Abstrakt.Arbutin - bu turli xil o'simliklardan, shu jumladan ayiq barglaridan olingan tabiiy birikma bo'lib, terini oqartiruvchi, yallig'lanishga qarshi va oksidlovchi stressdan himoya qiluvchi xususiyatlarni o'z ichiga oladi. Biroq, arbutinning osteoblastlarga ta'siri noma'lumligicha qolmoqda. Ushbu tadqiqot in vitroda MC3T3‑E1 sichqonchaning osteoblast prekursor hujayralarining ko'payishi va differentsiatsiyasida arbutinning funktsiyasi va mexanizmlarini o'rganishga qaratilgan. Arbutin bilan ishlov berilgan MC3T3‑E1 hujayralarining ko'payishi Hujayralarni hisoblash to'plami-8 tahlili va 5-etinil-2'-deoksiuridin yorliqlash tahlili yordamida baholandi. Bundan tashqari, hujayra aylanishi va apoptoz oqim sitometriyasi tahlili yordamida tekshirildi. Arbutinning osteoblast differentsiatsiyasiga ta'siri gidroksidi fosfataza (ALP) bo'yash yordamida va I 1-toifa kollagen zanjiri (COL1A1), suyak-karboksiglutamat oqsili (BGLAP) va Sp7 transkripsiya omilining (SP7) mRNK ifoda darajalarini o'rganish orqali o'rganildi. Osteogenezni rag'batlantirishda arbutin funktsiyasi ostida yotgan molekulyar mexanizmni qo'shimcha tekshirish uchun runt bilan bog'liq transkripsiya omili 2 (RUNX2) va -kateninning mRNK va oqsil ifoda darajalari teskari transkripsiya-miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi va g'arbiy blot bilan tahlil qilindi. Arbutin MC3T3‑E1 hujayra proliferatsiyasini sezilarli darajada rag'batlantirdi va S-fazadagi hujayralar nisbatini oshirdi. Arbutin bilan davolash ALP faolligini va MC3T3‑E1 hujayralarida COL1A1, BGLAP va SP7 ning mRNK ifoda darajalarini oshirdi. Bundan tashqari, RUNX2 va -kateninning oqsil va mRNK ifoda darajalari arbutin bilan davolashdan keyin sezilarli darajada oshdi. Umumiy topilmalar shuni ko'rsatdiki, arbutin Wnt / -katenin signalizatsiya yo'li orqali MC3T3‑E1 hujayralarining ko'payishi va differentsiatsiyasini rag'batlantirishga qodir.
Tegishli tadqiqotlarga ko'ra,cistancheoddiy o't bo'lib, u "hayotni uzaytiruvchi mo''jizaviy o't" deb nomlanadi. Uning asosiy komponentisistanozidkabi turli xil effektlarga egaantioksidant, yallig'lanishga qarshi, va immun funktsiyasini rag'batlantirish. Cistanche va o'rtasidagi mexanizmterini oqartirishCistanche glikozidlarining antioksidant ta'sirida yotadi. Inson terisida melanin katalizlangan tirozinning oksidlanishi natijasida hosil bo'laditirozinaza, va oksidlanish reaktsiyasi kislorod ishtirokini talab qiladi, shuning uchun organizmdagi kislorodsiz radikallar melanin ishlab chiqarishga ta'sir qiluvchi muhim omilga aylanadi. Cistanche tarkibida antioksidant bo'lgan va tanadagi erkin radikallarning paydo bo'lishini kamaytiradigan sistanozid mavjud.melanin ishlab chiqarishni inhibe qiladi.
Qo'shimcha ma'lumot uchun:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
Kirish
Osteoporoz - bu sog'liq va ijtimoiy-iqtisodiy muammo bo'lib, suyak massasining pastligi va suyak mikroarxitekturasining yomonlashishi bilan tavsiflanadi, bu esa mo'rtlik sinishi xavfini oshiradi (1,2). Evropa Ittifoqida (EI) 2010 yilda 50 yoshdan katta yoki unga teng bo'lgan odamlarda osteoporozning tarqalish darajasi erkaklar va ayollar uchun mos ravishda 6,6 va 22,1 foizga baholandi. Iqtisodiy nuqtai nazardan, Evropa Ittifoqiga osteoporozning umumiy qiymati 2010 yilda ~ 37,4 milliard evroni tashkil etdi (3). O'rtacha umr ko'rishning o'sishi va aholining qarishi tufayli, kelajakda osteoporotik yoriqlar bilan og'rigan odamlar soni ortib borishi mumkin (4). Osteoporoz osteoblastlar vositachiligida suyak shakllanishi va osteoklastlar vositachiligida rezorbsiya o'rtasidagi nomutanosiblik tufayli yuzaga keladi (5). Mavjud osteoporozni davolash usullariga rezorbsiyaga qarshi dorilar (masalan, bifosfonatlar va denosumab), kalsitonin va estrogen kiradi. Biroq, bu birikmalar ma'lum cheklovlarni ko'rsatadi; xususan, ular osteogenik aylanish tezligini kamaytiradi va suyaklarni qayta qurish jarayonini kamaytirish orqali suyak shakllanishining pasayishiga olib keladi (6). Estrogen terapiyasi uzoq muddatli osteoporozni davolash uchun ideal emas, chunki estrogenning yuqori darajasi bachadondan qon ketishi, ko'krak saratoni va yurak-qon tomir kasalliklarini keltirib chiqarishi mumkin (7). Bundan tashqari, rezorbsiyaga qarshi dorilar yo'qolgan suyak tuzilishini tiklashga qodir emas. Shu bilan birga, anabolik vositalar suyak shakllanishini rag'batlantirishi va suyak massasini oshirishi mumkin (8). Shuning uchun suyak shakllanishiga yordam beradigan yangi xavfsiz va samarali dorilarni aniqlash muhimdir.
Arbutin (4-gidroksifenil- ‑D-glyukopiranozid; 1-rasm) har xil turdagi o'simliklarda mavjud bo'lgan tabiiy gidroxinon hosilasidir (molekulyar massasi 272 Da). Arbutinning yuqori miqdori o'simliklarda, jumladan, marjoram (Origanum majorana, Lamiaceae) va nok (Pyrus communis, Rosaceae) va ayniqsa, ayiq barglari (Arctostaphylos uva‑ursi) kabi Ericaceae oilasida aniqlangan (9). Arbutin turli xil biologik faollikni namoyish etadi. Misol uchun, arbutin ishlatilishi mumkin
terini oqartiruvchi vosita sifatida; melanosomalarda tirozinaza faolligini inhibe qilish orqali arbutin depigmentatsiyani rag'batlantirishi aniqlandi (10,11). Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, arbutin gidroksil radikallarining hujayra ichidagi darajasini pasaytirish orqali rentgen nurlanishidan kelib chiqqan apoptozdan himoya rolini o'ynashi mumkin (12). Bundan tashqari, arbutin hujayra ichidagi superoksid darajasini pasaytirish va faollashtirilgan T hujayralarining yadro omilini 1 (13) kamaytirish orqali osteoklastlarning differentsiatsiyasini inhibe qilishi mumkin. Biroq, arbutinning osteoblast funktsiyasiga ta'siri noma'lumligicha qolmoqda. Shu sababli, ushbu tadqiqot arbutinning MC3T3-E1 sichqonchasi osteoblastining prekursorli hujayra proliferatsiyasi va differentsiatsiyasiga ta'siri va mexanizmlarini o'rganishga qaratilgan.
Wnt signalizatsiya yo'li osteoblast va osteoklastga to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita ta'sir qilishi mumkin, suyak shakllanishini oshiradi va suyak rezorbsiyasini kamaytiradi (14). Kanonik Wnt signalizatsiyasi osteoblastiklarning ko'payishi, differentsiatsiyasi va funktsiyasini bir necha darajalarda tartibga solishi mumkin (15). Hayvon modellarida ajratilgan oqsil bilan bog'liq bo'lgan oqsil 1, sklerostin va dikkopf WNT signalizatsiya yo'li ingibitoriga (DKK1) va glikogen sintazasining kichik molekulali ingibitorlariga qarshi antikorlarni qo'llash orqali Wnt/-katenin signalizatsiya yo'li ingibitorlarining faolligini kamaytirish. kinaz 3 (GSK-3) suyak massasini oshirishi va sinish xavfini kamaytirishi mumkin(16). Shuning uchun Wnt signalizatsiya yo'li osteoporozni davolash uchun yangi dorilarni ishlab chiqish uchun potentsial terapevtik maqsadni ifodalaydi (17). Ushbu tadqiqotda arbutinning MC3T3‑E1 hujayra proliferatsiyasi va differentsiatsiyasiga ta'siri o'rganildi. Bundan tashqari, MC3T3-E1 hujayralarining differentsiatsiyasini qo'zg'atishda arbutin funktsiyasining asosiy molekulyar mexanizmi ko'rib chiqildi.
Materiallar va usullar
Kimyoviy moddalar. Arbutin (sofligi, 98 foizdan yuqori yoki unga teng) Dalian Meilun Biotech Co., Ltd. (Dalian, Xitoy) dan sotib olindi, dimetil sulfoksidda (Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmshtadt, Germaniya) eritildi va saqlash joyida saqlangan. kontsentratsiyasi 0,5 M. Rekombinant inson DKK1 PeproTech, Inc. (Rocky Hill, NJ, AQSH; mushuk. № 120-30) dan sotib olingan.
Hujayra madaniyati. MC3T3‑E1 sichqonchaning kalvarial pre-osteoblastlari Xitoy Fanlar akademiyasi Shanxay Biologiya fanlari institutining Hujayra Resurs Markazidan (Shanxay, Xitoy) sotib olindi va -Minimum Essential Medium (-MEM; HyClone; GE Healthcare)da yetishtirildi. Life Sciences, Logan, UT, AQSH) 1{13}}% homila sigir zardobi (FBS; Biological Industries, Kibbutz Beit Haemek, Isroil), 100 µg/ml streptomitsin va 100 U/ml bilan to‘ldirilgan penitsillin (HyClone; GE Healthcare Life Sciences). Hujayralar 37˚C da 5 foiz CO2 bo'lgan hujayra madaniyati inkubatorida saqlangan. Media har kuni almashtirildi. 0,25% tripsin (HyClone; GE Healthcare Life Sciences) bilan 37˚C da 1‑2 daqiqa davomida ishlov berilgandan so‘ng 80% qo‘shilgan hujayralar to‘qima madaniyati kolbalariga qayta ekilgan. Osteoblastik farqlash tajribalari uchun hujayralar 50 mkg/ml L-askorbin kislotasi (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) va 10 mM-gliserofosfat disodiy tuzi gidrati (Sigma-Aldrich; Merck atA) 37 kun davomida o'z ichiga olgan osteogenik qo'shimchalar bilan ishlov berildi. ˚C. Mexanik tadqiqotlar uchun MC3T3‑E1 hujayralari 37˚C da 6 soat davomida DKK1 (0,5 µg/ml) bilan oldindan ishlov berildi va keyin 37˚C da 3 kun davomida arbutin (100 µM) bilan ishlov berildi.
Hujayra proliferatsiyasi. Arbutinning hujayra proliferatsiyasiga ta'sirini baholash uchun Hujayralarni hisoblash to'plami{0}} tahlili (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Inc., Kumamoto, Yaponiya) ishlatilgan. Hujayralar 96-quduq plitalariga 5x103 hujayra/quduq zichligida 24 soat davomida 37˚C da ekilgan. Keyinchalik, hujayralar turli konsentratsiyalarda (0, 10, 50 va 100 mkM) arbutin bilan ishlov berildi. 24, 48 yoki 72 soatdan keyin hujayralar 37˚C da 1‑2 soat davomida 10 µl CCK-8 va 100 µl ‑MEM o‘z ichiga olgan 9,1% CCK‑8 eritmasi bilan ishlov berildi. Har bir quduqning optik zichligi qiymati 450 nm to'lqin uzunligida mikroplata o'quvchi (ELx808; BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, AQSh) yordamida o'lchandi. Nisbiy hujayra hayotiyligi namunaning o'rtacha absorbsiyasi va nazorat o'rtasidagi nisbat sifatida hisoblab chiqilgan.
5‑etinil‑2'‑deoksiuridin (EdU) yorliqlash tahlili. Arbutinning hujayra proliferatsiyasiga ta'siri EdU Apollo®567 in vitro Imaging to'plami (Guangzhou RiboBio Co., Ltd., Guanchjou, Xitoy) yordamida o'lchandi. Hujayralar 96-quduq plastinkasiga 1x103 hujayra/quduq zichligida inkubatsiya qilindi va 0, 10, 50 yoki 100 mkM bilan 1{20}}% FBS o'z ichiga olgan -MEMda inkubatsiya qilindi. arbutin. 72-soatlik inkubatsiyadan so‘ng, 37˚C da 2 soat davomida qo‘shimcha inkubatsiyadan oldin har bir quduqqa 50 mkM konsentratsiyada EdU qo‘shildi. Hujayralar ikki marta PBS bilan yuvildi va xona haroratida (RT) 30 daqiqa davomida 4 foiz paraformaldegid o'z ichiga olgan PBS bilan mahkamlandi. Glitsin (2 mg/ml) va PBS bilan yuvilgandan so'ng, hujayralar RT da 10 daqiqa davomida Triton X-100 (0,5 foiz) bilan o'tkazuvchan bo'ldi. Hujayralar qorong'ida 30 daqiqa davomida RT da 1X Apollon bo'yash reaktsiyasi suyuqligi bilan inkubatsiya qilindi. Hujayra yadrolari RT da 30 daqiqa davomida 1X Hoechst 33342 bilan qarama-qarshi bo'yalgan. EdU-musbat hujayralar flüoresan mikroskopiya (kattalashtirish, x200; Eclipse Ti; Nikon korporatsiyasi, Tokio, Yaponiya) orqali tasodifiy tanlangan beshta maydonda tasvirlangan.
Hujayra sikli va apoptoz tahlili. MC3T3‑E1 xujayralari olti quduqli plitalarga 2x105 hujayra/quduq zichligida ekilgan. 24-soatlik inkubatsiyadan so‘ng hujayralar 0, 10, 50 va 100 mkM konsentratsiyalarda arbutin bilan ishlov berildi. Hujayralar RT da 3 kundan keyin yig'ib olindi va 4 ° C da 12 soat davomida 70% etanol bilan biriktirildi. Hujayralar uch marta PBS bilan yuvildi va qorong'ida 37 ° C da 30 daqiqa davomida propidiy yodid (PI) bo'yash eritmasi (Beyotime Biotexnologiya instituti, Xaymen, Xitoy) bilan bo'yaldi. DNK tarkibi FACSCalibur oqim sitometri (BD Biosciences, San-Xose, CA, AQSH) yordamida CellQuest Pro dasturi (Version 5.2; BD Biosciences) va ModFit LT dasturiy taʼminoti (versiya 3.0; Verity Software House, Inc., Topsham, ME,) yordamida oʻlchandi. AQSH). Apoptozni tahlil qilish uchun arbutin bilan ishlov berilgan hujayralar yig'ib olindi va RT da 15 daqiqa davomida qorong'uda flüoresein izotiyosiyanat etiketli Annexin-V va P I (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) bilan bo'yalgan. Hujayra apoptotik tezligi FACSCalibur oqim sitometri (BD Biosciences) yordamida CellQuest Pro dasturi (Version 5.2; BD Biosciences) yordamida baholandi.
Ishqoriy fosfataza (ALP) bo'yash tahlili. Osteoblastlar 5x104 hujayra/quduq zichligidagi {0}} quduq plitalariga ekilgan, osteogenik qo'shimchani o'z ichiga olgan -MEMda inkubatsiya qilingan va 0 (nazorat), 10, 50 yoki 100 mkM arbutin bilan ishlov berilgan. 37˚C da 9 kundan so'ng hujayralar PBS bilan uch marta yuvildi va RTda 4 foizli paraformaldegidda 10 daqiqa davomida mahkamlandi. Hujayralar uch marta distillangan suv bilan yuvildi va keyin 2 soat davomida 5-bromo{13}}xloro-3-indolil fosfat/nitro-ko‘k tetrazolium xlorid ALP rang ishlab chiqish to‘plami (Beyotime Biotexnologiya instituti) yordamida bo‘yaldi. RT da. Bo'yalgan hujayralar yorug'lik mikroskopi yordamida tasvirlangan (kattalashtirish, x40; Eclipse Ti; Nikon korporatsiyasi).
Teskari transkripsiya - miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (RT‑qPCR). Hujayralar 6-quduq plastinkalariga 2x105 hujayra/quduq zichligida ekilgan. 37˚C da 3 kun davomida turli konsentratsiyalarda arbutin bilan davolashdan so'ng, RNAiso Plus reagenti (Takara Biotechnology Co., Ltd., Dalian, Xitoy) yordamida MC3T3‑E1 hujayralaridan umumiy RNK ajratildi. Hammasi bo'lib 1 mkg RNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq, gDNA Eraser (Takara Biotechnology Co., Ltd.) bilan PrimeScript RT reagent to'plami yordamida cDNKga teskari transkripsiya qilindi. Reaksiya shartlari quyidagicha edi: 42˚C 2 daqiqa, 37˚C 15 daqiqa va 85˚C 5 soniya. qPCR SYBR premix Ex Taq II (Takara) yordamida ABI 7500 Fast Real-Time PCR tizimi (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, AQSh) bilan umumiy hajmi 20 µl bo‘lgan har bir namunadan teng miqdorda cDNK yordamida amalga oshirildi. Biotechnology Co., Ltd.). Quyidagi termosikl sharoitlari qo'llanildi: 95˚C da 30 soniya davomida dastlabki denaturatsiya, keyin 5 soniya davomida 95˚C va 34 sekund davomida 60˚C da 40 tsikl. Amplifikatsiyaning o'ziga xosligi erish egri tahlili bilan baholandi va -aktin ichki nazorat sifatida xizmat qildi. Nisbiy gen ifoda darajalari 2-DDCq usuli (18) yordamida tahlil qilindi. Foydalanilgan primerlar ketma-ketligi quyidagilar edi: Runt bilan bog'liq transkripsiya omili 2 (RUNX2), oldinga 5'‑CCAACCGAGTCATTTAAGGCT-3', teskari 5'-GCTCACGTCGCTCATCTTG-3'; kollagen turi I 1 zanjir (COL1A1), oldinga 5'-GCCTCCCAGAACATC ACCTA‑3', teskari 5'-GCAGGGACTTCTTGAGGTTG-3';suyak -karboksiglutamat oqsili (BGLAP), oldinga 5'-CGCTACCTTGGAGCCCTCAGT-3', teskari 5'‑AGGCGGTCTTCAAGCCATAC‑3'; Sp7 transkripsiya omili (SP7), oldinga5'‑AAGGTGTACGGCAAGGCTTC‑3', teskari 5'‑CGTCAGAGCGAGTGAACCTC‑3'; -katenin, oldinga 5'‑ATGGAGCCGGACAGAAAAGC‑3', teskari 5'‑CTTGCCACTCAGGGAAGGA‑3'; -aktin, oldinga 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3', teskari 5'‑CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'.
Western blot tahlili. MC3T3‑E1 xujayralari 6-quduq plastinkalariga 2x105 hujayra/quduq zichligida ekilgan. Hujayralar 3 kun davomida turli konsentratsiyalarda arbutin bilan ishlov berildi va muzli sovuq PBS bilan uch marta yuvildi. Umumiy hujayra oqsili MC3T3‑E1 hujayralaridan 1 mM fenilmetilsulfonil ftoridni o'z ichiga olgan radioimmunopresipitatsiya tahlili lizis buferi (Beyotime Biotexnologiya instituti) yordamida ajratildi. Proteinlar 4˚C da 15 daqiqa davomida 13,800 xg da santrifüjdan so'ng ajratildi. Protein kontsentratsiyasi bicinchoninic kislota oqsil tahlili to'plami (Beyotime Biotexnologiya instituti) yordamida aniqlangan. Har bir namunadagi teng miqdordagi protein (20-30 mkg) doimiy kuchlanishda (110 V) 2 soat davomida 10% SDS‑PAGE bilan ajratildi va poliviniliden ftorid (PVDF) membranasiga (EMD Millipore, Billerica, MA, AQSh). Membranalar TBS plyus Tween-20 (TBST; 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl pH 7,5 va 0,1 foiz Tween-20)da 2 soat davomida RTda 5 foiz yog'siz sutni o'z ichiga olgan bloklangan va keyin bir kechada inkubatsiya qilingan. Tegishli birlamchi antikorlar bilan 4˚C. Quyidagi antikorlar ishlatilgan: Quyon monoklonal anti- -katenin (1:5,000; kat. № ab32572; Abcam, Kembrij, MA, AQSh), quyon poliklonal anti-RUNX2 (1: 1,000; mushuk № ab23981; Abcam) va sichqoncha poliklonal anti- -aktin (1:1,000; mushuk № AF0003; Beyotime Biotexnologiya instituti). Keyinchalik, membranalar uch marta TBST bilan yuvildi va PVDF membranalari horseradish peroksidaza (HRP) bilan konjugatsiyalangan echki anti-quyon immunoglobulini G (IgG; 1:10,000; mushuk № ZB{{) bilan inkubatsiya qilindi. 52}}; OriGene Technologies, Inc., Pekin, Xitoy) yoki HRP-konjugatsiyalangan echki sichqonlarga qarshi IgG (1:10 000; kat. № ZB-2305; OriGene Technologies, Inc.) RT da 2 soat . Proteinlar Enhanced Chemiluminescence reagentlari (Thermo Fisher Scientific, Inc.) yordamida vizualizatsiya qilindi va kimyoluminesansni aniqlash tizimi (Amersham Imager 600; GE Healthcare Life) yordamida aniqlandi. Proteinlar miqdori ImageJ dasturi yordamida aniqlandi (versiya 1.52; Milliy sog'liqni saqlash institutlari, Bethesda, MD, AQSh). Oddiylashtirgandan so'ng, nisbiy protein ifoda darajalari ichki nazorat sifatida -aktin bilan hisoblab chiqilgan.
Statistik tahlil. Barcha tajribalar mustaqil ravishda kamida uch marta takrorlandi. Statistik tahlillar GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish sifatida taqdim etilgan va muhim farqlar Dunnettning post hoc testi bilan birgalikda bir tomonlama dispersiya tahlili orqali tahlil qilingan. P<0.05 was considered to indicate a statistically significant difference.
Natijalar
Arbutin MC3T3‑E1 hujayralarining ko'payishiga yordam beradi. Arbutinning MC3T3‑E1 hujayra proliferatsiyasiga ta'siri CCK-8 tahlili yordamida tekshirildi. Arbutin turli konsentratsiyalarda (0, 10, 50 va 100 mkM) 24, 48 va 72 soat davomida kiritildi va CCK-8 tahlili o'tkazildi (2A-rasm). 24 soatdan keyin davolanmagan nazorat hujayralari bilan solishtirganda osteoblast proliferatsiyasida statistik farqlar aniqlanmadi. Biroq, 48 va 72 soatdan keyin 100 mkM da arbutin bilan davolashdan keyin MC3T3‑E1 hujayra proliferatsiyasi sezilarli darajada oshdi. EU etiketlash tahlili 72 soatdan keyin amalga oshirildi va natijalar shuni ko'rsatdiki, 50 va 100 mkM konsentratsiyada arbutin bilan ishlov berilgan EdU-musbat MC3T3-E1 hujayralarining ulushi ishlov berilmagan nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada oshgan (2B va C-rasm). .
Arbutin hujayra siklining rivojlanishini tezlashtiradi. Arbutinning hujayra siklining rivojlanishiga ta'siri hujayra sikli tahlili yordamida baholandi (3-rasm). Arbutin bilan 50 va 100 mkM da davolash S-fazadagi hujayralar foizining oshishiga olib keldi (3A va C-rasm) va 100 mkM arbutin G1-fazasidagi hujayralar foizining pasayishiga olib keldi ( 3D-rasm). Nazorat guruhi bilan solishtirganda 10 mkM guruhida statistik jihatdan ahamiyatli farqlar aniqlanmadi. Arbutinning MC3T3‑E1 apoptoziga ta'siri ham oqim sitometriyasi yordamida baholandi (3B va E-rasm). Nazorat bilan solishtirganda 10, 50 va 100 mkM da arbutin bilan davolashdan keyin apoptoz tezligi sezilarli darajada o'zgarmadi.
Arbutinning ALP faoliyatiga ta'siri. Arbutinning osteoblast farqlanishiga ta'siri ALP bo'yash orqali tahlil qilindi. 9 kundan keyin arbutinning turli konsentratsiyalari (0, 10, 50 yoki 100 mkM) bilan davolash nazorat guruhiga nisbatan ALP faolligini sezilarli darajada oshirdi (4A-rasm). Ushbu topilmalar arbutin MC3T3-E1 hujayralarida ALP faolligini oshirishi mumkinligini ko'rsatdi.
Arbutinning COL1A1, ‑katenin, RUNX2, BGLAP va SP7 mRNK ifoda darajalariga ta'siri. COL1A1, -katenin, RUNX2, BGLAP va SP7 ning mRNK ifoda darajalari turli konsentratsiyalarda (0, 10, 50 yoki 100 mkM) arbutin bilan davolashdan keyin RT-qPCR yordamida MC3T3‑E1 hujayralarida baholandi. 3 kun. 10, 50 va 100 mkM arbutin bilan davolash qilingan osteoblastlarda COL1A1 va -katenin ifoda darajalari davolanmagan hujayralar bilan solishtirganda oshdi (4B va C-rasm). RUNX2, BGLAP va SP7 ning ifoda darajalari 50 va 100 mkM da arbutin bilan davolashdan keyin sezilarli darajada oshdi (4D‑F-rasm).
Arbutinning - katenin va RUNX2 ning protein ifoda darajalariga ta'siri. Arbutin tomonidan qo'zg'atilgan osteoblast differentsiatsiyasining asosiy mexanizmlarini o'rganish uchun RUNX2 va -kateninning protein ifoda darajalari MC3T3‑E1 hujayralarida western blotting orqali tekshirildi (5A va B-rasm). 100 mkM da arbutin bilan davolash osteoblastlarda -katenin va RUNX2 oqsillarini ifodalash darajasini nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada oshirdi (mos ravishda 5C va D-rasm). Mavjud natijalar shuni ko'rsatdiki, arbutin -katenin va RUNX2 oqsillarini ifodalash darajasini tartibga solish orqali osteoblast farqlanishiga ta'sir qilishi mumkin. Arbutin Wnt/-katenin signalizatsiya yo'li orqali osteoblastik differentsiatsiyani rag'batlantiradimi yoki yo'qligini tekshirish uchun MC3T3‑E1 hujayralari 100 mkM arbutin bilan davolashdan oldin 6 soat davomida 0,5 mkg/ml DKK1 bilan ishlov berildi.
DKK1 arbutin tomonidan qo'zg'atilgan RUNX2 proteini ifodasini sezilarli darajada inhibe qildi (5E-rasm). Mavjud natijalar shuni ko'rsatdiki, arbutin Wnt / -katenin signalizatsiya yo'li orqali osteoblast farqlanishiga ta'sir qilishi mumkin.
Munozara
Osteoporoz jiddiy sinish va nogironlikka olib kelishi mumkin va butun dunyo bo'ylab yoshga bog'liq muammodir (19). To'plangan dalillar suyak shakllanishi va rezorbsiyasidagi osteoklastlar va osteoblastlar o'rtasidagi muvozanat osteoporozga olib kelishi mumkinligini ko'rsatdi (20). Ta'kidlash joizki, suyak shakllanishi osteoblast proliferatsiyasi va differentsiatsiyasiga bog'liq (21,22).
Osteoporozni davolash uchun ishlatiladigan ko'plab mavjud dorilar antirezorptiv dorilar (23); ammo, bu muolajalar suyak yo'qotilishini qaytara olmaydi (24). Suyak shakllanishini rag'batlantiradigan anabolik vositalar jiddiy shikastlangan skelet mikro tuzilishini va suyak massasining yo'qolishini tiklashi mumkin (24). Teriparatid suyak shakllanishini rag'batlantirishi isbotlangan anabolik agentlardan biri bo'lib, klinik sinovlar shuni ko'rsatdiki, teriparatid bilan davolash yangi umurtqali sinishlar xavfini kamaytiradi va son, bel umurtqa pog'onasi va femur bo'ynida suyak mineral zichligini oshiradi (25). Ta'kidlash joizki, teriparatid qimmat davolash hisoblanadi. Shuning uchun suyak shakllanishiga samarali yordam beradigan yangi dori-darmonlarni ishlab chiqish muhimdir.
Arbutin sitoprotektiv vosita bo'lib, yuqori konsentratsiyalarda sezilarli sitotoksik ta'sir ko'rsatmaydi (26). Arbutinning qondagi kontsentratsiyasi aniq bo'lmasa-da (13), arbutin siydikni mikroblarga qarshi dori sifatida ishlatiladi va xavfsiz og'iz agenti hisoblanadi (27,28). Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, arbutin terini oqartirish (10,11), yallig'lanishga qarshi (29), saratonga qarshi (30) va osteoklastlarning differentsiatsiyasini bostirish (13) kabi bir nechta faollikni namoyish qilishi mumkin. Biroq, arbutinning osteoblastlarga ta'sirini va uning osteoporozni davolash uchun yangi birikma sifatida foydalanish potentsialini o'rganish uchun qo'shimcha tadqiqotlar talab etiladi. Shu sababli, ushbu tadqiqot arbutinning MCET3‑E1 hujayralarining ko'payishi va differentsiatsiyasiga ta'siri va in vitroda arbutin funktsiyasining asosiy mexanizmlari o'rganildi.
Suyak shakllanishi osteoblastlar soni va bitta osteoblastlarning faolligi bilan bog'liq (31). Osteoblastlar sonini osteoblastdan oldingi replikatsiya yoki differentsiatsiyani rag'batlantirish yoki etuk osteoblastlarning hujayra o'limini kamaytirish orqali oshirish mumkin (32). Ushbu tadqiqotda arbutin apoptotik tezlikka ta'sir qilmasdan MC3T3-E1 hujayralarining proliferatsiyasini oshirdi. Bundan tashqari, arbutin hujayralarni G1-fazadan S-fazaga o'tkazish orqali hujayra siklining rivojlanishini kuchaytirdi. Ushbu natijalar arbutin osteoblastik proliferatsiyani keltirib chiqarishi mumkinligini ko'rsatdi.
ALP osteogenik farqlanishning dastlabki belgisidir (33). ALP suyak shakllanishi paytida skeletning kalsifikatsiyasi bilan bog'liq (34). Ushbu tadqiqotda ALP bo'yash natijalari shuni ko'rsatdiki, 10, 50 va 100 mkM da arbutin bilan davolash qilingan osteoblastlar va 9 kun davomida osteogenik qo'shimchalar ALP faolligini oshirdi, bu arbutin osteoblastlarning erta farqlanishiga yordam berishi mumkinligini ko'rsatdi.
Osteogenez turli xil transkripsiya omillari, shu jumladan RUNX2 va SP7 va suyaklarga xos bo'lgan bir nechta matritsa oqsillari, shu jumladan ALP bilan boshqarilishi isbotlangan.BGLAP va COL1A1 (35). RUNX2 va SP7 muhimosteoblastlar differentsiatsiyasida ishtirok etadigan transkripsiya omillarisuyak shakllanishi davrida (36). COL1A1 hujayradan tashqarisuyak regeneratsiyasini va osteoni rag'batlantiradigan matritsa oqsiliportlash farqlanishi (37). BGLAP kollagen bo'lmagansuyak va suyak almashinuvini tartibga soluvchi suyak matritsasi oqsiliminerallashuv (38). Ushbu tadqiqot arbutinni aniqladimuhim mRNK ifoda darajalarini keltirib chiqarishi mumkinosteogen regulyatorlar, shu jumladan RUNX2, BGLAP, SP7 vaCOL1A1. Bundan tashqari, ifoda darajasi -katenin ediortdi. Ushbu natijalar arbutinni rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatdio'z ichiga olgan mexanizm orqali osteoblastik differentsiatsiyaWnt% 2f -katenin signalizatsiyasi.
Wnt signalizatsiya yo'li rivojlanish jarayonida suyak shakllanishiga va to'qimalarning yangilanishi paytida suyakning qayta tuzilishiga ta'sir qiladi (39). Kanonik Wnt signalizatsiya yo'li edihujayradagi Wnt ligand signalizatsiyasi bilan boshlanganligi aniqlanganpast zichlikli lipoprotein retseptorlari bilan bog'liq orqali sirtoqsil 5 yoki 6 (Lrp5/6) va etti-o'tish transmembranFrizzled retseptor (40). Wnt ligandlari orasidagi o'zaro ta'sirva ularning retseptorlari GSKni inhibe qilishi mumkin3- sitoplazmada,ning chiqarilishiga olib keladi -katenin, transkripsiya vositasikanonik Wnt signalizatsiyasi. Chiqarilganidan keyin, -kateninyadroga kirishi mumkin, shuning uchun ifodani nazorat qiladimaqsadli genlar darajasi (41). RUNX2 Runga tegishlidomen genlari oilasi va transkripsiya omili hisoblanadiosteoblastik differentsiatsiya (42). RUNX2 muhim vazifani bajaradidavomida bir nechta signalizatsiya yo'llarini muvofiqlashtirishdagi roliosteoblast farqlanishi (43). Oldingi o'rganilgan ibliskanonik Wnt signalizatsiyasi to'g'ridan-to'g'ri tartibga solishi mumkinligini ta'kidladiRUNX2. Xususan, -katenin/HNF1 homeobox Akompleks RUNX2 ifoda darajasini faollashtirishi mumkin,Shunday qilib, suyak shakllanishiga yordam beradi (44). DKK1 kuchliWnt inhibitori / -kateninning kanonik yo'li, bog'lanish orqaliLrp5/6 gacha (45,46). Ushbu tadqiqot natijalari taklif qildiarbutin bilan davolash oqsilni sezilarli darajada oshirdiRUNX2 va ifoda darajalari - MC3T3-E1dagi kateninhujayralar va DKK1 protein ekspressini sezilarli darajada kamaytirdiRUNX2 ning sion darajasi. Hozirgi natijalar shuni ko'rsatdiarbutin kanonik Wnt/ orqali MC3T3‑E1 hujayra farqlanishiga yordam berishi mumkin.-katenin yo'li.
Mualliflarning eng yaxshi ma'lumotlariga ko'ra, ushbu tadqiqot birinchi bo'lib arbutin Wnt/-katenin signalizatsiya yo'li orqali MC3T3‑E1 hujayralarining ko'payishi va differentsiatsiyasini rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatadi. Shuning uchun arbutin osteoporozni davolash uchun yangi potentsial nomzod bo'lishi mumkin. Shu bilan birga, Wnt / -katenin signalizatsiya yo'lining arbutin bilan qo'zg'atilgan osteogenezdagi o'ziga xos rolini aniqlash uchun qo'shimcha tadqiqotlar talab qilinadi, shu jumladan Ser675 da -kateninning fosforillanishi (47); Wnt/-katenin signalizatsiyasining roli haqida qo'shimcha ma'lumotga Wnt agonistlari yordamida erishish mumkin. Kelajakda keyingi tadqiqotlar arbutinning in vivo jonli ravishda suyak shakllanishiga yordam berish qobiliyatini o'rganishi mumkin.
Minnatdorchilik
Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.
Moliyalashtirish
Ushbu ish Xitoy Milliy Tabiatshunoslik Jamg'armasining asosiy dasturi (grant № 81370981) va Shengjing kasalxonasining ajoyib ilmiy jamg'armasi tomonidan qo'llab-quvvatlandi.
Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi
Joriy tadqiqot davomida foydalanilgan va/yoki tahlil qilingan maʼlumotlar toʻplami tegishli muallifdan asosli soʻrov boʻyicha mavjud.
Mualliflarning hissalari
QF, XM va LiY tajribalarni o'ylab topdilar va loyihalashtirdilar. XM tajribalarni amalga oshirdi va qo'lyozmani yozdi. SL, LiY, LeY va ML ma'lumotlarni tahlil qildi va qo'lyozmani tanqidiy qayta ko'rib chiqdi. QF barcha tadqiqotlarni nazorat qildi va qo'lyozmani qayta ko'rib chiqdi. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmani o'qib chiqdilar va tasdiqladilar.
Etikani tasdiqlash va ishtirok etishga rozilik
Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.
Nashr qilish uchun bemorning roziligi
Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.
Raqobatdosh manfaatlar
Mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar.
Ma'lumotnomalar
1. Das S va Crockett JC: Osteoporoz - farmakologik oldini olish va davolashning hozirgi ko'rinishi. Drug Des Devel Ther 7435-448.2013.
2.Rachner TD, Khosla S va Hofbauer LC: Osteoporoz: hozir va kelajak. Lancet 377: 1276-1287. 2011 yil.
3.Hernlund E, Svedbom A, Ivergard M, Compston J, Cooper CStenmark JMcCloskey EVJOnsson B va Kanis JA: Yevropa Ittifoqida osteoporoz: Tibbiy boshqaruv, epidemiologiya va iqtisodiy yuk. Xalqaro osteoporoz jamg'armasi (IOF) va Evropa farmatsevtika sanoati uyushmalari federatsiyasi (EFPIA) bilan hamkorlikda tayyorlangan hisobot .Arch Osteoporos 8: 136.2013.
4. Cauley JA: Osteoporozning jamoat salomatligiga ta'siri. J Gerontol ABiol Sci Med Sci 68: 1243-1251.2013.
5. Manolagas SC va Jilka RL: suyak iligi, sitokinlar va suyaklarni qayta qurish. Osteoporozning patofiziologiyasiga oid yangi tushunchalar. N Engl J Med 332: 305-311. 1995 yil.
6. Baron R va Hesse E: Osteoporozni davolashda suyak anaboliklari bo'yicha yangilanish: mantiqiy asoslar, hozirgi holat va istiqbollar. J ClinEndocrinol Metab 97: 311-325.2012.
7.TangDZ, Hou WZhou Q, ZhangM, HolzJ, SheuTJ, LiTF ChengSDShi O. Harris SE.et boshq: Osthole beta-katenin-BMP signalini faollashtirish orqali osteoblast farqlanishini va suyak shakllanishini rag'batlantiradi Bone Miner Res 25: 1234-1245 . 2010 yil.
8. Canalis E: Osteoporoz uchun yangi anabolik terapiyada yangilanish. J Clin Endocrinol Metab 95: 1496-1504.2010.
9. Lamien-Meda A, Lukas B, Schmiderer C, Franz C va Novak J: Origanum majorana va Arctostaphylos uva-ursiextracts da gaz xromatografiyasi yordamida arbutinning miqdoriy tahlilini tasdiqlash. Phytochem Anal 20: 416-420.2009 .
10.Lim YJ, Li EH, Kang TH, Ha SK, Oh MS, Kim SM, Yoon TJ.Kang C, Park JH va Kim SY: arbutinning alfa-melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormonlar keltirib chiqaradigan giperpigmentatsiyaning melanin biosinteziga inhibitiv ta'siri yetishtirilgan jigarrang gvineya cho'chqasi teri to'qimalarida. Arch Pharm Res 32: 367-373.2009.
11. Maeda K va Fukuda M: Arbutin: inson melanotsitlari madaniyatida uning depigmentatsiya ta'sirining mexanizmi. J Pharmacol ExpTher 276: 765-769.1996.
12. Vu LH Li P Chjao OL. Piao JL Jiao YF Kadowaki M va Kondo T: Arbutin. hujayra ichidagi gidroksil radikalini tozalash vositasi inson lenfomasi U937 hujayralarida radiatsiyadan kelib chiqqan apoptozni himoya qiladi. Apoptoz 19: 1654-1663.2014
13. Omori A Yoshimura Y. Deyama Y va Suzuki K: Rosmarinatsid va arbutin RAW 264.7 hujayralarida superoksid va NFATel pastga regulyatsiyasini inhibe qilish orqali osteoklast differentsiatsiyasini bostiradi Biomed Rep 3: 483-490.2015
14. Baron R va Kneissel M: Suyak gomeostazasi va kasalliklarida WNT signalizatsiyasi: inson mutatsiyalaridan davolanishgacha. Nat Med l9.179-197.2013
15. Baron R va Rawadi G: Kattalar skeletida suyak shakllanishini tartibga solish uchun Wnt/beta-katenin yo'lini maqsad qilib olish. Endokrinologiya 148: 2635-2643.2007.
16. Hoeppner LH Secreto FJ va Westendorf JJ: Wnt signalizatsiyasi suyak kasalliklari uchun terapevtik maqsad sifatida. Ekspert fikri TherTargets 13: 485-496.2009.
17. Uilyams BO va Insogna KL: Wnts qaerga ketdi: suyakdagi Lrp5 va Lrp6 signallarining portlash maydoni. J Bone Miner Res 24:171-178.2009
18. Livak KJ va Shmittgen TD: real vaqtda miqdoriy PCR va 2(-Delta DeltaC(T) usuli yordamida nisbiy gen ifodasi ma'lumotlarini tahlil qilish 25-usullar:402-408.2001.
19.Lin X. Xiong D. Peng YO. Sheng ZF. Wu XY Wu XP Wu FYuan LO va Liao EY: Osteoning epidemiologiyasi va boshqaruvi. Xitoy Xalq Respublikasida poroz: Hozirgi istiqbollar. Clin Interv Aging 10: 1017-1033.2015.
20. Manolagas SC: Suyak hujayralarining tug'ilishi va o'limi: Osteoporozning patogenezi va davolash uchun asosiy tartibga solish mexanizmlari va oqibatlari. Endocr Rev 21: 115-137.2000.
21.Liu S. Fang T. Yang L. Chen Z. Mu S va Fu O: Gastrodin MC3T3-El osteoblastlarini deksametazondan kelib chiqqan hujayra disfunktsiyasidan himoya qiladi va NRF2 signalizatsiya yo'lini induktsiya qilish orqali suyak shakllanishiga yordam beradi. Int J Mol Med 41: 2059-2069.2018.
22. Yun HM Park KR. Quang TH Oh H. Hong JT. Kim YC va Kim EC: 2.4.5-Trimethox yldalbergiquinol BMP va Wnt/B-katenin yo'llari orqali osteoblastik differentsiatsiya va minerallashuvga yordam beradi. Hujayra o'limi Dis 6: el819. 2015 yil.
23. Cosman F Nieves JW va Dempster DW: Davolash ketma-ketligi1718.22.muammolar: Osteoporoz uchun anabolik va antirezorptiv terapiya Bone Miner Res 32: 198-202.2017
24.Uihlein AV va Leder BZ: osteoporoz uchun anabolik terapiya. Endocrinol Metab Clin North Am 41: 507-525.2012
25. Nakamura T. Sugimoto T. Nakano T. Kishimoto H. Ito MFukunaga MHaginoH Sone T. Yoshikawa Nishizawa Y.eral Randomize teriparatid (inson paratiroid gormoni (PTH1-341) Samaradorlik tadqiqoti (TOWER)ni haftada bir marta sinovdan o'tkazish uchun Birlamchi osteoporoz va yuqori sinish xavfi bo'lgan sub'ektlarda yangi umurtqali sinishlar J Clin Endocrinoetab 97: 3097-3106.2012
26. Jurica K BrCic Karabonji l, Mikolic A, Milcjkowic-Opsenica DBenkovic V va Kopjar N: In Vitro qulupnay daraxti (Arbrrfus redo L) suv barglari ekstrakti va arbutin inson periferik qon limfotsitlarining xavfsizligini baholash. Sitotexnologiya 70: 1261-1278.2018
27. Schindler G. Patzak U Brinkhaus B. yutdi Niecieck A. Wittig JKrihmer N Glockl land Veit M: Siydik chiqarish va Metabo. sog'lom odamlarda kino bilan qoplangan planshetlar va suvli eritma sifatida Arctosfaphylos reversi ekstrakti og'iz orqali yuborilganidan keyin arbutin ro'yxati. J Clin Pharmacol 42: 920-927.2002.
28. Genowese C Davinelli S. Mangano K, Tempera G, Nicolosi D.Corsello S.Vergalito F Tartaglia E. Scapagnini G va Di Marko R: asoratlanmagan takroriy siydik yo'llarini boshqarish uchun o'simlik ekstraktlari va d-mannozning yangi kombinatsiyasining ta'siri infektsiyalar. J Kimyoviy 30: 107-114. 2018
29. Li HJ va Kim KW: Lipopolisakkarid bilan stimulyatsiya qilingan BV2 mikroglial hujayralarida arbutinning yallig'lanishga qarshi ta'siri. InfiammRes 61: 817-825.2012.
30. Jiang L. Vang D Zhang Y. Li J. Wu Z. Vang Z va Vang D. Arbutin va uning asetillangan hosilasining sichqonchaning melanoma hujayralariga pro-apoptotik ta'sirini o'rganish. Int J Mol Med 41:1048-1054.2018
31. Mari PJ va Kassem M: Osteoporozdagi osteoblastlar: Pastemerging va kelajakdagi anabolik maqsadlar. Eur J Endocrinol 165:1-10.2017
32. Canalis E: Endokrin kasalliklarni boshqarish: Osteoporoz uchun yangi anabolik davolash. Eur J Endocrinol 178: R33-R44. 2018
33. Weinreb M Shinar D va Rodan GA: In situ gibridizatsiyasi bilan vizualizatsiya qilingan kalamush suyagining rivojlanishida turli naqshli gidroksidi fosfataza, osteopontin va osteokalsin ifodasi. J BoneMiner Res 5: 831-842.1990.
34. Kim YJ. Li MH Vozni JM Cho JY va Ryoo HM: Suyak morfogenetik oqsil-2-induktsiyasi natijasida ishqoriy fosfataza ifodasi Dlxs tomonidan rag'batlantiriladi va Msx2 tomonidan bostiriladi. J BioChemm 279: 50773-50780.2004
35. An JYang H Zhang O. Liu C. Zhao J. Zhang L va Chen B. Osteoporozni davolash uchun tabiiy mahsulotlar: Osteoblast vositachiligida suyak shakllanishi hayotini rag'batlantirishga ta'siri va mexanizmlari Sci 147: 46-58.2016
36.Kobavashi T va K ronenbere H: Mini ko'rib chiqish: Suyak rivojlanishidagi transkripsiyani tartibga solish. Endocrinoloey 146: 1012-1017.2005.
37. Cathev va Reddy ABaltordal.oiczThrombospondin-2 kollagenga boy bo'lgan I tipdagi matritsaning osteoblastik turli stansiyadan o'tgan ilik stroma hujayralarida yig'ilishini osonlashtiradi. Connect Tissue Res 54: 275-782.2013
38. Neve A. Corrado A va Cantatore FP: Osteokalsin: Skelet va skeletdan tashqari ta'sirlar J Cell Physiol 228: 1149-1153.2013
39. Wang Y.Li YP Paulson C, Shao Jz, Zhang X Wu M va Chen ketdi va suyak rivojlanishi va kasalliklarida Wnt signalizatsiya yo'li. Front Biosci (Landmark Ed) 19: 379-407.2014
40.MacDonald BT. Tamai K va He X: Wnt / beta-katenin signalizatsiya komponentlari. mexanizmlar. va kasalliklar. Developer Cel1 17: 9-26. 2009 yil
41. Kramer l.Halleux C, Keller H, Pegurri M, Gooi JHWeber PB. Feng JO. Bonewald LF va Kneissel M: Oddiy suyak gomeostazi uchun OsteocytWnt/beta-katenin signalizatsiyasi talab qilinadi. Mo Cel1 Biol 30: 3071-3085.2010
42. Ducy P Schinke T va Karsenty G: Osteoblast: markaziy kuzatuv ostidagi murakkab fibroblast. Fan 289:1501-1504.2000
43. Franceschi RI va Xiao G: Osteoblastga xos transkripsiya omilini tartibga solish. RUNX2: bir nechta si-gnal uzatish yo'llariga javob berish. J Cell Biochem 88: 446-454.2003
44. Gaur T, Lengner Cl, Howhannisyan H, Bhat RA, Bodine PVKomm BS. Javed A. van Wijnen AJ. Steyn JL. Stein GS Lian JB: Kanonik WNT signalizatsiyasi to'g'ridan-to'g'ri Runx2 gen ifodasini rag'batlantiradigan osteogenezga yordam beradi. J Biol Chem 280:33132-33140.2005
45. Kawano Y va Kypta R: Wnt signalizatsiya yo'lining yashirin antagonistlari. J Cel1 Sci 116: 2627-2634.2003
46.Daoussis D va Andonopoulos AP: Suyak biologiyasida otDickkopf-lning paydo bo'layotgan roli: bu suyak va bo'g'imlarni qayta qurishni boshqarishning asosiy kalitimi? Semin artrit reum 41: 170-177.2011
47. Taurin S.Sandbo N. Qin Y. Browning D va Dulin NO: beta-kateninning siklik AMPga bog'liq protein kinaz bilan fosforlanishi. J Biol Chem 281: 9971-9976.2006
Batafsil ma'lumot uchun: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
