Acteoside o'simlik moddasi o'simta hujayralarini qanday inhibe qiladi?

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

ANTRACT

Tabiiy mahsulotlar o'ta tarkibiy xilma-xilligi bilan ajralib turadi va shuning uchun ular o'smaga qarshi yangi vositalarni aniqlash uchun noyob manbani taklif qiladi. Bu erda biz o'simlik moddasi haqida xabar beramizakteozidLippia citriodora barglaridan ilg'or fitokimyoviy usullar bilan ajratilgan holda metastatik o'simta hujayralariga nisbatan kuchaytirilgan sitotoksiklikni ko'rsatdi; turli sitotoksik agentlar va sensibilizatsiyalangan kimyoviy chidamli saraton hujayralari bilan sinergiyada harakat qildi.Akteozido'tlardanfiziologik hujayra kontekstlarida toksik emas edi, shu bilan birga u oksidlovchi yukni oshirdi, proteostatik modullarning faolligiga ta'sir qildi va o'simta hujayralari liniyalarida matritsa metalloproteinazalarini bostirdi. Intraperitoneal yoki og'iz orqali (ichimlik suvi orqali) yuborishcistancheakteozid melanoma sichqonchasi modelida o'smalarda antioksidant reaktsiyalarni ko'tardi; ammo, faqat qorin bo'shlig'iga yuborish o'simta o'sishini bostirdi va o'simtaga qarshi reaktiv immun javoblarni keltirib chiqardi. Mass-spektrometriya identifikatsiyasi/miqdori tahlillari shuni ko'rsatdiki, qorin bo'shlig'igaakteozidog'iz orqali yuborish bilan solishtirganda sezilarli darajada yuqori bo'ldi, plazmadagi birikmaning kontsentratsiyasi va davolangan sichqonlarning o'smalari, bu uning in vivo jonli ravishda o'simtaga qarshi ta'sirini kiritish yo'nalishiga va o'simtadagi erishilgan kontsentratsiyaga bog'liqligini ko'rsatadi. Nihoyat, molekulyar modellashtirish tadqiqotlari va fermentativ faollik tahlillari akteozid C protein kinazini inhibe qilishini ko'rsatdi. Xulosa qilib aytganda, akteozid o'simtaga qarshi yangi vositalarni ishlab chiqish uchun kimyoviy asos bo'lib xizmat qiladi.

Kalit so‘zlar:Akteozid, Saraton, Tabiiy birikma, Oksidlanish stressi, Proteostaz, Immunomodulyatsiya

Cistanche anti-tumor, namuna olish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Kanserogenez hujayra signalizatsiyasining bir nechta yo'llarining tartibga solinishi bilan tavsiflanadi va hujayralardagi oksidlovchi, replikativ, metabolik, genotoksik va proteotoksik stressning kuchayishi bilan bog'liq [1]. Ushbu stress fenotiplarini moslashtirish va engish uchun malign hujayralar davom etayotgan stressni bostirish yoki (hech bo'lmaganda) engillashtirishga qaratilgan bir nechta onkogen bo'lmagan yo'llarni (onkogenlardan tashqari) tartibga soladi. Shish paydo bo'lishi jarayonida tez-tez tartibga solinadigan turli xil onkogen bo'lmagan yo'llar orasida proteostaz tarmog'i (PN) modullari va hujayrali antioksidant javoblar mavjud [2,3].

PN ning asosiy komponentlari ikkita asosiy degradatsiya mexanizmi, ya'ni Autofagiya-Lizosoma yo'li (ALP) va Ubiquitin-Proteazoma yo'li (UPP) va hujayra molekulyar chaperonlar tarmog'idir. ALP asosan oqsil agregatlari va shikastlangan organellalarning parchalanishida ishtirok etadi [4], UPP esa oddiy qisqa muddatli oqsillarni va tiklanmaydigan noto'g'ri qatlamlangan yoki ochilgan oqsillarni [5-8] parchalaydi. 26Seukaryotik proteazoma 19S tartibga soluvchi zarrachalardan (RP) va 20 Skor zarrachasidan (CP) tashkil topgan; ikkinchisi bochkaga o'xshash tuzilmani tashkil etuvchi to'rtta to'plangan heptamerik halqalardan (ikkitasi - tipidagi ikkitasini o'rab turgan) iborat. Ximotripsinga o'xshash (CT-L), tripsinga o'xshash (TL) va kaspazaga o'xshash (CL) proteazoma peptidazalarining faolligi mos ravishda 5, 2 va 1 proteazoma bo'linmalarida joylashgan [6]. Bortezomib (Velcade®; shuningdek, PS{23}} deb ataladi) va Karfifilzomib proteazoma inhibitörlerinin turli gematologik malign o'smalarga qarshi ko'rsatilgan klinik samaradorligi [9] UPPni maqsadli davolashning istiqbolli strategiyasi sifatida "kontseptsiya isbotini" taqdim etdi. saraton kasalligini davolash. Kanserogenez [3,10] jarayonida tez-tez tartibga solinadigan hujayrali antioksidant mudofaa yo'llarining murakkab tarmog'i antioksidant fermentlarni, shuningdek, sitoprotektiv genomik javoblarni mobilizatsiya qiluvchi bir nechta transkripsiya omillarini o'z ichiga oladi; Bularga forkhead box O (Foxo) va yadro omili eritroid 2-bog'liq omil (Nrf-2) kiradi. Nrf-2 hujayralarni oksidlovchi va/yoki ksenobiotik shikastlanishdan himoya qilishda markaziy oʻrin tutadi, chunki u antioksidant va II faza genlari [11-13] ifodasini ragʻbatlantiradi.

Yaqinda biz va boshqalar ushbu o'smaga bog'liqlikni (ya'ni, proteostatik modullar va/yoki antioksidant ta'sir yo'llari) yoki o'zgartirilgan genotip kontekstida hujayralardagi ROS darajasini oshirishni o'simta hujayralarini tanlab o'ldirish uchun potentsial terapevtik oynani taklif qilishini taklif qildik. ,14]; qo'llab-quvvatlashda, hujayralardagi ROS darajasini ko'taradigan kichik molekula tomonidan saraton hujayralarini tanlab o'ldirish haqida xabar berilgan [2]. Kombinativ yondashuvlar, shu jumladan o'smaga qarshi reaktiv immun javoblarni faollashtirish [15] PN va antioksidant javoblarni inhibe qilish va/yoki hujayradagi ROS darajasini oshirish orqali taqdim etilayotgan terapevtik oynani maksimal darajada oshirishi kutilmoqda.

Turli manbalardan (o'simliklar, dengiz organizmlari, mikroorganizmlar va boshqalar) tabiiy mahsulotlar (ekstraktlar yoki sof birikmalar) (NP) o'ta tarkibiy xilma-xilligi va kimyoviy murakkabligi tufayli o'simtaga qarshi vosita sifatida harakat qilish qobiliyatiga qarab tekshiriladi. ular pleiotropik ravishda bir nechta uyali signalizatsiya yo'llarini modulyatsiya qiladi [16]. Xabar qilinishicha, NPlar yallig'lanishga qarshi, o'simtaga qarshi va/yoki anti-metastatik javoblarni faollashtiradi [16,17] va shuningdek, ko'p dori qarshiligidan qochadi [18,19]. Ular orasida fenolik birikmalar (jumladan, feniletanoid glikozidlar) insonning turli kasalliklarini oldini olish va / yoki davolashdagi roli tufayli katta qiziqish uyg'otdi.

Kusagin yoki verbaskozid [20] deb ham ataladigan akteozid ko'plab ikki pallali o'simliklardan ajratilgan feniletanoid glikoziddir. Xabar qilinishicha, akteozid ba'zi qiziqarli biologik faolliklarga ega, jumladan antioksidant, yallig'lanishga qarshi va hujayra apoptozini tartibga soluvchi xususiyatlar [21,22]. Shunga qaramay, uning o'smaga qarshi potentsial faolligi ko'rib chiqilmagan. Biz bu erda xabar beramiz, akteozid fiziologik hujayra kontekstida aniq toksik ta'sir ko'rsatmasdan, sutemizuvchilar saraton hujayralariga qarshi sitotoksiklikni oshirdi. Bundan tashqari, akteozid in vivo sichqoncha modelida melanoma o'simtasi o'sishini (boshqalar qatorida) o'simtaga qarshi reaktiv immun javoblarni faollashtirish orqali bostirdi.

o'simtaga qarshi sistanche ekstrakti

2. Materiallar va usullar

2.1. O'simlik materiallari va ekstraktsiyasi

Quritilgan Lippia citriodora (Lamiaceae) barglari (4,5 kg) Gretsiyaning Afina shahridagi mahalliy bozordan sotib olindi. Barglar maydalangan va 12 soat davomida metanol (2 × 20 L) bilan mexanik aralashtirish orqali ekstraksiya qilingan. Metanol ekstrakti quruq bo'lgunga qadar bug'landi va CH2Cl2 / MeOH 98/2 (15 L) aralashmasi bilan yuvildi. Erimaydigan qoldiq ajratildi va quritildi, yashil-sariq kukun (450 g) hosil qildi.

2.2. Akteozid va UPLC-HRMS tahlilini tozalash

Yuqorida aytib o'tilgan qoldiqning bir qismi (1{3}} g) tez markazdan qochma bo'linish xromatografiyasi (FCPC) apparati (Kromaton, Frantsiya) yordamida qarama-qarshi oqim xromatografiyasiga o'tkazildi; ikki fazali erituvchi tizim sifatida 5/0,5/4,5 nisbatda EtOAc/EtOH/H2O aralashmasi ishlatilgan. Yig'ilgan fraktsiyalar yupqa qatlam xromatografiyasiga o'tkazildi; keyin xromatogrammalar UV chiroq (254 va 365 nm) ostida kuzatildi va metanol vanillin sulfat bilan püskürtülmesi va ikki daqiqa davomida qizdirilishi bilan ko'zda tutildi. Yuqorida aytib o'tilgan jarayonda jami 2,1 g akteozid (tozaligi 90 foizdan yuqori yoki unga teng) ajratildi. Akteozidni identifikatsiyalash yadro magnit-rezonansi (NMR) va massa spektrometriyasi (MS) spektrlari bilan amalga oshirildi, uning tozaligi esa UPLC-MS va NMR tahlillari bilan aniqlandi; batafsil ma'lumot uchun Suppl. Materiallar va uslublar.

2.3. Hujayra chiziqlari

Inson o'pkasining embrion fibroblastlari (IMR90 hujayralari) va B16.F1, B16.F10, YAC-1 va WEHI-164 sichqoncha hujayralari qatorlari Amerika to'qimalari madaniyati to'plamidan (ATCC) olingan. U2 OS va Sa OS inson osteosarkomasi hujayra liniyalari Prof. V. Gorgoulis (Tibbiyot maktabi, Afina Milliy va Kapodistrian universiteti, Gretsiya), KH OS osteosarkoma hujayralari va kemorezistent osteosarkoma hujayralari [23] tomonidan xayriya qilingan. Doktor E. Gonos (Milliy Ellin tadqiqotlari jamg'armasi, Gretsiya) xayr-ehsoni. Sichqoncha saratoni hujayralari C5N va A5 ko'p bosqichli sichqon terisi kanserogenezi modeliga tegishli [24,25] va professor A. Balmain (Kompleks saraton markazi, Kaliforniya universiteti, AQSh) tomonidan sovg'a qilingan. Ishlatilgan hujayra liniyalarini etishtirish shartlari Suppl. Materiallar va uslublar.

Cistanche ekstraktining foydasi: saratonga qarshi

2.4. Melanoma sichqoncha modeli

Erkak C57BL/6 sichqonlari (25–30 g vazn, 6–8 haftalik) Yunoniston Paster institutidan olingan va nazorat qilinadigan harorat (22 daraja) va fotoperiod (12 soat yorug'lik: 12 soat) ostida joylashgan. qorong'i) suv va oziq-ovqatga erkin kirish imkoniyati bilan. Sichqonlar teri ostiga 105 ta B16.F1 melanoma hujayralari (100 mkl PBSda) bilan emlangan va tasodifiy 3 guruhga (n=5/guruhga) tayinlangan. Shishlar sezilib qolganda (11-kun) sichqonlar akteozidni ikki yo'l orqali qabul qilishdi; qorin bo'shlig'iga (IP) (1 mg / sichqoncha 200 mkL PBSda suyultiriladi; jami 6 dozada har kuni boshqariladi) yoki ichimlik suvi bilan og'iz orqali (OR) (2,5 mg / sichqoncha; ketma-ket 13 kun davomida jami 13 doza). Nazorat sichqonlariga PBS yuborildi. Raqamli kaliper yordamida hosil bo'lgan o'smalarning katta va kichik o'qlarini o'lchash orqali har 2 kunda o'smaning o'sishi qayd etildi. O'lchovlar o'simta hajmiga quyidagi formula yordamida aylantirildi: o'simta hajmi (sm3)=katta o'q × kichik o'q2 × 0,5. 28-kuni hayvonlar servikal dislokatsiya bilan evtanizatsiya qilindi va taloq aseptik tarzda olib tashlandi. Tajriba shunga o'xshash natijalar bilan uch marta takrorlandi.

Splenotsitlar alohida gomogenlashtirilgan taloqlardan ajratildi va darhol B16.F1, YAC-1 va WEHI{3}} hujayra maqsadlariga nisbatan sitotoksikligi uchun sinovdan o'tkazildi. Sitotoksiklik hujayra yuzasida CD107 ta'sirini aniqlash asosida, effektor hujayra degranulyatsiyasi natijasida baholandi. Splenotsitlar (105 hujayra/quduq) 96-quduqdagi U pastki mikroplastinkalardagi nishonlar bilan effektorning maqsadli (E: T) nisbati 100:1, CO2 ning 5 foizida 37 daraja boʻlgan holda birga yetishtirildi. Har bir quduqqa FITC-konjugatsiyalangan anti-CD107a va anti-CD107 b monoklonal antikorlari (25 mkl/ml) va monensin (6 mkl/ml; barchasi BD Biosciences’dan) qo‘shilgan. Hujayralar 6 soatdan keyin yig'ib olindi va FACSCanto II oqim sitometri yordamida tahlil qilindi. Bunga parallel ravishda, o'smalar kesilib, Supplda tavsiflanganidek, quyi oqim tahlillari uchun qayta ishlandi. Materiallar va uslublar.

cistanche ekstrakti ta'siri: shish va saratonga qarshi