Preeklampsi bilan og'rigan ayollarning buyraklarida trombomodulin ko'tariladi
Mar 22, 2022
Endotelial glikoprotein trombomodulin koagulyatsiyani, qon tomirlarining yallig'lanishini va apoptozni tartibga soladi. Inbuyrak, trombomodulin glomerulyar endoteliy va podotsitlar o'rtasida o'zaro bog'lanishni keltirib, glomerulyar filtratsiya to'sig'ini himoya qiladi. Bir nechta glomerulyar patologiyalar glomerulyar trombomodulinning yo'qolishi bilan tavsiflanadi. Preeklampsi bilan og'rigan ayollarda qon zardobida eruvchan trombomodulin darajasi ko'tariladi, bu glomerulyar endoteliyning yo'qolishini ko'rsatishi mumkin. Biz angiogenez inhibitori ta'sirida preeklampsi bo'lgan ayollar va kalamushlarning buyraklarida trombomodulin ifodasi pasayganmi yoki yo'qligini tekshirishga kirishdik. Trombomodulin ifodasi immunohistokimyo va qPCR yordamida tekshirildibuyrak11 preeklamptik ayol, 22 homilador nazorat va 11 gipertonik homilador bo'lmagan ayollardan to'plangan otopsi to'qimalari. Keyinchalik,buyraklarEndotelin retseptorlari antagonistlari bilan birgalikda sunitinib yoki sunitinibning ortib borayotgan dozalari bilan davolash qilingan kalamushlardan o'rganildi. Glomerulyar trombomodulin oqsillari darajasi oshdibuyraklarpreeklampsi bilan og'rigan ayollar. Bunga parallel ravishda, sunitinib ta'siriga uchragan kalamushlarda glomerulyar trombomodulin dozaga bog'liq ravishda ko'tarildi va glomerulyar trombomodulinning yuqori regulyatsiyasi gistopatologik o'zgarishlar boshlanishidan oldin sodir bo'ldi. Tanlangan ETAR blokadasi, ammo qo'shaloq ETA/BR blokadasi emas, sunitinib tomonidan qo'zg'atilgan trombomodulin ifodasi va albuminuriyaning ko'payishini normallashtirdi. Biz glomerulyar trombomodulin ifodasini erta bosqichda oshirishni taklif qilamizbuyrak shikastlanishiantiangiogen sharoitlar tomonidan qo'zg'atilgan. Ushbu nefroprotektiv oqsilning glomerulyar endotelial hujayralarida ko'tarilishi preeklampsiyada glomerulyar filtratsiya to'sig'ini himoya qilish mexanizmi bo'lib xizmat qilishi mumkin.
Kalit so'zlar;buyrak etishmovchiligi; buyrak; buyrak shikastlanishi; Buyrak disfunktsiyasi; buyrak to'qimalari; buyrak
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK EKSIZLIGINI YAXSHILADI
Preeklampsi homilador ayollarning 3-5 foiziga ta'sir qiladi va onalar va neonatal kasalliklar va o'limning muhim sababidir1. Preeklampsi platsenta disfunktsiyasi va platsentada bir qancha antiangiogen va yallig'lanishga qarshi omillar (masalan, eriydigan Flt-1, eriydigan endoglin va TNF-alfa) ishlab chiqarilishi bilan tavsiflanadi, bu tizimli endotelial disfunktsiyaga, tomirlar qarshiligining oshishiga yordam beradi. , va bir nechta organlarda asoratlar2. ThebuyrakKo'pincha preeklampsi bilan og'rigan ayollarda ta'sirlanadi, engil proteinuriyadan nefrotik darajadagi proteinuriyagacha vabuyrak etishmovchiligikasallikning keyingi bosqichlarida 3. Qondagi patologik o'zgarishlarbuyraklarpreeklampsi bilan og'rigan ayollarda endotelinlar, podotsitlar oyoq jarayonining yo'qolishi va podotsitlar yo'qolishi bilan tavsiflanadi4,5. Ushbu patologik o'zgarishlarga nima sabab bo'lganligi to'liq tushunilmagan.Buyrak disfunktsiyasipreeklampsiyada, ehtimol, glomerulyar filtratsiya to'sig'ini ushlab turish bilan bog'liq bo'lgan signalizatsiya yo'llarining buzilishi tufayli yuzaga keladi6. Masalan, antiangiogen omil eruvchan Flt-1 darajasining oshishi glomerulusdagi VEGF signalizatsiyasining buzilishiga olib keladi, natijada glomerulyar filtratsiya to'sig'i, proteinuriya va glomerulyar endoteloz buzilishiga olib keladi7,8. Shunga ko'ra, angiogen signalizatsiyani inhibe qiluvchi dorilar, masalan, sunitinib, preeklampsiyani taqlid qiluvchi salbiy ta'sirlar bilan bog'liq.buyrakfenotip 9. Gipertenziyaning yana bir muhim vositachisi vabuyrak shikastlanishipreeklampsiya va VEGF inhibisyonu endotelin tizimidir10. Endotelin - bu endotelin turi orqali signal beruvchi endotelial hujayralar tomonidan ishlab chiqarilgan kuchli vazokonstriktor.
Tomirlarning silliq mushak hujayralarida retseptor (ETAR) vazokonstriksiyaga olib keladi11. Aksincha, endotelin turi B retseptorlari (ETBR) orqali endotelin signalizatsiyasi vazodilatatsiyaga yordam beradigan azot oksidi va prostatsiklin ishlab chiqarishga olib keladi11,12. ETR blokadasi va ayniqsa selektiv ETAR antagonizmi preeklampsi va VEGF-inhibisyonu13 kemiruvchilar modellarida qon bosimi va proteinuriyani samarali ravishda kamaytiradi. Xuddi shunday, biz yaqinda selektiv ETAR blokadasi qutqarishini ko'rsatdikbuyrakVEGF-inhibisyoniga duchor bo'lgan kalamushlarning fenotipi14. Trombomodulin transmembran glikoprotein bo'lib, asosan endotelial hujayralar tomonidan ifodalanadi va endotelial sirt glikokaliks15 ning tarkibiy qismidir. Trombomodulin qon ivishini, yallig'lanishni va apoptozni tartibga solish orqali qon tomir gomeostazini saqlaydi15,16. Preeklampsi bilan og'rigan ayollarda qon zardobida eruvchan trombomodulin darajasining oshishi haqida xabar berilgan17, bu trombomodulin ektodomenining endoteliydan ajralishining kuchayishini aks ettiradi18. Trombomodulin diabetik sichqonlarda glomerulyar fltratsiya to'sig'ini saqlashda hal qiluvchi rol o'ynaydi: buzilgan trombomodulin signalizatsiyasi glomerulyar endotelial hujayralar va podotsitlar apoptozining kuchayishiga va glomerulyar komplement faollashuvining kuchayishiga olib keladi, natijada proteinuriya va glomeruloz, glomerulozning kuchayishi kuzatiladi. Shunday qilib, trombomodulin glomerulyar fltratsiya to'sig'iga muhim sitoprotektiv ta'sir ko'rsatadi va trombomodulin signalizatsiyasining buzilishida ishtirok etishi mumkin.buyrak kasalligipreeklampsida. Ushbu tadqiqotda biz trombomodulin ifodasi kamayganligini tekshirdikbuyraklarpreeklampsi bilan og'rigan ayollar va VEGF inhibisyonining kalamush modelida. Bundan tashqari, biz ushbu kalamush modelida selektiv ETAR antagonisti va ikki tomonlama ETA/BR antagonisti yordamida endotelin tizimining buyrak trombomodulin ifodasidagi rolini o'rgandik.
Usullari
Bemor uchun material. Ushbu tadqiqotda foydalanilgan buyrak otopsi kohortasi ilgari tasvirlangan (qarang: 21). Muxtasar qilib aytganda, Gollandiya Patologiya Registrida (PALGA) umummilliy qidiruv o'tkazildi.buyrak to'qimalarihomilador bo'lgan va preeklampsi holatlari tasdiqlangan bemorlardan. Bundan tashqari, ikkita nazorat guruhi kiritilgan: (1) homiladorlikdan oldin yoki homiladorlik davrida gipertenziv kasallik bo'lmagan homilador ayollar va (2) surunkali gipertenziya tibbiy tarixi bo'lgan homilador bo'lmagan yosh ayollar. Patologiya ma'lumotlari Gollandiya akusherlik jamiyatining Onalar o'limi milliy qo'mitasining yozuvlari bilan bog'langan. Preeklampsi homiladorlikdagi gipertenziyani o'rganish xalqaro jamiyati (ISSHP) 22 diagnostik mezonlari asosida aniqlangan. Parafin o'rnatilganbuyrakUshbu tadqiqot uchun preeklampsi bilan og'rigan 11 ta ayoldan, 22 ta homilador bo'lmagan norma va 11 ta homilador bo'lmagan gipertenziv nazoratdan olingan namunalar mavjud edi. Otopsiyaning barcha namunalari kodlangan va keyin Gollandiya milliy axloq qoidalariga (Inson to'qimalaridan to'g'ri ikkilamchi foydalanish kodeksi, Gollandiya Tibbiyot ilmiy jamiyatlari federatsiyasi) muvofiq anonim tarzda ishlov berilgan va tahlil qilingan. Ushbu tadqiqot Leiden universiteti Tibbiyot markazi Tibbiy etika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (litsenziya raqami P12.107).
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK FONKSIYASINI YAXSHILADI
Kalamushlar. Eksperimentlar Yevropa Parlamentining 2010/63/EU direktivasi va Niderlandiyaning Hayvonlar bo‘yicha eksperimentlari to‘g‘risidagi qonuni ko‘rsatmalariga muvofiq, Eras mus Medical Center Hayvonlar etikasi qo‘mitasidan ruxsat olgandan so‘ng amalga oshirildi (litsenziya raqami 118-16-01). Erkak Wistar Kyoto kalamushlari (WKY, 280-300 g) 10 haftalik yoshida olingan. Hayvonlar harorat 21-22 daraja va 12- soat yorug'lik/qorong'i tsiklda saqlanadigan tajriba xonasiga joylashtirildi. Hayvonlar standart laboratoriya kalamush chow va suv ad libitum foydalanish imkoniyatiga ega edi. Ushbu tadqiqotda batafsil usullar va bu hayvonlarning fenotipi ilgari nashr etilgan 14,23 bilan ikki xil tajriba ishlatilgan. Qisqacha aytganda, kalamushlar 8 kun davomida ETR antagonistlari bilan yoki ularsiz sunitinibning turli dozalari bilan davolashdi. Aorta qon bosimi radiotemetriya yordamida o'lchandi. Davolanishdan oldin va keyin kalamushlar 48 soat davomida metabolik kataklarga joylashtirildi. Birinchi kun iqlimlashtirish uchun, ikkinchi kuni esa 24-soat siydik namunalarini yig'ish uchun ishlatilgan. Birinchi tadqiqotda kalamushlar tasodifiy ravishda 8 kun davomida sunitinibning past, oraliq yoki yuqori dozasini (mos ravishda 7, 14 yoki 26,7 mg/kg/kg po sunitinib-L-malat (Sutent, Pfizer)) yoki transport vositasini olish uchun tayinlangan. . Tajriba oxirida kalamushlar 60 mg/kg pentobarbital intraperitoneal bilan evtanizatsiya qilindi va qorin bo'shlig'i venasini ponksiyon qilish orqali ekssanguinatsiya qilindi23. Ikkinchi tadqiqotda kalamushlarga transport vositasi yoki sunitinibning oraliq dozasi (kuniga 14 mg/kg po) yakka tartibda yoki macitentan (ikkita ETA/BR antagonisti, 100 mg/kg/kun po) yoki sitaksentan (selektiv ETAR) bilan birgalikda qo‘llangan. antagonist, 30 yoki 100 mg / kg / kun po). Tajriba oxirida kalamushlar Foran (izofluran) anesteziyasining haddan tashqari dozasi va qorin bo'shlig'i venasini ponksiyon qilish orqali evtanizatsiya qilindi14. Ikkala tadqiqotda, evtanaziyadan keyin,buyraklarkeyingi tahlillar uchun tezda kesildi.
Buyrak gistologiyasi.Buyrak bo'limlari ko'r-ko'rona patolog tomonidan endotelial hujayra shishishi, epiteliya hujayralarining shishishi, ishemiya va epiteliya ichidagi oqsilning mavjudligi yoki yo'qligi uchun baholandi. Elektron mikroskop uchun ikkita glomerul tekshirildi, glomerulyar endotelinlar mavjudligi va podotsitlar morfologiyasi o'rganildi. Sunitinibning turli kontsentratsiyasiga duchor bo'lgan insonlar va hayvonlarning gistopatologik topilmalari ilgari nashr etilgan21,23.
Immunogistokimyo.Buyrak bo'limlari deparafinizatsiya qilindi. Issiqlikdan kelib chiqqan antigenni olish sitrat (insonga qarshi trombomodulin antikori) yoki Tris/EDTA (kalamush trombomodulin va ETARga qarshi antikorlar) tamponlari yordamida amalga oshirildi. Peroksidaza vodorod periks eritmasida 20 daqiqa davomida bloklanadi.Buyraknamunalar sichqoncha monoklonal insonga qarshi trombomodulin (1:200, Leica Biosystems, Danvers), quyon monoklonal anti-sichqoncha/kalamush trombomodulini (1:2000, Abcam) yoki quyon poliklonal anti-ETAR (1:700) bilan inkubatsiya qilingan. Xona haroratida bir soat davomida Invitrogen, Carlsbad) antikor. Birlamchi antikorning bog'lanishi peroksidaza bilan belgilangan sichqonchaga qarshi yoki etiketli quyonga qarshi polimer (Dako, Daniya) va xromogen sifatida diaminobenzidin bilan tasvirlangan.
Bo'yash tahlili.Trombomodulin va ETAR bo'yashlari klinik diagnostika va davolash (CCLA va MB) bo'yicha ko'r bo'lgan ikkita mustaqil kuzatuvchi tomonidan baholandi. Tasodifiy tanlangan yigirma beshta glomeruli har bir namunada yarim miqdoriy o'lchov yordamida quyidagicha baholandi: 0, yo'q; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">Glomerulyar bo'yashning 90 foizi. Turli ballarning namunaviy misollari S1, S2, S3 qo'shimcha rasmlarida ko'rsatilgan. Kuzatuvchilar o'rtasidagi kelishuv barcha baholash tajribalarida minimal darajada etarli edi (k 0,5 dan katta yoki unga teng). Kuzatuvchilar glomeruliyani boshqacha baholaganlarida, konsensusga erishildi.
qPCR.Trombomodulin va ET AR ning mRNK ifodasini aniqlash uchun kantitativ PCR o'tkazildi. RNK TRIzol reaktivi bilan ajratilgan (Life Technologies, San-Fransisko, CA, AQSh). cDNK sintezi AMV teskari transkriptaza (Roche, Bazel, Shveytsariya) bilan amalga oshirildi va SYBR Green miqdoriy PCR ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq amalga oshirildi (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, AQSh). Primer ketma-ketligi S1 qo'shimcha jadvalida tasvirlangan. Ekspressiya qiyosiy chegara sikli usuli bilan o'lchandi va hipoksantin fosforiboziltransferaza ifodasiga normallashtirildi. Ilovaning o'ziga xosligini tekshirish uchun erish egri tahlili o'tkazildi.
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK DIALIZINI YANGILAYDI
Statistik tahlil.Kuzatuvchilar o'rtasidagi farq kappa statistikasi yordamida aniqlandi. Oddiy taqsimlangan uzluksiz ma'lumotlar bir tomonlama ANOVA yordamida tahlil qilindi, so'ngra rejalashtirilgan juftlik guruhlari taqqoslashlari uchun eng kam farqli post-hoc testdan so'ng. Otopsi kohortidagi guruhlar o'rtasidagi glomerulyar trombomodulin ifodasi ko'rsatkichlaridagi farqlarni tahlil qilish uchun umumlashtirilgan taxminiy tenglamalar (GEE) bilan klasterlangan ma'lumotlar uchun tartibli logistik regressiya ishlatilgan. Trombomodulin ifodasi va gistopatologik yoki klinik topilmalar o'rtasidagi taxminiy korrelyatsiyani tahlil qilish uchun Pearson korrelyatsiyasidan foydalanilgan. Sunitinib dozalari oralig'ida trombomodulin va ET AR javob egri shakllari regressiya chiziqlari yordamida tekshirildi. p<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Natijalar Preeklampsi bilan og'rigan ayollarning buyraklarida glomerulyar trombomodulin ko'payadi. Preeklampsi bilan og'rigan 11 ayolning buyrak namunalarida trombomodulinning bo'yalishi tahlil qilindi,22 ta normotenziv homilador nazorat va 11 ta homilador bo'lmagan gipertenziv nazorat. Gipertenziv nazoratchilar boshqa 2 tadqiqot guruhidagi ayollardan kattaroq edi; homilador nazorat bilan solishtirganda, preeklamptik ayollar uzoqroq homiladorlik va yuqori qon bosimiga ega (Qo'shimcha jadval S2). Glomerulusda trombomodulin mavjudligidan qat'i nazar, trombomodulin barcha o'rganilgan namunalarda peritubulyar kapillyarlarda mavjud edi (Qo'shimcha rasm S1). Glomerulyarlarda trombomodulin ifodasi qon tomir qutbidan kelib chiqqanga o'xshaydi (1A-rasm). O'rtacha, glomerulyar trombomodulin ifodasi preeklamptik bemorlarda homilador va gipertenziv nazorat bilan solishtirganda yuqori bo'lgan (1-rasm); preeklampsi bilan solishtirganda, nazorat guruhida glomerulyar trombomodulin ifodasi ko'rsatkichlari pastroq bo'lgan (homiladorlar, OR: 3.0; 95 foiz -CI: (1.1, 7.8), p.<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Sunitinibga duchor bo'lgan kalamushlarda glomerulyar trombomodulin ifodasi.Preeklamptikadagi topilmalarimizni yaxshiroq tushunish uchunbuyraklar,VEGF retseptorlari inhibitori sunitinibning ortib borayotgan dozalariga duchor bo'lgan kalamushlarda glomerulyar trombomodulinning bo'yalishi o'rganildi. Sunitinibni qabul qilish dozaga bog'liq holda qon bosimi va proteinuriyaning oshishiga olib keldi23. Sunitinibning past dozasiga duchor bo'lgan kalamushlarda histopatologik anomaliyalar yo'q edi; endotelinlar aniqlanganbuyraklarsunitinibning oraliq va yuqori dozalariga duchor bo'lgan kalamushlar; fibrin konlari faqat sunitinib23 ning yuqori dozasiga ta'sir qilgan hayvonlarning glomerulyar kapillyarlarida kuzatilgan. Sichqonlarda qayd etilgan glomerullarning hech biri trombomodulin uchun salbiy emas edi. Glomerulyar trombomodulin oqsili sunitinibning past va oraliq dozalari (p < 0.05,="" 2a-rasm)="" taʼsirida="" boʻlgan="" kalamushlarning="" buyragida="" koʻpaygan,="" ammo="" eng="" yuqori="" dozasi="" taʼsirlangan="" kalamushlarda="" koʻpaymagan.="" sunitinib.="" ushbu="" topilmalarni="" qo'llab-quvvatlash="" uchun="" regressiya="" modeli="" glomerulyar="" trombomodulin="" oqsillari="" darajasi="" sunitinib="" dozasi="" bilan="" statistik="" jihatdan="" ahamiyatli="" kvadratik="" bog'liqlik="" sifatida="" chiziqli="" bo'lmaganligini="" ko'rsatdi="" (2b-rasm,="" y="2.829" va="" 0).="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">buyrak shikastlanishiVEGF inhibisyoni tomonidan qo'zg'atilgan. Sunitinibning past va oraliq dozalari bilan davolash qilingan kalamushlarda, lekin yuqori dozada sunitinib qabul qilingan kalamushlarda emas, nazorat kalamushlarga nisbatan glomerulyar ETAR bo‘yalishi oshdi (p < {0}}.0="" 1,="" 2c-rasm).="" trombomodulin="" darajasiga="" parallel="" ravishda="" glomerulyar="" etar="" darajalari="" sunitinib="" dozasi="" bilan="" kvadratik="" bog'langan="" (y="0.642" plus="" 0,087x−0,003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
ETAR blokeri sitaksentan bilan davolash trombomodulin ifodasini normallantiradi.Trombomodulin ifodasi endotelin signalizatsiyasi bilan tartibga solinishini o'rganish uchun sunitinibning oraliq dozasiga duchor bo'lgan kalamushlar ETR blokirovka qiluvchi vositalar bilan davolandi. Selektiv ETAR antagonisti (sitaksentan) bilan davolash sunitinib bilan davolash qilingan kalamushlarda qon bosimi va albuminuriyani normallashtirdi14 (Qo'shimcha rasm S4). Aksincha, er-xotin ETA/BR antagonisti (makitentan) bilan davolash qon bosimining normallashishiga olib keldi, ammo sunitinib keltirib chiqaradigan albuminuriyani normallashtirishga olib kelmadi14 (Qo'shimcha rasm S4).
Trombomodulin mRNK ifodasi sunitinibga ta'sir qilgan kalamushlarning buyraklarida nazorat bilan solishtirganda ortdi (3A-rasm, p.<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Munozara
Bu erda biz trombomodulinning nefroprotektiv oqsili ko'payganligini ko'rsatamizbuyrakpreeklampsi bilan og'rigan ayollarning glomeruli. Bundan tashqari, biz angiogenez inhibitori sunitinib ta'siriga duchor bo'lgan kalamushlarda glomerulyar trombomodulin dozaga bog'liq ravishda ko'tarilganligini va glomerulyar trombomodulinning ko'payishi histopatologik ko'rinishlarning boshlanishidan oldin ekanligini ko'rsatamiz. Nihoyat, biz ETARni blokirovka qilish glomerulyar trombomodulinning sunitinib tomonidan qo'zg'atilgan yuqori regulyatsiyasini normallashtirishini ko'rsatamiz. Bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatadiki, glomerulyar endotelial trombomodulinning ko'tarilishi preeklamptikaning dastlabki bosqichida sodir bo'ladi.buyrak shikastlanishiva glomerulyar fltratsiya to'sig'ini himoya qilish mexanizmi bo'lib xizmat qiladi. Bizning tadqiqotimiz preeklampsiyada glomerulyar trombomodulinning ko'payishi haqida xabar bergan birinchi tadqiqotdir. Oldin biz preeklampsiya bilan og'rigan ayollarning platsentalarida trombomodulinning regulyatsiyasi pasayganligini aniqlaganimiz sababli24,
preeklampsi bilan og'rigan bemorlarda eruvchan trombomodulin ektodomenining sarum darajasining oshishi17 glomerulyar endoteliydan kelib chiqishi mumkin. Bundan tashqari, biz glomerulyar trombomodulin ifodasi va glomerulyar endotelinlar mavjudligi o'rtasida teskari bog'liqlikni topdik, bu trombomodulinning yuqori regulyatsiyasi glomerulyar himoya mexanizmi bo'lib xizmat qilishini ko'rsatadi. Ushbu tushuncha diabetik sichqonlarda klinikadan oldingi dalillar bilan qo'llab-quvvatlanadi, bunda trombomodulin glomerulyar hujayraning omon qolishini tanqidiy ravishda saqlaydi va glomerulyar komplement faollashuvini bostiradi19,20. Antiangiogenik holat glomerulyar trombomodulin darajasini oshiradi, degan xulosamizdan farqli o'laroq, oldingi tadqiqot sFlt{4}} bilan davolash yarim oylik glomerulonefritli kalamushlarda glomerulyar trombomodulin ifodasini kamaytirishini aniqladi25. Hara va boshq.25 sFlt-1 ning sog'lom kalamushlarda glomerulyar trombomodulinga ta'sirini o'rganmagan. Shuning uchun, preeklampsiyada yallig'lanish omillari darajasining ortishi ham kuzatilgan bo'lsa-da, bu tadqiqotda glomerulyar trombomodulinning regulyatsiyasi pastligi glomerulonefritda mavjud bo'lgan yuqori darajadagi glomerulyar yallig'lanish (yallig'lanishga qarshi sitokinlar, komplement faollashuvi) bilan izohlanishi mumkin, bu trombomodulin ifodasini kuchli bostiradi. .
Preeklampsiyada glomerulyar trombomodulin VEGF retseptorlarini tizimli inhibe qilish natijasida ko'tariladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz sunitinibga duchor bo'lgan kalamushlarda trombomodulin ifodasini o'rgandik. Sunitinib dozaga bog'liq ravishda glomerulyar trombomodulinni past va oraliq dozalarda oshiradi, lekin eng yuqori dozada emas. Kam dozali sunitinib23 taʼsirida boʻlgan kalamushlarning buyraklarida gistologik oʻzgarishlar kuzatilmaganligi sababli, glomerulyar trombomodulin ifodasining oshishi sunitinib tomonidan qoʻzgʻatilgan glomerulyar gistopatologik toʻsiq yoshi boshlanishidan oldin sodir boʻlgan. Sunitinibning oraliq dozasiga duchor bo'lgan kalamushlarda glomerulyar trombomodulinning eng yuqori ifoda darajasi kuzatildi va bu albuminuriya miqdori bilan bevosita bog'liq edi. Bizning odamda preeklampsi holatlarining buyrak gistopatologik fenotipi sunitinibning oraliq dozasi bilan davolangan kalamushlarning buyrak shikastlanishi bilan taqqoslangan: endotelinlar 11 preeklampsidan 6 tasida kuzatilgan.
holatlar va mikrotromblar 11 preeklampsi holatlarining 1 tasida kuzatilgan21, kalamush modelida esa oraliq dozada davolangan kalamushlarda endotelinlar, eng yuqori dozada davolangan kalamushlarda esa endotelinlar fibrin konlari bilan birlashtirilgan23. Biz glomerulyar trombomodulinning ekspressiyasini preeklampsi va angiogenik inhibisyonning dastlabki bosqichida ko'payishini taklif qilamiz, bu antiangiogenik stressni glomerulyar to'siqni bartaraf etish uchun himoya mexanizmi sifatida. Aksincha, eng yuqori dozada davolangan kalamushlarda trombomodulinning ekspressiyasi nazorat darajasiga kamaydi. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, og'ir erta boshlangan preeklampsi bilan og'rigan ayollarda endotelial glikokaliks qatlamining o'lchamlari kamayadi27. Shuning uchun biz, shuningdek, yuqori dozali sunitinib bilan davolash qilingan kalamushlarda trombomodulin va fermentlar o'rtasidagi o'zaro ta'sirni keltirib chiqaradigan endotelial glikokaliks ta'sirlanishini taklif qilamiz va shu bilan glomerulyar trombomodulin oqsilining proteolitik bo'linishi va yo'qolishiga yordam beradi. Bizning pre-eklampsiya holatlarida glomerulyar trombomodulin darajasining oshishi glomerulyar endotelinlarning kamayishi bilan bog'liq bo'lib, bu to'g'ridan-to'g'ri glomerulyar VEGF signalining buzilishi natijasida yuzaga kelgan lezyon. In vitro tadqiqotlari VEGF ni endotelial hujayralardagi trombomodulin ekspressiyasining kuchli qo'zg'atuvchi omili sifatida aniqladi28. Shunday qilib, preeklampsi va angiogenik inhibisyon kabi antiangiogenik sharoitlarda buyrak trombomodulinining ko'tarilishi teskari tuyulishi mumkin. Qizig'i shundaki, bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, preeklampsi29 bo'lgan ayollarning glomerulida VEGF ko'payadi, bu VEGFning biologik mavjudligini kamaytirishga urinishda glomerulyar kompensatsiya mexanizmini aks ettiradi. Shunday qilib, trombomodulinning yuqori regulyatsiyasi tizimli antiangiogenik sharoitlarda glomerulyar VEGF ning kompensatsion o'sishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, endotelin signalizatsiyasi glomerulyar trombomodulinni boshqarishda ishtirok etishi mumkin. Preeklampsi bilan og'rigan ayollarda plazma endotelin darajasi ko'tariladi30 va tizimli sFlt-1 darajalari bilan bog'liq31,32. Bizning kalamush modelimizda sitaksentan (ETAR antagonisti) va macitentan (ikkita ETA/BR antagonisti) bilan davolash kalamushlarimizda sunitinib keltirib chiqaradigan gipertenziyani normallashtirishga olib keldi14. Biroq, faqat sitaksentan (ETAR antagonisti) bilan davolash buyrak trombomodulinining sunitinib tomonidan qo'zg'atilgan regulyatsiyasini normallashtirdi va albuminuriyani kamaytirdi. Bu shuni ko'rsatadiki, buyrak trombomodulin ifodasini tartibga solish gipertenziya bilan bog'liq bo'lgan endotelial shikastlanishga bog'liq emas, bu bizning gipertenziv bemorlarda trombomodulinning ko'payishining yo'qligi bilan ham tasdiqlanadi. ETAR trombomodulin ifodasini tizimli ta'sirlar orqali yoki glomerulyar endotelial hujayralardagi signalizatsiya orqali qo'zg'atadimi yoki yo'qligini tekshirish kerak. Qizig'i shundaki, trombomodulin ifodasi faqat sunitinib bilan davolash qilingan kalamushlarda ETAR blokadasidan keyin mRNK darajasida normallashtirildi, ammo protein darajasida emas. Ushbu nomuvofiqlikni post-translatsiya effektlari, oqsilning yarim yemirilish davri va trombomodulinning endoteliydan parchalanishiga ta'sir qiluvchi omillar bilan izohlash mumkin.
Trombomodulin muhim yallig'lanishga qarshi xususiyatlarga ega bo'lib, Lyuis y antijeni va HMGB-133,34 kabi yallig'lanishga qarshi molekulalarni sekvestrlash orqali leykotsitlar infiltratsiyasini inhibe qiladi, NF-kB faolligini35 kamaytiradi va komplement faollashuvini inhibe qiladi20. Ilgari biz preeklampsi holatlarida glomerulyar komplement faollashuvi homilador va gipertonik nazorat bilan solishtirganda ko'payganligi haqida xabar bergan edik36. Tis shuni ko'rsatadiki, preeklampsiyada glomerulyar endotelial trombomodulinning yuqori regulyatsiyasi yallig'lanishga qarshi va komplementga qarshi mexanizm sifatida ishlaydi. O'zining taniqli yallig'lanishga qarshi ta'siridan tashqari, yaqinda o'tkazilgan tadqiqot trombomodulinning yallig'lanishga qarshi xususiyatlarga ega ekanligini aniqladi; trombomodulin leykotsitlar integrinlari LFA-1 va Mac1ni bog‘laydi va shu bilan in vitro37 leykotsitlarning endoteliyga yopishishini kuchaytiradi. Shuning uchun glomerulyar trombomodulinning ko'payishi ham glomerulyar yallig'lanish va shikastlanishga bevosita hissa qo'shishi mumkin. Biz o'rganishimizdagi cheklovlarni tan olishimiz kerak. Birinchidan, biz glomerulyar trombomodulin ifodasini o'rgangan preeklampsi bilan og'rigan ayollarning barchasi preeklampsiya oqibatlari tufayli vafot etdi. Bu ushbu ayollarni preeklampsi bilan og'rigan bemorlarning o'ziga xos kichik guruhiga aylantiradi va shuning uchun ushbu tadqiqot natijalari preeklampsi rivojlanayotgan barcha ayollar uchun qo'llanilmasligi mumkin. Ikkinchidan, sunitinib bilan davolash qilingan erkak kalamushlar antiangiogenik sharoitda trombomodulin regulyatsiyasini o'rganish uchun namuna sifatida ishlatilgan. Bundan tashqari, sunitinib turli xil retseptorlari tirozin kinazlarini inhibe qilishga olib keladi va VEGFning o'ziga xos inhibitori emas. Shubhasiz, bu model preeklampsiga to'liq taqlid qilmaydi, ammo sunitinib bilan davolash gipertenziya va proteinuriyaga olib keladi23. Shuning uchun biz ushbu modeldan antiangiogenik sharoitlarda trombomodulin regulyatsiyasini o'rganish uchun foydalana oldik. Tadqiqotimiz cheklovlariga qaramay, preeklampsiyada buyrak shikastlanishi mexanizmlari haqida qiziqarli fikrlarni ilgari suradi. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, preeklampsiyada va angiogenik inhibisyonning sunitinib tomonidan qo'zg'atilgan modelida buyrak trombomodulin ifodasi kuchayadi. Biz glomerulyar trombomodulin darajasining oshishi glomerulyar fltratsiya to'sig'iga antiangiogenik stressga javoban reno-himoya mexanizmini aks ettiradi deb taxmin qilamiz. Bundan tashqari, ETAR antagonisti bilan davolash sunitinib bilan davolash qilingan kalamushlarda proteinuriyani kamaytirish bilan bir vaqtda buyrak trombomodulin mRNK ifodasini normallashtirdi. Trombomodulinning glomerulyar fltratsiya to'sig'idagi roli bo'yicha ko'proq tadqiqotlar o'tkazilishi kerak.
