Beluga yasmiqining ishemiya-reperfuziya shikastlanishi uchun oldindan davolashning buyrakni himoya qilish ta'siri

Sinq-ok Li,¹ So Young Chun,²EunXye Li,²Bomi Kim,²BoHyun Yun,² va boshqalar

Orqa fon va maqsad. Ishemiya/reperfuziya (I/R) shikastlanishi, o'tkir sababbuyrakzarar, gistopatologik o'zgarishlar, tubula hujayralari apoptozi, yallig'lanish, oksidlanish va buyrak funktsiyasining yo'qolishiga olib keladi. Biz beluga yasmiqni oldindan davolashning I/R shikastlanishiga qarshi himoya ta'sirini baholadik. Materiallar va uslublar. Sichqonlar to'rt guruhga bo'lingan: normal, davolanmagan, past (2 mg) va yuqori dozali (8 mg) beluga yasmiq bilan davolash guruhlari. Beluga yasmiq 2 hafta davomida og'iz orqali yuborilgan, so'ngra 20 daqiqa davomida ikki tomonlama buyrak ishemiyasi va 30 daqiqa davomida reperfuziya qilingan. Qon namunalari vabuyrakbuyrak funktsiyasi, gistopatologiya, epiteliya va endotelial hujayralarni o'rganish uchun to'qimalar to'plangan va tahlil qilingan.zarar, apoptoz, oksidlovchi stress va yallig'lanish reaktsiyalari. Natijalar. Oldindan davolangan guruhlar buyrak funktsiyasini saqlab qoldi, qondagi karbamid azoti (BUN) va kreatinin darajasi boshqa guruhlarga nisbatan sezilarli darajada past bo'ldi. Gistopatologik tahlil proksimal tubula shikastlanishi va shikastlanish bilan bog'liq molekulalarning kamayganligini ko'rsatdi (buyrakboshqa guruhlar bilan solishtirganda oldindan davolash qilingan guruhlarda shikastlanish molekulasi 1 (KIM-1) va neytrofil jelatinaza bilan bog'langan lipokalin (NGAL) sekretsiyasi. Terminal deoksinukleotidil transferaza dUTP nick-end labeling- (TUNEL-) musbat hujayralar va apoptoz bilan bog'liq molekulalarning sekretsiyasi (Fas va kaspaza 3) boshqa guruhlarga nisbatan oldindan davolangan guruhlarda sezilarli darajada kamaydi. Oldindan ishlov berilgan guruhlar ijobiy mikrotomirlar bilan bog'langan gen (differentsiatsiya klasteri (CD31)) va salbiy adezyon molekulasi (hujayra ichidagi adezyon molekulasi 1 (ICAM-1)) ifodasini ko'rsatdi. Davolashdan oldingi guruhlarda malonaldegid (MDA) ifodasining kamayishi va antioksidant ferment (superoksid dismutaza (SOD), katalaza (CAT), glutation (GSH) va glutatyon peroksidaza (GPx)) sekretsiyasi ortishi bilan antioksidant ta'sir kuzatildi. Oldindan davolangan guruhlarda F4/80 plyus makrofaglar va CD4 plyus T hujayralari infiltratsiyasi to'xtatildi va yallig'lanishga qarshi sitokin (interleykin- (IL-) 1, IL-6 va o'simta nekrozi omili- (TNF-)) darajalari kamaydi; ammo yallig'lanishga qarshi sitokinlar (o'sish omili- (TGF-), IL-10 va IL-22) darajasi oshdi. Xulosa. Beluga yasmiqni oldindan davolash antiapoptotik, yallig'lanishga qarshi va antioksidant ta'sirlar orqali I / R tomonidan kelib chiqqan buyrak shikastlanishiga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi.

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com

cistanche propiedadesdeserticola oldini oladibuyrakkasallik, namunani olish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Qisman nefrektomiya yoki buyrak transplantatsiyasi paytida ishemiya/reperfuziya (I/R) shikastlanishi o'tkirbuyrakshikastlanish [1, 2] va buyrak funktsiyasining qaytarilmas yomonlashishiga olib kelishi mumkin [3]. Ishemiya buyrak tubulyar epiteliya hujayralarida apoptozni qo'zg'atadi, bu esa interstitsial hujayralarning yallig'lanish reaktsiyalarini kuchaytiradi. Reperfuziya endotelial hujayralar yuzasida adezyon faktorini ifodalash orqali yallig'lanish hujayralari migratsiyasini rag'batlantiradigan mikrovaskulyar zararni keltirib chiqaradi [4-8]. I/R shikastlanishi, shuningdek, oksidlovchi stressni keltirib chiqaradi, reaktiv kislorod turlarini (ROS) oshiradi va antioksidant ferment faolligini kamaytiradi [9], natijada yallig'lanishga qarshi omillar [10] ishlab chiqarilishi, kaspaza yo'lining faollashishi va apoptotik hujayralar o'limining ko'payishiga olib keladi. oxir-oqibat buyrak funktsiyasining yo'qolishiga olib keladi [11]. I/R dan kelib chiqqan buyrak shikastlanishining oldini olish uchun yallig'lanishga qarshi va antiapoptotik funktsiyalarga ega antioksidant vositalardan foydalanish taklif qilingan [10-14].

Yasmiq navlari (yashil, qizil, frantsuz yoki beluga) turli xil bioaktiv birikmalarni, ayniqsa antioksidantlarni o'z ichiga oladi [15]. Ularning umumiy polifenol va flavonoid tarkibi mos ravishda 27,30–30,30 mg (tanik kislota ekvivalenti)/g dan 13,14–16,29 mg (kversetin ekvivalenti)/g gacha [16]. Beluga yasmiqlari sezilarli darajada yuqori polifenol tarkibiga va ROSni tozalash ta'siriga ega ekanligi isbotlangan [16]. Bizning jamoamiz in vitro jigar hujayralari liniyasi tajribasidan foydalanib, yasmiqning antioksidant ta'siri haqida xabar berdi [16]. Beluga yasmiqlari boshqa yasmiq navlari bilan solishtirganda AML{13}} hujayralarida alkogoldan kelib chiqqan sitotoksiklikka qarshi sezilarli himoya ta'sirini ko'rsatdi. Beluga yasmiqlarining yallig'lanishga qarshi ta'siri lipopolisakkarid bilan ishlov berilgan RAW264.7 hujayralarida ham kuzatilgan [17]. Beluga yasmiq bilan davolash yadroviy omil E2-bog'liq 2- (Nrf{{2-) vositachi gema omilini ko'tarish orqali azot oksidi (NO) ishlab chiqarishni va induksiyalanuvchi NO sintaza (iNOS) ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi. oksigenaza-1 (HO-1) yo‘li. Ushbu in vitro tajribalar beluga yasmiqlarining antioksidant va yallig'lanishga qarshi ta'sirini ko'rsatdi.

Beluga yasmiqlarining qo'llanilishini kengaytirish uchun biz ularni buyrak I / R jarohati sichqonchasi modeliga qo'lladik va buyrakni himoya qilish ta'sirini baholadik. Ushbu tajriba uchun beluga yasmiqlari 2 hafta davomida oldindan davolash sifatida qo'llanildi, so'ngra 20 daqiqa davomida ishemiya va 30 daqiqa davomida reperfüzyon amalga oshirildi. Beluga yasmiqni oldindan davolashning buyrakni himoya qilish ta'siri buyrak funktsiyasi, gistopatologiya, epiteliya va endotelial hujayralar shikastlanishi, apoptoz, oksidlovchi stress va yallig'lanish reaktsiyalarini tahlil qilish orqali tasdiqlangan. Biz beluga yasmiqlari bilan oldindan davolash antioksidant, yallig'lanishga qarshi va antiapoptotik ta'sirlar orqali I / R sabab bo'lgan buyrak shikastlanishining oldini oladi, deb faraz qildik.

2. Materiallar va usullar

2.1. Hayvonlar guruhlari va davolash shartlari.

Barcha protseduralar Yeungnam universiteti hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo‘mitasi (AEC2019-003) tomonidan tasdiqlangan hayvonlar protokoli yordamida amalga oshirildi. Sichqonlar (ICR, 8 haftalik, erkak, 23-25 ​​g, Orient, Seongnam, Koreya) tasodifiy ravishda quyidagi 4 ta guruhga bo'lingan (har bir guruh uchun n =7): (1) Oddiy, normal nazorat guruhi; (2) ishlov berilmagan, sho'r suv bilan ishlov berilgan guruh; (3) Past, past dozali (2mg/100mkL fiziologik eritma/-BioMed Research International sichqonchasi), 14-kun davomida og'iz orqali yuboriladigan beluga yasmiqni oldindan davolash guruhi; va (4) Yuqori, yuqori dozali (8mg/100mkL fiziologik eritma/sichqoncha), 14-kuni og'iz orqali yuboriladigan beluga yasmiq, oldindan davolash guruhi. Beluga yasmiqlari professor Sing-Ook Li (Keimyung universiteti, Daegu, Koreya) tomonidan taqdim etilgan va ekstrakt tayyorlash va bioaktiv birikma tahlili avvalgi tadqiqotda xabar qilingan edi [16]. Davolanishdan so'ng hayvonlar moyil holatda, behushlik ostida joylashtirildi va dorsal kesma qilindi [1]. Ikkala buyrak uchun buyrak arteriyasi va venalari 20 daqiqa davomida tomir qisqichi bilan yopilgan, so'ngra 30 daqiqa davomida reperfüzyon qilingan, ilgari tavsiflangan protokolga muvofiq [18, 19]. Yurak ponksiyoni bilan qon to'plangan va buyraklar chiqarilgan. Buyraklar fosfat tamponlangan sho'r suv bilan yuvilgan; bir buyrak RNK va oqsil olish uchun ishlatilgan, ikkinchi buyrak esa gistologik tahlil uchun ishlatilgan.

2.2. Gistopatologik va immunohistokimyoviy (IHC) tahlillari.

Gistopatologik tekshiruvlar gematoksilin va eozin (H&E) bo'yoqlari yordamida o'tkazildi va shikastlanishlar quyidagi omillarga asoslanib baholandi: lümen ichiga tushgan tubula hujayralarining mavjudligi, eksfoliatsiyalangan hujayralardagi yadro yo'qolishi, luminal qoldiqlar, yoritilgan bo'shliq va immun hujayra infiltratsiyasi. . Ballar patologik mutaxassis tomonidan qo'lga kiritildi: ball 0, quvurli shikastlanish yo'q; ball 1,<10% of="" tubules="" injured;="" score="" 2,="" 10–25%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 3,="" 25–50%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 4,="" 50–74%="" of="" tubules="" injured;="" and="" score="" 5,="">Naychalarning 75 foizi shikastlangan. IHC tahlili uchun buyrak 4 foizli paraformaldegid bilan mahkamlangan va parafin o'rnatilgan namunalar 5 mkm bo'laklarga kesilgan. Muntazam jarayonlardan keyin H&E va IHC bo'yash amalga oshirildi. Bo'limlarga immun hujayraga (F4/80 va 8-differensiatsiya klasteri (CD8), Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) va endotelial hujayraga (CD31 va hujayra ichidagi yopishish molekulasi 1 (ICAM-1), Abcam) qarshi birlamchi antikorlar qo'llanildi. , 24 soat davomida 4 darajada (suyultirish 1:200), keyin ikkilamchi antikor (Alexa Fluor 594, Life Technology, Waltham, MA, AQSh), xona haroratida 1 soat va 4′,{18}}diamidino{ {19}}fenilindol (DAPI) yadrolarni boʻyash uchun ishlatilgan.

2.3. Protein tahlili.

Buyrak faoliyatini tahlil qilish uchun qon zardobi antikoagulyantsiz ajratildi va qon zardobidagi kreatinin va qon karbamid azoti (BUN) kontsentratsiyasi Kreatinin kolorimetrik tahlil to'plami va karbamid miqdorini tahlil qilish to'plami (BioAssay Systems LLC, Hayward, CA, AQSh) yordamida aniqlandi. ), mos ravishda. Buyrak kanalchalari/tomirlari shikastlanishini, oksidlovchi stressni, antioksidant fermentlarni va apoptozni baholash uchun buyrak to'qimalari har bir tegishli tampon bilan homogenlashtirildi. Buyrak kanalchalari epiteliya hujayralari shikastlanishini tahlil qilish uchun buyrak shikastlanishi molekulasi-1 (KIM-1) va neytrofil jelatinaza bilan bog'liq lipokalin (NGAL) kontsentratsiyasi ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) (USCN Life Science Inc) yordamida baholandi. ., Wuhan, Xitoy). Apoptozni tahlil qilish uchun Fas va kaspaza 3 kontsentratsiyasi tegishli Elishay to'plamlari (Abcam) yordamida o'lchandi. Oksidlanish stressini baholash uchun malonaldegid (MDA) darajalari MDA tahlil to'plami (Nankin Jiancheng bioengineering tadqiqot instituti, Nankin, Xitoy) yordamida o'lchandi. Antioksidant fermentlar, jumladan superoksid dismutaza (SOD), katalaza (CAT), glutation (GSH) va glutatyon peroksidaza (GPx) umumiy SOD tahlil to'plami (Nankin Jiancheng biomuhandislik tadqiqot instituti), CAT tahlil to'plami yordamida o'lchandi. Nankin Jiancheng biomuhandislik tadqiqot instituti), mos ravishda GSH florometrik tahlil to'plami va GPx tahlil to'plami (BioVision Inc.). Barcha to'plamlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq ishlatilgan.

2.4. Gen ifodasi tahlili.

Jami RNK TRIzol reagenti bilan ekstraksiya qilindi va cDNK sintez to'plami (Invitrogen, Waltham, MA, AQSh) yordamida 20ug umumiy RNKdan cDNK sintez qilindi. Haqiqiy vaqtda PCR shartlari quyidagicha edi: 10 daqiqa uchun 95 daraja, keyin 10 soniya uchun 95 darajali 40 tsikl, 50 soniya uchun 60 daraja va 20 soniya uchun 72 daraja. Genning kuchayishi SYBR yashil yordamida aniqlandi va ifodani tahlil qilish uchun 2−DDCt usuli qo'llanildi. Tajribalar quyidagi primer ketma-ketliklari yordamida uch nusxada amalga oshirildi: interleukin- (IL-) 1 , 5′-gcccatcctctgagactcat-3′ va 5′-aggccacagg- tattttgtcg-3′; IL-6, 5'-agttgccttcttgggactga-3' va 5' -tccacgatttcccagagaac-3'; o'simta nekrozi omili- (TNF-), 5'-agcccccagtctgtatcctt-3' va 5'-ctccctttgcagaactcagg-3'; transformatsion o'sish omili- (TGF-), 5'-tggttgtagaggg- caaggac-3' va 5'-ttgcttcagctccacagaga-3'; IL-10, 5′ -acctggtagaagtgatgccc-3′ va 5′-agggtcttcagcttctcacc-3′; IL- 22, 5'-tccaacttccagcagccata-3' va 5'-tagcactgactcctcggaac- 3'; va glitseraldegid 3'-fosfat dehidrogenaza (GAPDH), 5'-tgtgtccgtcgtggatctga-3' va 5'-cctgcttcacc-caccttcttga-3'.

2.5. TUNEL tahlili.

Apoptozni baholash uchun ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga binoan apoptozni aniqlash to'plami (Chemicon, Bedford, MA, AQSh) yordamida TdT vositachiligidagi dUTP nick-end labeling (TUNEL) tahlili o'tkazildi. Qisqacha, parafinlangan va regidratlangan slaydlar oqsillarni olib tashlash uchun 20ug/ml proteinaza K bilan 37 daraja haroratda 15 soat davomida hazm qilindi va endogen peroksidazani o'chirish uchun 3,0 foiz vodorod periks bilan ishlov berildi. Slaydlar 1x TdT muvozanat buferiga botirildi va 37 daraja haroratda 1 soat davomida TdT fermentining ish kuchi qo'shildi. Anti-digoksigenin konjugati 3'-OH DNK terminaliga 30 daqiqa davomida qo'llanildi va rang 3 daqiqa davomida peroksidaza substrati yordamida ishlab chiqildi. DAPI bilan ishlov berishdan so'ng slaydlar o'rnatildi. TUNEL-musbat yadrolar 200x kattalashtirish ostida har bir to'qima namunasidagi barcha ko'rish maydonlarida hisoblangan.

2.6. Statistik tahlil.

Barcha qiymatlar o'rtacha ± standart og'ish sifatida ifodalanadi. I/R buyrak shikastlanishi guruhi va beluga yasmiq I/R oldindan davolash guruhlari uchun sezilarli farqlar SPSS da (Ijtimoiy fanlar uchun statistik paket v. 9) tafovut tahlili, keyin Tukeyning post hoc testi yordamida baholandi.{{ 2}}; Chikago, IL, AQSh). p qiymatlari < 0.05="" muhim="" deb="">

Cistanche salsa foydalari

3. Natijalar

3.1. Beluga yasmiqni oldindan davolashning buyraklar faoliyatiga ta'siri.

Oldindan davolangan guruhlar I/R shikastlanishiga qarshi sezilarli himoya ta'sirini ko'rsatdi (1-rasm). Davolanmagan guruhda o'rtacha BUN va sarum kreatinin kontsentratsiyasi mos ravishda 89:92 ± 7:29 mg/dL va 0:48 ± 0:16 mg/dL ni tashkil etdi. Oldindan davolangan guruhlarda BUN (past: 22:6±3:67mg/dL; yuqori: 21:6±3:17mg/dL) va zardobdagi kreatinin (past: 0:25 ± {{19}) sezilarli darajada kamayganligini ko‘rsatdi. }:04mg/dL; yuqori: 0:23 ± 0:04mg/dL) davolash qilinmagan guruhdagilarga nisbatan konsentratsiyalar (p)<0:01), and="" no="" significant="" differences="" were="" observed="" between="" the="" two="" pretreatment="" groups.="" these="" results="" indicated="" that="" pretreatment="" with="" beluga="" lentils="" can="" protect="" against="" acute="" renal="" functional="">

3.2. Beluga yasmiqni oldindan davolashning quvurli epiteliya hujayralarining shikastlanishi va apoptozga ta'siri.

Buyrakning tashqi medullasida tubulalar shikastlanishi, ayniqsa epiteliya hujayralarining atrofiyasi tez-tez kuzatilgan va ba'zida buyrakda hujayralar yadrosining eksfoliatsiyalangan yo'qolishi, buyrak kanalchalarida luminal qoldiqlar, yoritilgan bo'shliq va interstitsial neytrofil infiltratlar aniqlangan. davolanmagan guruh (2-rasm (a)). Bundan farqli o'laroq, oldindan davolangan guruhlarning buyraklari deyarli normal hujayra morfologiyasini ko'rsatdi va yuqori dozali guruhda past dozali guruhga qaraganda quvurli shikastlanish kamroq kuzatildi. Shikastlanish maydon birligi uchun foiz sifatida ifodalanganda, jarohatlar ko'rsatkichi oldindan davolangan guruhlarda kamaydi (past: 2:0±0:93; yuqori: 1:5± {{ 11}}:53) ishlov berilmagan guruhdagi (2:87 ± 1:25) bilan solishtirganda (2(b)-rasm). KIM-1 va NGAL sekretsiyasi (2(c)-rasm) tekshirilganda, Elishay natijalari shuni ko'rsatdiki, KIM{20}} tarkibi oldindan davolangan guruhlarda kamaygan (past: 1, 922:83 ± 199:42 pg/ mg; yuqori: 1,827:83 ± 278:26 pg/mg) davolanmagan guruhdagiga nisbatan (1,977:83 ± 184:49 pg/mg). NGAL ifodasi yuqori dozali guruhda (489:34 ± 19:95 pg/mg) past dozali (527:36 ± 15: 19pg/ml) va davolanmagan (537:05 ± 15) bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi: 70pg/mg) guruhlari (s<>

Naychali epiteliya hujayralarining shikastlanishi apoptozga sabab bo'ladimi, keyin tahlil qilindi. Hujayra apoptozi TUNEL tahlili yordamida parchalangan xromosoma DNKsini aniqlash orqali baholandi (2-rasm (d)). Oldindan ishlov berilgan guruhlarda TUNEL-musbat hujayralar kamdan-kam kuzatilgan (past: 5:00 ± 1:22; yuqori: 2:25 ± 1:09). Aksincha, davolanmagan guruh tashqi medulla hududida (47:50 ± 16:77) TUNEL-musbat hujayralar sonining nisbatan ko'payishini ko'rsatdi.<0:01), showing="" apoptotic="" bodies="" that="" extruded="" into="" the="" tubular="" lumen="" (figure="" 2(e)).="" when="" the="" secretion="" of="" apoptosis-related="" molecules="" (fas="" and="" caspase="" 3)="" was="" analyzed="" by="" elisa="" (figure="" 2(f)),="" fas="" expression="" was="" high:="" 3:96="" ±="" 0:55ng/mg)="" compared="" with="" that="" in="" the="" untreated="" group="" (7:10="" ±="" 0:87ng/mg),="" and="" caspase="" 3="" expression="" showed="" similar="" results="" (low:="" 8:44="" ±="" 2:05ng/mg;="" high:="" 8:25="" ±="" 1:28ng/="" mg;="" and="" untreated:="" 11:99="" ±="" 0:63ng/mg)="" (p=""><0:05). these="" results="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="">

I / R tomonidan qo'zg'atilgan quvurli epiteliya hujayralari apoptozi.

3.3. Beluga yasmiqni oldindan davolashning endotelial hujayra shikastlanishiga ta'siri.

Beluga yasmiqni oldindan davolashning endotelial hujayralarga ta'siri CD31 antikoridan foydalangan holda IHC tomonidan tasdiqlangan (3-rasm (a)). Oddiy guruhda CD31-musbat qon tomirlari aniqlandi, ammo davolanmagan guruhda CD31-musbat hujayralar aniqlanmadi, bu I/R sabab bo'lgan tomirlarning buzilishini ko'rsatadi. Yuqori dozali dastlabki davolash guruhi peritubulyar kapillyarlarda CD31-musbat hujayralarni ko'rsatdi, bu esa yuqori dozali beluga yasmiqni oldindan davolashning qon tomirlarini himoya qiluvchi ta'siridan dalolat beradi. Endotelial hujayralar adezyon molekulasi bo'lgan ICAM- 1 ni aniqlash orqali tekshirildi va musbat hujayralar oldindan ishlov berilgan guruhlarga nisbatan davolanmagan guruhning quvurli qismida (46:4±41:7 hujayra/slayd) tez-tez aniqlandi ( past: 5:77 ± 1:01 katak/slayd; yuqori: 3:72 ± 1:05 hujayra/- slayd) (3-rasm (b)). Ushbu natijalar beluga yasmiqni oldindan davolash kapillyarlarni saqlab qolganligini va endotelial hujayra yuzasida adezyon molekulalarining faollashuvini inhibe qilganligini ko'rsatdi.

3.4. Beluga yasmiqni oldindan davolashning oksidlovchi stressga ta'siri.

To evaluate the antioxidant effects of beluga lentil pretreat- ment, MDA, SOD, CAT, GSH, and GPx levels were detected by ELISA (Figure 4). MDA levels decreased in the pretreated groups (low: 0:85 ± 0:23nmol/mg; high: 0:81 ± 0:22nmol/ mg) compared with that in the untreated group (0:96 ± 0:11nmol/mg) (p >0:05) (Figure 4(a)). However, the antioxidant enzyme activities increased in the pretreated groups (Figure 4(b)) compared with those in the untreated group (p >{{{20}}}}:05), SOD uchun (past: 360:21 ± 56:42U/mL; yuqori: 362:7{{ 36}} ± 70 :32U/ml; va ishlov berilmagan: 333:52 ± 41:58U/mL), CAT (past: 3:64 ± 1:09nmol/g; yuqori: 3:21 ± 0:76nmol/g; va ishlov berilmagan: 3:18 ± 0:40 nmol/g), GSH (past: 4:13 ± 0:53 nmol/mg; yuqori: 4:56 ± 0:69 nmol/mg; va ishlov berilmagan: 3:59 ± 0 :53nmol/mg) va GPx (past: 198:89 ± 48:43U/ug; yuqori: 219:61 ± 138:08U/ug; va ishlov berilmagan: 165:14 ± 34:73U/ug). Garchi bu farqlar statistik ahamiyatga ega bo'lmasa-da, bu natijalar beluga yasmiqni oldindan davolash buyraklardagi antioksidant quvvatni oshirish orqali I/R tomonidan kelib chiqqan buyrak oksidlovchi stressini oldini olganligini ko'rsatdi.

3.5. Beluga yasmiqni oldindan davolashning immun hujayra infiltratsiyasi, sitokinlar va yallig'lanishga ta'siri. Makrofag (F4/80 plus) va T hujayralari (CD4 plus) infiltratsiyasi va proinflamator sitokin (IL-1, IL-6 va TNF-) chiqarilishi apoptozdan kelib chiqqan yallig'lanishni baholash uchun tahlil qilindi. IHC tahlili bilan baholanganidek, oldindan davolangan guruhlarda davolanmagan guruhga qaraganda kamroq F4/80 plus va CD4 plus infiltrlovchi immun hujayralari kuzatildi (5-rasm (a)). Haqiqiy vaqtda PCR tahlili shuni ko'rsatdiki, proinflamatuar sitokin (IL-1, TNF- va IL 6) darajalarining buyrak mRNK darajalari davolanmagan guruhdagilarga nisbatan oldindan davolangan guruhda pasaygan (5-rasm (b). )). Biroq, yallig'lanishga qarshi sitokinlarning (TGF- va IL-22) mRNK darajalari IL-10 bundan mustasno, oldindan davolash qilingan guruhlarda davolanmagan guruhga nisbatan oshdi (5-rasm (c)). Bu natijalar buyraklardagi I/R tomonidan kelib chiqqan yallig'lanish shikastlanishini yallig'lanishga qarshi ta'siri tufayli beluga yasmiqni oldindan davolash orqali oldini olish mumkinligini ko'rsatdi, garchi IL{28}} ta'sir qilmagan bo'lsa ham.

antosiyanin qo'shimchasi

4. Munozara

I/R tomonidan qo'zg'atilgan buyrak shikastlanishi an'anaviy ravishda buyrak funktsiyasining tez pasayishi bilan tavsiflanadi [20]. Buyrak funktsiyasini BUN va sarum kreatinin ko'rsatkichlari yordamida baholash mumkin, ular glomerulyar filtrlar funktsiyasini ko'rsatadigan azotli metabolik yakuniy mahsulotdir [21]. Davolanmagan guruhda BUN (89:92 ± 7:29 mg/dL) va kreatinin (0:48 ± {{2{22}}}:16 mg/dL) sezilarli darajada oshdi, bu buyraklar funktsional etishmovchiligini ko'rsatdi. I/R tomonidan qo'zg'atilgan. Shu bilan birga, beluga yasmiq bilan oldindan davolash qilingan guruhlarda BUN (past: 22:6±3:67mg/dL; yuqori: 21:6±3:17mg/dL) va sarum kreatinin (past: 0) sezilarli darajada kamaygan: 25 ± 0:04mg/dL; yuqori: 0:23 ± 0:04mg/dL) qiymatlar (p)<0:01) compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" group.="" these="" values="" are="" similar="" to="" those="" observed="" in="" normal="" mice="" (male,="" 6wks;="" bun:="" 22:68="" ±="" 3:05mg/dl;="" creatinine:="" 0:25="" ±="" 0:06mg/dl)="" [22].="" the="" significantly="" decreased="" bun="" and="" serum="" creatinine="" values="" observed="" in="" the="" pretreated="" groups="" relative="" to="" the="" untreated="" group="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="" exerted="" protective="" effects="" on="" renal="" function="" against="" i/r-induced="" renal="">

Buyrak funktsiyasining pasayishi glomerulyar filtratsiyaning quvurli epiteliy bo'ylab orqaga oqishi natijasida kelib chiqqan glomerulyar filtratsiya muammolarini ko'rsatadi, bu I/R tomonidan eng og'ir shikastlangan hududni ifodalaydi [23]. I/R natijasida eksfoliatsiyalangan hujayra yadrosi yo'qoladi, buyrak kanalchalarida luminal qoldiqlar va quvurli epiteliya hujayralarida yoritilgan bo'shliqlar yiqildi. Oldindan davolangan guruhlar dozaga bog'liq holda gistopatologik naycha shikastlanishining kamayganligini ko'rsatdi. Kuzatilgan gistopatologik tubula shikastlanishi molekulyar markerlar, KIM-1 va NGAL [24] ni baholash orqali tasdiqlandi. KIM-1 - fosfatidilserin retseptorlari bo'lib, apoptotik hujayrani aniqlash molekulasi vazifasini bajaradi, apoptotik/nekrotik hujayra fagotsitozi, apoptotik qoldiqlarni tozalash va yallig'lanishga qarshi javobni cheklash uchun shikastlangan hujayrani lizosomaga o'tkazadi [25]. NGAL inson neytrofillaridan olingan jelatinazalarni bog'laydigan kichik sideroforlar oqsilidir. NGAL oddiy buyraklarda kamdan-kam hollarda ifodalanadi, ammo buyrakning o'tkir, ishemik yoki toksik shikastlanishi proksimal/distal kanalchalardagi epiteliya hujayralari tomonidan NGAL sekretsiyasiga olib keladi, siydik va qonda NGAL kontsentratsiyasini oshiradi; Shunday qilib, NGAL I/R tomonidan qo'zg'atilgan o'tkir buyrak etishmovchiligi uchun yangi erta biomarker sifatida ishlatilishi mumkin [26]. Oldindan ishlov berilgan guruhlarda KIM-1 va NGAL sekretsiyasi pasaygan, yuqori dozali davolovchi guruhda esa davolanmagan guruhga nisbatan NGAL sekretsiyasi sezilarli darajada kamaygan. Naychalar shikastlanishi va KIM-1 va NGAL oqsili sekretsiyasining kuzatilgan qisqarishi shuni ko'rsatdiki, beluga yasmiqni oldindan davolash I/R sabab bo'lgan quvurli epiteliya hujayralarining shikastlanishiga qarshi himoya ta'sir ko'rsatadi.

I / R shikastlanishi og'ir bo'lsa, zararlangan hujayralar apoptotik yo'l orqali tozalanadi, bu hujayra o'limining patofiziologik mexanizmi [27]. Apoptozga xos DNK shikastlanishi TUNEL tahlili orqali aniqlanishi mumkin.

Davolanmagan guruhda TUNEL-musbat hujayralar tez-tez kuzatilgan bo'lsa, beluga yasmiq bilan oldindan davolash qilingan guruhlar dozaga bog'liq holda TUNEL-musbat hujayralar soni sezilarli darajada kamaygan. Apoptozning bu gistologik dalillari Fas va kaspaza 3 ifodalarini o'rganish orqali tasdiqlangan. Fas hujayra o'limi retseptorlari bilan bog'langan ligand bo'lib, dastlab dasturlashtirilgan hujayra o'limi paytida kuzatiladi [28]. Kaspaza 3 apoptotik hujayra-o'lim yo'lining hujayra ichidagi ijro etuvchi fermenti bo'lib, apoptotik tana shakllanishiga olib keladi [29]. Fas va kaspaza 3 oqsili sintezi oldindan davolangan guruhda davolanmagan guruhdagilarga nisbatan sezilarli darajada kamaydi, bu esa beluga yasmiq bilan oldindan ishlov berish I/R shikastlanishidan keyin apoptotik signal uzatilishini inhibe qilishi mumkinligini tasdiqladi.

I/R shikastlanishi, shuningdek, buyrak mikrotomirlarining yo'qolishiga olib keladi [30], bu esa endotelial hujayralardagi patohistologik o'zgarishlarga olib keladi [20]. Endotelial hujayra belgisi bo'lgan CD31 ga qarshi antikor yordamida buyrak mikrotomirlarining shikastlanishi aniqlandi [30]. CD31 ifodasi davolanmagan guruhda aniqlanmadi, bu buyrak mikrotomirlarining yo'qolishini ko'rsatadi. Shu bilan birga, yuqori dozali oldindan ishlov berilgan guruh normal guruhda kuzatilgan qon tomir zichligiga o'xshash ijobiy CD31 ifodasini ko'rsatdi, bu esa beluga yasmiqni yuqori dozalarda oldindan davolash endotelial hujayralar saqlanishiga himoya ta'sirini ko'rsatdi. Shikastlangan endotelial hujayralar ICAM-1 [31] kabi endoteliy-leykotsitlarning adezyon molekulalarini ifodalaydi. Adezyon molekulalarining kuchayishi leykotsitlar faollashuviga, kapillyar obstruktsiyaga, sitokin ishlab chiqarishga va yallig'lanishga qarshi javoblarga olib kelishi mumkin [32]. Davolanmagan guruh ijobiy ICAM{13}} ifodasini ko‘rsatdi, bu endotelial hujayra shikastlanishi natijasida kelib chiqqan adezyon molekulasi ifodasining kuchayganini ko‘rsatdi. Shu bilan birga, yuqori dozali oldindan ishlov berilgan guruh manfiy ICAM{15}} ifodasini ko'rsatdi, bu endotelial hujayralarni ham funktsional, ham fiziologik jihatdan saqlash uchun beluga yasmiqdan oldingi davolashning himoya ta'sirini ko'rsatdi. Qo'llab-quvvatlangan qon tomir tuzilmalari doimiy qon oqimini ta'minlaydi, kislorod va ozuqa moddalarini I/R tomonidan shikastlangan to'qimalar va hujayralarga etkazib beradi, buyrakning funktsional va gistologik tiklanishiga yordam beradi.

Reperfuziya shikastlangan hujayralarni kislorod bilan ta'minlashni tiklaydi, bu kislorodni ROS ga aylantiradigan oksidlovchi stress bilan bog'liq fermentlarning ifodalanishini qo'zg'atishi mumkin [33]. ROS beqaror va yuqori reaktiv mahsulotlar bo'lib, hujayra oqsillari, lipidlar va nuklein kislotalarning o'zgarishi orqali DNKning shikastlanishiga, apoptoz va nekrozga olib keladigan erkin radikallarni hosil qiladi. Erkin radikallar hujayra membranasidagi to'yinmagan yog' kislotalariga zarar etkazadi, natijada lipidlarning peroksidlanishi [34]. Keyin lipid peroksid MDA ga parchalanadi, bu SOD, GPx, GSH va CAT [35] kabi antioksidant ferment faolligini kamaytiradi. SOD superoksidning kislorod va vodorod peroksidga dismutatsiyasini katalizlaydi, bu esa CAT tomonidan yanada parchalanadi. GPx asosiy antioksidant ferment bo'lib, GSH yordamida peroksidni yo'q qiladi. GSH GPx bilan birgalikda turli oksidlovchi mahsulotlarni zararsizlantirishi mumkin. MDA va antioksidant ferment darajalari Elishay tahlilida teskari munosabatni ko'rsatdi. Oldindan ishlov berilgan guruhlarda MDA ifodasi nisbatan past edi, ammo antioksidant fermentlar davolanmagan guruhdagi tegishli darajalariga nisbatan yuqori darajada ifodalangan.

Ushbu natijalar shuni ko'rsatdiki, beluga yasmiqni oldindan davolash membrana lipid peroksidatsiyasini inhibe qilish va antioksidant fermentlarni faollashtirish orqali oksidlovchi stress yo'lini to'sib qo'yish orqali I / R sabab bo'lgan buyrak shikastlanishini kamaytirishi mumkin.

Reperfuziya qon tomir endotelial hujayra faollashuvini ham keltirib chiqaradi, natijada hujayra yuzasida ICAM{0}} ifodalanadi. Aniqlangan ICAM-1 neytrofillar bilan limfotsitlar funktsiyasi bilan bog'liq bo'lgan antigen-1 (LFA-1) orqali bog'lanadi, buning natijasida neytrofillar endotelial hujayralarga birikadi, neytrofillar infiltratsiyasi va yallig'lanish sekretsiyasi paydo bo'ladi. neytrofillar tomonidan sitokinlar [36]. Zararlangan hududda neytrofillar paydo bo'lgandan so'ng, F4/80 plus makrofaglarning infiltratsiyasi sodir bo'ladi. Makrofaglar vaqt va atrof-muhitga qarab yallig'lanishga qarshi M1 va yallig'lanishga qarshi M2 fenotiplariga bo'linadi. M1 makrofaglari yallig'lanishga qarshi sitokinlarni (IL-1, TNF- va IL- 6) chiqaradi, ular I/R tomonidan induktsiya qilingan buyrak shikastlanishi bilan bog'liq, M2 makrofaglari esa yallig'lanishga qarshi sitokinlarni (TGF-, IL) chiqaradi. {19}} va IL-22) [37, 38]. Makrofaglar, shuningdek, CD4 va T hujayralari faollashuvini rag'batlantiradi. Faollashtirilgan T hujayralari interferon- (IFN-) ni sintez qiladi, bu M1 makrofaglarini faollashtirish orqali immun javobini kuchaytiradi [39]. Ushbu tadqiqotda beluga yasmiq bilan oldindan davolash qilingan guruhlar F4/80 plyus makrofag va CD4 plyus T hujayralarining buyrak korteksi hududiga infiltratsiyasiga qarshi inhibitiv ta'sir ko'rsatdi, buning natijasida IL-1, IL-6, va TNF- mRNK va TGF- , IL-10 va IL{36}} mRNKning yaxshilangan ifodasi. Ushbu natijalar shuni ko'rsatdiki, beluga yasmiqni oldindan davolash immunitet hujayralarining infiltratsiyasini inhibe qilish va yallig'lanishli sitokin ekspressiyasini kamaytirish orqali yallig'lanish reaktsiyasini kamaytirishi mumkin.

5. Xulosalar

Xulosa qilib aytganda, beluga yasmiqni oldindan davolash guruhlari proksimal tubula shikastlanishining kamayganligini, shikastlanish bilan bog'liq molekula sekretsiyasining kamayganligini, TUNEL-musbat hujayralar kamayganligini, apoptoz bilan bog'liq molekula sekretsiyasining kamayishini, ijobiy mikrotomirlar ifodasini, yopishqoqlik belgisining salbiy ifodasini, antioksidant ta'sirni va inhibe qiluvchi ta'sirni ko'rsatdi. javoblar. Shunday qilib, beluga yasmiqni oldindan davolash antiapoptotik, yallig'lanishga qarshi va antioksidant ta'sir ko'rsatish orqali I / R tomonidan kelib chiqqan buyrak shikastlanishiga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Ushbu tadqiqot natijalariga ko'ra, qisman nefrektomiya kabi I / R jarohatlari bilan bog'liq klinik holatlarda beluga yasmiq bilan davolashni qo'llash orqali buyrak funktsiyasini saqlab qolish mumkin.

buyraklardagi flavonoidlar qo'shimchalari

Ma'lumotlar mavjudligi

Ma'lumotlar so'rov bo'yicha mavjud.

Oshkora qilish

Qo'lyozma avtoreferati Koreya Urologiya Assotsiatsiyasining 72-yillik yig'ilishida ma'lum qilindi.

Manfaatlar to'qnashuvi

Hech qanday manfaatlar to'qnashuvi yo'q.

Mualliflarning hissalari

Sing-uk Li va So Young Chun bu ishga teng hissa qo'shdilar.

Minnatdorchilik

Ushbu ish Kyungpook milliy universiteti kasalxonasining Biotibbiyot tadqiqot instituti granti (2019) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

1Keymyung universiteti, Oziq-ovqat fanlari va texnologiyasi kafedrasi, Tegu 42601, Koreya Respublikasi

2BioTibbiyot tadqiqot instituti, Kyungpook milliy universiteti kasalxonasi, Daegu 41940, Koreya Respublikasi

3Yungnam universiteti kasalxonasi, Laboratoriya hayvonlar tadqiqotini qoʻllab-quvvatlash boʻlimi, Daegu 42415, Koreya Respublikasi

4Ichki kasalliklar kafedrasi, Yeungnam universiteti tibbiyot kolleji, Daegu 42415, Koreya Respublikasi

5Kyungpuk Milliy Universiteti, Tibbiyot fakulteti, Urologiya kafedrasi, Tegu 41566, Koreya Respublikasi

6Kyungpuk Milliy Universiteti, Tibbiyot fakulteti, Patologiya kafedrasi, Tegu 41566, Koreya Respublikasi

7Urologiya kafedrasi, Yeungnam universiteti tibbiyot kolleji, Daegu 42415, Koreya Respublikasi

Ma'lumotnomalar

[1] SY Chun, DH Kim, JS Kim, va boshqalar, "Sichqoncha modelida buyrak to'qimasini qayta tiklash uchun ishemik bo'lmagan qisman nefrektomiya usuliga yangi dorsal yoriq yaqinlashdi", To'qimalarni muhandislik va regenerativ tibbiyot, jild. 15, yo'q. 4, 453–466,2018-betlar.

[2] M. Agrawal va R. Swartz, "O'tkir buyrak etishmovchiligi", Amerika oilaviy shifokori, jild. 61, yo'q. 7, 2077–2088-betlar, 2000 yil.

[3] KR Tuttle, "Işemik nefropatiya", Nefrologiya va Gipertenziya bo'yicha hozirgi fikr, jild. 10, yo'q. 2, 167-173, 2001-betlar.

[4] K. Singbartl va K. Ley, "E-selektini blokirovka qilish orqali ishemiya-reperfuziyadan kelib chiqqan og'ir o'tkir buyrak etishmovchiligidan himoya qilish", Critical Care Medicine, jild. 28, yo'q. 7, 2507– 2514-betlar, 2000 yil.

[5] M. Takada, KC Nadeau, GD Shaw, KA Marquette va NL Tilney, "Kalamush buyragining ishemiyasi/reperfuzion shikastlanishidagi sitokin-yopishqoqlik molekulasi kaskadi. Eriydigan P-selektin ligand bilan inhibisyon", The Journal of klinik tekshiruv, jild. 99, yo'q. 11, 2682–2890-betlar, 1997 yil.

[6] J. Niu, J. Vu, X. Li va F. Chjan, "Endotelin-1/endotelin retseptorlari A va o'tkir ishemiya/reperfuziyadan keyin sichqon buyraklarida yallig'lanish o'rtasidagi bog'liqlik", Molecular Medicine Reports, vol. . 11, yo'q. 5, 3981–3987-betlar, 2015 yil.

[7] L. Vang, X. Liu, H. Chen va boshqalar, "Kalamushlarda buyrak ishemiyasi / reperfuzion shikastlanishi natijasida kelib chiqqan apoptozga peroksid II ta'siri", Eksperimental va terapevtik tibbiyot, jild. 9, yo'q. 3, 817–822-betlar, 2015 yil.

[8] B. Dong, H. Zhou, C. Xan va boshqalar, "Iskemiya/reperfuziyadan kelib chiqadigan chopish ifodasi apoptozni rag'batlantiradi va buyrak funktsiyasi tiklanishini buzadi: asidoz va Gpr4 roli", PLoS One, jild. 9, yo'q. 10, e110944-modda, 2014 yil.

[9] DL Cruthirds, L. Novak, KM Akhi, PW Sanders, JA Tompson va LA MacMillan-Crow, "Buyrak ishemiyasi/reperfuziya paytida oksidlovchi stressning mitoxondrial maqsadlari", Biokimyo va biofizika arxivlari, jild. 412, yo'q. 1, 27–33-betlar, 2003 yil.

[10] B. Yang, S. Jain, IZ Pawluczyk va boshqalar, "Kalamushlarda uzoq muddatli buyrak ishemiyasi / reperfuziya shikastlanishi va immunosupressiyada yallig'lanish va kaspaza faollashuvi", Kidney International, jild. 68, yo'q. 5, 2050–2067-betlar, 2005 yil.

[11] HH Wu, TY Hsiao, CT Chien va MK Lai, "Qisqa davrlarda reperfuziya bilan ishemik konditsionerlik buyrak ishemiyasi/reperfuziya natijasida kelib chiqqan kalamushdagi apoptoz va autofagiyani susaytiradi," Biotibbiyot fanlari jurnali, jild. 16, yo'q. 1, 2009 yil.

[12] EM El Morsy, MA Ahmad va AA Ahmad, "Kalamush modelida açai ekstrakti oldindan shartlash orqali buyrak ishemiyasi/reperfuziya shikastlanishining susayishi", Life Sciences, jild. 123, 35–42-betlar, 2015 yil.

[13] H. Ilhan, M. Eroglu, V. Inal va boshqalar, "Hiperbarik kislorod terapiyasi oksidlovchi stressni va kalamushlarda buyrak ishemiyasi / reperfuzion shikastlanishida to'qimalarning shikastlanishini engillashtiradi", Renal Failure, vol. 34, yo'q. 10, 1305– 1308-betlar, 2012 yil.

[14] H. Chen, B. Xing, X. Liu va boshq., "Ozon oksidlovchi oldingi sharti buyrak ishemiyasi/reperfuziya shikastlanishining kalamush modelida yallig'lanish va apoptozni inhibe qiladi", Evropa farmakologiya jurnali, jild. 581, yo'q. 3, 306–314-betlar, 2008 yil.

[15] BJ Xu, SH Yuan va SK Chang, "Fenol tarkibi, antioksidant quvvati va sovuq mavsumdagi dukkaklilar va boshqa tanlangan oziq-ovqat dukkaklilarning rangining qiyosiy tahlillari", Journal of Food Science, jild. 72, yo'q. 2, S167–S177-betlar, 2007 yil.

[16] SO Li va SH Li, "Turli navlardan olingan yasmiq ekstraktining polifenol tarkibi va antioksidant faolligi", Koreya oziq-ovqat fanlari va ovqatlanish jamiyati jurnali, jild. 45, yo'q. 7, 973–979-betlar, 2016 yil.

[17] SO Li va SH Li, 2018 yilda KFN xalqaro simpozium va yillik yig'ilishida "Nrf{1}}beluga yasmiqidan metanolik ekstraktining LPS bilan ishlangan RAW264.7 hujayralarida yallig'lanishga qarshi vositachilik ta'siri", pp. {{ 7}}, Pusan, Koreya, 2018 yil.

[18] EE Hesketh, A. Czopek, M. Clay va boshqalar, "Buyrak ishemiyasi-reperfuziya shikastlanishi: shikastlanish va regeneratsiyaning sichqoncha modeli", JoVE (Journal of Visualized Experiments), no. 88, b. 8, 2014 yil.

[19] Q. Wei va Z. Dong, "O'tkir buyrak ishemik shikastlanishining sichqoncha modeli: texnik eslatmalar va fokuslar", American Journal of Physiology-Renal Physiology, jild. 303, yo'q. 11, bet. F1487– F1494, 2012 yil.

[20] JV Bonventre va L. Yang, "O'tkir buyrak ishemik shikastlanishining hujayrali patofiziologiyasi", The Journal of Clinical Investigation, jild. 121, yo'q. 11, 4210–4221-betlar, 2011 yil.