Yallig'lanish va buyrak kasalliklarini davolash uchun Cistanche: Sistinopatiyada buyraklar ishtirokida yallig'lanishning patogen rolining sababi nima?
Mar 13, 2022
Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com
Galektin-3 va tsistinozin o'rtasidagi o'zaro ta'sir sistinozning buyraklar ishtirokida yallig'lanishning patogen rolini ochib beradi.
Tatyana Lobry1,2 va boshqalar
Yallig'lanishko'plab kasalliklarning patogenezida ishtirok etadi. Biroq, asosiy mexanizmlar ko'pincha noma'lum. Bu erda biz tekshiramizsistinoz, tarkibida ishtirok etgan proteinsistinoz, galektinning muhim regulyatoridir-3, davomida b-galaktosidaza bog'lovchi oqsil oilasining a'zosiyallig'lanish. Sistinozlizosomal saqlash buzilishi va sistinozning hamma joyda namoyon bo'lishiga qaramay,buyrakkasallik ta'sir qiladigan asosiy organdir.Sistinozgalektinning lizosomal joylashuvi va degradatsiyasini kuchaytirishi aniqlandi-3. Ctns ichida–/–sichqonlar, sichqonchaning modelisistinoz, galektin-3 haddan ortiq ifodalanganbuyrak. Tsistinozli sichqonlarda galektin-3 ning yo'qligi buyrakning patologik funktsiyasi va tuzilishini yaxshilaydi va Ctns buyragida makrofag/monotsitlar infiltratsiyasini kamaytiradi.–/–Gal3–/–sichqonlar Ctns bilan solishtirganda–/– sichqonlar. Bu maʼlumotlar galektin-3 vositachilik qilishini aniq koʻrsatadiyallig'lanishda ishtirok etishbuyraksistinozda kasallikning rivojlanishi. Bundan tashqari, galektin -3 yallig'lanishga qarshi sitokin MonocyteChemoattractant Protein-1 bilan o'zaro ta'sir qilishi aniqlandi, bu monositlar/makrofaglarning to'planishini rag'batlantiradi va Ctns-/- sichqonlari zardobida sezilarli darajada ko'paygan. va shuningdek, bemorlarsistinoz. Shunday qilib, bizning topilmalarimiz yallig'lanishda sistinoz va galektin{0}} o'zaro ta'sirining yangi rolini ta'kidlaydi va buning uchun qo'shimcha mexanik tushuntirish beradi.buyraksistinoz kasalligi. Bu yangi dori maqsadlarini aniqlashni kechiktirishga olib kelishi mumkinsistinoztaraqqiyot.
Kalit so‘zlar:surunkali buyrak kasalligi; sistinoz; galektin-3;yallig'lanish; monotsit kemoatrakant oqsili - 1
cistanche surunkali buyrak kasalligi va sistinozni davolashi mumkin
Yallig'lanishning asosiy sababi azot oksidi yallig'lanish hujayralarini ishlab chiqarishga olib kelishi mumkin.Cistancheqimmatli xitoy o'simlik dorisidir. Uning faol moddalari azot oksidi sekretsiyasini inhibe qilishi va yallig'lanish va buyrak kasalliklarining oldini olish va davolashda rol o'ynashi mumkin.
Tarjima bayonoti
Davolanishga qaramay, bemorlar hali ham buyrak etishmovchiligining so'nggi bosqichiga o'tishadi. Ushbu tadqiqotda biz yo'qligini ko'rsatdiksistinozgalektin-3 (Gal-3) lizosomal degradatsiyasining buzilishiga olib keladi.yallig'lanishva rivojlanishisurunkali buyrak kasalligiichidasistinoz. Ushbu topilmalar bemorlarda buyrak degeneratsiyasini cheklashi yoki kechiktirishi mumkin bo'lgan potentsial terapevtik maqsadlar bo'yicha yangi istiqbollarni ochadi.sistinoz. Shunday qilib, yallig'lanishga qarshi dorilar va Gal{1}} inhibitörleri, masalan, nonsteroid yallig'lanishga qarshi dorilar yoki indometazin sistinozda buyrak patogenezini yaxshilashi mumkin.
Yallig'lanishorganizmning shikastlanish yoki infektsiyaga normal o'tkir reaktsiyasi;1lekin surunkaliyallig'lanishto'qimalarning shikastlanishi bilan bog'liq. Qandli diabet kabi surunkali kasalliklar bo'lsa, shikastlangan to'qimalar immunitet tizimini faollashtiradi, bu doimiy yallig'lanish reaktsiyasiga va oxir-oqibat to'qimalarning degeneratsiyasiga olib keladi.2 Sitokinlar asosiy modulyatorlardiryallig'lanishva faollashtirish yoki hal qilish imkoniyatiga egayallig'lanishjarayoni.3 bilan kasallangan bemorlardasurunkali buyrak kasalligi(CKD), sitokinlarning plazma kontsentratsiyasining oshishi (interleykin [IL]-6 va o'simta nekrozi omili-a) vayallig'lanishmarkerlar (C-reaktiv oqsil, IL-6, gialuronan va neopterin) buyrak kasalligining oxirgi bosqichiga o'tish bilan bog'liq.4 Yallig'lanish reaktsiyalarini qo'zg'atuvchi o'ziga xos vositachilarni tushunish degenerativ zararni oldini olish uchun tegishli dori maqsadlarini aniqlashga yordam beradi. .
Sistinozautosomal-retsessiv metabolik kasallik bo'lib, lizosomal saqlash buzilishi oilasiga mansub va barcha organlarda sistinning to'planishi bilan tavsiflanadi.5 gen nuqsonlisistinoz, CTNS, lizosomal sistin/proton ko-transportchisi, sistinozni kodlaydi.6,7 CTNS hamma joyda ifodalangan bo'lsa-da,buyrakbilan odamlarda birinchi zararlangan organdirsistinoz. Bemorlar odatda hayotining birinchi yilida suyuqlik va elektrolitlar almashinuvining jiddiy buzilishi, zaif o'sish va raxit bilan tavsiflangan Fankoni sindromi bilan kasallanadilar.8Keyinchalik CKD rivojlanadi, bu buyrak kasalligining oxirgi bosqichiga o'tadi va talab qiladibuyraktransplantatsiya. Barcha to'qimalarda sistinning to'planishi oxir-oqibat ko'p organ disfunktsiyasiga olib keladi; bemorlarda fotofobi va ko'rlik, hipotiroidizm, gipogonadizm, diabet, miyopatiya va markaziy asab tizimining yomonlashuvi kuzatiladi.9 C57BL/6 fonida nokautli sichqoncha modeli (Ctns–/–) 10 sistinozli bemorlarning buyrak fenotipini takrorlaydi,11 shuningdek, shox pardada sistin kristallarining cho'kishi12va qalqonsimon bezning disfunktsiyasi.13
Ushbu tadqiqotda biz yangi rolni ochib beramizsistinozichidayallig'lanishGal-3 bilan oʻzaro aloqasi orqali. Gal-3 lektin va b-galaktozid bog‘lovchi oqsillar oilasiga kiradi 21 va bir nechta biologik funktsiyalarda ishtirok etadi, shu jumladanyallig'lanish.22kontekstidabuyrakkasalliklar, Gal{0}} inhibisyoni yallig'lanishga qarshi marker ifodasini va buyrak fibrozini kamaytirishi va giperaldosteronizm, gipertenziya yoki semirish modellarida glomerulyar filtratsiya tezligining pasayishiga yo'l qo'ymasligi ko'rsatilgan.23–26Bu erda biz dalillar keltiramiz, insistinoz, yo'qligisistinozichida Gal-3 ortiqcha ifodalanishiga olib keladibuyraklar, makrofag infiltratsiyasini va CKD rivojlanishini kuchaytirish. Bundan tashqari, biz dori terapiyasi uchun yangi gen maqsadlarini ochib beruvchi potentsial vositachi sifatida monotsit kimyoatrakant oqsili-1 (MCP-1)ni aniqlaymiz. NATIJALAR Gal-3 uglevodni aniqlash domeni orqali sistinoz bilan o'zaro ta'sir qiladi. Muayyan o'zaro ta'sirni aniqlash uchun kantitativ massa spektrometriyasidan foydalangan holda hamkorlar, Madin-Darby itibuyrak(MDCK) hujayralari sistinoz - yashil FL floresan oqsili (GFP) termoyadroviy oqsilini barqaror ifodalash uchun lentiviral konstruktsiya bilan o'tkazildi. Ilgari nashr etilgan vakuolyar tipdagi H+ adenozin trifosfatazaning 9 ta bo'linmasiga qo'shimcha ravishda,19Gal-3 bilan oʻzaro taʼsir qiluvchi oqsillardan biri sifatida aniqlandisistinoz(1a-rasm). Ushbu o'zaro ta'sir koimmunopresipitatsiya, so'ngra Western blot bilan tasdiqlandi (1b va c-rasm). Bundan tashqari, biz Gal-3 vasistinozoqsilning C-terminal dumida lokalizatsiya qilingan Gal-3 karbongidratni aniqlash domeni (CRD) orqali vositachilik qilgan. O'zaro ta'sir galektin-uglevod o'zaro ta'sirining kuchli inhibitori bo'lgan tiodigalaktozid tomonidan inhibe qilingan (1d-rasm). Barcha galektinlar singari, Gal-3 glikosillangan oqsillarga yaqinlik xususiyatiga ega21, shuning uchun Gal-3 bilan oʻzaro taʼsir oqsilning intralizosomal N-terminal dumida joylashgan sistinozning glikosillangan qismi orqali sodir boʻlishi mumkin.27
Sistinosin Gal-3 lizosomal joylashuvi va degradatsiyasini kuchaytiradi
Gal-3 bilan aloqa qilishda potentsial lizosomal lokalizatsiyasini tekshirishsistinoz, biz Gal-3 kabi katepsin D (intralizosomal proteaza) K proteinazasi tomonidan hazm qilishdan himoyalanganligini, lizosomalar Triton X- 100 bilan o'tkazilgach, ikkala oqsil ham hazm bo'lishini ko'rsatdik (2a-rasm va qo'shimcha). S1-rasm). Shunga o'xshash ma'lumotlar sichqon jigaridan ajratilgan lizosomalarda olingan bo'lib, Gal-3 in vivo lizosomal lokalizatsiyasini tasdiqlaydi (2b va s-rasm). Aniqlash uchun ishonchli antikor yo'qligi sabablisistinoz, ustida immuno-bo'yash o'tkazildisistinoz-GFP – anti-Gal-3 antikori bilan MDCK hujayra chiziqlarini ifodalash. Lizosomalar lümeninde Gal-3 mavjudligini tasdiqladi, sistinoz-GFP va Lamp-2 (lizosomal transmembran oqsili) esa faqat pufakchalar membranasida topilgan (2d-rasm).
Agar tekshirish uchunsistinozinGal-3 odam savdosi bilan shug'ullangan, biz ikkalasining dinamikasini tahlil qildiksistinozva Gal-3 – yovvoyi turdagi (WT) va Ctns dan sichqon embrion fibroblastlarida (MEFs) ikki rangli jonli hujayrali jami ichki aks ettiruvchi FL floresan mikroskopidan foydalangan holda musbat pufakchalar.–/–CTNS-DsRed va Gal-3–GFP ifodalovchi sichqonlar. Bizning tahlillarimiz buni tasdiqladisistinozva Gal-3 Ctns–/– MEFlarda haqiqiy kolokalizatsiyaga uchraydi, chunki bu molekulalarning umumiy ichki aks ettirish FL floresan mikroskopiya zonasida oʻxshash fazoviy-vaqt taqsimoti bilan tasdiqlangan (2e-rasm). WT MEFlardagi ma'lumotlar o'xshash edi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan). Bundan tashqari, faqat Gal- 3-GFP bilan transfektsiyalangan MEFlar tahlil qilinganda, sitoplazmada Gal-3-GFP topilgan va CTNS-DsRed bilan birgalikda transfeksiyadan farqli o'laroq, aniq pufakchali tuzilma kuzatilmagan. ma'lumotlar ko'rsatilmagan).
Bu ma'lumotlar 293T hujayralarida tasdiqlangan, ularda sitoplazmada kuchli GFP signali faqat Gal-3-GFP ifodalovchi hujayralarda, Gal-3-GFP va ikkalasini ifodalovchi hujayralarda kuzatilgan.sistinozin-DsRed, Gal-3–GFP asosan sistinoz-DsRed ifodalovchi lizosomalarda lokalizatsiya qilingan (3a-rasm). Bundan tashqari, faqat Gal-3–GFP yoki Gal- 3–GFP va CTNS-DsRed, Gal-3–GFP va DsRed bilan transfektsiyalangan hujayralardagi Gal-3 protein ifodasini miqdoriy aniqlash nazorat sifatida, CTNS-DsRed bilan birgalikda transfektsiyalangan hujayralardagi Gal-3-GFP oqsillarini yakka Gal-3-GFP bilan transfektsiyalangan yoki DsRed bilan birgalikda transfektsiyalangan hujayralar bilan solishtirganda sezilarli darajada kamroq ko'rsatdi (3b-rasm). Umuman olganda, bu natijalar shuni ko'rsatadisistinozinGal-3ning lizosomal joylashuvi va degradatsiyasini kuchaytiradi. Sistinosinning CMAda ishtirok etishi ko'rsatildi.28 Issiqlik zarbasi 70 kDa protein (Hsc70) LAMP2A ga bog'liq tarzda membrana bo'ylab substrat oqsillarining lizosomal lümenga ochilishi va joylashishiga yordam berish orqali CMAda ishtirok etadi.29,30 Chunki Gal{ {8}} ni CMA tomonidan parchalanishi taklif qilingan edi31, biz sistinotik MEFlarda Hsc70 ga nisbatan Gal-3 lokalizatsiyasini tekshirdik. Konfokal mikroskop tahlili Gal-3–GFP ning Hsc70- musbat tuzilmalarida WT (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) va Ctns da kolokalizatsiyasini tasdiqladi.–/–Hujayralar (3c-rasm), Gal-3 ning Hsc70 bilan birgalikda tashilishini qo'llab-quvvatlaydi va lizosomal ichkiizatsiyani, ammo chaperon tomonidan Gal-3 tan olinishini noto'g'ri ekanligini ko'rsatadi.sistinoz.
Gal-3 Ctnsda buyrak yallig'lanishida ishtirok etadi–/–sichqonlar
Gal-3ning rolini oʻrganishsistinozin vivo, biz ikkalasida ham etishmayotgan ikki marta nokautli sichqoncha modelini yaratdiksistinozinva Gal-3 (Mat–/–Gal-3–/–sichqonlar). WT, Ctns–/–, va Gal-3–/–sichqonlar nazorat sub'ektlari sifatida ishlatilgan. C57BL/6 Ctns da–/–sichqonlarda buyrak anomaliyalari taxminan 10 oylikda paydo bo'ladi.11 Shuning uchun, tadqiqotlar 8-9 oyligida o'tkazildi.buyrakanomaliyalar aniqlana boshlaydi va 12-15 oyda buyrak anomaliyalari kuchayganida. Chunki tsistin tarkibi erkak va ayol Ctnsda farqli ekanligi aniqlandi–/– buyraklar, ular alohida tahlil qilindi. Agar sistin miqdori ikkala genotipda ham yosh bilan ortib borsa, Ctns–/– Gal-3–/– sichqonlar va Ctns oʻrtasida erkak va urgʻochi buyraklarda sezilarli farq kuzatilmagan.–/– 8-9 oylik va 12-15 oylik sichqonlar (4a-rasm).
Buyrak funktsiyasi sarum va siydikda baholandi va WT va Ctns o'rtasida sezilarli farq kuzatilmadi–/–sichqonlar 8 dan 9 oygacha (ma'lumotlar ko'rsatilmagan), lekin 12 dan 15 oygacha, Ctns–/–sichqonlar WT sichqonlari bilan solishtirganda zardobdagi kreatinin va karbamid darajasini sezilarli darajada yuqori ko'rsatdi. Qizig'i shundaki, Ctns–/–Gal-3–/–sichqonlar Ctns bilan solishtirganda buyrak funktsiyasi yaxshilanganligini ko'rsatdi–/–sichqonlar 12 dan 15 oygacha, past zardobdagi kreatinin (P < 0.05) va karbamid (P <0,05; 1-jadval).
8- oylikdan 9- oygacha va 12- oydan 15- oygacha bo'lgan sichqonchaning gistologik tadqiqotlaribuyrakbo'limlar Ctnsda og'ir anomaliyalar mavjudligini aniqladi–/– buyraklar, shu jumladan quvurli atrofiya, tortib olingan glomeruli va mononuklear infiltratlar. Buyrak bo'limlarini ko'r-ko'rona tahlil qilish kortikal shikastlanish darajasini 1 dan (to'qima tuzilishi saqlanib qolgan) 6 gacha o'zgartirdi. Ctns uchun o'rtacha ball–/–sichqonlar 9 oyligida 2.64 - 0.36 (n ¼ 7) va 12-15 oyligida 4.12 0.37 (n ¼ 16) edi. Ctns buyraklarida–/–Gal-3–/–Shu yoshdagi sichqonlarda bu anomaliyalar sezilarli darajada kamroq edi: 1.62 - 0.11 9 oyda (n ¼ 21; P < 0.05,="" mann-whitney="" t-="" test)="" va="" 3.04="" -="" 0.22="" 12="" dan="" 15="" oygacha="" (n="" ¼="" 33;="" p=""><0,05, mann-uitni="" t-testi)="" (4b-rasm="" va="" qo'shimcha="" s2-rasm).="" bundan="" tashqari,="" har="" bir="" to'qimalarga="" quvurli="" atrofiya="" foizi="" va="" ctns="" uchun="" o'rtacha="">–/–sichqonlar va Ctns–/–Gal-3–/–sichqonlar 12 dan 15 oygacha mos ravishda 66 foiz va 42 foiz edi (P ¼ 0.01). Bundan tashqari, Ctns o'rtasidagi ajoyib farq–/–va Ctns–/– Gal-3–/– buyrakbo'limlar Ctnsda bir nechta mononuklear infiltratlarning mavjudligi edi–/–Gal-3–/–bo'limlar, holbuki Ctnsda doimiy ravishda og'ir infiltratlar kuzatilgan–/– buyrak(4b-rasm).
Biz 8- oylikdan 9- oygacha bo'lgan davrda gistologik tekshiruvda kuzatilgan mononuklear infiltratlarni tavsifladik.–/– buyraklarCD68 va CD45 va CD68 va asosiy gistomoslashuv klassi II (Qo'shimcha S3) bilan birgalikda immuno-bo'yash orqali makrofaglar/monotsitlar sifatida, lekin CD68 va CD163 bilan emas, bu makrofaglarning yallig'lanishga qarshi profiliga o'xshash M1- ga ega ekanligini ko'rsatadi.32 ,33 CD68- musbat hujayralar miqdori WT, Gal-3da makrofaglar/monotsitlar sezilarli darajada kamayganligini aniqladi.–/–, va Ctns–/–Gal-3–/– buyraklarCtns bilan solishtirganda–/– buyraklar(4c-rasm), gistologik ma'lumotlarni tasdiqlovchi (4b-rasm).
Umuman olganda, bu topilmalar Gal-3 sistinozda makrofaglar/monotsitlarni jalb qilishda ishtirok etishini ko'rsatadi.buyraklarva uning yo'qligi Ctnsda buyrak kasalligini yaxshilaydi–/–sichqonlar. Shuning uchun buni taklif qiladiyallig'lanishhech bo'lmaganda qisman Ctnsdagi buyraklarning yomonlashishi uchun javobgardir–/– sichqonlar.
Ctns etishmovchiligi bo'lgan buyraklar Gal-3 haddan tashqari ko'p namoyon bo'ladi
Western blot tahlilidan foydalanib, biz Gal-3 ifodasi sezilarli darajada oshganligini aniqladikbuyraklar12-oylik Ctns–/–sichqonlar WT sichqonlari bilan solishtirganda (5a va b-rasm). Gal-3 ning bu ortgan ifodasi Ctnsga xosmi yoki yoʻqligini tekshirish uchun–/– buyraklar, biz Gal{0}} ifodasini transkript va protein darajasida miqdoriy aniqladikbuyraklarstandart subtotal 2-bosqichli nefrektomiya operatsiyasi bilan qoʻzgʻatilgan CKD bilan kasallangan sichqonlardan va soxta operatsiya qilingan hayvonlardan. WT va Ctns–/–sichqonlar nazorat sub'ektlari sifatida ishlatilgan. Gal-3 transkriptlari Ctns–/– va soxta buyraklarda sezilarli darajada oshdi, ammo CKDda juda ko'p.buyraklarWT sichqonlari bilan solishtirganda (5c-rasm). Aksincha, protein darajasida Gal-3 faqat Ctnsda aniqlangan–/–buyraklar, kuchli faqat Ctns taklif–/–buyraklar Gal-3 oqsilini parchalay olmadi (5d-rasm). Sichqonchadagi Gal-3 ning immunoflyuoresan bo'yalishibuyrak8 dan 9 oygacha bo'lgan davrda Ctnsda Gal-3 haddan tashqari ko'pligini ko'rsatdi.–/– buyraklarWT bilan solishtirgandabuyraklar(5e-rasm). Bundan tashqari, Gal{1}} CD68+ makrofaglar, shuningdek, Ctnsdagi buyrak hujayralari tomonidan ifodalangan.–/– buyraklar8 dan 9 oygacha (qo'shimcha S4 rasm). Umuman olganda, bu ma'lumotlar Gal-3 degradatsiyasining kamayishi bilan mos keladi.sistinozin vitroda ko'rsatilgandek (3a va b-rasm), Ctns tarkibida Gal-3 oqsilining to'planishiga olib keladi.–/– buyraklar.
Sistinozinning yo'qligi gal-3 ko'tarilishi orqali sarum MCP-1 ko'payishiga olib keladi.
Gal-3 tartibga soladiyallig'lanishturli mexanizmlar orqali.34 Shunday qilib, mexanizm haqida qo'shimcha tushunchalarga ega bo'lishsistinoz, biz turli xil yallig'lanishga qarshi yoki yallig'lanishga qarshi sitokinlarning 12- dan 15- oygacha bo'lgan WT, Ctns zardobida ifodalanishini tekshirdik.–/–, Gal-3–/–, va Ctns–/–Gal- 3–/–sichqonlar. Oltita sitokin darajasi sichqonchaning sitometrik boncuk massivi, MCP-1, interferon-g, o'simta nekroz omili va IL-10, IL-6 va IL-12p70 bilan o'lchandi. Faqat MCP-1 ifodasi Ctns–/– sichqonlar zardobida WT va Gal-3–/– sichqonlari hamda Ctns bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi.–/–Gal-3–/–MCP-1 zardob darajasi WT sichqonlari bilan solishtirish mumkin bo'lgan sichqonlar (6a-rasm). MCP-1 turli xil hujayralar tomonidan ishlab chiqariladi, MCP-1 ning asosiy manbai makrofaglar va monositlardir35 va monotsitlar va makrofaglar uchun ularning migratsiya va infiltratsiyasini tartibga soluvchi kimyoatrakant vazifasini bajaradi. Aksincha, xuddi shu yoshda Gal{5}} ifodasi Ctns–/– sichqonlari (44,33 9,81 ng/ml; n ¼ 5) va WT sichqonlari (40.{{12}) zardobida o'xshashligi aniqlandi. },41 ng/ml; n=7).
Gal-3 va MCP-1 o'rtasidagi bog'liqlik Gal-3–GFP va MCP-1–DsRed– yoki Gal-3– yordamida koimmunoprecipitatsiya orqali o'rganildi. GFP va CTNS-DsRed- (musbat nazorat sifatida) 293T hujayralarini ifodalaydi. Gal-3 va MCP-1 o'rtasidagi o'zaro ta'sir kuzatildi (6b-rasm), bu Gal-3 tomonidan MCP-1 ning bevosita induksiyasini ko'rsatadi. Gal{16}} CRD inhibitori N-asetil-D-laktosamin (LacNAc) bilan inkubatsiya shuni ko'rsatdiki,sistinozino'zaro ta'sir, CRD Gal-3 va MCP-1 o'rtasidagi o'zaro ta'sirda ishtirok etmaydi (6c-rasm).
Ushbu topilma odamlarga tegishli yoki yo'qligini baholash uchun biz bemorlarda Gal-3 va MCP-1 darajasini o'lchadik.sistinozimmunosupressiv terapiyadan o'tmagan yoki yallig'lanishga qarshi dori-darmonlarni qabul qilmaganlar. Sog'lom donorlar bilan solishtirganda sistinozli bemorlarning qon zardobida Gal-3 darajasi bir oz ko'tarilganligi aniqlangan bo'lsa-da, farq sezilarli emas edi (6e-rasm), bu bizning Ctns-da olingan natijalarimizni tasdiqlaydi.–/–sichqonlar. Faqat 2 bemorda Gal-3 darajasi yuqori (25,34 va 39,54 ng/ml); ular chet ellik deb hisoblangan va shuning uchun 6e-rasmga kiritilmagan. Bundan farqli o'laroq, inson MCP-1 ga qarshi qaratilgan fermentga bog'langan immunosorbent tahlili yordamida (6d-rasm) qon zardobidagi MCP-1 darajalari bemorlarda sezilarli darajada oshgani aniqlandi.sistinoz(252.1 - 18.4 pg/ml; n=19; yosh oraligʻi 1–23 yosh) sisteamin bilan davolashga qaramay, sogʻlom nazorat subyektlari bilan solishtirganda (166.9 -13.5 pg/ml; n=1) 0; yosh oraligʻi 8–63 yosh) (P <0.001). ikkala="" bemorda="" ham="" yosh="" va="" mcp-="" 1="" darajasi="" o'rtasida="" korrelyatsiya="">sistinozva sog'lom donorlar (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).
Cistancheegayallig'lanishga qarshixususiyatlari
MUHOKAZA
Sistin bilan kasallangan bemorlarning barcha to'qimalarida to'planishiga qaramaysistinoz, buyraklar shikastlanishga eng zaif bo'lgan organlardir. Shunday qilib, biz sistin to'planishi faqat buyrak degeneratsiyasi uchun javobgar emasligiga ishonamiz. Bu erda biz yangi rolni tasvirlaymizsistinozintartibga solishdayallig'lanishsurunkali buyrak kasalligining rivojlanishida ishtirok etadisistinoz. Ushbu tadqiqot nega bemorlar sisteamin terapiyasini o'tkazganiga qaramay, buyrak etishmovchiligining oxirgi bosqichiga o'tishini tushuntirishi mumkin.
Sistinozning molekulyar sheriklarini o'rganish Gal-3 bilan to'g'ridan-to'g'ri o'zaro ta'sirini aniqladi, bu Gal-3 CRD inhibitörleri tomonidan inhibe qilinishi mumkin. Oxirgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, Gal-3 kristallarning to'planishi kabi lizosomal shikastlanishdan keyin lizosomal lümenda joylashgan glikanlar bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkin.36 Bizning tadqiqotimizda Gal-3 va o'rtasidagi o'zaro ta'sirsistinozinsog'lom hujayralarni ifodalashda o'rganildisistinozinva shuning uchun sistein yoki sistin kristallarini to'plamaydi. Bundan tashqari, sog'lom hujayralardagi Gal-3 va sistinozinning haddan tashqari ko'payishi Gal-3 ning hujayra osti lokalizatsiyasini o'zgartirdi, keyinchalik u lizosomalarda lokalizatsiya qilindi, faqat Gal-3ning haddan tashqari ifodalanishi bilan solishtirganda. sitoplazmada joylashgan edi. Bu natijalar Gal-3 va sistinosin oʻrtasidagi oʻzaro taʼsir lizosomal shikastlanishdan mustaqil ravishda sodir boʻlishini va sistinosin Gal-3 lizosomal joylashuvi uchun faol masʼul ekanligini aniq koʻrsatadi. Ilgari Gal-3 Abl va Arg, 2 tirozin kinazlar bo'lmaganda lizosomalga bog'liq proteoliz orqali parchalanishi ko'rsatilgan.31
Bundan tashqari, biz buni ko'rsatdiksistinozva Gal-3 dinamik vezikulyar tuzilmalarda birgalikda joylashadi va birgalikda fazoviy-vaqt tarzida mobilizatsiya qilinadi.Sistinosinilgari ma'lum bo'lgan yagona CMA retseptorlari bo'lgan lizosomal LAMP2A ning savdo mexanizmlari bilan bog'liq edi.sistinoz.28Gal-3 degradatsiyasi ilgari CMA vositachiligida koʻrsatilgan.31Konfokal mikroskopiya tahlili ikkala Ctnsda Hsc70-musbat tuzilmalarda Gal-3 kolokalizatsiyasini tasdiqladi.–/– va WT xujayralari, lizosomada taqdim etish uchun Gal-3 bilan Hsc70 bilan birgalikda tashishni va CMA tomonidan degradatsiyasini qo'llab-quvvatlaydi, chunki Hsc70 substrat oqsillarini membrana orqali lizosomal lümenga ko'chirishga yordam beradi.29,30Bizning natijalarimizning mumkin bo'lgan talqini shundan iboratsistinozinGal-3 ning CMA-faol lizosomalarga parchalanishi uchun savdosi va yetkazilishini tartibga soladi.
Ushbu yangi yo'lsistinozin-ga bog'liq Gal-3 lizosomal lokalizatsiyasi va degradatsiyasi in vivo jonli ravishda qo'llab-quvvatlanadi, chunki Ctns etishmovchiligi bo'lgan sichqonlar Gal-3 ichida haddan tashqari ko'p ifodalanadi.buyrak. Bundan tashqari, ko'paygan Gal{0}} mRNK Ctnsda cheklangan edi–/–buyraklar KKH ning boshqa modeli bilan solishtirganda, ko'p miqdorda Gal{0}} oqsili faqat Ctnsda aniqlangan.–/– buyraklar. Ushbu ma'lumotlar ushbu xulosani qat'iy tasdiqlaydisistinozinGal-3 oqsilining emirilishida ishtirok etadi, u KBH kabi stress sharoitida Gal-3 mRNKning ortiqcha ifodalanishini nazorat qila oladi.
Gal-3 bir nechta biologik rollarga ega, jumladan, o'tkir va surunkaliyallig'lanishmonotsitlar va makrofaglarni jalb qilish orqali.37,38Ctns ichida–/– sichqonlarda, asosan, og'ir mononuklear infiltratlarni kuzatdikbuyrakavval aytib o'tilganidek,11,39Ular monositlar/makrofaglar sifatida tavsiflangan. Bundan farqli o'laroq, er-xotin nokaut Ctns dan buyraklar–/–Gal-3–/–sichqonlarda juda oz sonli monositlar/makrofaglar infiltrati bor edi, bu esa Gal-3ning ishtirok etishidan dalolat beradi.yallig'lanishCtns buyraklarida–/–sichqonlar. To'qimalarning takroriy shikastlanishi kontekstida Gal-3 surunkali holatga o'tishni boshlashi mumkinyallig'lanishva fibroz.34Ushbu topilmalarga mos ravishda, bizning ma'lumotlarimiz Gal-3ning KKD rivojlanishida ishtirok etishini ko'rsatadi.sistinoz. Haqiqatan ham, ikki marta nokaut Ctns–/– Gal-3–/–sichqonlar yaxshiroq namoyon bo'ldibuyrakfunktsiyasi va tuzilishi Ctns bilan solishtirganda–/–sichqonlar. Xuddi shunday, Gal-3 – yetishmaydigan sichqonlarda buyrak fibrozi kamroq namoyon bo‘ladibuyrakbir tomonlama ureter obstruktsiyasidan keyin WT sichqonlari bilan solishtirganda,40 va Gal{0}} nokaut sichqonlari ishemiya-reperfuzion shikastlanishga uchragan WT sichqonlari bilan solishtirganda buyrak funktsiyasi yaxshiroq edi.41
Plazmadagi Gal-3 darajasi va KKD rivojlanishi o'rtasida bog'liqlik aniqlangan bo'lsa-da,42 sichqonlar va odamlarning qon zardobida Gal-3 ifodasida farq kuzatilmadi.sistinozva sog'lom nazorat sub'ektlari. Sarumdagi turli sitokin darajalarini o'lchash orqali biz Ctnsda MCP-1 ning sezilarli o'sishini aniqladik.–/–sichqonlar, Ctns–/–Gal-3–/–sichqonlar WT sichqonlari bilan taqqoslanadigan darajaga ega edi. MCP-1 qon zardobida ajralib chiqishi mumkin bo'lgan sitokin bo'lib, monotsitlar va makrofaglarni shikastlangan joyga jalb qilish uchun gradient hosil qiladi.35 Ctns zardobida MCP-1 ko'payishi.–/–sichqonlar Ctns bilan solishtirganda–/–Gal-3–/–sichqonlar sistin to'planishidan mustaqil edi, chunkibuyraksistin tarkibi ikkala genotipda ham o'xshash edi. Bundan tashqari, sisteamin bilan davolash sistinning lizosomalardan chiqishiga imkon berganiga qaramay, MCP-1 bilan bemorlarning zardobida sezilarli darajada oshgani aniqlandi.sistinozsog'lom donorlar bilan solishtirganda. Ushbu ma'lumotlar yo'qligidan dalolat beradisistinozinsistin to'planishidan ko'ra, zardobdagi MCP-1 ko'payishi uchun javobgardir. Bundan tashqari, biz Gal-3 va MCP-1 o'rtasidagi to'g'ridan-to'g'ri o'zaro ta'sirni ko'rsatdik, bu yaqinda Gordon-Alonso va boshq.43 tomonidan taklif qilingan, ammo boshqa o'rganilmagan. Bu yerda Gal-3 vositachiligida MCP-1 faollashtirish mexanizmi o‘rganilmagan. Gipoteza - bu inson MCP-1da signal peptidining mavjudligi, uning sekretsiyasini kuchaytirish uchun yorilishi mumkin.44 Bundan tashqari, plazmin MCP-1 ning C-terminusini parchalashi mumkin, bu esa uning kimyoatraktantini oshiradi. potentsial.45 Bundan tashqari, bizning ma'lumotlarimiz bilan bog'liq holda, diabetik nefropatiyaning sichqoncha modelida MCP-1 inhibisyonu buyrak makrofaglari infiltratsiyasini oldini oldi va buyrak funktsiyasi yaxshilandi.46,47 Insistinoz, Bizning ma'lumotlarimiz yo'qligidan qat'iy nazarsistinozinGal-3 ko'payishiga olib keladi, bu MCP-1 qon mobilizatsiyasini faollashtiradi, buyrak faoliyatini kuchaytiradi.yallig'lanishva rivojlanishisurunkali buyrak kasalligi.
Ushbu topilmalar bemorlarda buyrak degeneratsiyasini cheklashi yoki kechiktirishi mumkin bo'lgan potentsial terapevtik maqsadlar bo'yicha yangi istiqbollarni ochadi.sistinoz. Darhaqiqat, aspirin va indometazin kabi steroid bo'lmagan yallig'lanishga qarshi dorilar uning transkripsiyasini inhibe qilish orqali Gal-3 ifodasini inhibe qilishi aniqlangan.48 Indometazin aslida poliuriya va polidipsiyani tartibga solish uchun ishlatiladi.sistinoz,49 va sistinozli 307 yevropalik bemorlarning yaqinda o'tkazilgan tadqiqoti indometazin bilan davolangan bemorlarda buyrak faoliyatining yaxshilanganligini ko'rsatdi.50 Bizning tadqiqotimiz asosida indometazin yoki steroid bo'lmagan yallig'lanishga qarshi dorilarni qo'llashsistinozbemorlar qayta ko'rib chiqilishi mumkin.
USULLARI
Hayvonlar tajribalari
C57BL/6 Ctns–/–sichqonlar doktor Antignac (Inserm U1163, Parij, Fransiya) tomonidan taqdim etilgan. C57BL/6 galektin-3 null (Gal-3–/–) sichqonlar doktor Fu-Tong Liu (Kaliforniya universiteti, Devis) va doktor Jerrold M. Olefskiy (Kaliforniya universiteti, San-Diego) tomonidan taqdim etilgan. WT ishlab chiqarish uchun naslchilik strategiyasi, Ctns–/–, Gal-3–/–, Ctns–/– va Gal- 3–/–sichqonlar Qo'shimcha usullarda tasvirlangan.
Hujayra chiziqlari
tartibsizlik WT va Ctns ning yangi tug'ilgan teri biopsiyalaridan hosil bo'lgan–/–sichqonlar. MEF, 293T va MDCK II turdagi hujayra liniyalari (ATCC, Manassas, VA) Dulbekkoning o'zgartirilgan Eagle muhitida o'stirildi, unda 10% homila buzoq zardobi yoki homila sigir zardobi, 100 birlik/ml penitsillin, 0,1 mg/ml streptomiya mavjud. , va 2 mM L-glutamin.
Koimmunopresipitatsiya va mass-spektrometriya tahlili
Protein-oqsil o'zaro ta'sirini o'rganish uchun MDCK hujayralari barqaror ekspressiya qilish uchun lentiviral pRRL.SIN.cPPT.PGK/WPRE vektor magistral yordamida transduktsiya qilindi.sistinozin-GFP.51Qo'shimcha usullarda tavsiflanganidek, birgalikda immunopresipitatsiya amalga oshirildi. Birgalikda immunopresipitatsiyalangan oqsillar natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE) bilan hal qilindi va yuqorida aytib o'tilganidek, LTQ Orbitrap massa spektrometriyasi bilan tahlil qilindi.19
Gal-3–GFP va MCP-1–DsRed yoki Gal-3– GFP va CTNS-DsRedni ifodalovchi 293T hujayralari Qo‘shimcha usullarda tavsiflanganidek, birgalikda immunopresipitatsiya uchun ishlatilgan. Koimmunopretsipitatsiyalangan oqsillar SDS-PAGE orqali hal qilindi va Gal-3-bog'lovchi MCP-1 anti-DsRed antikori yordamida aniqlandi (Clontech Laboratories, Mountain View, CA).
Hujayra osti fraksiyasi
Sakkizta jigar C57BL/6 sichqonlaridan olingan va avval tavsiflanganidek tayyorlangan.52 Gradientning shartlari asl nashrda tasvirlangani bilan bir xil edi52, bundan tashqari metrizamid o'rniga Nycodenz ishlatilgan.
Gal-3–ingibitor va proteinaz K bilan davolash
dan lizatlarsistinozin-GFP MDCK hujayralari va Gal-3–GFP va CTNS-DsRed yoki Gal-3–GFP va MCP-1–DsRedni ifodalovchi 293T 5 mM tiodigalaktozid yoki 5 mM N bilan yoki ularsiz inkubatsiya qilingan. -Asetil-D-laktozamin, mos ravishda, Gal-3 CRD ning 2 inhibitori. 4 - C da doimiy chayqalish bilan 30 daqiqa inkubatsiyadan so'ng, lizatlar 50 ml anti-GFP mikrobonchalari bilan inkubatsiya qilindi va yuqorida aytib o'tilganidek, immunoprecipitatsiya amalga oshirildi. Cho'kma oqsillari SDS-PAGE tomonidan 10 foizli jelda hal qilindi.
dan lizatlarsistinozin-GFP MDCK hujayralari va sichqon jigarining lizosoma bilan boyitilgan fraksiyalari 2 foiz Triton X-100 bilan yoki inkubatsiya qilinmasdan 10 daqiqa davomida 4 - C da inkubatsiya qilindi va keyin 30 daqiqa davomida 2,5 mg/ml va 25 mg inkubatsiya qilindi. /ml proteinaz K, mos ravishda. Ferment 1 mM fenilmetilsulfonil ftorid bilan 4 - C da 5 daqiqa davomida faolsizlantirilgandan so'ng, oqsillar SDS-PAGE yordamida 10 foizli jelda hal qilindi.
Immunofluoresans tahlili
Ruxsat etilgan MDCK hujayralari anti-Lamp-2 (OriGeneTechnologies, Rockville, MD) va anti-Gal{1}} antikorlari (CedarlaneLaboratories, Burlington, Ontario, Kanada) bilan 2 soat davomida xona haroratida, keyin esa Alexa Fluor bilan inkubatsiya qilindi. Xona haroratida 1 soat davomida 555 ikkilamchi antikor (Invitrogen, Carlsbad, CA). Konfokal tasvirlar Zeiss LSM 700 mikroskopi (Carl ZeissMicroscopy, Jena, Germaniya) yordamida olingan.
293T hujayralari vaqtinchalik Gal-3–GFP, Gal-3–GFP va DsRed yoki Gal-3–GFP vasistinozin-DsRed slaydga o'rnatilishidan oldin qoplama ustida o'stirilgan. Hujayralar Keyence BZ-X700 asbobi (Keyence Corp., Osaka, Yaponiya) yordamida tasvirlangan.
Tugallanganbuyrakbo'limlar kechada 4 - C da anti-CD68 (BioLegend, San-Diego, CA) yoki anti-Gal-3 antikori (BioLegend), so'ngra Alexa Fluor 488 ikkilamchi antikori (Invitrogen), 1 soat inkubatsiya qilindi. xona haroratida. Rasmlar Keyence BZ-X700 asbobi yordamida olingan. CD68 ifodasining miqdori Qo'shimcha usullarda tasvirlangan.
Gal-3–GFPni ifodalovchi MEFlar anti-Hsc70 antikori (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) yordamida bo'yalgan va yuqorida aytib o'tilganidek tasvirlangan.53
Jami ichki aks ettirish FL floresan mikroskopiyasi
WT va Ctns–/–Gal-3–GFP va CTNS-DsRedni ifodalovchi MEF 4-kamerali 35- mm borosilikat pastki idishga (Cellvis, Mountain View, CA) ekilgan. Madaniyatda 2 kun o'tgach, MEFlar yuqorida aytib o'tilganidek, umumiy ichki aks ettirish FL floresan mikroskopiyasi bilan tahlil qilindi.54va qo'shimcha usullarda. Tasvirlar ImageJ dasturi yordamida tahlil qilindi.
Gal-3 ifoda tahlili
Gal-3–GFP, Gal{2}}–GFP va DsRed yoki Gal-3–GFP va CTNS-DsRedni ifodalovchi 293T hujayralari va eksplantatsiya qilinganbuyraklarProteinaz inhibitori kokteylini o'z ichiga olgan radioimmunopresipitatsiya tahlili buferida lizing qilindi. Proteinlar 4% dan 15% gacha bo'lgan jelda ajratilgan va anti-Gal-3 (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) yoki anti-gliseraldegid-3-fosfat dehidrogenaza (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) antikorlari yordamida aniqlangan. .
BuyraklarPrecellys 24 (Bertin Instruments, Montigny-le-Bretonneux, Frantsiya) yordamida b-merkaptoetanolni o'z ichiga olgan RLT buferida homogenlashtirildi. RNK ajratib olindi va Gal-3 - maxsus tomchilar raqamli polimeraza zanjiri reaktsiyasi Qo'shimcha usullarda tasvirlanganidek amalga oshirildi. Gal-3 transkript ifodasi endogen nazorat 18S bilan solishtirganda nisbat sifatida ifodalangan. Ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq sichqonlar va inson zardobidagi Gal-3 darajasini aniqlash uchun ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (Abcam) ishlatilgan.
Buyrak funktsiyasi
Sarum va siydik fosfati, sarum kreatinin va karbamid darajalari QuantiChrom Fosfat Assay Kit, Quanti Chrom Creatinine Kit va QuantiChrom Urea Assay Kit (BioassaySystems, Hayward, CA) yordamida baholandi. Siydikdagi protein darajasi Pirs BCA Protein Assay Kit (Rokford, IL) yordamida o'lchandi.
Gistologiya
Sichqonlar o'ldirilgan paytda,buyraklarto‘planib, formalinda mahkamlangan va kerosinga solingan. Gematoksilin va eozin bilan bo'yalgan bo'limlar qo'shimcha usullarda tasvirlanganidek, doktor Mari Kler Gubler tomonidan ko'r-ko'rona ko'rib chiqilgan.
Sistin tarkibini o'lchash
To'qimalarning sistinini o'lchash yuqorida aytib o'tilganidek, massa spektrometriyasi (LC-ESI-MS/MS) orqali amalga oshirildi.39
Standart nefrektomiya va soxta operatsiya
Sichqonlarda KKH yuqorida tavsiflanganidek, standart subtotal 2-bosqichli nefrektomiya operatsiyasi orqali qo'zg'atilgan.55,56Soxta sichqonlar guruhi xuddi shu protseduradan o'tdi, ammo hech kimni kesmasdanbuyrakto'qima.
Sarumdagi sitokin darajasi
Sichqoncha zardobidagi sitokin darajasini o'lchash uchun sichqonchayallig'lanishkit sitometrik boncuk massivi (BD Biosciences, San-Xose, CA) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi. Inson zardobidagi MCP-1 kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq MCP-1 (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) ga qarshi fermentga bog'langan immunosorbent tahlili yordamida aniqlandi.
Statistik tahlil
Qiymatlar o'rtacha - SEM sifatida ifodalanadi. Natijaning ahamiyati juftlashtirilmagan 2-quyruqli t-testi yoki juftlashtirilmagan 2-quyruqli t-testi bilan Welch tuzatishi bilan baholandi. 3 yoki undan ortiq shartlarni guruh taqqoslashlari dispersiyaning parametrik tahlillari bilan amalga oshirildi, so'ngra juftlik taqqoslash uchun Tukey ko'p taqqoslash testi o'tkazildi. Gistologik ko'rsatkichlar Mann-Whitney testi yordamida taqqoslandi. Tahlillar Prism 6 dasturi (GraphPad, San-Diego, CA) yordamida amalga oshirildi. 0.05 dan kichik P-qiymati muhim deb topildi.
O'qishni tasdiqlash
Sichqoncha tajribalari Hayvonlardan foydalanish bo'yicha institutsional qo'mitaning protokollariga muvofiq o'tkazildi. Ushbu tadqiqotda inson to'qimalaridan foydalanish Kaliforniya universiteti, San-Diego, HumanResearch Protection Programme tomonidan tasdiqlangan.
OSHHOR QILISh
SC ilmiy kengash aʼzosi va Vasiylik kengashi aʼzosi hisoblanadisistinozTadqiqot fondi. SC GenStem TherapeuticsInc hammuassisi, aktsiyadori va ilmiy kengashi va direktorlar kengashi a'zosidir. Ushbu kelishuv shartlari Kaliforniya-San-Diego universiteti tomonidan manfaatlar to'qnashuvi siyosatiga muvofiq ko'rib chiqilgan va tasdiqlangan. Boshqa barcha mualliflar hech qanday raqobatdosh manfaatlar yo'qligini e'lon qilishmagan.
gal-3 bilan ta'minlash–/–sichqonlar. Texnik yordam uchun Lou Devanneaux va Nikol Flerchingerga va qo'lyozmani ko'rib chiqqani uchun Elizabeth Souterga minnatdorchilik bildiramiz. Sichqonchani taqdim etgani uchun BDBioscience kompaniyasidan Kristofer Alfonsoni tan olamizyallig'lanishsitometrik boncuk massivi va natijalarni talqin qilishda yordami uchun. Ushbu ish Milliy Sog'liqni saqlash institutlarining RO1-DK090058 va R01-DK110162 grantlari tomonidan qo'llab-quvvatlandi.SistinozTadqiqot fondi va Kaliforniya regenerativ tibbiyot instituti (CIRM, CLIN-09230). TL Vaincre Les MaladiesLysosomales bitiruvchisi tomonidan qo'llab-quvvatlanadi. AB va JZ stipendiyalar tomonidan qo'llab-quvvatlanadisistinozTadqiqot fondi. UCSD Neuroscience MicroscopyShared Facility Nevrologik kasalliklar va insult milliy instituti (NINDS) P30-NS047101 granti tomonidan moliyalashtirilgan.
ADABIYOTLAR
1. Medjitov R. Kelib chiqishi va fiziologik rollariyallig'lanish. Tabiat. 2008;454:428–435.
2. Donath MY. Maqsadliyallig'lanish2-toifa diabetni davolashda. Qandli diabet obez metab. 2013; 15 (qo'shimcha 3): 193–196.
3. Jaffer U, Wade RG, Gourlay T. Tizimli yallig'lanishli javob sindromida sitokinlar: ko'rib chiqish. HSR Proc intensiv terapiya yurak-qon tomir anestezi. 2010;2:161–175.
4. Pecoits-Filho R, Heimburger O, Barany P va boshqalar. CRF bilan og'rigan bemorlarda aylanma yallig'lanish belgilari va qoldiq buyrak funktsiyasi o'rtasidagi bog'liqlik. Men JBuyrakDis. 2003;41:1212–1218.
5.Gahl WA, Thoene JG, Schneider JA.Sistinoz. N Engl J Med. 2002;347: 111–121.
6.Cherqui S, Kalatzis V, Trugnan G, Antignac C.sistinozinlizosomal membranaga tirozinga asoslangan signal va yangi saralash motivi kerak. J Biol Chem. 2001;276:13314–13321.
7. Kalatzis V, Cherqui S, Antignac C, Gasnier B.Sistinosin, oqsil nuqsonlisistinoz, H( ) tomonidan boshqariladigan lizosomal sistin tashuvchisidir. EMBO J. 2001;20:5940–5949.
8. Cherqui S, Courtoy PJ. Buyrak Fankoni sindromisistinoz: patogen tushunchalar va terapevtik istiqbollar. Nat Rev Nefrol. 2017;13:115–131.
9. Nesterova G, Gahl W. Nefropatiksistinoz: multisistemik kasallikning kech asoratlari. Pediatr Nefrol. 2008;23:863–878.
10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G va boshqalar. Sichqonlarda intralizosomal sistin to'planishi yo'qsistinozin, oqsil nuqsonlisistinoz. Mol hujayra Biol. 2002;22:7622–7632.
11. Nevo N, Chol M, Bailleux A va boshqalar. Buyrak fenotipisistinozSichqoncha modeli genetik fonga bog'liq. Nefrol dial transplantatsiyasi. 2010;25:1059–1066.
12. Kalatzis V, Serratrice N, Hippert C va boshqalar. Adagi ko'z anomaliyalarisistinozHayvon modeli kasallikning patogenezini taqlid qiladi. Pediatr Res. 2007;62:156–162.
13. Guide Chevronnay HP, Janssens V, Van Der Smissen P va boshqalar. Sichqoncha modeli chaqaloqlarda qalqonsimon bezdagi o'zgarishlarning ikkita mexanizmini taklif qiladisistinoz: endoplazmatik retikulum stressi / ochilgan oqsil reaktsiyasi va lizosomal qayta ishlashning buzilishi tufayli tiroglobulin sintezining pasayishi. Endokrinologiya. 2015;156:2349–2362.
14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P va boshqalar. Sisteamin terapiyasi nefropatik kasallikning rivojlanishini kechiktiradisistinozkech o'smirlarda va kattalarda.BuyrakInt. 2012;81:179–189.
15. Cherqui S. Sisteamin terapiyasi: davolashsistinoz, davo emas.BuyrakInt. 2012;81:127–129.
16. Gahl WA, Balog JZ, Kleta R. Nefropatiksistinozkattalarda: tabiiy tarix va og'iz sisteamin terapiyasining ta'siri. Enn Intern Med. 2007;147:242–250.
17. Cherqui S, Courtoy PJ. Buyrak Fankoni sindromisistinoz: patogen tushunchalar va terapevtik istiqbollar. Nat Rev Nefrol. 2017;13:115–131.
18. Napolitano G, Jonson JL, He J va boshqalar. Chaperon vositachiligidagi avtofagiyaning buzilishi lizosomal saqlash kasalligida selektiv lizosomal degradatsiya nuqsonlariga olib keladi.sistinoz. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
19. Andrzejewska Z, Nevo N, Tomas L va boshqalar.Sistinosinrapamisin kompleksi 1 signalizatsiyasining sutemizuvchilar nishonini nazorat qiluvchi vakuolyar H -ATPase-regulyator-latta kompleksining tarkibiy qismidir. J Am Soc Nephrol. 2016;27: 1678–1688.
20. Rega LR, Polishchuk E, Montefusco S va boshqalar. EB transkripsiya omilining faollashishi sistinozda lizosomal anormalliklarni qutqaradi.buyrakhujayralar.BuyrakInt. 2016;89:862–873.
21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galektin-3: ochiq hikoya. Biochim Biophys Acta. 2006;1760:616–635.
22. Sciacchitano S, Lavra L, Morgante A va boshqalar. Galektin-3: kasalliklar alifbosi uchun bitta molekula, A dan Z gacha. Int J Mol Sci. 2018;19(2).
23. Kalvier L, Martinez-Martinez E, Miana M va boshqalar. Galektinni inhibe qilishning aldosteron bilan bog'liq yurak va buyrak shikastlanishlariga ta'siri. JACC yurak etishmovchiligi. 2015;3:59–67.
24. Frenay AR, Yu L, van der Velde AR va boshqalar. Galektinning farmakologik inhibisyoni-3 gipertenziv nefropatiyadan himoya qiladi. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F500–F509.
25. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. O'zgartirilgan sitrus pektinlari eksperimental o'tkir davrda galektin-3 ifodasini va kasallikning og'irligini kamaytiradibuyrakjarohat. PloS One. 2011;6:e18683.
26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L va boshqalar. Galektin blokadasi buyrak shikastlanishining ikkita me'yoriy eksperimental modelida buyrak fibrozini kamaytiradi. PloS One. 2016;11:e0166272.
27. Nevo N, Tomas L, Chhuon C va boshqalar. ning ta'sirisistinozhujayra madaniyatida (SILAC) aminokislotalar tomonidan differensial dinamik barqaror izotop belgilari bilan oqsil barqarorligi bo'yicha glikozillanish. Mol hujayra proteomikasi. 2017;16:457–468.
28. Napolitano G, Jonson JL, He J va boshqalar. Chaperon vositachiligidagi avtofagiyaning buzilishi lizosomal saqlash kasalligida selektiv lizosomal degradatsiya nuqsonlariga olib keladi.sistinoz. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
29. Majeski AE, Dice JF. Chaperon vositachiligidagi avtofagiya mexanizmlari. Int J Biochem Cell Biol. 2004;36:2435–2444.
30. Xie W, Zhang L, Jiao H va boshqalar. chaperon vositachiligidagi otofagiya BBC3/PUMA ni buzish orqali apoptozni oldini oladi. Avtofagiya. 2015;11:1623–1635.
31. Li X, Ma Q, Vang J va boshqalar. c-Abl va Arg tirozin kinazlari Galektin onkoproteinining lizosomal degradatsiyasini tartibga soladi-3. Hujayra o'limi farq qiladi. 2010;17:1277–1287.
32. Takeuchi H, Tanaka M, Tanaka A va boshqalar. Quviq saratonida M{1}}polarizatsiyalangan makrofaglarning ustunligi angiogenezga, o'sma darajasiga va invazivlikka ta'sir qiladi. Onkol Lett. 2016;11:3403–3408.
33.Chavez-Galan L, Olleros ML, Vesin D, Garsiya I. M1 va M2 makrofaglaridan ancha ko'p CD169( ) va TCR( ) makrofaglar ham mavjud. Old immunol. 2015;6:263.
34. Henderson NC, Sethi T. tartibga solishyallig'lanishgalektin tomonidan-3. Immunologic Rev. 2009;230:160–171.
35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. Monosit kimyoatrakant oqsili-1 (MCP-1): umumiy ko'rinish. J Interferon sitokin Res. 2009;29:313–326.
36.Skowyra ML, Schlesinger PH, Naismith TV, Hanson PI. ESCRT apparatlarini ishga tushirish endolizosomal ta'mirlashga yordam beradi. Fan. 2018 yil; 360 (6384).
37.MacKinnon AC, Farnworth SL, Hodkinson PS va boshqalar. Galektin bilan muqobil makrofag faollashuvini tartibga solish-3. J Immunol. 2008;180: 2650–2658.
38. Sano H, Hsu DK, Yu L va boshqalar. Inson galektini-3 monotsitlar va makrofaglar uchun yangi kimyoatrakantdir. J Immunol. 2000;165:2156–2164.