Zebrafish embrioni oziq-ovqat antioksidant birikmalarining himoya ta'sirini sinash uchun namuna sifatida

Elektron pochtatina.xiang@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun.

Abstrakt: TheantioksidantOziq-ovqat birikmalarining faolligi sog'liq uchun foydalari va surunkali kasalliklarning oldini olish bilan bog'liqligi tufayli eng ko'p qiziqish uyg'otadigan xususiyatlardan biridir. Ushbu faollik odatda in vitro tahlillari yordamida o'lchanadi, bu in vivo ta'sirlarni yoki ta'sir mexanizmlarini bashorat qila olmaydi. Ushbu tadqiqotning maqsadi oziq-ovqatlarda tabiiy ravishda mavjud bo'lgan oltita fenolik birikma (naringenin, apigenin, rutin, oleuropein, xlorogen kislota va curcumin) va uchta karotenoidning (likopen B, -karotin va astaksantin) in vivo himoya ta'sirini baholash edi. zebrafish embrion modeli. Zebrafish embrioni to'qqizta antioksidant birikmaning har biri bilan oldindan ishlov berilgan va keyin ma'lum bo'lgan tertbutil gidroperoksid (tBOOH) bilan ta'sirlangan.oksidlovchi stresszebra baliqlarida. Oldindan ishlov berilgan embrionlarga nisbatan tBOOH keltirib chiqaradigan o'lim va dismorfogenezning kontsentratsiyasiga javobini solishtirish orqali sezilarli farqlar aniqlandi.antioksidantbirikmalar. Karotindan tashqari har bir birikmaning oksidlanish-stressdan kelib chiqadigan o'limga qarshi himoya ta'siri aniqlandi. Bundan tashqari, apigenin, rutin va curcumin ham dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Boshqa tomondan, -karotin faqat tBOOH bilan davolash bilan solishtirganda o'liklik va dismorfogenezni ko'rsatdi.

Kalit so'zlar: oksidlovchi stress; zebrafish embrioni; antioksidant ta'sir; polifenollar; karotinoidlar

1.Kirish

Reaktiv kislorod turlari (ROS) va reaktiv azot turlari (RNS) hujayra metabolizmi jarayonida paydo bo'ladi. Ular normal fiziologik holat uchun zarurdir, lekin ortiqcha bo'lsa, ular patologik jarayonlarda ishtirok etadilar [1]. Aerob organizmlar o'z ichiga olgan ROS-induktsiya oksidlovchi zarar oldini olish uchun himoya borantioksidantfermentlar va/yoki fermentativ bo'lmagan mexanizmlar, shu jumladan endogen ravishda ishlab chiqarilgan antioksidant birikmalar yoki antioksidantlarni dietaga kiritish [2].
Nomutanosiblik, reaktiv turlarning kontsentratsiyasi undan yuqori bo'lgandaantioksidantorganizmning himoya kuchlari deyiladioksidlovchi stress(OS) [3]. OTning oqibatlari makrofaglarni jalb qilishni o'z ichiga oladi; lipidlar va oqsillarning normal ishlashini inhibe qilish; va mitoxondriyal, membrana va DNK shikastlanishi [4-7]. Ushbu o'zgarishlar saraton, qarish, diabet, revmatoid artrit, yurak-qon tomir va neyrodegenerativ kasalliklar kabi bir qator patologiyalar bilan bog'liq [8-11].

Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, organizm ortiqcha ROS ishlab chiqaradigan fiziopatologik holatlarda (UV ta'siri, chekish, ifloslangan havo va boshqalar) oksidlovchi zararni kamaytirish uchun dieta orqali antioksidantlarni qabul qilishni talab qiladi. Turli xil antioksidantlar, masalan, fenolik birikmalar, vitaminlar, karotinoidlar va boshqalar ratsion orqali qabul qilinadi.flavonoidlar. "Fenol birikmalar" atamasi aromatik yoki alifatik tuzilmalarga biriktirilgan fenol guruhiga ega bo'lgan har qanday moddani anglatadi. Fenolik birikmalar o'simliklardan kelib chiqadi va eng muhim ikkilamchi metabolitlar qatoriga kiradi; ularning hayvonot olamida mavjudligi diet orqali iste'mol qilinishi bilan bog'liq. Ushbu birikmalar orasidaflavonoidlareng ko'p o'rganilgan va ko'p; ularning kimyoviy tuzilmalarida aflavonoidyadrosi uchta halqada joylashgan 15 ta uglerod atomidan iborat (C6-C3-C6) [13]. Ularning antioksidant mexanizmlari fermentlarni inhibe qilish yoki erkin radikallarni ishlab chiqarishda ishtirok etadigan mikroelementlarning xelyatsiyasini, ROSni qabul qilishni va endogen antioksidant mudofaalarni himoya qilishni o'z ichiga oladi [14]. O'rtachaflavonoidqabul qilish kuniga 23 mg [15,16] deb baholanadi va asosiy manbalar qora choy, qizil sharob, piyoz, olma va pivodir [17,18].

Antioksidant faolligi tufayli o'rganilgan birikmalarning yana bir guruhi karotinoidlardir. Ular pigmentlar bo'lib, ularning tuzilishi erkin radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish imkonini beruvchi konjugatsiyalangan C=C bog'lari (polien) qatoridan iborat; shuning uchun ular samarali antioksidantlar sifatida harakat qilishlari mumkin [19]. Karotenoidlar tabiiy tizimlarda keng tarqalgan bo'lib, ularning turli kasalliklarning oldini olishdagi roli, asosan, ratsionda mavjud bo'lgan - karotin, lutein va likopen kabi birikmalar uchun o'rganilgan [18,20,21].

ning rollarini aniqlashantioksidantlarOksidlanish jarayonlari bilan bog'liq kasalliklar va kasalliklarda in vivo jonli ravishda himoya ta'sirini tahlil qilish uchun zarurdir. Shu sababli, bizning laboratoriyamiz ushbu baliqlarning himoya ta'sirini baholash uchun zebrafish (ZF) embrion modelini ishlab chiqdi.antioksidantbirikmalar [22].Oksidativ stresstertbutil gidroperoksid (tBOOH) yordamida induktsiya qilinadi. tBOOH Fenton reaksiyasi orqali butoksil radikallarini hosil qiladi [23]. Hosil bo'lgan radikallar tiol guruhlari va glutation zahiralarining hujayra ichidagi kamayib ketishiga yordam beradi, bu esa ochiq zebrafish embrionlarida letallik va dismorfogenezning sezilarli darajada oshishiga olib keladi. Ushbu model tBOOH ta'siriga uchragan zebrafish embrionlari uchun letallik va dismorfogenezning konsentratsiyali ta'sir egri chiziqlarini va antioksidantlar bilan oldindan ishlov berilgan embrionlarning egri chiziqlarini taqqoslash imkonini beradi; tahlil qilingan antioksidant birikmaning himoya ta'sirini o'rganish uchun statistik tahlil qilish mumkin.

Ushbu ishning maqsadi zebrafish embrionlarida oksidlovchi tomonidan qo'zg'atilgan rivojlanish toksikligiga qarshi antioksidant faollikka ega oziq-ovqat birikmalarining in vivo himoya ta'sirini baholash edi.

2. Natijalar

2.1. Zebrafish embrionlarida tBOOH uchun konsentratsiya effekti egri chiziqlari

Bizning tadqiqot guruhimiz avval ZF embrionini ishlab chiqdi va tasdiqladioksidlovchi stresshimoya faoliyatini baholash uchun modelantioksidantmoddalar (22).

Zebrafish embrionlari letallik va dismorfogenez egri chiziqlarini olish uchun tertbutil gidroperoksid (tBOOH) ta'siriga duchor bo'ladi. Zebrafish embrionlari urug'lantirilgandan keyin 24 dan 48 soatgacha (hpf) 1 dan 3,5 mM gacha bo'lgan turli konsentratsiyalarda tBOOH ta'siriga duchor bo'ladi (1-rasm). O'limga olib keladigan kontsentratsiya 50 (LC50) 2,1 mM, dismorfogenez uchun samarali kontsentratsiya 50 (EC50) esa 1,7 mM ekanligi aniqlandi. Yuqorida aytib o'tilgan egri chiziqlar zebrafish embrionlarini ilgari antioksidant birikmalar bilan solishtirish uchun ishlatilgan yoki ular tBOOH ta'siriga duchor bo'lgan.

2.2. Zebrafish embrionlarida antioksidant birikmalarning himoya ta'sirini aniqlash

Oldin tasvirlangan zebrafish modeli oziq-ovqatda mavjud bo'lgan oltita polifenol va uchta karotenoidning himoya ta'sirini baholash uchun ishlatilgan.

Oltita polifenoldan uchtasi bor ediflavonoidlar: naringenin (20 uM), apigenin (10 uM) va rutin (10 uM). Uchflavonoidlarhalokatlilik uchun konsentratsiya-javob egri chizig'ida sezilarli siljish hosil qildi. Bundan tashqari, apigenin va rutin dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi, naringenin esa dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatmadi (2-rasm).

Oleuropein (15 mkM), xlorogen kislota (20 uM) va kurkumin (15 mkM) ham tahlil qilindi. Ushbu polifenollar halokatlilik uchun konsentratsiya-javob egri chizig'ida sezilarli siljishga olib keldi. Faqat curcumin dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi (3-rasm).

Bundan tashqari, karotinoidlar likopen (20 mkM), astaksantin (20 mkM) va -karotin (25 mkM) baholandi. Likopen va astaksantin o'limga olib keladigan kontsentratsiya-javob egri chizig'ida sezilarli siljishga olib keldi. Aksincha, karotenoidlarning hech biri dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatmadi (4-rasm). Bundan tashqari, -karotin o'lim va dismorfogenez uchun egri chiziqning chapga siljishiga olib keldi, bu esa mumkin bo'lgan prooksidant ta'sirni ko'rsatishi mumkin.

3. Munozara

Kislorod inson hayoti uchun zarurdir; ammo, shu bilan birga, u toksik moddalarni ishlab chiqaradi, masalan, erkin radikallar va reaktiv kislorod turlari (ROS); bu moddalar oksidlovchi, beqaror va reaktivdir. Bundan tashqari, ular har qanday makromolekulalar bilan reaksiyaga kirishib, hujayralarga zarar etkazishi mumkin [24]. Ushbu oksidlovchi moddalarga qarshi turish uchun organizm superoksid dismutaza va glutation peroksidaza kabi antioksidant fermentlarni va dietadan olingan antioksidant birikmalarni ishlatadi. Shu sababli, so'nggi bir necha yil ichida birikmalarning antioksidant qobiliyatini o'rganish qiziqish uyg'otdi. Antioksidant faollikni aniqlashning bir necha in vitro usullari mavjud, ammo ular ovqatlanish nuqtai nazaridan cheklovlarga ega, chunki ularning hech biri fiziologik holatni keltirib chiqarmaydi [25]. Shu sababli, in vivo usullarini o'z ichiga olgan usul yanada ta'sirli natijalarga olib keladi, chunki oksidlanish stressi ko'plab tizim sharoitlariga, ayniqsa reaktsiyalarning kinetik qismlariga bog'liq bo'lgan mexanizmlarni nazarda tutadi. Bizning jamoamiz in vitroda keng o'rganilgan to'qqizta antioksidant birikmaning himoya ta'sirini sinab ko'rish uchun qimmatli in vivo usuli bo'lishi mumkin bo'lgan ZF embrion modelidan [22] foydalangan. Biz oltita fenolik birikma va uchta karotenoidni baholadik. Fenolik birikmalar inson dietasining antioksidant potentsialiga muhim hissa qo'shadi; bu birikmalardan flavonoidlar eng ko'p o'rganilgan va ko'p. Flavonoidlarning apigenin, rutin va naringeninning antioksidant faolligi o'rganildi. Ushbu flavonoidlar, asosan, turli xil mevalar, o'simliklar va sabzavotlar, yong'oqlar va piyozlarda joylashgan bioaktiv birikmalardir. In vitro tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bu flavonoidlar gidroksil radikallarini, superoksidni, vodorod periksni, azot oksidi radikallarini, DPPH va lipid peroksidatsiyasini samarali ravishda zararsizlantiradi [26-29]. Chen va boshqalar, 2012 yilda [30] zebrafish lichinka modelidan foydalangan holda QSAR tahlilini o'tkazdilar, u o'n beshta flavonoidning, shu jumladan rutinning ultrabinafsha nurlanishidan kelib chiqqan fototoksiklikka qarshi ROSni tozalash qobiliyatini baholashdi. Oldingi tadqiqotlarga ko'ra, ular kuchli biologik faollik uchun zarur bo'lgan kamida ikkita gidroksil guruhiga ega bo'lgan ikkita gidroksil guruhi va ularning pozitsiyalarining ahamiyati haqida xulosaga kelishdi [30,31]. Bundan tashqari, C3, C5 va C7 pozitsiyalarida gidroksil guruhlari flavonning barqarorligi va faolligini ta'minlashi aniqlandi [31]. Natijalarimiz uchta flavonoid uchun tBOOH sabab bo'lgan o'limga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Apigenin va rutin ham dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi; ammo naringenin dismorfogenezga qarshi hech qanday ta'sir ko'rsatmadi.

Flavonoidlarga qo'shimcha ravishda oleuropein, xlorogen kislota va curcuminning antioksidant ta'siri ham baholandi. In vitro va in vivo tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bu

uchta fenolik birikma muhim antioksidant ta'sirga ega [32-34]. Oleuropein zaytun barglari, qo'shimcha bokira zaytun moyi va Oleaceae oilasining ba'zi turlarida topilgan biofenoldir [32]. Xlorogen kislotalar (CGA) kofein va quinik kislotalar o'rtasida hosil bo'lgan efirlar bo'lib, inson ratsionida mavjud bo'lgan polifenollar guruhini ifodalaydi [35]. Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, qahva, choy, sharob va turli xil meva sharbatlari kabi CGA ni o'z ichiga olgan ichimlik turli surunkali kasalliklarning rivojlanish xavfini kamaytiradi [36-38]. Ushbu pasayishning sabablaridan biri erkin radikallarni kamaytirish va oksidlanish reaktsiyalarini inhibe qilish uchun vodorod atomlarini beradigan CGA ning antioksidant qobiliyatidir [35]. Curcumin - bu oziq-ovqat mahsulotlarini bo'yash va ziravorlar uchun ishlatiladigan polifenol. Uning antioksidant faolligi so'nggi bir necha yil ichida o'rganilgan va bir tadqiqot shuni ko'rsatadiki, u biomembranlarni peroksidlovchi zarardan himoya qilishi mumkin [39]. ZF embrion modelidan foydalangan holda, oleuropein, xlorogen kislota yoki curcumin bilan oldindan davolash tBOOH tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressning o'limga olib keladigan ta'sirini kamaytirishi kuzatildi; ammo, dismorfogenezga qarshi sezilarli himoya ta'siri faqat curcumin uchun kuzatilgan.

Antioksidant xususiyatlarga ega bo'lgan yana bir guruh izoprenoid pigmentlarning hamma joyda mavjud bo'lgan karotenoidlar guruhidir. Ular yagona kislorodni so'ndiruvchilar va ROSni tozalash vositalaridir [40]. Karotenoidlarning anti- va prooksidant faolligining molekulyar mexanizmlari hali ham to'liq tushunilmagan. Eng ko'p o'rganilgan karotinoidlar orasida likopen va -karotin mavjud. Bularni pomidor, pomidor sousi, turli mevalar, suv o'tlari va sabzavotlarda ko'p topish mumkin [18,41]. Ushbu karotinlarning himoya ta'sirini baholashda likopenning embrion halokatiga qarshi himoya ta'siri bilan antioksidant faollik ko'rsatishi aniqlandi; ammo, dismorfogenezga qarshi ta'sir topilmadi. Boshqa tomondan, -karotin ZF embrionlarida faqat oksidlovchi ta'siriga nisbatan o'lim va dismorfogenez holatlarini oshirdi; Bu -karotinning yuqori dozalari antioksidant ta'sirga ega ekanligini ko'rsatgan tadqiqotlarga muvofiq, keyinchalik kislorodning yuqori kuchlanishida prooksidant ta'sir ko'rsatadi, bu uning salbiy ta'siri bilan bog'liq bo'lishi mumkin [42]. Bundan tashqari, tadqiqot shuni ko'rsatdiki, -karotin qo'shimchasi platsebo bilan solishtirganda diabetga chalingan erkaklarning umumiy o'limiga himoya ta'siri yo'q [43]. Baholangan boshqa karotenoid astaksantin edi; u suv o'tlari, xamirturush, qizil ikra, alabalık, krill, qisqichbaqalar va kerevitlarda topilgan ksantofil karotenoididir. Bu qizil rangli, yog'da eriydigan antioksidant pigment bo'lib, provitamin A faolligiga ega emas [44]. Bizning tadqiqotimizda astaxanthin o'limga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi, ammo dismorfogenezga qarshi ta'sir topilmadi.

Xulosa qilib aytganda, baholangan to'qqiz molekuladan sakkiztasi ZF embrion halokatiga qarshi himoya ta'siri bilan antioksidant faollikni ko'rsatdi. Faqat apigenin (10 mkM), rutin (10 mkM) va kurkumin (15 mkM) qo'shimcha ravishda tBOOH tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressdan kelib chiqadigan dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Aksincha, -karotin teskari ta'sir ko'rsatib, o'lim va dismorfogenez tezligini oshirganligi aniqlandi, chunki u LC50 va EC50 qiymatlarini pasaytirdi. Oksidlanish va antioksidant kuchlarning muvozanati va vaqti embrion rivojlanishining to'g'ri tartibga solinishi va vaqtining kalitidir [45]. Ushbu antioksidantlarning kinetikasi yoki ta'sir mexanizmidagi farqlar dismorfogenezga qarshi turli xil himoya qobiliyatlarining asosiy sababi bo'lishi mumkin. Nima uchun faqat ba'zi birikmalar embrion rivojlanishida morfogenezga himoya ta'sirini ko'rsatganligini o'rganish uchun ko'proq tadqiqotlar talab etiladi. Ushbu tadqiqot embriotoksik ta'sir (letallik) va dismorfogenez ta'siri (teratogenlik) o'rtasidagi farqni aniqlashga harakat qildi. Ba'zi hollarda malformatsiyalar oldin va o'limga olib kelishi mumkin. Boshqa hollarda, o'lim va malformatsiya turli sabablarga ko'ra bo'lishi mumkin. Agar birikma halokatli va dismorfogenez konsentratsiyasi-javob egri chizig'i orasidagi bo'linishni kuchaytirsa, bu ikki ko'rinishning mustaqilligi shubhali bo'lar edi. Bizning tadqiqotimizda sinab ko'rilgan barcha antioksidant birikmalar o'ldiradigan dozada teratogen ta'sirni ikki martadan ko'proq oshirmadi; shuning uchun hech qanday antioksidant birikma uchun teratogen potentsialning ortishi kuzatilmadi [46].

Umuman olganda, bu natijalar shuni ko'rsatadiki, ushbu ZF embrion modeli oziq-ovqatni tashkil etuvchi antioksidant molekulalarning himoya ta'sirini tahlil qilish uchun qimmatli vositadir. Tadqiqotimizda apigenin, rutin va curcumin eng yuqori himoya ta'sirini ko'rsatgan kimyoviy-strukturaviy sabablarni aniqlash uchun qo'shimcha tahlillar zarur; masalan, miqdoriy tuzilma-faoliyat munosabatlarini (QSAR) aniqlash.

4. Materiallar va usullar

4.1. Axloqiy bayonot

Zebrafish lichinkalari va embrionlari bilan bog'liq protseduralar Barselona universitetining Hayvonlar etikasi qo'mitasi, ruxsat raqami yoki Kataloniya hukumati chorvachilik va baliqchilik departamentining 7971 protokoli (ProcedureDAAM 7971) tomonidan ruxsat etilgan.

4.2. Kimyoviy moddalar va eritma

TayyorlanishiTert-butil gidroperoksid (tBOOH, CAS raqami: 75-91-2) va antioksidant birikmalar TCI Europedan sotib olingan. tBOOH 0.3X Daniyo buferida eritildi (17,4 mM NaCl; 0, 23 mM KCl; 0, 12 mM MgSO4 · 7 H2O; 0, 18 mM Ca (NO3)2; 1,5 mM HEPES(N-(2-gidroksietil)piperazin-N0 -(2-etansulfon kislotasi); pH 7,4).

Naringenin (2{21}} µM) (CAS raqami: 67604-48-2), oleuropein (15 µM) (CAS raqami:32619-42-4), rutin (10 mkM) (CAS raqami : 207671-50-9), xlorogen kislota (20 mkM) (CAS raqami: 327-97-9), apigenin (10 mkM) (CAS raqami: 520-36-5), kurkumin (15 mkM) (CAS raqami: 458-37-7), likopen (20 mkM) (CAS raqami: 502-65-8), astaksantin (20 mkM) (CAS raqami: 472-61-7) va -karotin (25 mkM) (CAS raqami: 7235-40-7) Sigmar-Aldrich® kompaniyasidan xarid qilingan. Antioksidantlar 100 foiz dimetil sulfoksidda (DMSO, Sigma Aldrich, Madrid, Ispaniya) eritildi va keyinchalik 0,3 × Danieau tamponida 0,05 foiz (v/v) DMSO ning yakuniy konsentratsiyasigacha suyultirildi. Antioksidantlar o'limga yoki embrion rivojlanishiga hech qanday ta'sir ko'rsatilmagan eng yuqori kontsentratsiyaga qarab turli konsentratsiyalarda ishlatilgan (maksimal toqat qilinadigan kontsentratsiya, MTC)

4.3. Zebra baliqlarini parvarish qilish va tuxum ishlab chiqarish

Voyaga etgan yovvoyi turdagi zebrafishlar standartlashtirilgan sharoitlarda joylashtirilgan. Embrionlar to'plangan, tozalangan va hayotiyligiga qarab tanlangan. Urug'langan embrionlar Xalqaro Standartlashtirish Tashkiloti (ISO) standartlariga muvofiq standartlashtirilgan suv bilan ishlov berildi 7346-1 va 7346-2 (ISO, 1998; 2 mM CaCl2·2H2O, 0,5 mM MgSO4 ·7H2O, 0,75 mM NaHCO3 va 0,07 mM KCl). Urug'langan tuxumlar Kimmel va boshq., 1995 [47] tomonidan oldingi tadqiqotlarga ko'ra sahnalashtirildi va keyinchalik diseksiyonlu stereomikroskop ostida (Motic SMZ168, Motic China Group, LTD., Luwan, Shanxay, Xitoy) ta'sir qilish uchun tanlangan. Baliq embrionlari 27 ± 1 ◦C haroratda boshqariladigan shisha flakonlarda saqlangan.

4.4. Zebrafish embrionlarining oksidlovchi stressga ta'siri (Tert-butil gidroperoksid)

tBOOH egri chizig'ini tayyorlash uchun Boix 2020 metodologiyasiga amal qilindi. Ushbu metodologiya ZF embrionlarini oksidlovchi stress induktori, tertbutil gidroperoksid (tBOOH) ta'siriga ta'sir qilish orqali konsentratsiya-o'limga javob (LC50) egri chizig'ini va dismorfogenezni (EC50) olishga asoslangan. Zebrafish embrionlari olingandan so'ng, ular 0 dan 24 hpf gacha bo'lgan 0,3X Danieau muhitida saqlanadi. 24 dan 48 hpf gacha, embrionlar 1, 1,5, 2, 2,5, 3 va 3,5 mM turli konsentratsiyalarda tBOOH eritmalariga ta'sir qiladi. Uch nusxada zebrafishning 3 xil changalidan olingan embrionlar ishlatilgan (5A-rasm).

4.5. Antioksidant birikmalarning himoya ta'sirini aniqlash

Murakkab oksidlovchi stressga qarshi himoya ta'sirini aniqlash uchun zebrafish embrionlari birinchi navbatda 0 dan 24 ot/soatgacha bo'lgan antioksidant birikmaga ta'sir qilishdi. Konsentratsiyalar maksimal bardoshli konsentratsiya tahlillariga qarab hisoblab chiqilgan. Keyin, 24 dan 48 hpf gacha, embrionlar stress induktoriga, tBOOHga ta'sir qilishdi. Keyinchalik, embrionlarning har bir guruhi tBOOH konsentratsiyasining har birida baholandi (5B-rasm). Muhim farq bor yoki yo'qligini aniqlash uchun faqat tBOOH ta'sirining egri chizig'i va antioksidant birikmaga oldindan ta'sir qilish egri chizig'i solishtirildi.

O'nta urug'lantirilgan tuxum har bir modda va konsentratsiya uchun 2,5 ml ta'sir ko'rsatdi. Turli xil urug'lantirish hodisalaridan olingan tuxumlardan foydalangan holda uchta mustaqil replikatsiya amalga oshirildi. ZF embrionlari 24 soat davomida antioksidant birikmalarga oldindan ta'sir ko'rsatdi, so'ngra antioksidant eritma olib tashlandi, Danieau muhiti yordamida yuvish amalga oshirildi va ZF embrionlari turli tBOOH konsentrasiyalariga ta'sir qildi. O'lim darajasi 48 soatdan keyin baholandi va o'lik embrionlarning o'rtacha qiymati tegishli tahlillardan so'ng hisoblab chiqildi. Dismorfogenezni baholash uchun biz Teixido va boshqalar tomonidan tavsiflangan ball tizimiga amal qildik. [48] ​​embrionlarning dismorfogenezini 48 ot/soat atrofida hisoblash uchun. Biz 2-jadvalda tasvirlangan to'qqizta morfologik xususiyatni tanladik. Har bir konsentratsiya va davolangan guruh uchun g'ayritabiiy embrionlarning chastotasi hisoblab chiqilgan (har qanday morfologik xususiyatda 1 ballga ega embrionlar sifatida belgilangan).

Antioksidantlarga oldindan ta'sir qilish tufayli konsentratsiya-javob egri chizig'ining o'ngga siljishi oksidlovchi stress qo'zg'atuvchisiga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatadi, chunki faqat tBOOH ta'sirida bo'lgan natijalarni olish uchun induktorning yuqori konsentratsiyasi talab qilinadi. Antioksidantlarga oldindan ta'sir qilish tufayli konsentratsiya-javob egri chizig'ining chap tomoniga siljishi oksidlovchi stressning kuchayishini anglatadi.

4.6.Statistik tahlil

O'lim va dismorfogenez uchun konsentratsiya-javob egri chiziqlari GraphPad 7.02 Software Inc yordamida hisoblab chiqilgan va baholangan. Egri chiziqning har bir ma'lumot guruhi parametrlarining mosligini solishtirish uchun qo'shimcha kvadratlar yig'indisi F testi ishlatilgan. Ishonch oralig'i 95 foizga o'rnatildi.

5. Xulosalar

Ushbu tadqiqotda zebrafish embrionlaridan oltita fenolik birikma va oziq-ovqatlarda keng tarqalgan uchta karotenoidning himoya qobiliyatini sinash uchun namuna organizm sifatida foydalanilgan. Karotindan tashqari barcha birikmalar oksidlanish-stressdan kelib chiqadigan o'limga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Bundan tashqari, apigenin, rutin va curcumin ham tBOOH tomonidan qo'zg'atilgan dismorfogenezga qarshi himoya ta'sirini ko'rsatdi. Biz bu erda keltirilgan zebrafish embrion testini potentsial antioksidant quvvatga ega yangi bioaktiv oziq-ovqat komponentlarining in vivo himoya ta'sirini baholash uchun qo'llanilishini taklif qilamiz.

Kristina Arteaga 1,20, Nuria Boix13, Elisabet Teyxido 13⑤, Fernanda Marizande 2, Santyago Kadena4 va Alberto Bustillos 5,*

1 Toksikologiya bo‘limi, Farmakologiya, toksikologiya va terapevtik kimyo kafedrasi, Farmatsevtika maktabi,

Barselona universiteti, Avda Joan XXIIs/n,08028Barselona, ​​Ispaniya;

2 Sog'liqni saqlash fanlari, ovqatlanish va dieta fakulteti, Ambato texnika universiteti, Ambato 180207, Ekvador;

3 INSA-UB Oziqlantirish va oziq-ovqat xavfsizligi tadqiqot instituti, Oziq-ovqat va ovqatlanish Torribera kampusi,

Barselona universiteti, Prat de la Riba 171, 08921 Santa Coloma de Gramenet, Ispaniya

4 Amaliy fanlar fakulteti, Xalqaro SEK universiteti, Quito 170134, Ekvador;

5Sog‘liqni saqlash fanlari fakulteti, tibbiyot, Ambato texnika universiteti, Ambato 180207

Ma'lumotnomalar

1.Tan, BL; Norxayzan, ME; Lie, W.-P.-P. Oziq moddalar va oksidlovchi stress: do'stmi yoki dushmanmi? Oksid. Med. Hujayra. Longev. 2018, 2018, 9719584. [CrossRef] [PubMed]
2. Sies, H. Oksidlanish stressining biokimyosi. Angew. Chemie Int. Ed. Ingliz. 1986, 25, 1058–1071. [CrossRef]
3. Dröge, W. Hujayra funktsiyasini fiziologik nazorat qilishda erkin radikallar. Fiziol. Vahiy 2002, 82, 47–95. [CrossRef] [PubMed]
4. Rendra, E.; Riabov, V.; Mossel, DM; Sevastyanova, T.; Harmsen, MC; Kzhyshkowska, J. Reaktiv kislorod turlari (ROS) makrofaglarni faollashtirish va diabetdagi funktsiya. Immunobiologiya 2019, 224, 242–253. [CrossRef]
5. Lin, MT; Beal, MF Mitoxondriyal disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarda oksidlovchi stress. Tabiat 2006, 443, 787–795. [CrossRef] [PubMed]
6. Therond, P. Oksidlanish stressi va biomolekulalarning (lipidlar, oqsillar, DNK) shikastlanishi. Ann. Farm. Fr. 2006, 64, 383–389. [CrossRef]
7. Ermak, G.; Davies, KJA Kaltsiy va oksidlovchi stress: hujayra signalidan hujayra o'limigacha. Mol. Immunol. 2002, 38, 713–721. [CrossRef]
8. Vadxva, R.; Gupta, R.; Maurya, PK oksidlovchi stress va neyrodegenerativ va neyropsikiyatrik kasalliklarda tezlashtirilgan qarish. Curr. Farm. Des. 2018, 24, 4711–4725. [CrossRef]
9. Maritim, AC; Sanders, RA; Watkins, JB diabet, oksidlovchi stress va antioksidantlar: sharh. J. Biokimyo. Mol. Toksikol. 2003, 17, 24–38. [CrossRef]
10. Sinha, N.; Dabla, PK oksidlovchi stress va gipertenziyadagi antioksidantlar - joriy sharh. Curr. Gipertenziya. Vahiy 2015, 11, 132–142. [CrossRef]
11. Klaunig, JE oksidlovchi stress va saraton. Curr. Farm. Des. 2018, 24, 4771–4778. [CrossRef] [PubMed]
12. Sies, H. Oksidlanish stressi: redoks biologiyasi va tibbiyotida tushuncha. Redoks Biol. 2015, 4, 180–183. [CrossRef]
13. Pietta, P.-G. Flavonoidlar antioksidantlar sifatida. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef]
14. Xolliuell, B.; Gutteridge, JMC Free Radicals in Biology and Medicine, 5-nashr; Oksford universiteti nashriyoti: Oksford, Buyuk Britaniya, 2015; ISBN 9780198717478.
15. Xollman, shaxsiy kompyuter; Katan, MB Diyet flavonoidlari: qabul qilish, sog'liqqa ta'siri va bioavailability. Oziq-ovqat kimyosi. Toksikol. Int. J. nashriyot. Br. Ind. Biol. Res. Dots. 1999, 37, 937–942. [CrossRef]
16. Xertog, MG; Hollman, shaxsiy kompyuter; Katan, MB; Kromhout, D. Gollandiyada potentsial antikarsinogen flavonoidlar va ularning determinantlarini kattalarda qabul qilish. Nutr. Saraton 1993, 20, 21-29. [CrossRef]
17. Martinez, S.; Gonsales, J.; Kulebras, J.; Tuñón, M. Flavonoides: Propiedades va acciones antioksidantlar. Nutr. Xosp. 2002, 17, 271–278.
18. Arteaga, C.; Bustillos, A.; Gómez, J. Migración de neutrófifilos en lichinkalar de pez cebra exuestos a extractos de sofrito de tomate. Ark. latinoam. Nutr. 2021, 70, 216–224. [CrossRef]
19. Young, AJ; Lowe, GL karotenoidlari - antioksidant xususiyatlar. Antioksidantlar 2018, 7, 28. [CrossRef] [PubMed]
20. Xavier, AAO; Pérez-Gálvez, A. Karotenoidlar dietada antioksidantlar manbai sifatida. Subcell. Biokimyo. 2016, 79, 359–375. [CrossRef] [PubMed]
21. Stahl, V.; Sies, H. Karotinoidlarning antioksidant faolligi. Mol. Asp. Med. 2003, 24, 345–351. [CrossRef]
22. Boix, N.; Teyxido, E.; Pike, E.; Llobet, JM; Gomez-Katalan, J. Modulyatsiya va antioksidant birikmalarning zebrafishda oksidlovchi tomonidan qo'zg'atilgan rivojlanish toksikligiga qarshi himoya ta'siri. Antioksidantlar 2020, 9, 721. [CrossRef]
23. Fenton, HJH Temir ishtirokida tartarik kislotaning oksidlanishi. J. Chem. Soc. Trans. 1894, 65, 899–910. [CrossRef]
24. Phaniendra, A.; Jestadi, DB; Periyasamy, L. Erkin radikallar: xususiyatlari, manbalari, maqsadlari va ularning turli kasalliklardagi ta'siri. Hindistonlik J. Klin. Biokimyo. 2015, 30, 11–26. [CrossRef] [PubMed]
25. Fernandes-Pachon, MS; Villaño, D.; Tronkoso, AM; García-Parrilla, MC Revisión de los metodos de la evaluación de la actividad antioksidant in vitro del vino va Valoración de sus Efectos in vivo. Ark. latinoam. Nutr. 2006, 56, 110–122. [PubMed] 26. Cavia-Saiz, M.; Busto, MD; Pilar-Izquierdo, MC; Ortega, N.; Peres-Mateos, M.; Muñiz, P. Antioksidant xususiyatlari, radikal tozalash faolligi va flavonoid naringenin va uning glikozid naringinning biomolekulalarini himoya qilish qobiliyati: qiyosiy tadqiqot. J. Sci. Oziq-ovqat qishloq xo'jaligi. 2010, 90, 1238–1244. [CrossRef] [PubMed]
27. Patel, K.; Singx, GK; Patel, DK Naringeninning farmakologik va analitik jihatlari bo'yicha sharh. Chin. J. Integr. Med. 2014, 24, 551–560. [CrossRef]
28. Rashmi, R.; Magesh, SB; Ramkumar, KM; Suryanarayanan, S.; Subbarao, MV Naringeninning antioksidant potentsiali jigar to'qimasini streptozototsin tomonidan qo'zg'atilgan shikastlanishdan himoya qilishga yordam beradi. Rep. Biochem. Mol. Biol. 2017, 7, 76–84.
29. Shukla, R.; Pandey, V.; Vadnere, GP; Lodhi, S. 18-bob - Flavonoidlarning yallig'lanish kasalliklarini davolashdagi roli. Artrit va ular bilan bog'liq yallig'lanish kasalliklari uchun parhez aralashuvi sifatida bioaktiv oziq-ovqatda; Watson, RR, Preedy, VR, Eds.; Akademik matbuot: London, Buyuk Britaniya, 2019; 293–322-betlar; ISBN 978-0-12-813820-5.
30. Chen, YH; Yang, ZS; Ven, CC; Chang, YS; Vang, miloddan avvalgi; Hsiao, Kaliforniya; Shih, TL. Zebrafish lichinkalarining antioksidantlari va toksikantlari sifatida flavonoidlarning struktura-faol munosabatlarini baholash. Oziq-ovqat kimyosi. 2012, 134, 717–724. [CrossRef]
31. Kushman, M.; Chju, X.; Geahlen, RL; Kraker, AJ Protein-tirozin kinazlarining p56lck, EGFr va p60v-src potentsial ingibitorlari sifatida bir qator aminoflflavonlar sintezi va biokimyoviy bahosi. J. Med. Kimyo. 1994, 37, 3353–3362. [CrossRef]
32. Cioffi, G.; Peska, MS; De Kaprariis, P.; Braka, A.; Severino, L.; De Tommasi, N. Cilento (Kampaniya, Italiya) dan zaytun moyi va zaytun pomasining fenolik birikmalari va ularning antioksidant faolligi. Oziq-ovqat kimyosi. 2010, 121, 105–111. [CrossRef]

33. Bulotta, S.; Korradino, R.; Celano, M.; D'Agostino, M.; Mayuolo, J.; Oliverio, M.; Prokopio, A.; Iannone, M.; Rotiroti, D.; Russo, D. Oleuropein va uning semisintetik giperatsetillangan hosilalarining ko'krak saratoni hujayralariga antiproliferativ va antioksidant ta'siri. Oziq-ovqat kimyosi. 2011, 127, 1609–1614. [CrossRef]
34. Xan, J.; Talorete, TPN; Yamada, P.; Isoda, H. Oleuropein va gidroksitirozolning inson ko'krak saratoni MCF -7 hujayralariga anti-proliferativ va apoptotik ta'siri. Cytotechnology 2009, 59, 45-53. [CrossRef] [PubMed]
35. Liang, N.; Kitts, DD Oksidlanish va yallig'lanish stressini nazorat qilishda xlorogen kislotalarning roli. Nutrients 2015, 8, 16. [CrossRef] [PubMed]
36. Park, S.-Y.; Freedman, ND; Xayman, Kaliforniya; Le Marchand, L.; Wilkens, LR; Setiawan, VW Qahva iste'moli assotsiatsiyasi, oq bo'lmagan populyatsiyalar orasida umumiy va o'ziga xos o'lim sabablari. Ann. Stajyor. Med. 2017, 167, 228–235. [CrossRef] [PubMed]
37. tojik, N.; tojik, M.; Mak, I.; Enck, P. Kofe tarkibidagi asosiy fenolik komponentlar bo'lgan xlorogen kislotaning salomatlikka potentsial ta'siri: adabiyotlarni keng qamrovli ko'rib chiqish. Yevro. J. Nutr. 2017, 56, 2215–2244. [CrossRef] [PubMed]
38. Poul, R.; Kennedi, OJ; Roderik, P.; Fallowfifield, JA; Hayes, kompyuter; Parkes, J. Kofe iste'moli va sog'liq: bir nechta sog'liq natijalarining meta-tahlillarini soyabon ko'rib chiqish. BMJ 2017, 359, j5024. [CrossRef] [PubMed]
39. Tanvir, EM; Xossen, MS; Hossain, MF; Afroz, R.; Gan, SH; Xalil, MI; Karim, N. Bangladeshdan mashhur zerdeçal (Curcuma longa) navlarining antioksidant xususiyatlari. J. Oziq-ovqat sifati. 2017, 2017, 8471785. [CrossRef]
40. Fiedor, J.; Burda, K. Inson salomatligi va kasalliklarida antioksidantlar sifatida karotenoidlarning potentsial roli. Oziq moddalar 2014, 6, 466–488. [CrossRef]
41. Eggersdorfer, M.; Wyss, A. Inson ovqatlanishi va sog'lig'ida karotenoidlar. Ark. Biokimyo. Biofizika. 2018, 652, 18–26. [CrossRef]
42. Padmanabxan, P.; Cheema, A.; Paliyath, G. Solanaceous Fruits, jumladan, pomidor, baqlajon va qalampir, 1-nashr; Elsevier Ltd: London, Buyuk Britaniya, 2015 yil.
43. Kataja-Tuomola, MK; Kontto, JP; Männistö, S.; Albanes, D.; Virtamo, JR. Alfa-tokoferol va beta-karotin qo'shimchasining makrovaskulyar asoratlar va diabetdan umumiy o'limga ta'siri: ATBC tadqiqoti natijalari. Ann. Med. 2010, 42, 178–186. [CrossRef]
44. Ambati, RR; Moi, PS; Ravi, S.; Aswathanarayana, RG Astaxanthin: Manbalar, ekstraktsiya, barqarorlik, biologik faollik va uning tijorat qo'llanilishi - Sharh. Mart Dorilar 2014, 12, 128-152. [CrossRef] [PubMed]
45. Dennery, PA Oksidlanish stressining embrion rivojlanishiga ta'siri. Tug'ma nuqsonlar Res. C Embrion Today 2007, 81, 155–162. [CrossRef] [PubMed]
46. ​​Selderslaghs, IWT; Blust, R.; Witters, HE 27 ta birikmadan iborat o'quv majmuasidan foydalangan holda rivojlanish toksikligi va embriotoksikligini tekshirishning muqobil usuli sifatida zebrafish tahlilining texnik-iqtisodiy asoslanishi. Qayta ishlab chiqarish. Toksikol. 2012, 33, 142–154. [CrossRef]
47. Kimmel, CB; Ballard, WW; Kimmel, SR; Ullmann, B.; Shilling, TF Zebrafishning embrion rivojlanish bosqichlari. Dev. Dyn. 1995, 203, 253–310. [CrossRef] [PubMed]
48. Teyxido, E.; Pike, E.; Gomes-Katalan, J.; Llobet, JM. Zebrafish embrionining teratogenligini tahlil qilishda rivojlanish kechikishini baholash. Toksikol. In Vitro 2013, 27, 469–478. [CrossRef] [PubMed]