Trichosanthes pulpasidan ajratilgan tarkibiy qismlarning oqartiruvchi faolligi

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Rongchao Chjan, 1, 2 Xiuqin Xu, 1 Bo Chjan, 1 ZhenWang, 1 Chunxiang Hao, 1 Jie Xin, 1 va Qingmei Guo 2

Annotatsiya: Oqartirishkosmetika bozori porloq kelajakka ega va an'anaviy xitoy tibbiyotining sof tabiiy oqartiruvchi mahsulotlari doimo tadqiqot nuqtasi bo'lib kelgan. Ushbu tadqiqotda Xitoy tibbiyoti Trichosanthes pulpasining oqartiruvchi faol moddasi birinchi marta ajratildi va tozalandi va uningoqlashmexanizmiga aniqlik kiritildi. Ularni ajratish va tozalash uchun silika jeli, ODS va HPLC kabi xromatografik usullar qo'llanilgan. B16 hujayralari antioksidant faollikni o'lchash uchun ishlatilgan,tirozinazafaollik va melanin chiqarish faoliyati. Jami 20 ta birikma ajratildi, jumladan p-gidroksibenzaldegid (1), salitsil kislotasi (2), vanil kislotasi (3), izovanil kislotasi (4), protokatechuat (5), trans-sinnamik kislota (6), {{9} }}kumar kislotasi (7), transferul kislotasi (8), drexslerol-B (9), siklogeksanol 3-palmitat (10), 5-atsetoksimetil{18}}furaldegid (11), 5-gidroksimetilfurfural (12), diosmetin (13), apigenin (14), xrizoberil (15), luteolin (16), 4'-gidroksiskutellarin (17), quercetin (18), 3',{{31} }dihidroksi-7-(-D-glyukopiranosiloksi)-4'-metoksi flavon (19) va siprofloksatsin-7-O- -D-glyukozid (20). Ular orasida 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 va 20-sonli birikmalar antioksidantlarni tiklovchi yaxshi ta'sirga ega; 3, 4, 5, 6 va 7 birikmalari yuqori qora inhibisyonga ega; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19 va 20 birikmalari tirozin oksidazni aniq inhibe qiluvchi faollikka ega. 1e natijalari Trichosanthes pulpa resurslarini yanada rivojlantirish va ulardan foydalanish uchun asos yaratdi, shuningdek, tabiiy resurslarni rivojlantirish uchun asos bo'ldi.oqlashkosmetika.

Cistanche o'tatabiiy oqartiruvchi ingredient.

1.Kirish

Trichosanthes kirilowii Maksim. koʻp yillik toqqa chiqadigan oʻt oʻsimligi, qovoqdoshlar oilasiga mansub. Uning mevalari, urug'lari, qobig'i va ildizi an'anaviy xitoy dori-darmonlari sifatida keng qo'llaniladi. Vaqt o'tishi bilan Trichosanthes pulpasi ko'pincha Semen Trichosanthis va Pericarpium Trichosanthis ishlab chiqarish va qayta ishlashda tashlab yuboriladi, bu esa katta chiqindilarga olib keladi. Hozirgi vaqtda Trichosanthes pulpasi haqidagi hisobotlar asosan shakar, aminokislotalar, vitaminlar va boshqa oziq moddalar tarkibini taqqoslashga qaratilgan [1-4]. Trichosanthes pulpasining kimyoviy tarkibi haqida hech qanday ma'lumot yo'q. 1shuning uchun pulpaning kimyoviy tarkibiy qismlarini muntazam ravishda o'rganish kerak.

Shu bilan birga, iqtisodiyotning jadal rivojlanishi bilan kosmetika nafaqat ko'p iste'mol qilinadigan turmush tarzi mahsuloti, balki ayollar uchun eng mashhur "kerakli narsalar" ga aylandi. Ko'pgina klassik xitoy tibbiyot kitoblari yoki materiamedica Trichosanthes pulpasi funktsiyaga ega ekanligi qayd etilgan.oqlashva ajinlarni yo'qotish effektlari [5-7]. Bizning tadqiqot guruhimizning oldingi natijalari shuni ko'rsatadiki, Trichosanthes pulpasining suv ekstrakti yuqori bo'lgantirozinazainhibitiv faollik va tirozinazni inhibe qilish darajasi taxminan 70 foizni tashkil etdi. 1 umumiyoqlashAgentlar vitamin C (VC) va arbutin nazorat qiluvchi moddalar sifatida ishlatilgan [8]. Trichosanthes pulpa ekstrakti tirozinaza faolligini inhibe qilish orqali ma'lum bir oqartiruvchi ta'sirga ega ekanligi oldindan isbotlangan. 1shuning uchun Trichosanthes pulpasining kimyoviy tarkibiy qismlarini va oqartirish mexanizmini o'rganish katta ahamiyatga ega.

TheoqlashMelanin sintezini inhibe qilish va melanin o'tkazilishini tezlashtirish mexanizmini umumlashtirish mumkin. 1e melanotsitlarda melanin hosil bo'lish jarayoni quyidagicha:tirozinazatirozinni polimorf BA (DOPA) ga oksidlaydi; keyin dopakinongacha oksidlanadi.Bir qator metabolik reaktsiyalardan so'ng melanin ishlab chiqariladi.Tirozinaza reaksiya jarayonida tezlikni cheklovchi yagona ferment bo'lib, uning faolligi melaninsintezlangan miqdorini belgilaydi. Tirozinaza faolligi kuchayganda, melaninsintez kuchayadi; tirozinaz faolligi inhibe qilinganida melanin sintezi kamayadi [9]. Tirozinazaning 1e faol markazida qo'sh mis faol joy bor va har bir mis ioni mos ravishda 1 yoki 2 valentlikka ega 3 ta histidin qoldig'i bilan birlashadi. 1shuning uchun, antioksidant ta'sir bilan pasayish tirozinazning faol joyidagi mis atomi bilan o'zaro ta'sir qilishi yoki melanin hosil bo'lishini inhibe qilish uchun melanin sintezi jarayonida oraliq moddasini kamaytirishi mumkin [10, 11]. Bundan tashqari, etuk melanotsitlarning keratinotsitlarga o'tishini inhibe qilish ham oqartirishda rol o'ynashi mumkin.

ning ta'sirini aniqlash uchun hujayra madaniyati texnologiyasi qo'llaniladioqlashfaol moddalar ustidatirozinazain vitro melanotsitlarda faollik va melanin ishlab chiqarish. 1e mousemelanoma hujayra liniyasi (B16 hujayralari) sichqon terisi melanoma hujayralaridan olingan va uning asosiy tuzilishi, ayniqsa melanin sintezi bo'yicha, asosan inson melanoma hujayralari bilan bir xil. Inson terisining birlamchi melanoma hujayralarini etishtirish juda qiyin bo'lganligi sababli, sichqoncha modeli melanomani aniqlash uchun sinov hujayrasi sifatida ishlatilishi mumkin.oqlashfaol moddalar. Shuning uchun B16 hujayralari antioksidant faollikni, tirozinaza faolligini va melaninni yo'q qilish faolligini o'lchash uchun ishlatilgan va oqartiruvchi faol komponentlar va tegishli mexanizm oldindan aniqlangan. Natijalar Trichosanthes pulpa resurslarini yanada rivojlantirish va ulardan foydalanish uchun asos yaratdi, shuningdek, tabiiy oqartiruvchi kosmetika rivojlanishi uchun asos bo'ldi.

2. Tajribalar

2.1. Materiallar.

Trichosanthes trichosanthis, Jinan shtatining Pinyin shahridagi Hebao o'simlik dori ekish bazasidan yig'ilgan. 1e namunalari Shandong an'anaviy xitoy tibbiyot universiteti professori QingmeiGuo tomonidan aniqlangan. Qobig'i va urug'ini olib tashlaganingizdan so'ng, mevaning pulpa qismi olinadi. Muzlatib quritgandan so'ng, pulpa ezildi, aralashtirildi va nihoyat keyingi foydalanish uchun quritgichga joylashtirildi.

yangi cistanchebilanechinacosideeffektlar

2.2. Hujayra hayotiyligi.

B-16 hujayralari (sichqonchaning melanoma hujayralari) KeyGEN'dan sotib olindi va 10 foiz homila sigir zardobi (FBS) bilan to'ldirilgan DMEM muhitida, 5 foiz CO2 bo'lgan namlangan atmosferada 37 darajada saqlangan. 1en, B{6}}hujayralari 24 soat inkubatsiya uchun 96-quduq plastinkalariga (10 × 104 hujayra/quduq) ekilgan.

2.3. Turli xil ekstraktlarni tayyorlash.

Trichosanthes kirilowii pulpasining xom ashyosi 4,5 kg edi. 1e pulpa 3 marta 95 foizli etanol miqdoridan 10 barobar ko'p namlangan. 1eekstrakt birlashtirildi va taxminan 3,0 L gacha konsentratsiya qilindi. Anetil asetat ekstrakti 15 l suvga etanolekstraktni tarqatish yo'li bilan olingan, ekstrakt rangsiz bo'lgunga qadar etil asetat bilan ekstraksiya qilingan. 1e ekstraktlari birlashtirildi va past bosim ostida konsentratsiya qilindi.

Etil asetat ekstrakti silikagel (100–200 mesh) bilan 1:2 nisbatda aralashtirildi (ekstrakt: silikagel, v/ v). 1esolvent bug'lanib, jel zahiraga olindi. 1e shishakromatografiya ustuni (8{{30} mm × 1200 mm) 200-300 mesh silika jeli va D101 bilan o'ralgan so'l gözenekli qatronlar, so'ngra kolonna etil asetat, neft efiri (10 foiz, 25 foiz, 50 foiz, 75 foiz va 100 foiz) va metanol, etil asetat (5 foiz, 10 foiz, 25 foiz, 50 foiz) bilan elutildi. , 75 foiz va 100 foiz), oqimni yig'ish uchun. Nihoyat, har bir fraksiya yig'ildi va quyidagi konsentratsiyalarga sozlandi: 0,003125 mg/ml, 0,00625 mg/ml, 0,0125 mg/ml, 0,025 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,25 mg/mL, 0,25 mg/mL, ml, 1,0 mg/mL va 2,0 mg/ml, so'ngra madaniy hujayralarni qayta ishlash uchun ishlatiladi. Davolanish oxirida har bir quduqqa 20 mkl MTT eritmasi (5 mg/ml) qo'shildi. 1e hujayralar 37 darajada 20 daqiqa davomida inkübe qilindi. 1 esupernatant tashlandi va har bir quduqqa 100 mkl DMSO qo'shildi. 1e absorbans 490 nm da o'lchandi. 1etajriba 3 marta takrorlandi. 1e omon qolish darajasi quyidagicha hisoblangan:

omon qolish darajasi foiz=(eksperimental guruh bo'sh guruhi)/(nazorat guruhi - bo'sh guruh) × 100 foiz .

Har bir fraksiyaning optimal kontsentratsiyasi (C1) omon qolish darajasi va har bir fraksiya kontsentratsiyasi o'rtasidagi funktsional bog'lanishga muvofiq hisoblab chiqilgan. C2, C3, C4 va C5 kontsentratsiyasini olish uchun C1 2, 4, 6 va 8 marta suyultirildi. 1e turli xil pulpa ekstraktlari 1-jadvalda ko'rsatilgan.

1-jadval: Trichosanthes pulpasining qutb ekstrakti va optimal konsentratsiyasi.

2.4. Oqartirish tajribasi

2.4.1. Antioksidant testi.

Hujayra hayotiyligini aniqlash uchun MTT tahlili ishlatilgan (MTT Kit, Kaiji Biology). 1en, B-16 hujayralar 96-quduq plastinkalariga (10 ×104 hujayra/quduq) 24 soat davomida ekilgan va 24 soat davomida turli ekstraktlar yoki birikmalar bilan ishlov berilgan. Davolanishdan so'ng madaniyat muhiti tashlab yuborildi va PBS bilan ikki marta yuvildi. 1en, 0,05 foiz H2O2 qo'shildi va hujayralar 4 soat davomida o'stirildi. Shundan so'ng, B{13}} hujayralari 20 µL MTT eritmasida (5 mg/ml) 37 darajada 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. 1en, kultura supernatanti olib tashlandi va qoldiq 100 µL DMSOda eritildi. 1e absorbansi 490 nm da mikroplata o'quvchi (Tecan Trading AG) yordamida aniqlandi. 1etajriba parallel ravishda 3 marta o'tkazildi.

2.4.2. Melanin ishlab chiqarishni inhibe qilish.

Melanin ishlab chiqarilishi NaOH pirolizida melanin tarkibidagi hujayralarni aniqlash orqali aniqlandi [12]. Hujayralar 96-quduq madaniyati plitalariga 24 soat davomida 10 ×104 hujayra/quduq zichligida ekilgan.1en, hujayralar 24 soat davomida turli ekstraktlar yoki birikmalar bilan ishlov berilgan. Shundan so'ng, hujayra madaniyatining supernatanti (300 µL) olib tashlandi va qoldiq NaOH (1 ml, 1,0 mol / L) ichida xona haroratida 24 soat davomida eritildi. 1eabsorbsiya 475 nm da mikroplatereader (Tecan Trading AG) yordamida o'lchandi. 1e tajriba 3 ta takrorlash bilan parallel ravishda o'tkazildi. 1e IC50 GraphPad Prism 5 dasturi (GraphPad Software, Inc., San-Diego, Kaliforniya) tomonidan aniqlangan va arbutin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan (IC50 =15,6 µL).

2.4.3. Tirozinaza faolligini aniqlash.

Hujayra kulturasining supernatanti olib tashlandi va qoldiq Tritonx-100 (90 mkl) ichida eritildi vatirozinaza(10 µL, 1,0 mg/ml, Sigma, T3824 25ku). Aralashtirilgandan so'ng, aralash 30 daqiqa davomida 37 daraja haroratda inkubatsiya qilindi. 1e absorbansi 475 nm da mikroplata o'quvchi (Tecan Trading AG) yordamida o'lchandi. 1etajriba parallel ravishda 3 marta o'tkazildi. 1e IC50 GraphPad Prism 5 dasturi (GraphPadSoftware, Inc., San-Diego, Kaliforniya) tomonidan aniqlangan va arbutin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan (IC50 =15,6 µL).

2.5. Ekstraktsiya va izolyatsiya. Etil asetat ekstrakti metanolda eritildi va ustun 200-300 mesh silika jeli bilan o'ralgan, u neft efiri bilan muvozanatlangan. 1en, 2 : 1, 1 : 1 va 1: 2 nisbatda nefteter va etil asetatdan tashkil topgan gradient elyusiyasi; etilatsetat; etil asetat va metanol 2:1, 1:1 va 1:2 nisbatda; va metanol A (11,5 g), B (10,4 g), C (12,1 g), D (5,2 g) va E (6,1 g) birikmalarini olish uchun TLC bilan birgalikda ishlatilgan.

A 2:1, 1:1 va 1:2 nisbatda diklorometan va metanoldan foydalangan holda poliamid ustunli xromatografiya bilan ajratildi. 1e eluat TLC tomonidan nazorat qilindi. Bir xil ushlab turish koeffitsienti (rf) bo'lgan dog'lar birlashtirildi va A1 va A2 olindi. 1en, A1 ishlab chiqaruvchi vosita sifatida 1:1 nisbatda diklorometan va metanoldan foydalangan holda TLC tomonidan tayyorlangan va jel ustuni bilan bir necha marta tozalangan. Nihoyat, birikma 1 (17 mg) va birikma 2 (27 mg) olindi. A2 1:1 va 1:2 nisbatda eluent sifatida diklorometan va metanoldan foydalangan holda silikagel ustunli xromatografiya orqali tozalandi. 3-aralash (11 mg), 4-aralash (12 mg) va 5- birikma (23 mg) olindi. B teskari fazali C18 o'rta bosimli xromatografiya (RP-C18) yordamida metanol, suvni gradient elutsiyada quyidagi tarzda ajratildi: 0 foiz ,10 foiz, 15 foiz, 20 foiz, 25 foiz, 30 foiz, 35 foiz, 40 foiz, 50 foiz, 75 foiz, 90 foiz va 100 foiz. 1e oqim tezligi 10 mL·min-1 edi. Xuddi shu rfga ega bo'lgan 1e oqim fraktsiyalari birlashtirildi va B1 va B2 olindi. B1 bir necha marta gel kolonkasi bilan, metanol bilan elyusiya hal qiluvchi sifatida tozalangan. Murakkab (24 mg), 7 (21 mg) va 8 (18 mg) takroriy elutsiyadan keyin olingan. B2 jel ustuni va metanol bilan tozalandi va 9-murakkab (11 mg) olindi. C RP-C18 bilan ajratilgan va metanol va 10 mL·min-1 oqim tezligi bilan suv bilan elutsiya qilingan. Xuddi shu rfga ega bo'lgan 1e oqim fraktsiyalari birlashtirildi va C1, C2 va C3 olindi. C1 gel ustuni tomonidan tayyorlandi va metanol bilan elutildi va 10 (13 mg) birikmasi olindi. C2 silikagel ustuni bilan ajratildi va etil asetat va metanol bilan 2:1, 1:1 va 1:2 nisbatda gradient elyusiyasi bilan elutildi. (14 mg) olindi.C3 poliamid kolonkasi bilan ajratildi, metanol va suv bilan elutildi va HPLC orqali tozalandi. 13 (34 mg), 14 (42 mg) va 15 (38 mg) birikmalar olindi. D RP-C18 bilan ajratilgan va metanol va suv bilan elut qilingan.1e oqim tezligi 10 mL·min-1 edi. 16 (36 mg), 17 (19 mg) va 18 (37 mg) birikmalari HPLC tomonidan olingan. 19 (29 mg) va 20 (34 mg) birikmalar etil asetat va metanol yordamida 1:1 va 1:2 nisbatda gradient elutsiya yo'li bilan olingan, keyin esa 100% metanol kremniy jeli ustunida.

teridagi herba epimedium sagittatum

3. Natijalar va muhokama

3.1. Faol ekstraktlarni aniqlash (E1-E11).

Har bir ekstraktning 1e optimal konsentratsiyasi (ya'ni, C1) hisoblangan va 1-jadvalda ko'rsatilgan. 1e antioksidant tajribasi shuni ko'rsatadiki, barcha ekstraktlar antioksidantni tiklash ta'siriga ega, ammo VC bilan solishtirganda har bir guruhning antioksidant ta'siri zaifdir. 1-rasmda ko'rsatilganidek, E1, E3, E4, E7 va E11 ning antioksidant faolligi konsentratsiyaning ortishi bilan pasaydi. 1e melaniningibitsiya testi Trichosanthes kirilowii pulpasidagi barcha qutb komponentlari melanin sintezini inhibe qilishini ko'rsatdi. Xususan, melaninni inhibe qilish darajasi E2, E3 va E4 uchun musbat nazorat qiluvchi arbutinga qaraganda sezilarli darajada yuqori bo'lgan, bu 2-rasmda ko'rsatilgan. 1e natijalari.tirozinazaFaoliyat shuni ko'rsatadiki, Trichosanthes kirilowi ​​pulpasidagi barcha qutb komponentlari tirozinaz faolligini inhibe qiladi va inhibisyon tendentsiyasi melanin inhibisyoniga o'xshash edi. 1e tirozinaz faolligini inhibe qilish E2, E3, E4 va E8 uchun ijobiy nazoratga qaraganda ancha yuqori edi. Umuman olganda, neft efiridan olingan ekstraktlar tirozinazaga past inhibitiv ta'sir ko'rsatadi.1e etil asetatdan olingan ekstraktlar tirozinazaga, ayniqsa etil asetatning qutb komponentlariga yuqori inhibitiv ta'sir ko'rsatadi. 3-rasmda ko'rsatilganidek, n-butanoldan olingan 1e ekstraktlari ham tirozinazaga yuqori inhibitiv ta'sir ko'rsatadi.

3.2. Monomer komponentlarini ajratish va identifikatsiya qilish.

20 ta birikma silikagel va ODS xromatogramma ustunlari hamda preparativ HPLC bilan ajratilgan. NMR va MS ma'lumotlarini tahlil qilish asosida ularning tuzilmalari aniqlandi.1e 20 ta birikma 2-jadvalda, monomerlarning o'ziga xos analitik ma'lumotlari 1-ilovada ko'rsatilgan.

3.3. Samarali birikmalarni tekshirish tahlili

3.3.1. Antioksidant birikmalarni tasdiqlash tahlili.

E1, E2, E3, E4 va E5 antioksidant ta'sirga ega. 1e yuqoridagi komponentlardan ajratilgan asosiy birikmalar drexslerol-B (9-birikma), sikloheksanol 3-palmitat(10 birikma), 5-atsetoksimetil{11}}furaldegid (birlashma 11), {{13}gidroksimetilfurt birikma 12), diosmetin (birikma 13), apigenin (14 birikma), xrizoberil (15 birikma), luteolin (16 birikma), 4'-gidroksi-skutellarin (17 birikma), quercetin (18 birikma), 3', {{ 25}}asosiy birikmalar glikozidlar boʻlib, glikozidlar yaxshi antioksidant taʼsirga ega ekanligini koʻrsatadi. Fenolik kislotalar, masalan, 5-atsetoksimetil{27}}furaldegid (11-birikma), 5-gidroksimetilfurfural (12-birikma), diosmetin (13-aralash), apigenin (14-birikma), xrizoberil (birikma) ,luteolin (birikma 16), 4'-gidroksiskutellarin (birikma 17), quercetin (18 birikma) va 3',{40}}dihidroksi-7-(-Dglyukopiranosiloksi)-4'-metoksi flavon, Fenolik gidroksil guruhi va to'yinmagan qo'sh aloqalar tufayli yaxshi antioksidant faollikka ega [26, 27]. 1e natijalari 4-rasmda ko'rsatilgan.

4-rasm: Trichosanthes ekstraktidan olingan turli birikmalarning antioksidant tajribasining hujayra omon qolish darajasi (foiz)

3.3.2. Melaninni inhibe qiluvchi birikmalarni tasdiqlash tahlili.

E11, E12, E13, E16, E17 va E18 melanin sinteziga yaxshi inhibitiv ta'sir ko'rsatadi. 1e yuqoridagi komponentlardan ajratilgan asosiy birikmalar 2-jadvalda ko'rsatilgan. 2.4.2-bo'limdagi usul bo'yicha har bir birikmaning melanin sinteziga ta'siri aniqlangan. Har bir birikma quyidagi konsentratsiyalarda baholandi: 1000 µg/ml, 800 µg/mL, 400 µg/ml, 200 µg/ml va 100 µg/ml. Har bir o'lchov uch nusxada amalga oshirildi va melanin sintezining inhibisyon darajasi hisoblab chiqildi.

Protokatechuat (mustahkam 5), 5-atsetoksimetil{2}}furaldegid (birikma 11), 5-gidroksimetilfurfural (birikma 12), diosmetin (birikma 13), p-gidroksibenzaldegid (1-birikma), salitsil kislotasi (2-birikma), vanil kislotasi (3-aralash), izovanil kislotasi (4-birikma), trans-sinnamik kislota (6-birikma), 4-kumarin kislotasi (7-birikma), apigenin (14-birikma), xrizoberil (15- birikmasi) ), luteolin (birikma 16), 4'-gidroksi skutellarin (17 birikma), quercetin (birikma 18), 3', 5-dihidroksi-7-(-D-glyukopiranosiloksi)-4' -metoksi flavon (murakkab 19), ofloksatsin-7-O- -D-glyukozid (murakkab 20) melanin ishlab chiqarishni inhibe qilishi mumkin [28]. Xususan, vanil kislotasi (3-birikma), izovanil kislotasi (4-birikma), protokatechuat (5-birikma), trans-sinnamik kislota (6-birikma) va 4-kumar kislotasi (murakkab 7) yuqori melanin inhibisyoniga ega. 1e natijalari 5-rasmda ko'rsatilgan.

3.3.3. Tirozinaz faolligini inhibe qiluvchi birikmalarni tekshirish va tahlil qilish.

E2, E3, E4, E7, E8 va E9 yaxshi inhibitiv ta'sirga egatirozinazafaoliyat. 1e yuqoridagi komponentlardan ajratilgan asosiy birikmalar 2-jadvalda ko'rsatilgan. 2.4.3-bo'limda keltirilgan usulga ko'ra, nazorat sifatida arbutin ishlatilgan va birikma konsentratsiyasi 1000 mkg/ml, 800 mkg/ml, 400 mkg/ml bo'lgan. , 200 µg/ml va 100 µg/ml. Har bir o'lchov 5 marta amalga oshirildi va tirozinazning inhibisyon tezligi hisoblab chiqildi. 1e natijalari 6-rasmda ko'rsatilgan.

1e natijalari shuni ko'rsatadiki, diosmetin (13 birikma), apigenin (14 birikma), xrizoberil (15 birikma), luteolin (16 birikma), 4'-gidroksiskutellarin (17 birikma), quercetin (18 birikma), 3',{10} }dihidroksi-7-(-D-glyukopiranosiloksi)-4'-metoksi flavon (birikma 19), siprofloksatsin-7-O- -D-glyukozid (birikma 20), p-gidroksibenzaldegid (birikma 1), salitsil kislotasi (birikma 2), vanil kislotasi (3 birikma), izovanil kislota (4 birikma), protokatechuat (5 birikma), trans-sinnamik kislota (6 birikma), 4-kumar kislotasi (7 birikmasi) ) va transferul kislotasi (8-birikma) hammasi aniqtirozinazainhibitiv faoliyat.

Cistanche o'simligi tirozinaz faolligini inhibe qiladi.

Rasmni bosing va batafsil ma'lumot oling.

Benzol halqasidagi gidroksil o'rnini bosuvchi birikmalar, masalan, p-gidroksibenzaldegid (birikma 1), salitsil kislotasi (birikma 2), vanil kislotasi (3 birikma), izovanilik kislota (4 birikma), protokatechuat (5 birikma), trans-sinnamik kislota ( 6-birikma), 4-kumar kislotasi (7-birikma), trans-ferul kislotasi (8-birikma) va flavonoidlar tirozinazaning yuqori inhibisyonini ko'rsatdi va para-almashtirilgan birikmalarning inhibisyon darajasi orto-almashtirilgan birikmalarga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi. . Masalan, p-gidroksibenzaldegidning inhibitiv faolligi salitsil kislotasidan sezilarli darajada yuqori edi va vanil kislotasining inhibitiv faolligi izovanilik kislotadan sezilarli darajada yuqori edi. Bundan tashqari, p-gidroksibenzaldegidning inhibitiv faolligi salitsil kislotasi, vanil kislotasi, izovanil kislotasi va protokatechuatdan sezilarli darajada yuqori edi. Buning sababi shundaki, faol markaz atrofida nukleofil guruhlar mavjudtirozinaza-SH, -NH2 va -OH kabi faol markaz atrofidagi bo'shliqni egallaydi va shu bilan tirozinning faol markazga hujum qilishini oldini oladi. Nihoyat, melanin sintezi inhibe qilindi [28]. 1e tarkibida o-digidroksi bo'lgan birikmalarning inhibitiv faolligi paragidroksi birikmalariga qaraganda kuchliroq edi va protokatechuatning inhibitiv faolligi vanilikat kislotasidan sezilarli darajada yuqori edi. 1e yuqoridagi hodisalar flavonoidlarda ham mavjud. 7 va 4' gidroksilguruhlarni o'z ichiga olgan flavonoidlarning 1eingibitorlik darajasi 7 va 4' gidroksilguruhlari almashtirilgandan sezilarli darajada yuqori edi. Masalan, xrizoberilning inhibitiv faolligi diosmetinnikidan sezilarli darajada yuqori, diosmetinning inhibitiv faolligi esa 3',5-dihidroksi-7-(-D-glyukopiranosiloksi)-4 dan yuqori edi. ′- metoksi flavon va siprofloksatsin-7-O- -D-glyukozid. 1gidroksisi bo'lgan flavonoidlarning ingibitorlik darajasi 3-gidroksisi bo'lmagan yoki 3-gidroksi almashtirilgan birikmalarga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi. Masalan, kversetinning inhibitiv faolligi 4'-gidroksiskutellarindan sezilarli darajada yuqori edi, ammo 4'-gidroksiskutellarinning inhibitiv faolligi quercetin{28}}o glyukozidga qaraganda yuqori edi. Bundan tashqari, koellinning inhibitiv faolligi apigeninnikiga qaraganda, lekin luteolinnikiga qaraganda pastroq. B-halqa o'rnini bosuvchi moddalar, ayniqsa gidroksil guruhi, uni kuchaytirishi mumkintirozinazainhibitiv faollik va B-halqaning ortodigidroksi guruhi ko'proq inhibitiv faollikka ega edi [29].