UPLC-Q-TOF-MSE tomonidan kalamushlarda xom va qayta ishlangan Cistanche Desertikolaning kimyoviy profillari va metabolitlarini o'rganish

Aloqa elektron pochtasitina.xiang@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Abstrakt

Fon: Xitoy materia medicasini qayta ishlash an'anaviy xitoy tabobatida (TCM) o'ziga xos va noyob farmatsevtika usuli bo'lib, nojo'ya ta'sirlarni kamaytirish va xom o'tlarning terapevtik samaradorligini oshirish yoki hatto o'zgartirish uchun ishlatiladi. Dorivor o'simliklarning samaradorligini oshirish uchun, birinchi navbatda, optimallashtirilgan qayta ishlash jarayoni bilan bog'liq muhim tarkibiy qismlarning o'zgarishi sabab bo'ladi. Bug'langan guruch sharobining buyrak-yang tetiklantiruvchi ta'siriCistanche deserticola(C.deserticola) xom C.deserticola (CD) dan kuchliroq edi.

Usullari: Qayta ishlash ta'sirini aniqlash uchun UPLC-Q-TOF-MS' yordamida UNIFl informatika platformasi bilan taqqoslash tahlili o'tkazildi. In vitro tadqiqotlar, shuningdek, tarkibiy qismlarni tavsiflash uchun o'tkazildimetabolitlariin vivo. Kimyoviy komponentlar CD va uning qayta ishlangan mahsulotlarida aniqlangan. Ko'p o'lchovli statistik tahlillar ular orasidagi o'zgarishlarni baholash uchun o'tkazildi, OPLS-DA esa juftlik taqqoslash uchun ishlatilgan.

Natijalar: Ushbu tadqiqot natijalari feniletanoid glikozidlarda (PhGs) sezilarli o'zgarishlarni aniqladi.iridoidlarqayta ishlashdan keyin. CD va uning qayta ishlangan mahsuloti ekstraktlarida jami 97 ta birikma aniqlangan. 8-O- -D-glyukopiranozil qismidagi 4-O-koffeoyl guruhiga ega boʻlgan PHGlar, masalan, akteozid, sistanozid C, kampneozid Il, osmantusidlar qayta ishlangandan keyin kamaydi, 6' boʻlgan PhGlar. 8-O- -D-glyukopiranosil qismidagi -O-kaffeoyl guruhi, masalan, izoasetozid, izokistanozid C, izokampneozid l, izomartinozid, ayniqsa CD-NP guruhida ortdi. Tuzilishi 6'-O- -D-glyukopiranosil qismiga ega bo'lgan echinakozid va sistanozid B ning intensivligi ham oshdi. In vivo tadqiqotda kalamush plazmasi, najas va siydikda 10 ta prototip komponenti va 44 ta metabolit aniqlandi. Olingan natijalar shuni ko'rsatdiki, qayta ishlash CD ning kimyoviy tarkibiy qismlarining sezilarli o'zgarishiga olib keladi va in vivo jonli ravishda birikmalarning joylashishiga ta'sir qiladi va faza Ⅱ metabolik jarayonlar har bir birikmaning asosiy kaskadlari hisoblanadi va metabolitlarning aksariyati echinacoside yoki bilan bog'liq. akteozid.

Xulosa: Bu xom va qayta ishlangan CDni birinchi global taqqoslash tadqiqotidir. Ushbu topilmalar CD-ni qayta ishlashning ta'siri haqidagi tushunchamizga qo'shimcha qiladi va kelgusida samaradorlikni tekshirish uchun muhim ma'lumotlarni beradi.

Kalit so'zlar: Cistanche deserticola, Qayta ishlash, UPLC-Q-TOF-MS5, Kimyoviy profillar, In vivo metabolitlar

Kirish

Xitoy materia medica (CMM) bilan ishlov berish an'anaviy xitoy tabobati (TCM) klinik amaliyotida sezilarli darajada qo'llanilishini ko'rsatdi va u bir necha asrlar davomida hayotiy davolash deb hisoblanadi. Bu TCM nazariyasidan olingan noyob farmatsevtika texnologiyasi. Qayta ishlashdan so'ng, barcha turdagi TCMlarning tashqi ko'rinishi, kimyoviy tarkibiy qismlari, xususiyatlari va dorivor ahamiyatidagi sezilarli farqlar aniqlandi, bu qayta ishlash TCMning samaradorligini oshirishi yoki toksik ta'sirini kamaytirishi mumkin degan taxminga olib keladi.

Yuz yillar davomida,Cistanche deserticola(Xitoy tilida Rou Cong Rong, CD) odatda TCM klinik amaliyotida buyrak funktsiyalarini to'ldirish uchun ishlatiladi. Shuningdek, u ichakni namlashda yordam beradi, bu esa ichakni bo'shashtirishga olib keladi [1].Cistanchebirinchi bo'lib ShenNongBencaoJingda yozilgan. U odatda Evroosiyo va Shimoliy Afrikaning qurg'oqchil va yarim qurg'oqchil yashash joylarida, jumladan Eron, Xitoy, Hindiston va Mo'g'ulistonda uchraydi [2]. CDni qayta ishlash guruch-vino bilan normal bosim ostida bug'lash yo'li bilan amalga oshirildi, bu Xitoy farmakopeyasida (xitoycha Jiukongong, bundan keyin "CD-NP" deb ataladi) hujjatlashtirilgan tayyorlash usuli hisoblanadi. Va yuqori bosim ostida guruch-vino bilan CD bug'lash yanada samarali tayyorlash usuli hisoblanadi (keyingi o'rinlarda "CD-HP") [3, 4]. Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CD ning farmakologik ta'siri qayta ishlangan mahsulotlardan farq qiladi [5]. CD buyrak-yangni tonlashi va ichakni bo'shashtirishi mumkin, shu bilan birga guruch-sharob bilan bug'langandan keyin buyrak-yangni to'ldirish ta'siri kuchayadi. Oldingi tadqiqotimizda CD-NP buyrakning tonikatsiyasini kuchaytirishi va yangni qo'llab-quvvatlashi va ichaklarni namlash va defekatsiya ta'sirini engillashtirishi aniqlangan [6-8]. Klinik amaliyotda qayta ishlangan mahsulotlar eng ko'p ishlatiladigan shakldir.

Bugungi kunga qadar bir nechta tadqiqotlar CD ning kimyoviy tarkibiy qismlarini tahlil qildi, so'ngra 100 dan ortiq birikmalar [9-11], masalan, feniletanol glikozidlari (PhGs) izolyatsiyasi va identifikatsiyasi aniqlandi.iridoidlar, lignanlar va oligosakkaridlar uning asosiy kimyoviy tarkibiy qismlari sifatida. Shuningdek, PHGlarning ko'plab farmakologik faolligi borligi, jumladan immunomodulyator, neyroprotektiv, gepatoprotektiv, yallig'lanishga qarshi, oksidlanishga qarshi va boshqalar [12-14]. Iridoidlar yallig'lanishga qarshi ta'sirga ega [15, 16]. Bundan tashqari, avvalgi tadqiqotlar natijasida ba'zi kimyoviy komponentlar qayta ishlash jarayonida o'zgarishlarni ko'rsatganligi aniqlangan [17-20]. Ushbu hisobotlarga asoslanib, qayta ishlashdan keyingi kimyoviy tarkibdagi o'zgarishlar turli xil farmakologik ta'sirlarga olib keladi, deb taxmin qilish mumkin, ularni yanada chuqurroq o'rganish kerak.

Joriy tadqiqotda qiyosiy tahlil qilish uchun sezgir va samarali usul, ya'ni TOF-MSE (UPLC-Q-TOF-MSE) bilan birgalikda ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi o'tkazildi va ekstraktlarni sifatli tahlil qilish uchun in vitro tadqiqotlar o'tkazildi. ularning kimyoviy profillarini tushuntirish uchun CD, CD-NP va CD-HP. Umuman olganda, maqsadli organlarga yuqori ta'sir ko'rsatadigan ekzogen kimyoviy moddalar samarali komponentlar sifatida qabul qilindi. Shu sababli, kalamushlarda CD va uning qayta ishlangan mahsulotlari mos ravishda og'iz orqali yuborilgan, so'ngra ularning tavsifi berilgan. Mavjud tadqiqot birinchi marta xom va qayta ishlangan CD ning qiyosiy tadqiqotini (in vitro va in vivo) ochib beradi. Olingan natijalar CD-ni qayta ishlashning ta'siri haqidagi tushunchamizni kengaytiradi, bu keyingi tadqiqotlar uchun foydali bo'lishi mumkin.

Materiallar va uslublar

Materiallar

Ajugol (180120) va 2'-asetil-asetozid (M0601AS) standart birikmalari Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Chengdu, Xitoy) tomonidan taqdim etilgan. Cistanoside F(MUST-17022620), echinacoside (D1105AS), cistanoside A(M0906AS) va isoacteoside(M0106AS) must company (Sichuan China); acteoside (O0618AS), salidroside(J0526AS), catalpol (S0728AS), geniposid (A0407AS) va genipozid kislotasi (MB{15}}S) Dalian Meilun Bio.Co.,Ltd (Dalian, Xitoy) dan olingan.8-epid oksilogan kislotasi (B31123) Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd, Xitoydan olingan. Metanol va asetonitril MS darajasida bo'lib, Merck KGaA, Darmshtadt, Germaniyadan olingan. HPLCgradning metanoik kislotasi (CH, O,) Merck KGaA (Darmshtadt, Germaniya) tomonidan taqdim etilgan. Mavjud tadqiqotda foydalanilgan suv Milli-Q tizimi orqali qayta ishlandi (18,2 MQ, Millipore, Ma, AQSh). Guruchli sharob Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Chjejiang, Xitoy) tomonidan taqdim etilgan.

Cistanch deserticola Neimenggu wangyedi cistanche Co.Ltd kompaniyasidan yig'ilgan. Namunalar professor Yanjun Zhai tomonidan aniqlangan (dorixona maktabi, TCM Liaoning universiteti). Namunalar Liaoning an'anaviy xitoy tibbiyot universitetiga topshirildi.

Hayvonlar

Umumiy tana vazni 180-220 g bo'lgan Sprague-Dawley erkak kalamushlari (SPF darajasi) Liaoning Changsheng biotechnology Co. Ltd. (Lyaoning provintsiyasi laboratoriya hayvonlari resurslari markazi, litsenziya raqami: SCXK-2015–0001) tomonidan taqdim etilgan. Bu kalamushlar bir hafta davomida yaxshi saqlanadigan harorat va namlik, ya'ni, 20-26 daraja, 50-70 foiz bo'lgan naslchilik xonasida joylashtirilgan. Tajribadan oldin kalamushlar odatdagi laboratoriya ovqati va suv bilan oziqlangan. Hayvonlar bir kechada ro'za tutishgan, ammo tajribadan oldin suv ad libitum bilan ta'minlangan. Kalamushlar 10 foiz xloralgidrat anestetik bilan o'ldirilgan. Liaoning provintsiyasi Xitoy tibbiyot kasalxonasining hayvonlar etikasi institutsional qo'mitasi barcha eksperimental protokollarni tasdiqladi (2019.3.25, 2019015).

CD, CD‑NP va CD‑HP ekstrakti tayyorlash

CD-NP, CD-HP Cistanch deserticolaning bir xil partiyasidan ishlangan. CD-NP tayyorlash uchun quruq CD bo'laklari (5 mm qalinlikdagi, 100 g) guruch-sharob (30 ml) bilan namlangan va 16 soat davomida 100 daraja bug'langan, so'ngra quritish pechida 55 daraja quritilgan. CD-HP quruq CD bo'laklarini (5 mm qalinlikdagi, 100 g) guruch-sharob (30 ml) bilan infiltratsiya qilish, so'ngra 1,25 atmosfera bosimida 4 soat davomida bug'lash orqali tayyorlangan. va keyin quritish pechida 55 daraja quritiladi.

100 ml o'lchov kolbasida bir gramm kukun №4 elak orqali elakdan o'tkazildi, so'ngra 50% metanol (50 ml) qo'shildi va keyin mahkam yopiladi va aralashtiriladi. Bu aralashmaning tarozida tortilgan, keyin yarim soat davom etgan. makeratsiya. Maseratsiyadan so'ng, aralashma 40 daqiqa davomida ultratovushli (kuch 250 Vt, chastotasi 35 kHz), so'ngra sovutib, yana tortildi. Og'irlikni yo'qotish 50% metanol bilan to'ldirildi, to'g'ri aralashtirildi va turishga ruxsat berildi, so'ngra supernatantni filtrlash va keyin olingan filtratni sinov eritmasi sifatida ishlatish.

Faol komponentlarning MSE tahlili

Standart moddalarni tayyorlash: tubuloside-A (3.02 mg), echinacoside (3.00 mg), 2'-acetylakteosid (2,34 mg), acteosid (2,45 mg), izoakteosid (0,61). mg), sistanozid-F (2,14 mg), salidrozid (3,39 mg), geniposid (2,84 mg), ajugol (1,58 mg), katapol (2,39 mg), genipozid kislotasi (2,56 mg) va 8-epideoksiloganik kislota (2,34 mg) 10 ml hajmli idishga qo'shildi, metanol doimiy hajmi o'lchovga qo'shildi va mos keladigan konsentratsiyali mos yozuvlar eritmasiga sozlandi. 100 mkL ning har biri aralash mos yozuvlar eritmasiga sozlangan.

MS tahlilining holati: Tajribadan oldin massa qiymati tuzatildi va manfiy ion rejimidan foydalanildi. Massa diapazoni 50–1200 Da ni tashkil etdi va namuna oqim quyish pompasi orqali AOK qilindi. Konusning tezligi 100 L / soat edi, erituvchi oqim tezligi 800 L / soat ga o'rnatildi. Kapillyar va konusning kuchlanishlari mos ravishda 2500 va 40 V da o'rnatildi. Ion manbai va erituvchi gazning harorati mos ravishda 100 daraja va 400 daraja, signalni olish chastotasi esa 0,5 S-1 edi.

CD ekstraktining UPLC-Q-TOF-MS tahlili (15-16 min), 65 foizdan 55 foizgacha A (16-18 min). Oqim tezligi 0,3 ml min−1, avtonamuna olish xonasi va ustunining harorati alohida 30 va 8 daraja edi. In'ektsiya hajmi 1,0 mkl edi.

Mass-spektrometrik baholash ESI manbasini o'z ichiga olgan Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS (Waters Corporation, Milford, MA, AQSH) orqali amalga oshirildi. Azot gazining oqim tezligi 400 daraja haroratda 800 L·soat-1 da, manba harorati 100 darajaga, konus gazi esa 50 L h-1 ga o'rnatildi. Konusning va kapillyarning kuchlanishi mos ravishda 40 va 2000 V da o'rnatildi. Rampaning to'qnashuv energiyasi 20–30 V oralig'ida ishlatilgan. Barcha namunalarning markazlashtirilgan ma'lumotlari 50 dan 1200 Da gacha, 5- skanerlash vaqti 0,5 s 10 minutlik tahlil vaqtida olingan. . LockSpray TM massa aniqligini tekshirish uchun ishlatilgan. Bloklash massasi sifatida m/z 554,2615 da Te [M–H]- leysin enkefalin ioni (200 pg·mL-1 infuzion oqim tezligi 10 mkL min−1) ishlatilgan. MassLynx V4.1 dasturi (Waters Co., Milford, AQSh) aniq massa, prekursor ionlarining tarkibi va fragment ionlarini hisoblash uchun ishlatilgan.

Masslynx platformasida ma'lumotlarni tahlil qilish

Bundan tashqari, adabiyotlar asosida birikmaning nomi, tuzilishi va molekulyar formulasidan (mol.da) iborat ichki kutubxona tashkil etildi. Barcha birikmalar Excelda tayyorlangan maxsus shablonda qayd etilgan. Bundan tashqari, mol fayllari (Chemdraw Ultra 8.0, Cam-bridge soft, AQSH) va barcha individual birikma tuzilmalarining Excel fayllari ham mahalliy kompyuterda saqlangan. Muhim ma'lumotlarga ega bo'lgan o'rnatilgan Excel varag'i to'g'ridan-to'g'ri UNIFI ilmiy kutubxonasiga import qilindi

UNIFI 1.8.2, Uoters, Manchester, Buyuk Britaniya strukturaviy xususiyatlarni baholash uchun, xususan, xarakterli fragmentlar va MS parchalanishi uchun ishlatilgan. 2D cho‘qqisini aniqlash uchun minimal cho‘qqi maydoni 500 belgilandi. 3D cho'qqilarini aniqlash paytida 300 dan ortiq hisoblangan past energiya cho'qqisi intensivligi va 80 dan ortiq hisoblangan energiya cho'qqisining yuqori intensivligi tanlangan. Massaning xatosi ma'lum birikmalar uchun ± 10 ppm gacha bo'lganligi aniqlandi va ushlab turish vaqtining bardoshliligi ± 0,1 min oralig'ida o'rnatildi. Biz -H, ortiqcha HCOOH o'z ichiga olgan salbiy qo'shimchalarni tanladik. O'z-o'zidan yaratilgan ma'lumotlar bazasi va an'anaviy tibbiyot kutubxonasi bilan standartlarga javob beradigan kimyoviy komponentlarni tezkor aniqlash uchun MSdan olingan xom ma'lumotlarni qayta ishlash soddalashtirilgan UNIFI dasturiy ta'minoti orqali amalga oshirildi.

Keyinchalik, har bir maqsadli birikmaning kimyoviy tuzilishini tekshirish uchun izomerlar hisobot qilingan tadqiqotlarda aniqlangan xarakterli MS parchalanish naqshlari va mos yozuvlar standartlarini saqlash vaqtlarini solishtirish orqali farqlandi.

Ko'p o'lchovli statistik tahlilga asoslangan metabolizm tahlili

Xom ma'lumotlarni qayta ishlashdan oldin parametrlar o'rnatildi, masalan, 150 dan 1200 Da gacha bo'lgan massa, saqlash vaqti diapazoni (0 dan 20 minutgacha), chegara intensivligi ( 2000 ta), massa bardoshlik, ya'ni 5 MDA, massa va ushlab turish vaqti mos ravishda 0,20 min va 0,05 Da bo'lgan. Ma'lumotlar bazasining keyingi ro'yxatida ionlarning identifikatori RT-m/ juftlari bo'lib, ularning elutsiya vaqtlari bo'yicha. Namunalarning turli partiyalarida RT va m/z uchun bir xil qiymatlar bir xil birikma sifatida qabul qilindi.

Turli guruhlar orasidagi o'zgarishlarga sezilarli hissa qo'shgan samarali biomarkerlarni baholash uchun ko'p o'lchovli statistik tahlil o'tkazildi. Tahlil davomida umumiy ko'rinish va tasnifni olish uchun maksimal farqlarni va naqsh tan olinishini ko'rsatish uchun asosiy komponent tahlili (PCA) qo'llanildi. OPLS-DA - bu modelni baholashga yordam berish uchun OPLS-DA prognozli komponentlarini yuklash vizualizatsiyasini ta'minlovchi modellashtirish vositasi. Proyeksiyaning o'zgaruvchan ahamiyati (VIP) turli komponentlarni baholashni baholash uchun ishlatilgan vametabolitlariwith VIP values>1.0 va P-qiymati<0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r²/o²values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

Hayvonlar tajribasida kalamushlar tasodifiy ravishda to'rt guruhga bo'lingan (har bir guruh uchun n=6), so'ngra turli ekstraktlar og'iz orqali yuborilgan: (1) Bo'sh nazorat guruhi: kalamushlarga oddiy sho'r suv (2 ml/100 g) berildi. ; (2) CD guruhi: kalamushlarga CD ekstrakti (2 ml/100 g) berildi; (3) CD-NP guruhi: kalamushlarga CD-NP ekstrakti (2 ml/100 g) berildi; (4) CD-HP guruhi: kalamushlarga CD-HP ekstrakti (2 ml/100 g) berildi. Barcha guruhlarning keyingi tasnifi mos ravishda plazma, siydik va najas uchun uchta kichik guruhga bo'lingan. Ikki soat o'tgach, har bir kalamush bir xil va teng miqdordagi ekstraktlar bilan og'iz orqali yuborildi.

Qo'llashdan keyin qon namunalarini olish 1.0 soat, 2.0 va 4.{5}} soatlarda geparinlangan 1,5 ml polietilen naychalarda (orbital tomirlardan) o'tkazildi. , so'ngra barcha namunalarni 15 daqiqa davomida santrifüjlash (4500 rpm da) amalga oshiriladi.

Siydik va najas namunalari uchun kalamushlar metabolizm kataklarida ushlab turilgan, so'ngra siydik va najas namunalarini yig'ish administratsiyadan keyin 24 soat davomida amalga oshirilgan. Siydik namunalarini santrifüjlash 45 00 aylanish tezligida 15 daqiqa davomida amalga oshirildi, najas namunalari soyada quritilib, kukunga aylantirildi, keyin 0,2 g olindi va 0,5 ml sho'r suvga qo'shildi. eritma, 5 minut davomida ultratovush tekshiruvi va 12,{9}} aylanish tezligida 15 minut santrifüj qilinadi. Barcha bionamunalar tahlilga qadar -80 darajada saqlanadi.

Biologik namunalarni tayyorlash. Plazma, siydik va najas namunalarini qo'shish 3 hajmli metanol bilan amalga oshirildi, so'ngra 3 daqiqa davomida vortekslash amalga oshirildi. Keyin aralashmalarning santrifüjlanishi (12,{3}} aylanish tezligida) 10 daqiqa davomida amalga oshirildi, so'ngra supernatant EP trubasiga o'tkazildi va keyin 37 daraja azot bilan quritildi. Bundan tashqari, 200 mL HCN-H2O (50 foiz) eritmasi qo'shildi. O'n, vorteks aralashtirish uchun ishlatilgan (1 daqiqa), so'ngra 5 daqiqa davomida santrifüjlash (12,{11}} aylanish tezligida). Davolangan namunalarning supernatanti (5 mkl) UPLC-Q-TOF-MSE tizimiga AOK qilindi.

Suyuqlikning xromatografik va massa spektrometrik holatimetabolitlariESI interfeysi orqali Waters UPLC asbobi tomonidan ham amalga oshirildi. Ajratishlar Acquity UPLC HSS T3 ustuni (100 mm×2,1 mm, 1,8 mkm) yordamida amalga oshirildi, mobil faza 0,1 foizli chumoli kislotasi (A): Asetonitril (B), gradient elutsiya holati 0-3 min (99,8 foiz → 98 foiz A).3-5 min (98 foiz → 95 foiz A), 5-8 min (95 foiz → 90 foiz A), { {18}} min (90 foiz → 85 foiz A), 12-17 min (85 foiz → 70 foiz A), 17-22 min (70 foiz → 60 foiz A), 22-23 min (60 foiz →58 foiz A), 23-25 min (58 foiz A), 25-32 min (58 foiz → 45 foiz A) va 32-37 min (45 foiz → 35 foiz A) ), 0,4 ml min-1 oqim tezligi edi. Ustun va namuna xonasi uchun harorat mos ravishda 40 daraja va 8 darajaga o'rnatildi. Yuqorida keltirilgan mass-spektrometriya sharoitlaridan foydalanilgan.

Bio-namunalarda metabolitlarni tizimli tahlil qilish strategiyasi UNIFI (1.8.2) dasturiy ta'minoti ma'lumotlarni qayta ishlash uchun ishlatilgan. Samarali metabolitlarni aniqlash uchun Binary Compare funksiyasidan foydalanilgan. Baholangan metabolitlar ekvivalent nazorat namunasida mavjud emas yoki past ion intensivligida mavjud. Nisbiy intensivlik chegarasi 3 yoki 5 ga o'rnatildi va ta'kidlangan mezonlarga javob beradigan metabolitlar baholanishi mumkin edi. Keyinchalik EIC tomonidan umumiy va bashorat qilinadigan metabolitlar aniqlandi. Ikki fazali metabolitlarni qidirish uchun NLF funktsiyasi qo'llaniladi. Misol uchun, UNIFI dasturida glyukuron kislotasining mumkin bo'lgan konjugatlarini qidirish uchun parametrlar 176.0321 ga o'rnatilishi mumkin. Qayta ishlashdan keyin neytral yo'qotish usulda o'rnatilishi yoki aniqlanishi mumkin. MassFragment aniqlangan metabolitlar tuzilmalarini aniqlash yoki tavsiflash uchun ishlatilgan, UNIFI ning spektral talqin funktsiyasi asosiy komponentlarning ikkilamchi parchalanishini tahlil qilish uchun ishlatiladigan asosiy funktsiyadir. Ushbu funktsiyadan oqilona bo'lsa ham, parchalanish yo'lini tezkor tekshirish uchun foydalanish mumkin.

Natijalar

Feniletanoid glikozidlar va iridoidlarning massa parchalanish qoidasi

Feniletanoid glikozidlar CD ning asosiy kimyoviy tarkibiy qismidir. Izoakteozidning standart eritmalari,

sistanozid F, tubuloside A, echinacoside, acteosid va 2'-asetil-akteosid olindi, so'ngra to'qnashuv energiyasining boshqa darajasini ta'minladi (1-jadval), so'ngra tegishli MS2 xaritalari olingan (1-rasm).

Mass-spektrometrik tahlil shuni ko'rsatdiki, feniletanoid glikozidlar o'xshash massa spektrining parchalanish naqshlariga ega, manfiy ion rejimida parchalanish yo'llari asosan (1) Ester bog'lanishining parchalanishini o'z ichiga oladi: neytral kofeol guruhi (C, H, O162.03) va neytral atsetilni yo'qotish. guruh (C, H, O,42.00);(2) Glikozidlar boʻlinishi: neytral ramnoz qoldiqlari (C.HIO, 146.05) va neytral glyukoza qoldigʻi (CgH2O,162.05) yoʻqolishi. Yuqori aniqlikdagi massa spektrometriyasidan kofeol (162,03) va glyukoza qoldig'ini (162,05) ajratish mumkin.

Iridoidlar ajugol, katapol, genipozid kislota, geniposid va 8-epid oksilogan kislotasining standart eritmalari olindi, so'ngra turli xil to'qnashuv energiyalari ta'minlandi va tegishli MS xaritalari olindi (2-rasm).

Iridoid glikozidlar o'xshash massa spektrining parchalanish naqshlariga ega, manfiy ion rejimida bo'linish yo'llari asosan (1) glikozidlar bo'linishini o'z ichiga oladi: neytral glyukoza qoldig'ining yo'qolishi (CHoO, 162,05); (2) neytral CO ning yo'qolishi, (43,99) , O(18.01).

CD, CD-NP va CD-HP ekstraktlaridagi birikmalarni aniqlash

UPLC-QTOF-MSE tahlili

Xromatografik sharoitlarni optimallashtirish amalga oshirildi. Keyinchalik, CistancheHerba birikmalari yuqori va past CE bilan salbiy va ijobiy ion rejimlarida baholandi. Olingan natijalar shuni ko'rsatdiki, salbiy rejimning mosligi ushbu birikmalar uchun ijobiy rejimga nisbatan yuqoriroq. 3-rasmda raqamlangan cho'qqilar bilan kuzatilgan MS asosiy tepa ioni (BPI) xromatogrammasi ko'rsatilgan. UPLC-Q-TOF-MS tahlilida aniqlangan har bir ionning intensivligi m/z qiymati, normalangan tepalik maydoni va saqlash vaqtidan iborat bo‘lgan ma’lumotlar matritsasi hosil qilish uchun butun ionlar soniga nisbatan normallashtirildi.

UNIFl platformasida CD va uning qayta ishlangan mahsulotlaridan komponentlarni baholash

CD va uning qayta ishlangan mahsulotidan (2-jadval), jumladan, feniletanoid glikozidlar (PhG), iridoidlar, lignanlar va oligosakkaridlardan -SEM (n=6) rejimi bilan jami 97 ta birikma aniqlandi. 95,91 va 94 komponentlar mos ravishda CD, CD-NP va CD-HP da aniqlandi. Ulardan 64 tasi feniletanoidlar, 13 tasi iridoidlar va 20 ta boshqa turdagi birikmalar aniqlangan. CD va uning qayta ishlangan mahsuloti kimyoviy tarkibida o'xshashlik bor edi, ammo komponentlar miqdori CD va uning qayta ishlangan mahsuloti o'rtasida farqli ekanligi aniqlandi.

Qayta ishlangan mahsulotlarning kimyoviy tarkibiy qismlarining o'zgarishi Ko'p o'zgaruvchan ma'lumotlar matritsasini tahlil qilish uchun Simca-P 13.0 dasturidan foydalanilgan. PCA dan oldin barcha o'zgaruvchilar o'rtacha markazlashtirilgan va Pareto-miqyosda bo'lgan, keyin potentsial diskriminant o'zgaruvchilari aniqlangan. PCA ball syujetida har bir nuqta alohida namunani ko'rsatdi. Kimyoviy tarkibiy qismlarida o'xshashlikni ko'rsatgan namunalar bir-biriga qo'shni bo'lgan, tarkibiy qismlarida o'zgarishlarni ko'rsatgan namunalar bo'lingan. PCA (4-rasm) ko'rinib turibdiki, CD-HP guruhi CD va CD-NP guruhlaridan ajratilgan.

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs.5, 6,7)The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP>1 va P<0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

8-rasmdan biz 4'-O-kofeol guruhiga ega bo'lgan akteozid (54), sistanozid C (74), kampneozid I (43), osmantusid (75) va 2'-aktilakteozid (80) intensivligini topdik. 8-O- -D-glyukopiranosil qismi (9-rasmga qarang) guruch-vino bilan qayta ishlanganidan keyin kamaydi, izoatsetozidning (60) intensivligi esa kastanozid (71), izo-kampneozid I. (69), izomartinozid (86) 6'-O-kofeol guruhiga ega (9-rasmga qarang), ayniqsa CD-NP guruhi uchun ortdi. Tubulozid B (72) 6'-O-kofeol guruhiga ega bo'lsa-da, izoakteozid bilan bir xil bo'lsa-da, uning 2'-asetil guruhi tufayli intensivlik kamaydi. 6'-O- -D-glyukopiranosil guruhiga ega bo'lgan echinakozid (38) va sistanozid B intensivligi oshdi, ammo tubulozid A (55) ning intensivligi uning 2'-atsetil guruhi tufayli ham kamaydi.

Bizning tadqiqot guruhimiz, shuningdek, akteozid va izoakteozidning termal barqarorligini o'rganib chiqdi va akteozid suv, metanol va sariq guruch sharob eritmasida beqaror ekanligini va isitish sharoitida qisman izoakteozidga aylanishi mumkinligini aniqladi. Ammo izoakteozidning termostabilligi, ayniqsa, sariq guruch sharob eritmasida yaxshiroq edi. 10-rasmda qayta ishlash jarayonida CD-dagi PhGlarning mumkin bo'lgan o'zgarishlari ko'rsatilgan:

Kalamushlarda metabolitlarni identifikatsiyalash Yuqori aniqlikdagi mass-spektrometriya ma'lumotlaridan metabolitlar va protomolekula birikmalarining aniq molekulyar og'irligi va elementar tarkibi tahlil qilindi va solishtirildi. TCMdagi bir xil turdagi birikmalar metabolik o'zgarishlarda o'xshashlikni ko'rsatganligi sababli, fitokimyoviy tarkibiy qismlarning in vitro o'zaro bog'liqligi ularning metabolitlariga in vivo tarqalishi mumkin. Shu bilan birga, an'anaviy biotransformatsiya yo'llariga asoslanib, molekulyar og'irlikning oqilona o'zgarishi haqida xulosa chiqarildi. Nihoyat, metabolitlar metabolitlarning MSE massa spektrlarini va massa spektridagi proto-birikmalarning parchalanish yo'lini tahlil qilish orqali aniqlandi [21, 22]. Bo'sh namuna bilan solishtirganda, uning tarkibiy qismlari xromatogramma-massa spektri, metabolik reaktsiyaning ehtimoli, birikma strukturasining xususiyatlari va uning massa spektrining parchalanish qoidasi tomonidan taqdim etilgan ma'lumotlarga asoslanib, in vivo jonli ravishda aniqlandi. 3-jadvalga qarang.

Feniletanol glikozidlari bilan bog'liq metabolitlarni aniqlash

Qayta ishlash uchun UNIFI platformasi ishlatilgan. 11-rasmda CD va uning qayta ishlangan mahsulotlari uchun siydik, najas va plazmaning TIC xromatografi ko'rsatilgan. Bo'sh namunalar bilan taqqoslaganda, kalamushlarda jami 54 ta metabolit aniqlandi, shu jumladan 10 ta prototip komponentlari va 44 ta metabolitlar, ularning 24, 49 va 6 tasi najas, siydik va plazmada.

Aniq massa, parchalanish kaskadi va biotransformatsiya orqali bashorat qilinadigan neytral yo'qotishlarga asoslanib, jami 35 ta feniletanoid glikozidlar bilan bog'liq metabolitlar taxminiy baholandi. Feniletanoid glikozidlarning tegishli metabolitlari o'xshash massa spektrining parchalanish naqshlariga ega, masalan, m/z 461,1605 tipik dekofeol fragmenti, keyin in vivo jonli ravishda glikozid va efir bog'lari bilan gidrolizlanadi va gidroksitirozolga (HT) metabollanadi. z153.0504, C.HO.4.73 min) va kofein kislotasi (CA) (m/z179.0389, CH, O0.77 min), 12A-rasmga qarang.

M11 [MH]~da m/ 153.0504 da, ya'ni C.H2O formulasi bilan ko'rsatilgan va HT sifatida aniqlangan. M16 [MH]- ni m/z 329,0851 da taqdim etdi, bu HT ga qaraganda 176 Da ga yuqori bo'lib, u HTning glyukuronidlangan metaboliti bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi. M26 ning [MH] - HT-glyukuronidnikidan m/z 343,1037,14 Da yuqori edi. Shuning uchun M26 HT-metillangan glyukuronid sifatida aniqlandi. M17 HT-sulfat sifatida aniqlandi, uning [MH]-da m/z 233.0112,80 Da HT ustidagi, keyinchalik metillanishi mumkin, keyin M22 hosil bo'ldi, bu m/z 247.0278 ko'rsatdi, bu uning HT- ekanligini ko'rsatdi. metillangan sulfatlangan metabolit. M7 (m/167,0335) va M5 (m/z 167,0762) mos ravishda oksidlanish mahsulotlari va metillangan HT sifatida qabul qilindi (12B-rasm).

M1 [MH]- m/z 179,0389 da, aniqlangan molekulyar formulasi CH-O va kofein kislotasi (CA) sifatida aniqlandi. M25 m/355,0704 da [MH]-ni aniqladi, bu CA dan 176 Da ga ko'tarildi. Bu CA ning glyukuronidlangan metaboliti bo'lishi mumkin. M27 m/z 258,994 ga ega edi, bu CA dan 80 Da yuqori edi, shuning uchun biz uni CA sulfat sifatida aniqladik va u M35 (m/z 273,0064) ishlab chiqarishi mumkin edi. M4 [MH]7 ni m/z 193,0524,14 Da CA dan yuqori bo'lganligi sababli, u CA metillangan metaboliti sifatida aniqlandi. M39 CA dehidroksillanish metaboliti bo'lib, m/z 163,04 bo'lib, uni M32 (m/z 242,9951) ga sulfatlash mumkin edi.

M33(m/z 181.0491, C.H2O,9.06 min) CA ning qaytarilish mahsuloti, ya'ni 34-digidroksi-benzolpropion kislotasi bo'lib, uni M19 (m) ga metillanishi mumkin edi. /z 195.0623, C10H12O4, 0.93 min). M33 M43, ya'ni 3-HPP (m/z 165,0558, C9H10O3, 11,29 min) va M31 (m/z 341,0942, C15H17O9, 8,90 min) va M29 (m/z 06, 015 O) ga suvsizlanishi mumkin. 8,52 min) glyukuronidlangan va sulfatlangan mahsulotlar edi (12C-rasm).

Feniletanoid glikozidlar bilan bog'liq metabolitlar uchun asosiy metabolik kaskadlar metabolik reaktsiyalarning II bosqichi, ya'ni glyukuronidlanish, metillanish va sulfatlanish edi. Feniletanoidlarning tavsiya etilgan metabolik kaskadlari 13-rasmda tasvirlangan.

Iridoidlarga tegishli metabolitlarni aniqlash

Metabolitlarning elementar tarkibini, MSE parchalanishini va tegishli adabiyotlarni tahlil qilish orqali jami 19 ta iridoid bilan bog'liq metabolitlar taxminiy baholandi. Iridoid glikozidlar glikozid bog'lari bilan gidrolizlanib, ularga mos keladigan aglikonlarni hosil qiladi. M/z 185.117 M8 uchun bo'lib, glyukoza qoldig'ini yo'qotish natijasida hosil bo'lgan ajugoldan 162 Da kamroq.

M40(m/z 199,0641, Rt 10,91 min) katapolning deglikozillangan mahsuloti edi. M45 m/z 169,0487, Rt 12,15 min) katapol deglikosillangan metabolitiga nisbatan 30 Da dan kam bo'lgan va CH, O metabolitining molekulasini olib tashlash sifatida aniqlangan. M34 (m/z 151.0352, Rt 9.08 min), H, O metabolitining keyingi yo'qolishi edi.

M44(m/z 211,0665, Rt 11,31 min) geniposidning deglikosillangan metaboliti, M37 (m/z 197,0833, Rt 15,03 min) esa 8-epideoksilogan kislotaning deglikozillanishi edi. Iridoidlar uchun metabolik reaktsiyalar deglikozillanishning I fazasi metabolizmi sifatida aniqlanishi mumkin (12D-rasm).

CD va uning qayta ishlangan mahsulotlari o'rtasida plazma, siydik va najasdagi metabolik profilni solishtirish

Plazmadagi 2 ta prototip, siydikda 7 ta va najasdagi 3 ta prototip solishtirildi. CD-da so'rilgan 7 prototip, CD-NP-da 7 prototip va CD-HPda 8 prototip mavjud edi. M21 faqat CD-NP ning najas guruhida, M38 va M51 esa CD-HP ning siydik guruhlarida aniqlangan. Metabolitlar bilan taqqoslaganda, plazma, siydik va najasdagi bir xil metabolitlar mos ravishda 4, 42 va 21 ni tashkil etdi. CD guruhida 34 ta, CD-NPda 39 ta va CD-HP guruhida 40 ta metabolit so'rilgan. M5, M7, M40 va M52 faqat CD-NP guruhlarida, M24, M4l va M48 esa CD-HP guruhlarida aniqlangan.

CD ning turli xil qayta ishlangan mahsulotlarida faol moddalarning so'rilishi va metabolizmida o'zgarishlar kuzatildi. 14-rasmdan biz siydikda HT-sulfat konjugatsiyasining intensivligi (M17) eng yuqori ekanligini aniqladik, undan keyin 3-HPP sulfat konjugasiyasi (M29), metillangan HT sulfat konjugasiyasi (M22), dehidroksillangan CA sulfat. konjugatsiya (M32) va 3,4-digidroksibenzol propion kislota sulfat konjugasiyasi (M19). Qayta ishlangan guruhdagi metabolik mahsulotlarning tarkibi CD guruhiga qaraganda yuqori edi, ayniqsa M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. Ularning 8-O- -D-glyukopiranozil qismidagi 6'-O-kofeoyil guruhining kashshoflari, gidroksitirozol kabi birikmalar o'simtaga qarshi, yallig'lanishga qarshi, antibakterial, antiviral va antifungal xususiyatlarga ega. 23]. Kofe kislotasi yallig'lanishga qarshi, saratonga qarshi va virusga qarshi ta'sirga ega [24]. Bu CD va uning qayta ishlangan mahsulotlarini klinik foydalanish bilan mos edi.

Munozara

CD TCM bo'lib, uning asosiy bioaktiv komponentlari, jumladan PhGs, iridoidlar, polisakkaridlar turli tadqiqot ishlari bilan hujjatlashtirilgan. TCM klinik amaliyotida CD ning qayta ishlangan mahsulotlari xom mahsulotlarga nisbatan keng qo'llanilgan. Qayta ishlash jarayonida kimyoviy tarkibi o'zgaradi, bu dorivor ta'sirning o'zgarishiga olib kelishi mumkin (14-rasm).

PhGs - bu aglikon sifatida gidroksi-feniletil qismini o'z ichiga olgan -glyukopiranozid tuzilishi bilan tavsiflangan fenolik birikmaning bir turi. Ushbu birikmalar ko'pincha ester yoki glikozid aloqalari orqali glyukoza qoldig'iga biriktirilgan kofe kislotasi va ramnozni o'z ichiga oladi. Joriy tadqiqotda CD, CD-NP ning sifatli tahlillari. va CD-HP o'tkazildi va jami 97 ta birikmalar, jumladan, feniletanoid glikozidlar (PhGs), iridoidlar va boshqalar aniqlandi. Olingan natijalar qayta ishlashdan oldin va keyin kimyoviy tarkibdagi o'zgarishlarni ko'rsatdi. 8-O- -D-glyukopiranozil qismidagi 4'-O-kofeoyil guruhiga ega bo'lgan PhGlarning intensivligi, masalan, akteozid, sistanozid C, kampneozid II, osmantus tomoni qayta ishlanganidan keyin pasaydi, PhGlar esa bilan

isoasetoside, isocistanoside, isocampneoside I, isomartynoside, ayniqsa, CD-NP guruhida ortdi. Tuzilishi 6'-O- -D-glyukopiranosil qismiga ega bo'lgan echinakozid va sistanozid B ning intensivligi ham oshdi. 2'-asetil guruhiga ega bo'lgan PhG'lar ko'pincha jarayon davomida gidroliz reaktsiyasi tufayli kamayadi, masalan, tubulozid B, 2-asetillakteozid.

In vivo so'rilgan metabolitlarni o'rganish CD va uning qayta ishlangan mahsulotlarini og'iz orqali yuborishdan keyin amalga oshirildi. II fazaning metabolik jarayonlari asosiy kaskadlar edi va metabolitlarning aksariyati sulfat, glyukuronid va metillangan konjugatlar edi. Feniletanol glikozidlari og'iz orqali so'rilishi va utilizatsiyasi past. Ularning qonga singishi qiyin va in vivo jonli metabolik faollashuvdan so'ng o'z rollarini o'ynash uchun progenitator sifatida ishlaydi. Feniletanoidlar, masalan, gidroksitirozol (HT) va kofein kislotasi (CA) va uning hosilasi 3-gidroksifenilpropion kislotasi (3-HPP) kabi feniletannolaglikonda hosil bo'ladi, bu metabolitlar plazmaga osonroq so'riladi va yaxshi shifobaxsh ta'sir.

CD va uning qayta ishlangan mahsulotlari. HT-sulfat konjugasiyasi (M17) siydikda eng yuqori intensivlikka ega, undan keyin 3-HPP sulfat konjugasiyasi (M29), metillangan HT sulfat konjugasiyasi (M22), dehidroksillangan CA sulfat konjugasiyasi (M32) va 3,{{ 7}}digidroksibenzolpropion kislota sulfat konjugasiyasi (M19). Qayta ishlangan guruhdagi metabolik mahsulotlarning tarkibi CD guruhiga qaraganda yuqori edi, ayniqsa M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Umuman olganda, maqsadli organlarga yuqori ta'sir ko'rsatadigan komponentlar samarali bo'lishi mumkin. Feniletanoidlarning etarli miqdori va ularning hosilalari in vitroda baholangan va aniqlangan. Akteozid xarakterli birikma bo'lib, uning tarkibi guruch-vino bilan qayta ishlanganidan keyin kamayadi va izoakteozid, izokistanozid C, izokampneozid I ning miqdori mos ravishda oshadi. CA va HT hosilalari kabi PhGlarning parchalanish mahsulotlari bio-namunalarda baholanishi mumkin va guruch-sharobni qayta ishlash in vivo metabolitlarning so'rilishini kuchaytirishi mumkin.

Xulosa

Ushbu tadqiqotda CD va uning qayta ishlangan mahsuloti ekstraktlarida 97 ta birikma aniqlandi. Ko'tarilgan haroratda bir nechta glikozidlarning parchalanishi sodir bo'ldi va natijada ba'zi yangi izomerlar va komplekslar sintez qilindi. In vivo tadqiqotda prototip komponentlari (10) va metabolitlar (44) kalamush plazmasi, najas va siydikda aniqlangan yoki taxminiy baholangan. Ikkinchi bosqich metabolik jarayonlar asosiy kaskadlar bo'lib, metabolitlarning aksariyati HT, CA va ularning hosilalari 3-gidroksifenilpropion kislotasi 3-HPP kabi echinacoside yoki acteosid bilan bog'langan. Ushbu metabolitlar plazmaga osonroq so'rilishi va yaxshi shifobaxsh ta'sirga ega bo'lishi mumkin. Olingan natijalar shuni ko'rsatdiki, CD ning kimyoviy tarkibi har xil bo'lib, in vitro va in vivo birikmaning tarqalishiga ta'sir qiladi.

Qisqartmalar

PhGs: Feniletanoid glikozidlar; CD: Cistanche deserticola; CMM: Xitoy Materia Medica; TCM: an'anaviy xitoy tabobati; CD-NP: Gistanche deserticola Oddiy bosim ostida guruch-sharob bilan bug'lash orqali qayta ishlangan; CD-HP: Cistanche deserticola Yuqori bosim ostida guruch-vino bilan bug'lash orqali qayta ishlangan; UPLC-Q-TOF-MS: TOF-MS bilan birlashtirilgan ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi; PCA: Asosiy komponentlar tahlili; VIP: proektsiya uchun o'zgaruvchan ahamiyat; CA: kofeik kislota; HA: gidroksitirozol.

Minnatdorchilik

Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Mualliflarning hissalari

LZ, LBN, SJ qo'lyozmani yozishda, loyihalashda qatnashgan. RJ, LPP hayvonlar tajribalarida yordam berdi va barcha raqamlar va jadvallarni tuzdi va yakunladi. ZC, HY. ITZ ushbu tadqiqotni loyihalash va bajarishda yordam berdi va qo'lyozmani ko'rib chiqdi. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmani o'qib chiqdilar va tasdiqladilar.

Moliyalashtirish

Bu ish Xitoy Milliy Tabiatshunoslik Jamg'armasi (Grant No:81874345) va Liaoning viloyati Tabiatshunoslik Jamg'armasi (Grant №: 2020-MS-223) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi

Joriy tadqiqot davomida foydalanilgan va/yoki tahlil qilingan maʼlumotlar toʻplami tegishli muallifdan asosli soʻrov boʻyicha mavjud.

Deklaratsiyalar

Etikani tasdiqlash va ishtirok etishga rozilik

Ushbu tadqiqot uchun eksperimental hayvonlardan foydalanish uchun axloqiy ruxsat Liaoning an'anaviy xitoy tabobati universiteti Tibbiy etika qo'mitasidan olingan (Tasdiqlash raqami: 2018YS(DW)-044-01), ushbu tadqiqotdagi barcha eksperimental protseduralar axloqiy standartlarga muvofiq edi. Liaoning an'anaviy xitoy tibbiyot universitetining tibbiy etika qo'mitasi.

Nashr qilishga rozilik

Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Raqobatdosh manfaatlar

Mualliflar oshkor qiladigan manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qiladilar.

Muallif tafsilotlari

'Farmatsevtika bo'limi, Liaoning an'anaviy xitoy tabobati universiteti, Dalyan, Liaoning, Xitoy.'Monos guruhi dori tadqiqot instituti, Ulan-Bator 14250, Mo'g'uliston.

Qabul qilingan: 31-may 2021-yil Qabul qilingan: 17-sentyabr 2021-yil Onlayn chop etilgan: 28-sentyabr 2021-yil

Chje Li1, Lkhaasuren Ryenchindorj2, Bonan Liu1, Ji Shi1*, Chao Chjan1, Yue Hua1, Pengpeng Liu1, Guoshun Shan1 va Tianchju Jia1

Ma'lumotnomalar

1. Xitoy farmakopeyasi komissiyasi. Xitoy Xalq Respublikasi farmakopiyasi, jild. I. Pekin: Xitoy tibbiyot fanlari matbuoti; 2020. p. 140.
2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): an'anaviy xitoy tibbiyotining eng yaxshi farmatsevtika sovg'alaridan biri. Old Farmakol. 2016;7:41.
3. Liu BN, Shi J, Chjan C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Fresh Cistanche deserticola uchun turli quritish ishlov berish usullarining uning tarkibiy qismlariga ta'siri. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.
4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Cistanches Herba uchun yuqori bosimli bug'lash jarayonini optimallashtirish. Chin Trad Patent Med. 2019;11:2576–80.
5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Vang J, La-Sika, Shi J. Cistanches herba ning qayta ishlashdan oldin va keyin D-galaktoza bilan qo'zg'atilgan qarish kalamushlarining anti-aging funktsiyasi va immun funktsiyasiga ta'siri. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.
6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Xan ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Cistanche deserticola YMCA da laksatif tarkibiy qismlarni o'rganish. Zamonaviy Chin Med. 2015;17(4):307–10.
7. Liu BN, Shi J, Li Z, Chjan C, Liu P, Yao V, Jia T. Cistanche deserticola ning neyroendokrin-immun funktsiyasini va uning glyukokortikoidli kalamush modelidagi guruch sharobini bug'lash mahsulotlarini o'rganish. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2020;22:5321976.
8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Cistanches herba tomonidan sichqoncha modelida buyrakni tetiklantiruvchi funktsiyani kuchaytirish o'rta-yuqori haroratda tez quritilgan. J Med oziq-ovqat. 2019;22(12):1246–53.
9. Vang T, Zhang X, Xie W. Cistanche deserticola YC Ma, "Cho'l ginseng": sharh. Am J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.
10. Fu Z, Fan X, Vang X, Gao X. Cistanches Herba: uning kimyosi, farmakologiyasi va farmakokinetik xususiyatlariga umumiy nuqtai. J Etnofarmakol kol. 2018;219:233–47.
11. Lei H, Vang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang V. Herba Cistanche (Rou Cong Rong): uning fitokimyosi va farmakologiyasini ko'rib chiqish. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.
12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Parkinson kasalligining sichqoncha MPTP modelida echinacoside neyroprotektiv ta'siri. Eur J Pharmacol. 2007;564:66–74.

13. Deng M, Chjao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Tubulosid B ning neyron hujayralarida TNF alfa-induktsiyali apoptozga himoya ta'siri. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.
14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Vang WN, Jiang Y, Tu PF. Tarim cho'lida o'stirilgan Cistanche deserticola poyasidan yallig'lanishga qarshi iridoidlar. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.
15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Tarim cho'lida yetishtirilgan Cistanche deserticola poyasidan yallig'lanishga qarshi ta'sirga ega feniletanoid glikozidlar. Fitoterapiya. 2013;89:167–74.
16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Cistanche tubulosa dan Iridoid va asiklik monoterpen glikozidlari, kankanosidlar L, M, N, O va P. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.
17. Li SL, Song JZ, Qiao CF va boshqalar. Ko'p o'lchovli statistik tahlil bilan UHPLC-TOF-MS tomonidan xom va qayta ishlangan Radix Rehmanniae o'rtasidagi kamsitish uchun potentsial kimyoviy belgilarni tezda o'rganish uchun yangi strategiya. J Pharm Biomed Anal. 2010;51(4):812–23.
18. Peng F, Chen J, Vang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Cistanche deserticola tilimlarida feniletanoid glikozidlar, antioksidant faollik va boshqa sifat belgilarining bug 'qayta ishlash yo'li bilan o'zgarishi. Chem Pharm Bull. 2016;64:1024–30.
19. Ma ZG, Tan YX. Desertliving Cistanche'da sharob bilan bug'langan vaqt oralig'ida oltita feniletanoid glikozidning tarkibi o'zgaradi. Chin Trad Pat ent Med. 2011;33(11):1951–4.
20. Peng F, Xu R, Vang X, Xu C, Liu T, Chen J. Quyoshda quritish paytida dorivor maqsadlarda foydalanish uchun o'rim-yig'imdan keyingi cistanche deserticola sifatiga bug'lash jarayonining ta'siri. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.
21. Cui Q, Pan Y, Zhang V, Zhang Y, Ren S, Vang D, Vang Z, Liu X, Xiao W. Xun akteozidning metabolitlari: profillar, izolyatsiya, identifikatsiya va gepatoprotektiv imkoniyatlar. J Agric Food Chem. 2018;66(11):2660–8.
22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang V, Chen L, Liu X. UPLC-ESI-Q-TOF asosida kalamush plazmasi, safro, siydik va najasdagi Cistanche tubulosa dan echinacoside va acteosid metabolitlarining tizimli tavsifi. -XONIM. Biomed Xromatogr. 2016;30(9):1406–15.
23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Gidroksitirozol: istiqbolli farmakologik faollikka ega tabiiy birikma. J Biotexnol. 2020;309:29–33.
24. Touaibia M, Jan-Fransua J, Doiron J. Kofeik kislota, ko'p qirrali farmakologiya: umumiy ko'rinish. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.

Nashriyot eslatmasi

Springer Nature nashr etilgan xaritalar va institutsional birlashmalardagi yurisdiksiyaviy da'volarga nisbatan betaraf qoladi.