R. Vesikarius L. Sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressga qarshi nefroprotektiv ta'sir ko'rsatadi
Mar 26, 2022
Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Doktor Mahmudul Hasan1, Ko'pchilik. Sayla Tasmin2, Ahmad M. El-Shahavi3, Mona M. Elseehy4, Doktor Abu Rizo1va Ariful Haque2*
Abstrakt
Fon:Sisplatin saratonga qarshi ajoyib doridir, ammo kuchli nefrotoksiklik tufayli uning qo'llanilishi sezilarli darajada kamaydi. R. vicarious L. - bargli sabzavot bo'lib, antiangiogen, yallig'lanishga qarshi, antiproliferativ, gepatoprotektiv va nefroprotektiv potentsialga ega. Shuning uchun ushbu tadqiqot uning metanol ekstraktini (RVE) mumkin bo'lgan nefroprotektiv ta'sirni tekshirish uchun mo'ljallangan.
Usullari:Asosan, in vitro sharoitida RVE ning antioksidant faolligi 2 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) erkin radikallarni tozalash qobiliyatiga asoslangan holda tasdiqlangan. Shundan so'ng, shveytsariyalik albino erkak sichqonlari nefrotoksiklikni keltirib chiqarish uchun ketma-ket 5 kun davomida sisplatin (2,5 mg / kg) bilan davolandi. Nefrotoksiklikdan tiklanish keyingi 5 kun davomida RVE (25, 50 va 100 mg / kg) bilan intraperitoneal (ip) bilan davolash orqali tekshirildi. Davolash tugagandan so'ng, sichqonlar qurbonlik qilindi va buyraklar yig'ildi. Uning bir qismi malondialdegid (MDA) darajasini baholash uchun natriy fosfat buferida gomogenlashtirildi, boshqa qismi gen (NQO1, p53 va Bcl-2) ifodasini baholash uchun ishlatilgan. Bundan tashqari, RVE ning vodorod periksni (H2O2) neytrallash qobiliyati HK-2 hujayralarida in vitroda baholandi. Nihoyat, RVEdagi bioaktiv fitokimyoviy moddalar gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi (GC-MS) yordamida aniqlandi.
Natijalar:RVE 37,39 ± 1,89 ug/mL IC50 qiymati bilan dozaga bog'liq holda in vitro antioksidant faolligini ko'rsatdi.
RVE bilan davolash (p < {{0}}.05)="" buyrak="" to'qimalarida="" mda="" tarkibini="" sezilarli="" darajada="" kamaytirdi.="" bundan="" tashqari,="" rve="" qo'llanilishi="" tufayli="" nqo,="" p53="" va="" bcl="" -2="" genlarining="" ifodasi="" dozaga="" bog'liq="" holda="" sezilarli="" darajada="" pasaygan="" (p=""><0,05). rve="" sezilarli="" darajada="" (p="">< 0,05)="" hk-2="" hujayralaridagi="" h2o2="" darajasini="" deyarli="" normal="" holatga="" qaytardi.="" gc-ms="" dan="" o'nta="" birikma,="" shu="" jumladan="" uchta="" ma'lum="" antioksidant="" "4h-pyran-4-bir,="" 2,="" 3-dihidro-3,5-dihidroksi-6-metil-"="" ,="" "geksadekanoik="" kislota"="" va="" "skualen"="" aniqlandi.="" ekstrakt="" "13-dokosenamid"="" alkaloidiga="" boy="">
Xulosa:Umuman olganda, RVE sisplatin ta'siri ostida buyrak shikastlanishiga qarshi himoya ta'siriga ega.
Kalit so‘zlar:Cisplatin, R. vicarious, Sichqoncha, Buyrak, HK{0}} hujayralari, Oksidlanish stressi, NQO1 geni
Cistanche deserticola buyrak kasalligining oldini oladi, namunani olish uchun shu yerni bosing
Kirish
Oksidlanish stressi reaktiv kislorod turlarining (ROS) shakllanishi va muntazam antioksidant himoya mexanizmlari o'rtasidagi nomutanosiblik natijasidir [1]. Muntazam biokimyoviy reaktsiyalar, noqulay muhitga tez-tez ta'sir qilish va ksenobiotiklarni ko'p iste'mol qilish ROS ishlab chiqarishga olib keladi [1]. ROS transkripsiya omillari, protein tirozin fosfatazalar va protein kinazalarni o'z ichiga olgan redoksga sezgir signalizatsiya molekulalarining sistein qoldiqlari bilan o'zaro ta'sir qiladi; Binobarin, ushbu qoldiqlarda tiol guruhlarining oksidlanishi maqsadli oqsillarni, biologik ta'sirlarni, signalizatsiya imkoniyatlarini, immunitetni va qo'shimcha hujayraning tirik/o'lik paradigmalarini o'zgartirishga yordam beradi [2]. Reaktiv xususiyatlarga ega bo'lgan kislorod o'z ichiga olgan kimyoviy turlar ROS deb nomlanadi, ular mos ravishda superoksid va H2O2 kabi erkin radikallar va radikal bo'lmagan molekulalarni o'z ichiga oladi [3]. ROS tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stress ko'plab kasalliklar, shu jumladan saraton etiologiyasi bilan bog'liq. O'tkir miyeloid leykemiya (AML) - suyak iligidagi qon hujayralarining saraton o'sishi. AML asosidagi hujayra va molekulyar hodisalarga DNKning shikastlanishi, klonal ko'payish, hujayralar o'limining kuchayishi va ROS tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressning natijasi bo'lgan keyingi genetik beqarorlik kiradi [4]. Inson fiziologiyasi oksidlovchi stressdan himoya qilish uchun antioksidantlarni ishlab chiqaradigan ko'plab mexanizmlarga ega bo'lib, hujayralarni toksik ta'sirlardan himoya qiladi va kasalliklarning oldini olishga xizmat qiladi [5]. Biroq, hujayralar oksidlovchi stressga qarshi turish va zarur ROSni saqlash uchun endogen mexanizmlarni ishlab chiqadi [6].
NAD(P)H: xinon oksidoreduktaza 1 (NQO1) ikki yoki to'rt elektronli qaytarilishni katalizlashi mumkin bo'lgan flavoenzim [7] va bu xususiyatdan xininlarni detoksifikatsiya qilish uchun foydalanadi [8]. Redoks aylanishini chetga surib, erkin radikallar ishlab chiqarishni kamaytirish orqali hujayralarni oksidlovchi shikastlanishdan himoya qilishi mumkin [8]. Ksenobiotiklarni detoksifikatsiya qilishdan tashqari, NQO1 superoksidni neytrallashda, p53 proteazoma degradatsiyasini modulyatsiya qilishda [9], Bcl{10}} inhibisyonida [10] va hujayra shikastlanishiga sezuvchanlikni oshirishda ham ishtirok etadi [11].
Sisplatin oziq-ovqat va farmatsevtika idorasi (FDA) tomonidan tasdiqlangan birinchi platina asosidagi saratonga qarshi doridir [12]. Sisplatin oksidlovchi stress va p53 o'simtani bostiruvchi genni haddan tashqari ifodalash orqali apoptozni amalga oshiradi [12]. Nefrotoksiklik, gepatotoksisite, gastrotoksiklik, ototoksisite, miyelosupressiya va neyrotoksiklik kabi bir qancha nojo'ya ta'sirlar sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressning natijasidir [12]. Ushbu nojo'ya ta'sirlar sisplatindan foydalanishni sezilarli darajada kamaytirdi, garchi u ajoyib antikanser faolligiga ega. Sisplatin oksidlovchi stressni keltirib chiqarishi va sichqonlarning buyraklarida NQO1 genini bostirishi yaxshi ma'lum. Shu sababli, antioksidantlarning samarali tabiiy manbalarini izlash va tasdiqlash xabardorlik sohasiga aylanmoqda. Flavonoidlar, karotenoidlar va fenolik birikmalar kabi o'simlikdan olingan parhez antioksidantlarni iste'mol qilish yurak-qon tomir kasalliklari, katarakt va saraton kasalligidan himoya qilishga olib kelishi mumkin [14].
R. vicarious (Polygonaceae) bengal tilida "Takpalong/ Chukapalong/Amlabetom" nomi bilan tanilgan [15]. Osiyo, Avstraliya va Shimoliy Afrikaning choʻl va chala choʻl hududlarida oʻsadi [16]. Bu Bangladeshda kam o'rganilgan yo'qolib ketish xavfi ostida turgan o'simlik. Bangladeshda odamlar tuz, turli ziravorlar va moy bilan pishirgandan keyin butun o'simlikni sabzavot sifatida iste'mol qiladilar. Ba'zan, odamlar aralash salatada faqat yangi barglarni marulga muqobil sifatida ishlatishadi. Xom barg bir oz nordon, lekin pishirgandan keyin juda nordon bo'ladi. Bundan tashqari, ozgina kislotali ta'mga ega bo'lish uchun pishirish paytida baliq idishlariga ozgina barglar aralashtiriladi.
Bu o'simlik butun dunyo bo'ylab sabzavot va dorivor o't sifatida ishlatiladi [17]. Barglari va urug'lari mos ravishda ilon va chayon zahariga qarshi vosita sifatida ishlatiladi [17]. Xalq davolashda R. vicarious uzoq vaqt davomida jigar kasalliklari, yomon ovqat hazm qilish, qabziyat, qoziqlar, qusish, meteorizm, yurak kasalliklari, og'riqlar, taloq kasalliklari, dispepsiya, tish og'rig'i, bronxit, astma, qo'tir, leykoderma va davolashda qo'llanilgan. laksatif, oshqozon, ishtahani ochuvchi, tonik, diuretik va og'riq qoldiruvchi [18]. Bu o'simlik antioksidant, antimikrobiyal va saratonga qarshi vositalar sifatida yaxshi tanilgan flavonoidlar, antrakinonlar, karotenoidlar, vitaminlar, lipidlar va organik kislotalarni o'z ichiga olgan ko'plab biologik muhim birikmalarni o'z ichiga oladi [19]. Bu o'simlikning har bir qismida ko'p miqdorda quercetin (flavonoidlar) mavjud [15]. Bu o'simlikda 100 g quruq vaznga 0,25 mg A vitamini, 1,33 mg vitamin C, 2,37 mg vitamin E [15], 3,38 mg flavonoidlar va 5,66 mg polifenollar [20] mavjud.
Shahat va uning hamkasblari [21] kalamush modelida gepatotsellyulyar karsinomaga qarshi R. vikariy havo qismining metanol (80 foiz) ekstraktining anti-angiogen va anti-proliferativ ta'sirini ko'rsatdi. Boshqa bir tadqiqot R. vicarious ekstraktining in vitro anti-angiogen salohiyatini ko'rsatdi [22]. Butun R. vicariousning metanol ekstrakti in vivo [23] uglerod tetrakloriddan kelib chiqqan gepatotoksiklikdan himoya qiladi. Quyonlarda yallig'lanishga qarshi ta'sir R. vicariousning metanolik barglari ekstrakti bilan aniq bo'ldi [24]. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot [25] fraksiyalangan etanolik R. vikariy ekstraktining gentamitsin va kaliy dixromat toksikligiga qarshi in vivo nefroprotektiv ta'siri haqida xabar berdi.
Yuqoridagi ma'lumotlarni hisobga olgan holda, biz hayvonlar modelida NQO1 gen ifodasini saqlab qolish orqali sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan nefrotoksiklikni tiklash nuqtai nazaridan R. vikariy ekstraktlarining (RVE) ta'sirini tekshirishni maqsad qildik.
cistanche sog'liq uchun foydalari: buyrak kasalliklarini davolash
Materiallar va uslublar
Kimyoviy moddalar va reagentlar
Sisplatin va 2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) SIGMA-ALDRICH (AQSh) dan sotib olindi.
Kreatinin kolorimetrik tahlil to'plami (mahsulot identifikatori - 700,460) Cayman Chemical'dan (AQSh) sotib olingan. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), homila sigir zardobi (FBS) va antibiotik (10,000 U/ml penitsillin va 10,000 ug/ml streptomitsin) Gibco (Gibco Laboratories,) dan sotib olingan. AQSH). ROS-Glo™ H2O2 Assay to'plami va GoTaq® qPCR Master Mix Promega (AQSh) dan olingan. TIAN-Script M-MLV teskari transkripsiya to'plami TIANGEN (Xitoy) dan va primerlar IDT (Integrated DNA Technologies, Malayziya) dan sotib olingan. Ushbu tajribada ishlatiladigan barcha boshqa kimyoviy moddalar va reagentlar analitik darajada edi.
O'simlik namunalarini yig'ish va ekstrakti tayyorlash
Yangi R. vicarious o'simliklar Sonadighi, Rajshaxi, Bangladesh mahalliy bozordan sotib olindi. O'simlik namunasi Bangladesh, Rajshaxi universiteti Botanika bo'limi doktor Ahmad Humayan Kabir tomonidan aniqlangan va tasdiqlangan. Vaucher raqami ostidagi namuna. 00095 Rajshaxi universitetining botanika kafedrasi gerbariysida saqlangan. Zavodning havo qismlari tozalandi, 37 darajada quritildi, elektron quritgich yordamida qo'pol kukunga aylantirildi va yopiq idishda 4 daraja haroratda saqlangan. Nozik kukun (10 g) metanolda (500 ml) eritildi. Tarkib 10 daqiqa davomida 20 kHz chastotada (Soniprep 150, Xitoy) sonikatsiya qilindi. Ekstraktni filtrlash shisha tolali filtr qog'ozi (Macherey NAGEL, GmBH, nemis) DURAN filtrlash apparati (nemis) yordamida amalga oshirildi. Nihoyat, filtrat muzlatilgan quritgich (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, AQSh) yordamida konsentratsiya qilindi. Ekstrakt nihoyat RVE deb nomlandi.
In vitro antioksidant faollik testi
RVE ning in-vitro antioksidant qobiliyati avvalroq [26] taʼriflanganidek, ozgina oʻzgartirishlar bilan DPPH ni tozalash asosida amalga oshirildi. RVE ning DPPH radikalini tozalash qobiliyati DPPH ning binafsha rangini sariq rangga aylantirish asosida baholandi. Har bir mikro-tsentrifuga naychasidagi (2 ml) reaksiya aralashmasi besh xil konsentratsiyali (200, 500, 1000, 2000 va 4000 ug) DPPH radikallarining 950 mL metanolik eritmasidan (0,1 mM) va 50 mkl RVEdan iborat. /ml metanol) 10, 25, 50, 100 va 200 ug/ml yakuniy konsentratsiyalarni hosil qilish uchun. 50 mkl metanol va 950 mkl DPPH metanolik eritmasi bo'lgan boshqa naycha nazorat sifatida saqlangan. Probirkalar qorong'i joyda 30 daqiqaga qoldiriladi. Aralashmalarning absorbsiyasi GENESYS 10S UV-VIS spektrofotometri (Thermo SCIENTIFIC, AQSh) yordamida 517 nm da olingan. Nihoyat, radikal tozalash faolligi (RSA) DPPH rangining o'zgarishi asosida quyidagi formuladan foydalangan holda hisoblab chiqildi foiz RSA=[(ADPPH - ARVE)/ADPPH] × 100, bunda ADPPH DPPH eritmasining absorbsiyasidir. (nazorat) va ARVE - RVE eritmasining absorbsiyasi. RVE 50 foiz RSAga olib kelgan konsentratsiya IC50 qiymati deb nomlandi va foydalanilgan turli RVE konsentrasiyalariga nisbatan foizli RSAni joylashtirgan grafik yordamida hisoblab chiqilgan.
Eksperimental hayvonlar va eksperimental dizayn
42 kunlik (tana og'irligi 30-32 g) erkak Shveytsariya albino sichqonlari xonada tajriba boshlanishidan oldin 1 hafta davomida iqlimga moslashtirildi (harorat taxminan 25 ± 2 daraja va ~ 50 foiz namlik, 12 soat qorong'i/yorug'lik davri). Ichimlik suvi va oziq-ovqat ad libitum bilan ta'minlandi.
Sichqonlar tasodifiy tarzda sakkizta guruhga ajratildi (n {0}}). Birinchi (nazorat) guruhga 0.2 ml 0,9 foiz NaCl bilan ishlov berildi. Keyingi to'rtta guruh 24 soatlik interval bilan 5 kun davomida 2,5 mg / kg dozada sisplatin bilan davolandi. Sisplatin qo'llanilgandan so'ng, bir guruh (ikkinchi guruh) boshqa davolashsiz qoldirildi va stressli nazorat guruhi sifatida tayinlandi. Uchinchi, to'rtinchi va beshinchi guruhlar 5 kun davomida mos ravishda 25, 50 va 100 mg / kg da RVE bilan davolashdi. Keyingi uchta guruh 5 kun davomida mos ravishda 25, 50 va 100 mg / kg da RVE bilan davolandi. Sisplatin va RVE distillangan suvda eritildi. Barcha muolajalar intraperitoneal tarzda o'tkazildi. Oxirgi davolanishdan 24 soat o'tgach, hayvonlar bachadon bo'yni dislokatsiyasidan keyin evtanizatsiya qilindi [25]. Keyin qorin pardasi qaychi bilan ochildi, yurak ponksiyonidan so'ng qon, vilkalar yordamida buyraklar yig'ildi. Qon zardobidagi kreatinin darajasini tekshirish uchun qon topshirildi. Buyraklar malondialdegid darajasini va gen ekspressiyasini baholashga duchor bo'ldi.
Sarum kreatininini o'lchash
Sarum kreatinin miqdori Kreatinin Colorimetric Assay Kit-700,460 (Cayman Chemical, AQSH) yordamida ishlab chiqaruvchining to'plam bilan birga taqdim etilgan protokoliga muvofiq o'lchandi.
Buyrak lipidlari peroksidatsiyasini o'lchash
Malondialdegid (MDA) buyrak to'qimalarida lipid peroksidatsiyasining yakuniy mahsulotidir va odatda ROS ishlab chiqarish ko'rsatkichi sifatida o'lchanadi. Biroq, MDA darajasi oldingi tadqiqotga ko'ra buyrak to'qimalarida o'lchangan [27]. Dastlab, buyrak to'qimasi natriy fosfat tamponida bir hil holga keltirildi (0,1 M, pH 7,4). 100 ga 0,8% tiobarbiturik kislota (1,5 ml), 8,1% SDS (200 mL), 20% (pH 3,5) sirka kislotasi (1,5 ml) va dH2O (600 mL) dan iborat reaksiya eritmasi qoʻshildi. mL gomogenlangan to'qimalarni oling va aralashma 95 daraja haroratda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Sovutgandan so'ng, aralashmalar 10,{24}} g haroratda 10 daqiqa 4 darajada santrifüj qilindi va supernatantning absorbsiyasi standart 1, 1, 3, 3- tetra metoksi propan bilan 532 nm da o'lchandi. Umumiy oqsil miqdori Bradford Protein Assay to'plami (BIO-RAD, AQSh) yordamida va uni standart sigir zardobi albumini (BSA) bilan solishtirish orqali o'lchandi. Lipid peroksidlarning intensivligi har bir milligramm (mg) protein uchun MDA nanomollari (nM) sifatida ifodalangan.
Haqiqiy vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi (real vaqtda PCR)
Haqiqiy vaqtda PCR yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi [28, 29]. Buyrak to'qimasidan umumiy RNK ishlab chiqaruvchi tomonidan taqdim etilgan protokolga muvofiq TRIzol® reagenti (Invitrogen) yordamida ajratilgan. Keyin ajratilgan RNK (1 ug) cDNK ga aylantirildi. Birinchidan, 2 mkL tasodifiy geksamer (10 mkM), 2 mkl dNTP (10 mM), 1 ug RNK va 15 mL gacha bo'lgan nukleazsiz H2O olindi va 5 daqiqa davomida 70 gradusda inkubatsiya qilindi. Aralash bir zumda 2 daqiqa davomida muzga qo'yiladi. Keyin har bir naychaga 4 mkl 1-strand tampon (5x) va 1 mL M-MLV teskari transkriptaza qo'shildi va 10 daqiqa va 50 inkubatsiya qilindi.
min. mos ravishda 25 daraja va 42 daraja. Nihoyat, M-MLV teskari transkriptaza fermenti aralashmani 95 daraja haroratda 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilish orqali faolsizlantirildi. Sintezlangan cDNK mahsulotlari NQO1, p53 va Bcl{9}} gen ifodasini aniq primerlar yordamida aniqlash uchun real vaqt rejimida PCRdan o'tkazildi (1-jadval). Har bir reaksiya (1{14}} mkl) 5 mkL GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, AQSH), 0,5 mkl (10 mM) har bir primer, 3 mkl nukleazsiz suvdan iborat uch nusxada bajarildi. 1 mkl cDNK {{20}quduq reaksiya plitalarida. Termal aylanish real vaqtda PCR mashinasi (Eco™ Real-Time PCR System, Illumine®, AQSh) yordamida quyidagi aylanish shartlari bilan amalga oshirildi: 10 daqiqa davomida 95 daraja, keyin 30 soniya davomida 95 darajali 40 tsikl, 30 soniya uchun 50 daraja va 25 soniya uchun 72 daraja. PCR reaktsiyalarining o'ziga xosligi 15 soniya davomida 95 daraja, 15 soniya davomida 45 daraja va 15 soniya davomida 95 daraja eritma egri chizig'ini tahlil qilish orqali tasdiqlandi. PCR reaktsiyalarining o'ziga xosligi 15 soniya davomida 95 daraja, 15 soniya davomida 45 daraja va 15 soniya davomida 95 daraja eritma egri chizig'ini tahlil qilish orqali tasdiqlandi. Gen ekspressiyasining nisbiy miqdorini aniqlash endogen GAPDH geni yordamida DDCq usuliga asoslangan nazorat sifatida amalga oshirildi.
Hujayra madaniyati va davolash
Inson buyrak proksimal tubula epitelial hujayra liniyasi HK{0}} 10% FBS va antibiotiklar (50 U/ml penitsillin va 50 ug/ml streptomitsin) bilan to'ldirilgan DMEMda 5% CO2 va 95 inkubatorda saqlangan. foiz namlik 37 daraja.
H2O2 o'lchash tahlili
HK-2 hujayralardagi H2O2 darajasi to'plam ishlab chiqaruvchisi tomonidan taqdim etilgan protokolga muvofiq ROS-Glo™ H2O2 Assay to'plami (Promega, AQSH) yordamida baholandi. 70 mkl DMEMdagi HK-2 hujayralar (1000 hujayra) 96-quduq mikrotitr plastinkasining quduqlariga joylashtirildi. Hujayralarning devor yuzasiga biriktirilishiga ruxsat berilgandan so'ng, mikrotitr plitasining quduqlaridan 10 mkl DMEM 10 mkl sisplatin (DMEMda 25 mkM) bilan almashtirildi va inkubatorda 12 soat davomida saqlanadi. Keyin, DMEMda yakuniy konsentratsiyalarni 125, 250 va 500 ug/ml qilish uchun 10 mL RVE qo'shildi va yana 12 soat davomida inkubatsiya qilindi. Shundan so'ng, har bir quduqqa 20 mkl H2O2 substrat eritmasi va 100 mkl ROS-Glo™ aniqlash eritmasi qo'shildi. Reaksiya xona haroratida 20 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Nihoyat, luminesans GloMax Luminometer (Promega, AQSh) yordamida o'lchandi.
GC-MS tahlili
RVE ning GC-MS tahlili (metanolda erigan) avval tavsiflanganidek [30] avtomatik namuna oluvchidan (AOC{) oʻz ichiga olgan GCMS-QP2020 (SHIMADZU) yordamida amalga oshirildi. {5}}s), avtomatik injektor (AOC-20i) va SH-Rxi{{1{{ bilan jihozlangan Mass-spektrometrga ulangan gaz xromatografi (GC-2010 Plus) 37}}}}Sil MS kapillyar ustuni (30 m × 0,25 mkm ID × 0,25 mkm DF). Tashuvchi gaz geliy 1,72 ml/min doimiy oqim tezligida saqlangan va 5 mkL in'ektsiya hajmi 10:1 bo'linish nisbati bilan ta'minlangan. Injektorning harorati 220 daraja, ion manbasining harorati 280 daraja, pechning harorati 80 darajadan (2 daqiqa ushlab turing), 5 daraja / min 150 darajaga ko'tarilishi bilan dasturlashtirilgan (ushlab turish vaqti 5,0) min), keyin 5 daraja / min dan 280 darajagacha, 280 daraja 8 daqiqa izotermik bilan tugaydi. Massa spektrlari 0,5 s skanerlash oralig'i bilan 1,5 kV da olingan va namuna 45-350 m / z oralig'ida o'tkazilgan. Erituvchining kechikishi 0 dan 3 minutgacha bo'lgan va umumiy GC-MS ish vaqti 55 minut edi. Aniqlangan birikmalarning nisbiy kontsentratsiyasi uning o'rtacha tepalik maydonini umumiy maydonga solishtirish orqali o'lchandi. GC-MSda massa spektrini talqin qilish Milliy Institut standart va texnologiya (NIST) ma'lumotlar bazalari, shu jumladan NIST08, NIST08s va NIST14 yordamida amalga oshirildi.
Statistik tahlil
Statistik tahlillar IBM SPPS (versiya 20) dasturidan foydalangan holda Dunnettning T3 testidan so'ng ANOVA tomonidan amalga oshirildi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida ifodalanadi. Muhim taqqoslash pda ko'rib chiqildi<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">
Natijalar
In vitro antioksidant faollik testi
Ilgari RVE antioksidant faolligi haqida xabar berilgan bo'lsa-da, biz DPPH erkin radikallarini tozalash qobiliyatidan foydalangan holda ekstraktimizning antioksidant faolligini qayta tekshirdik. RVE neytrallangan DPPH dozaga bog'liq (1-rasm). RVE sezilarli in vitro antioksidant faolligini aniqladi va RVE ning hisoblangan IC50 qiymati 37,39 ± 1,89 ug/ml ni tashkil etdi.
Sarum kreatininini o'lchash
Sichqonlarda sarum kreatinin darajasi sisplatin qabul qilingandan keyin sezilarli darajada oshgan (p < {0}}.05)="" (2-jadval).="" rve="" bilan="" davolash="" dozaga="" bog'liq="" holda="" kreatinin="" darajasini="" sezilarli="" darajada="" yaxshilagan="" (p=""><0,05)>
Buyrak lipidlari peroksidatsiyasini o'lchash
Nazorat bilan solishtirganda, sisplatin (p < {0}}.05)="" sichqonlarning="" buyrak="" to'qimalarida="" mda="" tarkibini="" sezilarli="" darajada="" oshirdi="" (3-jadval).="" aksincha,="" rve="" davolash="" sezilarli="" darajada="" (p=""><0.05) mda="" ni="" dozaga="" bog'liq="" holda="" deyarli="" normal="" holatga="" keltirdi="">
Haqiqiy vaqtda PCR
Sisplatin sezilarli darajada (p < {{0}}.05)="" nqo1="" mrnk="" ifodasini="" 0="" ga="" kamaytirdi.15-katta="" va="" p53="" va="" bcl-2="" mrnkni="" oshirdi.="" mos="" ravishda="" 24="" va="" 4.2-katlamali="" ifoda="" (2-rasm).="" rve="" sezilarli="" darajada="" (p="">< 0.05)="" nqo1,="" p53="" va="" bcl-2="" mrnk="" ifodasini="" dozaga="" bog'liq="" holda="" yumshatdi="" (2-rasm).="" yagona="" sisplatin="" bilan="" davolash="" qilingan="" guruh="" bilan="" solishtirganda,="" nqo1="" mrnk="" ifodasi="" 3,57,="" 6,36="" va="" 9="" martaga="" oshdi.28-25,="" 50="" va="" 100="" mg/kg="" rve,="" mos="" ravishda="" (2a-rasm).="" yana="" p53="" mrnk="" ifodasi="" 25,="" 50="" va="" 100="" mg/kg="" rve="" da="" mos="" ravishda="" 0.63,="" 0.46="" va="" 0.21-="" marta="" kamaydi="" (2b-rasm).="" bcl{41}}="" mrnk="" ifodasi="" ham="" mos="" ravishda="" 25,="" 50="" va="" 100="" mg/kg="" rve="" da="" 0,71,="" 0,40="" va="" 0.32-baravariga="" kamaydi="" (2c-rasm).="" biroq,="" rve="" bilan="" davolash="" tufayli="" nqo1,="" p53="" va="" bcl{56}}="" genlarining="" ifoda="" darajasida="" sezilarli="" (p=""> 0,05) o'zgarishlar aniqlanmadi (3-rasm).
H2O2o'lchov tahlili
H2O2 o'lchash tahlilida H2O2darajasi luminesansga mutanosib hisoblangan. Sisplatinni qabul qilish sezilarli darajada (p < {{0}}.05)="" h2o2="" darajasini="" 2.2-="" barobar="" oshirdi="" (4-rasm).="" rve="" bilan="" davolash="" sezilarli="" darajada="" kamaydi="" (p="">< 0.05)="" h2o2="" darajasi="" mos="" ravishda="" 0,25,="" 0,38="" va="" 0.49-125,="" 250="" va="" 500="" ug/ml="">
GC-MS tahlili
Jami 10 ta birikma (4-jadval va 5-rasm), shu jumladan "Izoborneol, pentametildisilanil efir (sesquiterpen spirti)", "Timin (pirimidin nukleobaza)", "4H-Pyran-4-bir, 2,{{ 8}}dihidro-3,5-digidroksi-6-metil- (saponin)", "Geksadekanoik kislota, metil efir (yog‘ kislotasi metil efiri)", "9,12- Oktadekadienoik kislota, metil ester (yog 'kislotasi metil esteri)", "9-oktadesenik kislota (Z)-, metil ester (yog' kislotasi metil esteri)", "Metil stearat (yog' kislotasi metil esteri)", "Diizooktil ftalat (ester)", "13-Dokosenamid, (Z)- (alkaloid)", va "Skualen (triterpen)" RVEda aniqlandi.
cistanche tubolosa foydalari: qon lipidlarini kamaytirish
Munozara
Tabiiy va sintetik antioksidantlar har tomonlama o'rganilgan va hayvonlar fiziologiyasida toksiklikni oldini olish yoki yaxshilash uchun funktsional ekanligi aniqlangan [31]. Antioksidant qo'shimchalar kimyoviy sintez yoki tabiiy oziq-ovqatlardan ekstraktsiya yo'li bilan ishlab chiqilgan komponentdir, ammo ular tarkibida oziq-ovqatda mavjud bo'lgan antioksidantlar bilan bir xil emas [5]. Shu sababli, sintetik antioksidantlar tabiiy antioksidantlar kabi sog'liq uchun foyda keltiradimi yoki yo'qmi degan fikrlar vaqt o'tishi bilan ajralib turadi [32]. Sintetik antioksidant qo'shimchalardan foydalanishni kamaytirish va samarali tabiiy antioksidantlarning alternativ, arzon, qayta tiklanadigan, tabiiy va ehtimol xavfsizroq manbalarini izlash istagi paydo bo'ladi.
Eng muhim mexanizmlardan biri bu yadro omili eritroid-2 bilan bog'liq-2 (Nrf2) yo'li bo'lib, u odatda hujayralarni ekzogen yoki endogen stress omillari ta'sirida oksidlovchi stressdan himoya qiladi [27]. Samarali antioksidantlar Nrf2 ekspressiyasini keltirib chiqaradi, bu esa keyinchalik yadroga o'tadi va antioksidant javob elementi (ARE) bilan bog'lanadi, bu II fazani detoksifikatsiya qiluvchi va antioksidant gen NQO1 [33, 34] ifodasini qo'zg'atadi. NQO1 to'qimalarga xos tarzda keng va differentsial tarzda ifodalanadi. NQO1 sitozolik antioksidant flavoprotein bo'lib, u 2-xinonlarning gidroxinonlarga elektron qaytarilishini katalizlaydi, natijada elektrofillarning detoksifikatsiyasi va oksidlanish-qaytarilish aylanishini kutish mumkin [35]. Oldingi tadqiqotga ko'ra [36], -lapachone NQO1 ni faollashtiradi, bu hujayra ichidagi NAD plyus darajasini yanada oshiradi va buyrakni sisplatin sabab bo'lgan o'tkir shikastlanishdan himoya qiladi.
Sisplatin oksidlovchi stress, yallig'lanish va apoptoz orqali glomerulyar filtratsiya membranasiga zarar etkazishi ma'lum, bu esa umuman glomerulyar filtratsiya tezligini pasayishiga va normal membran o'tkazuvchanligini yo'qotishiga olib keladi [37]. Shunday qilib, qon zardobidagi kreatinin darajasi oshadi. Qon zardobidagi kreatinin buyrak funktsiyasining potentsial belgilaridan biridir. Sisplatin bilan davolash lipid peroksidatsiyasining ikkilamchi mahsuloti bo'lgan buyrak to'qimalarida MDA tarkibini oshirdi va bu hisobot avvalgi tadqiqotlar bilan doimiydir [27, 35, 37, 38]. RVE bilan davolash buyrak to'qimalarida MDA tarkibini sezilarli darajada kamaytirdi. Shu bilan birga, kreatinin darajasi ham pasaygan, bu RVE ning yaxshilovchi ta'sirini ko'rsatadi.
Bundan tashqari, sisplatin ta'siridan keyin NQO1 ifodasi sezilarli darajada kamaydi va p53 va Bcl{2}} ifodasi sezilarli darajada oshdi. In vivo NQO1 va p53 ifodasi nuqtai nazaridan, bizning natijamiz oldingi tadqiqotga mos keladi [13]. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot [39] sisplatin sichqonlarning buyragida Bcl{7}} ifodasini sezilarli darajada kamaytirganini ko'rsatdi, ammo ajablanarlisi shundaki, biz yuqori ifodani topdik. Bu farq doza farqining natijasi bo'lishi mumkin [40], chunki Muhammad va uning hamkasblari [39] 12 kun davomida 8 mg / kg dan foydalangan, biz esa atigi 5 kun davomida 2,5 mg / kg dan foydalanganmiz. Boshqa bir tadqiqot [41] shuni ko'rsatdiki, sisplatin sitotoksik bo'lmagan dozada Bcl{16}} ifodasini oshirishi mumkin. Yana Bcl{18}} ko'payishi hujayralarni oksidlovchi stressga sezgir qiladi [40].
Biroq, normal fiziologik sharoitlarda p53 ekspressiyasi past bo'ladi, ammo sisplatin bilan davolangandan so'ng yuqori tartibga solinishi kutilmoqda, chunki bu platina asosidagi kimyoterapevtik vosita p53 ga bog'liq apoptotik yo'lni faollashtiradi. Sichqonlarni sisplatin bilan davolashganimizdan so'ng, p53 sichqonlarning buyraklarida nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi. Boshqa proto-onkogen Bcl-2 ham NQO1 ifoda darajasi bilan bog'liq. P53 ifodasini taqlid qilib, biz Bcl{9}} darajalari sisplatin bilan davolash bilan ortganligini, ammo RVE bilan davolashda sezilarli darajada qayta qoplanganini aniqladik. Bu mumkin, oksidlovchi stressga javoban, p53 geni faollashadi va hujayra aylanishi, qarish yoki apoptozning to'xtatilishiga olib keladi [6]. Detoksifikatsiya bilan NQO1 haddan tashqari ekspressiyasi ko'pincha saraton hujayralarida apoptoz bilan bog'liq deb hisoblanadi [10], ammo apoptozning asosiy mexanizmi va NQO1 ning haddan tashqari ekspressiyasi hali ham bahsli. Bundan tashqari, gepatotsellyulyar karsinomada NQO1 haddan tashqari ekspressiyasi Bcl{18}} ifodasini pasaytiradi [10]. Proto-onkogen Bcl- 2, shuningdek, NQO1 ifodasi bilan bog'liqlik kabi p53 ga ega. p53 ketma-ketlikka xos transkripsiya omili bo'lib, u hujayra stressining ko'p turlari bilan faollashadi [42], Bcl{27}} haddan tashqari ifodasi esa oksidlovchi stressda sitoxrom-c chiqishini osonlashtirish uchun mitoxondriyal g'ovak-stabilizator rolini o'ynadi [12]. Bizning holatda, biz normal buyrak to'qimalarida sisplatin bilan davolash bilan ikkala gen javobini tekshirdik va ularning ortib borayotgan ifodasini topdik. RVE bilan davolash p53 va Bcl-2 ifodasini dozaga bog'liq holda deyarli normal holatga qaytardi. Ushbu turdagi Bcl{34}} ifodasini bekor qilish ROS scavenger Trolox [43] yordamida ham ko'rsatilgan. Bundan tashqari, in vitro sisplatin bilan davolash natijasida HK-2 hujayralarida H2O2 darajasi ham sezilarli darajada oshdi. RVE bilan davolashdan so'ng H2O2 darajasi sezilarli darajada normal holatga qaytdi. Bu, ehtimol, oksidlovchi stressdan himoya qiluvchi NQO1 ifodasini [44] oshiradigan RVE davolashning ta'siri bilan bog'liqdir [6].
GC-MS xromatogrammasi RVEda o'nta birikma mavjudligini tasdiqladi. Bular orasida "4H-Piran- 4-bir, 2, 3-dihidro-3,5-dihidroksi-6-metil-", "Geksadekanoik kislota" va " Skualen" taniqli antioksidantlardir [45-47]. Ushbu uchta birikma umuman sinergik nefroprotektiv ta'sir ko'rsatishi mumkin. Oldingi tadqiqotlar, shuningdek, A vitamini [48], vitamin C [49], E vitamini [50], flavonoidlar [51] va polifenollar [50] tomonidan NQO1 ifodasini induktsiya qilish haqida xabar berdi. Shuning uchun, ushbu hisobot ushbu ekstraktda A vitamini, C vitamini, E vitamini, flavonoidlar va polifenol orasida biron bir narsa bor yoki yo'qligini aniqlashni taklif qiladi.
Xulosa
Umumiy topilma shuni ko'rsatadiki, RVE buyraklarni sisplatin ta'siridan kelib chiqadigan shikastlanishdan himoya qilishda fiziologik jihatdan samarali. Shu sababli, sisplatin tomonidan qo'llaniladigan nefrotoksiklikni yumshatish uchun mas'ul bo'lgan aniq birikmalarni aniqlash juda muhimdir, bu odamlar uchun foydali bo'lishi mumkin.
Minnatdorchilik
Mualliflar Bangladesh ilmiy va sanoat tadqiqotlari kengashiga (BCSIR), Rajshaxi filialiga RNK miqdorini aniqlash uchun laboratoriya yordami uchun minnatdorchilik bildiradilar.
Mualliflarning hissalari
MMH eksperimental dizayn, eksperiment, ma'lumotlarni tahlil qilish va tayyorlash, qo'lyozma yozish va tahrirlash, qo'lyozmalarni qayta ko'rib chiqish va loyihalashni amalga oshirdi; MST & MME tajriba va ma'lumotlarni tahlil qildi; AME & MAR nazorat va resurslarga hissa qo'shdi; AH kontseptualizatsiya, nazorat, manbalar va qo'lyozmalarni tahrirlash uchun mas'ul edi. Barcha mualliflar
qo‘lyozmani ko‘rib chiqdi. Mualliflar yakuniy qo'lyozmani o'qib chiqdilar va tasdiqladilar.
Moliyalashtirish
Joriy ish Taif universiteti tadqiqotchilarni qo'llab-quvvatlovchi loyiha raqami (TURSP - 2020/75), Taif universiteti, Taif, Saudiya Arabistoni tomonidan moliyalashtirildi.
Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi.
Barcha tegishli ma'lumotlar mavjud va ular tegishli muallifning so'roviga binoan taqdim etilishi mumkin.
Deklaratsiyalar
Etikani tasdiqlash va ishtirok etishga rozilik
Ushbu eksperimentni o'tkazish etikasi Hayvonlar, tibbiy etika, bioxavfsizlik va bioxavfsizlik bo'yicha institutsional qo'mitasi (IAMEBBC), Biologiya fanlari instituti (IBSc), Rajshaxi universiteti tomonidan tasdiqlangan va 31/{{1}-sonli eslatma ostida taqdim etilgan. }IAMEBBC/IBSc. Barcha usullar yuqorida ko'rsatilgan axloqiy qo'mita tomonidan taqdim etilgan ko'rsatmalar va qoidalarga muvofiq amalga oshirildi. Ushbu tadqiqot ARRIVE (Hayvonlarni o'rganish: In Vivo Eksperimentlar haqida hisobot berish) ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi. "Ishtirok etishga rozilik" ushbu tadqiqot uchun qo'llanilmaydi.
Muallif tafsilotlari
1Molekulyar biologiya va oqsil fanlari laboratoriyasi, Genetik muhandislik va biotexnologiya boʻlimi, Hayot va Yer fanlari fakulteti, Rajshaxi universiteti, Rajshaxi 6205, Bangladesh. 2Molekulyar patologiya laboratoriyasi, Biologiya fanlari instituti, Rajshaxi universiteti, Rajshaxi 6205, Bangladesh. 3Taif universiteti Fan kolleji biotexnologiya boʻlimi, PO Box 11099, Taif 21944, Saudiya Arabistoni. 4Iskandariya universiteti qishloq xo'jaligi fakulteti genetika bo'limi, Iskandariya 21545, Misr.
Ma'lumotnomalar
1. Bagchi K, Puri S. Salomatlik va kasallikdagi erkin radikallar va antioksidantlar: sharh. East Mediterr Health J. 1998; 4: 350-60.
2. Koh EM, Li EK, Song CH, Song J, Chung HY, Chae CH va boshqalar. Bug'doy urug'ining faol komponenti bo'lgan ferulat oksidlovchi stressdan kelib chiqqan PTK/PTP muvozanatini va PP2A inaktivatsiyasini yaxshilaydi. Toxicol Res. 2018;34(4):333–41.
3. Hassan AI, Ibrohim RY. Erlixning jigaridagi ba'zi genetik profillar nurlanish stressi ostida o'simtali sichqonlarni astsitlaydi. J Radiat Res Appl Sci. 2014;7(2):188–97.
4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang BY va boshqalar. O'tkir miyeloid leykemiyaning qaytalanishida oksidlovchi stressning ishtiroki. J Biol Chem. 2010;285(20):15010–5.
5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. Erkin radikallar, kasallik va salomatlikdagi antioksidantlar. Int J Biomed Sci. 2008;4:89–96.
6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. NAD (P) H-xinon oksidoreduktaza 1 (NQO1) ning saraton rivojlanishi va kimyoviy qarshilik bo'yicha rollari. J Clin Exp Oncol. 2017;6:1–6.
7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: xinon oksidoreduktaza 1 (NQO1) o'simtaga qarshi xinonlarga sezuvchanlik va qarshilikda. Biochem Pharmacol. 2012;83(8):1033–40.
8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: xinon qabul qiluvchi oksidoreduktaza 1 (NQO1), ko'p funktsiyali antioksidant ferment va juda ko'p qirrali sitoproteksiya. Arch Biochem Biophys. 2010;501(1):116–23.
9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady M, Gaut AW, Liu J, Zhang YP va boshqalar. Dikumarolning NADPH ning inhibisyonu: xinon oksidoreduktaza superoksid vositachiligidagi mexanizm orqali oshqozon osti bezi saratonining o'sishini inhibe qiladi. Saraton Res. 2003;63(17):5513–20.
10. Chjan X, Xan K, Yuan DH, Meng CY. NAD (P) H ning haddan tashqari ko'payishi: xinon oksidoreduktaza 1 AMPK/PGC-1 yo'lini faollashtirib, gepatotsellyulyar karsinoma hujayralari proliferatsiyasini va induktsiyalangan apoptozni inhibe qiladi. DNK hujayra bio. 2017;36(4):256–63.
11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. NAD (P) H-kinon oksidoreduktaza 1ning bostirilishi xolangiokarsinoma hujayralarining kemoterapevtik vositalarga sezuvchanligini oshirdi. J Exp Clin Saraton Res. 2014;33(1):1–13.
12. Dasari S, Tchounwou PB. Saratonni davolashda sisplatin: ta'sirning molekulyar mexanizmlari. Eur J Pharmacol. 2014;740:364–78.
13. Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allilmerkaptotsistein apoptoz, oksidlovchi stress va yallig'lanishni bostirish orqali sisplatin bilan bog'liq nefrotoksiklikni susaytiradi. Oziq moddalar. 2017;9(2):166.
14. Matkowski A. Antioksidantlar ishlab chiqarish uchun in vitro o'simlik - sharh. Biotechnol Adv. 2008;26(6):548–60.
15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA. Rumex vicarious L.ning oʻsishning vegetativ bosqichida antioksidant faolligi. Asian J Pharm Clin Res. 2012;5:111–7.
16. Rechinger KX. Avstraliyada Rumex (Polygonaceae): qayta ko'rib chiqish. Nuytsiya. 1984;5:75– 122.
17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya MA, Xiggins M, Dinkova-Kostova AT. NAD (P) H: Ba'zi Saudiya Arabistoni dorivor o'simliklarining quinon oksidoreduktaza 1 induktor faolligi. Planta Med. 2013;79(06):459–64.
18. El-Havari SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. Rumex vicarious L. J Food Sci ning bioaktiv birikmalarining profili. 2011;76(8): C1195–202.
19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF va boshqalar. Alfa-, beta-, gamma-, delta-va epsilon-karotinlarning manbalari: yigirmanchi asr sharhi. Rev Bras. 2008;18(1):135–54.
20. Laouini SE, Ouahrani MR. Fitokimyoviy skrining, Rumex vicarious L. ekstraktining in vitro antioksidant va antibakterial faolligi. Ilmiy tadqiqot Res: Chem Chem Engi Biotech Food Ind. 2017;18:367–76.