Malayziyada albuminuriya bilan og'rigan va bo'lmagan 2-toifa diabetli bemorlarda aylanma MiRNKlar

AbstraktKirish: Diabetik buyrak kasalligi(DKD) surunkali buyrak kasalligining asosiy sababi bo'lib qolmoqda. Aylanma miRNKlarning disregulyatsiyasi haqida xabar berilgan, bu ularning DKDdagi patologik rolini ko'rsatadi. Ushbu tadqiqot Malayziyaning tanlangan populyatsiyasida albuminuriya bo'lgan va bo'lmagan 2-toifa diabet (T2DM) bemorlarining zardobidagi differentsial ifodalangan miRNKlarni o'rganishga qaratilgan.Usul:Jamoatchilik klinikasida kuzatuvda bo'lgan qirq bir T2DM bemorlari normal (NA), mikro (MIC) va makroalbuminuriya (MAC) guruhlariga bo'lingan. 12 ta namunadagi miRNKlarning differentsial darajalari yo‘lga yo‘naltirilgan (inson fibrozi) miScript miRNA qPCR massivi yordamida aniqlangan va miScript maxsus qPCR massivi (CMIHS02742) (Qiagen GmbH, Hilden, Germaniya) yordamida 33 ta namunada tasdiqlangan.Natijalar:Sarumdagi 3 miRNKning yuqori regulyatsiya tendentsiyalari, xususan, MAC bilan T2DM bemorlarining miR-874-3p, miR{2}}p va miR-145-5p NA bilan solishtirganda. miR- 874-3p ning statistik jihatdan sezilarli darajada oshishi (p= 0.04) va miR-101-3p (p= 0.01) tekshirish guruhida koʻrildi. Glomerulyar filtratsiyaning taxminiy tezligi (eGFR) va miR-874-3p (p= 0.05), miR-101-3p (p= 0.03) va miR-145-5p (p= 0.05), shuningdek, miR-874-3p va yosh o'rtasidagi ijobiy korrelyatsiya (p= 0.03) Pearson korrelyatsiya koeffitsienti tahlili bilan ko'rsatilgan.Xulosa:Ushbu tadqiqotda T2DM bilan og'rigan bemorlarning qon zardobida ilgari ma'lum bo'lgan miR-145-5p va ehtimol yangilari, ya'ni miR-874-3p va miR{2}}p ning ko'tarilishi aniqlandi. . eGFR va bu miRNKlar o'rtasida sezilarli korrelyatsiya mavjud edi. Ushbu tadqiqot natijalari differensial ravishda ifodalangan miRNKlarning taxminiy rollarini yanada tadqiq qilish uchun dalda beruvchi dalillarni taqdim etdi.DKD.

Buyrak kasalligi uchun cistanche herba uchun bosing

Kirish

Diabetik buyrak kasalligi (DKD) AQShda oxirgi bosqichdagi buyrak kasalliklarining 39% ni tashkil qiladi [1]. Xuddi shunday, DKD Malayziyada surunkali buyrak kasalligi (KBH) ning asosiy sababi bo'lib qolmoqda va 2018 yilda yangi dializ bemorlarining 69 foiziga hissa qo'shgan [2]. DKD patologiyasi asosan giperglikemiya tufayli yuzaga keladi, bu hujayra ichidagi signalizatsiya yo'llarining faollashishiga va natijada buyrak fibroziga olib keladi [3]. Boshqaruv sohasidagi yutuqlarga qaramay, hozirgi biomarkerlar va davolash usullari uning buyrak kasalligining oxirgi bosqichiga o'tishini oldini olmaydi [3]. Shunday qilib, zudlik bilan DKD vositachilari va mexanizmlarini yaxshiroq tushunish kerak.

Mikroribonuklein kislotasi (miRNK) - bu gen ekspressiyasining muhim post-transkripsiya regulyatori sifatida paydo bo'lgan kichik kodlanmagan RNK oilasi [4]. MiRNKlarning noaniq ifodasi va ularning DKD ning hujayra mexanizmidagi ishtiroki kuzatilgan [3]. Ushbu tadqiqot albuminuriya bo'lgan va bo'lmagan 2-toifa qandli diabet (T2DM) bemorlarining zardobida tanlangan miRNKlarning ekspressiyasini aniqlashga qaratilgan. Dunyo bo'ylab shunga o'xshash tadqiqotlar ilgari ko'rib chiqilganidek, turli populyatsiyalarda o'tkazilgan [5-7]. Biz T2DM bilan og'rigan bemorlarda fibrotik yo'llar bilan bog'liq bo'lgan miRNKlar tanlovining differensial ifodalanishini o'rganishni maqsad qildik, ularning ba'zilari ilgari DKDda o'rganilgan. Oldingi tadqiqotlar miRNK ifodasida etnik bilan bog'liq farqlarni taklif qildi [8, 9]. Shu sababli, oldingi topilmalarni tasdiqlashdan tashqari, ushbu tadqiqot Malayziya aholisida noyob tarzda ifodalangan yangi miRNKlarni ochib berishi mumkin.

Materiallar va usullar

Aholini o'rganish

Ushbu kesmaviy tadqiqotda 2019-yilning yanvaridan apreligacha jamoat klinikalarida kuzatuvda bo‘lgan 41 mavjud T2DM bemor ishtirok etdi. Bu tadqiqot bir 2-bosqichli protsedurani o‘z ichiga oldi: (1) 12 bemorning zardobidagi miRNKlar (skrining kohorti). ) profillangan va (2) eng mos miRNKlar 33 bemorning sarumlari bilan tasdiqlangan (valifikatsiya kohorti deb ataladi). Bunga skrining kohortasidan 4 nafar bemor kirdi. Ayrim bemorlardan yozma rozilik olindi. Ushbu tadqiqot uchun axloqiy ruxsat Malayziya Sog'liqni saqlash vazirligining Tibbiy tadqiqotlar va etika qo'mitasidan (MREC) olingan. Qo'shilish mezonlari T2DM bemorlari va mavjud klinik va laboratoriya ma'lumotlari edi. 1-toifa DM bilan og'rigan bemorlar; DKD bo'lmagan; saraton, o'tkir febril kasallik yoki yaqinda infektsiyalar kabi qo'shma kasalliklar; homiladorlik; va tug'ruqdan keyingi davr istisno qilindi.

Bemorning tibbiy ma'lumotlaridan quyidagilarga oid ma'lumotlar olingan: (1) demografik ma'lumotlar, shu jumladan yoshi va jinsi; (2) qon bosimi, vazn, T2DM davomiyligi, davolash va boshqa diabetik asoratlar kabi klinik ma'lumotlar; (3) laboratoriya ma'lumotlari, shu jumladan ochlik plazmasidagi glyukoza, glyukozalangan gemoglobin A1c (HbA1c), albumin-kreatinin nisbati va sarum kreatinin. Bemorlar albuminuriya darajasiga ko'ra 3 guruhga bo'lingan: normoalbuminuriya (NA), mikroalbuminuriya (MIC) va makroalbuminuriya (MAC).

Ta'rif

Ushbu tadqiqotda,

NA, MIC va MAC albumin-kreatinin nisbati sifatida belgilangan<30, between 30 and 300 and >300 mg/g kreatinin, mos ravishda, 3 dog'li siydik to'plamining kamida 2 tasida [10]. Hisoblangan glomerulyar filtratsiya tezligi (eGFR) Surunkali buyrak kasalligi-epidemiologiya kreatinin tenglamasi asosida hisoblab chiqilgan.

Sarum tayyorlash

Vakutainer 10-ml BD ®SSTTM naychalarida (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, AQSH) ochlik (8 soatdan kam yoki unga teng) toʻliq qon namunalari yigʻilgan holda xona haroratida 30- daqiqa qoldirildi. 1,900 g da 10- daqiqa sentrifugalashdan oldin qon ivishi. Yuqori faza yig'ib olindi, 0.22-mk Minisart®PES filtri (Sartorius, Gottingen, Germaniya) bilan filtrlandi va tahlil qilinguncha -80 darajada saqlash uchun mikrotsentrifuga naychalariga ajratildi.

Jami miRNK

Izolyatsiya Jami miRNK ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen GmbH) yordamida ajratilgan. Qisqasi, Qiazol liziz reagenti denaturatsiya uchun 200 mkL sarum alikvotiga qo'shildi, so'ngra miRNeasy Serum/Plazma Spike-In Control C. elegans miR-39 miRNA mimikasi (Qiagen GmbH) RNKning tiklanishini va teskarisini kuzatish uchun qo'shildi. transkripsiya samaradorligi. Fazalarni ajratish uchun xloroform qo'shildi, so'ngra yuqori suvli fazaga 100% etanol qo'shildi. Yuvish bosqichlariga Buffer RWT, Buffer RPE va 80% etanol erishildi. RNK RNeasy MinElute spin ustuni membranasiga 14 mkl RNazsiz suv qo'shish orqali elutsiya qilindi. RNK miqdori va sifati NanoDrop 1000 spektrofotometri (Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, DE, AQSH) tomonidan aniqlandi, foydalanilgunga qadar -80 darajada saqlanadi. MiRNKning cDNKga teskari transkripsiyasi (RT) va oldindan kuchaytirilishi ishlab chiqaruvchining protokoliga ko'ra, mos ravishda miScript RTII to'plami (Qiagen GmbH) va miScript PreAMP PCR to'plami (Qiagen GmbH) bilan 6 mkL shablon RNK va 5 mkl suyultirilgan holda amalga oshirildi. mos ravishda cDNA

Haqiqiy vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasining miqdoriy tahlili

Skrining kohortasining zardobida aylanib yuruvchi miRNKlar yoʻlga yoʻnaltirilgan (inson fibrozi) miScript miRNA qPCR massivi (Qiagen GmbH) tomonidan aniqlandi va tanlangan miRNKlar keyinchalik tekshirish kohortida maxsus miScript miRNA qPCR massivi (CMIHS02742) bilan tasdiqlandi. Qiagen GmbH) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Har bir reaksiya cDNA shablonini, 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 10x miScript Universal Primer, 10x miScript Primer Assay va RNazsiz suvni va umumiy hajmi 25 mklni tashkil etadigan suyultirilgan cDNA shablonini o'z ichiga oladi. Miqdoriy real vaqtda PCR Eppendorf Mastercycler ep realplex 4 da amalga oshirildi, u quyidagicha dasturlashtirilgan: 95 gradusda 15 daqiqa, 94 gradusda 15 s, 55 gradusda 30 s va 40 tsikl bilan 70 gradusda 30 s.

MiRNKning nisbiy miqdorini aniqlash

Haqiqiy vaqtda PCR ma'lumotlarini tahlil qilish Qiagen Gene Globe Data Analysis Center dasturi (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/) yordamida amalga oshirildi. Nisbiy ifoda (RE) 2−∆Ct usuli bilan olingan, bunda har bir miRNKning ifodasi SNORD95 yoki Global Ct oʻrtacha geninikiga normallashtirildi. Qatlamning o'zgarishi nazorat guruhidagi (NA) normallashtirilgan miRNK ifodasiga bo'lingan har bir guruhdagi (MIC yoki MAC) normallashtirilgan miRNK ifodasidan hisoblab chiqilgan. p qiymatlari nazorat guruhi va test guruhlaridagi har bir gen uchun takroriy RE (2−∆Ct) qiymatlarining mustaqil namunalar t-testi asosida hisoblab chiqilgan. qPCR ma'lumotlar tahlilining keyingi tekshiruvi Microsoft Excel va IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp, Ar monk, NY, USA) Microsoft Windows dasturiy ta'minoti uchun 25-reliz yordamida qo'lda amalga oshirildi.

Tekshirish uchun skrining kohortida miRNKlarni tanlash

Initially, the relative quantification of miRNAs in the screening cohort was based on the global Ct mean normalization method, and Ct >Qiagen GeneGlobe ma'lumotlar tahlil markazi (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/) tomonidan tavsiya etilganidek, 30 salbiy ifoda sifatida qabul qilindi. Onlayn qo'shimcha 1-jadval (barcha onlayn qo'shimcha materiallar uchun www.karger.com/doi/10.1159/000518866 ga qarang) global Ct o'rtacha darajasiga normallashtirilgan skrining kohortidagi 84 miRNKdan iborat REni ko'rsatadi. Muhim ±2.0-katta oʻzgarishlarga ega boʻlgan va sifatli MiRNKlar dasturiy taʼminot tomonidan aniqlanganidek, tekshirish uchun tanlangan. Bundan tashqari, boshqa miRNKlar ularning p qiymatlari reytingi va DKD va DKD bilan bog'liq yo'llardagi oldingi tadqiqotlardagi ishtiroki asosida tanlangan, bunda eng ko'p taxminiy xabarchi RNK maqsadlariga ega miRNKlar tanlangan. Onlayn qo'shimcha 2-jadvalda tekshirish uchun miRNKlarni tanlashda qo'llaniladigan qo'shimcha mezonlar ko'rsatilgan. Tekshirish tahlilida miRNK ifodasi SNORD95 ga normallashtirildi, chunki global Ct o'rtacha usuli mos emas edi va Ct> 35 salbiy ifoda sifatida qabul qilindi. Standartlashtirish uchun biz SNORD95 normalizatsiyasi asosida skrining kohortida tanlangan miRNKning RE ni qayta tahlil qildik va bu tekshirish kohorti bilan solishtirganda keyingi tahlil uchun foydalanildi.

Statistik tahlil

Normality check of continuous variables was done using both statistical tests (Shapiro-Wilk, Kolmogrov-Smimov, skewness, and kurtosis) and visual inspection of plots (histogram, normal Q-Q, and detrended normal Q-Q). Continuous data were presented as either mean ± standard deviation or median (interquartile range). A comparison of 2 independent groups was done using an independent samples t-test (Tables 2–4). Comparison of >2 mustaqil guruh mustaqil namunalar Kruskal-Wallis testi yordamida amalga oshirildi (1-jadval). Kategorik o'zgaruvchilarni taqqoslash mumkin bo'lmagan holatlarning ch2 testi yoki Fisherning aniq testi yordamida amalga oshirildi (1-jadval). Tanlangan miRNA RE va uzluksiz o'zgaruvchilar (demografik va klinik ma'lumotlar) o'rtasidagi korrelyatsiya Pearson korrelyatsiya koeffitsienti yordamida amalga oshirildi. Tanlangan miRNA RE va uning muhim bashoratchilari o'rtasidagi chiziqli munosabatni tahlil qilish uchun bir nechta regressiya testi ishlatilgan. Statistik hisob-kitoblar Microsoft Windows uchun IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp) 25-versiyasi va Prism 8 statistik dasturlar paketi (GraphPad, San-Diego, CA, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Statistik ahamiyatlilik p < 0.05 sifatida aniqlandi.

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

BUYRAK INFEKTSIONIDA 25% EXINAKOSID VA 9% AKTEOSID BO'LGAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRAKTINI OLING.