Trombomodulin G-protein bilan bog'langan retseptorlari 15/Akt signal yo'li orqali o'sish omili-b1 vositachiligidagi surunkali buyrak kasalligini yaxshilaydi

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Atsuro Takeshita1,2,8 , Taro Yasuma1,2,8 , Kota Nishihama1 , Korina N. D'Alessandro-Gabazza2, Masaaki Toda2 , Toshiaki Totoki4 , Yuko Okano1,2 , Akihiro Uchida1 , Ryo Inoue6 Vajiain5 , Fridman D'Alessandro2, Tetsu Kobayashi3, Yoshiyuki Takei4, Akira Mizoguchi5, Yutaka Yano1,9 va Esteban C. Gabazza2,9

1 Qandli diabet, metabolizm va endokrinologiya kafedrasi, Mie universiteti Oliy tibbiyot maktabi, Tsu-siti, Mie, Yaponiya; 2 Immunologiya kafedrasi, Mie universiteti Oliy tibbiyot maktabi, Tsu-siti, Mie, Yaponiya; 3 O'pka va jiddiy tibbiy yordam bo'limi, Mie universiteti Oliy tibbiyot maktabi, Tsu-siti, Mie, Yaponiya; 4 Gastroenterologiya va gepatologiya kafedrasi, Mie universiteti Oliy tibbiyot maktabi, Tsu-siti, Mie, Yaponiya; 5 Nerv regeneratsiyasi va hujayra aloqasi bo'limi, Mie universiteti Oliy tibbiyot maktabi, Tsu-siti, Mie, Yaponiya; 6 Eksperimental hayvonlar markaziy instituti, Kavasaki-ku, Kavasaki, Kanavaga, Yaponiya; va 7 ta Nefrologiya bo'limi, Taizhou kasalxonasi, Wenzhou tibbiyot universiteti, Lihai, Zhejiang viloyati, Xitoy Xalq Respublikasi.

Xalqaro buyraklar (2020) 98, 1179–1192; https://doi.org/10.1016/ j.kint.2020.05.041

Mualliflik huquqi ª 2020, Xalqaro Nefrologiya Jamiyati. Elsevier Inc tomonidan nashr etilgan. Bu CC BY-NC-ND litsenziyasi (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/) ostida ochiq kirish huquqiga ega maqola.

Muloqot: Esteban C. Gabazza, Mie universiteti tibbiyot fakulteti immunologiya boʻlimi, Edobashi 2-174, Tsu-siti, Mie 514-8507, Yaponiya. E-mail: gabazza@doc.medic.mie-u.ac.jp; yoki Yutaka Yano, qandli diabet, metabolizm va endokrinologiya, Mie universiteti oliy tibbiyot maktabi, Edobashi 2-174, Tsu-siti, Mie 514-8507, Yaponiya. E-mail: yanoyuta@clin.medic.mie-u.ac.jp 8 AT va TY bu ishga teng hissa qo‘shgan. 9 YY va EKG hammualliflardir. 2019-yil 1-sentabrda olingan; 2020-yil 24-aprelda qayta koʻrib chiqilgan; 2020-yil 7-mayda qabul qilingan

Kalit so'zlar: apoptoz; surunkali buyrak kasalligi; G-oqsil bilan bog'langan retseptorlari; rekombinant inson trombomodulini; transformatsion o'sish omili-b1

Buyrak fifibrozi surunkali buyrak kasalliklarining keng tarqalgan oqibati bo'lib, surunkali buyrak kasalligining yakuniy bosqichiga o'tadi va faqat almashtirish terapiyasi bilan davolash mumkin bo'lgan organ etishmovchiligi. Transformatsiya qiluvchi o'sish omili-b1 buyrak fifibrozisi patogenezida asosiy o'yinchi bo'lganligi sababli, biz rekombinant trombomodulin o'sish omili-b1 vositachiligida progressiv buyrak fifibrozi va etishmovchiligini yaxshilashi mumkin degan farazni ilgari surdik. Bizning gipotezamizni so'roq qilish uchun biz rekombinant trombomodulinning terapevtik ta'sirini baholash uchun glomerulusga xos bo'lgan insonga xos o'sish omili-b1 transgenik sichqonchani yaratdik. Ushbu transgen sichqonchada progressiv glomerulyar skleroz va buyrak etishmovchiligi bilan tubulointerstitial fibroz rivojlandi. To'rt hafta davomida rekombinant trombomodulin bilan terapiya davolanmagan transgenik sichqonlarga nisbatan buyrak fifibrozini sezilarli darajada inhibe qildi va organlar faoliyatini yaxshiladi. Rekombinant trombomodulin bilan davolash Akt signalizatsiya yo'lini faollashtirish va survivinni o'z ichiga olgan antiapoptotik oqsillarning ekspressiyasini oshirish uchun G-oqsil bilan bog'langan retseptorlari 15 bilan o'zaro ta'sir qilish orqali podotsitlarning apoptozi va mezenximal differentsiatsiyasini sezilarli darajada inhibe qildi. Shunday qilib, bizning tadqiqotimiz rekombinant trombomodulinni davolash uchun potentsial terapevtik samaradorligini aniq ko'rsatadi.surunkali buyrak kasalligiva keyingi organ etishmovchiligi.

cistanchemumkinbuyrak kasalligini davolashbuyrak faoliyatini yaxshilash

Tarjima bayonoti

Fibroz va disfunktsiyabuyraklarhozirgi kunda butun dunyo bo'ylab asosiy sog'liq muammolari. Hozirgi vaqtda buyrak fifibrozini davolash uchun tasdiqlangan antifibrotik dori yo'q. Transformatsiya o'sish omili-b1 ko'plab kasalliklardan kelib chiqqan surunkali buyrak kasalligida buyrak fibrogenezining asosiy va umumiy haydovchisi hisoblanadi. Bu erda biz Yaponiyada tarqalgan tomir ichidagi koagulyatsiyani davolash uchun tasdiqlangan rekombinant trombomodulin preparati glomerulyar skleroz, tubulointerstitial fibroz va buyrak yetishmovchiligining rivojlanishini bostiradi, bu esa insonni o'zgartiruvchi o'sish omili-b1 ning haddan tashqari ekspressiyasidan kelib chiqadi, bu uning davolash uchun potentsial terapevtik ahamiyatini ko'rsatadi. ningsurunkali buyrak kasalliklari.

Surunkali buyrak kasalligiRivojlangan mamlakatlarda kattalar aholisining qariyb 13 foiziga ta'sir ko'rsatadigan yuqori kasallanish va o'lim bilan bog'liq bo'lgan asosiy sog'liqni saqlash muammosi.1 Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti ma'lum qildi.surunkali buyrak kasalligi(CKD) 2012 yilda butun dunyo bo'ylab o'limning 1,5 foiziga sabab bo'lgan.1 Bundan tashqari, so'nggi epidemiologik ma'lumotlar CKD bilan kasallanganlar sonining global barqaror o'sib borayotganidan dalolat beradi.2,3 Aksariyat hollarda patologik jarayon bosqichma-bosqich rivojlanib, oxir-oqibat yakuniga olib keladi. buyrak yetishmovchiligi bosqichi, uni faqat umrbod dializ yoki buyrak transplantatsiyasi bilan davolash mumkin.4,5 Qandli diabet (DM) va arterial gipertenziya KKHning eng ko‘p uchraydigan sabablari bo‘lib, undan keyin ishemiya, noma’lum etiologiyali glomeruloskleroz, urologik obstruktsiyalar va surunkali infektsiyalar keladi.6 Asosiy buzilishdan qat'i nazar, KKHning yakuniy va keng tarqalgan patologik oqibati buyraklarning fifibrozidir.7 Buyrak fifibrozi - bu tubulointerstitial fibrozning mavjudligi bilan tavsiflangan uzoq muddatli yoki takroriy shikastlanishga duchor bo'lgan buyraklar parenximali tuzilmalarining aberrant shifo va qayta qurish, glomeruloskleroz va quvur atrofiyasi.8 Buyrak fifibrogenezining asosiy omili o'sish faktini o'zgartiradi. yoki (TGF)-b1.8,9 TGFb1 hujayradan tashqari matritsa oqsillari va kimyotaktik omillar yoki fibroblastlarning proliferatsiya qiluvchi omillari sekretsiyasini rag'batlantirish, metalloproteinazalarni inhibe qilish va epiteliya-mezenximal o'tishni rag'batlantirish orqali fifibrozni kuchaytirishi mumkin.10 Asosiy kasallikni davolashdan tashqari. , maxsus buyrak fifibroziga qaratilgan tasdiqlangan dori hozirda mavjud emas.6

Trombomodulin (TM) ko'plab biologik funktsiyalarga ega bo'lgan transmembran glikoprotein bo'lib, qon ivish tizimining modulyatsiyasi, immun javobi, yallig'lanish reaktsiyalari va hujayraning omon qolishi kabi funktsiyalarga ega. , serin/treoninga boy domen, transmembran qismi va sitoplazmatik dum. S proteinini faollashtirish orqali yallig'lanishga qarshi va sitoprotektiv faollikka ega bo'lgan antikoagulyant bo'lgan faollashtirilgan protein C (APC) ni faollashtiradi. Bundan tashqari, TMning o'zi yallig'lanish reaktsiyasini to'g'ridan-to'g'ri yuqori harakatchan guruh B oqsilining faolligini inhibe qilish orqali kamaytirishi mumkin-1 (HMGB1), immunogen dendritik hujayralarni, eozinofillarni, mast hujayralarini va komplement tizimini bostirish orqali.13-18

Diabetik renopatiya va ishemiya-reperfuzion buyrak shikastlanishida TM ning profilaktik ta'sirini ko'rsatadigan nashr etilgan natijalar mavjud.19-21 Biroq, rekombinant TM ning buyrak fibrozining umumiy qo'zg'atuvchisi bo'lgan TGFb1 tomonidan qo'zg'atilgan progressiv buyrak fibroziga ta'siri baholanmagan. CKDni keltirib chiqaradigan bir qator kasalliklar. Biz TM TGFb1-vositalangan buyrak fifibrozini va buyrak etishmovchiligini yaxshilashi mumkin degan gipotezani ilgari surdik. Ushbu gipotezani so'roq qilish uchun biz yangi ishlab chiqilgan glomerulusga xos TGFb1 transgenik (TG) sichqonchasida rekombinant TM ning terapevtik ta'sirini baholadik.buyrak fifibrozi va buyrak etishmovchiligi.

buyrak uchun cistanche

NATIJALAR

Aylanma TM fragmentlarining ko'payishi buyrak funktsiyasining buzilishi bilan bog'liq

TM, endotelial hujayra membranasi bilan bog'langan glikoprotein bo'laklarga bo'linadi va endoteliy shikastlanishi vaqtida himoya funktsiyalarini yo'qotadi.22 Diabetik nefropatiya endoteliy shikastlanishi bilan bog'liq.23,24 Nefropatiyasi bo'lgan DM bilan og'rigan bemorlar nefropatiyasi bo'lmagan bemorlar bilan solishtirganda, yuqori belgilar ko'rsatdi. TM ning aylanma darajalari (4,4 ga qarshi 3,3 pg/ml) va faol TGFb1 (0,28 va 0,24 ng/ml) (Qo'shimcha jadval S1, qo'shimcha rasm S1A). TM kreatinin, faol TGFb1 va eruvchan podotsin bilan sezilarli darajada bog'liq (qo'shimcha rasm S1B). Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, funktsional membrana bilan bog'langan TM ning yo'qolishi faol TGFb1 ning ko'payishi va buyrak funktsiyasining buzilishi bilan bog'liq.

To'liq uzunlikdagi inson TGFb1 genining glomerulusga xos ifodasi bo'lgan TG sichqonchasi

Biz podotsitlarda to'liq uzunlikdagi inson TGFb1 genini haddan tashqari ifodalovchi TG sichqonchasini ishlab chiqdik. Sichqoncha inson TGFb1 ni bakterial sun'iy xromosoma (BAC) konstruktsiyasiga podotsin promotori nazorati ostida joylashtirish orqali yaratilgan (Qo'shimcha rasm S2; qo'shimcha rasm S3). Biz inson TGFb1 transgenining 3 nusxasini ifodalovchi 5 ta asoschi sichqon va 1 nusxasini ifodalovchi 3 ta asoschi sichqonni oldik. Transgenning ifodasi buyraklarga xos bo'lib, asoschilarning avlodlari yashovchan edi (Qo'shimcha rasm S3). Sichqonlarning to'liq muddatli homiladorligi bor edi va axlat normal o'lchamda edi. Sichqonlar kutilgan Mendel nisbatida tug'ilgan.

TG sichqonlarini tavsiflash uchun biz bir nechtasini o'lchadikbuyrak parametrlari16 hafta davomida har 4 haftada (qo'shimcha S4-rasm). TGFb1 ning plazma va siydik kontsentratsiyasi TGFb1- TG sichqonlarida yovvoyi turdagi (WT) sichqonlarga nisbatan tug'ilgandan keyingi dastlabki haftalarda sezilarli darajada oshdi va keyin yuqori darajada barqaror bo'lib qoldi (1a-rasm). TGFb1-TG sichqonlarida 2{12}}haftada gidroksiprolinning buyrak to‘qimalari miqdori sezilarli darajada oshgan (190,5 ga nisbatan 96,0 mg/buyrak ), 4-haftadan boshlab mezangial kengayish (1,9 va 1,1 ball) va tug'ilgandan keyin 12-haftadan boshlab kollagen cho'kishida (0,9 foizga nisbatan 0,1 foiz) WTdagi hamkasblari bilan solishtirganda (1a-f-rasm) ). An'anaviy optik mikroskopda Bowman kapsulasi bazal membranasining kengayishi, glomerulyar bazal membrananing qalinlashishi, mezangial va interstitsial bo'shliqlarda kollagenning ko'payishi va quvur atrofiyasi ko'rsatilgan (1bd-rasm). Transmissiya elektron mikroskopi glomerulosklerozni ko'rsatdi, shu jumladan mikrovillus transformatsiyasi va podotsitlarning oyoq jarayonining yo'q qilinishi, glomerulyar kapillyar endotelial fenestratsiyaning pasayishi, glomerulyar bazal membrananing qalinlashishi va mezangial matritsaning cho'kishi kuchaygan (2a-i-rasm). Nefropatiyaning dastlabki belgilarining siydikdagi konsentratsiyasi Yog 'kislotasini bog'laydigan oqsil (185,1 ga qarshi 87,0 pg/ml) vabuyrak shikastlanishi1-molekula (441,9 va 256,9 pg/ml) TGFb1-TG sichqonlarida mos ravishda 4 va 8-haftalardagi WT sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada yaxshilangan (Qo'shimcha rasm S5). TGFb{16}}TG sichqonlarida 4, 8, 12, 16 va 2{26}}haftalarda umumiy proteinuriya va siydikdagi umumiy oqsil-kreatinin nisbati WTdagi hamkasblari bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi (3a-rasm). . TGFb1-TG sichqonlarida qonda karbamid azotining plazma darajasi 4-haftadan (5,1 ga qarshi 4,1 mg/dl) va kreatinin kontsentratsiyasi 8-haftadan (1,1 ga qarshi 0,4 mg/dl) sezilarli darajada oshdi. ularning WT hamkasblari bilan solishtirganda (3b-rasm).

rhTM glomeruloskleroz va tubulointerstitial fibrozni inhibe qiladi

TGFb{0}}TGFb{0}Fizikal (SAL) bilan davolash qilingan TG sichqonlari va rekombinant inson (RH) TM yoki SAL bilan davolash qilingan WT sichqonlari bilan solishtirganda, ritm bilan ishlov berilgan TGFb1-TG sichqonlari mezangialning sezilarli darajada kamayganini ko'rsatdi. kengayish/hujayralik (1,3 va 3.{{3{37}}}} ball) va tubulointerstitial kollagenning sezilarli darajada pastligi va glomeruloskleroz (121,3 foizga nisbatan 139,7 foiz) (4a-e-rasm). Ushbu kuzatishlarga muvofiq, gidroksiprolin miqdori (11,7 ga qarshi 19,9 mg/g), buyrak to‘qimalarida kollagen I (101,3 ga qarshi 196,7 ng/mg oqsil) va periostin (21,7 ga qarshi 40,8 ng/g) kontsentratsiyasi. mg protein) va kollagen I ning nisbiy mRNK ifodasi rhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlarining buyrak to'qimalarida nazorat sichqonlarining buyrak to'qimalariga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (4f, qo'shimcha jadvallar S2 va S3). Transmissiya elektron mikroskopi faqat SAL bilan davolash qilingan sichqonlarga nisbatan rhTM bilan davolash qilingan sichqonlarda podotsitlarning oyoq jarayonining yo'q qilinishi va glomerulyar bazal membrananing qalinlashishi sezilarli darajada kamayganligini ko'rsatdi (Qo'shimcha rasm S6AB va B). Bundan tashqari, buyrak to'qimalarida profibrotik sitokinlarning kontsentratsiyasi kimyoatraktant oqsili monotsit-1 (45,0 ga qarshi 76,1 pg/mg oqsil), interleykin-13 (612,1 va 1002,0 pg/mg oqsil) va faol TGFb1 (131,0 ga nisbatan 151,5 pg/ mg protein) rhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlarida nazorat sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi (Qo'shimcha rasm S7). TGFb{46}}TG sichqonlarining buyrak to'qimalarida HMGB1 ning buyrak to'qimalari kontsentratsiyasi, shuningdek, rhTM bilan davolash qilingan TG sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi.buyrak to'qimalarinazorat sichqonlaridan (qo'shimcha rasm S7). Trombin antitrombin kompleksining plazma kontsentratsiyasi TGFb1-TG/SAL guruhida WT/SAL guruhiga nisbatan sezilarli darajada oshdi, ammo TGFb1-TG/rhTM va WT/rhTM guruhlari o‘rtasida farq aniqlanmadi. (Qo'shimcha rasm S8A). Kutilganidek, rhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG va WT sichqonlari plazmasida TM ning yuqori konsentratsiyasi mavjud edi. APC/antitripsin kompleksining plazma kontsentratsiyasi TGFb1-TG/SAL guruhida WT/SAL va TGFb1-TG/rhTM guruhlari bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi (280,5 va 384,6 pg/ml) , va plazminogen aktivator inhibitori darajasida sezilarli farq yo'q -1 (Qo'shimcha rasm S8A). Plazma, siydik va C5a darajasibuyrak to'qimasi(630.1 va 1075.0 pg/mg protein) va plazmada eruvchan podotsin rhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlarida SAL bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlariga nisbatan sezilarli darajada kamaydi. (Qo'shimcha rasm S8B). Siydikdagi podotsin darajasi TGFb1-TG/SAL guruhida WT/SAL va TGFb1-TG/rhTM guruhlariga qaraganda yuqori edi (Qoʻshimcha rasm S9A–C).

1-rasm|Insonni o'zgartiruvchi o'sish omili b1 (TGFb1) transgen (TG) sichqonchasi progressiv buyrak fifibrozini rivojlantiradi. (a) Plazma va siydikdagi TGFb1 oqsilining kontsentratsiyasi ferment immun tahlili va to'qimalarning gidroksiprolin tarkibi kolorimetrik tahlil bilan o'lchandi. (b–d) Buyrak toʻqimalarining boʻlaklari (b) davriy kislota-Schiff (barchalar ¼ 20 mm) va (c,d) Masson trikromi (barchalar ¼ 10{{) bilan boʻyalgan. 40}} mm) va keyin (e,f) baholash tizimi yoki WinROOF tasvirlash dasturi (Mitani korporatsiyasi, Tokio, Yaponiya) yordamida hisoblangan. Buyrak to'qimasini baholash uchun sichqonlar soni: yovvoyi turdagi (WT) sichqonlar uchun, 4, 12 va 20 haftalarda n ¼ 4; TG sichqonlari uchun 4 haftada n ¼ 7, 16 haftada n ¼ 8 va 20 haftalik bolalarda n ¼ 9. Plazma va siydikni baholash uchun sichqonlar soni: WT sichqonlari uchun 4 haftada n ¼ 12, 8 haftada n ¼ 8, 12 haftada n ¼ 7 va 16 va 20 haftalarda n ¼ 4; TG sichqonlari uchun 4 haftada n ¼ 24, 8 va 12 haftalarda n ¼ 17 va 16 va 20 haftalarda n ¼ 9. Ma'lumotlar median interquartile diapazonida ifodalanadi. Mann-Whitney U testi bo'yicha statistik tahlil. * P <0,05, **p=""><0,01, ****p=""><0,0001. ns,="" muhim="" emas.="" ushbu="" rasmni="" ko'rishni="" optimallashtirish="" uchun="" www.kidney-international.org="" saytida="" ushbu="" maqolaning="" onlayn="" versiyasiga="">

2-rasm|Transmissiya elektron mikroskopik topilmalar o'zgaruvchan o'sish omili b1-induktsiyalangan buyrak fifibrozi modeli. Sichqonlardan buyraklarni mahkamlash, ishlov berish va olib tashlash Usullarda tasvirlanganidek amalga oshirildi. (a,b) mikrovillus o'zgarishi va (a,b,d,e,g) podotsitlarning oyoq jarayonining yo'q bo'lib ketishi (oq strelka uchlari), (c-e) glomerulyar kapillyar endotelial fenestratsiyaning pasayishi (sariq o'q uchlari), (f) qalinlashishi. glomerulyar bazal membrana (yulduzchalar) va (h, i) ortib mezangial matritsa cho'kishi (oq o'qlar) mavjud. CL, kapillyar lümeni. Ushbu rasmni ko'rishni optimallashtirish uchun www.kidney-international.org saytida ushbu maqolaning onlayn versiyasiga qarang.

rhTM buyraklar faoliyatini yaxshilaydi

L-yog 'kislotalarini bog'laydigan oqsil darajasi (197.0 ga nisbatan 313,4 pg/ml),buyrak shikastlanishi molekulasi1 (299,9 ga qarshi 596,2 pg/ml), qon karbamid azoti (12,9 ga qarshi 34,8 mg/dl), kreatinin (0,5 ga qarshi 1,4 mg/dl) va albumin-kreatinin nisbati sezilarli darajada kamaydi. TGFb1-TG sichqonlari buyrak fifibrozisi bilan rhTM bilan davolangan, ularning davolanmagan TG hamkasblari bilan solishtirganda (5-rasm). rhTM bilan davolash qilingan TGFb{16}}TG sichqonlarida siydikdagi umumiy oqsil va umumiy protein kreatinin nisbati ham davolanmagan hamkasblariga nisbatan kamaydi (5-rasm).

rhTM glomerulyar hujayralarning apoptozini kamaytiradi

Terminal deoksinukleotidil transferaza vositachiligidagi dUTP nik end-yorlig'i bo'yalishi TGFb1-TG sichqonlarining rhTM bilan davolash qilingan glomerulidagi apoptotik hujayralar sonining TGFb1- bilan davolash qilingan TGAL sichqonlaridagi glomeruliyalarga nisbatan sezilarli darajada kamayganligini ko'rsatdi. Shakl S10A va B). RhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlarining buyrak to'qimalarida kaspaza-3ning bo'linishi, SAL bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlarining buyrak to'qimalariga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (Qo'shimcha rasm S10C). Thebuyrak to'qimalarirhTM bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlari, SAL bilan davolash qilingan TGFb1-TG sichqonlari bilan solishtirganda, B-hujayrali limfoma 2 (Bcl-2), B mRNK darajasida sezilarli o'sishni ko'rsatdi. -hujayra limfomasi - juda katta (Bcl-XL), apoptozning takrorlanishining bakuloviral inhibitori, 5 (BIRC5, shuningdek survivin deb ham ataladi) va Bcl-2-Bax nisbati ortgan BIRC6 (Apollon) (qo'shimcha rasm S11) ).

3-rasm|Insonning o'sish omili b1 (TGFb1) transgenik (TG) sichqonchasi buyrak funktsiyasi buzilgan. (a) umumiy oqsil va (b) qon karbamid azoti (BUN) kolorimetrik usullar bilan, kreatinin esa fermentativ usul bilan o'lchandi. Plazma va siydikni baholash uchun sichqonlar soni: yovvoyi turdagi (WT) sichqonlar uchun, 4 haftada n ¼ 12, n=7 8 va 12 haftalarda va n=4 16 va 2{ {21}} hafta; TG sichqonlari uchun n =24 4 haftada, n=17 8 va 12 haftalarda va n=9 16 va 20 haftalarda. Ma'lumotlar median ± interquartile diapazon sifatida ifodalanadi. Mann-Whitney U testi bo'yicha statistik tahlil. *P < 0.05,="" **p=""><0.01, ****="" p=""><>

rhTM podotsitlar apoptozini inhibe qiladi

Podositlarni rhTM bilan oldindan davolash TGFb1 ishtirokida yetishtirilgan podotsitlar apoptozini sezilarli darajada kamaytirdi, chunki subG1 fazasidagi hujayralar soni (3,2 foizga nisbatan 5,2 foiz), terminal deoksinukleotidil transferaza vositachiligidagi dUTP taxallusli hujayralar (posi) bilan baholanadi. 1.0 5,4 hujayra/Fifildga qarshi) va kaspaza-3 bo‘linish darajasi (0,9 va 1,1 nisbat) (6a-e-rasm). Madaniy podotsitlarda antiapoptotik omillarni skrining qilish shuni ko'rsatdiki, rhTM antiapoptotik omil Bcl-2 mRNK ifodasini davolanmagan hujayralardagi ekspressiyaga nisbatan sezilarli darajada oshiradi (Qo'shimcha rasm S12). BIRC5 antiapoptotik omilining mRNK ifodasi rhTM bilan davolash qilingan hujayralarda, ishlov berilmagan hujayralardagi ifodaga nisbatan ortdi (Qo'shimcha rasm S12). Proapoptotik omil Baxning mRNK ifodasi hech qanday davolash bilan solishtirganda rhTM bilan davolash bilan sezilarli darajada kamaydi (Qo'shimcha rasm S12). rhTM bilan davolash, shuningdek, vodorod peroksid (Qo'shimcha rasm S13A-E) va yuqori glyukoza sharoitida (qo'shimcha S13A-E rasm) ekilgan podotsitlarda aneksin V va terminal deoksinukleotidil transferaza vositachiligida dUTP nick end-yorlig'i bo'yalishini sezilarli darajada inhibe qildi. ) podotsitlarda rhTM ning antiapoptotik xususiyatini yanada tasdiqlaydi. Antiapoptotik protein kinaz B (Akt) yo'lini o'rganish25 ko'rsatdiki, rhTM vodorod peroksid yoki TGFb1 (qo'shimcha S15A va B) ishtirokida o'stirilgan insonning asosiy podotsitlarida Aktning fosforlanishini kuchaytirdi. Keyin biz sichqonlarning har bir guruhidan podotsitlarni ajratib oldik va Akt fosforillanishini Western blotting orqali baholadik. TGFb{{30}}TG/rhTM guruhidan ajratilgan podotsitlarda Aktning fosforillanishi davolanmagan guruhdagi podotsitlar bilan solishtirganda sezilarli darajada kuchaygan (1,1 ga nisbatan 0,7 nisbat) (Qo‘shimcha rasm S16A va B).

GPR15 vositachiligi

Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, TM fibroblast o'sish omili retseptorlari 1 (FGFR1) bilan o'zaro ta'sir qilish orqali hujayra ichidagi yo'llarni faollashtiradi vaG-oqsil bilan bog'langan retseptorlari15 (GPR15).26,27 Podotsitlar FGFR128 ni ifodalaydi, ammo ular GPR15 ni ifodalaydimi yoki yo'qmi aniq emas. Bu erda biz sichqonlarning har bir guruhidan podotsitlarni ajratib oldik va podotsitlar ham GPR15 ni ifodalashini ko'rsatdik (Qo'shimcha rasm S17A-E). Sog'lom nazorat ostidagi podotsitlar va glomerulosklerozli bemor ham GPR15 ni ifodalashini aniqladik (Qo'shimcha rasm S18). FGFR1 yoki GPR15 podotsitlar apoptozidagi rhTM inhibitiv faolligiga vositachilik qiladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz TGFb{12}}davolangan podotsitlardagi rhTM ning antiapoptotik faolligini FGFR1 inhibitori ishtirokida yoki hujayralarni mayda interferent RNK (siRNK) bilan transfektsiyasidan keyin baholadik. FGFR1 yoki GPR15 ga qarshi. Podositlarni FGFR1 inhibitori (Qo'shimcha S19A va B rasm) yoki FGFR1 siRNA (13,2 foizga nisbatan 7,9 foiz) bilan oldindan davolash (7a va b-rasm) podotsitlar apoptozidagi rhTM ning inhibitiv faolligini bekor qila olmadi. Biroq, hujayralarni GPR15 siRNK bilan transfeksiya qilish rhTM ning inhibitiv faolligini (14,6 foizga nisbatan 13,8 foiz) butunlay bekor qildi.podotsitlarning apoptozi(7a-c-rasm).

4-rasm|Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) glomeruloskleroz va tubulointerstitial fibrozni inhibe qiladi. Buyrak to'qimalarining bo'limlari (a, b) davriy kislota-Schiff va (c, d) Masson trikromi va (e) bilan bo'yalgan, so'ngra skoring tizimi yoki WinROOF tasvirlash dasturi yordamida miqdori aniqlangan. (e) Yovvoyi turdagi (WT)/sho'r (SAL) guruhining o'rtacha qiymati 100 foiz sifatida qabul qilindi. Mann-Whitney U testi bo'yicha statistik tahlil. (f) To'qimalarning gidroksiprolin tarkibi kolorimetrik usul, kollagen I-a1 (Col1a1) va periostin kontsentratsiyasi ferment immunoassay va mRNK ifodasi teskari transkriptaza-polimeraza zanjiri reaktsiyasi bilan o'lchandi. Kruskal Uollis tomonidan statistik tahlil dispersiya tahlili va tuzatilgan Dunn testi. Har bir guruhda n=8. Barlar {{10}} (a,c) 50 mm va (d) 20 mm. Ma'lumotlar median ± interquartile diapazon sifatida ifodalanadi. *P <0.05, **p=""><0.01, ***p=""><0.001, ****p=""><0.0001. tg,="" transgen;="" tgfb1,="" o'sish="" omili="" b1.="" ushbu="" rasmni="" ko'rishni="" optimallashtirish="" uchun="" www.kidney-international.org="" saytida="" ushbu="" maqolaning="" onlayn="" versiyasiga="">

rhTM podotsitlarning EMT ni inhibe qiladi

TGFb1-TG/SAL sichqonlarida TGFb1-TG bilan solishtirganda podotsin va a-silliq mushak aktini (a-SMA) (1,4 foizga nisbatan 11,2 foiz) musbat bo‘yalgan maydon sezilarli darajada oshdi. / rhTM sichqonlari (8a va b-rasm). Keyin biz in vitro birlamchi inson podotsitlarini yetishtirdik, madaniyat muhitiga TGFb1 oqsilini qo'shishdan oldin rhTM bilan oldindan ishlov berdik. Fibroblastga o'xshash morfologiyasi va a-SMA ning yaxshilangan ifodasi rhTM bilan davolash qilingan podotsitlarda davolanmagan hujayralar bilan solishtirganda bostirildi (Qo'shimcha rasm S20A). Bundan tashqari, rhTM fibronektin va vimentinning mRNK ifodasini inhibe qilgan bo'lsa-da, ishlov berilmagan hujayralardagi ifoda bilan solishtirganda podotsitlarda E-kaderinning mRNK ifodasini kuchaytirdi (Qo'shimcha rasm S20B). SMAD oilasi a'zolari 2 (Smad2) va Smad3 TGFb1-vositachiligida epiteliya-mezenximal o'tishda (EMT) hal qiluvchi rol o'ynaydi.29 rhTM bilan davolash TGFb1-TG sichqonlarida Smad2 va Smad3 faollashuvini sezilarli darajada bostirdi. ishlov berilmagan TG sichqonlari bilan solishtirganda (8c-rasm) va TGFb1 (qo'shimcha rasm S20C) ishtirokida yetishtirilgan inson podotsitlarida. Naychali epiteliya hujayralarida (3,7 foizga nisbatan 17,2 foiz) davolanmagan hamkasblari bilan solishtirganda (Qo'shimcha rasm S21A va B).

5-rasm|Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) buyrak shikastlanishi va buyrak disfunktsiyasini yaxshilaydi. Kreatinin enzimatik usul bilan o'lchandi; kolorimetrik usul bilan umumiy protein; va qon karbamid azoti (BUN) va albumin, buyrak shikastlanishi molekulasi 1 (KIM-1), L-yog 'kislotalarini bog'lovchi oqsil (L-FABP) va ferment immun tahlili orqali umumiy o'sish omili b1 (TGFb1). Har bir guruhda n=8. Ma'lumotlar median±kvartil oralig'ida ifodalanadi. Kruskal-Uollis tomonidan statistik tahlil dispersiya va tuzatilmagan Dunn testi tahlili. * P < {{10}}.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001,="" ****="" p="">< 0.0001,="" #p="0.06." ns,="" muhim="" emas;="" sal,="" sho'r="" suv;="" tg,="" transgen;="" wt,="" yovvoyi="">

GPR15 EMT da rhTM ning inhibitiv faolligiga vositachilik qiladi

Podositlarni FGFR1 siRNK bilan transfeksiya qilish TGFb1- bilan ishlov berilgan podotsitlarda kollagen I-a1 va a-SMA ning nisbiy mRNK ifodalarida rhTM ning inhibitiv faolligini bekor qila olmadi (Qo'shimcha rasm S22). Biroq, hujayralarni GPR15 siRNK bilan transfeksiya qilish TGFb{10}}davolangan podotsitlarda kollagen I-a1 va a-SMA ning nisbiy mRNK ifodalarida rhTM ning inhibitiv faolligini sezilarli darajada bekor qildi (Qo'shimcha rasm S22).

MUHOKAZA

TGFb1 va glomerulyar hujayralarning shikastlanishi

CKDni keltirib chiqaradigan buzilishlarning umumiy oqibati buyrak fibrozisidir.8,30,31 TGFb1 buyraklardagi fibrogenezning umumiy haydovchisi bo'lib, DM, arterial gipertenziya va otoimmün kasalliklar, jumladan, DM, arterial gipertenziya va otoimmün kasalliklar tufayli kelib chiqadi. TGFb1 ning yashirin shakllarini ajratishi mumkin, ular to‘qimalar shikastlanishi vaqtida haddan tashqari faollashganda buyrak chandig‘iga olib kelishi mumkin.32 TGFb1 o‘z sekretsiyasini rag‘batlantirishi mumkinligi sababli, fibrotik jarayon odatda ayovsiz tsiklga aylanadi.8 TGFb patogen jarayonining dastlabki hodisasi. 1- vositachilik qildibuyrak fifibrozipodotsitlar va glomerulyar endoteliy hujayralarining shikastlanishi hisoblanadi.33-35 Eriydigan TM ning plazma darajasi endoteliy shikastlanishining belgisidir. Buyrak hujayralari shikastlanishida TGFb1 ning roliga mos ravishda, bu erda biz faol TGFb1 ning DM bilan og'rigan bemorlarning plazmasida eruvchan TM, eriydigan podotsin va kreatinin bilan muhim korrelyatsiyasini topdik. Glomerulyar endotelial hujayralar va podotsitlar o'rtasidagi o'zaro bog'lanish abuyrak shikastlanishiglomerulyar bazal membrana degradatsiyasini keltirib chiqaradigan proteazlarning mahalliy ifodalanishiga olib keladi.34-36 Bu DM bilan og'rigan bemorlarimizda eruvchan podotsinning aniqlanishi va uning eruvchan TM bilan muhim korrelyatsiyasini tushuntirishi mumkin.

6-rasm|Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) o'sish omili b1 (TGFb1) tomonidan qo'zg'atilgan podotsitlarning apoptozini bostiradi. (a) rhTM 48 soat davomida 10 ng/ml TGFb1 bilan apoptozni induktsiya qilishdan 1 soat oldin podotsitlarning madaniy muhitiga qo'shilgan. (b) subG1 fazasidagi hujayralar foizi boshqa sitometriya orqali aniqlandi. (a,b) n=3 har bir guruhda. (c,d) DNK parchalanishiga ega bo'lgan hujayralar soni terminal deoksinukleotidil transferaza vositachiligida dUTP nick end-labeling (TUNEL) tahlili bilan o'lchandi (tuzli [SAL]/SAL va rhTM/SAL guruhlarida n=3; n SAL/TGFb1 va rhTM/TGFb1 guruhlarida=6) va (e) kaspaz{15}} boʻlinish darajasi Western blot usuli bilan oʻlchandi (har bir guruhda n=4). Barlar=100 mm. Ma'lumotlar median ± interquartile diapazon sifatida ifodalanadi. Mann-Whitney U testi bo'yicha statistik tahlil. *P <0,05. dapi,="" 40="" ,6-diamidino{23}}fenilindol;="" hpf,="" yuqori="" quvvatli="" maydon;="" ns,="" muhim="" emas.="" gistogrammalar="" maks="" foiz="" (maksimal="" qiymatdan="" foiz)="" sifatida="" ko'rsatiladi,="" har="" bir="" egri="" chiziq="100" foiz="" rejimiga="" o'tkaziladi.="" ushbu="" rasmni="" ko'rishni="" optimallashtirish="" uchun="" www.kidney-international.org="" saytida="" ushbu="" maqolaning="" onlayn="" versiyasiga="">

Podositlarga xos inson TGFb1 haddan tashqari ekspressiyasi bilan bog'liq buyrak fifibrozi

TGFb1 ta'siriga qarshi tura oladigan dori buyrak fifibrozini blokirovka qilish uchun ideal bo'ladi. Bu erda biz tug'ilishdan 4 hafta o'tgach, buyrak etishmovchiligi bilan spontan va progressiv glomerulyar skleroz va tubulointerstitial fibrozni rivojlantiruvchi odamning TGFb1 genini glomerulusda haddan tashqari ifodalovchi TG sichqonchasini yaratdik. Model podotsitlar va glomerulyar endotelial hujayralarning shikastlanishi bilan rivojlangan glomerulopatiyani ko'rsatadi; glomerulyar bazal membrananing qalinlashishi va interstitsial chandiq bilan mezangial kengayish; buyrak to'qimalarining shikastlanishi va buyrak funktsiyasining buzilishi belgilarining ko'payishi; va plazmadagi TGFb1 ortishi,buyrak to'qimasi, va siydik. Proteinlar, TGFb1 ning siydik bilan chiqarilishining ko'payishi va komplement tizimining faollashishi bizning hozirgi modelimizdagi interstitsial chandiqning bir vaqtning o'zida rivojlanishini tushuntirishi mumkin.37-40 Keyingi tajribalar apoptotik hujayralar va buyrak to'qimalarida davolanmagan TGFb dan Smad oqsillarining faollashishini aniqladi{ {3}}TG sichqonlari WT sichqonlari bilan solishtirildi. Umuman olganda, ushbu topilmalar ushbu TGFb1-TG sichqonchasini dori vositalarini topish uchun mos model sifatida ko'rsatmoqda.buyrak fifibrozi.

7-rasm|G-protein bilan bog'langan retseptorlari (GPR15) podotsitlarda apoptoz rekombinant inson trombomodulini (rhTM) ning inhibisyoniga vositachilik qiladi. Odamning asosiy podotsit hujayralari fibroblast o'sish omili retseptorlari 1 (FGFR1) kichik interferent RNK (siRNK), GPR15 siRNK yoki shifrlangan siRNK bilan 48 soat davomida transfektsiya qilindi, so'ngra o'sish omili b1 bilan davolashdan 1 soat oldin hujayra madaniyatiga rhTM qo'shildi. (TGFb1). Apoptotik hujayralar (a) boshqa sitometriya bilan baholandi va (b) keyin miqdori aniqlandi. (c) Hujayra lizatlari Western bloting uchun tayyorlangan. Har bir guruhda n{{10}}. Ma'lumotlar median ± interquartile diapazon sifatida ifodalanadi. Mann-Whitney U testi bo'yicha statistik tahlil. *P <0,05, #p="0.1." sal,="" sho'r="">

8-rasm|Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) tomonidan epiteliya-mezenximal o'tishni inhibe qilish. (a) Podotsin va a-silliq mushak aktini (a-SMA) Usullarda tasvirlanganidek bo'yalgan. (b) a-SMA bo'yalishi uchun musbat maydon WinROOF tasvirni qayta ishlash dasturi tomonidan aniqlangan. n=3 yovvoyi turdagi (WT)/sho'r (SAL) va WT/rhTM guruhlarida va n=5 ichidatransformatsion o'sish omili-b1-transgen(TGFb{0}}TG)/SAL va TGFb1-TG/rhTM guruhlari. (c) Jami (t) va fosforlangan (p) SMAD oilasi a'zosi (Smad) oqsillari Western bloting bilan baholandi. Har bir guruhda n=8. Ma'lumotlar median ± interquartile diapazon sifatida ifodalanadi. Kruskal-Uollis tomonidan statistik tahlil dispersiya tahlili va tuzatilgan Dunn testi. *P < 0.05,="" **p=""><0,01, ***p=""><0,001, #p="0.08." ushbu="" rasmni="" ko'rishni="" optimallashtirish="" uchun="" www.kidney-international.org="" saytida="" ushbu="" maqolaning="" onlayn="" versiyasiga="">

rhTM buyrak fifibrozini yaxshilaydi

Biz rhTM alveolyar epitelial hujayra apoptozini bostirish orqali o'pkada odam TGFb1 ni haddan tashqari ifodalovchi sichqonlarda rivojlangan o'pka fifibrozini yaxshilashini ko'rsatdik.41 Klinik tadqiqotlar, shuningdek, rhTM davolashdan so'ng idiopatik o'pka fifibrozining yaxshilanishini ko'rsatdi. organ fifibrozini davolash uchun. Biz rhTM TGFb1- bilan bog'liq buyrak fifibrozida samarali bo'lishini taxmin qildik. Ushbu gipotezani sinab ko'rish uchun biz buyraklarga xos TGFb 1-TG sichqonlarini rhTM bilan davolashdik. RhTM bilan davolangan sichqonlar siydikda umumiy protein, albumin, TGFb1, C5a ning past darajalarini ko'rsatdi va profibrotik sitokinlarning buyrak darajasi, C5a va HMGB1.45 rhTM bilan terapiya ham apoptozni, ham podotsitlarning EMTsini inhibe qildi. Biroq, rhTM trombin antitrombin kompleksiga, koagulyatsion faollashuv belgisiga hech qanday ta'sir ko'rsatmadi, garchi u yallig'lanishga qarshi va apoptotik faollikka ega bo'lgan antikoagulyant omil - APC hosil bo'lishini oshirgan bo'lsa-da.23 Shuni ta'kidlash kerakki, prokoagulyant ferment bo'lgan trombin TM/trombin kompleksini hosil qilish orqali past darajadagi protrombotik holatlarda antikoagulyantni paradoksal tarzda kuchaytiradi, bu esa antikoagulyant APC ning hosil bo'lishini oshiradi. Biroq, trombin asosan haddan tashqari protrombotik holatlarda (masalan, sepsis) prokoagulyant sifatida ishlaydi.46 Trombinning bu ikki tomonlama va paradoksal ta'siri past darajadagi protrombotik holatda bo'lgan bizning modelimizda koagulyatsiya faollashuvini inhibe qilish uchun rhTM ning aniq samarasizligini tushuntirishi mumkin. . Umuman olganda, bu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, rhTM amelio-progressiv fifibroz va disfunktsiyani tezlashtiradi.buyraklarglomerulyar hujayralarning EMT ning omon qolishini uzaytirish yoki oldini olish va yallig'lanishni, komplement faolligini va o'sish omilining faolligini to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita C protein yo'lini faollashtirish va HMGB1 ifodasini kamaytirish orqali. Sichqonlarda diabetik nefropatiyaning yaxshilanishi aylanma TM lektinga o'xshash domenning ortishi va lektinga o'xshash domenga ega bo'lmagan sichqonlarda kasallikning yomonlashuvi rhTM ning buyrak fibrozisiga foydali ta'sirini qo'llab-quvvatlaydi.20,21

Podositlar apoptozini inhibe qilish

Podotsitlar glomerulyar filtratsiya to'sig'ini saqlashda va asosiy aylanma oqsillarni yo'qotishning oldini olish uchun diafragma diafragmasining shakllanishida muhim rol o'ynaydi.47Buyrak shikastlanishiReaktiv kislorod turlari, yuqori glyukoza yoki yallig'lanish vositachilari, shu jumladan TGFb1 tufayli kelib chiqqan podotsitlar apoptozini keltirib chiqaradi, bu esa oxir-oqibat buyrak disfunktsiyasini keltirib chiqarishi mumkin. , TGFb1 transkripsiya omillarining Smad oilasi orqali yoki Smadga bog'liq bo'lmagan signalizatsiya yo'llari orqali hujayra ichidagi signallarni chiqaradi.48 Smadga bog'liq yo'lning faollashishi TGFb1 retseptorlari faollashtirilganda Smad2 va Smad3 fosforillanadi, ular Smad4 bilan Smad4 yadrosiga o'tadi249. Smad3/Smad4 kompleksi proapoptotik omillarning transkripsiyasini rag'batlantiradi va hujayra apoptoziga olib keladigan antiapoptotik omillarni kamaytiradi.49 Bunga muvofiq, biz proapoptotik omil Baxning yuqori buyrak darajasini va antiapoptotik omillar Bcl2 va Bcl-XL past darajasini aniqladik. TGFb1- TG sichqonlarida. TM turli xil hujayra turlarining apoptozini inhibe qilishi mumkin.21,41,49 Bunga muvofiq, bu erda biz rhTM vodorod peroksid, yuqori glyukoza yoki TGFb1 tomonidan qo'zg'atilgan podotsitlar apoptozini inhibe qilishini aniqladik va bu topilma rhTM ning CKDdagi foydali ta'sirini tushuntirishi mumkin. . Bundan tashqari, rhTM Bax ekspresyonini kamaytirish, Bcl2, Bcl-XL, BIRC5 va BIRC6 ifodasini ko'paytirish va Akt yo'lining faollashuvini oshirish orqali muvozanatni apoptozni inhibe qilish tomon yo'naltirdi.buyrak to'qimalari. Umuman olganda, bu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, rhTM Akt faollashuvi va antiapoptotik omil ifodasini qo'llab, podotsitlarning omon qolishini rag'batlantiradi.

surunkali buyrak kasalligi uchun cistanche

EMTni inhibe qilish

Podositlarning EMT ham buyrak fifibroziga yordam beradi. EMTdan o'tgan podotsitlar hujayradan tashqari matritsa oqsillarini chiqaradi, ular TGFb{0}}bog'langan buyrak fifibrogenez jarayonida to'planadi.50 TGFb1 Smad2/Smad3/Smad4 kompleksining retseptorlari vositasida faollashishi orqali EMTni rag'batlantiradi. Fosforlangan Smad3 matritsa oqsillarining transkripsiyasini rag'batlantirish va epiteliya belgilarining ifodalanishini kamaytirish orqali EMT ni rag'batlantiradi.51 Bunga mos ravishda, biz TGFb1-TG sichqonlari va TGFb1 yoki undan past bo'lgan joyda yetishtirilgan podotsitlarda podotsitlarning EMT ko'payishini aniqladik. oksidlovchi yoki yuqori glyukoza sharoitlari. Oldingi hisobotlarda rhTM EMTni bostiradi, deb taklif qilingan edi.52,53 Bu yerda biz rhTM TGFb1-TG sichqonlarida podotsitlar va tubulointerstitial epiteliya hujayralarining EMTsini inhibe qilishini aniqladik. Smad oqsili faollashuvini inhibe qilish rhTM ning EMTga foydali ta'siri mexanizmi bo'lib ko'rinadi, chunki TGFb1-TG sichqonlari va rhTM bilan ishlov berilgan birlamchi podotsitlar Smad2 va Smad3 fosforillanishini davolanmagan holatlarga nisbatan sezilarli darajada kamaytirganini ko'rsatadi. Ushbu topilmalar EMTda TM ning inhibitiv faolligini qo'llab-quvvatlaydi.

RhTM himoya faoliyatida retseptorlarning vositachiligi

Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, GPR15 yoki FGFR1 TM.26,27,54 ning sitoprotektiv faolligiga vositachilik qiladi. GPR15 oqsilining siRNK tomonidan pastga regulyatsiyasi rhTM ning TGFb{6}}podositlarning apoptozi vositachiligida bostiruvchi faolligini butunlay bekor qilgan bo'lsa-da, na FGFR1 siRNK, na uning inhibitori uni bekor qilmagan, bu GPR15 rhTM himoya faolligiga vositachilik qilishini ko'rsatadi. TGFb{9}}TG sichqonlaridan ajratilgan madaniy podotsitlar va podotsitlarda rhTM bilan davolashdan keyin Aktning fosforillanishi kuchaygan, bu hujayra ichidagi Akt yo'lining ishtirokini ko'rsatadi. RhTM ning endotelial hujayralardagi Akt yo‘lini faollashtirishini ko‘rsatuvchi ish bu xulosani tasdiqlaydi.55 Akt signalizatsiya yo‘lining faollashuvi GPR15 sirt ifodasini oshirish orqali rhTM ta’sirini yanada kuchaytirishi mumkin.56 Bu kuzatishlar shuni ko‘rsatadiki, rhTM bizning TGFbmizdagi podotsitlarni apoptozdan himoya qiladi. {13}}TG sichqonlari GPR15/Akt oʻqini faollashtirib, antiapoptotik omillarning ifodalanishining kuchayishiga va proapoptotik omillarning kamayishiga olib keladi.57 Boshqa tomondan, avvalgi tadqiqotlar C3a va C5a anafilatoksinlari ularning GPRlari orqali oʻz hissasini qoʻshishini koʻrsatdi. Podositlarni shikastlash orqali CKD va APC o'zining endotelial protein C retseptorlari va proteaz bilan faollashtirilgan retseptorlari orqali podotsitlar apoptozi va buyrak fifibrozini inhibe qilishi mumkin. Shuning uchun, GPR15/Akt yo'lining faollashuvidan tashqari, komplement omillarining inhibisyonu va protein C va uning retseptorlari faollashuvining kuchayishi bizning TGFb1-bizning bog'langan rhTM ning foydali ta'sirini ham tushuntirishi mumkin.buyrak fifibrozi modeli.

Bundan tashqari, GPR15 ning pastga regulyatsiyasi, lekin FGFR1 emas, balki rhTM ning EMT ga inhibitiv ta'sirini blokirovka qildi, bu GPR15 bu rhTM himoya faoliyatiga vositachilik qilishini ko'rsatadi. Smad oqsillarini inhibe qilish EMTni bostirishda ishtirok etadi, chunki rhTM bilan davolash TGFb1-TG sichqonlari va yetishtirilgan podotsitlarda Smad2 va Smad3 ning fosforillanishini inhibe qilgan. Biroq, GPR15 orqali Smad oqsilini inhibe qilishning aniq mexanizmi aniq emas. Ba'zi dalillar shuni ko'rsatadiki, Akt yo'li Smad signalizatsiya yo'li bilan o'zaro bog'lanishi va tartibga solinishi mumkin,62-64 va Akt Smad3 ning fosforillanishini oldini olishi mumkin, uni fosforlanmagan Smad3 bilan to'g'ridan-to'g'ri o'zaro ta'sir qilish orqali yadrodan tashqarida sekvestrlash transkripsiya va EMT ning inhibisyoniga olib keladi.62- 64 Ushbu hisobotlarga asoslanib, Aktning rhTM GPR15 sekvestrlari bilan bog'langandan so'ng faollashishi, fosforlanmagan Smad3 ning podotsitlar EMT inhibisyoniga olib kelishi mumkin. Shuni ta'kidlash kerakki, Akt vositachiligidagi bu foydali ta'sir faqat malign bo'lmagan hujayralarda kuzatiladi.65-67 Xatarli hujayralarda TGFb1 ning uning retseptorlari bilan o'zaro ta'siri bevosita fosfoinositid 3-kinaz/Akt/Snail yo'lini faollashtirishi va sabab bo'lishi mumkin. EMT.65-67 Umuman olganda, tadqiqotimiz natijalari podotsitlarga rhTM ning foydali ta'sirini vositachilik qiluvchi retseptor sifatida GPR15 rolini qo'llab-quvvatlaydi.

Xulosa

Xulosa qilib aytganda, bu yerda biz birinchi marta spontan va progressiv glomerulyar skleroz, tubulointerstitsial fibroz va glomerulyar sklerozni rivojlantiruvchi inson TGFb1 genining to'liq uzunligini haddan tashqari ifodalovchi yangi transgen TG sichqonchasi haqida xabar beramiz.buyrak etishmovchiligi, va podotsitlarning apoptozi va mezenximal o'tishini inhibe qiluvchi GPR15 bilan rhTM o'zaro ta'sirida o'rnatilgan buyrak fifibrozisi / buyrak etishmovchiligini yaxshilash.

USULLARI

TGFb1 BAC TG sichqonchasini yaratish

TGFb1-BAC-TG sichqonchasi podotsin promotori nazorati ostida toʻliq uzunlikdagi inson TGFb1 genini ifodalovchi sichqonchani 392 C57BL/6J sichqon embrioniga pronuklear inyeksiya yoʻli bilan yaratilgan (CLEA Japan, Inc., Tokio, Yaponiya). Biz TG asoschilari va BAC TG konstruktsiyasining germline uzatilishini Southern blotting (qo'shimcha materiallar va usullar) orqali baholadik.

Eksperimental hayvonlar

TGFb{0}}TG sichqonlari eksperimentlarda foydalanishdan oldin C57BL/6 fonida 10 dan ortiq avlod uchun yetishtirilgan. WT axlatlari nazorat hayvonlari sifatida ishlatilgan. Barcha hayvonlar ma'lum bir patogensiz muhitda saqlangan va atrof-muhit harorati va namligi 22 dan 26 darajagacha va 40 foizdan 70 foizgacha bo'lgan 12-soatlik yorug'lik-qorong'u tsiklga va ad libitum kirish huquqiga ega bo'lgan. Mie universitetining hayvonlar uyidagi oziq-ovqat va suvga (qo'shimcha materiallar va usullar).

Axloqiy bayonot

Rekombinant DNK eksperimenti xavfsizligi qoʻmitasi (tasdiqlash raqami I-629; sana: 2013-yil 19-sentyabr) va Mie universiteti hayvonlarni oʻrganish qoʻmitasi (tasdiqlash raqami. 27-4; sana: 2015-yil 19-avgust) tadqiqot bayonnomalarini tasdiqladi. Hayvonlarning barcha protseduralari Mie universitetining institutsional ko'rsatmalariga muvofiq va Milliy sog'liqni saqlash instituti (https://olaw.nih.gov/) tomonidan chop etilgan laboratoriya hayvonlarini parvarish qilishning xalqaro miqyosda tasdiqlangan tamoyillariga muvofiq amalga oshirildi.

Klinik tekshiruv uchun barcha bemorlar va sog'lom sub'ektlar tomonidan yozma ma'lumotli rozilik berildi va tadqiqot protokoli Mie universitetining Klinik tekshiruv Etika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (tasdiqlash № 1043 va 2194).

Eksperimental dizayn

Xarakterlash uchunbuyrakfifibroz modelida biz TGFb{0}}TG sichqonchalarini (n=24) va 4 haftalik va vazni 20-23 g gacha bo'lgan erkak WT sichqonlarini (n=12) 3 taga ajratdik. har bir guruhda 8 TGF b1-TG sichqonlari va 4 WT sichqonlari bo'lgan guruhlar. Har bir WT va TGFb1-TG guruhidagi sichqonlar 0, 8 yoki 16-haftalarda fifibroz va buyrak funktsiyasi parametrlarining vaqt o‘zgarishini baholash uchun siydik, qon va buyrak namunalarini yig‘ish uchun evtanizatsiya qilindi.

rhTM ning terapevtik samaradorligini baholash uchun (rhTM Asahi Kasei Pharma korporatsiyasi, Tokio, Yaponiya) buyrak fifibrozisi, TGFb1-TG sichqonlari (n= 8) yoki WT littermatlarida (n {{2) }}) sichqonlarni o'ldirishdan oldin 4 hafta davomida haftasiga 3 marta rhTM (3 mg / kg) bilan ip in'ektsiya yo'li bilan davolash qilindi. TGFb{6}}TG sichqonlari (n =8) yoki IP in'ektsiyasi orqali teng miqdorda fiziologik SAL olgan WT sichqonlari (n= 8) ​​manfiy nazorat sichqonlari sifatida ishlatilgan.

Ushbu tadqiqot protokoli hayvonlarni o'rganish bo'yicha Hayvonlarni o'rganish: In Vivo Tajribalarni Hisobot qilish (ARRIVE) ko'rsatmalariga amal qildi. Sichqonlar randomizatsiyalangan va parametrlarni o'lchagan tadqiqotchilar davolash guruhlariga ko'r bo'lgan.

Biokimyoviy tahlil

Umumiy oqsil kontsentratsiyasi (BCA protein tahlili to'plami; Pirs, Rockford, IL), TGFb1 (R&D System, Minneapolis, MN), monotsitlar kemoatrakant oqsili-1 (BD Biosciences Pharmingen, San-Diego, CA), trombin antitrombin kompleksi (Cedarlane Laboratories, Hornby, Ontario, Kanada) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga (Qo'shimcha materiallar va usullar) rioya qilgan holda tijoriy ferment immunoassay to'plamlari yordamida o'lchandi.

Hujayra madaniyati

Inson podotsitlarining asosiy hujayralari CELPR OGEN (Torrance, CA) dan sotib olingan. Inson podotsitlarining asosiy hujayralari Dulbekkoning o'zgartirilgan Eagle muhitida namlangan, 5% CO2 atmosferasida 37 daraja haroratda o'stirildi. Muhit 10 foiz issiqlik bilan inaktivlangan homila sigir zardobi (Bio Whittaker, Walkersville, MD), 100 IU / ml penitsillin, 100 mg / ml streptomitsin va L-glutamin (qo'shimcha materiallar va usullar) bilan to'ldirildi.

Statistik tahlil

Ma'lumotlar median±kvartil oralig'ida ifodalanadi. O'zgaruvchilar o'rtasidagi statistik farq Kruskal-Uollis dispersiya tahlili bilan Dunn testi yordamida post hoc tahlili bilan hisoblab chiqilgan. 2 guruh o'rtasidagi farqlarni baholash uchun Mann-Whitney U testi ishlatilgan. Statistik tahlillar GraphPad Prism versiyasi 8.0.1 (GraphPad Software, San-Diego, CA) yordamida amalga oshirildi. Statistik ahamiyatlilik P < 0.05="" sifatida="" qabul="">

OSHHOR QILISh

EKG, CND-G va YY TGFb1-TG sichqonchasiga patentga ega.buyrak fifibrozihozirgi tadqiqotda foydalanilgan. CND-G va YY ushbu tadqiqot uchun Yaponiya Ta'lim, Madaniyat, Sport, Fan va Texnologiya Vazirligidan grant oldi. EKG, TY, CND-G va MT Shionogi Pharmaceuticals kompaniyasidan grant oldi. Boshqa barcha mualliflar hech qanday raqobatdosh manfaatlar yo'qligini e'lon qilishmagan.

MAQDAT

Ushbu tadqiqot qisman Yaponiya Taʼlim, Madaniyat, Sport, Fan va Texnologiya Vazirligi grantlari (YY uchun Kakenhi № 17K09824; CND-G uchun Kakenhi № 17K08442) va qisman Shionogi granti bilan qoʻllab-quvvatlandi. & Co, Ltd., Yaponiya. Tadqiqot loyihasi, ma'lumotlarni tahlil qilish, nashr etish to'g'risida qaror qabul qilish yoki qo'lyozmani tayyorlashda moliyachilarning roli yo'q edi.

Ushbu asarning bir qismi abstrakt shaklda nashr etilgan.

MUALFOLAR HISSALARI

AT kasallik modelini tayyorladi va qo'lyozmaning birinchi loyihasini yozdi. TY, KN, TT, RI va CND-G kasallik modellarini va o'lchangan parametrlarni tayyorladi. AM va SW transmissiya mikroskopik tadqiqotini amalga oshirdi. MT, YO va AU parametrlarni o'lchadi va in vitro tajribalarini o'tkazdi. YT, LQ, TK va VFD intellektual hissalarni taqdim etdi. YY va EKG qo'lyozma loyihasini tuzatdi va tadqiqotni ishlab chiqdi.

buyrak etishmovchiligi belgilari uchun cistanche

QO'SHIMCHA MATERIAL

Qo'shimcha fayl (PDF) Qo'shimcha materiallar va usullar.

S1-jadval. Mavzularning xususiyatlari.

Jadval S2. Sichqoncha to'qimalarining RT-PCR uchun primerlar.

Jadval S3. Inson podotsitlarining RT-PCR uchun primerlar.

S1-rasm. Eriydigan trombomodulin fragmentlari DM bilan og'rigan bemorlarda TGFb1 va kreatinin bilan korrelyatsiya qiladi.

S2-rasm. Inson TGFb1 - bakterial sun'iy xromosoma (BAC) konstruktsiyasi. S3-rasm. Inson TGFb1 genining to'liq uzunligini ifodalovchi asoschi sichqonlar.

S4-rasm. Glomerulaga xos transformator o'sish omili b1 transgenik sichqonchaning xarakteristikasi.

S5-rasm. Inson TGFb1 transgen sichqonchasi buyrak shikastlanishining belgilarini oshirdi.

S6-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan terapiya oyoq jarayonining podotsitlarning yo'q qilinishini va glomerulyar bazal membrananing qalinlashishini kamaytiradi.

S7-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan davolash qilingan TGFb1 transgen sichqonlari buyrak to'qimalarida profibrotik omillar va HMGB1 ning past konsentratsiyasiga ega. S8-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan davolash faollashtirilgan protein C generatsiyasini oshiradi, komplement tizimini inhibe qiladi, aylanib yuruvchi eruvchan podotsin miqdorini kamaytiradi, garchi TGFb1 transgen sichqonlarida koagulyatsiya tizimiga hech qanday ta'sir ko'rsatmaydi.

S9-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan terapiya siydikda podotsin kontsentratsiyasini kamaytiradi.

S10-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan terapiya glomerulyar hujayralar apoptozini kamaytiradi.

S11-rasm. TGFb{1}}ortiqcha ifodalanishi bilan bog'liq buyrak fifibrozini rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan davolash buyrak to'qimalarida apoptozni inhibe qiladi.

S12-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) podotsitlarda antiapoptotik omillarning ifodasini oshiradi.

S13-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) vodorod peroksid tomonidan qo'zg'atilgan podotsitlarning apoptozini bostiradi.

S14-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) yuqori glyukoza darajasidan kelib chiqqan podotsitlar apoptozini bostiradi.

S15-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) podotsitlarda Akt yo'llarining faollashuvini oshiradi.

S16-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan davolash TGFb1-TG sichqonlarining podotsitlarida Akt fosforillanishini oshiradi.

S17-rasm. Sichqonlarning har bir davolash guruhidagi podotsitlar GPR15 mRNKni ifodalaydi.

S18-rasm. Sog'lom odam va fokal segmental glomerulosklerozli bemorning podotsitlarida GPR15 ni bo'yash.

S19-rasm. Fibroblast o'sish omili retseptorlari-1 podotsitlardagi rekombinant inson trombomodulinining (rhTM) inhibitiv faolligida ishtirok etmaydi.

S20-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) podotsitlarning epitelial-mezenximal o'tishini inhibe qiladi.

S21-rasm. Rekombinant inson trombomodulini (rhTM) bilan davolash buyrak kanalchalarida silliq mushak aktinining ifodalanishini inhibe qiladi.

S22-rasm. G-protein bilan bog'langan retseptorlari (GPR15) podotsitlarning epitelial-mezenximal o'tishida rekombinant inson trombomodulini (rhTM) ning inhibitiv faolligiga vositachilik qiladi.

Qo'shimcha ma'lumotnomalar.

ADABIYOTLAR

1. Webster AC, Nagler EV, Morton RL va boshqalar. Surunkali buyrak kasalligi. Lanset. 2017;389:1238–1252.

2. Bello AK, Levin A, Tonelli M va boshqalar. Global buyrak salomatligi holatini baholash. JAMA. 2017;317:1864–1881.

3. Levin A, Tonelli M, Bonventre J va boshqalar. Global buyrak salomatligi 2017 va undan keyingi yillar: parvarish, tadqiqot va siyosatdagi bo'shliqlarni yopish uchun yo'l xaritasi. Lanset. 2017;390:1888–1917.

4. Ackland P. Surunkali buyrak kasalligining tarqalishi, aniqlash, baholash va boshqarish. BMJ. 2014;348:f7688.

5. Turner JM, Bauer C, Abramowitz MK va boshqalar. Surunkali buyrak kasalligini davolash. Buyrak Int. 2012;81:351–362.

6. Breyer MD, Susztak K. Surunkali buyrak kasalligi uchun terapevtiklarning keyingi avlodi. Nat Rev Drug Discov. 2016;15:568–588.

7. Liu Y. Buyrak fifibrozisi: patogenezi va terapevtikasi bo'yicha yangi tushunchalar. Buyrak Int. 2006;69:213–217.

8. Liu Y. Buyrak fifibrozining hujayrali va molekulyar mexanizmlari. Nat Rev Nefrol. 2011;7:684–696.

9. Xavier S, Vasko R, Matsumoto K va boshqalar. Endotelial TGF-beta signalini qisqartirish CKDda endotelial-mezenximal o'tishni va fifibrozni kamaytirish uchun etarli. J Am Soc Nephrol. 2015;26:817–829.

10. Higgins SP, Tang Y, Higgins CE va boshqalar. Buyrak fifibrogenezida TGF-beta1 / p53 signalizatsiyasi. Hujayra signali. 2018;43:1–10.

11. Konvey EM. Trombomodulin va uning yallig'lanishdagi roli. Semin immunopatol. 2012;34:107–125.

12. Martin FA, Merfi RP, Cummins PM. Trombomodulin va qon tomir endoteliyasi: funktsional, tartibga solish va terapevtik jihatlar haqida tushunchalar. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2013;304:H1585–H1597.

13. Morser J. Trombomodulin koagulyatsiyani yallig'lanish va immunitet bilan bog'laydi. Curr dori maqsadlari. 2012;13:421–431.

14. Roeen Z, Toda M, D'Alessandro-Gabazza CN va boshqalar. Trombomodulin eozinofillar va mast hujayralarining faollashuvini inhibe qiladi. Hujayra immunol. 2015;293:34–40.

15. Takagi T, Taguchi O, Toda M va boshqalar. Allergik bronxial astmani trombomodulin bilan inhibe qilish dendritik hujayralar orqali amalga oshiriladi. Am J Respir Crit Care Med. 2011;183:31–42.

16. Tateishi K, Imaoka M, Matsushita M. Trombomodulinning muqobil komplement yo'lida ikki tomonlama modulyatsiya qiluvchi funktsiyalari. Biosci tendentsiyalari. 2016;10:231–234.

17. Toda M, D'Alessandro-Gabazza CN, Takagi T va boshqalar. Trombomodulin dendritik hujayralarni yuqori harakatchanlik guruhi B1 oqsilining antagonizmlari va mustaqil mexanizm orqali modulyatsiya qiladi. Allergol Int. 2014;63:57–66.

18. Van de Wouwer M, Plaisance S, De Vriese A va boshqalar. Trombomodulinning lektinga o'xshash sohasi komplementning faollashishiga to'sqinlik qiladi va artritdan himoya qiladi. J Thromb Haemost. 2006;4:1813–1824.

19. Sharfuddin AA, Sandoval RM, Berg DT va boshqalar. Eriydigan trombomodulin ishemik buyraklarni himoya qiladi. J Am Soc Nephrol. 2009;20:524–534.

20. Vang H, Vinnikov I, Shahzad K va boshqalar. Trombomodulinning lektinga o'xshash sohasi komplementni inhibe qilish orqali diabetik glomerulopatiyani yaxshilaydi. Tromb Haemost. 2012;108:1141–1153.

21. Yang SM, Ka SM, Wu HL va boshqalar. Trombomodulin domeni 1 anti-NF-kappaB / NLRP3 yallig'lanish vositachiligidagi yallig'lanish, NRF2 antioksidant faolligini oshirish va apoptozni inhibe qilish orqali sichqonlarda diabetik nefropatiyani yaxshilaydi. Qandli diabet. 2014;57:424–434.

22. Ohlin AK, Larsson K, Hansson M. Plazmada eriydigan trombomodulin faolligi va eruvchan trombomodulin antijeni. J Thromb Haemost. 2005;3: 976–982.

23. Gil-Bernabe P, D'Alessandro-Gabazza CN, Toda M va boshqalar. Ekzogen faollashtirilgan protein C diabetik nefropatiyaning rivojlanishini inhibe qiladi. J Thromb Haemost. 2012;10:337–346.

24. Yasuma T, Yano Y, D'Alessandro-Gabazza CN va boshqalar. Qandli diabetni protein S. Diabet bilan yaxshilash. 2016;65:1940–1951.

25. Havasi A, Borkan SC. Apoptoz va o'tkir buyrak shikastlanishi. Buyrak Int. 2011;80:29–40.

26. Kuo CH, Sung MC, Chen PK va boshqalar. FGFR1 rekombinant trombomodulin domenidan kelib chiqqan angiogenezga vositachilik qiladi. Kardiovasc Res. 2015;105:107–117.

27. Pan B, Vang X, Kojima S va boshqalar. Trombomodulinning epidermal o'sish omiliga o'xshash beshinchi hududi GPR15 bilan o'zaro ta'sir qilish orqali LPS keltirib chiqaradigan sepsisni engillashtiradi. Tromb Haemost. 2017;117:570– 579.

28. Lu Y, Ye Y, Bao V va boshqalar. Bir hujayrali RNK ketma-ketligi asosida podotsitlar sitoskeletlari uchun zarur bo'lgan genlarni genom bo'yicha identifikatsiyalash. Buyrak Int. 2017;92:1119–1129.

29. Vigolo E, Marko L, Hinze C va boshqalar. Naychali hujayralardagi kanonik BMP signalizatsiyasi o'tkir buyrak shikastlanishidan keyin tiklanishga vositachilik qiladi. Buyrak Int. 2019;95:108–122.

30. Nangaku M. Surunkali gipoksiya va tubulointerstitial shikastlanish: oxirgi bosqichli buyrak etishmovchiligining yakuniy umumiy yo'li. J Am Soc Nephrol. 2006;17: 17–25.

31. Tomas R, Kanso A, Sedor JR. Surunkali buyrak kasalligi va uning asoratlari. Asosiy parvarish. 2008;35:329–344, vii.

32. Mozes MM, Bottinger EP, Jacot TA va boshqalar. TGF-beta transgen sichqonlarida fibrotik matritsa oqsillari va transformatsiya qiluvchi o'sish omili-beta (TGF-beta) izoformlarining buyraklardagi ifodasi. J Am Soc Nephrol. 1999;10:271– 280.

33. Arif E, Solanki AK, Srivastava P va boshqalar. Motor oqsili Myo1c podotsitlarda transformatsiya qiluvchi o'sish omili - beta-signal va fifibrozni tartibga soladi. Buyrak Int. 2019;96:139–158.

34. Ebefors K, Wiener RJ, Yu L va boshqalar. Endotelin retseptorlari-A faollashtirilgan podotsitlar va glomerulyar endotelial hujayralar o'rtasidagi patologik o'zaro bog'lanish orqali glomerulyar endotelial sirt qatlamining degradatsiyasiga vositachilik qiladi. Buyrak Int. 2019;96:957–970.

35. Fu J, Li K, Chuang PY va boshqalar. Diabetik buyrak kasalligida glomerulyar endotelial hujayra shikastlanishi va o'zaro suhbat. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F287– F297.

36. Masum MA, Ichii O, Elewa YHA va boshqalar. O'zgartirilgan skanerlash elektron mikroskopiyasi membranoproliferativ glomerulonefritning sichqoncha modelida endotelial hujayralar va podotsitlar o'rtasidagi patologik o'zaro bog'liqlikni aniqlaydi. Sci Rep. 2018;8:10276.

37. Abbate M, Zoja C, Rottoli D va boshqalar. Proksimal quvurli hujayralar peritubulyar miofifibroblastlarning TGF-beta1-vositachiligi orqali fifibrogenezga yordam beradi. Buyrak Int. 2002;61:2066–2077.

38. Liu BC, Tang TT, Lv LL va boshqalar. Buyrak tubulasining shikastlanishi: surunkali buyrak kasalligiga olib keladigan harakatlantiruvchi kuch. Buyrak Int. 2018;93:568–579.

39. Loefflfler I, Wolf G. Transforming o'sish omili-beta va buyrak kasalliklarining rivojlanishi. Nefrol dial transplantatsiyasi. 2014;29(qo‘shimcha 1):i37–i45.

40. Murakami K, Takemura T, Hino S va boshqalar. Glomerulyar kasalliklari bo'lgan bemorlarda siydikni o'zgartiruvchi o'sish omili-beta. Pediatr Nefrol. 1997;11:334–336.

41. Fujiwara K, Kobayashi T, Fujimoto H va boshqalar. Hujayra apoptozini inhibe qilish va o'pka fifibrozini trombomodulin bilan yaxshilash. Men J Pathol. 2017;187:2312–2322.

42. Kataoka K, Taniguchi H, Kondoh Y va boshqalar. Idiopatik o'pka fifibrozining o'tkir kuchayishida rekombinant inson trombomodulini. Ko'krak. 2015;148:436–443.

43. Tsushima K, Yamaguchi K, Yokoyama T va boshqalar. Idiopatik o'pka fifibrozining o'tkir kuchayishi uchun trombomodulin: kontseptsiyani o'rganishning isboti. Pulm Pharmacol Ther. 2014;29:233–240.

44. Umemura Y, Yamakawa K. Sepsisda antikoagulyant terapiya uchun bemorni optimal tanlash: Yaponiyadan dalillarga asoslangan taklif. J Thromb Haemost. 2018;16:462–464.

45. Chen Q, Guan X, Zuo X va boshqalar. Buyrak kasalliklari patogenezida yuqori harakatchanlik guruhi qutisi 1 (HMGB1) ning roli. Acta Pharm Sin B. 2016;6:183–188.

46. ​​Miyake Y, D'Alessandro-Gabazza CN, Takagi T va boshqalar. Allergik bronxial astmada trombinning dozaga bog'liq differentsial ta'siri. J Thromb Haemost. 2013;11:1903–1915.

47. Assady S, Wanner N, Skorecki KL va boshqalar. Glomerulyar salomatlik va kasalliklarda podotsitlar biologiyasiga oid yangi tushunchalar. J Am Soc Nephrol. 2017;28: 1707–1715.

48. Derynck R, Chjan YE. TGF-beta oilasi signalizatsiyasida Smadga bog'liq va Smaddan mustaqil yo'llar. Tabiat. 2003;425:577–584.

49. Shuster N, Krieglstein K. TGF-beta-vositachi apoptozning mexanizmlari. Hujayra to'qimalarining Res. 2002;307:1–14.

50. Greka A, Mundel P. Hujayra biologiyasi va podotsitlar patologiyasi. Annu Rev Fiziol. 2012;74:299–323.

51. Isaka Y. Buyrak fifibrozida TGF-beta signalizatsiyasini nishonga olish. Int J Mol Sci. 2018;19:2532.

52. Chang YJ, Cheng YW, Lin RK va boshqalar. Trombomodulin metastatik bo'lmagan yo'g'on ichak saratoni bilan og'rigan bemorlarning epiteliyadan mezenximaga o'tish (EMT) orqali omon qolishiga ta'sir qiladi. PLoS One. 2016;11:e0160550.

53. Zheng N, Huo Z, Zhang B va boshqalar. Trombomodulin E-kaderinning yuqori regulyatsiyasi va N-kaderinning ekspressiyasini pastga regulyatsiyasi orqali o'pka saratoni hujayralarining o'sma va metastatik potentsialini kamaytiradi. Biochem Biophys Res Commun. 2016;476:252–259.

54. Pan B, Vang X, Nishioka C va boshqalar. G-oqsil bilan bog'langan retseptor 15 trombomodulinning angiogenezi va sitoprotektiv funktsiyasiga vositachilik qiladi. Sci Rep. 2017;7:692.

55. Chen PS, Vang KC, Chao TH va boshqalar. Rekombinant trombomodulin endotelial hujayralarda anti-autofagik ta'sir ko'rsatadi va apolipoprotein E etishmovchiligi bo'lgan sichqonlarda aterosklerozga qarshi ta'sir ko'rsatadi. Sci Rep. 2017;7: 3284.

56. Chung JJ, Okamoto Y, Coblitz B va boshqalar. PI3K/Akt signali vositasida oqsil yuzasi ifodasi 14-3-3 oʻzaro taʼsir etuvchi motiv bilan seziladi. FEB J. 2009;276:5547–5558.

57. Sanches-Kapelo A. Apoptozda TGF-beta1 uchun ikki tomonlama rol. Sitokin o'sish omili Rev. 2005;16:15-34.

58. Griffifin JH, Zlokovic BV, Mosnier LO. Faollashtirilgan protein C, proteaz bilan faollashtirilgan 1 retseptorlari va neyroproteksiya. Qon. 2018;132:159–169.

59. Isermann B, Vinnikov IA, Madhusudhan T va boshqalar. Faollashtirilgan protein C endotelial va podotsitlar apoptozini inhibe qilish orqali diabetik nefropatiyadan himoya qiladi. Nat Med. 2007;13:1349–1358.

60. Klos A, Tenner AJ, Johswich KO va boshqalar. Anafilatoksinlarning salomatlik va kasallikdagi roli. Mol immunol. 2009;46:2753–2766.

61. Morigi M, Perico L, Corna D va boshqalar. C3a retseptorlari blokadasi podotsitlarni diabetik nefropatiyada shikastlanishdan himoya qiladi. JCI Insight. 2020;5: e131849.

62. Conery AR, Cao Y, Tompson EA va boshqalar. Akt TGF-beta-induktsiyali apoptozga nisbatan sezgirlikni tartibga solish uchun Smad3 bilan bevosita o'zaro ta'sir qiladi. Nat Cell Biol. 2004;6:366–372.

63. Derynck R, Muthusamy BP, Saeteurn KY. TGF-beta-induktsiyali epiteliya-mezenximal o'tishda signal yo'lining hamkorligi. Curr Opin Cell Biol. 2014;31:56–66.

64. Remy I, Montmarquette A, Michnick SW. PKB/Akt Smad3 bilan to'g'ridan-to'g'ri shovqin orqali TGF-beta signalini modulyatsiya qiladi. Nat Cell Biol. 2004;6: 358–365.

65. Hamidi A, Song J, Thakur N va boshqalar. TGF-beta PI3K-AKT signalini va p85alpha ning TRAF{4}}vositachiligi orqali prostata saratoni hujayralari migratsiyasini rag'batlantiradi. Ilmiy signal. 2017;10:eaal4186.

66. Peng Z, Weber JC, Han Z va boshqalar. Ko'krak saratonida Akt signalizatsiyasining dixotomiya ta'siri. Mol saratoni. 2012;11:61.

67. Chjou F, Geng J, Xu S va boshqalar. FAM83A signalizatsiyasi NSCLCda PI3K/AKT/Snail yo'li orqali epiteliya mezenximasiga o'tishni keltirib chiqaradi. Qarish (Albany NY). 2019;11:6069–6088.