Sistanosid A ning tuxumdonga o'tkazilgan sichqonlarning suyak metabolizmiga terapevtik ta'siri

1.Kirish

Osteoporoz, tizimli skelet "jim qotil" so'nggi yillarda dunyo bo'ylab 2000 milliondan ortiq odamning sog'lig'iga jiddiy xavf tug'dirdi.. Bu suyak massasining past zichligi (KMD) va mikro-arxitekturaning buzilishi bilan tavsiflanadi, bu suyak shakllanishidan ortiq suyak rezorbsiyasidan kelib chiqadi va nihoyat, osteoporotik sindirishga olib keladi.. Hozirgi vaqtda osteoklastik differentsiatsiya va rezorbsiyani blokirovka qiluvchi vositalarni aniqlash osteoporoz uchun terapevtik dorilarni ishlab chiqishning umumiy va muvaffaqiyatli strategiyasidir., va haqiqatan ham ko'plab sintetik vositalar mavjud, jumladan estradiol valerat va natriy alendronat, ularosteoporozning oldini olish va davolash. Biroq, kasalliklar uchun dorilar idealdan uzoqdir; Ushbu dorilarning ba'zilari endometrium va ko'krak saratoni xavfini oshirishi mumkin, shuningdek, giperkalsemiya, giperkaltsiuriya va boshqalar kabi nojo'ya ta'sirlarga ega bo'lishi mumkin., bu ularning klinik qo'llanilishini cheklaydi. Shu sababli, ming yillikdan ko'proq vaqt davomida an'anaviy xitoy dori-darmonlari (TCM), ayniqsa ajratilgan bioaktiv birikmalar va fraksiyalarga ega qutulish mumkin bo'lgan TCM, Osiyo mamlakatlarida turli kasalliklarning, shu jumladan osteoporozning oldini olish va davolash uchun xavfsiz va samarali ravishda keng qo'llanilgan.. 

OSTEOPOROZ KASALLIGINI DAVOLASH VA OLDINI OLISH UCHUN TABIY CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Osteoporoz osteoklastogenezning kuchayishi tufayli suyak rezorbsiyasining kuchayishi bilan tavsiflanadi va bu jarayon gematopoetik monotsitlarning osteoklast prekursorlariga ulanishini o'z ichiga oladi, ular qayta qurishdan o'tayotgan suyak joylarini nishonga olgan ko'p yadroli osteoklastlarni hosil qiladi [4]. Osteoblastlardan ajralib chiqadigan asosiy omil bo'lgan yadro omil-kB ligand (RANKL) uchun retseptor faollashtiruvchisi monotsitlarning osteoklastlarga differensiatsiyasini rag'batlantiradi [8,9]. RANKL ning RANK retseptorlari bilan o'zaro ta'siri TNF retseptorlari bilan bog'liq omil (TRAF6) adapter signalini jalb qilish orqali NF-kB, PI3K / Akt va kaltsiy / kalmodulinga bog'liq kinazni o'z ichiga olgan hujayra ichidagi hodisalar kaskadiga olib keladi. Natijada, TRAP, katepsin K va DPDni o'z ichiga olgan bir nechta osteoklast bilan bog'liq marker genlari yuqori tartibga solinadi va suyaklarning rezorbsiyasi jarayoni tezlashadi.

Feniletanoid glikozidlar shifobaxsh oʻsimliklarda keng tarqalgan glikozid bogʻ orqali -glyukopiranoza (apioza, galaktoza, ramnoz, ksiloza va boshqalar) bilan bogʻlangan sinnamik kislota va gidroksilfenil etil qismlari bilan tavsiflanadi [10]. Cistanoside A (Cis A) faoldirfeniletanoid glikozidyilda Cistanche deserticola YC Ma. Xitoy farmakopeyasining ma'lumotlariga ko'ra, C. deserticola an'anaviy ravishda buyrak-yin etishmovchiligi, mushaklar kuchsizligi, belning zaifligi va boshqalarni davolash uchun ishlatilgan va feniletanoid glikozidlar bu o'simlikning asosiy bioaktiv tarkibiy qismlaridir [11]. TCMning "buyrak" nazariyasiga asoslanib, buyrak suyak tizimini boshqarishi mumkin, ya'ni suyaklarning rivojlanishi va funktsiyalari buyrak mohiyatiga bog'liq va bu buyrak mohiyati suyaklarni oziqlantirish uchun suyak iligiga aylanishi mumkin, skeletning o'sishi va tiklanishiga yordam beradi va skeletni mustahkamlaydi [12]. C. deserticola buyrakni kuchaytirishi mumkinligi sababli, biz Cis A osteoporozning oldini olishi va davolashi mumkin deb taxmin qildik. Shuning uchun ushbu tadqiqot potentsialini tasdiqlash uchun ishlab chiqilganOsteoporozning oldini olishda Cis Aovariektomilashtirilgan sichqon modelidan foydalangan holda, suyak shakllanishi va rezorbsiya belgilari, shuningdek, ushbu agentning antiosteoporotik bioaktivligini baholash uchun tegishli potentsial mexanizmlar aniqlandi.

2. Natijalar va muhokama

2.1. Natijalar

2.1.1. Cis A ning suyak uch nuqtali egilish sinoviga ta'siri

Cis A bilan davolash suyakni mustahkamlaydimi yoki yo'qligini tahlil qilish uchun biz femurlarni uch nuqtali egilish sinovidan o'tkazdik. 1-rasmda ko'rsatilganidek, suyak sinishi paytida qo'llaniladigan maksimal yuk 20 mg/kg va 8{12}} mg/ bilan davolash qilingan hayvonlarda 21,5% va 22,0% yuqori bo'lgan. kg Cis A, mos ravishda, tuxumdonlar (OVX) guruhidagi hayvonlarga nisbatan (p < 0.05). Shu bilan birga, Cis A bilan davolash ham suyakning qattiqligini kuchaytirdi; Cis A bilan davolash qilingan barcha sichqonlar mos ravishda 121.0 ± 12,1 (p <0,05), 124,1 ± 16,2 (p <0,05) va 127,7 ± 9,6 (p <0,01) ma'lumotlari bilan qattiqlikni sezilarli darajada oshirdi. OVX sichqonlarining 102,2 ± 10,7 ga nisbatan. Natijalar shuni ko'rsatadiki, Cis A bilan davolash qilingan OVX sichqonlarida suyak mustahkamligi oshishi suyak miqdorining ko'payishi va suyak sifatining yaxshilanishi bilan bog'liq.

2.1.2. Cis A ning suyak mikroarxitekturasiga ta'siri

Mikro-KT bilan o'lchangan sichqonlarning uch o'lchovli trabekulyar suyagi mikroarxitekturasi (2-rasm va 1-jadval) intuitiv ravishda OVX guruhidagi sichqonlar soxta guruh bilan solishtirganda trabekulyar maydon va trabekulyar sonning sezilarli darajada qisqarganligini ko'rsatadi, bu esa ovariektomiya ekanligini ko'rsatadi. suyak massasi zichligi (BMD, -46%), suyak mineral tarkibi (BMC, -66%), to'qimalarning mineral tarkibi (TMC, -85%), suyak hajmi ulushi (BVF, -82%) sezilarli darajada pasayishiga olib kelishi mumkin. trabekulyar soni (Tb. N, -76%) va trabekulyar ajralishning ortishi (Tb. Sp, +80%) to'qimalarning umumiy mineral zichligi (TMD) va trabekulyar qalinligida (Tb. Th) hech qanday o'zgarishsiz. operatsiya 12 hafta. Biroq, Cis A bilan davolash qilingan OVX sichqonlari dozaga bog'liq ravishda BMD (+43%~57%), BMC (+65%~73%), TMC (+83%~) oshishiga olib keldi. 90%, BVF (+80%~88%), Tb koʻproq kamayadi. Sp (-79% ~ 88%) va yanada yaxshilangan Tb. OVX guruhiga nisbatan N (+73%~82%). TMD ovariektomiyaga ta'sir qilmaganga o'xshaydi, ammo estradiol valerat (EV) bilan davolash sezilarli darajada oshdi.

2.1.3. Cis A ning suyak shakllanishi va rezorbsiya belgilariga ta'siri

Cis A ning suyak rezorbsiyasi belgilariga, jumladan TRAP, DPD, katepsin K suyak hosil bo'lish indeksi ALP va suyak Gla-oqsiliga (BGP) ta'siri 3-rasmda ko'rsatilgan. 12 haftalik ovariektomiya operatsiyasidan so'ng, TRAP, DPD faoliyati , va OVX guruhidagi katepsin K sezilarli darajada oshdi, ayniqsa DPD, deyarli 55,6% ga oshdi; TRAP va katepsin K soxta guruhga nisbatan mos ravishda 43,5% va 38,1% ga yaxshilandi. 12 hafta davomida og'iz orqali qabul qilingan Cis A yuqorida qayd etilgan barcha suyak rezorbsiyasi belgilarining oldini olishda sezilarli salohiyatni ko'rsatdi, ayniqsa yuqori dozada (8{13}} mg/kg) DPD faoliyatini bostirishga sezilarli ta'sir ko'rsatadi. ga nisbatan 45.0%, TRAP 49.0% va katepsin K 44.0% ga (p < 0.01), mos ravishda OVX guruhi (3-rasm). OVX guruhida ALP va BGP faolligining ortib borayotgan tendentsiyasi ko'rsatilgan bo'lsa-da, statistik jihatdan muhim o'zgarishlar kuzatilmadi. Shu bilan birga, soxta guruhga nisbatan past va yuqori Cis A bilan davolash qilingan guruhlarda ALP faolligida sezilarli yaxshilanish kuzatildi (p <0.01).

OSTEOPOROZ KASALLIKLARINI OLDINI OLISH UCHUN TABIY CISTANCHE TUBULOSAPHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.1.4. Cis A ning TRAF6, NF-kB PI3K, Akt, OPG va RANKL oqsillarini ifodalash darajalariga ta'siri

Western blot tahlili shuni ko'rsatdiki, sham guruhi bilan solishtirganda, OVX guruhidagi TRAF6, NF-kB va RANKL oqsillari darajasi sezilarli darajada oshgan (p < 0.05), OPG esa, PI3K va Akt sezilarli darajada kamaydi (4-rasm). Cis A (20 mg/kg yoki 80 mg/kg) TRAF6 ifodasini sezilarli darajada pasaytirdi (p <0,05), keyin RANKL ifodasi kamayadi va OPG ortdi, ya'ni OPG/RANKL nisbati yuqoriga ko'tarildi. Natijada, NF-kB ning signalizatsiya kaskadlari pastga tushirildi va PI3K / Akt Cis A bilan davolash bilan ko'tarildi (p <0.05).

2.2. Munozara

Osteoporoz kasalligi uchun hozirgi terapevtik imkoniyatlarning cheklovlarini hisobga olgan holda, oziq-ovqat yoki tabiiy qutulish mumkin bo'lgan dorivor o'simliklardan muqobil variantlarga ehtiyoj bor. TCM dan samarali antiosteoporotik vositalarni topish bo'yicha davom etayotgan sa'y-harakatlarimizning bir qismi sifatida biz antiosteoporotik xususiyatlarga ega bo'lgan bir qator ekstraktlar, fraktsiyalar va birikmalarni topdik [13,14]. Cistanche deserticola muhim klassik TCM bo'lib, u qulay xavfsizlik profiliga ega [15] va buyrak etishmovchiligini davolash uchun keng dorivor funktsiyalarga ega [16]. TCM nazariyasiga ko'ra, buyrakni tetiklantiruvchi ta'sirga ega bo'lgan TCM odatda edi.osteoporozni davolash uchun ishlatiladi; feniletanoid glikozidlar bu o'simlikning asosiy bioaktiv tarkibiy qismlari bo'lib, bu shuni anglatadiki,feniletanoid glikozidlarC. deserticola tarkibidagi antiosteoporotik xususiyatga ega bo'lishi mumkin. C. deserticola ekstrakti BMDning kamayishini sezilarli darajada inhibe qilishi va OVX tufayli trabekulyar mikroarxitekturaning yomonlashishini oldini olishi isbotlangan [17]. In vitro tajribada u ALP, suyak morfogenetik oqsili-2 va osteopontin mRNKni, shuningdek, madaniy osteoblastlarning suyak mineralizatsiyasini sezilarli darajada oshirdi [18]. Xitoy farmakopiyasida [11] rasman qayd etilgan C. desertikolaning asosiy bioaktiv komponenti bo‘lgan echinakozid sutkada 30~270 mg/kg tana vazniga [19] yuqori dozada antiosteoporotik faollik ko‘rsatdi va keyingi in vitro natijalari shuni ko‘rsatdiki, MC3T3-E1 Subclone 14 hujayralarida OPG/RANKL ratsionini oshirish orqali suyak regeneratsiyasiga yordam berishi mumkin [20]. Cis A C. deserticola dan ajratilgan feniletanol glikozidlaridan biri bo'lib, bir nechta hisobotlarda bu birikmaning antioksidant faolligi [21] va yallig'lanishga qarshi xususiyatlar [22,23] borligi aniqlandi. Yaqinda nashr etilgan maqolada Cis A sichqonlarda CCl4 va alkogolli gepatotoksisitda himoya faolligini ko'rsatganligi aniqlangan va u in vitroda birlamchi ekilgan sichqon gepatotsitlarida etanoldan kelib chiqqan zararga qarshi himoya xususiyatini ko'rsatdi [24]. Bizning hozirgi tadqiqotimiz natijalari shuni ko'rsatdiki, Cis A ovariektomizatsiya qilingan sichqon modelidan foydalangan holda past dozada (20 ~ 80 mg / kg tana vazniga) antiosteoporotik faollikka ega edi va bu bioaktivlik TRAF6 darajasini pasaytirish orqali amalga oshirildi. RANKL va NF-kB ifodasi va OPG, PI3K va Aktni rag'batlantirish, ya'ni OVX sichqonlarida Cis A ning terapevtik ta'siri TRAF vositachiligida NF-kappaB inaktivatsiyasi va PI3K/Akt faollashuvi mexanizmi orqali bo'lgan.

Ma'lumki, ovariektomiya BMD, biomexanik kuch, suyak sifati va trabekulyar suyak mikroarxitekturasining aniq pasayishi bilan osteoporozga olib kelishi mumkin va yuqoridagi o'zgarishlar qisman estrogen etishmovchiligi bilan bog'liq [25]. Hozirgi in vivo eksperimentda bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatadiki, ovariektomiya natijasida kelib chiqqan osteoporoz biomexanik kuch va trabekulyar strukturaviy parametrlar, shu jumladan BMD, BMC, TMC va Tb ning sezilarli darajada pasayishiga olib keldi. N va ortib borayotgan Tb. Sp; va Cis A ni davolash suyakning mexanik xususiyatlarini sezilarli darajada yaxshiladi, shu jumladan maksimal yuk va qattiqlik, BMD yaxshilandi va OVX guruhidagi sichqonlar bilan solishtirganda suyak trabekulyar mikroarxitekturasining strukturaviy parametrlarining ko'pchiligi yaxshilandi, bu Cis A suyak sifatini yaxshilashda samarali ekanligini ko'rsatadi. va OVX sichqonlarida trabekulyar mikroarxitektura.

Umumiy BMDdan tashqari, uch nuqtali egilish testi va trabekulyar suyak mikroarxitekturasini o'lchash to'g'ridan-to'g'ri osteoporozni tashxislashi mumkin edi, suyak shakllanishi belgilari, shu jumladan ALP va BGP va suyak rezorbsiyasi indeksi, shu jumladan TRAP, DPD va katepsin K. Cis A ning tegishli antiosteoporotik mexanizmlarini yoritib berish. Bizning tadqiqotimizda OVX guruhidagi sichqonlarda ALP faolligi sezilarli bo'lmagan o'sish tendentsiyasini ko'rsatdi, bu postmenopozal osteoporozda suyak aylanishining [26,27] ortib borayotganini ko'rsatdi; yuqori (80 mg/kg tana vazniga/kun) va past (20 mg/kg tana vazniga/kun) Cis A muolajalari soxta guruhga nisbatan ALP faolligini sezilarli darajada yaxshilaganini ko'rsatdi, BGP faolligiga esa ta'sir qilmaganga o'xshaydi. barcha davolangan guruhlarda ovariektomiya; OVX guruhida TRAP, DPD va katepsin K sezilarli darajada oshdi va Cis A ma'muriyati barcha uchta suyak rezorbsiyasi belgilarini sezilarli darajada kamaytirdi. Yuqoridagi ma'lumotlar Cis A ning potentsial antiosteoporotik faollikka ega ekanligini ko'rsatdi va bu ta'sir suyak metabolizmini tartibga solish, shu jumladan suyak rezorbsiyasini bostirish va suyak shakllanishini oshirish orqali amalga oshirildi.

Osteoblast va osteoklast o'rtasidagi muvofiqlashtirish skelet yaxlitligini saqlashda hal qiluvchi omil hisoblanadi. TRAPni ifodalovchi osteoklastlar aktin bilan bog'langan plomba zonalarini hosil qilish orqali suyak yuzasiga yopishadi, ular ichida katepsin K kabi proteolitik fermentlar ajralib chiqadi va bu rezorbsiya chuqurlarining paydo bo'lishiga olib keladi. Osteoblastik naslning yetilmagan hujayralari tomonidan osteoklastogenezning modulyatsiyasi RANKL va OPG [28] tomonidan vositachilik qiladi. OPG - bu osteoklastogenezning RANKL faollashuvini inhibe qiluvchi, shu bilan suyak rezorbsiyasini kamaytiradigan aldash retseptorlari. Osteoklastlarning ajdodlari uchun muhim signalni ta'minlaydigan RANKL - osteoklastlarning shakllanishiga yordam beruvchi o'simta nekrozi omili ligandlar oilasining membrana bilan bog'langan molekulasi. OPG/RANKL ifodasining nisbati osteoklastogen faollikning asosiy parametri hisoblanadi va RANKL tomonidan faollashtirilgan signal kaskadlari NF-kB va PI3K yo‘llarini o‘z ichiga oladi [29]. NF-kB yo'lining osteoklastogenezga bo'lgan ahamiyati sichqonlarda NF-kB ning yo'q qilinishi etuk osteoklastlarning yo'qligiga olib kelganligi bilan ko'rsatiladi [30]. TRAF6 yangi anti-osteoporotik dorilar uchun istiqbolli maqsad sifatida isbotlangan. Noto'g'ri osteoklastogenez va og'ir osteopetrozni ko'rsatadigan TRAF{11}}kam sichqonlar TRAF6 ning suyak metabolizmidagi ahamiyatini ko'rsatdi. Rivojlanayotgan dalillar RANKL/RANK vositachiligidagi signal kaskadlarida TRAF6 uchun muhim tartibga solish funktsiyasiga ishora qiladi [4,31]. Mavjud tadqiqot ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, OVX sichqonlarida Cis A bilan davolash TRAF6 protein ekspresyon darajalarining pasayishiga, RANKLning pasayishiga va OPG ifodalarining ko'payishiga olib keldi, shu bilan quyi oqim NF-kB ning RANKL faollashuvini oldini oldi va PI3K/Akt signal yo'llarini faollashtirdi. Cis A TRAF vositachiligida NF-kappaB inaktivatsiyasi6-va PI3K/Akt faollashuvi orqali osteoklast differentsiatsiyasini inhibe qiladi va OPG/RANKL nisbatini oshiradi, keyinchalik osteoklastogenezni inhibe qiladi va suyak shakllanishiga yordam beradi.

TABIY CISTANCHE TUBULOSA UCHUNANTIOSTEOPOROTIK FAOLIYATPHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Materiallar va usullar

3.1. O'simlik materiallari, tayyorlash va aniqlash

Cistanche deserticola poyalariNingxia tibbiyot universiteti farmatsiya boʻlimi professori Xue-yan Fu tomonidan aniqlangan YC Ma 2015-sentabrda Xitoyning Ningxia provinsiyasi, Yongning okrugida toʻplangan. Vaucher namunasi (№20150901) dorixona boʻlimining gerbariysida saqlangan. Jami 30,0 kg havoda quritilgan C. deserticola poyasi 3 marta 70% etanol (180 L, 3 × 2 soat) bilan qayta oqim bilan ekstraksiya qilindi. Filtrlar birlashtirildi va uchta fraktsiya hosil qilish uchun suvdagi etanolni (0%, 20% va 60%, har biri 60 L) ko'paytiruvchi bosqichma-bosqich gradient erituvchi tizimiga ega bo'lgan makro gözenekli qatron (AB{12}}) ustuniga o'tkazildi, so'ngra Fraksiyaning 60% Sephadex LH-20 (Pharmacia Biotech Co., Uppsala, Shvetsiya) va yarim tayyorlovchi yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (Agilent 1100, Agilent Technologies, Waldbronn, Germaniya) yordamida och sariq rangga ega bo‘lish uchun qo‘shimcha tozalandi. sistanozid A 4,5 g (Cis A; hosildorlik 0,015%). Tuzilma asosan NMR (Bruker Avance, 400 MGts, Germaniya) va MS spektrlari (Agilent 6540, Agilent Technologies) ma'lumotlar tahlillari orqali aniqlandi, ular xabar qilingan ma'lumotlarga mos keldi [19]. Uning tozaligi HPLC maydonini normallashtirish usuli bilan aniqlandi (5-rasm). Hayvonlar tajribasida, bizning dastlabki tajribamizga asoslanib, Cis A ning dozasi kuniga 20-80 mg / kg ni tashkil etdi.

3.2. Kimyoviy moddalar va erituvchilar

Quyidagilar ishlatilgan: umumiy protein ekstraktsiyasi to'plami va BCA oqsilini kvantlash to'plamlari (Ken Gen Biotech. Co. Ltd, Nankin, Xitoy), TRAF6, NF-kB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -aktin va tubulinning asosiy antikorlari ( Hujayra signalizatsiya texnologiyasi, Beverli, MA, AQSh), xren peroksidaza bilan konjugatsiyalangan echkiga qarshi quyon IgG (ZSGB-BIO, Pekin, Xitoy), estradiol valerat (1 mg, Delpharm Lille SAS, Parij, Frantsiya), suyak glasining ikkilamchi antikorlari -oqsil va deoksipiridinolin o'zaro bog'liqliklari Elishay to'plamlari (Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanxay, Xitoy) va katepsin K ELISA to'plami (Biovision, Mountain View, CA, AQSh). Boshqa barcha kimyoviy moddalar va biokimyoviy moddalar AR analitik darajadagi reagentlar edi.

3.3. Hayvonlar tajribalari

Tana vazni 26.0 ± 1.62 g boʻlgan, 8 haftalik, 60 ta urgʻochi Kunming shtammi sichqonlari Ningxia tibbiyot universitetidan sotib olindi va 1{8}} sichqon standart laboratoriya dietasi bilan bitta qafasda saqlangan. va musluk suvi havo bilan boshqariladigan holatda (24.0 ± 0.5 ◦C, 45%–50% namlik va 12 soat/12 soat yorugʻlik-qorongʻi yoritish davrlari). 1 hafta davomida moslashgandan so'ng, operatsiya aseptik holatda amalga oshirildi va barcha sichqonlar xloralgidrat (100 mg / kg, ip) bilan behushlik qilindi; tuxumdonlarni olib tashlamasdan jarrohlik ta'siriga uchragan sichqonlar soxta guruh edi (n=10); boshqalarga OVX guruhlari (n=50) sifatida ikki tomonlama ovariektomiya qilingan. Yuqoridagi hayvonlar tajribalari laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha yo'riqnomaga muvofiq amalga oshirildi va Ningxia tibbiyot universiteti bioetika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Yana bir {0}} haftalik tiklanish davridan so'ng, yuqoridagi 50 ta OVX sichqonlari tasodifiy va teng ravishda 5 guruhga bo'lingan: og'iz orqali ijobiy nazorat (EV) sifatida estradiol valerat (1 mg / kg / kun) bilan davolash qilingan; 20, 40 va 80 mg/kg/kun Cis A ni mos ravishda past, o'rtacha va yuqori dozalash guruhlari bilan; avtomobil bilan (0,5% Karboksimetilselüloz ()-Na) model guruhi (OVX). Barcha sichqonlar og'iz orqali og'iz orqali 1 ml / 100 g tana vazniga teng hajmdagi vosita, EV yoki Cis A, operatsiyadan keyingi ikkinchi haftada boshlangan va 12 hafta davom etgan. Tana vazni ikki haftada bir marta o'lchanadi, doza mos ravishda o'rnatiladi. Oxirgi og'iz orqali yuborishdan so'ng, qon namunalari behushlik qilingan sichqonlarning femoral arteriyasidan olingan, ivishiga ruxsat berilgan va sarum olish uchun 3000 × g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilingan; o'ng son suyagi va tibia kesildi. Barcha namunalar suyak mikroarxitekturasini va osteoporoz bilan bog'liq sarum biokimyoviy parametrlarini keyingi baholash uchun -80 ◦C da saqlangan.

3.4. Uch nuqtali egilish sinovi

Sichqonchaning o'ng son suyagining biomexanik xususiyati uch nuqtali egilish tartibi yordamida aniqlandi. Sinov paytida femurning distal va proksimal uchlarini mahkamlash uchun bukuvchi jig V shaklidagi tayanchga ega. Femur gorizontal holatda oldingi tomoni yuqoriga ko'tarildi va o'rta femurning markazida yuk pastga qarab qo'llaniladi. Qo'llab-quvvatlovchilar orasidagi masofa 8 mm edi. Suyaklar BOSE sinov mashinasi (3220) (Bose Corporation, Endura TEC Systems Group, Minnetonka, MN, AQSh) yordamida ishlamay qolguncha 0,02 mm/s doimiy siljish tezligida yuklangan. Yukning siljishi egri chiziqlari olingan va strukturaviy va moddiy xususiyatlarni, shu jumladan maksimal yuk, eng yuqori yuk, elastik modul, egilish kuchi va boshqalarni hisoblash uchun ishlatilgan.

3.5. Mikrokompyuterli tomografiya tahlili

Barcha sichqonlarning o'ng son suyaklari yopishgan yumshoq to'qimalardan tozalandi va yuqoridagi o'ng distal femur metafizikasining trabekulyar suyagi mikroarxitekturasi mikro-KT skaneri (eXplore Locus SP, GE Healthcare, London, ON, Kanada) tomonidan aniqlandi. har uch fazoviy o'lchovda izotropik ruxsat 8 mikronga o'rnatiladi. Qiziqish mintaqasi (ROI) femurning o'sish plastinkasida bir xil koordinatalar yordamida tanlangan. Suyak morfometrik parametrlari, jumladan, BMD, suyak mineral tarkibi (BMC), to'qimalarning mineral tarkibi (TMC), to'qimalarning mineral zichligi (TMD), suyak hajmi ulushi (BVF), trabekulyar ajralish (Tb. Sp), trabekulyar soni (Tb. N). ) va trabekulyar qalinligi (Tb. Th), ABA suyak tahlil dasturi yordamida ROIni tahlil qilish orqali baholandi.

3.6. Biokimyoviy parametrlarni tahlil qilish

Sarum ishqoriy fosfataza (ALP) faolligi avtomatik analizatorda o'lchandi (Ciba-Corning 550 Diagnostics, Corp., Oberlin, OH, AQSh)); sarum DPD, BGP va katepsin K darajalari mos keladigan reagentlar to'plamlari bilan aniqlandi va tartratga chidamli kislota fosfataza (TRAP) tegishli adabiyotlarga muvofiq tahlil qilindi [32].

3.7. Western Blot tahlili

Turli guruhlardagi TRAF6, NF-kB PI3K, Akt, OPG va RANKL ning protein ifoda darajalari Western blot tahlili bilan aniqlandi. Qisqacha aytganda, oqsil 0.5 mM fenilmetilsulfonil ftorid, proteaza va fosfataza ingibitorlarini o'z ichiga olgan lizis buferi yordamida sichqonlarning o'ng tibiasidan olingan. Keyinchalik tahlil qilish uchun supernatantlarni olish uchun lizatlar 10 daqiqa davomida 12, 000 × g da santrifüj qilindi. Lizatlarning oqsil kontsentratsiyasi bicinchoninic kislota miqdorini aniqlash tahlili yordamida o'lchandi. Proteinlar (50-100 mkg) 10% SDS-PAGE yordamida ajratildi, poliviniliden diftorid membranasiga o'tkazildi va TRAF6, NF-kB RANKL, PI3K, Akt, OPG va -aktin (1:50) ga qaratilgan monoklonal birlamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. Xuddi shu membran tozalandi va qayta tekshirildi, Image Lab dasturiy ta'minoti tomonidan aniqlangan xemiluminesans signallari bilan. -aktin yoki tubulin ichki nazorat vazifasini bajargan.

3.8. Statistik tahlil

Hayvonlar tajribasidan olingan barcha ma'lumotlar SPSS (versiya 22.0, IBM SPSS Statistics, IBM Corp., Armonk, Nyu-York, NY, AQSH) tomonidan Dennet testi bilan farqni bir tomonlama tahlil qilish orqali tahlil qilindi. ) dasturiy ta'minot; p < 0.05 qiymati statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblandi va barcha natijalar o'rtacha ± SD sifatida taqdim etildi.

4. Xulosalar

Xulosa qilib aytganda, Cis A,faol feniletanoid glikozidlarC. deserticola dan ajratilgan, OVX sichqonlarida sezilarli antiosteoporotik faollikni ko'rsatdi va molekulyar mexanizm TRAF{0}}vositalangan NF-kappaB inaktivatsiyasi va PI3K/Akt faollashuvi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, shuning uchun osteoporozni davolash uchun istiqbolli vosita bo'lishi mumkin. kasallik.

TABIY CISTANCHE TUBULOSA UCHUNANTIOSTEOPOROTIK FAOLIYATPHGS75% ECH 30% ACT 12%