Yuqori tartibli tartibga soluvchi kombinatsiyalarni va asabiy tabaqalanish uchun muhandislik genetik drayverlarini kashf qilish uchun kombinatsion genetika usullari

Hujayralarni farqlashning samarali omillarini izlashga sho'ng'ish

Tadqiqotchilar hali ham Parkinson kasalligi, Altsgeymer kasalligi va Xantington kasalligi kabi nevrologik kasalliklarning rivojlanishini qaytarish yoki sekinlashtirish uchun yaxshiroq davolash usullarini topishga intilmoqda. Ushbu buzilishlar miyaning turli qismlarida neyron hujayralarining o'limining natijasidir. Bemorlarda simptomlarni engillashtirish uchun ishlatiladigan dorilar yoki davolash usullari yaxshi o'rnatilmagan.

Neyroproteksiya uchun cistanche tubulosa kukuniga bosing

Ular shikastlangan asab to'qimalarini tiklamaydi va istalmagan yon ta'sirga olib kelishi mumkin. Shu sababli, o'z-o'zini yangilash qobiliyati va yo'qolgan asab to'qimalarini tiklash uchun bemorga o'tkazish uchun kerakli hujayra avlodlariga differensiallanishning moslashuvchanligi tufayli ildiz hujayralarini istiqbolli terapevtik sifatida ko'rib chiqilayotgan tadqiqotlar soni ortib bormoqda.

Biroq, ildiz hujayralari klinik jihatdan nevrologik kasalliklarni davolashda qo'llanilishidan oldin, ularning to'liq salohiyatini ochish uchun yaxshiroq tushunishni talab qiladigan sohalar mavjud. Ildiz hujayralari regenerativ va moslashuvchan bo'lib, differentsiatsiyani qo'zg'atuvchi omillarning to'g'ri birikmasini hisobga olgan holda har qanday hujayra turiga aylanishga moyil. Biroq, omillarning katta tarmog'ida murakkablik chuqurligi mavjud.

Ildiz hujayralarini, shu jumladan embrion ildiz hujayralarini (ESC) va induktsiyalangan pluripotent ildiz hujayralarini eng tez farqlash uchun optimal sinergizmga erishish uchun transkripsiya omillari (TF), kichik molekulalar va / yoki o'sish omillarining kombinatsiyasini aniqlash muhim, buning natijasida neyron avlodining eng sof populyatsiyasida. Biroq, bu omillarni tejamkorroq va vaqtni tejaydigan tarzda tekshirishning strategik usuli bo'lishi mumkin.

Bu hali ham mashaqqatli yoki o'rta tikanli neyronlar, sezgir neyronlar va serotonerjik neyronlar kabi neyronal pastki tiplarni yanada tavsiflash uchun allaqachon o'rnatilgan protokollarni optimallashtirishga yordam beradi. Neyron taqdirining drayverlarini har tomonlama aniqlash va ushbu elementlarning tartibga solish tarmog'ida bir-biri bilan qanday o'zaro ta'sirini aniqlash qiyin bo'lib qolmoqda.

Bir nechta guruhlar hujayra taqdirining tartibga soluvchi tarmog'ini tushuntirish uchun yangi yuqori samarali skrining yondashuvlaridan foydalanganlar va neyronlarning konvertatsiyasi va omon qolishini ta'minlovchi omillar haqida ma'lumotli tushunchalar berishgan. Liu va boshqalar. (2018) ESClarning neyron taqdirini rag'batlantiradigan TF yoki DNKni bog'lovchi omillarni qidirish uchun CRISPR faollashuvidan (CRISPRa) foydalangan. Biroq, ish faqat bitta omillar yoki juft birikmalarni o'rganish bilan chegaralangan.

Yana bir tizimli skrining Tsunemoto va boshqalar tomonidan o'tkazildi. (2018), TF o'rtasidagi munosabatlarni o'rgangan. Ularning tanlangan yagona TF larining ko'pchiligi tadqiqotda hech qanday ta'sir ko'rsatmadi, ammo ular sichqon fibroblastlarini induktsiyalangan neyronlarga ajratishni ta'minlash uchun 76 juft TF kombinatsiyasini aniqladilar.

Shunisi e'tiborga loyiqki, ularning natijalari oldingi tadqiqotlar bilan mos kelmadi, masalan, qo'shimcha omillarni yo'qotib qo'yganligi sababli, qo'zg'atilgan neyronlarda dopamin faol tashuvchisi Slc6a3 ni aniqlamadi. Boshqa bir tadqiqot CRISPR aralashuvi (CRISPRi) asosidagi skriningni o'tkazish orqali neyronlarning omon qolishini saqlab qolish yoki yaxshilash uchun muhim genlarni aniqladi (Tian va boshq., 2019). Va yana, ular bitta sgRNK skriningi bilan cheklangan edi.

Boshqa genetik omillarni xolis skrining qilish va omillar kombinatsiyasi sonini ko'paytirish uchun keyingi tadqiqotlar talab qilinadi, chunki farqlash va qayta dasturlashni samarali boshqarish uchun turli kontekstlarda ikkitadan ortiq omillar kokteyli talab qilinishi mumkinligi ko'rsatilgan.

Yaxshi misol - Oct4, Sox2, Klf4 va c-Myc kombinatsiyasi, bu ESClarning pluripotentligi uchun rivojlanish signalizatsiya tarmog'ini tartibga solish uchun zarurdir (Takahashi va Yamanaka, 2006). Bunday murakkab tizimlarda yuqori darajadagi genetik birikmalarning funktsiyalarini yuqori o'tkazuvchanlik uslubida har tomonlama tavsiflash zarurati tug'iladi va Combinatory Genetics En Masse (CombiGEM) usuli buni amalga oshirishi mumkin.

Faktor birikmalarining yuqori mahsuldorligi, yuqori tartibli va tizimli ekrani uchun CombiGEM usuli

CombiGEM nafaqat keng miqyosli birlashtirilgan ekranlarni o'tkazishning tizimli usulini taklif qiladi, balki yuqori tartibli kombinatoryal genetik kutubxonalarni kengaytiriladigan yig'ish qobiliyatiga ega (Wong va boshq., 2015, 2016; Zhou va boshq., 2020). Bir qozonli jarayon foydalanuvchiga ko'plab genetik birikmalarni tekshirishga imkon beradi; 1-yoʻl, 2-yoʻl, 3-yoʻl va nazariy jihatdan n-way kutubxonalari.

Bu individual nomzodlar kombinatsiyasini yaratish va sinovdan o'tkazishning an'anaviy jarayoniga tezkor alternativani ta'minlaydi. Bir qator boshqa kombinatsion CRISPR skrining strategiyalari juft genetik birikmalarni o'rganish uchun ishlab chiqilgan (Han va boshq., 2017; Shen va boshq., 2017; Najm va boshq., 2018; Truong va boshq., 2019; DeWeirdt va boshq., 2020). ), CombiGEM uch yoki undan ortiq genetik birikmalar o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarni baholash uchun noyob imkoniyatni taqdim etadi.

Misol uchun, agar foydalanuvchi mos ravishda nomzod TF kombinatsiyalari roʻyxatini haddan tashqari ifodalash yoki bostirish uchun CRISPRa yoki CRISPRi’dan foydalanishni maqsad qilgan boʻlsa, CombiGEM-CRISPR v2 yordamida TF-targeting sgRNA birikmalarining shtrix-kodlangan kutubxonasini koʻrish mumkin.0 ( Vong va boshq., 2016; Zhou va boshq., 2020) 1-rasmda ko'rsatilganidek.

Bitta qozonli bog‘lash bosqichlaridan foydalangan holda, sgRNKlar kutubxonasi va ularning tegishli shtrix-kodlari neyron hujayra turiga xos promouter faollashganda, masalan, tubulin 1 kabi lyuminestsent oqsilning ifodalanishi haqida xabar beruvchi lentiviral maqsadli vektorga kiritilgan. Kutubxona sgRNKlar va transkripsiya faollashtiruvchisi yoki repressor bilan birlashtirilgan fermenti yetishmaydigan Cas9 ni o'z ichiga olgan alohida lentiviral vektor kerakli boshlang'ich hujayralarga yuborilishi mumkin.

Vaqt o'tishi bilan hujayralar farqlana boshlaganda, faqat induktsiyalangan neyronga o'xshash hujayralar flüoresansni ifodalaydi va bu hujayralar shtrix kodli ketma-ketlik orqali o'zlarining TF kombinatsiyalarini olish uchun flüoresans bilan faollashtirilgan hujayralarni saralash yordamida ajratilishi mumkin.

Muayyan hujayra nasllarini harakatga keltiradigan birikmalarni yaxshiroq tushunish uchun ushbu hujayralar, shuningdek, foydalanuvchi o'rganishni tanlagan farqlash bosqichlarini afzal ko'rgan holda ma'lum hujayra-nasab muxbirlari yoki markerlar uchun tekshirilishi mumkin. Magnit faollashtirilgan hujayralarni saralash, hujayra yuzasi markerining ifodalariga qarab, qiziqqan hujayralarni ajratish uchun ishlatilishi mumkin.

Yagona hujayrali RNK ketma-ketligi genning turi va darajalarini yuqoriga yoki pastga regulyatsiya qilish profilini o'qish uchun CRISPR skriningi bilan birlashtirilishi mumkin va maqsadli TFlarning kombinatsiyasi shtrix kodini o'qish orqali aniqlanishi mumkin (Replogle va boshq., 2020). Neyron rivojlanishining dastlabki bosqichidan keyingi bosqichlarigacha bo'lgan hujayra morfologiyasi o'zgarishlarini kuzatish uchun yuqori kontentli tasvirlardan foydalanish mumkin.

Induktsiya qilingan neyronga o'xshash hujayralarning fiziologik ahamiyati yoki funksionalligi NeuN, TUJ1 va MAP2 kabi neyronlarning kamolotiga xos bo'lgan immunotsitokimyoviy belgilar va elektrofiziologik choralar bilan aniqlanishi mumkin. Yuqorida aytib o'tilganidek, tadqiqotlar hujayra taqdirini boshqarish uchun TF va kichik molekulalarni birlashtirdi.

CombiGEM shuningdek, ildiz hujayralarining o'z-o'zini yangilanishini ta'minlaydigan, hujayra naslining differentsiatsiyasini qo'zg'atadigan yoki samaradorlikni oshirish va potentsial ravishda genetik omillarni almashtirish orqali qayta dasturlashni osonlashtiradigan kichik molekula birikmalarini aniqlash uchun ham ishlatilishi mumkin. CombiGEM signalizatsiya yo'llarining kichik molekula maqsadlarini, epigenetik yoki hujayrali jarayon omillarini aniqlash orqali ham qo'llanilishi mumkin.

Keyin dorivor maqsadlarni faollashtirish yoki inaktivatsiya qilish uchun sgRNK kutubxonasini loyihalash orqali farqlash yoki qayta dasturlashni kuchaytirish uchun kichik molekulalarning samarali birikmalarini aniqlash mumkin. Ushbu kontseptsiya saraton va Parkinson kasalligiga qarshi dorilarning maqsadli kombinatsiyalarini aniqlash uchun biz ilgari olib borgan tadqiqotlarimizda yaxshi aks ettirilgan (Chjou va boshq., 2020).

CombiGEM-dan foydalanish nafaqat CRISPR-ga asoslangan buzilishlar bilan cheklanib qolmaydi, balki RNK interferensiyasi bilan funksiyani yo'qotadigan ekranlarni, shuningdek, ifodalangan funktsiyalarni oshirishni o'rganish uchun boshqa DNK yoki RNK tartibga soluvchi omillarga ham qo'llanilishi mumkin. mikroRNKlar (Wong va boshq., 2015) va ketma-ketlik bilan tasdiqlangan inson ochiq o'qish ramkalari, masalan, inson TFome kutubxonasida (Ng va boshq., 2020) xabar qilingan.

CombiSEAL usuli transkripsiya omillarining yuqori samarali muhandisligi uchun

Tabiiy kelib chiqadigan genetik omillarning ideal kombinatsiyasini topish hali ham qiyinchiliklarni keltirib chiqarishi mumkin, masalan, genomning xarakterli TFlari bilan chegaralanib, ularning ifodasi va differentsiatsiyadagi roli haqida oldindan ma'lumotga ega. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, TF-larni ishlab chiqish yoki sun'iy transkripsiya omillarini yaratish genlarni tartibga solish tarmog'idagi boshqa endogen ko-faktorlarning zaruriy ifodalanishiga bog'liqlikdan oshib, muqobil yo'llar orqali differentsiatsiya tezligini tezlashtirish uchun yangi imkoniyatlarni ochadi yoki butunlay o'rnini bosadi. samaraliroq bo'lgan tabiiy TFlar (Jauch, 2018).

Bu tadqiqotchilarga kerakli omillarni eksperimental ehtiyojlariga mos ravishda moslashtirishga imkon beradi. Biz taklif qilamizki, agar kimdir turli domenlarni o'z ichiga olgan TFga bir nechta saytlarda yuqori o'tkazuvchanlik mutagenezini o'tkazishni maqsad qilgan bo'lsa, CombiSEAL foydali platforma bo'lishi mumkin (Choi va boshq., 2019). CombiSEAL usuli shtrix-kodlar bilan kombinatsion tarzda yorliqlangan aminokislotalarni kodlovchi DNK fragmentlarini yig'adi (1-rasm).

1-rasm ｜ CombiGEM va CombiSEAL usullari tabaqalanishning samarali genetik drayverlarini tekshirish uchun. CombiGEM usuliga misol sifatida bir xil konstruksiyadan ifodalangan bir nechta sgRNKlarning yig'ilishi va sgRNK birikmalari ularning birlashtirilgan shtrix kodlari bilan ifodalanadi. CombiSEAL usuli oqsilning turli qismlariga kiritilgan mutatsiyalarni o'z ichiga oladi, masalan, P1, P2, P(n) va P(n plyus 1) sifatida ko'rsatilgan transkripsiya omillari. Mutatsiyalarning kombinatsiyasi esa ularning tegishli birlashtirilgan shtrix kodlari bilan aks ettiriladi. Foydalanuvchi o'rnatishlarni boshqa DNK etkazib berish tizimlariga qo'llashi mumkin va bu tasvirda lentiviral vektorlardan foydalaniladi. Skrining strategiyalari birlashtirilgan formatda o'tkazilishi mumkin va bu misolda ma'lum bir neyron nasliga farq qiluvchi hujayra populyatsiyalarini aniqlash diagrammada X-fluoresans sifatida belgilangan floresan oqsil ifodasi uchun promouterni faollashtirish orqali aniqlanadi. Hujayra hovuzidagi shtrix-kodlarning keyingi avlod ketma-ketligi (NGS) DNK maqsadlari yoki transkripsiya variant(lar)ni shifrlaydi. Turli xil neyron turlarining farqlanishiga turtki bo'lgan omillarni qat'iy tahlil qilish massivga asoslangan usullardan foydalanishi mumkin, masalan, hujayra nasl belgilari bilan hujayralarni tekshirish, so'ngra magnit faollashtirilgan hujayralarni saralash (MACS) ko'p quduqli plitalarga o'tkazilishi mumkin. yuqori kontentli tasvirlash. Shu bilan bir qatorda, bitta hujayrali RNK ketma-ketligi (RNK-Seq) foydalanuvchiga kerakli fenotiplarga ega bo'lgan hujayralarning gen ifodalarini profillash imkonini beradi va sgRNK birikmalarini yoki asosiy variant(lar)ning mutatsion birikmalarini aniqlash uchun shtrix-kodlarni olish imkoniyatiga ega bo'ladi. FACS: Flüoresans bilan faollashtirilgan hujayralarni saralash.

CombiSEAL mutagenez zarur bo'lgan oqsilning birinchi bo'linma qismlaridan boshlanadi. Foydalanuvchi har bir bo‘lim uchun istalgan sonli variantlarni yaratishi mumkin, so‘ngra mutatsiyalar o‘rnini va kombinatsiyasini aniqlash uchun ularni shtrix-kodlar bilan belgilashi mumkin. So'ngra har bir bo'lim havzasi ularni mo'ljallangan mutagenez hududida yonbosh tipidagi IIS fermentlari bilan o'zgartirilgan yovvoyi tipdagi oqsillar ketma-ketligini o'z ichiga olgan maqsad vektorga kiritish orqali ketma-ket yig'iladi.

Proteinning bir nechta qismlarini bog'lashning chandiqsiz termoyadroviy sxemasi oqsilga kiruvchi aminokislotalarni qo'shmaslik uchun muhimdir. CombiSEAL usuli mutatsiyalar turlarini va ularning qayerda joylashganligini aniqlash uchun butun oqsil bo‘yicha uzoq o‘qiladigan ketma-ketlikni talab qilmasdan, qiziqarli variantlarning tanlangan hovuzining aminokislotalar ketma-ketligini yanada samaraliroq va tejamkorlik bilan aniqlash imkonini beradi. oqsil.

Ushbu uslubiy sozlash aminokislotalar mutatsiyalarining turlari va pozitsiyalarining kombinatsiyasini yoki domenni almashtirish, kiritish va o'chirish kabi boshqa kerakli o'zgarishlarni ko'rsatadigan qisqa birlashtirilgan shtrix-kodlar pulining yuqori o'tkazuvchanlik ketma-ketligini o'tkazish orqali tahlil qilishni osonlashtiradi. dastlab TF da ishlab chiqilgan va o'rnatilgan

Xulosa

Sinov va xato usullari bilan solishtirganda, bitta hujayra turini neyron avlodiga aylantirish uchun zarur bo'lgan muhim omillar yoki kombinatsiyalarni aniqlash uchun tizimliroq yondashuvlarni qo'llashda yutuqlarga erishildi. Biroq, yuqori tartibli kombinatsiyalarni aniqlash qobiliyati yo'q edi va bu erda biz CombiGEM usuli bunday cheklovlarni bartaraf etishi mumkinligini taklif qilamiz.

CombiGEM DNKni maqsadli DNKga bog‘lovchi omillarning yuqori tartibli birikmalarini bir vaqtning o‘zida birlashtirish uchun shtrix-kodli, bitta idishli bog‘lash tizimidan foydalanadi va quyi oqim tekshiruvlari uchun zarbalar sonini boshqarish mumkin bo‘lgan o‘lchamgacha qisqartirish maqsadida bir necha bosqichli skrining jarayonini chetlab o‘tadi. . Bundan tashqari, kamroq samarali tabiiy TFlar gen ekspressiyasini yaxshiroq tartibga solish uchun sun'iy yoki muhandislik TFlari bilan almashtirilishi mumkin. Biz CombiSEAL protein mutagenezi usulini tasvirlab beramiz, bu foydalanuvchilarga oqsil va ularning turli domenlarida shtrix-kodlar bilan belgilangan bir nechta sayt mutatsiyalarini to'g'ridan-to'g'ri yig'ish orqali transkripsiya faktorlari variantlarining katta hovuzlarini yaratishga imkon beradi.

Bu qiziqish variantlari mutatsiyalari turlari to'g'risidagi ma'lumotlarni olish uchun skrining protseduralari narxini tezlashtiradi va kamaytiradi. Umid qilamizki, tavsiya etilgan usullar asab regeneratsiyasini rag'batlantirish imkoniyatlarini yanada tushunish va kengaytirishga yordam beradi va tadqiqotning boshqa sohalarida keng qo'llanilishi mumkin.

Cistanche neyroprotektiv ta'sirining mexanizmi

Cistanche bir necha mexanizmlar orqali neyroprotektiv ta'sirga ega ekanligi ko'rsatilgan:

1. Yallig'lanishga qarshi ta'sir: Cistanche tarkibida miyaning turli qismlarida yallig'lanishni inhibe qilish uchun ko'rsatilgan birikmalar mavjud bo'lib, ular neyronlarni shikastlanishdan himoya qilishga yordam beradi.

2. Antioksidant ta'sir: Cistanche kuchli antioksidant xususiyatlarga ega bo'lgan birikmalarni o'z ichiga oladi. Antioksidantlar neyronlarni erkin radikallar va oksidlovchi stressdan kelib chiqadigan zararlardan himoya qilishga yordam beradi.

3. Neyrotransmitterlarni tartibga solish: Cistanche neyronlarni himoya qilish va kognitiv funktsiyani yaxshilashga yordam beradigan serotonin va dopamin kabi ba'zi neyrotransmitterlarni tartibga solishi ko'rsatilgan.

4. Neyrotrofik omil stimulyatsiyasi: Cistanche neyronlarning o'sishi va omon qolishiga yordam beradigan miyadan olingan neyrotrofik omil (BDNF) kabi neyrotrofik omillar ishlab chiqarishni rag'batlantirishi ko'rsatilgan.

Umuman olganda, bu mexanizmlar neyronlarni shikastlanishdan himoya qilish, ularning o'sishi va omon qolishiga yordam berish va kognitiv funktsiyani yaxshilash uchun birgalikda ishlaydi.

Ma'lumotnomalar

Choi GCG, Chjou P, Yuen CTL, Chan BKC, Xu F, Bao S, Chu HY, Thean D, Tan K, Vong KH, Zheng Z, Vong ASL (2019) Kombinator mutagenez ommaviy ravishda SpCas9 genomini tahrirlash faoliyatini optimallashtiradi. Nat usullari 16:722-730.

DeWeirdt PC, Sanson KR, Sangree AK, Hegde M, Hanna RE, Feeley MN, Griffith AL, Teng T, Borys SM, Strand C, Joung JK, Kleinstiver BP, Pan X, Huang A, Doench JG (2020) AsCas12a-ni optimallashtirish inson hujayralarida kombinatsion genetik ekranlar uchun. Nat Biotechnol 39:94-104.

Xan K, Jeng EE, Hess GT, Morgens DW, Li A, Bassik MC (2017) CRISPR ekranida juft genetik o'zaro ta'sirlar uchun aniqlangan saraton uchun sinergik dori kombinatsiyalari. Nat Biotechnol 35:463- 474.

Jauch R (2018) Mahalliy transkripsiya omillarini yaratish orqali hujayra taqdirini qayta dasturlash. Curr Opin Genet Dev 52:109-116.

Najm FJ, Strand C, Donovan KF, Hegde M, Sanson KR, Vaimberg EW, Sullender ME, Hartenian E, Kalani Z, Fusi N, Listgarten J, Younger ST, Bernstein BE, Root DE, Doench JG (2018) Orthologous CRISPR- Kombinatorial genetik ekranlar uchun Cas9 fermentlari. Nat Biotechnol 36:179-189.

Ng AHM, Khoshakhlagh P, Rojo Arias JE, Pasquini G, Vang K, Swiersy A, Shipman SL, Appleton E, Kiaee K, Kohman RE, Vernet A, Dysart M, Leeper K, Saylor W, Huang JY, Graveline A, Taipale J, Hill DE, Vidal M, Melero-Martin JM va boshqalar. (2020) Hujayra taqdiri muhandisligi uchun inson transkripsiyasi omillarining to'liq kutubxonasi. Nat Biotechnol doi: 10.1038/s41587-020-0742-6.

Replogle JM, Norman TM, Xu A, Hussmann JA, Chen J, Cogan JZ, Meer EJ, Terry JM, Riordan DP, Srinivas N, Fiddes IT, Artur JG, Alvarado LJ, Pfaiffer KA, Mikkelsen TS, Weissman JS, Adamson B (2020) RNKni to'g'ridan-to'g'ri yo'naltirish va maqsadli ketma-ketlik bilan bir hujayrali CRISPR ekranlari. Nat Biotechnol 38:954- 961.

Shen JP, Chjao D, Sasik R, Lyubek J, Birmingem A, BojorkezGomes A, Likon K, Klepper K, Pekin D, Bekket AN, Sanches KS, Tomas A, Kuo CC, Du D, Roguev A, Lyuis NE, Chang AN , Kreisberg JF, Krogan N, Qi L va boshqalar. (2017) Genetik o'zaro ta'sirlarni de novo xaritalash uchun kombinatsion CRISPRCas9 ekranlari. Nat usullari 14:573-576.

Takahashi K, Yamanaka S (2006) Belgilangan omillar bilan sichqon embrioni va kattalar fibroblast madaniyatidan pluripotent ildiz hujayralarining induktsiyasi. 126-uya:663-676.

Tian R, Gachechiladze MA, Ludwig CH, Laurie MT, Hong JY, Nathaniel D, Prabhu AV, Fernandopulle MS, Patel R, Abshari M, Ward ME, Kampmann M (2019) Inson iPSC-dagi multimodal genetik ekranlar uchun CRISPR shovqinga asoslangan platformasi - olingan neyronlar. Neyron 104:239-255.

Truong VA, Hsu MN, Kieu Nguyen NT, Lin MW, Shen CC, Lin CY, Xu YC (2019) CRISPRai bir vaqtning o'zida gen faollashuvi va inhibisyonu uchun ildiz hujayralarining xondrogenezi va kalvarial suyak regeneratsiyasini rag'batlantirish uchun. Nuklein kislotalari Res 47:e74. Vong AS, Choi GC, Cheng AA, Purcell O, Lu TK (2015) Inson hujayralarida massiv parallel yuqori tartibli kombinatoryal genetika. Nat Biotechnol 33:952-961.

Vong AS, Choi GC, Cui CH, Pregernig G, Milani P, Adam M, Perli SD, Kazer SW, Gaillard A, Hermann M, Shalek AK, Fraenkel E, Lu TK (2016) CombiGEM tomonidan ko'p shtrixli CRISPR-Cas9 skriningi yoqilgan . Proc Natl Acad Sci USA 113:2544-2549.

Chjou P, Chan BKC, Wan YK, Yuen CTL, Choi GCG, Li X, Tong CSW, Zhong SSW, Sun J, Bao Y, Mak SYL, Chow MZY, Khaw JV, Leung SY, Zheng Z, Cheung LWT, Tan K , Vong KH, Chan HYE, Vong ASL (2020) Dorivor maqsadlar o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarni tahlil qilish uchun uch tomonlama kombinatsion CRISPR ekrani. Hujayra vakili 32:108020.

Dawn GL Thean, Alan SL Vong*