Beta-glyukan Nyukasl kasalligiga qarshi vaktsinaga immunitetni kuchaytirdi va tovuqlarda taloqning MRNK ifodasini o'zgartirdi.

ANTRACT

Ushbu tadqiqot xamirturush hujayra devoridan olingan mahsulot b-glyukan (G70) ni og'iz orqali yuborishning Nyukasl kasalligi virusiga (NDV) xos gemagglyutinatsiyani inhibe qilish (HI) titrlariga, limfotsitlar proliferatsiyasiga ta'sirini o'rganish uchun o'tkazildi. jonli NDV vaktsinasi bilan davolangan tovuqlarda T-limfotsitlar subpopulyatsiyasining roli. Bundan tashqari, b-glyukanning taloq genining ifodasiga ta'siri transkriptome sekvensiyasi orqali tekshirildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, b-glyukan qo'shilishi qon zardobidagi NDV HI titrini oshirdi va periferik qon va ichak traktidagi limfotsitlarning NDV stimulyatsiya indeksini oshirdi va T limfotsitlarining CD 4+ T hujayralariga differentsiatsiyasini kuchaytirdi. RNK ketma-ketligi (RNK-seq) tahlili shuni ko'rsatdiki, G70 G-oqsil bilan bog'langan retseptorlari va MHC I sinf polipeptidlari bilan bog'liq mRNK ifodalarini ko'targan va katelitsidin va betadefensin bilan bog'liq mRNK ifodalarini pasaytirgan. G70 ning immunomodulyatsion ta'siri mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz signalizatsiya yo'li orqali ishlashi mumkin. Xulosa qilib aytganda, G70 tovuqlarda jonli NDV vaktsinasining immunologik samaradorligini oshirishi va parrandachilik sanoatida potentsial yordamchi nomzod sifatida qo'llanilishi mumkin.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Kalit so'zlar: Nyukasl kasalligiga qarshi vaktsina, beta-glyukan, yordamchi, qora suyakli tovuq, RNK-seq

KIRISH

Xamirturush hujayra devori polisaxaridlari to'g'ridan-to'g'ri Saccharomyces cerevisiae hujayra devoridan riginatlanadi va ishlab chiqarish va salomatlikni yaxshilash uchun parrandalarda o'sish promouterlari, mikroblarga qarshi vositalar yoki immunomodulyatorlar sifatida keng qo'llaniladi (Schiavone va boshq., 2017; Hasted va boshq., 2201). Ilgari, xamirturush hujayra devori polisaxaridlarini o'z ichiga olgan PW220 deb nomlangan mahsulot Nyukasl kasalligi virusi (NDV) qo'zg'atadigan immunitet reaktsiyasini kuchaytirishi va og'iz orqali yuborish orqali tovuqlar ko'richakning mikrobial jamoasini o'zgartirishi uchun namoyish etilgan (Bi va boshqalar, 2020). ). Xamirturush hujayra devori polisaxaridlari asosan b-glyukan va mannan-oligosakkaridlardan iborat (Vang va boshq., 2018). Ushbu tadqiqotda b-glyukan tovuqlarda NDV vaktsinasiga immun javobiga ta'siri uchun tekshirildi. Taloq immunitet reaktsiyasini boshlash uchun asosiy organdir. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, xamirturush hujayra devori mahsuloti bo'lgan PW220 tovuqlar taloqida TGF-b, IL-6, TLR5, GATA-3 va T-betning mRNK ifodasini kuchaytirgan ( Bi va boshq., 2022). Biroq, aniq mexanizmni tushuntirish kerak. RNK ketma-ketligi (RNK-seq) kantitativ gen ekspressiyasini tahlil qilish uchun qo'llanilishi mumkin bo'lgan va butun transkriptom darajasida turli ekspressiya profillarini tahlil qilishni ta'minlaydigan yuqori o'tkazuvchanlik texnologiyalaridan biridir (Zhao va boshq., 2018). Yuqori sezuvchanlik va arzon narxlardagi afzalliklari bilan RNK-seq chorvachilik va parrandachilik tadqiqotlarida keng qo'llanilgan (Teixeira va boshq., 2019; Yuan va boshq., 2020). Shunday qilib, ushbu tadqiqotda NDV vaktsinasi bilan og'iz orqali emlangan tovuqlarda b-glyukanni boshqarishning NDVga xos gemagglyutinatsiyani inhibe qilish (HI) titrlariga, limfotsitlarning proliferatsiyasiga va T-limfotsitlar subpopulyatsiyalariga ta'siri baholandi. Bundan tashqari, transkriptom tahlili b-glyukanning tovuqlarning taloqidagi gen ekspressiyasiga va asosiy signal uzatish yo'llariga ta'sirini baholash uchun ishlatilgan.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Hayvonlar

Bir kunlik tijorat qora suyakli tovuqlar (erkak) Guizhou Yushun Poultry Co., Ltd. (Anshun, Xitoy) dan sotib olindi. Tovuqlar ozuqa va suvga erkin kirish imkonini beradigan simli kataklarga bo'lingan. Birinchi 7 kun ichida xona harorati 33 ° C dan 35 ° C gacha ushlab turildi, keyin asta-sekin har 2 kun uchun 1 ° C ga 27 ° C gacha kamaydi. Qoʻmitadan foydalaning (Etika sertifikati raqami: IAC-2021-0057). Tadqiqot oxirida barcha eksperimental qushlar CO2 bilan evtanizatsiya qilindi.

Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi

Vaktsina

NDV (Strain La Sota) ning jonli vaktsinasi Qingdao YEBIO Bioengineering Co., Ltd. (Qingdao, Xitoy) tomonidan taqdim etilgan.

Reaktivlar 

Xamirturush hujayra devori mahsuloti (YP) G70 xamirturush hujayrasi (Saccharomyces cerevisiae) devoridan olingan bo'lib, unda b-glyukan (70% dan ortiq yoki unga teng) (AngelG70, QB/T4572, Angel Yeast, Yichang, Xitoy) mavjud. NDV-ga xos HI titrlarini o'lchash uchun antigen va musbat nazorat sarumlari Qingdao Regen Diagnostics Development Center (Qingdao, Xitoy) dan sotib olingan. Tovuqqa qarshi CD3-APC (C2818-T9580), CD4-FITC (D0117-WA78E) va CD8- PE (L{{14) }}TH49T) kalamushlarda Nanjing Zeweil Biological Technology Co., Ltd. (Nankin, Xitoy) tomonidan taklif qilingan.

Eksperimental dizayn

5 kunlik qirq sakkizta qora suyakli tovuqlar tasodifiy tarzda 3 guruhga ajratildi (1-jadval) va ularga bazal parhez (2-jadval) yoki 0.1% G7{{10} bilan bazal parhez berildi. } (b-glyukan, 0,7 g / kg) ushbu tadqiqot davomiyligi uchun qo'shimcha. H guruhi (G70 + vaktsina) va C (Vaktsina) mos ravishda 14 va 28 kunlarda NDV vaktsinasi bilan og'iz orqali emlangan. S guruhi (Sailne) teng miqdorda sho'r suv bilan ishlov berildi. Qon namunalari HI titrini tekshirish uchun 5, 7, 14, 21, 28, 35 va 42 yoshda qanot venipunkturi orqali olingan. Kuchaytiruvchi emlashdan etti kun o'tgach, har bir ustundagi 8 ta tovuq tasodifiy tanlab olingan va CO2 yordamida asfiksiya bilan qurbon qilingan. Limfotsitlar limfotsitlar proliferatsiyasi va oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun periferik qon va jejunumdan ajratilgan. Jejunal namuna olishda o'n ikki barmoqli ichakning suspensor ligamenti jejunumning boshlang'ich nuqtasi edi va jejunumning boshlang'ich nuqtasidan 5 sm uzunlikdagi qism yig'ildi. Taloq suyuq azotda tez muzlatilgan va keyin RT-qPCR va ketma-ketlik profilini aniqlash uchun -80 darajada saqlangan.

Jadval 1. Eksperimental loyihalash

2-jadval. 1 Eksperimental broyler bazal dietalarining tarkibi va ozuqaviy tarkibi.

HI o'qish

Sarumdagi NDVga xos HI titrlarini tahlil qilish avvalgi tavsifga muvofiq amalga oshirildi (Ball va boshq., 2019). Qisqacha aytganda, sarum V-pastki 96-quduq mikrotitr plastinkasida 1:2 dan 1:1,024 gacha fosfat-buferli tuz (PBS) bilan suyultirildi. Keyin har bir quduqqa 25 ml NDV suyultirish qo'shildi va 30 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilindi. Shundan so'ng, har bir quduqqa 25 ml 1% xo'roz eritrotsit suspenziyasi qo'shildi va 30 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilindi. Barcha namunalar ikki marta sinovdan o'tkazildi va har bir plastinkada ijobiy va salbiy nazorat mavjud. HI titrlari gemagglyutinatsiyani to'liq inhibe qilishga olib keladigan eng katta suyultirishga asoslangan. Har bir guruh uchun o'rtacha HI titri va standart xato (SE) o'lchandi.

Periferik qondan limfotsitlarni ajratish

Limfotsitlar ajratilgan va periferik qon limfotsitlaridan limfotsitlarni ajratish vositasi to'plamidan foydalangan holda to'plangan (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd., Tianjin, Xitoy). Keyin limfotsitlar RPMI 1640 muhiti (Solarbio, Pekin, Xitoy), shu jumladan 5% homila buzoq zardobi va 25 mM HEPES (pH 7.0) bilan suspenziyada saqlangan.

Jejunumdan limfotsitlarni izolyatsiya qilish

Topshiriq jarayoni oldingi tavsifga muvofiq va ozgina o'zgartirishlar bilan amalga oshirildi (Yuan va boshq., 2020). Qisqacha aytganda, ichakni 4 ml sovuq PBSga bo'lish uchun 70 mm hujayra filtridan foydalaning. Shundan so'ng, namuna hujayralarining suspenziyasi supernatantni olib tashlash bilan 12 daqiqa davomida 4500 rpm tezlikda santrifüj qilindi. Keyin ichak hujayralarini RPMI 1640 (Sijiqing Co., Xanchjou, Xitoy) da 5% homila sigir zardobidan (FBS) tashkil topgan to'liq muhitga (Solarbio Co., Pekin, Xitoy) qayta suspenziya qiling. Oxir-oqibat, limfotsitlarni ajratish uchun tovuq limfotsitlarini izolyatsiya qilish to'plami (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd.). ichak to'qimasi 70 mm hujayra filtri yordamida 4 ml sovuq PBS ga bo'lingan. Keyinchalik, namuna hujayralarining suspenziyasi 12 daqiqa davomida 4500 rpm da santrifüj qilindi va supernatant tashlandi. Shundan so'ng, ichak hujayralari 5% FBS (Sijiqing Co.) ni o'z ichiga olgan RPMI 1640 (Solarbio Co.) ga qayta suspenziya qilindi. Nihoyat, limfotsitlar tovuq limfotsitlarini izolyatsiyalash to'plami (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd.) yordamida ajratildi.

Limfotsitlarning ko'payishi 

Hujayralar 96-quduq plastinkalariga ekilgan (har bir quduq uchun 5 funt sterling), 4 gemagglyutinatsiya birligi yoki teng hajmdagi sho'r suv uchun inaktivatsiyalangan NDV antijeni bilan stimulyatsiya qilingan. Har bir namuna 3 ta takroriy sinovdan o'tkazildi. Hujayralar va antijen 44 soat davomida 37 daraja 5% CO2 da inkubatsiya qilindi va keyin har bir quduqqa 50 ml metil tiazolil tetrazolium (MTT) (2 mg / ml) qo'shildi va yana 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. Namunalar ichki haroratda 8 daqiqa davomida 1200 £ g da santrifüj qilindi. Shundan so'ng, supernatant ehtiyotkorlik bilan olib tashlandi va har bir quduqqa 100 ml DMSO qo'shildi. Kristallarni to'liq eritish uchun plitalar 8 daqiqa davomida chayqatildi. Nihoyat, o'rtacha optik zichlik (OD) 570 nm da qayd etildi. Rag'batlantirish indeksi (SI) tenglama yordamida olingan: stimulyatsiya qilingan quduqlarning OD qiymatlari / stimullanmagan quduqlarning OD qiymatlari (Cui va boshq., 2020).

Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi

T-limfotsitlar subpopulyatsiyalarining oqim sitometriyasini tahlil qilish

Limfoid hujayra suspenziyalari ajratilgan va PBS bilan ikki marta yuvilgan. Hujayra konsentratsiyasi 106 / ml ga o'zgartirildi va keyin muzda saqlangan. Har bir namuna 30 daqiqa davomida yorug'likdan himoyalangan sharoitda 2 ml kalamush tovuqga qarshi CD3-APC, CD4- FITC va kalamush tovuqga qarshi CD8-PE bilan bo'yalgan. PBS bilan 2 marta yuvish. Hujayralar Flow sitometrida (BD Bioscience, San-Xose, CA) oqim sitometriyasi tahlili orqali tekshirildi.

RT-qPCR tahlili

Umumiy RNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq TRIzol reaktivi (Takara, Shiga, Yaponiya) yordamida taloqdan olingan va keyin T100 termal sikl qurilmasida (Bio-Rad, Takara, Dalian, Xitoy) PrimeScript RT Master Mix (Takara, Dalian, Xitoy) yordamida cDNKga aylantirilgan. Herkules, Kaliforniya). Tovuq beta-aktini ichki nazorat geni sifatida ishlatilgan. Tanlangan genlarning RT-qPCR SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Takara) bilan bir nechta real vaqtda PCR tizimida (AB, Carlsbad, CA) amalga oshirildi. Nisbiy miqdoriy usul (244CT) miqdoriy o'zgarishlarni baholash uchun amalga oshirildi (Bi va boshq., 2022). Primer ketma-ketliklari 3-jadvalda keltirilgan.

RNK ekstraktsiyasi

H guruhi (G70 +Vaktsina) va C guruhi (Vaktsina) dan 3 ta taloq namunalarining har biri TRIzol reaktivi (Takara) bilan RNK-seq uchun ishlatilgan. Shundan so'ng, RNK 1% agaroz jeli bilan ifloslanish va parchalanish uchun sinovdan o'tkazildi va RNK tozaligi NanoFotometr spektrofotometri (IMPLEN, Westlake Village, CA) yordamida tahlil qilindi. RNK kontsentratsiyasi Qubit 2 da Qubit RNK tahlil to'plami yordamida aniqlandi.0 Fluorometr (Life Technologies, Carlsbad, CA). RNK yaxlitligi Bioanalyzer 2100 tizimining RNK Nano 6000 tahlil to'plami (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) yordamida o'lchandi. Natijalar RNK to'liq va DNK bilan ifloslanmaganligini ko'rsatdi.

Transkriptoma tahlili

Transkriptomlar ketma-ketligi, ketma-ketlikni yig'ish va ma'lumotlarni tahlil qilish Novogene Bioinformatics Technology Co. Ltd. (Pekin, Xitoy) tomonidan taqdim etilgan. Transkriptom uchun asosiy protseduralar quyidagicha sanab o'tilgan: 1) mRNKni umumiy RNKdan tozalash poli-T oligo biriktirilgan magnit boncuklar yordamida amalga oshirildi. Parchalanish ikki valentli kationlar bilan NEB Next First Strand Synthesis Reaction Buferida (5X) yuqori haroratda amalga oshirildi. 2) Birinchi zanjirli cDNK tasodifiy heksamer primeri va Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV) teskari yordamida sintez qilindi. Keyin ikkinchi zanjirli cDNK sintezi DNK polimeraza I va RNaz H yordamida sintez qilindi. 3) Qolgan o'simtalar ekzonukleaza/polimeraza faolligi orqali to'mtoq uchlarga aylantirildi. DNK bo'laklarining 3' uchi adenilatsiya qilinganidan so'ng gibridlanishga tayyorgarlik ko'rish uchun NEB Next Adapter soch turmagi tuzilmasi bog'landi. 4) Taxminan 250 dan 300 bp gacha cDNK fragmentlari olindi va kutubxona Beckman Coulterning AMPure XP tizimi (Beckman Coulter, Beverly, MA) yordamida tozalandi. Keyin 3 ml NEBU SER fermenti (Termo Fisher, Hillsboro, OR) o'lchami bo'yicha tanlangan, adaptor bilan bog'langan cDNK bilan 37 daraja C da 15 daqiqa, so'ngra 95 daraja 5 daqiqa davomida qo'llanildi. PCR kuchaytirilishi Phusion High-Fidelity DNK polimerazasi yordamida amalga oshirildi. Oxir-oqibat, PCR mahsulotlari tozalandi (AMPure XP tizimi) va kutubxona sifati Agilent Bioanalyzer 2100 tizimi yordamida baholandi. Indeks bilan kodlangan namunalarni klasterlash TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS (Illumina, San-Diego, CA) da amalga oshirildi. Keyin, ketma-ketlik Illumina Novaseq platformasida amalga oshirildi va 150 bp juftlashtirilgan o'qishlar yaratildi. Yoʻnaltiruvchi genom va gen modelining izohli fayllari genom veb-saytidan (ftp://ftp.ensembl.org/pub/release- 98/fasta/gallus_gallus/ va ftp://ftp) yuklab olindi. ensembl.org/ pub/re-lease-98/gtf/gallus_gallus/). HISAT2 (v2.0.5) yordamida mos yozuvlar genomining indeksi o'rnatildi va juftlashtirilgan toza o'qishlar mos yozuvlar genomiga moslashtirildi. Har bir genga moslashtirilgan oʻqishlar soni va har bir gen uchun bir million kilobaza boʻlaklari (FPKM) gen uzunligi va genga moslashtirilgan oʻqishlar soni asosida Feature Counts v1.5 yordamida hisoblab chiqilgan.{{38} }p3. H guruhi (G70 + Vaktsina) va C guruhi (Vaktsina) o'rtasidagi farqli ifoda DESeq2 R paketi (1.16.1) yordamida olingan. P < 0,05 va |log2 (katlama o'zgarishi)| bo'lgan genlar > 1 differensial ekspression genlar (DEG) sifatida belgilangan.

Jadval 3. RT-qPCR uchun primerlar ketma-ketligi.

Haqiqiy vaqtda miqdoriy PCR tekshiruvi 

RT-qPCR orqali transkriptom sekvensiyasi natijalarini tasdiqlash uchun H (G70 + Vaktsina) va C guruhi (Vaktsina) o'rtasidagi taqqoslashda ikkita yuqori tartibga solinadigan DEG va 4 pastga regulyatsiya qilingan DEG tanlangan. RNK T100 termal siklida (Bio-Rad) PrimeScript RT Master Mix (Takara) yordamida cDNK ga aylantirildi. Primer ketma-ketliklar 3-jadvalda keltirilgan. Ichki nazorat geni sifatida tovuq b-aktin ishlatilgan. Tanlangan genlarning RT-qPCR SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Takara) bilan bir nechta real vaqtda PCR tizimida (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) amalga oshirildi. Miqdordagi o'zgarishlarni baholash uchun nisbiy miqdoriy usul (244CT) qo'llanildi. Barcha namunalar tahlil qilish uchun uch nusxada bajarildi.

Statistik tahlil

Duncan post hoc testi bilan bir tomonlama ANOVA SPSS dasturidan foydalangan holda guruhlar o'rtasida bir nechta taqqoslash uchun ishlatilgan (versiya 21.0, SPSS Inc., Chicago, IL). Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi. P < 0.05 qiymati statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi.

NATIJALAR b-glyukanning qon zardobidagi antikor titrlariga ta'siri

1-rasmda ko'rsatilganidek, NDVga xos HI titrlari emlashdan oldin barcha guruhlarda kamaydi va immunizatsiyadan keyin H (G70+Vaktsina) va C (Vaktsina) guruhlarida ortdi. Qizig'i shundaki, H (G70+Vaktsina) guruhida 21 (P > 0.05), 28 (P < 0.{{) guruhida yuqori HI titrlari kuzatildi. 14}} 5), 35 (P > 0,05) va 42 (P > 0,05) d yoshi C guruhiga qaraganda (Vaktsina).

B-glyukanning limfotsitlar proliferatsiyasiga ta'siri

G70 ning periferik qon limfotsitlarining proliferatsiyasiga ta'siri 2A-rasmda tasvirlangan. Qon limfotsitlaridagi SI vaktsina guruhi bilan solishtirganda, kuchaytiruvchi immunizatsiya 7 kun (P < 0,05) da G70 (G70 + vaktsinasi) bilan to'ldirilgan qushlarda yaxshilangan. Bundan tashqari, vaktsina guruhi bilan solishtirganda, jejunal limfotsitlardagi SI 7 d (P <0,05) immunizatsiyadan keyingi davrda sezilarli darajada oshdi (2B-rasm).

b-glyukanning periferik qondagi CD4 + / CD8 + T hujayralari nisbatiga ta'siri 

3A va 3B rasmlari limfotsitlar va CD3 + hujayralarining yopilishini ko'rsatadi va 3C dan 3Egacha bo'lgan rasmlarda G70dagi CD4 + /CD8 + T hujayralarining nisbati ko'rsatilgan, vaktsina va sho'rlangan guruhlar. 3F-rasmda ko'rsatilganidek, kuchaytiruvchi immunizatsiyadan so'ng (P > 0.05) vaktsinalar guruhi va tuzli guruh o'rtasida sezilarli farq yo'q edi, CD4 + /CD{{12} } T xujayrasi G70 (G70 + Vaktsina) guruhida Vaktsina guruhidagiga qaraganda yuqoriroq edi (P <0,05).

Shakl 1. NDV vaktsinasiga b-glyukanni og'iz orqali yuborishning sarum antikor titrlariga ta'siri. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

Tegishli gen ifodasi

4-rasmda ko'rsatilganidek, TGF-b (P < 0.05), IL-6 (P < 0.{{13}) ning mRNK ifodasi sezilarli darajada oshdi. }5) va TLR5 (P < 0.05) Vaktsina guruhi bilan solishtirganda G70 (G70 + vaktsinasi bilan davolash qilingan tovuqlarning taloqida aniqlandi. G70 (G70 + vaktsinasi) va vaktsina oʻrtasida taloqda IFN-g (P > 0.05), TLR4 (P > 0.05) va TLR3 (P > 0.05) mRNK ifodasida sezilarli farq topilmadi. guruhlar.

RNK ketma-ketligi ma'lumotlarini tahlil qilish 

8 ta taloq kutubxonasidan RNK ketma-ketligi qo'shimcha materialning S1-jadvalida keltirilgan 24,1 G xom ma'lumotni berdi. CN guruh vaktsinasi, HN esa G70 + guruhi vaktsinasini bildiradi. Kutubxona C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3 va H4 mos ravishda 45,591,492, 47,424,782, 46,193,492, 54,403,376, 47,118,476, 45,480, 45,480 va 45,480 dan iborat. 4 438 asl o'qilgan. Aptamerdan so'ng noaniq ketma-ketliklar va past sifatli ketma-ketliklar olib tashlandi, 44,050,198, 45,449,884, 44,261,112, 52,097,846, 45,542,404, 44,566,241, 44,564,291, o'qilgan, toza qoldirildi. s. Toza o'qishlarning 96% dan ortig'i asl o'qishlar qatoriga kirdi va 8 ta kutubxona Gallus genomidan iborat mos yozuvlar ma'lumotlar bazasiga qarshi o'qishlarni ketma-ketlashtirish uchun HISAT2 yordamida moslashtirildi. Bundan tashqari, 95% dan ortiq hollarda toza o'qishlar ushbu ma'lumotlar bazasiga kiritilgan. C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3 va H4 kutubxonalariga xos boʻlganlar soni: 40,921,384 (92,9%), 41,302,100 (90,87%), 40,771,075 (92,11%), 470,42,5,46,40 (47,40) 3.2 %), mos ravishda 40 213 444 (90,23%), 40 922 895 (92,77%) va 40 971 972 (93,06%) o'qishlar mos ravishda ma'lumot bazasiga ajratilgan.

Differensial ifodalangan genlar

5A-rasmda ko'rsatilganidek, jami 198 ta differentsial tarzda ifodalangan genlar, shu jumladan 47 ta yuqori tartibga solinadigan gen va 151 ta pastga regulyatsiya qilingan genlar aniqlandi. DEGlar S2-jadvalning qo'shimcha materialida batafsil tavsiflangan. Shakl 5B shuni ko'rsatadiki, DEGlar davolashning yaxshi takrorlanishiga ega.

Gen ontologiyasi tasnifi va genlar va genomlarni boyitishning Kioto entsiklopediyasining tahlili

Differensial ravishda ifodalangan genlar Gen Ontologiyasi (GO) tasniflash tizimiga asoslanib 3 ta asosiy funktsional toifaga bo'lingan: biologik jarayon, hujayra komponenti va molekulyar funktsiya. 3 toifadagi eng yaxshi 10 ta GO atamasi 6-rasmda keltirilgan. “Gumoral immunga javob”, “kimyokin javob”, “mikroblarga qarshi gumoral javob”, “bakteriyaga qarshi mudofaa javobi, " "Mikroblarga qarshi peptidlar vositachiligida antimikrobiyal hazilga immun javob", "Gram-manfiy bakteriyaga qarshi mudofaa javobi" va "Gram-musbat bakteriyaga qarshi mudofaa javobi" biologik jarayonlar toifasida. Bundan tashqari, molekulyar funktsiya toifasida genlarning ajoyib nisbati "CC motif chemokin retseptorlari (CCR) kemokin retseptorlari bilan bog'lanish", "kemokin retseptorlari bilan bog'lanish" va "lipopolisakkaridlar bilan bog'lanish" bilan bog'liq edi. Bundan tashqari, "mitoxondrial nafas olish zanjiri kompleksi I", "NADH dehidrogenaza kompleksi" va "nafas olish zanjiri" hujayra komponentlari toifasida eng ko'p boyitilgan atamalar edi. Kyoto genlar va genomlar entsiklopediyasi yo'lini tahlil qilish, shuningdek, differentsial ifodalangan genlar bo'yicha ham amalga oshirildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, genlar asosan "Neyroaktiv ligand-retseptorlar o'zaro ta'siri", "Gap birikmasi", "mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) signalizatsiya yo'li", "ABC tashuvchilari", "Aminokislotalarning biosintezi" kabi 7 yo'lga guruhlangan. "Dori almashinuvi" va "Oqsil eksporti".

Shakl 2. B-glyukanni og'iz orqali yuborishning limfotsitlarni ogohlantiruvchi indeksga (SI) ta'siri. A) Periferik qon limfotsitlari; B) ichak limfotsitlari. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

Shakl 3. Periferik qonning CD4+/ CD8+ hujayra nisbatiga b-glyukanni og'iz orqali yuborishning ta'siri. A) Limfotsitlar darvozasi; (B) CD3+ T hujayralaridagi eshik; (C) G70+Vaktsina guruhidagi CD3+ CD4 + CD8 + T hujayralarining chastotalari; (D) Vaktsina guruhidagi CD3+ CD4 + CD8 + T hujayralari chastotalari; (E) tuzli guruhdagi CD3+ CD4 + CD8 + T hujayralarining chastotalari; (F) CD4+/CD8+ nisbatini ifodalovchi bardiagramma. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

Shakl 4. Tovuq taloqidagi mRNK ifodasiga b-glyukanni og'iz orqali yuborish ta'siri. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

Shakl 5. RNK-Seq ma'lumotlarining qisqacha mazmuni. (A) Differensial ravishda ifodalangan genlar ro'yxati, (B) DEGlarning klasterlash xaritasi.

RT-qPCR tomonidan turlicha ifodalangan genlarni tekshirish

Yuqoriga yoki pastga tartibga solingan 6 DEG real vaqtda miqdoriy PCR bilan tasdiqlangan. Natija shuni ko'rsatdiki, RT-qPCR ma'lumotlari umuman RNK-seq ma'lumotlariga mos keladi, bu ishonchli ketma-ketlik natijasini ko'rsatadi (7-rasm). MAPK yo'li bilan bog'langan genlarning mRNK ifodasi 8-rasmda ko'rsatilganidek, FAS (P < 0.05) va CACNA2 (P < 0.05) mRNK ifodasi sezilarli darajada kamaydi. G70 guruhidagi tovuqlarning taloqida (G70 + Vaktsina) vaktsinalar guruhi bilan solishtirganda aniqlangan. Bundan tashqari, G70 guruhida (G70 + Vaktsina) emlash guruhi (P > 0,05) bilan solishtirganda, DUSP5 va DUSP4 ning mRNK ifodasining soni ortib borayotgani va p38, JNK va ERK ning mRNK ifodasining soni kamayganligi aniqlandi. .

MUHOKAZA

Jonli ND vaktsinasi tovuq fermalarida keng tarqalgan, ammo emlangan parrandalar podalarida Nyukasl kasalligining vaqti-vaqti bilan tarqalishi hali ham mavjud (Chjan va boshq., 2022). Optimal vaktsinalar hujayra va shilliq qavat immunitetini hamda samarali gumoral immunitetni rag'batlantirish uchun belgilangan (Shan va boshq., 2019). Shu sababli, shilliq qavat va hujayra immunitetini ta'minlaydigan yordamchi moddalarga tobora ko'proq e'tibor qaratilmoqda (Chen va boshq., 2014; Yu va boshq., 2015). In'ektsiya yo'li bilan solishtirganda, og'iz orqali yuborish broyler tovuqlari uchun xarajatlarni kamaytiradigan va kamroq stressni keltirib chiqaradigan osonroq yondashuvdir (Boyaka va boshq., 2003; Zhang va boshq., 2008). Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatdiki, b-glyukan bilan to'ldirilgan parhez tovuqlar zardobida NDV-ga xos HI titrlari darajasini sezilarli darajada oshirdi, bu avvalgi hisobotlarga mos keladi (Horst va boshq., 2019). NDVga xos antikor tovuqlarni NDV infektsiyasidan himoya qilish uchun gumoral immun javobni rivojlantirish uchun zarurdir (Martinez va boshq., 2018; Li va boshq., 2020). B limfotsitlari antikorlarni ishlab chiqaradi va T limfotsitlari mitogenga javoban kengayadi (Bohacova va boshq., 2021). Ushbu tadqiqotda G70 guruhidagi tovuq periferik qon limfotsitlarining NDV ga stimulyatsiya ko'rsatkichi vaktsina guruhiga qaraganda yuqoriroq edi, bu ko'proq T limfotsitlari faollashtirilganligini ko'rsatadi. T limfotsitlarining asosiy subpopulyatsiyasi CD4 + va CD8 + T hujayralaridir (Cui va boshq., 2020). CD4 + T hujayralari asosan sitokinlarni ishlab chiqaradi va B hujayralarining kamolotiga yordam beradi, CD8 + T hujayralari esa maqsadli hujayralarni o'ldirish bilan bog'liq (Chjan va boshq., 2021b). Ushbu tadqiqotda G70 guruhida aniqlangan CD4 +/CD8 + T hujayralari nisbati aniq ortib bordi, bu G70 periferik qondan ko'proq CD4 + T hujayralarini faollashtirishi mumkinligini ko'rsatdi. Bundan tashqari, biz G70 guruhida vaktsina guruhiga qaraganda sezilarli darajada yuqori ichak limfotsitlarini stimulyatsiya qilish indeksini kuzatdik, bu b-glyukan ichak limfotsitlarini ham rag'batlantirishi mumkinligini tasdiqladi. Bizning oldingi tajribalarimiz xamirturush hujayra devori ekstrakti PW220 ichakka xos sIgA va IgA + hujayralarini sezilarli darajada oshirishini tasdiqladi (Bi va boshq., 2020). Ya'ni, b-glyukan G70 va PW220 ham ichak shilliq qavatining immunitetini oshirishda samarali.

Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi

Ilgari b-glyukanni qo'llash orqali hayvonlarning immunitetini yaxshilash haqida xabar berilgan. Guo va boshqalar. (2003) b-glyukanni qabul qilish tovuqlarda bursa va NDV-ga xos antikorlar indeksini yaxshilaganligini tasdiqladi. Levine va boshqalar. (2018) b-glyukan qo'shimchasi ichakdagi MHC Ⅱ ni ko'paytirishi va ichak shikastlanishini engillashtirish uchun CD{7}} hujayralari sonini ko'paytirishi mumkinligini taklif qildi.

Li va boshqalar. (2005) dietali b-glyukan cho'chqalarning ichak traktida IL-8 va TGF-b mRNK ifoda darajasini oshirishi mumkinligini aniqladi. b-glyukanning immunomodulyatsion ta'sirining mexanizmi aniq emas. Kim va boshqalar. (2010) b-glyukan CD40, CD80 va CD86 ifodasini yuqori tartibga solish orqali dendritik hujayralarning kamolotiga yordam berishini ko'rsatdi. Bundan tashqari, Lee and Kim (2014) va Su et al. (2020) b-glyukan Dectin{14}} retseptorlari, Toll-like retseptorlari va CR3 kabi naqshni aniqlash retseptorlarini faollashtirganini xabar qildi (Baert va boshq., 2015). Taloq immunitet reaktsiyasini boshlash uchun muhim organ bo'lib, tug'ma va orttirilgan immunitetda muhim rol o'ynaydi (Bronte va Pittet, 2013). Biroq, xamirturush polisaxaridlarini taloqdan keyin og'iz orqali yuborishda mRNK ifodasining RNK-seq tahliliga asoslangan ozgina tadqiqot mavjud. Ushbu tadqiqotda Kioto entsiklopediyasi genlar va genomlar yo'li tahlili ushbu genlar asosan 2 yo'lga guruhlanganligini ko'rsatdi, jumladan "Neyroaktiv ligand-retseptorlar o'zaro ta'siri" va "MAPK signalizatsiya yo'li". B-glyukanga qaratilgan naqshni aniqlash retseptorlari immun hujayralari yuzasida boyitilgan (Goodridge va boshq., 2009). B-glyukan tan olingandan so'ng, tirozin kinaz va yadro omili kappaB (NF-kappaB) ushbu retseptorlar tomonidan rag'batlantirildi, natijada yallig'lanishga qarshi sitokin sekretsiyasi indüksiyonu va immun javoblarning faollashuvi (Kankkunen va boshq., 2010; Masuda va boshqalar) ., 2012; Xu va boshqalar, 2016; Bode va boshqalar, 2019). MAPK, serin-treonin oqsil kinazalari oilasi sifatida, tovuqlarda yallig'lanish va sitokin ishlab chiqarishda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Byun va boshqalar. (2016) b-glyukan interferon-g va interleykin-2 ishlab chiqarishni oshirganini va peritoneal makrofagda MAPK p38 fosforillanishining sezilarli darajada ko'proq darajasini ishga tushirishini ko'rsatdi. Vang va boshqalar. (2014) b-glyukan p38 MAPK faollashuvini inhibe qilish orqali THP{40}} hujayralarida yallig'lanish reaktsiyalarini susaytirishini xabar qildi. Ushbu tadqiqotda DUSP4, CACNA2D1, PDGFD, PTPRR, ENSGALG00000006351, FAS, MAP2K3, MYC, DUSP5, MAX, SRF, PRKCB va EGFR kabi 13 DEG aniqlandi, bu MAPK immun signalizatsiya yo'lini qayta tiklashi mumkinligini ko'rsatadi. tovuqlarda MAPK orqali taloq. MAPK hujayralardagi Ser/Thr kinazlarining saqlanib qolgan sinfidir, ular asosan immun javob, apoptoz va proliferatsiya kabi hujayrali javoblarda ishtirok etadi. MAPK oilasi kamida 3 ta kichik oilani o'z ichiga oladi: c-Jun N-terminal kinaz (JNK), p38 MAPK va hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinaz (ERK) (Hong va boshq., 2020; Zhang va boshq., 2021a). DUSP4 va DUSP5 ikki o'ziga xos fosfatazalar bo'lib, ular p38, JNK va ERK kabi MAPK oilasi a'zolarining faolligini inhibe qiladi, yallig'lanishning haddan tashqari reaktsiyasini oldini olishda va organizmdagi yallig'lanishning regressiyasini rag'batlantirishda muhim tartibga soluvchi rol o'ynaydi (Imasato va boshq. ., 2002; Talreja va boshqalar, 2021). Bundan tashqari, gga-miR-200a-3p nomli kichik kodlanmagan RNK yallig'lanishga qarshi omillarning ifodasini bostirishi va shu tariqa MAPK yo'lini salbiy tartibga solish orqali xostning otoimmün javobini tartibga solishi haqida xabar berilgan. va uning quyi oqimidagi signalizatsiya molekulalari (Pham va boshq., 2017). Ushbu tadqiqotda RT-qPCR tahlili shuni ko'rsatdiki, b-glyukan (G70) bilan oziqlangan tovuqlarda P38, JNK va ERK ning mRNK ifodasi kamaygan va DUSP4 va DUSP5 ning mRNK ifodasi ortgan. Ushbu natijalar, b-glyukanning (G70) Nyukasl kasalligi vaktsinasiga immunitetni kuchaytiruvchi ta'siri MAPK orqali vositachilik qiluvchi yallig'lanishga qarshi omillarning salbiy teskari aloqasi bilan bog'liq bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, FAS apoptoz vositachisi bo'lgan muhim moddadir va immun gomeostazi uchun juda muhimdir (Krueger va boshq., 2003; Guegan va Legembre, 2018). Shu bilan birga, CACNA2 kuchlanishga bog'liq bo'lgan kaltsiy kanali bo'linmasi bo'lib, u hujayralar ko'payishi, ko'chishi va bostirib kirishiga ta'sir qiluvchi ta'sir ko'rsatadi (Sun va boshq., 2020). Ushbu tadqiqotda, b-glyukan (G70) bilan to'ldirilgan tovuqlarda FAS va CACNA2 sezilarli darajada kamaydi, bu b-glyukan (G70) asosan immun hujayra apoptozini inhibe qilish va otoimmunitetni muvozanatlash orqali immunitetni kuchaytiruvchi ta'sir ko'rsatishini ko'rsatadi. Ushbu topilmalar b-glyukandan (G70) klinik sharoitlarda immunitetni kuchaytiruvchi vosita sifatida foydalanish uchun nazariy ma'lumot beradi. Biroq, MAPK yo'lining salbiy teskari aloqa ta'siri orqali b-glyukanning immunitetni kuchaytiruvchi mexanizmi qo'shimcha dalillarga muhtoj. Shunisi qiziqki, CATH3, CATH1, CATH2 va b-defensinni kodlovchi genlar, shu jumladan AvBD6, AvBD7, AvBD1 va AvBD4 ni oʻz ichiga olgan katelisidinni kodlovchi genlar H (G70 + vaktsina guruhi) bilan solishtirishda sezilarli darajada pastga regulyatsiya qilingan. qarshi nazorat (guruh vaktsinasi). Xost mudofaa peptidlari (HDP) tug'ma immunitet tizimida hal qiluvchi rol o'ynaydigan effektor molekulalardir (Cuperus va boshq., 2013). Ushbu peptidlar sut emizuvchilardan qushlargacha bo'lgan turli xil hayvonlar turlarida topilgan. Jo'jalarda CATH1, CATH2, CATH3 va CATHB1 dan iborat 4 ta katelisidin mavjud bo'lib, ular turli bakteriyalarni samarali o'ldiradi (Hamad va boshq., 2017). Qushlarning beta-defensinlari (AvBD), muqobil ravishda gallinacean deb nomlanadi, ularning sistein qoldiqlari o'rtasida 3 ta sistein disulfid aloqasi bo'lgan kichik katyonik peptidlar bo'lib, tug'ma immunitet tizimida muhim rol o'ynaydi (Yoshimura, 2015). Katelitsidinlar va beta-defensin ekspressiyasining kamayishi, ehtimol, bakterial va parabakterial populyatsiyalar xamirturush hujayra devori polisakkaridlari tomonidan kamaytiriladigan qayta aloqa regulyatsiyasi bilan izohlangan (Bi va boshq., 2020). Shunga o'xshash natijalar boshqa tadqiqotlarda ham aniqlandi. Shao va boshqalar. (2016) broyler tovuqlarida xamirturush b-glyukan qo'shilishi Salmonella infektsiyasini bostirishini va HDPlarning miqdoriy real vaqtda PCR tahlili orqali ifodasini kamaytirishini ko'rsatdi. Ushbu tadqiqotda, asosan, b-glyukandan tashkil topgan G70 mahsuloti zardobdagi NDV-ga xos antikorlar darajasini oshirdi, periferik qon limfotsitlari va ichak limfotsitlarining NDV stimulyatsiya indeksini oshirdi va periferik qon T-limfotsitlarining CD {{ ga differensiatsiyasini rag'batlantirdi. 123}} T hujayralari. Bundan tashqari, RNK-seq tahlili shuni ko'rsatdiki, G70 G-oqsil bilan bog'langan serotonin retseptorlari va MHC I sinf polipeptidi bilan bog'liq mRNK ifodalarini ko'targan va katelisidin va beta-defensin bilan bog'liq mRNK ifodalarini pasaytirgan. G70 ning tovuqdagi ND vaktsinasiga ta'siri kuchayganligini hisobga olgan holda, G70 ning parranda grippiga qarshi vaktsina kabi boshqa parranda vaktsinalariga ta'siri qo'shimcha o'rganilishi mumkin.

Shakl 6. KEGG yo'li tahlili.

Shakl 7. Tanlangan DEG nomzodlarining RT-qPCR tasdiqlanishi. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

8-rasm. Taloqdagi nisbiy mRNK ifodasi. Jami RNK taloqdan olingan. Tovuq b-aktin ichki nazorat geni sifatida xizmat qildi. Ma'lumotlar o'rtacha § SE sifatida ifodalanadi.

ADABIYOTLAR

Baert, K., E. Sonck, BM Goddeeris, B. Devriendt va E. Cox. 2015. Cho'chqaning tug'ma immun hujayralarida b-glyukanni aniqlash va signalizatsiya qilishda hujayra turiga xos farqlar. Dev. Comp. Immunol. 48:192–203.

Ball, C., A. Forrester, A. Herrmann, S. Lemiere va K. Ganapathy. 2019. Bir kunlik broyler jo'jalarida yuqumli bronxit virusining klassik va variantli shtammlari bilan birgalikda qo'llanganda Nyukasl kasalligi virusi yoki parranda metapnevmovirusiga qarshi jonli vaktsinalar bilan ta'minlangan qiyosiy himoya immuniteti. Vaktsina. 37:7566–7575.

Bi, S., J. Chjan, Y. Qu, B. Chjou, X. Xe va J. Ni. 2020. Xamirturush hujayra devori mahsuloti tovuqlarda og'iz orqali emlashdan keyin ichakning IgA reaktsiyasini kuchaytirdi va ko'richak mikroflorasi turlarini o'zgartirdi. Poult. Sci. 99:6576–6585.

Bi, S., J. Chjan, L. Chjan, K. Huang, J. Li va L. Cao. 2022. Xamirturush hujayra devori Nyukasl kasalligi virusi vaktsinasiga hujayra vositachiligidagi immun javoblarni kuchaytirdi. Poult. Sci. 101:101712–101721.

Bode, K., F. Bujupi, C. Link, T. Hein, S. Zimmermann, D. Peiris, V. Jaquet, B. Lepenies, H. Weyd va PH Krammer. 2019. Dektin{1}} apoptotik hujayralardagi aneksinlar bilan bog‘lanishi NADPH oksidaza-2 orqali periferik immun tolerantlikni keltirib chiqaradi. Hujayra. Vakil 29:4435–4446.

Bohacova, P., J. Kossl, M. Hajkova, B. Hermankova, V. Xolan va E. Javorkova. 2021. R-fikoeritrin-konjugatsiyalangan antikorlarning o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishida mitogen-stimulyatsiya qilingan B va T hujayralari o'rtasidagi farq. J. Immunol. Usullari. 493:113013–113023.

Boyaka, PN, A. Tafaro, R. Fischer, K. Fujixashi, E. Jirillo va JR McGhee. 2003. Immunitet tizimining terapevtik manipulyatsiyasi: tug'ma va adaptiv mukozal immunitetni kuchaytirish. Curr. Farm. Dizayn. 9:1965–1972.

Bronte, V. va MJ Pittet. 2013. Immunitetni mahalliy va tizimli tartibga solishda taloq. Immunitet. 39:806–818.

Byun, E., S. Park, B. Jang, N. Sung va E. Byun. 2016. Gamma-nurlangan b-glyukan MAPK va NF-kB yo'llari orqali immunomodulyatsiya va saratonga qarshi faollikni keltirib chiqaradi. J. Sci. Ovqat. Agr. 96:695–702.

Chen, X., X. Chen, S. Qiu, Y. Xu, C. Jiang, D. Vang, Q. Fan, C. Zhang, Y. Huang, Y. Yu, X. Yang, C. Liu, Z. Gao, R. Xou va X. Li. 2014. Epimedium polisakkarid-propolis flavon og'iz suyuqligining tovuqlarda shilliq immunitetga ta'siri. Int. J. Biol. Makromol. 64:6–10.

Cui, X., Y. Vang, R. Guan, M. Lu, L. Yuan, V. Xu va S. Xu. 2020. Oʻsimlik moyi yordamchisida emulsiyalangan oyoq va ogʻiz kasalligiga qarshi vaktsina zardobi proteomik tahlili bilan mustahkamlangan immun javoblar. Vaksinalar. 8:180–197

Cuperus, T., M. Coorens, A. van Dijk va HP Haagsman. 2013. Qushlarning mezbon mudofaa peptidlari. Dev. Comp. Immunol. 41:352–369.

Goodridge, HS, AJ Wolf va DM Underhill. 2009. Beta-glyukanning tug'ma immunitet tizimi tomonidan tan olinishi. Immunol. Vahiy 230:38–50.

Guegan, J. va P. Legembre. 2018. Fas/ CD95 ning immun javobdagi nonapoptotik funktsiyalari. FEBS J 285:809–827.

Guo, Y., RA Ali va MA Qureshi. 2003. Broyler jo'jalarida beta-glyukanning immun reaktsiyalariga ta'siri. Immunofarm. Immunol. 25:461–472.

Hamad, SK, S. Kim, SW El-Kadi, EA Vong va RA Dalloul. 2017. Kurka tovuqlarida xost mudofaa peptidlarining qiyosiy ifodasi. Poult. Sci. 96:2083–2090.

Hasted, T., S. Sharif, P. Boerlin va MS Diarra. 2021. Parranda go'shtida mevalar va ularning ekstraktlarining immunostimulyator salohiyati. Old. Immunol. 12:641696.

Xong, Y., J. Li, TH Vu, S. Li, HS Lillehoj va YH Xong. 2020. Tovuq parrandasi b-defensin 8 tovuq makrofagi hujayra liniyasida mitogen faollashtirilgan protein kinaz signalizatsiya yo'llari orqali immun javobini modulyatsiya qiladi. Poult. Sci. 99:4174–4182.

Horst, G., R. Levin, R. Chick va C. Hofacre. 2019. Broyler tovuqlarida beta- 1,3-glyukan (AletaTM) ning emlash reaktsiyasiga ta'siri. Poult. Sci. 98:1643–1647.

Imasato, A., C. Desbois-Mouthon, J. Xan, X. Kay, ACB Cato, S. Akira va J. Li. 2002. MAPK fosfataza-1 induksiyasi orqali p38 MAPK ning glyukokortikoidlar tomonidan inhibe qilinishi, tollga o'xshash retseptor 2 ning tipik bo'lmagan Gemofil ta'siridan kelib chiqqan ifodasini kuchaytiradi. J. Biol. Kimyo. 277:47444–47450.

Kankkunen, P., L. Teiril€a, J. Rintahaka, X. Alenius, X. Volf va S. Matikainen. 2010. (1,3)-beta-glyukanlar inson makrofaglarida dektin-1 va NLRP3 yallig'lanishini faollashtiradi. J. Immunol. 184:6335–6342.

Kim, HS, JY Kim, XK Li, MS Kim, SR Li, JS Kang, HM Kim, K. Li, JT Xong, Y. Kim va S. Xan. 2010. Umbilicaria esculenta dan ajratilgan glyukan bilan dendritik hujayra faollashuvi. Immunitet. Tarmoq. 10:188–197.

Krueger, A., SC Fas, S. Baumann va PH Krammer. 2003. Periferik T-hujayra apoptozini tartibga solishda CD95 ning roli. Immunol. Vahiy 193:58–69.