Sichqonlarda sinergetik immunitet va SARS-CoV ning boshoq oqsili va boshqa tarkibiy oqsillarini kodlovchi DNK vaktsinalari bilan birgalikda immunizatsiya orqali himoya qilish-2

Annotatsiya:Og'ir o'tkir respirator sindromli koronavirus 2 (SARS CoV-2) ning yangi turlarining paydo bo'lishi butun dunyo bo'ylab takrorlanadigan infektsiya epidemiyalarini keltirib chiqardi. Bu yuqori mutatsiyaga uchragan variantlar 2019-yilgi koronavirus kasalligi (COVID-19) vaktsinalarining samaradorligini pasaytiradi, ular faqat asl virusning spike (S) oqsilini nishonga olishga mo‘ljallangan. SARS-CoV-2 S dan tashqari, boshqa strukturaviy oqsillarning (nukleokapsid, N; konvert, E; membrana, M) vaktsinaning maqsadli antijeni sifatidagi immunoprotektiv salohiyati haligacha noaniq va tadqiqotga loyiq. Ushbu tadqiqotda to'rtta SARS-CoV-2 tarkibiy oqsilini (pS, pN, pE va pM) kodlovchi sintetik DNK vaktsinalari ishlab chiqildi va sichqonlar mushak ichiga in'ektsiya va elektroporatsiya orqali uch dozada immunizatsiya qilindi. Shunisi e'tiborga loyiqki, S va N oqsillarini ifodalovchi ikkita DNK vaktsinasi bilan birgalikda immunizatsiya sichqonlardagi S proteiniga qaraganda yuqori neytrallashtiruvchi antikorlarni keltirib chiqardi va SARS-CoV{10}} virus yukini kamaytirishda samaraliroq bo'ldi. Bundan tashqari, pN yoki pE + pM bilan birgalikda pS immunizatsiyasi uchta emlashdan so'ng yuqori S proteiniga xos hujayrali immunitetni keltirib chiqardi va faqat pS dan keyingi sinovdan ko'ra engilroq histopatologik o'zgarishlarni keltirib chiqardi. SARS-CoV-2 ning konservalangan strukturaviy oqsillari, shu jumladan N/E/M oqsillarining roli ularni mRNK vaktsinalari kabi vaktsinalarni loyihalashda qo‘llashda qo‘shimcha ravishda o‘rganilishi kerak.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Kalit so‘zlar: COVID-19; SARS-CoV-2}}; birgalikda immunizatsiya; DNK vaktsinasi; boshoq oqsili; strukturaviy protein

1.Kirish

Og'ir o'tkir respirator sindrom koronavirus 2 (SARS-CoV-2) butun dunyo bo'ylab millionlab infektsiyalar va o'limga sabab bo'lgan va inson salomatligi va global iqtisodiyotga xavf soladigan 2019 yilgi koronavirus kasalligining (COVID-19) sababidir. . Samarali terapevtik yondashuvlar hali ham mavjud bo'lmasa-da, ular CAR-T hujayra terapiyasi va nanotexnologiyani qo'llashni o'z ichiga olgan holda tez rivojlandi [1,2]. Emlash pandemiyani nazorat qilishning samarali usuli hisoblanadi va bir nechta vaktsinalar turli tartibga soluvchi sog'liqni saqlash organlari tomonidan foydalanish uchun tasdiqlangan [3,4]. Koronavirus genomi to'rtta asosiy strukturaviy oqsilni, ya'ni virion yig'ilishi va xostning immun javobini bostirish uchun mas'ul bo'lgan boshoq (S), nukleokapsid (N), membrana (M) va konvert (E) oqsillarini kodlaydi [5] ]. S oqsili 1273 ta aminokislota qoldig'idan iborat bo'lib, ikkita bo'linmani o'z ichiga oladi, S1 va S2. Bu virusning kirib kelishiga vositachilik qiladi va koronavirus vaktsinalarini ishlab chiqishda asosiy maqsad hisoblanadi [6-11]. Biroq, SARS-CoV-2 S oqsili mutatsiya chastotasi yuqori. RNK virusi bo'lgan SARS-CoV-2da mutatsiya uzluksiz va muqarrar bo'lishi ajablanarli emas. 2020-yil sentabridan beri SARS-CoV-2 tashvishining beshta varianti (VOC) paydo boʻldi, jumladan B.1.1.7 (Buyuk Britaniya, Alpha), B.1.351 (Janubiy Afrika, Beta), P.1 (Braziliya, Gamma), B.1.617.2 (Hindiston, Delta) va B.1.1.529 (Janubiy Afrika, Omicron) (Andreano va Rappuoli, 2021; Gupta, 2021). Ularning barchasida boshoq oqsilida bir nechta mutatsiyalar mavjud [12]. Bu variantlar mavjud COVID{38}} vaktsinalarining samaradorligiga tahdid soladi, ular faqat spike oqsiliga mo‘ljallangan.

SARS-CoV-2 ning N oqsili virusli RNK bilan oʻz yadrosidagi 140-aminokislota uzunlikdagi RNK-bogʻlovchi domen orqali “ipdagi munchoq” usulida bogʻlanadi. U koronaviruslar orasida yuqori darajada saqlanib qolgan, SARS-CoV bilan ~ 90% ketma-ketlik o'xshashligini baham ko'radi va u virion ichidagi yagona tarkibiy oqsildir [13]. Bundan tashqari, u virusli RNKni ribonukleo kapsid kompleksiga qadoqlashda muhim rol o'ynaydi va virusli RNK replikatsiyasi, virion birikmasi va xost hujayralaridan ajralib chiqishi uchun zarurdir [14]. Koronaviruslardagi N oqsilining yuqori ketma-ketlik o'xshashligiga asoslanib, uni o'zaro himoya vaktsina maqsadi sifatida taklif qilish mumkin. E va M oqsillarini ifodalovchi ikkita DNK vaktsinasi bilan birgalikda immunizatsiya SARS-CoV-2 dan qisman himoya qilishini avvalroq aniqlagan edik va bu usul vaktsinani ishlab chiqishda e'tiborga olinishi lozim [15]. JSSTning landshaft hujjatiga ko‘ra, SARS-CoV-2 vaktsinalariga nomzodlar uchun odatda ettita strategiya mavjud bo‘lib, ularni yana uchta toifaga bo‘lish mumkin: birinchidan, oqsilga asoslangan vaksinalar, jumladan, virusga o‘xshash faolsizlantirilgan vaksinalar. zarralar va oqsil subunit vaktsinalari; ikkinchidan, genga asoslangan vaktsinalar, jumladan, virus-vektorli vaktsinalar, DNK vaktsinalari va mRNK vaktsinalari; uchinchidan, oqsilga asoslangan va genga asoslangan yondashuvlarning kombinatsiyasi, masalan, jonli zaiflashtirilgan virusli vaktsinalar. DNK texnologiyalari, yangi genga asoslangan vaktsina strategiyasi sifatida, klinikadan oldingi sinov paytida bir nechta vaktsina nomzodlari va strategiyalarini tezda solishtirishi mumkin [16,17]. Nazariy jihatdan deyarli barcha virusli oqsillar potentsial immunogenlar va vaktsina maqsadlari hisoblanadi. Biroq, bizning eng yaxshi ma'lumotlarimizga ko'ra, sintetik DNK vaktsinalarining SARS-CoV-2 S oqsillari va boshqa strukturaviy oqsillarni kodlashda immunogenligi va himoya potentsiali hali tizimli ravishda xabar qilinmagan. SARS-CoV-2 S, N, E va M l oqsillarini ifodalovchi to‘rtta DNK vaktsinasi S ning boshqa tarkibiy oqsillar bilan birgalikda immunologik ta’sirini o‘rganish uchun sichqonlarda immunogenligi va himoya samaradorligi bo‘yicha baholandi.

2. Materiallar va usullar

2.1. Hujayralar

Huh7.5 hujayralari va inson embrion buyragi 293T hujayralari tadqiqot davomida 5% CO2 da namlangan atmosferada 37 ◦C da yetishtirildi. Hujayralar DMEM muhitida (HyClone, Logan, UT, AQSh), 10% FBS (GEMINI Co., Shanxay, Xitoy) va 1% penitsillin-streptomitsin (Gibco, Nyu-York, NY, AQSh) bilan to'ldirildi. Barcha hujayra liniyalari mikoplazma bilan ifloslanish uchun salbiy tasdiqlandi.

2.2. SARS-CoV-2 S/N/E/M kodlovchi DNK vaksinalarini yaratish

N-terminal Kozak ketma-ketligini (GCCACC) va undan keyin boshlash kodonini (ATG) o'z ichiga olgan SARS-CoV-2 S/N oqsilini kodlovchi geni sutemizuvchilar uchun optimallashtirilgan kodon (GenScript Co., Nankin) yordamida sintez qilindi. , Xitoy). Keyin u EcoRI va XbaI hazm qilish orqali pcDNA3.1 (+) ifoda vektoriga klonlandi va pS/pN (DNK vaktsinalari) deb nomlandi (1A-rasm). pE/PM oqsili avval tasvirlanganidek tuzilgan va aniqlangan [15]. Vaktsinalar endotoksinsiz Maxiprep to'plamlari (Qiagen, Pekin, Xitoy) yordamida tayyorlangan va ketma-ketliklar Sanger DNK sekvensiyasi yordamida tasdiqlangan. S/N oqsilining ifodasi western blot va anti-S (Sino Biological, Pekin, Xitoy)/anti-N antikorlari yordamida 1:1000 nisbatda suyultirilgan holda tasdiqlangan. Bu tajribalar ilgari ta'riflanganidek o'tkazildi [15,18].

1-rasm. Rekombinant DNKga asoslangan SARS-CoV-2 S/N oqsil vaktsina konstruksiyalarining dizayni va ifodasi. (A) SARS-CoV-2 spike (PS), nukleokapsid (pN), konvert (pE) va/yoki membrana (PM) oqsillarini kodlovchi rekombinant DNK asosidagi vaktsinalarning sxematik diagrammasi. (B) DNK vaktsinalaridagi maqsadli oqsil ifodasi pS/pN/pE/pM plazmidlari bilan transfektsiyalangan 293T hujayralarining western blot tahlili orqali tasdiqlangan.

2.3. Immunizatsiya va qiyinchilik

Ayol BALB/c sichqonlari (Charlz River Laboratories, Frantsiya) 6 xaftaligida Milliy Kasbiy salomatlik va zaharlarni nazorat qilish institutida 21 ◦C haroratda va namlik bilan boshqariladigan muhitda 12 soat yorug'lik / qorong'u davrlarda joylashtirilgan. Shu bilan birga, oziq-ovqat va suv ad libitum bilan ta'minlangan va barcha hayvonlar tajribalari Xitoy Kasalliklarni nazorat qilish va oldini olish markazining (Xitoy CDC) Hayvonlar tajribalari etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Tadqiqot tegishli axloqiy qoidalarga muvofiq amalga oshirildi.

Sichqonlar tasodifiy besh guruhga bo'lingan va faqat pS/pN bilan immunizatsiya qilingan yoki mushak ichiga in'ektsiya va elektroporatsiya (35 mg/50) orqali 0, 21 va 42-kunlarda pS + pN yoki pS + pE + PM bilan birgalikda immunizatsiya qilingan. ml) (2-rasm) [19,20]. Qisqacha aytganda, DNK vaktsinalari tibialis anterior (TA) mushaklariga AOK qilingan va darhol ignalari bilan 5 mm-lik ikki ignali elektrod (ECM830; BTX) yordamida elektr toki bilan impuls qilingan. Sichqonlardan olingan sarumlar gumoral immun javob tahlili uchun to'plangan va sichqon taloqlari hujayra immun javobini o'lchash uchun qayta ishlangan (2-rasm).

2-rasm. Emlash sxemasi va SARS-CoV-2 muammosi. Emlashning vaqt kursi, qiyinchilik va qon/to'qima namunalari. BALB/C sichqonlari tasodifiy ravishda guruhlarga bo'lingan.

SARS-CoV-2 sinovlari yuqorida tavsiflanganidek o'tkazildi [15,21]. Qisqacha aytganda, sichqonlar behushlik qilindi va keyin umumiy hajmi 45 mkL bo'lgan 2,5 × 108 PFU Ad5-hACE2 bilan intranazal tarzda o'tkazildi. Transduksiyadan besh kun o'tgach, sichqonlar behushlik qilindi va keyin intranazal 1 × 105 TCID50 SARS-CoV-2 (Wuhan/IVDC HB-02/2019) bilan umumiy hajmi 50 mkl sho'r suv bilan sinovdan o'tkazildi. bufer. Sichqoncha modellarida jonli SARS-CoV-2 bilan barcha ishlar Hayvonlar uchun bioxavfsizlik darajasi 3 (ABSL-3) laboratoriyalarida amalga oshirildi.

2.4. Ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili

Fermentga bog'liq immunosorbent tahlillari (ELISA) avvalroq ta'riflanganidek o'tkazildi [15]. Qisqacha aytganda, karbonat tamponida (0.1 M, pH 9,6) suyultirilgan S (Sino Biological'dan sotib olingan)/N oqsillari (Song'dan sovg'a) 96-quduq EIA/RIA plitalari (Thermo) ustiga qoplangan. Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSH) kechasi 4 ◦C da. Plitalar 2 soat davomida 37 ◦C da PBSda 200 µL 10% echki zardobi bilan bloklandi, so'ngra PBST bilan besh marta yuvildi. Keyin, PBSda 2% echki zardobida ketma-ket suyultirilgan sarum namunalari qo'shildi va 2 soat davomida 37 ◦C da inkubatsiya qilindi, so'ngra PBST bilan besh marta yuviladi. HRP-konjugatsiyalangan echki sichqonchaga qarshi IgG Ab (1:5000) 37 ◦C da 1 soat davomida qo'shildi. Har bir quduqqa jami 100 µL TMB substrati qo‘shildi va 50 µL 2M H2SO4 bilan so‘ndiriladi. Absorbans SPECTR Ostar Nano (BIO-GENE, Gonkong, Xitoy) yordamida 450 nm to'lqin uzunligida o'qildi.

cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.5. Pseudovirus infektsiyasi va neytrallash tajribalari

Pseudovirus neytrallash tahlili ilgari tasvirlanganidek amalga oshirildi [21,22]. Ajdodlar virusi S oqsilini ifodalovchi plazmid ilgari qurilgan [22]. Omicron varianti SARS-CoV-2 spike protein geni (GISAID: EPI_ISL_6590782.2) sintez qilindi (Vazyme Biotech Co., Ltd. sovg'asi, Nankin, Xitoy) sutemizuvchilar uchun optimallashtirilgan kodon yordamida va avval aytib o'tilganidek, pcDNA3.1 vektoriga klonlanadi [22]. Qisqacha aytganda, lusiferaza muxbirini ifodalovchi plazmidlar va S oqsilini ifodalovchi plazmidlar X-treme GENE HP DNK transfeksiya reagenti yordamida HEK 293T hujayralariga birgalikda transfektsiya qilindi. Hujayra madaniyati transfeksiyadan 6 soat o'tgach yangilandi va psevdovirus o'z ichiga olgan supernatant 48 soatdan keyin yig'ib olindi va -70 ◦C da saqlanadi. Psevdovirusni zararsizlantirish tahlilida teng sarum-virus aralashmasi psevdovirus o'z ichiga olgan supernatantning 37 hajmida inkubatsiya qilindi va keyin suyultirilgan sarumga qo'shildi. ◦C 1 soat davomida. Keyin Huh7.5 hujayra madaniyat muhiti 100 µL zardob-virus aralashmasi bilan almashtirildi va 37 ◦C da 12 soat davomida inkubatsiya qilindi. Faqat SARS-CoV-2 psevdoviruslari bilan yetishtirilgan hujayralar parallel ravishda ishga tushirildi. Keyin ommaviy axborot vositalari DMEM (2% FBS) bilan almashtirildi va inkubatsiya 37 ◦C da 48 soat davomida inkubatsiya qilindi. Keyin, lusiferaza signali Bright-Glo firefly lusiferaza to'plami (Promega) yordamida o'lchandi.

2.6. SARS-CoV-2 Neytralizatsiya tahlili

Ushbu tajribada SARS-CoV-2 (Wuhan/IVDC-HB-02/2019) ishlatilgan. Qisqacha aytganda, sarumlar 1:10 boshlang'ich suyultirishdan ikki marta suyultirildi, teng hajmdagi (10-15 pfu/quduq) jonli SARS-CoV-2 bilan aralashtirildi va 37 ◦C da 1 soat davomida inkubatsiya qilindi, shundan so'ng ular urug'langan Vero hujayralariga qo'shildi. 37 ◦C da 48 soat davomida inkubatsiyadan so'ng, sitopatik ta'sir (CPE) kuzatildi va nuklein kislota ekstraktsiyasi va real vaqtda floresan teskari transkripsiyali PCR (RT-PCR) uchun 100 µL madaniyat supernatant yig'ildi. O'rtacha neytrallash dozasi (ND50) Reed-Munch usuli [15] yordamida hisoblab chiqilgan.

2.7. IFN - ELISpot tahlili

10 ta aminokislota bilan ketma-ket 15-mers sifatida butun S/N/E/M oqsilini qamrab oluvchi peptid hovuzlari Scilight Biotechnology, LLC tomonidan sintez qilingan. Har bir flakonda peptid hovuzidagi har bir tozalangan peptiddan taxminan 2,5 mg mavjud edi. Tajriba yuqorida tavsiflanganidek o'tkazildi [18]. Qisqacha 96-quduq plitalari (BD ELISPOT Set, AQSH) anti-IFN tutilishiga qarshi Ab bilan qoplangan va kechasi 4 ◦C da inkubatsiya qilingan. Plitalar uch marta yuvilgandan keyin to'liq madaniyat muhiti bilan to'silgan. Splenotsitlar sichqonlar 35-kunlarda evtanizatsiya qilinganidan so'ng yig'ib olindi va har bir guruhdan 120 ta yangi bitta hujayrali suspenziyalar quduq uchun 5 × 106 bilan qoplangan va peptidlar qo'shilgan. Keyin plitalar 22 soat davomida 5% CO2 da 37 ◦C da inkubatsiya qilindi va ELISpot plastinka o'quvchi (Biosys, So. Pasadena, CA, AQSh) yordamida aniqlandi. Nuqta hosil qiluvchi birlik (SFU) T xujayrasi ajraladigan IFN-ni ifodalaydi.

2.8. Sichqonlarning SARS-CoVdan keyingi himoyasini baholash-2

Tajribalar avval tavsiflanganidek o'tkazildi [15,21]. Qisqacha aytganda, o'pka sichqonlar evtanizatsiya qilinganidan keyin yig'ib olindi. To'qimalarning yarmi nuklein kislota ekstraktsiyasi, real vaqtda floresan RT-PCR va TCID50 uchun ishlatilgan. Qolgan yarmi patologik baholash uchun Xitoy qishloq xo'jaligi universitetining veterinariya tibbiyoti kollejiga yuborildi.

2.9. Statistik tahlil

Bog'lanmagan t-testlari, ikki tomonlama ANOVA testlari va Dunnettning ko'p taqqoslash testi GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software LLC) yordamida amalga oshirildi. p-qiymatlari < 0.05 statistik ahamiyatga ega deb hisoblandi (* p < 0.05; ** p < 0.01; * ** p <0,001; **** p <0,0001).

3. Natijalar

3.1. DNK vaktsinalarining xarakteristikasi

E va M protein darajalari western blotting yordamida aniqlandi. Biz pS/pN/pE/pM plazmidlari bilan transfektsiyalangan HEK-293T hujayralarida SARS-CoV-2 kodlangan S/N/E/M oqsillarining ekspressiyasini anti-blot tahlili orqali o‘lchadik. -S/anti-N antikorlari va anti-6 x Uning antikori, hujayra lizatlarida. Bantlar S (140-142 kDa), N (45 kDa), E (10 kDa) va M (22-25 kDa) oqsillarining taxmin qilingan molekulyar og'irligiga yaqinlashdi (1B-rasm).

3.2. pS va/yoki pN DNK tomonidan qo'zg'atilgan mustahkam va barqaror Anti-S va/yoki anti-N IgG ishlab chiqarish

Vaktsinalar sarum BALB/c sichqonlaridan 35, 56, 96 va 120 kunlarda yig'ilgan (2-rasm). Anti S/anti-N IgG darajalari Elishay yordamida aniqlandi. pS yoki pN tomonidan qo'zg'atilgan S yoki N-maxsus IgG javobining kattaligi birinchi va ikkinchi kuchayishdan keyin sarumda oshdi. Anti-S va anti-N IgG titrlari pS + pN guruhida boshqa guruhlarga qaraganda yuqori edi; ammo farq statistik jihatdan ahamiyatli emas edi (3A, B-rasm). E/M oqsiliga xos antikor reaktsiyalari aniqlanmadi, bu avvalgi tadqiqot natijalariga mos keladi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) [15].

3-rasm. BALB/c sichqonlarida SARS-CoV-2 ga B-hujayra javoblari. (A) SARS-CoV-2 S (A) va N oqsillari (B) uchun sarum IgG bilan bog‘lovchi so‘nggi nuqta titrlari. (C) Neytrallash titrlari SARS-CoV-2 psevdotipli virus tizimi asosida aniqlandi. (D) Anti-SARS-CoV-2 neytrallash titrlari SARS-CoV-2 virusi yordamida aniqlandi. (E) SARS-CoV-2 Omicron psevdotipli virus tizimiga asoslangan neytrallash tahlili. Soxta (ko'k), pS (qizil), pS + pN (yashil), pS + pE + pM (pushti) va pN (to'q sariq) guruhlari sarumlari uchun inhibisyon nisbatlari ko'rsatilgan. Xato satrlari SEMni ifodalaydi va p-qiymatlari ikki tomonlama ANOVA va Sidakning post hoc tahlili yordamida hisoblangan, bunda * p < 0.05

3.3. pS va pN vaktsinalari bilan birgalikda immunizatsiya natijasida kelib chiqqan neytrallashtiruvchi antikorlarning yuqori darajalari

Ketma-ket suyultirilgan sarum namunalarining neytrallashtiruvchi titrlari psevdotipli SARS-CoV-2 virusi yordamida aniqlandi. Neytrallashtiruvchi antikorlarning (nAbs) eng yuqori darajalari pS + pN guruhida kuzatildi, o'zaro EC5{12}} geometrik o'rtacha titrlari 2988 (35-kuni) va 3578 (56-kun) ga yetdi (3C-rasm). Shunga o'xshash natijalar jonli virus mikroneytralizatsiyasi (MN) tahlili yordamida kuzatildi, bunda pS + pN guruhidagi nAbs darajasi 56 va 96-kunlarda S guruhidagiga qaraganda yuqori edi (p < 0.05; rasm 3D). Bundan tashqari, 56-kuni (ikkinchi kuchaytirish) pS + pN guruhidagi nAbs darajalari 35-kunga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (p <0.05; 3D-rasm).

Har bir emlash rejimining SARS-CoV-2 Omicron variantiga qarshi neytrallashtiruvchi faolligi psevdotipli platforma va sarum namunalari yordamida aniqlandi. 35 va 56-kunlarda Omicron virusiga qarshi neytrallash profili ajdodlar virusiga (3E-rasm) o'xshash bo'lib, PS + pN bilan davolash o'zaro neytrallash kuchiga ega ekanligini ko'rsatadi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

3.4. DNKga qarshi emlash natijasida kelib chiqqan T-hujayralarining javoblari

Yuqorida ta'riflanganidek, SARS-CoV-2 S/N/E/M antijenlariga qarshi T-hujayralarining javoblari, avval tavsiflanganidek, IFN-ELISpot yordamida baholandi [15]. Kutilganidek, PS + pN va pS + pE + pM rejimlari 120 kuni S proteiniga xos bo‘lgan IFN + T hujayralarining 35-kuniga qaraganda ancha yuqori darajalarini keltirib chiqardi (p < 0). 05; 4A-rasm). Bundan tashqari, 120-kuni (ikkinchi kuchaytirish) N oqsiliga xos bo'lgan IFN + T hujayralari soni pS + pN guruhidagi 35-kunga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (p <0,05; 4B-rasm). Nihoyat, 120-kuni (ikkinchi kuchaytirish) M oqsiliga xos bo'lgan IFN + T hujayralari soni ikkala guruhda ham 35-kunga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (p <0.05; 4D-rasm).

4-rasm. BALB/c sichqonlarida SARS-CoV-2 individual strukturaviy oqsillarga T hujayralarining javoblari. (A) T-hujayra javoblari SARS-CoV-2 S, (B) N, (C) E ni qamrab olgan peptid hovuzlari bilan 20 soat davomida stimulyatsiya qilingan splenotsitlarda IFN-ELISpot yordamida o'lchandi, va (D) M oqsillari. Barlar o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Statistik tahlillar ikki tomonlama ANOVA va Sidakning post hoc testi yordamida amalga oshirildi, bu erda * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,01 va **** p <0,0001.

3.5. pS/pN yoki pS/pE/pM bilan birgalikda immunizatsiya natijasida yuzaga kelgan sinergetik himoya

Keyin ajdodlarimiz SARS-CoV-2 virusiga qarshi immunizatsiya qilingan hACE2 sichqonlari yordamida DNK vaktsinalarining himoya samaradorligini baholadik. Qiyinchilikdan so'ng, soxta guruhdagi sichqonlar asta-sekin vazn yo'qotishini ko'rsatdilar. Bundan farqli o'laroq, pS yoki pS + bilan immunizatsiya qilingan sichqonlar infektsiyadan so'ng darhol engil vazn yo'qotishini, keyin esa tiklanishni ko'rsatdi (5A-rasm). pS, pS + pN yoki pS + pE + pM bilan emlangan sichqonlarda jonli virus aniqlanmadi. Bundan tashqari, pS + pN emlash faqat pS emlash bilan olinganlarga nisbatan virusli RNK nusxalari sonini sezilarli darajada kamaytirdi (p=0.0228; 5B-rasm). Bundan tashqari, o'pka gistopatologiyasi shuni ko'rsatdiki, soxta va pN guruhlaridagi sichqonlarda yallig'lanish, plevra invaginatsiyasi, alveolyar kollaps, yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasining yuqori darajasi va gemorragik joylarning fokal yamoqlari ko'rsatilgan. Taqqoslash uchun, pS + pN yoki pS + pE + pM bilan davolash qilingan sichqonlar boshqa guruhga qaraganda engilroq histopatologik o'zgarishlarni va pastroq INHAND ballarini ko'rsatdi (5C-rasm).

5-rasm. Jonli SARS-CoV-2 virusi bilan kurashdan keyin immunizatsiyaning himoya samaradorligi. (A) Sichqonlar sinovdan keyingi uch kun davomida har kuni tortildi (o'rtacha ± standart xato (SEM), n=4). (B) TCID5{{10}} tahlili va RNK nusxasi raqami orqali aniqlanganidek, sinovdan keyingi uchinchi kuni oʻpka gomogenatlarida yuqumli SARS-CoV-2 titri. Guruhlar orasidagi statistik jihatdan ahamiyatli farqlar bir tomonlama ANOVA yordamida aniqlandi, keyin Dunnettning bir nechta taqqoslash tuzatishi (* p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 va **** p <0,0001). (C) H&E binoni yordamida o'pkaning gistopatologik tahlili.

4. Munozara

Ushbu tadqiqotda S va N oqsillarini ifodalovchi ikkita DNK vaktsinasi bilan birgalikda immunizatsiya nAbsning yuqori darajasini keltirib chiqardi va sichqonlarda SARS-CoV-2 virus yukini kamaytirishda yuqori samaradorlikka erishdi. S proteinini ifodalovchi DNK vaktsinalari sichqonlar N/E va M oqsillari bilan birgalikda immunizatsiya qilinganda uchta emlashdan so'ng S proteiniga xos hujayra immuniteti darajasini oshirdi va sinovdan keyingi gistopatologik o'zgarishlarni engillashtirdi. Bizga maʼlum boʻlishicha, bu sichqonlarda SARS-CoV ning boshqa strukturaviy oqsillarini kodlovchi DNK vaktsinalari bilan birgalikda immunizatsiya qilinganda S oqsilini kodlovchi DNK vaktsinasidan foydalangan holda sichqonlarda immunitet va himoyaning sinergik kuchayishini ochib beruvchi birinchi hisobotdir{{8} }}.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

N antijenli hududlarda immunodominant B-hujayra epitoplari bir nechta tadqiqotlarda kuzatilgan. N-asosli vaktsinalar odatda nAbsni keltirib chiqara olmaydi, chunki N proteini virus yuzasida ko'rsatilmaydi. Shunisi e'tiborga loyiqki, S va N oqsillari bilan birgalikda immunizatsiya boshqa guruhlarga qaraganda ajdodlar va Omicron SARS-CoV-2 virusiga qarshi yuqori darajadagi nAbsni keltirib chiqardi. nAb javoblarining oshishi virusni tozalash va himoya samaradorligini oshirish bilan bog'liq. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, pS + pN bilan davolash SARS-CoV-2 dan keyingi sinovdan keyingi virus yukini kamaytirishda faqat pS davolashdan ko'ra samaraliroq bo'lgan. Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, M va N oqsillarini birgalikda ifodalovchi vaktsina bilan immunizatsiya qilingan hamsterlar og'ir vazn yo'qotish va o'pka patologiyasidan himoyalangan va SARS-CoV-2dan keyin orofarenks va o'pkada virus titrlarini sezilarli darajada kamaytirgan. bu bizning natijalarimizga mos keladi [23]. Afsuski, virus titrlarining kamayishi M yoki N oqsiliga bog'liq bo'lishi mumkin emas va nAb darajalari ushbu tadqiqotda baholanmagan. SARS-CoV-2 mRNK vaktsinasini oʻrganish boʻyicha bir tadqiqot shuni koʻrsatdiki, S+N koimmunizatsiyasi kuchaytirilgan S-maxsus CD8+ T-hujayra javobini keltirib chiqardi va oʻpkani Deltaga qarshi yaxshi himoya qiladi. variant faqat S bilan solishtirganda, bu tadqiqot natijalariga mos keladi [24]. Boshqa bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, transmissiv gastroenterit koronavirusining N oqsili cho'chqa TGEV-IMMUNE hujayralari in vitroda S va N oqsillari birikmasi bilan rag'batlantirilganda neytrallashtiruvchi antikorlar sinteziga yordam bergan va bu ta'sir T-limfotsitlarning yordamchi reaktsiyasi bilan izohlanishi mumkin. N oqsili [25].

N-antigen hududlarida immunodominant CD4+/CD8+ T-hujayra epitoplari ilgari aniqlangan. Bir qator tadqiqotlar SARS-CoV-2 N oqsiliga asoslangan vaktsinalar hujayra immun javoblarini samarali tarzda qo'zg'atishi haqida xabar berdi. S + N guruhi uchta emlashdan so'ng S proteiniga xos hujayra immuniteti darajasini ko'rsatdi. SARS-CoV-2 mRNK vaktsinasi boʻyicha bir tadqiqot shuni koʻrsatdiki, kombinatsion S+N S-ga xos CD{12}} T-hujayra javobini faqat S bilan solishtirganda kuchaytirgan, bu bizning natijalarimizga mos keladi [24]. Boshqa bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, ikkita antijenli hAd5 S + N asosiy emlashdan so'ng T-hujayralarining S va N antijenlariga javoblari ilgari SARS-CoV-2- bilan kasallangan bemorlarning javoblariga teng bo'lgan va T-hujayralarining silika prognozi modellarida. epitop HLA bog'lanishi hAd5 S + N vaktsinasiga T-hujayra javoblari B.1.351 variantiga nisbatan o'z samaradorligini saqlab qolishini ko'rsatdi. Bundan tashqari, avvalroq SARS-CoV bilan kasallangan bemorlarning plazmasi S-Fusion + N-ETSD konstruksiyali qo‘sh antijeni ifodalovchi hujayralar bilan faqat hAd5 S-Fusion bilan solishtirganda yuqoriroq bog‘lanish qobiliyatini ko‘rsatdi, bu esa uning immunogenligidan dalolat beradi. S + N ikki antigenli vaktsina S yagona antigenli vaktsinadan yaxshiroqdir [26].

O'pkada jonli virus aniqlanmadi va pS, pS + pN va pS + pE + pM guruhlarida vazn yo'qotishdan keyingi vazn yo'qotildi, pN bilan davolash virus titrini samarali ravishda kamaytirmadi. Ushbu topilmalar S proteinining vaktsina maqsadi sifatida ajralmasligi va samaradorligini ta'kidlaydi. Shunisi e'tiborga loyiqki, pS va pN bilan birgalikda immunizatsiya virusni tozalashga pS yoki pN ga qaraganda yaxshiroq ta'sir ko'rsatdi. pS + pE + pM guruhi o'pkada kamroq histopatologik o'zgarishlarni ko'rsatdi, bu bizning oldingi tadqiqotimiz natijalariga mos keladi [15]. S+N guruhida oʻpkada kam virusli RNK nusxalari bor edi, vazn yoʻqotish kamaygan va SARS-CoV-2dan soʻng tez tiklanish davri faqat S/N bilan emlangan guruhga nisbatan kuzatilgan. ushbu tadqiqot natijalari. Biroq, guruhlarning hech biri neytrallashtiruvchi antikor titrlarini aniqlamadi, bu vaktsinalar xilma-xilligi va eksperimental hayvonlarning farqlari bilan izohlanishi mumkin [26]. SARS-CoV-2 adenovirus vektorli vaktsinasi bo'yicha bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, S vaktsinasi faqat N vaktsinasi bilan birgalikda immunizatsiya qilinganida miyaning o'tkir himoyasini ta'minlagan [27]. Boshqa tadqiqot Tri: ChAd, Bi: ChAd va Mono: ChAd vaktsinalari mos ravishda S1/N/RdRp, N/RdRp va S1 oqsillarini ifodalovchi vaktsinalar ishlab chiqdi va ularni B.1.351 hayvon modelida sinab ko'rdi. Mono: ChAdlunglarda keng tarqalgan yalpi patologiya kuzatildi, Bi: ChAd va Tri: ChAd o'pkalari esa bu patologiyadan deyarli xoli bo'lgan [28].

Bundan tashqari, emlanmagan hayvonlarning o'pkada virusli yuklari yuqori bo'lgan, Tri: ChAd bilan davolash esa virusli yuklarni 3,5 logga sezilarli darajada kamaytirdi. Taqqoslash uchun, Bi: ChAd va Mono: ChAd vaktsinalari virus yukini o'rtacha darajada kamaytirdi. Ushbu natijalar S/N ikki antigenli vaktsinaning variantlarga qarshi himoya ta'siri S yagona antigenli vaktsinadan yaxshiroq bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi, bu bizning natijalarimizga mos keladi [28]. Bir nechta tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, N protein bilan immunizatsiya qilingan sichqonlarda SARS-CoV infektsiyasidan so'ng kuchli o'pka yallig'lanishi rivojlanadi [29-31]. Oldingi tadqiqotlar, shuningdek, Sichqoncha gepatiti virusi N oqsilini ifodalovchi adenovirus vektorli vaktsina bilan immunizatsiya sichqonlarni o'limga olib keladigan infektsiyadan himoya qilishini xabar qildi, bu N proteini himoya ta'sirini yaratishi mumkinligini ko'rsatadi [32]. Bundan tashqari, CRT/N DNK vaktsinasi bilan immunizatsiya qilingan guruhda SARS-CoV N oqsilini ifodalovchi vaktsiniya virusi bilan bog'liq sinovdan keyin virus titri sezilarli darajada pasaygan [33].

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

S proteiniga oid bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, birlashtirilgan DNK/oqsil vaktsinasi DNK/oqsil vaktsinasidan ko'ra gumoral va hujayraviy immunitetni yaxshiroq qo'zg'atgan [8]. Faqat S oqsiliga moʻljallangan vaktsinalar paydo boʻlgan variantlardan kelib chiqqan engil va oʻrtacha darajadagi COVID-19 dan himoyalanish samaradorligi pasayganini koʻrsatdi. Konservalangan SARS-CoV-2 tarkibiy oqsillarining, shu jumladan N/E/M oqsillarining roli vaktsinani loyihalash va qo'llashda e'tiborga loyiqdir, chunki konservatsiyalangan epitoplarga qarshi vaktsina tomonidan qo'llaniladigan T-hujayra javoblari odatda mutatsiyalarga ta'sir qilmaydi. . Bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, SARS bilan kasallangan bemorlarda (n=23) 2003 yil avj olgandan keyin 17 yil o'tgach ham SARS-CoV N oqsiliga reaktiv bo'lgan uzoq muddatli xotira T hujayralari mavjud bo'lib, ular SARS CoV ga kuchli o'zaro reaktivlik ko'rsatdi{ {15}} N proteini, N oqsilidan oʻzaro himoya qiluvchi vaktsina maqsadi sifatida foydalanishni tasdiqlaydi [34]. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, pS/pN koimmunizatsiyasi yuqori nAb javoblari, yaxshi virusli klirens va yaxshilangan hujayra immuniteti bilan bog'liq va faqat pS bilan solishtirganda SARS-CoV-2 muammosidan keyin yaxshiroq himoyani ta'minlaydi. Bundan tashqari, SARS-CoV-2 variantlari koʻplab hayvonlar turlarini yuqtirgani va baʼzi yovvoyi hayvonlar va uy hayvonlarida odamdan hayvonlarga yuqishi kuzatilgan [7]. Shunday qilib, veterinariya SARS-CoV-2 vaktsinasiga ko'proq e'tibor berish kerak. Bundan tashqari, nanotexnologiya vaktsinalarni optimallashtirishda kuchli vosita bo'lishi mumkin va ko'proq e'tiborga loyiqdir [2].

Ushbu tadqiqot bir nechta cheklovlarga ega. Birinchidan, biz faqat BALB / c sichqonlarida DNK vaktsina strategiyasini kuzatdik va kelajakdagi tadqiqotlar boshqa hayvonlar modellarida ushbu vaktsina rejimlarining immunogen ta'sirini baholashi kerak. Ikkinchidan, S va N oqsillari yordamida birgalikda immunizatsiya natijasida kelib chiqqan nAb- va S-maxsus CD8 T-hujayralarining kuchaytirilgan javoblari asosidagi molekulyar mexanizmlarni toʻliq tushunish va bu bilimlarni COVIDni optimallashtirish uchun ishlatish uchun qoʻshimcha tadqiqotlar talab etiladi-19 vaktsina dizayni. Nihoyat, N proteinga xos antikorlarning funktsiyasi qo'shimcha o'rganishga loyiqdir.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Xulosa qilib aytganda, ushbu tadqiqot SARS-CoV-2 S, N, E va M oqsillari bilan birgalikda immunizatsiya qilishning immun-himoya salohiyatini baholadi. Faqat S proteiniga mo'ljallangan bir nechta vaktsinalar paydo bo'lgan variant shtammlariga himoya ta'sirini kamaytiradi. Natijalarimiz hozirgi va paydo bo'layotgan SARS-CoV-2 variantlarini nazorat qilish va potentsial -koronavirus pandemiyasining oldini olish uchun o'zaro faol COVID-19 vaktsinasini ishlab chiqish uchun asos yaratadi.

Ma'lumotnomalar

1. Zmievskaya, E.; Valiullina, A.; Ganeeva, I.; Petuxov, A.; Rizvanov, A.; Bulatov, E. Onkologiyadan tashqari CAR-T hujayra terapiyasini qo'llash: otoimmün kasalliklar va virusli infektsiyalar. Biomeditsinalar 2021, 9, 59. [CrossRef] [PubMed]

2. Rashidzoda, H.; Danafar, H.; Rahimiy, H.; Mozafari, F.; Salehiabar, M.; Rahmati, MA; Rahamuz-Xaggi, S.; Musazoda, N.; Muhammadi, A.; Ertas, YN; va boshqalar. Yangi koronavirusga qarshi nanotexnologiya (og'ir o'tkir respirator sindrom koronavirus 2): diagnostika, davolash, terapiya va kelajak istiqbollari. Nanomedicine 2021, 16, 497–516. [CrossRef]

3. Fontanet, A.; Cauchemez, S. COVID{1}} poda immuniteti: Biz qayerdamiz? Nat. Rev. Immunol. 2020, 20, 583–584. [CrossRef] [PubMed]

4. Jeyanathan, M.; Afxami, S.; Smaill, F.; Miller, MS; Lichty, BD; Xing, Z. COVID{1}}ga qarshi vaktsina strategiyalari uchun immunologik mulohazalar. Nat. Rev. Immunol. 2020, 20, 615–632. [CrossRef] [PubMed]

5. Vandelli, A.; Monti, M.; Milanetti, E.; Armaos, A.; Rupert, J.; Zakko, E.; Bechara, E.; Delli Ponti, R.; Tartaglia, GG SARS-CoV-2 genomining strukturaviy tahlili va inson interaktomining bashoratlari. Nuklein kislotalari Res. 2020, 48, 11270–11283. [CrossRef] [PubMed]

6. Jekson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. SARS-CoV-2 ning hujayralarga kirish mexanizmlari. Nat. Ruhoniy Mol. Hujayra Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef]

7. Konforti, A.; Sanches, E.; Salvatori, E.; Lione, L.; Compagnone, M.; Pinto, E.; Palombo, F.; D'Akunto, E.; Muzi, A.; Roscilli, G.; va boshqalar. SARS-CoV-2 retseptorlarini bog‘lovchi domenini kodlovchi chiziqli DNK vaktsina nomzodi uy mushuklarida kuchli immun javob va neytrallovchi antikorlarni keltirib chiqaradi. Mol. U erda. Usullari Clin. Dev. 2023. [CrossRef]

8. Borgoyakova, MB; Karpenko, LI; Merkulyeva, IA; Shcherbakov, DN; Rudometov, AP; Starostina, EV; Shanshin, DV; Isaeva, AA; Nesmeyanova, VS; Volkova, NV; va boshqalar. COVIDga qarshi DNK/oqsilli vaksinaning immunogenligi-19. Buqa. Exp. Biol. Med. 2023, 1–4. [CrossRef]

9. Qu, L.; Yi, Z.; Shen, Y.; Lin, L.; Chen, F.; Syu, Y.; Vu, Z.; Tang, H.; Chjan X.; Tyan, F.; va boshqalar. SARS-CoV-2 va yangi paydo bo'lgan variantlarga qarshi dumaloq RNK vaktsinalari. Hujayra 2022, 185, 1728–1744.e16. [CrossRef]

10. Korbett, KS; Edvards, DK; Leist, SR; Abiona, OM; Boyoglu-Barnum, S.; Gillespi, RA; Himansu, S.; Shefer, A.; Zivavo, KT; DiPiazza, AT; va boshqalar. SARS-CoV-2 mRNK vaktsinasining dizayni patogenning prototipi tayyorligi bilan faollashtirilgan. Tabiat 2020, 586, 567–571. [CrossRef]

11. Tian, ​​JH; Patel, N.; Haupt, R.; Chjou, X.; Veston, S.; Hammond, H.; Logue, J.; Portnoff, A.; Norton, J.; Guebre-Xabier, M.; va boshqalar. SARS-CoV-2 glikoproteinli vaktsina nomzodi NVX-CoV2373 babunlarda immunogenlik va sichqonlarda himoya. Nat. Kommun. 2021, 12, 372. [CrossRef] [PubMed]

12. Andreano, E.; Paciello, I.; Piccini, G.; Manganaro, N.; Pileri, P.; Hyseni, I.; Leonardi, M.; Pantano, E.; Abbiento, V.; Beninkasa, L.; va boshqalar. Gibrid immunitet B hujayralari va SARS-CoV-2 variantlariga qarshi antikorlarni yaxshilaydi. Tabiat 2021, 600, 530–535. [CrossRef]

13. Naqvi, AAT; Fotima, K.; Muhammad, T.; Fotima, U.; Singx, IK; Singx, A.; Atif, SM; Xariprasad, G.; Hasan, GM; Hassan, MI SARS-CoV-2 genomi, tuzilishi, evolyutsiyasi, patogenezi va terapiyasiga oid tushunchalar: Strukturaviy genomika yondashuvi. Biochim. Biofizika. Acta Mol. Asos. Dis. 2020, 1866, 165878. [CrossRef] [PubMed]

14. Abbosi, J. Hindistonning o'smirlar va kattalar uchun yangi COVID{1}} DNK vaktsinasi birinchi. JAMA 2021, 326, 1365. [CrossRef] [PubMed]

15. Chen, J.; Deng, Y.; Huang, B.; Xan, D.; Vang, V.; Huang, M.; Chjay, C.; Chjao, Z.; Yang, R.; Chjao, Y.; va boshqalar. Konvert va membrana oqsillarini ifodalovchi DNK vaktsinalari sichqonlarda SARS-CoV-2 dan qisman himoya qiladi. Old. Immunol. 2022, 13, 827605. [CrossRef]

16. Tebas, P.; Kraynyak, KA; Patel, A.; Maslou, JN; Morrow, deputat; Silvestr, AJ; Knoblok, D.; Gillespi, E.; Amante, D.; Rasin, T.; va boshqalar. Intradermal SynCon®Ebola GP DNK vaktsinasi harorat barqaror va sog'lom ko'ngillilarda hujayra va gumoral immunogenlik afzalliklarini ishonchli tarzda namoyish etadi. J. Yuqtirish. Dis. 2019, 220, 400–410. [CrossRef]

17. Smit, TRF; Patel, A.; Ramos, S.; Elvud, D.; Chju, X.; Yan, J.; Gari, EN; Uoker, SN; Schultheis, K.; Purvar, M.; va boshqalar. COVID uchun DNK vaksina nomzodining immunogenligi-19. Nat. Kommun. 2020, 11, 2601. [CrossRef]

18. Chjao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Song, J.; Vang, V.; Du, Y.; Huang, B.; Vang, V.; Chjan, L.; Chjao, P.; va boshqalar. CHIKV VLP va DNK vaktsinalari bilan birgalikda emlash sichqonlarda umid beruvchi gumoral javobni keltirib chiqaradi. Old immunol. 2021, 12, 655743. [CrossRef]

19. Guan, J.; Deng, Y.; Chen, H.; Yin, X.; Yang, Y.; Tan, V. Dendritik hujayralarga qaratilgan gepatit C virusi NS3 oqsilini ifodalovchi ikkita DNK vaktsinasi bilan astarlash sichqonlarda yuqori heterologik himoya potentsialini keltirib chiqaradi. Ark. Virol. 2015, 160, 2517–2524. [CrossRef]

20. Chen, X.; Ven, B.; Deng, Y.; Vang, V.; Yin, X.; Guan, J.; Ruan, L.; Tan, V. Gepatit B virusi yadrosi-PreS1 va S-PreS1 plazmidlarining kombinatsiyasi bilan DNK immunizatsiyasining kuchaytirilgan ta'siri va in vivo elektroporatsiya. Klin. Vaktsina Immunol. 2011, 18, 1789–1795. [CrossRef]

21. Yang, R.; Deng, Y.; Huang, B.; Huang, L.; Lin, A.; Li, Y.; Vang, V.; Liu, J.; Lu, S.; Jan, Z.; va boshqalar. Qulay biotarqatish sxemasi va istiqbolli immunitetga ega yadro qobig'i tuzilgan COVID-19 mRNK vaktsinasi. Signal uzatish. Nishon. 2021, 6, 213. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, R.; Huang, B.; A, R.; Li, V.; Vang, V.; Deng, Y.; Tan, V. Psevdotipli SARS-CoV-2 tizimining rivojlanishi va samaradorligi neytrallash samaradorligi va in vitroda kirishni inhibe qilish testi bilan aniqlanadi. Biosaf. Salomatlik 2020, 2, 226–231. [CrossRef] [PubMed]

23. Jia, Q.; Bielefeldt-Ohman, H.; Maison, RM; Maslesha-Gali´c, S.; Kuper, SK; Bowen, RA; Horwitz, MRA SARS-CoV-2 membrana va nukleokapsid oqsillarini ifodalovchi bakteriya vektorli vaktsinani ko'paytiruvchi vaksina hamsterlarda jiddiy COVID{5}}kasallikdan himoya qiladi. NPJ vaktsinalari 2021, 6, 47. [CrossRef] [PubMed]

24. Hajnik, RL; Plante, JA; Liang, Y.; Alame, M.-G.; Tang, J.; Zhong, C.; Odam A.; Sharton, D.; Rafael, GH; Liu, Y.; va boshqalar. Kombinativ mRNK emlash SARS-CoV-2 delta variantidan himoyani kuchaytiradi. bioRxiv 2021. [CrossRef]

25. Anton, IM; Gonsales, S.; Bullido, MJ; Korsin, M.; Risko, C.; Langeveld, JP; Enjuanes, L. Virusga xos antikorlarning in vitro induktsiyasida transmissiv gastroenterit koronavirus (TGEV) tarkibiy oqsillari o'rtasidagi hamkorlik. Virus Res. 1996, 46, 111–124. [CrossRef]

26. Deschambault, Y.; Linch, J.; Warner, B.; Tierney, K.; Xyuin, D.; Vendramelli, R.; Tikuvchi, N.; Frost, K.; But, S.; Sajesh, B.; va boshqalar. Spike va nukleokapsid oqsillarini ifodalovchi rekombinant ACAM2000 vaccinia viruslari bilan yagona immunizatsiya hamsterlarni SARS-CoV-2-kabi klinik kasallikdan himoya qiladi. bioRxiv 2021. [CrossRef]

27. Penaloza-MacMaster, P.; Sinf, J.; Dangi, T.; Richner, JM A SARS CoV-2 nukleokapsid vaktsinasi virusning distal tarqalishidan himoya qiladi. bioRxiv 2021.

28. Afxami, S.; D'Agostino, MR; Chjan, A.; Steysi, HD; Marzok, A.; Kang, A.; Singx, R.; Bavananthasivam, J.; Ye, G.; Luo, X.; va boshqalar. Yangi avlod COVID{2}} vaktsinasining nafas olish shilliq qavati orqali yuborilishi SARS-CoV-2 ning ajdodlari va oʻzgaruvchan shtammlaridan mustahkam himoya qiladi. Hujayra 2022, 185, 896–915.e19. [CrossRef]

29. Zheng, N.; Sya, R.; Yang, C.; Yin, B.; Li, Y.; Duan, C.; Liang, L.; Guo, X.; Xie, Q. Tamakidagi SARS-CoV nukleokapsid oqsilining ifodalanishi va sichqonlarda uning immunogenligi. Vaktsina 2009, 27, 5001–5007. [CrossRef]

30. Yasuiy, F.; Kay, C.; Kitobatake, M.; Inoue, S.; Yoneda, M.; Yokochi, S.; Kase, R.; Sekiguchi, S.; Morita, K.; Xishima, T.; va boshqalar. Og'ir o'tkir respirator sindrom (SARS) bilan bog'liq bo'lgan koronavirus (SARS-CoV) nukleokapsid oqsili bilan oldingi immunizatsiya SARS-CoV bilan kasallangan sichqonlarda og'ir pnevmoniyaga olib keladi. J. Immunol. 2008, 181, 6337–6348. [CrossRef]

31. Deming, D.; Sheahan, T.; Heise, M.; Yount, B.; Devis, N.; Sims, A.; Sutar, M.; Xarkema, J.; Uitmor, A.; Tuzlangan bodring, R.; va boshqalar. Qarigan sichqonlarda vaktsina samaradorligi rekombinant SARS-CoV epidemiyasi va zoonotik boshoq variantlari bilan shubha ostiga olingan. PLoS Med. 2006, 3, e525. [CrossRef] [PubMed]

32. Wesseling, JG; Godeke, GJ; Schijns, VE; Prevec, L.; Graham, F.; Horzinek, MC; Rottier, PJ Mouse gepatit virusi spike va adenovirus vektorlari tomonidan ifodalangan nukleokapsid oqsillari sichqonlarni o'limga olib keladigan infektsiyadan himoya qiladi. J. General Virol. 1993, 74, 2061–2069. [CrossRef] [PubMed]

33. Kim, TW; Li, JH; Hung, CF; Peng, S.; Roden, R.; Vang, MC; Viscidi, R.; Tsai, YC; U, L.; Chen, PJ; va boshqalar. Og'ir o'tkir respirator sindromli koronavirusning nukleokapsid oqsiliga qaratilgan DNK vaktsinalarini yaratish va tavsiflash. J. Virol. 2004, 78, 4638–4645. [CrossRef] [PubMed]

34. Le Bert, N.; Tan, AT; Kunasegaran, K.; Tham, CYL; Hofizi, M.; Chia, A.; Chng, MHY; Lin, M.; Tan, N.; Linster, M.; va boshqalar. COVID-19 va SARS holatlarida SARS-CoV-2-maxsus T hujayra immuniteti va infektsiyalanmagan nazorat. Tabiat 2020, 584, 457–462. [CrossRef]