyin membrana echki quyonga qarshi IgG H&L ikkilamchi antikorlari (1:2000; kat. № ab205718; Abcam) bilan xona haroratida 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. TBS‑0,05% Tween‑20 bilan yuvilgandan so'ng, dog'lar Kengaytirilgan Kimiluminesans tizimi (Amersham; Cytiva) yordamida vizualizatsiya qilindi. Tasvirlarning nisbiy intensivligi ImageJ2x dasturiy ta'minoti (2.1.4.7 versiyasi; Rawak Software Inc.) yordamida densitometrik tahlil orqali yarim miqdoriy aniqlandi va natijalarning densitometrik chizmalari ‑aktin intensivligiga normallashtirildi.

Statistik tahlil. Ma'lumotlarni tahlil qilish uchun SPSS 19.0 dasturidan (SPSS, Inc.) foydalanilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish sifatida taqdim etilgan va bir tomonlama ANOVA, so'ngra Tukeyning post hoc testi bilan tahlil qilingan. P<0.05 was="">statistik jihatdan muhim farqni ko'rsatadi. Barcha tajribalar kamida uch nusxada amalga oshirildi.

Natijalar

CPhGlarning hujayra hayotiyligiga ta'siri. HepG2 xujayralari turli konsentratsiyali CPhGs (5, 25, 50, 100, 200 va 500 mkg/ml) bilan 48 soat davomida (ekishdan 24 soat keyin) ishlov berildi. 1-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat guruhiga nisbatan 200 va 500 mkg/ml CPhGlar bilan ishlov berilgan hujayralarning hayotiyligi sezilarli darajada pasaygan (P).<0.05). these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" could="" modulate="" cell="" viability="" in="" a="" dose‑dependent="">

CPhG'lar OXA ning jigar saratoniga ta'sirini kuchaytiradi. CPhGlarning OXA-modulyatsiyalangan HepG2 hujayralarining hayotiyligiga ta'siri keyinchalik baholandi (2-rasm). ~48 soatdan keyin CPhG va OXA kombinatsiyasi HepG2 hujayralarining hayotiyligini OXA plus bilan solishtirganda sezilarli darajada pasaytirdi.CoCl2 guruhi. Xususan, CPhGs‑M plyus OXA plus CoCl2 va CPhGs‑H plyus OXA plus CoCl2 OXA plus CoCl2 guruhiga nisbatan HepG2 hujayralarining hayotiyligini sezilarli darajada inhibe qildi (P).<0.05 and=""><0.01,>

CPhG'lar jigar saratoni hujayralarining migratsiyasini va ishg'olini inhibe qiladi. CPhG va OXA bilan davolashdan keyin jigar saratoni hujayralarining invaziv salohiyati va migratsiya qobiliyatini qo'shimcha o'rganish uchun yarani davolash va Transwell tahlillari o'tkazildi. Yarani davolash tahlili shuni ko'rsatdiki, DMSO guruhidagiga qaraganda, HepG2 hujayralarining migratsiyasi CoCl2, OXA va CPhGs (200 yoki 500 mkg/ml) bilan davolashdan so'ng kamaygan (P).<0.05; fig.="" 3a="" and="" b).="" for="" the="" transwell="" assay,="" the="" invasive="" ability="" of="" cells="" was="" markedly="" inhibited="" in="" the="" co-treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2)="" compared="" with="" that="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 3c="" and="" d).="" conversely,="" in="" the="" co‑treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2),="" the="" invasive="" potential="" and="" migratory="" ability="" of="" cells="" was="" markedly="">

CPhGs va OXA ning apoptozga ta'siri. uchun CPhGs va OXA kombinatsiyasi bilan davolashdan keyin

48 soat, HepG2 hujayralari Annexin V-FITC va PI bilan bo'yalgan, so'ngra hujayra apoptozini aniqlash uchun oqim sitometriyasi o'tkazildi. 4A-rasmda ko'rsatilganidek, birgalikda davolash guruhlari (CPhGs‑L/M/H plyus OXA va CoCl2) CPhGs kontsentratsiyasining oshishi bilan apoptotik hujayralar nisbatida bosqichma-bosqich o'sishni ko'rsatdi. CPhGs va OXA bilan davolash qilingan hujayralarning aksariyati Q4 mintaqasida lokalizatsiya qilingan, bu CPhG va OXA kombinatsiyasi erta bosqichda apoptozni keltirib chiqarganligini ko'rsatdi. OXA plyus CoCl2 guruhi bilan solishtirganda, OXA, CoCl2 va o'rtacha yoki yuqori dozalarda CPhG (P) bilan davolash qilingan guruhlarda hujayralarning apoptotik tezligining sezilarli darajada oshishi aniqlandi.<0.01; fig.="" 4b).="" these="" findings="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" oxa="" and="" cphgs="" may="" contribute="" to="" the="" apoptosis="" of="" hepg2="">

mRNA expression levels of HIF‑1α, LOXL2, E‑cadherin and Twist following CPhGs and OXA co‑incubation. There were no statistical differences in the mRNA expression levels of HIF‑1α, LOXL2, E‑cadherin and Twist between the control and DMSO groups (P>0.05; 5A‑D-rasm). Aksincha, CoCl2 DMSO bilan solishtirganda LOXL2, HIF-1 va Twist mRNK ifoda darajalarining sezilarli darajada oshishiga olib keldi.guruh (P<0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group,="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" loxl2,="" hif‑1α="" and="" twist="" were="" significantly="" enhanced="" in="" the="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups=""><0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" by="" contrast,="" cocl2="" induced="" a="" significant="" downregulation="" in="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" dmso="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" all="" concentrations="" of="" cphgs="" combined="" with="" oxa="" and="" cocl2="" were="" able="" to="" upregulate="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" these="" results="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" cphgs="" and="" oxa="" effectively="" inhibited="" the="" emt="" under="" hypoxic="">

CPhG va OXA ko-inkubatsiyasidan keyin HIF-1, LOXL2, E-kaderin va Twistning protein ifoda darajalari. Vestern bloting natijalari HIF‑1, LOXL2 va Twist oqsillarini ifodalash darajalari DMSO guruhidagilarga nisbatan gipoksik sharoitda yuqori tartibga solinganligini aniqladi. Aksincha,

E-kaderinning protein ekspresyon darajasi gipoksik sharoitda pastga tushirildi (P<0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" notably,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" hif‑1α,="" loxl2,="" and="" twist="" were="" significantly="" decreased="" in="" the="" cphgs‑m="" +="" oxa="" +="" cocl2="" or="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" compared="" with="" dmso="" group,="" cocl2="" treatment="" significantly="" decreased="" the="" expression="" level="" of="" e‑cadherin.="" in="" the="" cphgs="" groups,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" were="" significantly="" increased="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6b).="" these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" treatment="" could="" effectively="" inhibit="" the="" downregulation="" of="" e‑cadherin,="" and="" the="" upregulation="" of="" hif‑1α,="" loxl2="" and="" twist="" induced="" by="">

Munozara

Gipoksiya saraton mikro muhitida keng tarqalgan xususiyatdir; bu asosan ning ko'payishi bilan bog'liqsaraton hujayralari aberrant neovassellarning tomir shakllanishi bilan solishtirganda tezroq. Bundan tashqari, boshqa biologik jarayonlar, jumladan proliferatsiya, metastaz va dori sezgirligi gipoksiyaga ta'sir qiladi (21). O'simtaning gipoksik mikro muhiti saraton kasalligining patogenezi va rivojlanishi uchun juda muhimdir, shuningdek, jigar saratonining dori-darmonlarga chidamliligi va vaskulyarizatsiyasida ham muhimdir (22).

Ushbu tadqiqotda HepG2 xujayralari turli konsentratsiyali CPhGlar bilan ishlov berildi, ular orasida CPhGs (200 mkg/ml) hujayra hayotiyligini sezilarli darajada pasayishiga olib kelishi mumkin edi. Shunisi e'tiborga loyiqki, CPhGlar hujayra hayotiyligini dozaga bog'liq holda modulyatsiya qilishi mumkin. Gipoksik sharoitda OXA va CPhG (50 yoki 100 mkg/ml) kombinatsiyasi faqat OXA bilan davolash bilan solishtirganda HepG2 hujayralarining hayotiyligini sezilarli darajada inhibe qilgan. Xuddi shunday dozaga bog'liq tendentsiya jigar saratoni hujayralarining migratsiya va invaziya tahlillarida kuzatildi. Hozirgi vaqtda jigar kasalligi patogenezida saraton hujayralari apoptozisining rolini o'rganish uchun keng qamrovli tadqiqotlar olib borildi (23-26). Apoptozni rag'batlantirish orqali jigar saratonini davolash uchun bir qancha strategiyalar ishlab chiqilgan (27-29); shuning uchun aralashish

HepG2 hujayra apoptozi jigar saratonining oldini olish va davolash uchun istiqbolli nomzod bo'lib xizmat qilishi mumkin. HepG2 hujayralarining apoptozi CPhGs‑M/‑H va OXA kombinatsiyasi bilan davolashdan so'ng, faqat OXA bilan davolash qilingan hujayralardagiga nisbatan sezilarli darajada yaxshilandi. Shu sababli, CPhGlar OXA ning o'smaga qarshi ta'sirini sezilarli darajada kuchaytirishi mumkinligi ko'rsatilgan.

HIF-1 E-kaderin, N-kaderin va Vimentinning ifoda darajalarini, shuningdek, Snail1/2, Zeb1 va Twist1 kabi ba'zi transkripsiya omillarini oshirishi mumkin. Keyinchalik, bu hujayra polaritesining yo'qolishiga, hujayra-hujayra birikmalarining bo'shashishiga, sitoskeletal oqsilning o'zgarishiga va saraton hujayralarining ko'chishi va invaziyasiga olib kelishi mumkin, bu esa saraton hujayralarining bazilyar membrana orqali qon aylanish tizimiga o'tishiga olib kelishi mumkin. va keyingi metastazlar (30). Ushbu tadqiqotda CoCl2 gipoksiya modelini qo'zg'atish uchun ishlatilgan, bu HepG2 hujayralarining hayotiyligini oshirishga, shuningdek hujayralar migratsiyasi va invaziyasiga olib keldi. Bundan tashqari, HIF-1 ning mRNK va oqsil ifoda darajalari sezilarli darajada oshdi, bu CoCl2 ning hosil bo'lishiga olib kelganligini ko'rsatadi.

gipoksik mikro muhit. CPhGs va OXA kombinatsiyasi bilan davolash gipoksiya bilan qo'zg'atilgan HIF-1 ning mRNK va oqsillarni ifodalash darajasini sezilarli darajada inhibe qildi. Ushbu topilmalar CPhG'lar jigar saratonining mikro muhitini dozaga bog'liq holda susaytirishi mumkinligini ko'rsatdi.

E-kaderin Ca2 plyusga bog'liq bo'lgan adezyon molekulasi bo'lib, hujayra-hujayraga yopishishda, to'qima tuzilishining yaxlitligini saqlashda va signal uzatishda muhim rol o'ynaydi. Pastroq regulyatsiya yoki hatto yopishish funktsiyasini yo'qotish holatlarida, saraton hujayralari nazoratsiz ko'payish va dedifferentsiyani namoyon qilishi mumkin, bu esa saraton hujayralarining ko'payishiga va keyingi metastazlarga yordam beradi (31). Bundan tashqari, E-kaderin saraton hujayralarining EMTni inhibe qilish uchun juda muhimdir, bu ko'plab epitelial malign o'smalarning differentsiatsiyasi, invaziyasi, metastazlari va prognozi bilan chambarchas bog'liq. Twist, Snail va Zeb kabi EMTni qo'zg'atuvchi transkripsiya omillari (EMT‑TF) EMT uchun juda muhimdir. Gipoksiya EMT‑TF ifodasini keltirib chiqaradigan signal yo'llarini faollashtirishi haqida xabar berilgan; ayniqsa, bu omillarning transkripsiyaviy faollashuvi orqali EMTni bevosita rag'batlantirishi mumkin (32). Burilish yuqori darajada saqlanib qolgan spiral-halqali spiraldir

so'nggi yillarda yangi aniqlangan transkripsiya omili. Yuqori Twist ifodasi saraton hujayralarining ko'p turlarida aniqlangan (33). Shu sababli, Twist ifodasi va saraton hujayralarining ko'chishi yoki metastazi o'rtasidagi bog'liqlikni, shuningdek metastazning klinik oldini olish va davolashni o'rganish juda muhimdir (34). Ushbu tadqiqotda E-kaderinning mRNK va oqsillarni ifodalash darajalari gipoksiya borligida pastga regulyatsiya qilinganligi, Twistning mRNK va oqsillarni ifodalash darajalari esa ko'tarilganligi aniqlandi. Ushbu topilmalar bosqinchilik va migratsiya tahlillari natijalariga mos keldi, bu gipoksiya EMT paydo bo'lishiga hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatdi. OXA bilan davolashdan so'ng, E-kaderinning protein ekspresyon darajasi pasaygan; Bu OXA ning jigar saratoni hujayralarining o'sishini inhibe qilishda kam samaradorlik ko'rsatganligini ko'rsatdi, holbuki u EMTni rag'batlantirishi mumkin. Biroq, CPhGs bilan birgalikda HepG2 hujayralarining OXA ga sezuvchanligi gipoksiya borligida sezilarli yaxshilanishni ko'rsatdi. Bundan tashqari, CPhG va OXA bilan birgalikda davolash HepG2 hujayralarining hujayra hayotiyligini, migratsiyasini va ishg'olini inhibe qilishi mumkin. Hozirgi tadqiqot faqat aniqlandi

Twist va E-kaderin ifodasi; shuning uchun kelajakdagi tadqiqotlar CPhGlarning jigar saratonida gipoksiyadan kelib chiqqan EMTga inhibitiv ta'sirini baholash uchun ko'proq EMT bilan bog'liq markerlarga e'tibor qaratishga qaratilgan.

HIF-1 LOXL2 ifodasini rag'batlantirishi va jigar saratoni xujayralarining ko'chishi va invaziyasini kuchaytirishi haqida xabar berilgan, bu jigar saratonining yomon prognozi bilan chambarchas bog'liq bo'lishi mumkin (30). Oldingi tadqiqotda qo'shni jigar saratoni to'qimalarida LOXL2 ning ifoda darajalari saraton to'qimalariga nisbatan sezilarli darajada oshdi (35). Bundan tashqari, u jigar saratonining invaziyasi va metastazlari bilan chambarchas bog'liq edi. Kichkina interferent RNK orqali LOXL2 genini o'chirish HepG2 va SMCC‑7721 hujayralarining ko'payishini inhibe qildi, bu saraton hujayralarining hujayra siklini to'xtatishga va apoptozning kuchayishiga olib keldi (36). Shao va boshqalar (35) jigar saratoni namunalaridagi LOXL2 va klinikopatologik omillar, VM va davolash uchun operatsiya qilingan 201 holatlar orasida prognoz o'rtasidagi bog'liqlikni o'rgandilar. LOXL2 jigar saratoni patogenezi va rivojlanishida muhim rol o'ynagan, bu dori ishlab chiqarish uchun maqsad bo'lib xizmat qilishi mumkinligi taxmin qilingan. Bundan tashqari, Peng va boshqalar (37) LOXL2 Snail/E-cadherin va Src kinaz/Fokal adezyon kinaz signalizatsiya yo'llarini faollashtirishi mumkinligini ko'rsatdi, bu esa oshqozon saratoni hujayralarining EMT patogenezi va rivojlanishiga hissa qo'shishi mumkin. Ushbu tadqiqotda, gipoksik sharoitda, LOXL2 ning mRNK va oqsil ifoda darajalari ko'tarildi, OXA bilan davolashdan keyin uning ekspressiyasi pastga tushdi. Bundan tashqari, CPhG va OXA kombinatsiyasi bilan davolash OXA ning jigar saratoniga qarshi o'smaga qarshi ta'siriga samarali yordam berishi mumkin bo'lgan LOXL2 ekspressiyasining aniq pasayishiga olib keldi.

Ushbu tadqiqotda ba'zi cheklovlar mavjud. Ushbu tadqiqotda yana ikkita jigar saratoni hujayra liniyasi, shu jumladan SMCC-7721 hujayra liniyasi qo'llanilishi kerak edi, ammo ulardan foydalanish mumkin emas edi, chunki bu hujayra liniyalarini sotib olish mumkin emas edi, chunki ular noto'g'ri aniqlangan va HeLa hujayralaridan olingan. Bundan tashqari, ushbu tadqiqot hujayralardagi turli konsentratsiyali CPhGlarning antioksidant ta'sirini tahlil qilmagan.

Xulosa qilib aytganda, CPhG'lar HIF-1 signalizatsiya yo'lini modulyatsiya qilish orqali jigar saratoni hujayralarining gipoksik o'sma mikro muhitini almashtirishi mumkin. Bundan tashqari, jigar saratoni hujayralarining OXA ga sezgirligi CPhG va OXA kombinatsiyasi bilan davolanishga javoban sezilarli darajada oshdi. Ushbu topilmalar jigar saratonining kimyoterapiyaga sezgirligini oshirish uchun yangi davolash strategiyasini taqdim etishi mumkin.

Minnatdorchilik

Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Moliyalashtirish

Ushbu tadqiqot Shinjondagi tabiiy dori faol komponentlari va dori chiqarish texnologiyasi asosiy laboratoriyasi (grant № XJDX1713), Shinjon-Uyg‘ur avtonom viloyatida ilmiy va texnologik innovatsiyalar bo‘yicha yetakchi nomzodi uchun zaxira nomzodi loyihasi (grant № 2019XS14) tomonidan qo‘llab-quvvatlandi. Xitoy Milliy tabiiy fanlar fondi (grant № 81860735) va Bethune xayriya tashkiloti

"Bethune·Quest-farmatsevtik ilmiy tadqiqot salohiyatini qurish" fondi (grant № B‑19‑H‑20200622).

Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi

Joriy tadqiqot davomida foydalanilgan va/yoki tahlil qilingan maʼlumotlar toʻplami tegishli muallifdan asosli soʻrov boʻyicha mavjud.

Mualliflarning hissalari

LMW va JWZ tajribalar o'tkazdi, qo'lyozmani tuzdi va barcha xom ma'lumotlarning haqiqiyligini tasdiqladi. JPH va JHY ushbu tadqiqotni ishlab chiqdilar. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmani o'qib chiqdilar va tasdiqladilar.

Etikani tasdiqlash va ishtirok etishga rozilik

Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Nashr qilish uchun bemorning roziligi

Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Raqobatdosh manfaatlar

Mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar.

Ma'lumotnomalar

1. Gepatotsellyulyar karsinoma. Nat Rev Dis Primers 2: 16019, 2016 yil.

2. Gingold JA, Zhu D, Li DF, Kaseb A va Chen J: Birlamchi jigar saratonida genomik profillash va metabolik gomeostaz. Trends Mol Med 24: 395‑411, 2018 yil.

3. McGuire S: Jahon saraton hisoboti 2014. Jeneva, Shveytsariya: Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti, saraton bo'yicha tadqiqotlar bo'yicha xalqaro agentlik, JSST matbuoti, 2015. Adv Nutr 7: 418‑419, 2016.

4. G'olomrizo K, Jadidi-Niaragh F, Jahromi AS, Zandi K va Hojjat-Farsangi M: O'simta hujayralarining hozirgi maqsadli terapiya vositalariga qarshilik ko'rsatish mexanizmlari. Tumor Biol 37: 10021-10039, 2016 yil.

5. Dong X va Mumper RJ: Ko'p dori-darmonlarga chidamli o'smalarni davolash uchun nanomtibbiy strategiyalar: Hozirgi taraqqiyot. Nanomedicine (Lond) 5: 597-615, 2010 yil.

6. Xie Y va Zhong DW: AEG-1 PI3K/AKT/HIF-1alpha/MDR-1 yo'lini tartibga solish orqali gipoksiyadan kelib chiqqan gepatosellüler karsinoma kimyorezistentligi bilan bog'liq. EXCL J 15: 745-757, 2016 yil.

7. Xiong H, Ni Z, Xe J, Jiang S, Li X, Xe J, Gong V, Zheng L, Chen S, Li B va boshqalar: LncRNA HULC Sirt1ni barqarorlashtirish orqali otofagiyani qo'zg'atadi va HCC hujayralarining kimyoviy sezgirligini susaytiradi. Onkogen 36: 3528‑3540, 2017 yil.

8. Gade TPF, Tucker E, Nakazawa MS, Hunt SJ, Wong W, Krock B, Weber CN, Nadolski GJ, Clark TWI, Soulen MC, va boshqalar: Ishemiya gepatotsellyulyar karsinomada sukunat va otofagiyaga qaramlikni keltirib chiqaradi. Radiologiya 283: 702‑710, 2017 yil.

9. Siegel RL, Miller KD va Jemal A: Saraton statistikasi, 2017. CA Cancer J Clin 67: 7‑30, 2017.

10. Dong LQ, Shen BQ va Ma Y: Gepatotsellyulyar karsinomada gipoksiya mikro muhitini tadqiq qilish jarayoni. Zhong Guo Pu Wai Ji Chu Yu Lin Chuang Za Zhi 25: 1254-1258, 2018 yil (Xitoy tilida).

11. Moon HJ, Finney J, Ronnebaum T va Mure M: Inson lizil oksidaza o'xshash 2. Bioorg Chem 57: 231-241, 2014 yil.

12. Ferreira S, Saraiva N, Rijo P va Fernandes AS: LOXL2 inhibitörleri va ko'krak saratoni rivojlanishi. Antioksidantlar (Bazel) 10: 312, 2021.

13. Filp CJ, Siebeke I, Klements D, Miller S, Habgud A, Jon AE, Navaratnam V, Hubbard RB, Jenkins G va Jonson SR: Hujayradan tashqari matritsaning o'zaro bog'lanishi fibroblast o'sishini kuchaytiradi va o'pka fibrozida matritsa proteolizidan himoya qiladi. Am J Respir Cell Mol Biol 58: 594‑603, 2018 yil.

14. Galvan JA, Zlobek I, Wartenberg M, Lugli A, Gloor B, Perren A va Karamitopoulou E: E-kaderin repressorlari SNAIL, ZEB1 va ZEB2 ning o'simta va stromal hujayralar tomonidan ifodalanishi o'simta tomurcuklanma fenotipiga ta'sir qiladi va heterojenlikni ko'rsatadi. oshqozon osti bezi saratonidagi hujayralar. Br J Saraton 112: 1944-1950, 2015.

15. Gu C, Yang X va Huang L: Cistanches herba: Neyrofarmakologiya tekshiruvi. Front Pharmacol 7: 289, 2016 yil.

16. Fu Z, Fan X, Vang X va Gao X: Cistanches Herba: uning kimyosi, farmakologiyasi va farmakokinetik xususiyatlariga umumiy nuqtai. J Ethnopharmacol 219: 233-247, 2018 yil.

17. Xu Q, You SP, Liu T, Vang B, Liu X va Jiang Y: Cistanchening jigar saratoniga qarshi ta'siri bo'yicha tadqiqot. Carcinog Teratog Mutagen 30: 194-199, 2018 yil.

18. Mao J, Tian Y, Vang C, Jiang K, Li R, Yao Y, Chjan R, Sun D, ​​Liang R, Gao Z va boshqalar: CBX2 gepatotsellyulyar karsinomada YAP ning fosforillanishi orqali proliferatsiya va apoptozni tartibga soladi. J Saraton 10: 2706-2719, 2019 yil.

19. Qin Y, Liu HJ, Li M, Zhai DH, Tang YH, Yang L, Qiao KL, Yang JH, Zhong WL, Chjan Q va boshqalar: Salidroside gipoksik o'simta mikro muhitini yaxshilaydi va platinali dorilarning dori qarshiligini o'zgartiradi. HIF-1 signalizatsiya yo'li. EBioMedicine 38: 25-36, 2018 yil.

20. Livak KJ va Shmittgen TD: real vaqtda kantitativ PCR va 2 (‑Delta Delta C(T)) usuli yordamida nisbiy gen ekspressiyasi ma'lumotlarini tahlil qilish. 25-usul: 402‑408, 2001 yil.

21. Vaupel P: O'sma mikroekologik fiziologiyasi va uning radiatsiya onkologiyasiga ta'siri. Semin Radiat Oncol 14: 198-206, 2004 yil.

22. Chen C va Lou T: Gepatotsellyulyar karsinomada gipoksiyani keltirib chiqaradigan omillar. Oncotarget 8: 46691‑46703, 2017 yil.

23. Schwabe RF va Luedde T: Jigarda apoptoz va nekroptoz: hayot va o'lim masalasi. Nat Rev Gastroenterol Gepatol 15: 738-752, 2018 yil.

24. Kanda T, Matsuoka S, Yamazaki M, Shibata T, Nirei K, Takahashi H, Kaneko T, Fujisawa M, Higuchi T, Nakamura H va boshqalar: Apoptoz va alkogolsiz yog'li jigar kasalliklari. Jahon J Gastroenterol 24: 2661-2672, 2018 yil.

25. Pittala S, Kreml Y va Shoshan-Barmatz V: mitoxondrial VDAC1-asosli peptidli sichqonlarda jigar saratoni va unga bog'liq patologiyalarni nishonga olish. Neoplaziya 20: 594‑609, 2018 yil.

26. Jing ZT, Liu V, Xue CR, Wu SX, Chen WN, Lin XJ va Lin X: AKT faollashtiruvchisi SC79 gepatotsitlarni TNF vositachiligidagi apoptozdan himoya qiladi va d‑Gal/LPS tomonidan qo'zg'atilgan jigar shikastlanishini engillashtiradi. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 316: G387‑G396, 2019 yil.