Cistanche Tubulosa apoptoz va glial hujayradan olingan neyrotrofik omilni tartibga solish orqali dopaminerjik neyronlarni himoya qiladi: in Vivo va in Vitro-Ⅱ

Xulq-atvor testlari

Suzish testi (Chju va boshq., 2014)

Sichqonlarda tana harakatlarini muvofiqlashtirish suzish testi bilan o'lchandi. Sichqonlar alohida-alohida 10 sm suv bo'lgan suv idishiga (balandligi 25 sm va diametri 10 sm) joylashtirildi va ularning 5 daqiqadan ortiq statsionar davomiyligini qayd etish uchun tinch muhitda sinovdan o'tkazildi.

Ochiq dala testi (Kawai va boshqalar, 1998)

Lokomotor faollik ochiq maydon testi yordamida o'lchandi. Sichqonlar jim va zaif yoritilgan muhitda sinovdan o'tkazildi va alohida-alohida 30 sm × 30 sm × 15 sm shaffof akril idishga quyida 6 sm × 6 sm ajratish panjarasi bilan joylashtirildi. Sichqonlarga atrof-muhitga moslashish uchun 10 daqiqa vaqt berildi, so'ngra o'rtacha qiymatlarni olish uchun grid sonining ambulatsiyasi va individual sichqonlarning boqish chastotasi ketma-ket besh marta o'lchandi.

JINSIY FONKSIYONNI YASHLASHTIRISH UCHUN TABIY CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Miya to'qimalaridan namuna olish

To'qimalardan namuna olishdan oldin, sichqonlar suvga erkin kirish huquqi bilan ad libitum bilan oziqlangan va ketma-ket 14 kun davomida dori aralashuvini olgan. Har bir guruhdan to'rtta sichqon tanlab olindi va tezda boshi kesildi. Har bir hayvondan SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) ajratilgan va muzga joylashtirilgan. Miya to'qimalari qonni olib tashlash uchun 0,9% muzdek sovuq natriy xlorid eritmasi bilan yuvildi va -80 ◦C da saqlashdan oldin filtr qog'ozida quritildi. Har bir guruhdagi to'rtta sichqon qorin bo'shlig'iga behushlik qilindi va ularning ko'krak qafasi ochildi. Keyin har bir hayvonning chap qorinchasiga infuzion igna kiritildi. Qon aylanish tizimidagi qonni olib tashlash uchun o'ng atrium qo'shimchasi kesildi va ketma-ket perfuziyani ta'minlash uchun jigar rangpar bo'lgunga qadar hayvonga 4◦C normal fiziologik eritma yuborildi. O'ng atriumning oqava suvlari aniq bo'lgach, har bir hayvonga 4% paraformaldegid fiksatori yuborildi. Perfuziyadan so'ng, har bir hayvonning miya to'qimalari ehtiyotkorlik bilan ajratildi va 24 soat davomida 4% paraformaldegidda mahkamlandi. So'ngra qattiq miya to'qimalari suv ostida yuviladi, etanol eritmalarining bosqichma-bosqich seriyasida suvsizlanadi va ksilen eritmasida tozalanadi. Shundan so'ng kerosinni botirish va o'rnatish amalga oshirildi.

HPLC tomonidan o'lchangan DA miqdorining o'zgarishi

Har bir guruhdagi nano kukunli SN 0,9% natriy xlorid eritmasi (1:9 nisbat) bo'lgan muz hammomiga joylashtirildi. Miya to'qimasi ultratovushli hujayra buzuvchisi yordamida bir hil holga keltirildi va supernatantni olish uchun 4 ° C da 20 daqiqa davomida 1200 rpm da santrifüj qilindi. HPLC uchun 30◦C ustun haroratida Hypersil AA-ODS ustuni (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) ishlatilgan. Floresansni aniqlash 280 nm lex va 340 nm lem da amalga oshirildi. In'ektsiya hajmi 10 µL edi.

TH, GDNF, GFR 1 va Ret ifodasi immunohistokimyo tomonidan aniqlangan

Har bir hayvondan alohida miya toʻqimalarining kerosin boʻlaklari (qalinligi 5 mkm) ajratilib, shisha slaydlarni tekislash va yopishtirish uchun 40◦C issiq suv hammomiga joylashtirildi. Barcha to'qimalar slaydlari 3-6 soat davomida 60 ° C pechda inkubatsiya qilindi, so'ngra ksilen dewaxing, gradient etanol dehidratsiyasi va limon kislotasi tamponida inkubatsiya qilish va mikroto'lqinli pechda 20 daqiqa davomida isitish orqali antigen olish. Keyin to'qima slaydlari xona haroratida 3% H2O2 eritmasida 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. PBSda uch marta yuvilgandan so'ng, to'qimalarning slaydlari normal sarum bilan yopiq kamerada 20 daqiqa davomida xona haroratida inkubatsiya qilindi. Immunogistokimyoviy bo'yash ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq o'tkazildi. Motic Med 6.0 tasvir analizatori ijobiy bo'yalgan hujayralardagi integratsiyalashgan optik zichlik qiymatini hisoblash uchun ishlatilgan.

Sichqonlarning miya to'qimalarida Western Blot tahlili

Ushbu tadqiqot tirozin gidroksilaza (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 va Baxning protein ifodasini baholadi. Har bir guruhdan olingan miya lizatasi muz ustida 3{10}} daqiqa davomida gomogenlashtirildi, keyin past haroratda, 2{16}},000 rpm, 4 ◦C da santrifüj qilindi. Supernatantni yig'ish uchun 5 daqiqa. Protein namunalari yuqorida tavsiflanganidek 10% SDS-PAGE jeli yordamida doimiy bosim ostida ajratildi. Birlamchi antikor kontsentratsiyasi: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml va Bax 0,11 mg/ml. Jarayon yuqoridagi kabi edi.

TABIY CISTANCHE TUBULOSA ANTI-ALZGEYMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Statistik tahlil

Ushbu tadqiqot ma'lumotlarni qayta ishlash va tahlil qilish uchun SPSS 20.0 statistik dasturidan foydalanildi. Parametr qiymatlari o'rtacha ± standart og'ish (¯x ± S) sifatida ifodalangan. Bir faktorli ma'lumotlarni tahlil qilish uchun ANOVA ishlatilgan. Guruhlarni solishtirish uchun LSD yoki Games-Howell testi ishlatilgan. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

NATIJALAR

C. tubulosa nanopowderning faol komponentlari

200-400 nm skanerlash oralig'ida C. tubulosadagi ECH va 330 nmdagi VER maksimal yutilish cho'qqisiga ega bo'lib, u 20 daqiqa ichida paydo bo'ldi. ICA 270 nm da maksimal yutilish cho'qqilariga ega edi va 20 daqiqadan so'ng paydo bo'ldi (1A-rasm). Natijalar salbiy namunalar aniqlashga xalaqit bermasligini ko'rsatdi (1B-rasm). Namunalar va nazorat bir xil xromatografik cho'qqilarga ega edi va salbiy namunada yo'q edi. Bu namunadagi boshqa ingredientlar o'lchanadigan komponentga xalaqit bermasligini ko'rsatdi. Bundan tashqari, uchta komponent va qo'shni cho'qqilar ajralishning asosiy chizig'iga etib borishi mumkin va ajratish darajasi 1,5 dan katta edi.

C. tubulosa nanopowder kamaytirilgan MPP+ -MES23.5 hujayralarida induktsiya qilingan sitotoksiklik

MES23.5 hujayralarining hayotiyligi MPP + kontsentratsiyasining ortishi bilan sezilarli darajada kamaydi. 2F-rasmda MPP+ ning turli konsentrasiyalarining sezilarli sitotoksikligi ko'rsatilgan.

C. tubulosa nanopowder MPP{0}}sitotoksikligini kamaytirdi va MES23.5 hujayralarining hayotiyligini oshirdi. 2G-rasmda C. tubulosa nano kukunining 10–250 µg/ml dozalari MPP+-davolangan MES23.5 hujayralariga dozaga bog‘liq himoya ta’sir ko‘rsatganligini ko‘rsatadi.

C. tubulosa nanopowderning sitomorfologik ta'siri

Oddiy MES23.5 hujayralari yaxshi hujayra yopishishiga ega va aniq hujayra chegaralari va sinapslari bilan milya shaklida edi. MPP+-zararlangan MES23.5 xujayralari zaif hujayra yopishishi va qisqarishini ko'rsatdi va ularning ko'plari qisqargan sinapslar bilan mediada to'xtatildi. Bu hujayralar to'plangan, kichraygan va dumaloq bo'lib, ichida vakuolalar bo'lgan va yadrolar parchalangan yoki yiqilib ketgan. Turli dozalarda C. tubulosa nanopowder, hujayra yopishishini va avtomobil guruhining sinaptik tozalanishini yaxshilash orqali MES23.5 hujayralarining sitomorfologiyasini turli darajada yaxshiladi. Yuqori dozali C. tubulosa davolash guruhidagi MES23.5 hujayralari normal nazorat guruhiga o'xshash morfologiyani ko'rsatdi (2A-E-rasmlar).

C. tubulosa nanopowderning hujayralardagi TH ifodasi va apoptoziga ta'siri

3-rasmda transport vositalari guruhidagi TH oqsili ifodasining sezilarli darajada kamayishi ko'rsatilgan. C. tubulosa ning turli dozalari bilan davolash qilingan guruhlarda TH oqsili ifodasi turlicha oshdi. Biroq, LSD testi davolash qilingan uchta guruh o'rtasida sezilarli farq yo'qligini ko'rsatdi.

4-rasmda oqim sitometriyasi yordamida apoptozni baholash natijalari ko'rsatilgan. Avtotransport guruhidagi apoptoz darajasi boshqa guruhlarga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi. C. tubulosa nanopowderning turli dozalari bilan ishlov berilgan hujayralar, transport vositalari guruhi bilan solishtirganda apoptotik tezligining turli darajada pasayishini ko'rsatdi. O'rta va yuqori dozali C. tubulosa davolash guruhidagi hujayralar, boshqa C. tubulosa davolash guruhlari bilan solishtirganda apoptotik tezligida eng sezilarli yaxshilanishga ega edi. LSD testi shuni ko'rsatdiki, davolash qilingan ikki guruh o'rtasida sezilarli farq yo'q, lekin past dozali guruh o'rtasida ham sezilarli farq bor.

C. tubulosa nanopowderning hujayralardagi Bcl2/Bax oqsili ifodasiga ta'siri

Shakl 5 shuni ko'rsatadiki, vosita guruhining hujayralarida Bcl2 oqsilining ifodasi oddiy nazorat guruhiga nisbatan sezilarli darajada past bo'lgan. Aksincha, avtotransport guruhining hujayralarida Bax proteinining ifodasi oddiy nazorat guruhiga qaraganda ancha yuqori edi. C. tubulosa davolash guruhlari MPP+-davolangan MES23.5 hujayralarida Bcl2 oqsili ifodasining ortishi va Bax proteini ifodasining kamayganligini ko'rsatdi. Davolangan uchta guruh o'rtasida LSD testida sezilarli farqlar mavjud edi. Ushbu ta'sirlar dozaga bog'liq edi.

Xulq-atvor testlari

Suzish testi natijalari shuni ko'rsatdiki, transport vositalari guruhidagi sichqonlar nisbatan uzoq statsionar vaqtga ega bo'lib, vaqt o'tishi bilan ko'paygan. 14-kuni, avtomobil guruhidagi sichqonlar normal nazorat guruhidagi sichqonlarga qaraganda ancha uzoqroq statsionar vaqtga ega edi. Sichqonlarning statsionar davomiyligi

past dozaC. tubulosadavolash guruhi avtomobil guruhidagi sichqonlarnikidan sezilarli darajada farq qilmadi. Biroq, yuqori dozali C. tubulosa davolash guruhidagi sichqonlarning statsionar davomiyligi avtomobil guruhidagi sichqonlarga qaraganda sezilarli darajada kamroq edi.

Ochiq dala testi natijalari shuni ko'rsatadiki, sichqonlarda MPTP-induktsiyasi bilan bog'liq zarardan so'ng, transport vositalari guruhidagi sichqonlar etishtirish chastotasi bilan ko'rsatilgandek, o'z-o'zidan faollik qobiliyatining sezilarli darajada pasayishini ko'rsatdi. 14-kun administratsiyasidan keyinC. tubulosa nano chang, o'rtacha va yuqori dozali davolash guruhlaridagi sichqonlar avtomobil guruhidagi sichqonlarga nisbatan sezilarli darajada yuqori tarbiya chastotalariga ega edi (6A, B-rasmlar).

C. tubulosa nanopowderning sichqonlardagi DA tarkibiga ta'siri

SN ning DA tarkibidagi o'zgarishlar HPLC tomonidan aniqlandi. Avtotransport guruhining miyasida DA tarkibi sezilarli darajada kamayganligi aniqlandi. Past dozali C. tubulosa davolash guruhidagi PD sichqonlarining miyasidagi DA tarkibi avtomobil guruhidagi sichqonlardan sezilarli darajada farq qilmadi. Biroq,C. tubulosa davolashPD sichqonlarining miyasida DA darajasini dozaga bog'liq ravishda oshirdi. Yuqori dozali C. tubulosa bilan davolash qilingan PD sichqonlarining miyalari transport vositalari guruhidagi sichqonlarning miyalariga qaraganda sezilarli darajada yuqori DA tarkibiga ega edi (6C-rasm).

C. tubulosa nanopowderning sichqonlarda TH ifodasiga ta'siri

MPTP bilan qo'zg'atilgan PD sichqonlarining SN-dagi TH-musbat hujayralar soni va TH oqsili ifodasi darajasi nazorat guruhidagi sichqonlarga nisbatan pastroq edi. C. tubulosa davolashdan so'ng, yuqori dozali C. tubulosa davolash guruhi va transport vositalari guruhi o'rtasida sezilarli farq bo'lgan MPTP bilan qo'zg'atilgan PD sichqonlarining SNida TH-musbat hujayralar soni va TH oqsilining ifoda darajasi oshdi. LSD testi orqali; va uchta davolangan guruh o'rtasida sezilarli farqlar mavjud edi (7-rasm).

C. tubulosa nanopowderning sichqonlarda GDNF va uning retseptorlari, GFR 1 va Retning oqsil ifodasiga ta'siri

Ijobiy bo'yalgan hujayralardagi GDNF va uning retseptorlari GFR 1 va Retning protein ifodasi immunohistokimyo yordamida baholandi. Western blot tahlili sichqonlarning turli guruhlari SNdagi protein ifoda darajasini baholash uchun ishlatilgan. Turli guruhlar uchun topilmalar ikkita aniqlash usulidan foydalangan holda o'xshash edi. GDNF va uning retseptorlari oqsillari, GFR 1 va Retning ekspressiyasi, transport vositalari guruhidagi sichqonlarning SN dagi ijobiy bo'yalgan hujayralardagi normal nazorat guruhidagi sichqonlarga qaraganda ancha past edi. C. tubulosa bilan davolashning turli dozalari GDNF-, GFR 1- va Ret-musbat hujayralar sonini oshirdi (8A-S-rasmlar).

Avtotransport guruhidagi sichqonlarning SNdagi GDNF, GFR 1 va Ret ning protein ifodasi nazorat guruhidagi sichqonlarga qaraganda ancha past edi. Davolash konsentratsiyasini oshirishC. tubulosa nanopowerbu oqsillarning ifodasini sezilarli darajada oshirdi. Yuqori dozali C. tubulosa davolash guruhidagi sichqonlarning SNida GDNF, GFR 1 va Ret ning protein ifodasi avtomobil guruhidagi sichqonlarga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (P).< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa nanopowderning sichqonlarda Bcl2/Bax ning protein ifodasiga ta'siri

Bcl2 oqsilining ifodasi sezilarli darajada kamaydi va Bax proteini ifodasi transport vositalari guruhidagi sichqonlarning SNida sezilarli darajada yaxshilandi (P).< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

MUHOKAZA

PD va apoptoz

PD - bu neyrodegenerativ kasallik. Chjan va boshqalarga ko'ra. (2005), tarqalish 55 yoshdan oshgan Xitoy aholisida 10,7% va 65 yoshdan oshganlarda 1,67% ni tashkil qiladi. Global qarishning tezlashishi bilan PD bilan kasallanganlar soni har yili ortib bormoqda va bu bemorlarning oilalariga katta moliyaviy yukni qo'yadi. va umuman jamiyat. Miyada dopaminerjik neyronlar asosan DA sintezi va sekretsiyasida ishtirok etadi. Ular markaziy asab tizimida keng tarqalgan va asosan SNda (80%) joylashgan. TH DA sintezi uchun tezlikni cheklovchi asosiy ferment hisoblanadi. Shunday qilib, TH faolligini inhibe qilish DA sintezini kamaytiradi (Huot va Parent, 2007). PD ning asosiy patologik va biokimyoviy o'zgarishlari SNdagi dopaminergik neyronlarning apoptozi, nigrostriatal DA ning sezilarli darajada pasayishi va dopaminerjik neyronlarda Lyui jismlarining shakllanishi (Dexter va Jenner, 2013). PD etiologiyasi bog'liq bo'lgan genetik omillar, atrof-muhit omillari va asab tizimining qarishi bilan bog'liq (Allam va boshq., 2005). PD patogenezi zamonaviy tibbiyotda noaniq bo'lib qolmoqda. 1960-yillarning oxiridan boshlab levodopani almashtirish terapiyasi PDni davolashda muvaffaqiyatli qo'llanildi va PD davolashda asosiy burilish nuqtasi sifatida e'tirof etildi. Biroq, ushbu terapiyaning uzoq muddatli qo'llanilishi nojo'ya ta'sirlarni keltirib chiqaradi va terapiya PDning asosiy sabablarini davolamaydi (Del Sorbo va Albanese, 2008). Shuning uchun dopaminerjik neyronlarni himoya qilishga qaratilgan yangi dorilar yoki davolash usullari bo'yicha faol tadqiqotlar PDni davolash uchun juda muhimdir.

Oldingi tadqiqotlarda terminal deoksinukleotidil transferaza vositachiligidagi dUTP nick end yorlig'ini qo'llash PD bilan og'rigan bemorlarning SNidagi dopaminerjik neyronlarning 0.6% -4.8% apoptozni ko'rsatishini ko'rsatdi (Mochizuki va boshq., 1996). Elektron mikroskop apoptotik xususiyatlarni, shu jumladan dopaminerjik hujayralardagi xromatik kondensatsiya va apoptotik jismlarni ko'rsatdi (Anglade va boshq., 1997). Tompkins va boshqalar. (1997) PD, AD va diffuz Lewy tanasi kasalligi (DLBD) bilan og'rigan bemorlarning miya to'qimalarining otopsilarining ultrastrukturaviy tahlilini o'tkazdi. Ular PD va DLBD kasalliklarida SN ning zich qatlamida apoptotik tanalarni topdilar, bu PD va shunga o'xshash kasalliklarda neyronal apoptozning ishonchli dalillarini taqdim etdi. Shuning uchun dopaminerjik neyronlarda apoptozning kamayishi yoki bostirilishi PD davolash uchun asosiy hisoblanadi.

Oldingi tadqiqotlar MPTP PDga o'xshash simptomlarni keltirib chiqarishini ko'rsatdi. MPTP qon-miya to'sig'ini kesib o'tadi va astrositlarda B tipidagi monoamin oksidazlar tomonidan metabollanadi. Keyinchalik u DA tashuvchisi oqsillarini qabul qilish orqali dopaminerjik neyronlarning mitoxondriyalarida to'plangan zaharli MPP + ga aylanadi. Shunday qilib, u mitoxondrial nafas olish zanjirining kompleks I faolligini va ATP sintezini inhibe qiluvchi ortiqcha kislorodli erkin radikallarni hosil qiladi. Ushbu hodisalar erkin radikal shakllanishi va oksidlovchi stress reaktsiyalarini yanada kuchaytiradi va oxir-oqibat dopaminerjik neyronlarning nasli va o'limiga olib keladi. Shunday qilib, ushbu tadqiqot MES23.5 dopaminergik neyronlarida in vitro transport vositasini yaratish uchun MPP + va o'zaro tekshirish uchun transport vositasi sichqonchasini qo'zg'atish uchun MPTP dan foydalangan. MTT tahlili natijalariga ko'ra, MPP + MES23.5 hujayralarining hayotiyligini sezilarli darajada kamaytirdi, bu MPP + ning dopaminergik neyronlar uchun sitotoksik ekanligini ko'rsatdi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, C. tubulosa anti-apoptotik oqsillar ekspressiyasini samarali kuchaytirgan va MPP{11}}induktsiyasi bilan bog'liq apoptozning ko'payishini inhibe qilgan.

PD va GDNF

GDNF neyrotrofik omil bo'lib, birinchi marta Lin va boshqalar tomonidan ajratilgan. (1993). Lin va boshqalar. (1993) shuningdek, GDNF kalamushlarning o'rta miyasidagi dopaminerjik neyronlarga o'ziga xos oziqlanish ta'siriga ega ekanligini ko'rsatdi. GDNF, neurturin (NTN), persefin (PSP) va artemin (ART) GDNF oilasini tashkil qiladi. Ular tarkibiy jihatdan o'xshash va funktsional jihatdan bog'liq bo'lgan sekretor oqsillardir (Kotzbauer va boshq., 1996; Baloh va boshq., 1998; Milbrandt va boshq., 1998; Woodbury va boshqalar, 1998).

GDNF retseptorlari ikkita komponentdan iborat. Birinchi komponent, GFR, glikosilfosfatidilinositol (GPI) ning tashqi membranasiga mahkamlanadi va konneksin yuzasiga mahkamlanadi. Ikkinchi komponent Ret oqsilidir. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, GFR ning to'rt xil turi mavjud: GFR 1, GFR 2, GFR 3 va GFR 4. GFR 1 - GDNF ning yuqori afinitetli retseptorlari (Onochie va boshq., 2000; Chen va boshq., 2001; Lindahl). va boshq., 2001). Ret oqsili GDNF ning funktsional retseptoridir. GDNF ning gomodimer molekulasi komplekslar hosil qilish uchun GFR 1 bilan bevosita bog'lanadi va Ret bilan o'zaro ta'sir qiladi, natijada Retning dimerizatsiyasi va faollashishi sodir bo'ladi. Retning avtofosforilatsiyasi tufayli Ret bir nechta umumiy TH signalizatsiya yo'llarini faollashtiradi. Ret oqsili yo'q bo'lganda, GDNF mRNK ifodasi va C-fosning funktsional faolligiga qo'shimcha ravishda MAPK, PI-3 va PLC-ning oqsil fosforlanishiga olib keladi, GFR 1 retseptorlari oqsili (He va boshq., 2008).

Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, GDNF dopaminerjik neyronlarga eng kuchli himoya ta'siriga ega (Rangasamy va boshq., 2010; Campos va boshq., 2012). Dopaminerjik neyronlarga zarar etkazish uchun MPTP va 6-gidroksidopamin (6-OHDA) dan foydalanadigan transport vositalarida GDNF apoptozni kamaytirish va ildiz hujayralarining differentsiatsiyasini qo'zg'atish uchun aksonal o'sishni rag'batlantirish orqali dopaminerjik neyronlarni himoya qiladi (Lukas va boshq., 2012; Littrell va boshqalar, 2013). Lin va boshqalar. (1993) GDNF neyronlarda DA ning o'zlashtirilishini rag'batlantirish uchun dopaminerjik neyronlarning hayotiyligini, differentsiatsiyasini va aksonal o'sishini rag'batlantirishini ko'rsatdi. Tadqiqot shuni ko'rsatdiki, GDNF nafaqat o'tkir zaharlanishning oldini oldi, balki dopaminerjik neyronlarda MPP + yoki 6-OHDA ning uzoq muddatli toksikligini engillashtirdi, bundan tashqari stressli yoki shikastlangan hujayralardagi hujayra o'limining oldini oldi (Yu va boshq., 2010). Bundan tashqari, GDNF dopaminerjik neyronlarni retrograd degeneratsiyadan qutqarish uchun o'rta miyada (Lindsay, 1995) dopaminerjik neyronlarga nisbatan nerv ildiz hujayralarining ko'payishi va differentsiatsiyasini rag'batlantirdi (Hong-Juan va boshq., 2011).

Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, SNdagi GDNF ifodasi hayvonlarning transport vositalarida sezilarli darajada kamaygan (Yang va boshq., 2010). Bu PD kalamushlarida patogenez mexanizmlaridan biri bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. 5-15 mkg/d GDNFni MPTP qo'zg'atgan transport vositasining lateral qorinchasi yoki striatumiga ketma-ket uch oy davomida yuborish transport vositasida dopaminerjik tizimning nigrostriatal tiklanishiga yordam berdi (Grondin va boshq., 2002). Hayvonlar uchun transport vositalarida PD uchun GDNF davolashni o'rganish shuni ko'rsatdiki, GDNF ning miyaning turli qismlariga, masalan, SN, kaudat yadrosi va lateral qorinchaga intraserebral in'ektsiyasi, PD hayvonlar modellari bilan bog'liq yaxshilangan harakat buzilishlari, shu jumladan motor faolligining pasayishi, mushaklarning qattiqligi va tremor (Grondin va boshq., 2002). Biroq, GDNF bevosita qon-miya to'sig'idan o'ta olmaydi. Shuning uchun GDNF ning mahalliy miya in'ektsiyasi klinik qo'llashda katta xavf va qiyinchiliklarni o'z ichiga oladi. Ekzogen GDNFni boshqariladigan mikrosferalar, uzluksiz chiqariladigan kapsulalar va virusli genlar orqali joriy qilish uchun ilovalar hali ham o'rganilmoqda (Liang va boshq., 2010; Yang va boshq., 2010; Qiao va boshq., 2012). Miyaga ekzogen GDNFni kiritish uchun turli usullarning cheklovlarini hisobga olgan holda, endogen GDNF chiqarilishiga yordam beruvchi neyroprotektiv vositalar klinik qo'llash uchun muhimdir.

PD vaC. tubulosaNano kukun

PD ko'proq o'rta yoshli kattalar va qariyalarda uchraydi. TCM nazariyasi PD birinchi navbatda miyada joylashganligini va asosan hayotiy energiya va qon etishmovchiligidan tashqari, jigar va buyrak etishmovchiligi bilan bog'liq deb hisoblaydi. Ushbu nazariyaga ko'ra, PDni davolash buyrak va suyak iligini kuchaytirishga qaratilgan.Yang va boshqalar. (2010)randomizatsiyalangan, ikki marta ko'r va platsebo-nazorat qilinadigan klinik sinovlardan foydalangan va Madopar va buyrakni tonlash retseptlaridan foydalangan holda kombinatsiyalangan terapiya PD bilan og'rigan bemorlarning motor disfunktsiyasini engillashtirganini aniqladi. Davolash natijasi Madopar yordamida bitta terapiyadan ko'ra yaxshiroq edi. PDda TCM monoterapiyasi yoki birikma retseptining davolash samaradorligi PD hayvonlar modellarida va klinik ilovalarda tasdiqlangan. Buyraklarni tonlash va qon aylanishini rag'batlantirish uchun TCM ilovalari Madopar yordamida PD uchun monoterapiya dozasini kamaytirdi. Ba'zi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, TCM PD belgilarini va himoyalangan dopaminerjik neyronlarni yaxshilaydi, bu endogen GDNF ifodasini targ'ib qilish bilan chambarchas bog'liq bo'lishi mumkin (Hong-Juan va boshqalar, 2011; Qiao va boshqalar, 2012).

Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan buyrakni toniklashtiruvchi birikma,C. tubulosanano chang, tarkibidaSitanche% 2c epimedium, vaRizoma poligonati. Zamonaviy tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, kimyoviy tarkibiCistancheMPTP bilan qo'zg'atilgan PD sichqonlarida SNdagi dopaminerjik neyronlarni himoya qiluvchi ECH bo'lib, DA va DA tashuvchisining qisqarishini inhibe qiladi (Zhao va boshqalar, 2010). Bundan tashqari, u DA ning 6-OHDA sabab bo'lgan kamayishini oldini oladi va striatal dopaminerjik neyronlarni himoya qiladi (Chen va boshqalar, 2007). Epimedium kaspaza-3 faollashuvini inhibe qiladi va neyroprotektiv rol o'ynaydi (Liu va boshqalar, 2011). Epimedium flavonoidlari nerv ildiz hujayralarining ko'payishi va farqlanishiga samarali yordam beradi (Yao va boshqalar, 2010).

Ushbu tadqiqotda,C. tubulosanano chang MPP ning ko'payishiga qarshi chiqdi+- dozaga bog'liq bo'lgan apoptoz. Bu TH ifodasini sezilarli darajada yaxshilaganin vitrovosita va dopaminerjik neyronlarda sezilarli anti-apoptotik ta'sirga ega edi. MPTP tomonidan qo'zg'atilgan transport vositasi sichqonlari xulq-atvor buzilishlarini ko'rsatdi va o'rta miya to'qimalarida va PD ning tipik patologik xususiyatlari bo'lgan DA darajalarida TH ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi. Turli dozalardaC. tubulosanano kukun statsionar vaqtni qisqartirdi, avtonom faoliyatni kuchaytirdi, xulq-atvor buzilishlarini yaxshiladi, miyada DA darajasini oshirdi va transport vositalarida TH ifodasini oshirdi. Bu natijalar shuni ko'rsatdiC. tubulosanano kukun dopaminerjik neyronlarda himoya ta'sirini ko'rsatdi va shu bilan transport vositalarining xatti-harakatlaridagi buzilishlarni yaxshilaydi. Turli dozalardaC. tubulosananopowder avtomobil sichqonlari miyasida GDNF oqsili va uning retseptorlari oqsillari ifodasini oshirdi. Yuqori dozaC. tubulosadavolash Bcl2 ifodasini sezilarli darajada oshirdi va Bax ifodasini kamaytirdi, bu shuni ko'rsatdiC. tubulosanano changMPTP shikastlangan sichqoncha miyasida GDNF ifodasi va sekretsiyasini rag'batlantirishi mumkin. Bundan tashqari, u dopaminergik neyronlarda neyroprotektiv ta'sir ko'rsatishi va GDNF ning neyrotrofik qo'llab-quvvatlash rollari orqali neyronal apoptozni minimallashtirishi mumkin.

Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiC. tubulosanano kukun ikkalasida ham dopaminerjik neyronlarda himoya ta'sirini ko'rsatdiin vitrovain vivova DA tarkibini yaxshilash uchun TH ifodasini oshirdi. Shuningdek, u MPTP tomonidan qo'zg'atilgan avtomobil sichqonlarida xulq-atvor buzilishlarini yaxshiladi, SNda GDNF va uning retseptorlari oqsillarining protein ifodasini tartibga soldi va PD sichqonlarida anti-apoptotik ta'sir ko'rsatdi. ning klinik ta'siri ostida yotgan mexanizmC. tubulosaPDdagi nano chang miyadagi endogen GDNF tarkibini ko'paytirishni va shu bilan dopaminerjik neyronlarning shikastlanishini kamaytirishni o'z ichiga olishi mumkin.

JINSIY FONKSIYONNI YASHLASHTIRISH UCHUN TABIY CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12