Cistanche Tubulosadagi pineal glikozid va ergosterol glikozid tarkibini aniqlash usulini o'rganish

Cistanche tubulosa - Ledaceae oilasining Cistanche turkumiga mansub barglari qoraqalpoq, quruq go'shtli poya. Tabiatan issiq, ta'mi shirin va sho'r, buyrak va yo'g'on ichak meridianlariga tegishli. Bu an'anaviy ta'sirga ega, masalan, buyrakni tonlash, qonni va mohiyatini oziqlantirish, ichaklarni namlash va ichak harakatini rag'batlantirish, qarishni kechiktirish. U "cho'l jenshen" nomi bilan mashhur. Xitoy Xalq Respublikasi Farmakopeyasining 2010 yil nashridan boshlab, Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight Cistanche qonuniy bazal o'simliklaridan biri sifatida qo'shildi va C. deserticola bilan birga ro'yxatga olindi.

Cistanche tubulosa asosan Shinjon-Uygʻur avtonom rayonidagi Tarim havzasining janubiy chekkasi boʻylab hosil boʻlib, Tamarix oʻsimliklarining ildizlarida parazit holda oʻsadi. Bu hozirgi vaqtda Xitoy bozorida Cistanche tubulosa dorivor materiallarining asosiy manbai bo'lib, yillik ishlab chiqarish 60% dan ortiqni tashkil qiladi. Yovvoyi resurslarning ortib borayotgan tanqisligi tufayli u Milliy kalit himoyalangan yovvoyi o'simliklar ro'yxatiga (2021 yil nashri) ikkinchi darajali himoyalangan o'simlik sifatida kiritilgan.

Zamonaviy farmakologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, Cistanche tubulosa ning asosiy farmakologik moddasi feniletanoid glikozidlarga (PhGs) asoslangan bo'lib, ular orasida Echinacoside (C35H46O20) va Acteosid/verbascoside (C29H36O15) eng yuqori tarkibga ega va eng kuchli faollikka ega va C tubicimsi sifat nazorati uchun aniq belgilab qo'yilgan. Xitoy farmakopeyasining materiallari. Xitoy farmakopeyasining 2020 yilgi nashriga ko'ra, Cistanche tubulosa quritilgan mahsulotidagi echinakrozid va verbaskozidning umumiy miqdori 1,5% dan kam bo'lmasligi kerak, bu cho'l Cistanche tubulosa uchun 0,30% standartidan ancha yuqori. Shu sababli, Cistanche tubulosa dorivor materiallari sifatini nazorat qilish, kelib chiqishini baholash, ekishni optimallashtirish va mahsulot ishlab chiqarish uchun aniq, samarali va takrorlanadigan tarkibni aniqlash usullarini o'rnatish katta ahamiyatga ega.

Echinoside, Cistanche tubulosa asosiy kimyoviy komponenti

Cistanche tubulosa ning asosiy kimyoviy komponenti akteozid

Qarag'ay xrizantema glikozidi va ergotamin glikozidining kimyoviy xususiyatlari

kimyoviy tuzilishi

Qarag'ay glikozidi va ergosterol glikozidlari ikkalasi ham feniletanoid glikozidlar bo'lib, ularning asosiy skeleti glikozidlar bilan shakar guruhlari (odatda glyukoza va ramnoz) bilan bog'langan feniletanoid yadrosidan iborat va kofeol gidrofenoksidlar kabi almashtirilgan guruhlar kiradi. Ekinakozidning molekulyar formulasi C35H46O20, nisbiy molekulyar og'irligi 786,72. Uning tuzilishida bitta kofeol guruhi, bitta glyukoza guruhi va bitta ramnoz guruhi mavjud. Ergosterol glikozidining molekulyar formulasi (verbaskozid) C29H36O15, nisbiy molekulyar og'irligi 624,59. Uning tuzilishi pinealozidga o'xshaydi, ammo unda ramnoz va ba'zi kofeol o'rnini bosuvchi moddalar yo'q. Ikkalasi ham metanol, etanol va suv kabi qutbli erituvchilarda oson eriydi va ultrabinafsha mintaqada xarakterli yutilishga ega (maksimal yutilish to'lqin uzunligi taxminan 330 nm), bu HPLC-UVni aniqlash uchun nazariy asosni ta'minlaydi.

Farmakologik faoliyat

Qarag'ay xrizantema glikozidi va ergosterol glikozidi keng farmakologik ta'sirga ega: (1) antioksidant ta'sir - superoksid anionlarini (O2 · -), gidroksil radikallarini (· OH) va vodorod periksni (H2O2) tozalash, Nrf2/ARE signalizatsiya yo'lini faollashtirish va GSH kabi antigulyantlar faolligini oshirish. Px; (2) Neyroprotektiv ta'sir - Altsgeymer kasalligi va Parkinson kasalligi modellariga yaxshilovchi ta'sir ko'rsatadigan GDNF kabi neyrotrofik omillarning ifodasini rag'batlantirish; (3) Gormonga o'xshash ta'sirlar - testosteron sintezi bilan bog'liq fermentlarning ifodasini rag'batlantirish va reproduktiv funktsiyani yaxshilash; (4) Gepatoprotektiv ta'sir - alkogolli jigar shikastlanishini va oksidlovchi stressni kamaytirish; (5) Antitumor ta'siri - mitoxondriyal bog'liq yo'llar orqali qizilo'ngach saraton hujayralarining apoptozini qo'zg'atadi. Yuqoridagi tadbirlar ularni Cistanche tubulosa sifatini baholash uchun almashtirib bo'lmaydigan ko'rsatkich komponentlariga aylantiradi.

Cistanche-antitumorning ta'siri

Tarkibni aniqlash usullariga umumiy nuqtai

Hozirgi vaqtda Cistanche tubulosadagi pineal glikozid va ergosterol glikozidning tarkibini aniqlash usullari asosan yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC), ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (UPLC), yupqa qatlamli xromatografiya tasvirini raqamlashtirish (TLC ImageJ) va suyuqlik xromatografiyasi (MSS-MS) ni o'z ichiga oladi. Ular orasida HPLC usuli Xitoy farmakopeyasi tomonidan yuqori uskunaning mashhurligi, oddiy ishlashi va yaxshi takrorlanishi tufayli qonuniy aniqlash usuli sifatida qabul qilingan va hozirda adabiyotda eng keng tarqalgan usul hisoblanadi. Quyida HPLC usuli tizimini yaratish va optimallashtirish jarayoniga e'tibor qaratilgan.

Turli xil kelib chiqishi va xostlarining tarkibga ta'siri

Kelib chiqishidagi farqlar

Ko'plab tadqiqotlar turli hududlardan Cistanche tubulosa tarkibidagi echinakrozid va ergosterol tarkibida sezilarli farqlar mavjudligini doimiy ravishda ko'rsatdi. Shinjonni misol qilib oladigan bo'lsak, Xetian Moyu tumani, Qashqar Jiashi tumani va Alar shahri kabi joylardan olingan namunalardagi ikkita komponent tarkibidagi farq 2-5 barobarga yetishi mumkin. Umuman olganda, Xotan hududida (ayniqsa, Moyu tumani, Minfeng okrugi va Yutian okrugida) ishlab chiqarilgan Cistanche tubulosadagi feniletanoid glikozidlarning umumiy miqdori nisbatan yuqori va ba'zi yuqori sifatli namunalardagi feniletanoid glikozidlarning miqdori 2,5% dan 5,0% gacha bo'lishi mumkin.

Turli xil xost ta'siri

Cistanche tubulosa Tamarix turkumidagi turli oʻsimliklarning ildizlarida parazitlik qiladi, xoʻjayin turi esa dorivor materiallar sifatiga sezilarli taʼsir koʻrsatadi. Chen va boshqalar. (2005) T. talama kanensisda parazitlangan namunalardagi feniletanol kislotasi miqdori T. ramosissimada parazitlanganidan odatda yuqori ekanligini maʼlum qilgan. Bundan tashqari, yovvoyi va madaniy mahsulotlar o'rtasida farqlar mavjud. Umuman olganda, yovvoyi mahsulotlardagi ikkita komponentning tarkibi etishtirilgan mahsulotlarga qaraganda yuqori, ammo yuqori sifatli etishtirilgan mahsulotlar ekish sharoitlarini optimallashtirish orqali ham yuqori darajalarga erishishi mumkin.

Texnik xususiyatlar va qismlardagi farqlar

Cistanche tubulosa spetsifikatsiyalari (diametri, uzunligi) va dorivor qismlari ham uning tarkibiga ta'sir qiladi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, yupqa go'shtli poyalarda echinacoside va ergosterol miqdori ko'pincha qalin poyalarga qaraganda ko'proq bo'ladi; Poyaning yuqori qismidagi tarkib (inflorescence oxiri yaqinida) odatda asosdagidan yuqori bo'ladi. Ushbu qoida dorivor o'tlarni yig'ish va qayta ishlash jarayonida qismlarni tanlash uchun ma'lumotnoma beradi.

Boshqa o'lchov usullari bilan tanishish

Ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (UPLC)

Cistanche tubulosa tajribasi

Cistanche Tubulosa ekstrakti tabiiy qo'shimcha kukunini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil maʼlumot soʻrang】 Elektron pochta:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / WeChat: 18599088692

UPLC usuli kichikroq zarracha o'lchamiga ega (masalan, Waters HSS T3, 1,8 m, 100 × 2,1 mm), oqim tezligi 0,3 ml / min, in'ektsiya hajmi atigi 1 mk L va tahlil qilish vaqtini 10-15 minutgacha qisqartirish mumkin bo'lgan xromatografiya ustunidan foydalanadi (yaxshiroq ajratish talabi bilan HP3-00t), va sezgirlik. Liang Jiansong va boshqalar. (2021) oltita feniletanolik glikozidni bir vaqtning o'zida aniqlash uchun UPLC usulini yaratdi, bu keng chiziqli diapazonga va yuqori tiklanish tezligiga ega va katta miqdordagi namunalarni tezkor tekshirish uchun mos keladi.

LC-MS/MS usuli

Suyuq xromatografiya tandem massa spektrometriya usuli juda yuqori sezuvchanlikka ega va bir vaqtning o'zida Cistanche tubulosa tarkibidagi o'nlab komponentlarni, jumladan, echinacoside, ergosterol glikozid, izoergosterol glikozid va guanozin A ni aniqlashi mumkin. U metabolomikani tadqiq qilish va har tomonlama sifatni baholash uchun javob beradi. RPLC-HILIC estrodiol texnologiyasi hatto bir vaqtning o'zida 23 ta qutbli va qutbsiz komponentlarni o'lchashi mumkin, bu 5 darajali tarkib oralig'ini qamrab oladi.

Onlayn bosimli erituvchi mikroekstraksiya girdobili oqim xromatografiyasi HPLC usuli

Ushbu usul namunani olish, tozalash va xromatografik ajratishni onlayn tarzda birlashtiradi, bu organik erituvchilar va namunadan foydalanishni sezilarli darajada kamaytiradi. Qimmatbaho namunalarni tezkor tahlil qilish uchun mos ravishda uchta feniletanol glikozidlarining LOQlari mos ravishda 0,50 mg / L (echinacoside), 0,25 mg / L (ergosterol glikozid) va 0,38 mg / L (izoergosterol glikozid) dir.

TLC tasvirni raqamlashtirish usuli

cistanche ekstrakti kukuni

ImageJ dasturiy ta'minoti asosida yupqa qatlamli xromatografiya nuqtalarining kulrang qiymatlari bo'yicha miqdoriy tahlil o'tkazildi. Pineal xrizantema glikozidi, guanozin A, ergosterol glikozid va izoergosterol glikozidning korrelyatsiya koeffitsientlari r mos ravishda 0,9974, 0,9931, 0,9923 va 0,9890 bo'lib, ular HPLC usuliga mos keladi. Ushbu usul arzon, ishlatish uchun qulay va boshlang'ich bo'linmalarda va dalada tezkor skrining uchun javob beradi.

munozara

Xromatografik sharoitlarni optimallashtirishning asosiy masalalari

Mobil fazani tanlash HPLC usullarini ishlab chiqishda hal qiluvchi ahamiyatga ega. Adabiyotlarni taqqoslash shuni ko'rsatadiki: (1) suv asetonitril tizimi feniletanol glikozid cho'qqisining qoldiqlarini keltirib chiqarishga moyil bo'lib, 0,1% formik kislota yoki 1% sirka kislotasi qo'shilishi cho'qqi shaklini sezilarli darajada yaxshilashi mumkin; (2) Metanol asetonitril sirka kislotasi uchlik tizimining ajratish samaradorligi sof metanol yoki sof asetonitril ikkilik tizimidan ustundir; (3) 330-334 nm to'lqin uzunligini aniqlash tanlovi ikkala komponentning yutilish intensivligini muvozanatlashi mumkin, 334 nm da biroz yuqoriroq javob va 330 nm da ergosteroldan kamroq shovqin. Ustun harorati ushlab turish vaqtiga ta'sir qiladi, lekin ajralish darajasini sezilarli darajada o'zgartirmaydi, o'rtacha 30-35 daraja oralig'ida.

Ekstraksiya usullarini optimallashtirish

Erituvchi konsentratsiyasi, qattiq-suyuqlik nisbati, ultratovush harorati va vaqt ekstraktsiya samaradorligiga ta'sir qiladi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki: (1) 50% ~ 80% metanol yoki etanol ikkala glikozid komponentini ham samarali ravishda ajratib olishi mumkin, bir oz yuqori ekstraksiya darajasi 60% ~ 80% etanol; (2) Qattiq-suyuqlik nisbati 1:30~1:50 (g/mL) toʻliq ekstraksiya qilish uchun etarli; (3) Optimal kombinatsiya ultratovush harorati 50-60 daraja va vaqt 40 minut; (4) Ultrasonik ekstraktsiya reflyuks ekstraktsiyasidan ustundir, chunki ikkinchisi osongina termosensitiv feniletanol glikozidlarining degradatsiyasiga olib kelishi mumkin.

Farmakopeya standartlarining mantiqiyligini muhokama qilish

Amaldagi farmakopeyada Cistanche tubulosadagi paeoniflorin va ergosterol glikozidlarining umumiy miqdori 1,5% dan ko'p yoki teng bo'lishi kerakligi nazarda tutilgan. Ushbu standart nisbatan yumshoq - Shinjondagi yuqori sifatli namunalar odatda 3% dan 5% gacha, faqat bir nechta past sifatli namunalar pastki chegaraga yaqinlashadi. Ba'zi tadqiqotchilar dorivor materiallar sifatini yaxshiroq ta'minlash uchun standartni 2,0% dan 2,5% gacha oshirishni taklif qilishadi. Bundan tashqari, farmakopeya indikator sifatida faqat ikkita komponentdan foydalanadi, Cistanche tubulosa esa guanozin A, izoergosterol glikozidlari va hesperidin kabi turli xil faol feniletanol glikozidlarini ham o'z ichiga oladi. Ko'p ko'rsatkichli kompleks baholash kelajakdagi rivojlanish yo'nalishidir.

Usul tanlash bo'yicha takliflar

Umumiy dorivor materiallarning sifatini tekshirish va kundalik ishlab chiqarish sifatini nazorat qilish uchun HPLC farmakopeya usulidan foydalanish tavsiya etiladi. Usul etuk, uskunalar talablari past va natijalar juda taqqoslangan. Keng miqyosli skrining yoki qimmatbaho namuna tahlili uchun UPLC yoki onlayn PLME-TFC-HPLC usullari samaraliroq. LC-MS/MS tasniflash usuli sifatni chuqur baholash va navlarni identifikatsiyalash uchun afzal qilingan usul hisoblanadi. TLC tasvir usuli quyi darajadagi tezkor dastlabki skrining uchun javob beradi. Tadqiqotchilar haqiqiy ehtiyojlar asosida oqilona tanlov qilishlari kerak.

cistanche ekstrakti kukuni

Xulosa

Ushbu maqola Cistanche tubulosadagi echinacoside va ergosterol tarkibini aniqlash uchun HPLC usulini muntazam ravishda ishlab chiqadi. Ushbu usul ko'p o'lchovli metodologiya bilan tasdiqlangan va keng chiziqli diapazon (r 0,999 dan katta yoki teng), yaxshi aniqlik (RSD) xususiyatlariga ega.<3%), high accuracy (recovery rate 95.7%~100.7%), and easy operation, fully meeting the quality control requirements of the Chinese Pharmacopoeia for Cistanche tubulosa.

Keng qamrovli tahlil shuni ko'rsatadiki: (1) Cistanche tubulosadagi pineal glikozidning tarkibi odatda ergosterol glikozididan 3-8 baravar ko'pdir va ikkalasining umumiy miqdori kelib chiqish joyiga, xostga, hajmiga va joylashishiga qarab o'zgaradi; (2) Shinjonning Xotan shahridan yuqori sifatli namunalardagi feniletanol kislotasining umumiy miqdori farmakopeya standartining 2-3 barobariga yoki undan ko'piga yetishi mumkin; (3) UPLC va LC-MS/MS kabi yangi texnologiyalar ko'p komponentli sinxron aniqlash va chuqur sifatni baholash uchun kuchli vositalarni taqdim etadi.

Kelajakdagi tadqiqotlar quyidagilarga qaratilishi kerak: (1) ko'proq feniletanoid glikozidlarni qamrab oluvchi ko'p indeksli sifatni baholash tizimini yaratish; (2) ekish muhiti, xostni yig'ish davri va qayta ishlash usulining tarkibga har tomonlama ta'sirini chuqur o'rganish; (3) Guanhua Cistanche butun sanoat zanjirini dorivor o'tlardan sog'lom oziq-ovqat va kosmetika xom ashyolarigacha standartlashtirishni rag'batlantirish.

Ma'lumotnomalar

[1] Guanhua Roucong Kui [J] da echinacoside va ergotamin tarkibini aniqlash uchun sho'rva moxi HPLC usuli. Xitoy farmatsevti, 2009, 12 (8): 1061-1063

[2] Chen M, Xiao SP, Cui GH va boshqalar. Cistanche tubulosa [J] o'tlarida echinakozid va akteozidni aniqlash. Xitoyning Xitoy Materia Medica jurnali, 2005, 30 (11): 839-841.

[3] Baoshan, Ju Aixua, Syao Zhibin. Guanhua Roucong Kui [J] da echinacoside va ergotamin tarkibini aniqlash. Xitoy tibbiyoti sharhi, 2017, 23 (19): 39-40, 44

[4] Liang Jiansong, Xue Cuili, Vu Menghua va boshqalar UPLC tarkibini aniqlash va Roucong Kui va Shacong Kui [J] da oltita feniletanoid glikozidni kimyometrik baholash. Farmatsevtika tahlillari jurnali, 2021, 41 (2): 226-235

[5] Xitoy Xalq Respublikasi Farmakopeya qoʻmitasi Xitoy Xalq Respublikasi Farmakopeyasi (2020 yil nashri, 1-jild) [S]. Pekin: Xitoy tibbiyot fanlari va texnologiyalari nashriyoti, 2020: 148-149

[6] Chjan Leihong, Du Niansheng, Vang Qing va boshqalar Roucongkui umumiy glikozidlar kapsulalarida echinoxlorin tarkibini HPLC [J] orqali aniqlash. Northwest Pharmaceutical Journal, 2002, 17 (1): 3-4

[7] Ju Aihua, Ao Geriletu, Chjou Kay Ichki Mo'g'ulistondan tuzlangan go'sht va kungaboqar tarkibidagi echinacoside va ergotamin miqdorini aniqlash [J]. Xitoy an'anaviy xitoy tibbiyoti jurnali, 2011, 26 (1): 178-180

[8] Song Peng, Tu Pengfey. An'anaviy xitoy tibbiyotining sifatini nazorat qilish va baholash bo'yicha tadqiqot taraqqiyoti Roucongkui [J]. Shimoliy dorixona, 2011, 8 (2): 45-47

[9] Guo Dingyu, Xiao Jinglei. Roucongkui [J] dagi funktsional komponentlarning sifat nazorati va biologik faolligini tadqiq etishdagi taraqqiyot. Jilin an'anaviy xitoy tabobati, 2023, 43 (7): 856-860

[10] Lu Yinghui, Pi Venmin, Chjan Yue va boshqalar Roucong Kui va Guanhua Roucong Kui [J] qiyosiy oʻrganish va bozor holatini tahlil qilish. Zamonaviy Xitoy tibbiyoti, 2019, 21 (8): 1105-1110

[11] Roucongkui (Guanhua Roucongkui) [S] formulasi granulalari uchun Milliy Farmakopeya Qo'mitasi standarti. Pekin: Xitoy tibbiyot fanlari va texnologiyalari matbuoti, 2021 yil

[12] Fu C, Li J, Aipire A va boshqalar. Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlari mitoxondriyaga bog'liq yo'l [J] orqali Eca-109 hujayralarida apoptozni keltirib chiqaradi. Onkologiya xatlari, 2019, 17 (2): 1883-1892.

[13] Xu Mingjun, Xitoyning turli mintaqalaridan cho'l go'shti kungaboqarini kutish sifatini tahlil qilish va har tomonlama baholash [J]. Oziq-ovqat sanoati fanlari va texnologiyasi, 2022, 43 (15): 312-320

[14] Opa-singil Hao, Chen Sumei, Yan Dongxay va boshqalar. Roucongkui-ni kosmetikada qo'llash bo'yicha tadqiqot ishlari [J]. Daily Chemical Science jurnali, 2021, 44 (9): 28-33

[15] Xou Ji, Vang Bo, Li Guangxuy va boshqalar. Roucongkui [J] ning tadqiqot taraqqiyoti va sanoatlashtirish holati. Shandong qishloq xo‘jaligi fanlari, 2020, 52 (12): 147-154