RNK M6 A o'quvchi YTHDF2 NK hujayra antitumor va antiviral immunitetni boshqaradi 2-qism

YTHDF2 NK hujayralarining antiviral funktsiyasi uchun zarur

Ythdf2 etishmovchiligi NK hujayralarining antiviral faolligiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz Ythdf2WT sichqonlari va Ythdf2DNK sichqonlariga 2,5 × 104 PFU MCMV AOK qildik.

Natijalar shuni ko'rsatdiki, Ythdf2DNK sichqonlari MCMV infektsiyasiga ko'proq moyil bo'lib, ular Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada vazn yo'qotish va qon, taloq va jigarda virus titrlarining ortishi bilan tavsiflanadi (3, A va B-rasm; va S2, A va B-rasm). .

Shuningdek, infektsiyadan keyin Ythdf2DNK sichqonlarining taloq va qonidagi umumiy NK hujayralarining foiz va mutlaq sonining Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada kamayishini kuzatdik (3-rasm, C va D; va S2, C va D-rasm). Keyingi tahlillar shuni ko'rsatdiki, Ythdf2DNK sichqonlarining NK hujayralari Ki67 ning Ythdf2WT sichqonlariga qaraganda ancha past ifodalangan (3-rasm, E-G).

Shu bilan birga, NK hujayralarining hayotiyligi Ythdf2WT sichqonlari va Ythdf2DNK sichqonlari o'rtasida o'xshash edi, bu anneksin V bo'yalishi bilan ko'rsatilgan (S2 E-rasm). Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, NK hujayralarida YTHDF2 etishmovchiligi virusli infektsiya paytida hujayraning omon qolishi o'rniga hujayra proliferatsiyasida nuqsonga olib keladi. NKhujayralari MCMV infektsiyasini faollashtiruvchi Ly49H va Ly49D retseptorlari orqali inhibe qiladi va jarayon perforin yoki IFN vositachiligidagi antiviral javob bilan tavsiflanadi (Arase va boshq., 2002; Li va boshq., 2009; Loh va boshq., 2005; Orr. va boshqalar, 2010; Sumaria va boshqalar, 2009).

Biz Ythdf2DNK sichqonlari infektsiyadan so'ng Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda taloq va qondagi Ly49H + va Ly49D + NK hujayralarini sezilarli darajada kamaytirganini aniqladik (3-rasm, H-J; va S2, F-K-rasm).

Keyingi tahlillar shuni ko'rsatdiki, foizda faqat Ly49D+Ly49H+ hujayralari Ythdf2DNK sichqonlarida Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda, Ly49D−Ly49H+ NK hujayralari, Ly49D+Ly49H− NK9D hujayralari va L+L49y hujayralarining mutlaq hujayra soni bilan solishtirganda farq ko'rsatdi. taloq va qon Ythdf2DNK sichqonlarida infektsiyadan keyin Ythdf2WTmice bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi (S2, L-W-rasm).

Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, YTHDF2 tomonidan MCMV infektsiyasini nazorat qilish asosan Ly49D + Ly49H + NK hujayralari tomonidan vositachilik qiladi. Ythdf2DNK sichqonlarida NK hujayralari tomonidan B granzimi va IFN ishlab chiqarilishi Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirish mumkin edi (S2, X va Y-rasm).

Biz Ythdf2DNK sichqonlari tomonidan perforin ishlab chiqarishni taloq va qonda Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada kamayganligini aniqladik (3-rasm, K-M), bu YTHDF2 asosan NK hujayralarida MCMVga qarshi perforin vositachiligidagi antiviral faollikka ta'sir qilishini ko'rsatadi. YTHDF2 MCMV infektsiyasi paytida NK hujayralarining kengayishi va effektor funktsiyasi uchun juda muhim ekanligini ko'rsatadi.

YTHDF2 NK hujayra gomeostazini va barqaror holatda terminal kamolotini nazorat qiladi

NK hujayralarida Ythdf2 etishmovchiligi o'simta metastazlarini kuchaytirganligi va NK hujayralarining MCMV infektsiyasini nazorat qilish qobiliyatini buzganligi haqidagi yuqoridagi topilmalar bizni YTHDF2 NK hujayralarini barqaror holatda saqlash uchun zarur yoki yo'qligini tekshirishga undadi.

4 A-rasmda ko'rsatilganidek, NK hujayralarining chastotasi va mutlaq soni periferik qon, taloq, jigar va o'pkada sezilarli darajada kamaygan, ammo Ythdf2DNK sichqonlarining suyak iligida (BM) Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda kamaygan.

Biroq, Ythdf2WT va Ythdf2DNK sichqonlari o'rtasida BM (Fathman va boshq., 2011)da umumiy limfoid progenitori, NKdan oldingi hujayra progenitori va tozalangan NK hujayra progenitori (NKP) o'rtasida sezilarli o'zgarishlar kuzatilmadi (S3 A-rasm). YTHDF2 bizning modelimizda NK hujayralarining erta rivojlanishiga ta'sir qilmasligi mumkin.

Ythdf2DNK sichqonlarida NK hujayralarining kamayishi uchun mas'ul bo'lgan potentsial mexanizmlarni o'rganish uchun biz barqaror holatda Ythdf2 o'chirilgandan keyin NK hujayralarining hujayra ko'payishi, hayotiyligi va savdo qobiliyatini tekshirdik. Ko'payish NK hujayralarining ulushi Ythdf2WT va Ythdf2DNK sichqonlari o'rtasida solishtirish mumkin edi, bu Ki67 bo'yalishidan dalolat beradi (S3 B-rasm).

NKhujayralarining hayotiyligi Ythdf2WT va Ythdf2DNK sichqonlari o'rtasida ham ekvivalent edi, bu aneksin V bo'yalishi bilan ko'rsatilgan (rasm S3 C). YTHDF2 NK hujayralarining BM dan periferiyaga chiqishiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini tekshirish uchun Ythdf2WT va Ythdf2DNK sichqonlariga immun hujayralarini belgilash uchun antiCD45 antikori yuborildi va 2 daqiqadan so'ng qurbon qilindi va ularning BM hujayralari tahlil qilindi.

Bu bizga BM ning sinusoidal va parenximal hududlaridagi NK hujayralari sonini aniqlashga imkon berdi, bu NK hujayralarining barqaror holatda BM dan periferik qonga o'tish ko'rsatkichi (Leong va boshq., 2015). Natijalar sinusoidlardagi Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda Ythdf2DNK sichqonlarida CD45+ NK hujayralarining chastotasi sezilarli darajada kamayganligini ko'rsatdi (4 B-rasm), bu Ythdf2 etishmovchiligi NK hujayralarining BM dan qon aylanish tizimiga in vivo chiqishiga putur etkazishini ko'rsatadi. .

Immun hujayralari ma'lum virusli infektsiyalar yoki kimyoterapiya sabab bo'lgan limfopeniya paytida gomeostatik proliferatsiyaga uchraydi (Sun va boshq., 2011). Biz YTHDF2 ning barqaror holatda NK hujayralarining ko'payishi uchun zarur ekanligini aniqlagan bo'lsak-da, MCMV infektsiyasi paytida hujayra proliferatsiyasining sezilarli darajada pasayishini kuzatdik (3-rasm, E-G). Shuning uchun biz YTHDF2 ning in vivo jonli limfopenik muhitda NK hujayra gomeostatik proliferatsiyasini tartibga solishdagi rolini o'rganib chiqdik.

Biz CD45.2 Ythdf2DNK sichqonlaridan yoki CD45.1 tug'ma sichqonlaridan limfotsitlar yetishmaydigan Rag2−/−Il2rg−/− sichqonlaridan teng miqdordagi taloq NK hujayralarini o'tkazdik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, NK hujayralarining katta qismi CD45.1WT nazorat sichqonlaridan hujayra o'tkazilgandan keyingi 3-kuni CD45.2 Ythdf2DNK sichqonlaridan ko'ra olingan (S3 D-rasm).

Keyingi tahlillar shuni ko'rsatdiki, Ythdf2DNK sichqonlarining NK hujayralarining kamayishi buzilgan hujayra proliferatsiyasi (S3 E-rasm), lekin hujayra apoptozi emas (S3 F-rasm), bu YTHDF2 lenfopenik sharoitda NK hujayra gomeostatik proliferatsiyasini in vivo jonli ravishda boshqarganligini ko'rsatdi.

Sichqoncha NK hujayralarining keyingi differentsiatsiyasi CD11b va CD27 darajalariga ko'ra, etuk bo'lmagan (CD11b−CD27+), oraliq etuk (CD11b+CD27+) va terminal etuk (CD11b+CD27−) bosqichlarga bo'linishi mumkin. Chiossone va boshqalar, 2009; Geiger va Sun, 2016).

Ythdf2 ifodasi etilish bilan ortib borishi va CD11b−CD27+, CD11b+CD27+, CD11b+CD27− mos ravishda Ythdf2 ning eng past, o‘rta va eng yuqori ifoda darajalarini ko‘rsatishini aniqladik (S3 G-rasm), Bu YTHDF2 NK hujayralarining kamolotiga aloqador bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Shuning uchun biz CD11b va CD27 hujayra sirt belgilari tomonidan aniqlangan NK hujayra kamolotida YTHDF2 ning rolini o'rganib chiqdik.

Biz NK hujayralarida Ythdf2 ning yo'qolishi terminal etuk NK hujayralari chastotasining sezilarli darajada pasayishiga va/yoki taloq, jigar, o'pka va qondagi etuk va oraliq etuk NK hujayralarining ko'payishiga olib kelganligini aniqladik, ammo BMda emas (4-rasm va C va). S3 H-rasm), bu YTHDF2 terminal NK hujayralarining kamolotini ijobiy tartibga solishini ko'rsatadi. Ushbu ma'lumotlarga muvofiq, taloq, jigar va o'pkada Ythdf2DNK sichqonlarining aterminal NK hujayrasi etukligi belgisi bo'lgan KLRG1 darajasi sezilarli darajada pasaygan, ammo BM bilan taqqoslanmagan. Ythdf2WT sichqonlari mos keladigan organlar yoki to'qimalar bo'linmalarida (4-rasm D).

Ythdf2 etishmovchiligi tufayli etuk NK hujayralari sonining kamayganligini aniqlash uchun biz Rag2−/−Il2rg−/− sichqonlarida 1:1 nisbatda aralashtirilgan CD45.1 WT va CD45.2 Ythdf2DNK sichqonlaridan BM hujayralarini kiritish orqali kimeralarni yaratdik. nisbat. Transplantatsiyadan keyin 8 haftalik oqim sitometriyasida ko'rsatilgandek, terminal etuk NK hujayralarining kamaytirilgan ulushi CD45.2 Ythdf2DNK BM hujayralaridan CD45.1 WT nazorat hujayralaridan (4-rasm) olingan bo'lib, bu NK hujayra terminali etukligi YTHDF2 tomonidan nazorat qilinishini ko'rsatadi. hujayraning o'ziga xos xususiyatidir.

T-box transkripsiya omillari Eomes va Tbet NKcell kamoloti uchun juda muhimdir (Daussy va boshq., 2014; Gordon va boshq., 2012). Hujayra ichidagi bo'yash Ythdf2DNK sichqonlarining Ythdf2WT sichqonlari bilan solishtirganda NK hujayralarida Eomlarning protein darajasining sezilarli darajada pasayishini aniqladi (S3 I-rasm). Bundan tashqari, biz Eomlarning oqsil va mRNK darajasining pasayishi, ayniqsa, terminal etuk (CD11b + CD27−) NK hujayralarida sodir bo'lganligini aniqladik (S3, J-L-rasm).

Biroq, Eomesdan farqli o'laroq, Tbet ifodasi Ythdf2DNK va Ythdf2WT sichqonlari o'rtasidagi NK hujayralarida ekvivalent bo'lgan (S3, I va K-rasm), bu YTHDF2 Eomesni nishonga olgan holda NKcell terminali etukligini tartibga solishini ko'rsatadi.