COVID-19 MRNA vaktsinasi SARS-CoV-2 Omicron BA.1 infektsiyasidan, semiz sichqonlarda oziq-ovqat bilan bog'liq tug'ma antiviral reaktsiyalarni kuchaytirish orqali himoya qiladi

Xulosa

Fon

Semirib ketish butun dunyo boʻylab epidemiya boʻlib, 2019-yilgi Koronavirus kasalligining (COVID-19) jiddiy namoyon boʻlishi uchun xavf omili hisoblanadi. Og'ir o'tkir respirator sindromli koronavirus 2 (SARS-CoV-2) patogenligi va semirib ketgan odamlarda infektsiyaga, qayta infektsiyaga va emlashga bo'lgan javoblari to'liq tushunilmagan.

Usullari

Biz dietadan kelib chiqqan semirib ketgan (DIO) sichqoncha modelidan foydalanib, SARS-CoV-2 Alpha- va Omicron BA.1-kasallik namoyon bo'lishini va infektsiya, qayta infektsiya va COVIDga xos immun javoblarini o'rgandik{ {6}} mRNK emlash.

Topilmalar

Ozg'in sichqonlardan farqli o'laroq, Omicron BA.1 va Alpha DIO sichqonlarining o'pkalarida o'xshash darajalarga ko'paydi va shunga o'xshash darajada to'qimalarning shikastlanishiga olib keldi. Muhimi, DIO sichqonlarida SARS-CoV-2 infektsiyasiga yoki COVID-19 mRNK vaktsinatsiyasiga T hujayrasi va B hujayra vositachiligidagi adaptiv immun javoblari buziladi, bu esa qayta infektsiyaga moyilligining oshishiga va emlash darajasining pasayishiga olib keladi. samaradorlik. Biroq, neytrallashtiruvchi antikor yo'qligiga qaramay, emlangan DIO sichqonlari Omicron chaqiruvi bilan o'pkaning shikastlanishidan himoyalangan va o'pka to'qimalarida sezilarli darajada ko'proq IFN- va IFN- ishlab chiqarish bilan birga. O'pka RNAseq va keyingi tajribalar shuni ko'rsatdiki, DIO sichqonlarida COVID{8}} mRNKga vaktsinatsiya virusga qarshi tug'ma immun javobni, jumladan, emlanmagan nazorat bilan solishtirganda IFN- ifodasini kuchaytirgan.

cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi

Izoh

Bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatdiki, COVID{0}} mRNK vaktsinasi semirishda xostning tug'ma antiviral javoblarini kuchaytiradi, bu esa moslashuv immuniteti suboptimal bo'lganda DIO sichqonlarini ma'lum darajada himoya qiladi.

Moliyalashtirish

Ushbu tadqiqotga hissa qo'shgan moliyalashtirish organlarining to'liq ro'yxatini Minnatdorchilik bo'limida topish mumkin.

Kalit so'zlar: Semizlik; Parhezli semiz sichqoncha; SARS-CoV-2}}; COVID-19; Emlash; Omikron

Kirish

Koronavirus kasalligi 2019 (COVID-19) og‘ir o‘tkir respirator sindrom koronavirusi-2 (SARS CoV-2) sabab bo‘lib, 630 milliondan ortiq infektsiyani yuqtirib, 6,5 milliondan ortiq o‘limga olib keldi.1 –3 Katta yoshdagi va unga qo‘shiladigan kasalliklar, jumladan, gipertoniya, semizlik, ayrim saraton va yurak-qon tomir kasalliklari og‘ir COVID-19 rivojlanishi uchun xavf omillari sifatida taklif qilingan.4 Bu holatlar orasida semizlik hozirda butun dunyo bo‘ylab epidemiya hisoblanadi va uning turi bilan bog‘liq. II qandli diabet, yurak-qon tomir kasalliklari, gipertoniya va surunkali past darajadagi tizimli yallig'lanish holatiga bog'liq alkogolsiz yog'li jigar kasalligi.5 Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, dietadan kelib chiqqan semirib ketgan (DIO) sichqonlarda tartibga solinmagan tug'ma immunitet reaktsiyalari paydo bo'lgan va o'pkaning jiddiy shikastlanishi rivojlangan. H1N1 grippi pandemik infektsiyasi.6–8 COVID{18}} pandemiyasi boshlanganidan beri, klinik hisobotlar shuni ko'rsatdiki, semirish bilan bog'liq kasalliklarga chalingan odamlarda COVID-19 xavfi yuqori va og'ir kasalliklarga ko'proq moyil bo'ladi. 9,10 Bundan tashqari, yaqinda oʻtkazilgan tadqiqot shuni koʻrsatdiki, semizlik SARS-CoV-2 tozalanishining kechikishi va COVID-19 bemorlarida noqulay prognoz bilan bogʻliq.11 Biroq, SARS-CoV-2 patogenligi va semizlik bilan og'rigan odamlarda qayta infektsiya va emlashga xos bo'lgan javoblar to'liq tushunilmagan.12 2019 yilda paydo bo'lganidan beri SARS-CoV-2 rivojlanishda davom etmoqda va yangi SARS-CoV-2 variantlarini keltirib chiqarmoqda ( VOCs), shu jumladan Alpha, Beta, Gamma, Delta va Omicron. Ushbu VOClar spike va boshqa virusli oqsillardagi asosiy mutatsiyalarga ega bo'lib, ularning patogenezini, immunitetdan qochish va o'tish qobiliyatini birgalikda modulyatsiya qiladi. 2021-yil noyabr oyi oxirida SARS-CoV-2 Omicron BA.1 birinchi marta Janubiy Afrikada xabar qilingan edi, u tez tarqaldi va 2022-yil boshida SARS-CoV-2 dominant aylanma varianti sifatida Delta oʻrnini egalladi. Omicron BA. .1 ajdodlaridan qolgan SARS-CoV-2 bilan solishtirganda 30 dan ortiq aminokislota oʻzgarishini oʻz ichiga oladi, bu uning oʻziga xos virusologik xususiyatlariga olib keladi, shu jumladan patogenlikni pasaytirish, oʻtkazuvchanlikni oshirish13–17 va vaksinadan kelib chiqqan immunitetdan qochish.18– 20 Omicron va uning subliniyalari hozirda SARS-CoV-2 shtammlari bo'lganligi sababli, semiz populyatsiyada Omicron infektsiyasining namoyon bo'lishini tushunish muhimdir. Eng muhimi, semirib ketgan davlatlarda COVID-19 mRNKga qarshi emlashning samaradorligi toʻliq oʻrganilmagan.

Ushbu tadqiqotda biz DIO sichqonlaridan SARS-CoV-2 patogenezi, qayta infektsiyasi va mRNK vaktsinasi vositachiligida Alpha va Omicron BA.1 koʻrinishini simulyatsiya qilish uchun hayvon modeli sifatida foydalandik. semiz odamlarda himoya. Birinchidan, SARS-CoV-2 DIO sichqonlarida ozg‘in sichqonlarga qaraganda og‘irroq kasallik natijalariga olib kelganini aniqladik. Shu bilan birga, biz DIO sichqonlarida virus infektsiyasi yoki COVID{10}} mRNK emlash natijasida kelib chiqqan zardobni neytrallashtiruvchi antikor javoblari va virusga xos T hujayra interferon javoblarini aniqladik, bu esa qayta infektsiyaga yuqori sezuvchanlik va Ozg'in sichqonlar bilan solishtirganda DIO sichqonlarining COVID{12}} mRNK vaktsinasidan himoyasi kamroq. Ikkinchidan, Omicron BA.1 infektsiyasi ozg'in sichqonlarda zaiflashgan kasalliklarga olib kelgan bo'lsa-da, bu DIO sichqonlarida Alpha sichqonlariga o'xshash og'ir kasallikka olib keldi. Uchinchidan, biz COVID{14}} mRNKga qarshi vaktsinaning ikki dozasi Omicron BA.1 ga qarshi zardobni neytrallashtiruvchi antikorni keltirib chiqara olmaganini, ammo Omicron BA ni yaxshilashga qodirligini koʻrsatdik.1-DIO sichqonlarida oʻpka shikastlanishiga olib keldi. O‘pka to‘qimalarining transkriptomik tadqiqotlari DIO sichqonlarida tug‘ma immun virusga qarshi javoblar emlash orqali sezilarli darajada oshirilganligini ko‘rsatdi, bu esa COVID{18}} mRNK vaktsinasi DIO sichqonlariga xos antiviral immunitetni oshirish orqali himoya qilishini ko‘rsatdi. Umuman olganda, bizning tadqiqotimiz DIO sichqonlarida SARS-CoV-2 Alpha va Omicron BA.1 infektsiyasi, qayta infektsiyasi va COVID{23}} mRNK emlashiga oid muhim bilimlarni aniqladi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Usullari

Etik bayonot

Jonli SARS-CoV-2 bilan bogʻliq barcha tajribalar standart ish tartib-qoidalariga muvofiq Gonkong universiteti (HKU) Mikrobiologiya kafedrasidagi Bioxavfsizlik darajasi-3 muassasasida oʻtkazildi. Hayvonlar bo‘yicha barcha eksperimental protseduralar CULATR 5786-21 bo‘yicha HKU ning o‘qitish va tadqiqotida tirik hayvonlardan foydalanish qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan va hayvonlardan foydalanish bo‘yicha ko‘rsatmalarga muvofiqligi.

Virus va bioxavfsizlik

SARS-CoV-2 B.1.1.7/Alpha (GISAID: EPI_ISL_1273444) va B.1.1.529.1/Omicron BA.1 (GenBank: OM212469)18 izolyatsiya qilingan Gonkongdagi laboratoriya tomonidan tasdiqlangan COVID{15}} bemorlaridan. Alpha va Omicron BA.1 VeroE6-TMPRSS2 hujayralarida blyashka tahlili bilan ekilgan va titrlangan va ishlatishdan oldin -80 ◦C da saqlangan.

Hayvonlar

C57BL/6N sichqonlari HKU qiyosiy tibbiyot tadqiqotlari markazidan olingan va BSL{2}} hayvonlar laboratoriyasida 12-soatlik intervalli kun/tun tsikli bilan saqlangan.21 Semirib ketish induksiyasi avval aytib o‘tilganidek amalga oshirilgan. 6 3 haftalik yangi sutdan ajratilgan urg'ochi sichqonlar tasodifiy ravishda 2 guruhga bo'lingan, bir guruh dietani qo'zg'atish uchun 20 hafta davomida 45 Kkal% yuqori yog'li parhezlar (D12451, Research Diet Inc, Nyu-Brunsvik, NJ) bilan oziqlangan. semiz (DIO) sichqonlarini qo'zg'atdi va nazorat guruhi ozg'in sichqonlar sifatida 13,2 Kkal% dietani (PicoLab Rodent Diet 20, LabDiet Code 5053, PMI) o'z ichiga olgan standart granulalar bilan oziqlangan. Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan DIO sichqonchasining o'rtacha tana vazni 40-50 g, nazoratsiz sichqonlar guruhi esa 25-30 g edi.

Hujayra madaniyati va stimulyatsiyasi

Alveolyar makrofaglar (AM) bronxoalveolyar yuvish (BAL) bilan ajratilgan. Qisqacha aytganda, sichqonlar pentobarbitalni qorin bo'shlig'iga yuborish orqali qurbon qilinganidan so'ng, o'pkalar 3 ml bronxoalveolyar yuvish suyuqligi (BALF) olish uchun uch marta 1 ml sovuq PBS bilan yuvildi. Xuddi shu guruhdagi sichqonlardan olingan BALF birlashtirildi va cho'kma hujayralarini to'plash uchun 500 × g da 10 daqiqa davomida 4 ◦C da santrifüj qilindi, AM'lar zichligi 50, 000 hujayra/quduqqa 96- ekildi. RPMI 1640 plyus 1% penitsillin-streptomitsin 37 ◦C da 2 soat davomida 5% CO2 nam atmosferasida o'stirilgan quduq plitalari, so'ngra AM mono qatlamlari madaniyat plitalariga yopishishi mumkin edi, yopishmaydigan hujayralar PBS bilan plitalardan yuvildi va AMlar o'stirildi. RPMI 1640 plyus 1% penitsillin-streptomitsin va 10% homila sigir zardobida (FBS) 24 soat davomida 1 ug/ml mRNK vaktsinasi, 100 ug/ml Poly (I: C) yoki 100 ng/ml spike oqsili bilan yoki stimulyatsiyasisiz .22 Supernatantlar Elishay testi uchun yig'ildi. Hujayralar PBS bilan yaxshilab yuvilgan va RNK ekstraktsiyasi uchun yig'ilgan.

Sichqonlarda Alpha va Omicron BA.1 muammosi

Ketamin (100 mg/kg) va Ksilazin (10 mg/kg)23 tomonidan behushlik ostida DIO va ozg'in sichqonlar 20 ul fosfat-buferli sho'r suvda (PBS) suyultirilgan 103 PFU Alpha yoki Omicron BA.1 bilan intranazal inokulyatsiya, nazorat sichqonlari bir xil hajmdagi PBS bilan emlangan. Infektsiyalangan sichqonlarning tana vazni va alomatlari 14 kun davomida kuzatilgan, kasallik belgilari junlari jingalak, bukilgan holat va nafas olish qiyinligini o'z ichiga olgan va har bir belgi uchun bitta ball berilgan. Sichqonlar infektsiyadan 2 va 4 kun o'tgach (dpi) pentobarbitalni qorin bo'shlig'iga yuborish orqali qurbon qilindi, har bir guruhdagi 3-6 sichqon virusologik, gistopatologik va immunologik baholash uchun qon namunalarini, o'pka va burun to'qimalarini yig'ish uchun evtanizatsiya qilindi. Baholash uchun har bir sichqondan o'pka namunalari yig'ildi. Rasmlar panelidagi har bir ma'lumot nuqtasi bitta sichqonchaning natijasini ifodalaydi.

Emlash tartibi

Sichqonlar tasodifiy guruhlarga bo'lindi va 14- kunlik intervallarda COVID{1}} mRNK emlashning ikki dozali rejimi (BNT162b2, lot raqami 1B004A, BioNTech, Germaniya) berildi. Vaktsina lipid nanozarrachalarida tuzilgan nukleozidlar bilan o'zgartirilgan mRNKga asoslangan bo'lib, u ajdodlar SARS-CoV-2 ni to'liq uzunlikda kodlaydi. DIO va ozg'in sichqonlarga mushak ichiga 50 ul (5 ug) COVID{13}} mRNK vaktsinasi yoki oddiy fiziologik eritma yuborildi.24,25 Birinchi emlash dozasidan so'ng 14-kuni biz qon namunalarini oldik va keyin ularni taqdim etdik. mRNK vaktsinasining ikkinchi dozasi. Ikkinchi dozadan 14 kun o'tgach, antikor reaktsiyalarini baholash uchun qon namunalari yig'ildi. Keyinchalik sichqonlar burun ichiga 103 PFU Alpha yoki Omicron BA.1 bilan emlangan. 2 dpi tezlikda sichqonlar pentobarbitalni qorin bo'shlig'iga yuborish yo'li bilan qurbon qilindi va virusologik, gistologik va immunologik baholash uchun qon namunalari, o'pka va burun to'qimalari, shu jumladan namunalar yig'ildi. O'pka to'qimalari uch qismga bo'lingan, chap o'pka gistologik baholash uchun yig'ilgan, o'ng o'pkaning kaudal bo'lagi o'pka gomogenati sifatida to'plangan va o'ng o'pkaning qolgan qismi RNK ekstraktsiyasi uchun.

O'pka va burun to'qimalarida SARS-CoV-2 gen nusxalari va yuqumli virus titrini aniqlash

Alpha va Omicron BA.1 infektsiyasi bo'lgan sichqonlarning o'pka va burun turbinati (NT) to'qimalaridan jami RNK MiniBEST Universal RNK ekstraktsiyasi to'plami (9766, Takara Bio Inc. Shiga, Yaponiya) tomonidan ajratilgan. SARS-CoV-2 RNKga bog'liq bo'lgan RNK polimeraza (RdRp) gen nusxalari QuantiNova probe RT-PCR to'plami (208354, Qiagen) yordamida aniqlangan. SARS-CoV-2 RdRp gen nusxalarini aniqlash uchun qRT-PCR va normalizatsiya qilish uchun uy-ro'zg'or geni -aktin LightCycler 96 tizimida (Roche Applied Sciences, Indianapolis, AQSH) amalga oshirildi.21 Yuqumli virusni titrlash uchun homogenatlar Alpha va Omicron BA.1 bilan zararlangan o'pka (o'ng o'pkaning kaudal bo'lagi) va NT to'qimalari VeroE6-TMPRSS2 hujayralarida 50% to'qima madaniyati yuqumli dozasi (TCID50) tahlili bilan amalga oshirildi.26 Gomogenatlar {{ 19}}katta ketma-ket suyultirish va VeroE6-TMPRSS2 xujayralari bilan 96-quduq plastinkasida 37 ◦C inkubatorda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi, supernatantlar tashlab yuborildi va hujayralar 37 ◦C da 72 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. h. Sitopatik ta'sir (CPE) kuzatildi va 50% to'qimalarning yuqumli titri Reed & Munch so'nggi nuqtani hisoblash usuli bilan aniqlandi.26

Gistopatologiya, immunohistokimyo va o'pka va burun to'qimalarining bo'limlarini immunofluoresans bilan bo'yash

Gistopatologik o'zgarishlar uchun formalin bilan biriktirilgan va kerosin bilan biriktirilgan to'qimalarning (har biri 4 mkm) gematoksilin va eozin (H&E) bo'yalishi kuzatildi. O'pkada gistopatologiyaning og'irligiga o'pka tiqilishi, interstitsial infiltratsiya, alveolyar infiltratsiya va qon ketishini baholash yo'li bilan to'liq niqoblangan holda27 ball berildi va yuqorida tavsiflanganidek 0-4 ball berildi.26 Baholash uchun quyidagi mezonlar qo'llanildi: 0, oddiy o'pka bo'limi; 1, qon tomirlarining tiqilishi, perivaskulyar yoki peribronxiolyar infiltratsiya; 2, diffuz alveolyar devor tiqilishi va infiltratsiyasi bilan 1 dan tashqari; 3, havo bo'shlig'ining infiltratsiyasi, ekssudatsiya, mahalliy alveolitning qon ketishi; 4, diffuz alveolit ​​kuzatildi. Immunogistokimyoviy bo'yash DAB (3,3′-diaminobenzidin) substrat to'plami (Vector Laboratories) tomonidan yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi.28 Qisqacha, ACE2 antijenini aniqlash uchun ACE2 rekombinant quyon monoklonal antikorlari (MA5-32307, Invitrogen) edi. ishlatilgan va DAB substrat to'plamidan foydalangan holda ranglarni ishlab chiqish. ACE2 oqsili gematoksilin, so'ngra VectaMount doimiy o'rnatish muhiti (Vector Laboratories) bilan to'qima bo'limlari tomonidan aniqlandi. SARS-CoV-2 antigenini ifodalash uchun o‘pka va NT to‘qimalarining slaydlari quyon anti-SARS-CoV-2 nukleokapsid oqsilining (NP) ichki antikori, so‘ngra FITCning ikkilamchi antikori bilan bo‘yalgan. – konjugatsiyalangan echki quyonlarga qarshi IgG (65-6111, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSH). NP baholash uchun quyidagi mezonlar ishlatilgan. O'pka: "Skor 0" - floresan bo'yash signali yo'q; "1 ball"- faqat N antigen-musbat hujayrali 1-3 bronxiolyar epiteliyda; "2 ball" - N antigen-musbat hujayrali 3 dan ortiq bronxiolyar epiteliya; "3 ball" - yaqin alveolyarlarda bir nechta musbat hujayrali bronxiolyar epiteliya; "4 ball" - N antigen-musbat hujayrali alveolalarning bir nechta o'choqlari yoki katta maydoni. NT: "Score 0"- floresan bo'yash signali yo'q; "1 ball"- epiteliyda tarqalgan bir necha N antigen-musbat hujayralar; "2 ball" - qo'shni hujayralarda doimiy musbat N antigen fokusini ko'rsatadigan epiteliya; "3 ball" - boshqa hududda tarqalgan epiteliya o'choqlarining ko'proq N antijeni ijobiy. Tasvirlar Olympus BX53 yarim motorli lyuminestsent mikroskop yoki OLYMPUS CellSense standart dasturi bilan yorqin maydon yordamida olingan.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

RNK izolyatsiyasi va real vaqtda teskari transkripsiya polimeraza zanjiri reaktsiyasi

Jami RNK to'qima gomogenatlaridan (bosh suyagi, o'rta va yordamchi bo'laklar o'pka uchun yig'ib olingan) ekstraksiya qilingan va cDNK uchun teskari transkripsiya MiniBEST Universal RNK Extraction Kit va RT Reagent Kit (RR036A Takara Bio Inc.) tomonidan ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirilgan. . Sitokinlar, kimokinlar va interferonlarning ifoda darajalari SYBR Premix Ex Taq II to'plami (RR820A, Takara Bio Inc.) yordamida maxsus primerlar (qo'shimcha S1 jadvali) bilan qRT-PCR orqali aniqlandi. Har bir genning qiymatlari uy-ro'zg'or geni -aktin bilan normallashtirildi va biz avval aytib o'tganimizdek 2−DCt sifatida taqdim etildi.28,29

Fermentga bog'liq immunosorbent tahlili (ELISA)

SARS-CoV-2 nukleoproteini (N), spike protein retseptorlarini bog‘lovchi domen (RBD) va faol bo‘lmagan SARS-CoV-2 96- quduq immunoblastlarida (Nunc-Immuno modules; Nunc A) qoplangan. /S, Roskilde, Daniya) 0.05 M NaHCO3 ichida va 4 ◦C da bir kechada inkubatsiya qilingan. Sarum namunalari 2-katta ravishda suyultirildi va qoplangan plastinkaga qo'shildi, 1 soat davomida 4 ◦C da inkubatsiya qilindi, so'ngra xren peroksidaza (HRP) bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar (quyon sichqonchaga qarshi IgG, echki sichqonchaga qarshi IgG1, IgG2a, IgG2b, ab6728, ab98693, M32307, M32507, Abcam va Invitrogen) 37 ◦C da 1 soat davomida. Rangni ishlab chiqish 3,3',5,5'-tetrametilbenzidin eritmasi (#N301, Thermo Fisher Scientific) bilan 37 ◦C da 15 daqiqa davomida amalga oshirildi va H2SO4 bilan to'xtatildi. Optik zichlik (OD) qiymatlari 450 nm da o'qildi. Antikor titrlari barcha suyultirishlarda infektsiyalanmagan sarumning o'rtacha OD qiymatida va 3 standart og'ishda o'rnatilgan kesilgan OD qiymati bilan aniqlandi va chegaradan yuqori OD qiymatini hosil qiluvchi eng yuqori suyultirish antikor titri sifatida aniqlandi. sarum.30 IFN-, IFN-, Albumin va gemoglobin kontsentratsiyasi sichqoncha IFN- (Invitrogen, AQSH), IFN- (R&D tizimlari, AQSH), albumin va gemoglobin (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) ELISA toʻplami yordamida aniqlandi. ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalari.

Mikroneytralizatsiya (MNT) tahlili

Sarum namunalari PBS da 1:10 dan boshlab ketma-ket 2-katta suyultirildi va 100 TCID 50 SARS-CoV-2 bilan 37 ◦C da 1 soat davomida aralashtirildi, aralash oldindan urug'langan VeroE ga qo'shildi. 6-TMPRSS2 hujayralari 96-quduq plastinkasidagi 37 ◦C da 72 soat. CPE kuzatildi va neytrallashtiruvchi antikor titrlari sitopatik ta'sirni to'liq inhibe qiluvchi sarumning eng yuqori suyultirilishi sifatida aniqlandi.

1-rasm: SARS-CoV-2 Alpha va Omicron BA.1 DIO sichqonlarida ozg‘in sichqonlarga qaraganda og‘irroq kasalliklarni keltirib chiqaradi.

Ferment bilan bog'langan immuno-nuqta (ELISpot) tahlili

Virusga xos IgG ishlab chiqaruvchi hujayralar o'pka va taloq to'qimalarining bir hujayrali (har bir quduq uchun 2,5 × 105 hujayra) suspenziyasini 37 da faollashtirilgan SARS-CoV -2 (5 ug/ml) bilan ELISpot plastinkasiga ekish orqali aniqlandi. ◦C 48 soat. IgG ishlab chiqaruvchi hujayralar ishqoriy fosfataza (AP) konjugatsiyalangan echkiga qarshi IgG antikori (62-6522, Invitrogen) bilan aniqlandi.31 Virusga xos IFN ishlab chiqaruvchi hujayralarni aniqlash uchun, bitta hujayra uchun 2,5 × 105 hujayra/quduq. o'pka va taloq to'qimalarining suspenziyasi SARS-CoV-2 RBD peptid hovuzi va N proteini bilan ogohlantiruvchi IFN-ELISpot plastinkasida 37 ◦C da 48 soat davomida inkubatsiya qilindi, IFN ishlab chiqaruvchi hujayralar sichqoncha IFN- ELISpot BASIC yordamida aniqlandi. to'plam (3321-2A, Mabtech, Inc., Stokgolm, Shvetsiya) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq.32

RNK ketma-ketligi va ma'lumotlarni tahlil qilish

DIO va ozg'in sichqonlarning o'pka to'qimalari hujayralaridan jami RNK (n Guruhda 3 dan katta yoki teng) NucleoSpin RNK to'plami (740955,250, MACHEREY-NAGEL, Duren, Germaniya) yordamida ajratilgan. . DNKsi yo'qolgan va tozalangan RNK standart protokolga muvofiq MGIEasy RNK Library tayyorlash reagenti to'plamidan (MGI, Shenzhen, Xitoy) foydalanib, ikki zanjirli (ds) cDNK kutubxonasini yaratish uchun ishlatilgan. Tartiblash maʼlumotlari adapter va past sifatli oʻqishlarni olib tashlash uchun tezkor v0.20.1 bilan filtrlandi.33 Ribosomal RNK (rRNK) oʻqishlari URMAP v1.0 bilan filtrlandi. 1480 (Edgar, 2020) va 34 HISAT2 v2.2.0 sichqoncha mos yozuvlar genomiga (GRCm38/ ENSEMBL 84) qarshi o'qishlarni xaritalash uchun ishlatilgan.35 Hizalama fayli transkriptlarni yig'ish, ularning ko'pligini baholash va differentsial ifodani aniqlash uchun ishlatilgan. genlar, gen ekspresyon darajalari StringTie v2.1.5.36 orqali aniqlandi Asosiy komponentlar tahlili (PCA) R v4.0 bilan o'tkazildi. Differensial ravishda ifodalangan genlar (DEG) va turli davolash guruhlari orasidagi DESeq2 v3.15.37 DEG bilan genlar soni asosida aniqlangan clusterProfile tomonidan |log2FC| chegarasi bilan aniqlangan. > 1 va FDR qiymati < 0,05 va Gen Ontologiyasi (GO), Kioto Entsiklopediyasi genlar va genomlar yo'li (KEGG) ishtirokida boyitish tahlili uchun ishlatiladi.38 Sichqoncha genomidagi barcha genlar boyitish foni sifatida ishlatilgan. ImmuCellAI_RNAseq maʼlumotlari asosida immun hujayralar koʻpligini aniqlash uchun sichqonchadan foydalanildi.39

Statistik tahlil

Ma'lumotlar ifodalangan vositalar va standart og'ishlar. Ikki guruh o'rtasidagi statistik farqlar GraphPad Prism 8 yordamida Student t-testi bilan baholandi. Uch yoki undan ortiq guruhlar o'rtasidagi statistik farqlar GraphPad Prism 9 yordamida bir tomonlama yoki ikki tomonlama ANOVA yordamida baholandi. Farqlar p < { bo'lganda statistik ahamiyatga ega deb hisoblandi. {5}}.05. Qo'lyozmadagi raqamlar va grafiklar GraphPad Prism 8, Adobe Illustrator yoki BioRender.com yordamida tayyorlangan.

Reaktivni tekshirish

Tadqiqotda ishlatiladigan antikorlar ular sotib olingan tijorat manbasi tomonidan tasdiqlangan. Tadqiqotda ishlatiladigan reagentlar haqida batafsil ma'lumotni qo'shimcha ma'lumotlarning Reagentni tekshirish faylida topish mumkin (qo'shimcha jadval S2).

Moliyachilarning roli

Moliyalashtirish manbalari tadqiqotni loyihalash, ma'lumotlarni to'plash, tahlil qilish yoki sharhlash yoki hisobotni yozishda hech qanday rol o'ynamagan.

Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi

Natijalar

SARS-CoV-2 Alpha va Omicron BA.1 DIO sichqonlarida ozg‘in sichqonlarga qaraganda og‘irroq kasalliklarga olib keladi.

Semizlik kontekstida SARS-CoV-2 patogenligini tushunish uchun DIO va oriq sichqonlarga 103 PFU Omicron BA.1 (B.1.1.529.1) yoki Alpha (B) bilan emlangan. .1.1.7) burun ichidagi yo'l orqali. Omicron BA.1 va Alpha N501Y o‘rnini egallaydi, bu ularga yovvoyi sichqonlarni yuqtirish imkonini beradi.40,41 Kasallikning 14-kunlik kursida biz sekin, lekin doimiy pasayish kuzatildi 14 dpi da o'rtacha tana vaznining 5% yo'qolishi bilan Alfa-infektsiyali ozg'in sichqonlarda tana vaznining (1a-rasm). Aksincha, biz Omicron BA.1-infektsiyalangan oriq sichqonlarda oʻrtacha tana vaznining 1,5% ga oshishini kuzatdik, bu esa Omicron BA.1 ning ozgʻin sichqonlarda patogenligi sezilarli darajada zaiflashganini koʻrsatadi (1a-rasm). biz va boshqalar tomonidan olib borilgan so'nggi tadqiqotlarni hisobga olgan holda.14,42 Biroq, Alpha va Omicron BA.1 ning infektsiyasi dietadan kelib chiqqan semirib ketgan (DIO) sichqonlarda tana vaznining jiddiyroq yo'qolishiga olib keldi, bu solishtirganda 9 dpi da taxminan 12% ni tashkil etdi. 0 dpi da asl tana og'irligi (100%) bilan (1a-rasm). Qizig'i shundaki, Alpha- va Omicron BA.1-infektsiyalangan ozg'in sichqonlar (14 dpi: −5,0% va +1,5%) o'rtasida o'rtacha tana vaznining o'zgarishida aniq farq bo'lsa-da, tana vazni Alpha- va Omicron BA.1-infektsiyalangan DIO sichqonlarining yo'qolishi asosan bir xil edi (14 dpi: -11,1% va -11,4%) (1a-rasm). Tana vazni o'lchovlariga mos ravishda, Alpha va Omicron BA.1 infektsiyasi DIO sichqonlarida qiyosiy klinik alomatlarga olib keldi, shu jumladan junlari jingalak, bukilgan orqa va nafas olish qiyin bo'lib, ular 4 dpi balandlikda (1b-rasm), biz hech qanday kuzatmadik. Alpha yoki Omicron BA.1 infektsiyasida ozg'in sichqonlarda kasallik belgisi. Keyinchalik, yuqori va pastki nafas yo'llarining to'qimalarida gistologik o'zgarishlarni baholadik. Soxta infektsiyalangan sichqonchaning burun turbinati (NT) va o'pka to'qimalari nazorat sifatida ko'rsatilgan (Qo'shimcha rasm. S1). Biz Alpha va Omicron BA.1-infektsiyalangan oriq sichqonlarning NTida 2 dpi tezlikda virus keltirib chiqaradigan epiteliyning engil destruktsiyasi va yallig'lanish infiltratsiyasini kuzatdik. Epiteliya desquamatsiyasi va immun infiltratsiyasi Alpha yoki Omicron BA.1 bilan kasallangan DIO sichqonlarining NT bo'limlarida 2 dpi da ozg'in sichqonlarga nisbatan ancha dramatik edi (1c-rasm). 4 dpi tezlikda Alfa-yuqtirgan ozgʻin sichqonlarda NT epiteliysining bir necha luminal hujayra qoldiqlari bilan yengil destruksiyasi aniqlangan, Omicron BA sichqonlarining NTsi.{63}}infektsiyalangan ozgʻin sichqonlar nisbatan buzilmagan boʻlib chiqdi. Shu bilan birga, biz Alpha yoki Omicron BA.1 infektsiyasidan keyin 4-kuni DIO sichqonlarining NT bo'limlarida epiteliyaning jiddiy buzilishi, luminal qoldiqlar va submukozal immun hujayra infiltratsiyasini aniqlashni davom ettirdik (1c-rasm). Ozg'in sichqonlarning o'pka to'qimalarida Alfa infektsiyasi 2 va 4 dpi tezlikda lokalizatsiyalangan interstitsial yallig'lanish va engil alveolyar kapillyar tiqilishi bilan yakunlangan, Omicron BA.1 infektsiyasi esa 2 dpi tezlikda o'pkaning interstitsial yallig'lanishiga olib keldi, lekin asosan 4 dpi da bartaraf etildi (rasm). 1d). Bundan keskin farqli o'laroq, DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida Alpha yoki Omicron BA.1 infektsiyasidan so'ng alveolalarning yanada og'ir gistologik shikastlanishi kuzatildi, bu 2 dpi tezlikda o'pka tomirlarining qattiq tiqilishi sifatida namoyon bo'ldi. Alveolyar qoplarda 4 dpi tezlikda peribronxiolyar va peri-vaskulyar immun hujayralar infiltratsiyasining kuchayishi, shuningdek, immun hujayralar va suyuqlik ekssudati kuzatildi (1d-rasm). Bronxoalveolyar yuvish suyuqligidagi albumin kontsentratsiyasi DIO sichqonlarida Alfa infektsiyasidan so'ng 4-kuni ozg'in sichqonlarga qaraganda sezilarli darajada yuqori bo'lgan, bu SARS CoV{79}}yuqtirilgan DIO sichqonlarida alveolyar kapillyar o'tkazuvchanlik oshganidan dalolat beradi (Qo'shimcha rasm S2). Ushbu topilmalarga muvofiq, o'pka to'qimalarining yarim miqdoriy gistologik bahosi Omicron BA.1 va Alpha infektsiyasi DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlarga qaraganda og'irroq o'pka gistopatologiyasiga olib kelganligini ko'rsatdi (1e-rasm). Umuman olganda, bu natijalar SARS-CoV-2 infektsiyasi DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlarga qaraganda og'irroq kasallikning namoyon bo'lishiga olib kelishini ko'rsatadi. Muhimi, Omicron BA.1 ozg‘in sichqonlarda Alpha ga qaraganda kamroq patogen bo‘lsa-da, SARS CoV-2 ning ikkita varianti ko‘proq patogen va DIO sichqonlarida o‘xshash kasalliklarni keltirib chiqaradi.

2-rasm: SARS-CoV-2 DIO sichqonlarida ozg‘in sichqonlarga qaraganda samaraliroq ko‘payadi.

SARS-CoV-2 DIO sichqonlarida ozg‘in sichqonlarga qaraganda samaraliroq ko‘payadi 

Keyinchalik, Omicron BA.1 va Alpha DIO sichqonlarining nafas olish to'qimalarida ozg'in sichqonlarga qaraganda samaraliroq replikatsiya qilishini so'radik. Biz Alpha va Omicron BA.1 ning DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida 2 va 4 dpi da ozg'in sichqonlarga qaraganda yuqori darajalarga ko'payishini aniqladik (2a va b-rasm). Oldingi hisobotlarga ko'ra, Omicron BA.1 ozg'in sichqonlarning o'pka to'qimalarida Alpha darajasidan pastroq darajaga ko'paydi. Xususan, Omicron BA.1 ning yuqumli titri 26.1- va 3.{10}}Alpha'dan 2 va 4 dpi tezlikda pastroq edi. Aksincha, Omicron BA.1 va Alpha RdRp gen nusxalarini va yuqumli titrlarni o'lchash orqali DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida o'xshash darajalarga ko'paytirildi (2a va b-rasm). Bundan tashqari, biz NT to'qimalarida virusli RdRp geni va yuqumli titrning o'xshash namunasini aniqladik, bu erda Omicron BA.1 va Alpha DIO sichqonlarida taqqoslanadigan darajalarga ko'paygan, ammo ozg'in sichqonlarda emas (2c va d-rasm). Immunofloressensiya bilan bo'yash orqali biz Omicron BA.1 yoki Alpha bilan kasallangan DIO sichqonlarining o'pka va NT to'qimalarida 2 va 4 dpi da ozg'in sichqonlar bilan solishtirganda yanada aniqroq virusli nukleokapsid (N) ifodasini aniqladik (2e va f va qo'shimcha rasm). S3-rasm). Bunga parallel ravishda biz o'pka to'qimalarida asosiy interferonlar (IFN) va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ifodasini aniqladik. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, Omicron BA.1 va Alpha DIO sichqonlarida o'zlarining ozg'in hamkasblari bilan solishtirganda sezilarli darajada past IFN- darajasini ishga tushirgan (2g-rasm va qo'shimcha rasm S4). Bundan farqli o'laroq, IL{27}} va IP-10 kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlar DIO sichqonlarida Omicron BA.1 va Alpha infektsiyasi tomonidan ozg'in sichqonlarga nisbatan yuqori darajada ishga tushirildi (2h-rasm). Bundan tashqari, biz infektsiyalanmagan ozg'in va DIO sichqonlarida ACE2 va TMPRSS2 ning asosiy ifodasini baholadik va ozg'in va DIO sichqonlarida ACE2 va TMPRSS2 solishtirma darajalarda ifodalanganligini aniqladik. Biroq, ACE2 antijeni ekspresyonida o'tkazilgan immunohistokimyoviy bo'yash, ozg'in sichqonlarga nisbatan infektsiyalanmagan DIO sichqonlarining bronxiolyar va alveolyar epiteliysida ACE2 ning yuqori intensivligini aniqladi (Qo'shimcha rasm S5). Birgalikda, bu topilmalar DIO sichqonlarida buzilgan IFN-ekspresyonu va yuqori ACE2 ifodasi virusning yuqori replikatsiyasiga va yallig'lanishga qarshi reaktsiyaning kuchayishiga yordam berishi mumkinligini ko'rsatadi, bu esa DIO sichqonlarida to'qimalarning jiddiy shikastlanishiga olib keladi.

3-rasm: Oldingi SARS-CoV-2 infektsiyasidan olingan adaptiv immunitet DIO sichqonlarini samarasiz himoya qiladi. a

Oldingi SARS-CoV-2 infektsiyasidan olingan adaptiv immunitet DIO sichqonlarini samarasiz himoya qiladi

Keyinchalik, semirib ketgan holatda qayta infektsiyaga qarshi moslashuvchan immunitetning himoya samaradorligini tushunish uchun konvalessen DIO sichqonlari va ozg'in sichqonlar birlamchi infektsiyadan so'ng 28-kunida 103 PFU Alpha bilan qayta sinovdan o'tkazildi va namunalar qayta infektsiyadan keyin 2 kun ichida yig'ib olindi ( dpr) (3a-rasm). Biz birlamchi Alfa infektsiyasidan so'ng 14-kuni olingan sarum namunalarida SARS-CoV-2 antijeniga qarshi IgG antikorini tahlil qildik va IgG ning SARS CoV-2 N ga qarshi titri va retseptorlari bilan bog'lanish domenini tikishini aniqladik. RBD) DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlarga qaraganda 1.9- (p=0.0128) va 3.4-katlama (p=0.0362) ga sezilarli darajada past bo'lgan. , mos ravishda (3b-rasm). Bundan tashqari, DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlar bilan solishtirganda, virusli IgG va IgG1, IgG2a va IgG2b subtiplari titri sezilarli darajada past edi (3b-rasm). Sarumni neytrallash titri 1:10-1:20 6 ta ozg'in sichqondan 5 tasida aniqlandi, ammo 6 ta DIO sichqonlarining birortasida aniqlanmadi (3b-rasm), bu DIO sichqonlarida SARS-ga nisbatan buzilgan adaptiv immun javobni taklif qildi. CoV-2 infektsiyasi. 2dprda virusli RdRp gen nusxasi barcha NT to'qimalaridan va qayta sinovdan o'tgan DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarining 3/6 (50%) qismidan osongina aniqlandi (3c-rasm), NT va o'pkadan virusli RdRp gen nusxasi olinmadi. qayta chaqirilgan ozg'in sichqonlarning to'qimalari. Izchil ravishda, biz tez-tez DIO sichqonlarida NT va o'pka to'qimalarining epiteliyasida virusli N oqsilini aniqladik, ammo ozg'in sichqonlarda emas (3d-rasm). Gistologik tekshiruvlar NT to'qimalarida epiteliya destruktsiyasi, shuningdek, DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida alveolyar devor tiqilishi, peribronxiolyar infiltratsiya va mahalliy alveolyar qon ketishini aniqladi, ammo ozg'in sichqonlarda emas (3e-rasm). Keyinchalik, biz ozg'in va DIO sichqonlarida qayta infektsiyalanganida immun xotira reaktsiyalarining esga olinishini baholadik, biz DIO sichqonlarining o'pka va taloq to'qimalarida virusga xos IFN va IgG ishlab chiqaruvchi hujayralar ozg'in sichqonlarga qaraganda ancha past ekanligini aniqladik. 2dpr (3f va g-rasm). Muhimi shundaki, biz Alpha ni qayta yuqtirgandan so'ng 2-kuni DIO sichqonlari zardobida Alfa ga qarshi neytrallashtiruvchi antikor titrini aniqlay olmadik, qayta yuqtirilgan ozg'in sichqonlarning 4/6 (66,7%) esa neytrallash titri 1 ga teng edi. :10 (3h-rasm). Shunday qilib, bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatadiki, DIO sichqonlari SARS-CoV-2 infektsiyasiga moslashtirilmagan B hujayra va T hujayralari immun javoblari tufayli qayta infektsiyalarga ko'proq moyil bo'ladi.

4-rasm: COVID-19 mRNK vaktsinasi zaiflashgan adaptiv immun javobi tufayli DIO sichqonlarida alfa infektsiyasidan kamroq himoya qiladi. a

COVID-19 mRNK vaktsinasi zaiflashgan adaptiv immun javob tufayli DIO sichqonlarida alfa infektsiyasidan kamroq himoya qiladi

mRNK vaktsinalari bilan immunizatsiya qilinganidan keyin DIO sichqonlarini himoya qilish samaradorligini o'rganish uchun biz DIO va ozg'in sichqonlarga ikki dozali COVID{1}} mRNK emlash rejimini mushak ichiga kiritdik, so'ngra 14-rasmda ko'rsatilganidek, kuchaytirilgandan keyin Alpha sinovini o'tkazdik. 4a. NT to'qimalari uchun biz emlangan oriq sichqonlarning 3/6 (50%) qismida virusli RdRp geni va 2/6 (33,3%) qismida yuqumli titrni aniqladik, barcha emlanganlarda virusli RdRp geni va yuqumli titrni aniqladik. DIO sichqonlari (4b-rasm), emlashdan keyingi infektsiya DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlarga nisbatan ancha oson sodir bo'lganligini ko'rsatadi. Tavsiya etilgan emlashlar inson va hayvonlar modellaridagi yuqori nafas yo‘llariga nisbatan quyi nafas yo‘llarini yaxshiroq himoya qilishiga oid oldingi hisobotlarga muvofiq, 43,44 biz emlangan o‘pka to‘qimalarining birortasidan ham virusli gen nusxasini yoki yuqumli virusni aniqlamadik. oriq sichqonlar (4c-rasm). Aksincha, biz DIO sichqonlarining 3/6 (50%) qismida virusli RdRp genini va o'pka to'qimalarining 4/6 (66,7%) qismida yuqumli titrni aniqladik. Gistologik nuqtai nazardan, biz emlangan DIO sichqonlarining NT to'qimalarida Alpha virusi tomonidan sinovdan so'ng keng tarqalgan epiteliyning yo'q qilinishini kuzatdik, emlangan ozg'in sichqonlarda esa kamroq darajada NT to'qimalarining shikastlanishi kuzatildi (4d-rasm). Emlangan DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida biz Alpha infektsiyasida alveolyar qon ketish o'choqlari bilan birga alveolyar bo'shliqda tiqilishi va infiltratsiyasini aniqladik, emlangan ozg'in sichqonlarning o'pka to'qimalarida esa bu histopatologik shikastlanishlar asosan yo'q edi (4e-rasm). Ushbu topilmalarga muvofiq, COVID-19 mRNK vaktsinasi NT to'qimalarida ham yog'siz, ham DIO sichqonlarida SARS-CoV- 2 N ifodasini kamaytirdi (4f-rasm). O'pka to'qimalarida virusli N signallari faqat emlangan DIO sichqonlarida aniqlangan, ammo emlanmagan ozg'in sichqonlarda (4g-rasm). Keyinchalik, biz emlangan DIO sichqonlarining taloq to'qimalarida virusga xos IFN- va IgG ishlab chiqaruvchi hujayralar Alfa infektsiyasidan keyin 2-kuni emlangan ozg'in sichqonlar bilan solishtirganda sezilarli darajada past ekanligini aniqladik (4h-rasm). Muhimi, mikroneytralizatsiya tahlili DIO sichqonlari zardobida faqat ikkinchi emlash dozasidan 14 kun o‘tgach va virusga qarshi kurashdan 2 kun o‘tgach, Alfa ga qarshi neytrallovchi antikorni aniqladi, ammo bu daraja 2.8-katta (p <0,0001) va 21 edi. .8- burmalar (p=0.0053) mos ravishda ozgʻin sichqonlarnikidan pastroq (4i-rasm). Umuman olganda, bu natijalar DIO sichqonlarida COVID-19 mRNK emlashiga moslashgan antikor javoblari buzilganligini koʻrsatadi.

COVID-19 mRNK vaktsinasi DIO sichqonlarida Omicron BA.1 chaqiruvi natijasida kelib chiqqan oʻpkaning shikastlanishini yaxshilaydi, chunki aniqlangan neytrallovchi antikorlar mavjud emas.

Keyin biz COVID{0}} mRNK vaktsinasi DIO sichqonlarini SARS-CoV-2 Omicron BA.1 dan qanchalik himoyalashini soʻradik. Shu maqsadda biz birinchi marta Omicron BA.1 ga qarshi zardob neytrallashtiruvchi antikor titrini sinovdan o‘tkazdik va kuchayishdan keyin 14 kun ichida ozg‘in sichqonlarda past titrni aniqladik, shu bilan birga DIO sichqonlarida COVID{{ emlashning ikki dozasidan keyin ham neytrallashtiruvchi antikor titri aniqlanmadi. 6}} mRNK kuchayishi yoki Omicron BA.1 infektsiyasidan 2 kun o'tgach (5a va b-rasm), bu DIO sichqonlarida emlash Omicron BA.1 ga nisbatan kam o'zaro faoliyat antikorlarni keltirib chiqarganini ko'rsatadi. Keyinchalik, DIO va ozg'in sichqonlar emlashdan keyin 14 kun ichida intranazal yo'l orqali Omicron BA.1 ning 103 PFU bilan sinovdan o'tkazildi (5a-rasm). NT to'qimalarida COVID{15}} mRNK vaktsinasi ozg'in sichqonlarda Omicron BA.1 replikatsiyasini va yuqumli titrni kamaytirdi, ammo DIO sichqonlarida emlanmagan nazorat guruhlariga nisbatan kam ta'sir ko'rsatdi (5c-rasm). Qizig'i shundaki, COVID{18}} mRNK vaktsinasi DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida Omicron BA.1 replikatsiyasini emlanmagan nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaytirdi, ammo emlangan yog'siz o'pka to'qimalarida Omicron BA.1 ni to'liq inhibe qilish kabi samarali emas. sichqonlar (5d-rasm). Xususan, emlangan DIO sichqonlarida Omicron BA.1 RdRp gen nusxasi 867-katta (p=0.0087) va yuqumli titr 7979.9-katlama (p < 0,0001) ga kamaydi. . Yuqoridagi virusologik topilmalarga muvofiq, COVID{30}} mRNKga qarshi emlash ozgʻin va DIO sichqonlarining NT toʻqimalarida Omicron BA.1 antijeni ekspressiyasini kamaytirishda samarasiz boʻlgan, ammo ozgʻin va DIO sichqonlarining oʻpka toʻqimalarida Omicron BA.1 antijeni ekspressiyasini kamaytirgan. (5e-rasm). 2 dpi tezlikda Omicron BA.1 infektsiyasi alveolyar bo'shliqda ma'lum darajada tiqilib qolish va infiltratsiyaga olib keldi, emlanmagan DIO sichqonlarida o'pka qon ketishi va epiteliyning shikastlanishi bilan birga COVID-19 mRNK emlashi bilan kamayadi (5f-rasm). Muhimi shundaki, biz emlangan DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida IFN- va IFN- kontsentratsiyasi Omicron BA.1 sinovidan keyin emlanmagan sichqonlarga nisbatan 2 dpi tezlikda sezilarli darajada oshganini aniqladik, shu bilan birga sarumni neytrallashtiruvchi antikor emlanganlardan aniqlanmadi. DIO sichqonlari (5g-rasm). Tana vaznining oʻzgarishi boʻyicha kasallikning umumiy ogʻirligi shuni koʻrsatdiki, COVID{44}} mRNKga qarshi emlash DIO sichqonlarida maksimal tana vaznining yoʻqotilishini emlanmagan DIO sichqonlaridagi 13% bilan solishtirganda 9% gacha kamaytirdi (Qoʻshimcha S6-rasm). Birgalikda bu natijalar shuni ko'rsatadiki, aniqlanmaydigan darajada antikor reaktsiyasini qo'zg'atsa ham, COVID{48}} mRNK vaktsinasi Omicron BA.1-DIO sichqonlarida o'pka to'qimalarining shikastlanishini yaxshilash uchun tug'ma antiviral javoblarni kuchaytirishi mumkin.

5-rasm: COVID-19 mRNK vaktsinasi Omicron BA.1-infektsiyalangan DIO sichqonlarida neytrallashtiruvchi antikor reaktsiyasi boʻlmaganda oʻpkaning shikastlanishini yaxshilaydi. a

COVID-19 mRNKga qarshi emlash DIO sichqonlarining oʻpkalarida virusga qarshi javoblarni kuchaytiradi

COVID-19 mRNK vaktsinasi bilan DIO sichqonlarining oʻpka toʻqimalarida immun javoblarini yaxshiroq tushunish uchun biz sichqonlarning oʻpka namunalarini oldik va Omicron BA.1 infektsiyasining 2-kuni ularning transkriptom profilini oʻrgandik (6a-rasm va qoʻshimcha rasm). S7). Ajablanarlisi shundaki, biz emlangan DIO sichqonlarining o'pka to'qimalarida "IFN- va IFN- ga hujayrali javob" va "IFN- va IFN- ishlab chiqarishning ijobiy regulyatsiyasi" kabi tug'ma antiviral javoblar bilan bog'liq bo'lgan genlarning sezilarli darajada boyitilganini kuzatdik. 6b-rasm). Immun gen to'plamlarini tahlil qilish, emlangan DIO sichqonlari barcha baholangan guruhlar orasida M1 makrofaglarining eng yuqori ko'pligiga ega ekanligini ko'rsatdi (6c-rasm). COVID{12}} mRNK vaktsinasi alveolyar makrofaglarda antiviral interferon javoblarini kuchaytirganligini baholash uchun biz alveolyar makrofaglarni oriq sichqonlar va DIO sichqonlaridan ajratib oldik va mRNK vaktsinasi bilan stimulyatsiya qildik (7a-rasm). Biz mRNK vaktsinasi sichqoncha alveolyar makrofaglarini in vitro stimulyatsiyasi RIG-I, MDA5, STAT1, STAT2, ISG15, IFIT3 va OAS3 ning sezilarli darajada ko'tarilishini keltirib chiqarganini aniqladik, faqat DIO sichqonlarining alveolyar makrofaglari mRda IFN- ishlab chiqarishning sezilarli darajada yaxshilanganligini ko'rsatdi. va oqsil darajasi (7b va c-rasm). Ushbu topilmalar DIO sichqonlari va ozg'in sichqonlardan alveolyar makrofaglarning differentsial javob profilini taklif qildi. Keyinchalik, biz emlangan yoki emlanmagan yog'siz va DIO sichqonlaridan sichqon alveolyar makrofaglarini ajratib oldik, so'ngra hujayralarni poli (I: C) yoki SARS-CoV-2 boshoq oqsili bilan stimulyatsiya qildik (7d-rasm). Poli (I: C) bilan in vitro stimulyatsiya emlangan ozg'in va DIO sichqonlarining alveolyar makrofaglarida tug'ma immun javob bilan bog'liq genlar ifodasini yanada oshirdi. Qizig'i shundaki, ISG15, IFIT3 va OAS3 ni o'z ichiga olgan interferon bilan stimulyatsiya qilingan genlar DIO sichqonlarining emlangan alveolyar makrofaglarida ozg'in sichqonlarga qaraganda ancha yuqori tartibga solingan (7e-rasm). Bunga parallel ravishda, rekombinant SARS-CoV-2 spike protein stimulyatsiyasi vaktsinada RIG-I, TLR3, IL-6, TNF-, IFN-, IFN-, IRF7 va STAT2 mRNK ifodasini oshirdi. DIO sichqonlarining astarlangan alveolyar makrofaglari, ammo ozg'in sichqonlar emas (7g-rasm). Muhimi, poli (I: C) yoki S proteinini stimulyatsiya qilishga javoban emlangan DIO sichqonlarining alveolyar makrofaglarida IFN- ishlab chiqarish keskin oshdi (7f va h-rasm). Birgalikda bu natijalar shuni ko'rsatadiki, COVID-19 mRNK vaktsinasi alveolyar makrofaglarda interferon bilan bog'liq bo'lgan I tip genlarning ekspressiyasini modulyatsiya qilish orqali DIO sichqonlarining o'pkasida tug'ma antiviral javobni tiklashi mumkin.

6-rasm: COVID-19 mRNK vaksinatsiyasi DIO sichqonlarining o‘pkalarida virusga qarshi javoblarni kuchaytiradi. a

Munozara

Semirib ketish yallig'lanish reaktsiyalarining kuchayishi va immunitet tizimining buzilishi bilan bog'liq bo'lib, natijada COVID-19 bemorlari uchun jiddiylik va kasalxonaga yotqizish xavfi yuqori bo'ladi.45 Bu surunkali past darajadagi yallig'lanish va immun reaktsiyalarining disfunktsiyasi qanday ekanligi noma'lumligicha qolmoqda. SARS-CoV-2 infektsiyasi kursini modulyatsiya qilish. SARS-CoV-2 patogenezini oʻrganish va semirib ketgan odamlarda COVID{7}} mRNK emlash samaradorligini baholash uchun COVID-19 bilan kasallangan bemorlarning klinik xususiyatlarini taqlid qilish uchun zudlik bilan tegishli mayda hayvonlar modellari zarur. . Biroq, ota-bobolarning SARS-CoV-2 yovvoyi turdagi laboratoriya sichqonlarini yuqtirmaydi, chunki ajdodlar boshoqining RBD sichqonchani ACE bilan samarali bog‘lamaydi2.21,40,41 Qizig‘i shundaki, yaqinda paydo bo‘lgan SARS-CoV-2 variantlari , jumladan Alpha (B.1.1.7), Beta (B.1.351), Gamma (P.1) va Omicron BA.1 (B.1.1.529.1) spikedagi N501Y mutatsiyasiga ega bo'lib, ular o'zaro faoliyatni ta'minlaydi. SARS-CoV-2 ning yovvoyi turdagi sichqonlarga oʻtishi.41,46–50 Ushbu tadqiqotda biz SARS-CoV-2 Alpha va sichqonchani oʻrganish uchun parhezga asoslangan semiz yovvoyi sichqoncha modelidan foydalanamiz. Omicron BA.1 patogenezi, qayta infektsiyasi va emlash.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, Omicron BA.1 infektsiyasi tana vaznining o'zgarishi, virus yuki, virus titri, o'pka proinflamatuar belgilari va gistopatologik topilmalar bo'yicha ozg'in sichqonlarda Alpha infektsiyasiga qaraganda kamroq. Bu natijalar hayvonlar modellarida oldingi SARS-CoV-2 variantlari bilan solishtirganda Omicron BA.1 tomonidan infektsiyaning pastroq darajasi kuzatilgan so'nggi hisobotlarga mos keladi.14,42 SARS-CoV ning kuchayishi{{7} } DIO sichqonlarida ozg'in sichqonlarga qaraganda infektsiya dietadan kelib chiqqan semiz sichqonlar va hamsterlarda o'tkazilgan so'nggi tadqiqotlar natijalariga mos keladi.51–53 Qizig'i shundaki, biz Omicron BA.1 DIO sichqonlarida Alpha bilan solishtirganda o'xshash darajaga ko'payganini aniqladik. natijada DIO sichqonlarida Omicron BA.1 va Alpha ning solishtirish mumkin bo'lgan patogenligi. Xususan, IP-10 va IL-6 kabi vakil qiluvchi yallig'lanishga qarshi sitokinlar DIO sichqonlarida Omicron BA.1 infektsiyasi tomonidan kuchli tarzda tetiklangan, bu yallig'lanish shikastlanishi va kasallanishning kuchayganligini ko'rsatadi.54 Shu bilan birga, o'pka to'qimalarida antiviral IFN ishlab chiqarilishini ko'rsatadi. DIO sichqonlarining soni Alpha va Omicron BA.1 infektsiyasida ozg'in sichqonlarga qaraganda ancha past bo'lgan. Ushbu natijalar DIO sichqonlarida Omicron BA.1 infektsiyasi Alpha sichqonlariga o'xshash jiddiy kasalliklarga olib kelishi mumkinligini ko'rsatadi. Semizlik COVIDdagi og‘ir kasalliklarga qanday hissa qo‘shishi hozircha to‘liq tushunilmagan-19. Leptin darajasining oshishi semizlikning o'ziga xos belgisi bo'lib, u metabolizmni, Jak/STAT va Akt signalizatsiya yo'llarini tartibga soladi va og'ir oqibatlarga olib kelishi mumkin bo'lgan T hujayralari funktsiyalarini modulyatsiya qiladi. 57–59, shu bilan birga SARS-CoV{25}}yuqtirgan sichqonlarda virusni optimal tozalash CD4+ va CD8+ T hujayralari javoblarini ham talab qiladi.60 Ushbu tadqiqotda biz B hujayralarining sezilarli darajada pastroq darajasini aniqladik. va DIO sichqonlarining T-hujayra javoblari ozg'in sichqonlar bilan solishtirganda, bu DIO sichqonlarida qayta infektsiyaning sezuvchanligini oshirishga yordam beradi. DIO sichqonlarida kamaygan B hujayra va T hujayralari javobining asosiy mexanizmi to'liq o'rganilmagan, ammo gripp virusi bo'yicha oldingi tadqiqotlarda aniqlanganidek, dendritik hujayralar faoliyatining buzilishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin.61-63

SARS-CoV-2 ning og‘ir kasalliklaridan himoya qilish uchun yuqori samaradorlik bilan COVID-19 mRNK emlash muvaffaqiyatiga qaramay, SARS-CoV-2 variantlarida immunitetdan qochishning paydo bo‘lishi vaksina samaradorligini xavf ostiga qo‘yishi mumkin.43 Ikki dozali immunizatsiya rejimiga ega bo'lgan DIO sichqoncha modelimizda ozg'in sichqonlarda neytrallashtiruvchi antikor osonlik bilan aniqlandi va Alpha va Omicron BA.1 ga qarshi emlashning ikkinchi dozasi bilan mustahkam oshirildi. Aksincha, COVID-19 mRNKga qarshi emlashning ikki dozali immunizatsiya rejimi DIO sichqonlarida Alpha va Omicron BA.1 ga qarshi sarum neytrallashtiruvchi antikorni aniqlab boʻlmaydigan holatga keltirdi va hatto 2-kunida ham Omicron BA.1 ga qarshi neytrallashtiruvchi antikor aniqlanmadi. Omicron BA.1 sinovida. Bu topilmalar shuni ko'rsatadiki, DIO sichqonlarida mRNK vaktsinasiga moslashgan B hujayralarining javoblari sezilarli darajada zaiflashadi, bu B hujayralari rivojlanishi, faollashuvi va funktsiyalaridagi buzilishlar bilan bog'liq bo'lishi mumkin.64-66 Qizig'i shundaki, emlash Omicron BA uchun ma'lum darajadagi himoyani taklif qildi. .1-DIO sichqonlari pastki nafas yo‘llarida, lekin yuqtirilgan hayvonlarning burun tiqmalarida emas. Burun turbinasi to'qimalarida etarli darajada himoyalanmaganligi mushak ichiga emlash paytida shilliq qavatning immuniteti etarli emasligi sababli bo'lishi mumkin, bu shilliq qavatlarda etarli himoya immunitetini keltirib chiqarmaydi.67,68

7-rasm: DIO sichqonlarining alveolyar makrofaglari (AM) yuqori tartibga solinadigan antiviral javoblarga hissa qo'shadi. a

Transkriptomik tahlil orqali biz COVID-19 mRNK vaktsinasi DIO sichqonlarining o‘pkalarida virusga qarshi javoblarni kuchaytirganini aniqladik. Keyingi tajribalar shuni ko'rsatdiki, emlangan DIO sichqonlarining alveolyar makrofaglarida poli (I: C) yoki SARS-CoV-2 spike oqsil stimulyatsiyasiga javoban IFN- ishlab chiqarish ko'paygan. Omicron BA.1- emlangan DIO sichqonlarida virus yukining kamayishi va gistopatologik oʻzgarishlar hamda IFN-/ kontsentratsiyasining ortishi bilan birga, bizning topilmalarimiz shuni koʻrsatadiki, mRNK emlash semiz hayvonlarda xostning tugʻma immunitetini oshiradi. kuzatilgan himoyaga hissa qo‘shadi. Umuman olganda, bizning tadqiqotimiz SARS-CoV-2 Alpha va Omicron BA.1 infektsiyasi, qayta yuqtirish va dietadan kelib chiqqan semirib ketgan sichqonlarda emlash haqida muhim bilimlarni ochib beradi, bu esa ularni boshqarish, davolash va emlash strategiyalari haqida tushuncha beradi. semirib ketgan populyatsiyalar. Bizning tadqiqotimiz bir nechta cheklovlarga ega. Birinchidan, biz birlamchi infektsiyadan keyin 28 kun ichida qayta sinovni o'tkazdik. Haqiqiy hayot stsenariylarida xotiraning uzoq umr ko'rishi va bemorlarda qayta infektsiyadan himoyalanish uzoqroq vaqt oralig'ida kuzatilishi kerak. Ikkinchidan, bu tadqiqotda urgʻochi sichqonlardan foydalanilgan, chunki urgʻochilar erkaklarnikiga qaraganda kuchliroq tugʻma va adaptiv immunitetga ega ekanligi maʼlum.69 Jinslar oʻrtasidagi SARS-CoV-2 ga qarshi differentsial immun javoblar va ularning COVID kasalligi rivojlanishidagi roli{{ 19}} batafsil o'rganilishi kerak. Uchinchidan, biz ushbu tadqiqot uchun faqat yovvoyi tipdagi sichqonlar modelidan foydalandik, COVID-19 mRNK vaksinatsiyasi tug‘ma immun javoblarni yaxshilaydimi yoki yo‘qligi haqidagi topilmalarimizni tasdiqlash va yanada o‘rganish uchun kelajakdagi klinik tadqiqotlarda odamlarda qo‘shimcha baholash o‘tkazilishi kerak. Emlangan semiz odamlarda SARS-CoV-2 infektsiyasi. Shunga qaramay, bizning tadqiqotimiz semiz bemorlarda SARS-CoV-2 infektsiyasi bilan og'irroq klinik kasalliklar rivojlanishi va qayta infektsiyalar yoki vaktsina orqali yuqadigan infektsiyalarga ko'proq moyil bo'lishi mumkinligini ko'rsatadigan muhim tushunchalar beradi. Muhimi, bizning maʼlumotlarimiz shuni koʻrsatadiki, COVID{28}} mRNK vaksinalari semiz odamlarda antikor reaktsiyasi past yoki yoʻqligiga qaramay samarali boʻlib qolishi va bu populyatsiyalarda emlash muhimligini yana bir bor taʼkidlaydi.

Ma'lumotnomalar

1 Zhou P, Yang XL, Vang XG va boshqalar. Ko'rshapalak kelib chiqishi mumkin bo'lgan yangi koronavirus bilan bog'liq pnevmoniya epidemiyasi. Tabiat. 2020;579(7798):270–273.

2 Chu H, Chan JF, Yuen TT va boshqalar. SARS-CoV-2 va SARS-CoV ning qiyosiy tropizmi, replikatsiya kinetikasi va hujayra shikastlanishi profilini aniqlash, COVID-19 ning klinik koʻrinishlari, oʻtkazuvchanligi va laboratoriya tadqiqotlari uchun taʼsiri: kuzatuv tadqiqoti. Lancet mikrobi. 2020;1(1):e14–e23.

3 Chan JF, Kok KH, Zhu Z va boshqalar. Vuxanga tashrif buyurganidan keyin atipik pnevmoniya bilan og'rigan bemordan ajratilgan 2019 yilgi yangi inson-patogen koronavirusning genomik tavsifi. Yangi paydo bo'lgan mikroblar yuqadi. 2020;9(1):221–236.

4 Williamson EJ, Walker AJ, Bhaskaran K va boshqalar. OpenSAFELY yordamida COVID{1}}bogʻliq oʻlim bilan bogʻliq omillar. Tabiat. 2020;584(7821):430–436.

5 Guh DP, Chjan V, Bansback N, Amarsi Z, Birmingem CL, Anis AH. Semirib ketish va ortiqcha vazn bilan bog'liq bo'lgan birgalikda kasalliklarning tarqalishi: tizimli tahlil va meta-tahlil. BMC Jamoat salomatligi. 2009;9:88.

6 Chjan AJX, Zhu H, Chen Y va boshqalar. Prostaglandin E2-paratsetamol yordamida semirib ketgan sichqonlarda A(H1N1)pdm09 infektsiyasiga tug'ma immunitetning buzilishi vositachilik bilan tiklanishi mumkin. J Infect Dis. 2019;219(5):795–807.

7 Smit AG, Sheridan PA, Harp JB, Bek MA. Parhezli semiz sichqonlar gripp virusi bilan kasallanganda o'limni oshirdi va immunitetni o'zgartirdi. J Nutr. 2007;137(5):1236– 1243.

8 Hulme KD, Noye EC, Short KR, Labzin LI. Semirib ketish davrida tartibga solinmagan yallig'lanish: gripp virusi va SARS-CoV-2 infektsiyalarida kasallikning og'irligini oshiradi. Old immunol. 2021;12:770066.

9 Sanchis-Gomar F, Lavi CJ, Mehra MR, Genri BM, Lippi G. Semizlik va COVIDdagi natijalar-19: epidemiya va pandemiya to‘qnashganda. Mayo Clin Proc. 2020;95(7):1445–1453.

10 Kruglikov IL, Shah M, Scherer PE. Semirib ketish va qandli diabet COVID-19 uchun birgalikdagi kasallik: asosiy mexanizmlar va virus-bakterial oʻzaro taʼsirlarning roli. Elife. 2020;9:e61330.

11 Chen X, Xu V, Ling J va boshqalar. Gipertenziya va diabet COVID-19 bilan og'rigan bemorlarda virusni tozalashni kechiktiradi. medRxiv. 2020. https://doi. org/10.1101/2020.03.22.20040774.

12 Nasr MC, Geerling E, Pinto AK. Semizlikning SARS-CoV ga qarshi emlashga ta'siri-2. Old endokrinol (Lozanna). 2022;13:898810.

13 Viana R, Moyo S, Amoako DG va boshqalar. Janubiy Afrikada SARS-CoV-2 Omicron variantining tez epidemiyasi kengayishi. Tabiat. 2022;603(7902):679–686.

14 Shuai H, Chan JF, Xu B va boshqalar. SARS-CoV ning zaiflashtirilgan replikatsiyasi va patogenligi-2 B.1.1.529 Omicron. Tabiat. 2022;603(7902): 693–699.

15 Xu B, Chan JF, Liu H va boshqalar. Spike mutatsiyalari SARS-CoV-2 Omicron BA.1 va BA.2 ning kirish afzalligining oʻzgarishiga yordam beradi. Yangi paydo bo'lgan mikroblar yuqadi. 2022;11:1–31.

16 Chan JF, Xu B, Chai Y va boshqalar. SARS-CoV ning virusologik xususiyatlari va patogenligi-2 Omicron BA.2. Cell Rep Med. 2022;3(9):100743.

17 Yuan S, Ye ZW, Liang R va boshqalar. Suriyalik hamsterlarda SARS-CoV-2 Omicronning patogenligi, uzatilishi va yaroqliligi. Fan. 2022;377(6604):428–433.

18 Lu L, Mok BW, Chen LL va boshqalar. SARS-CoV-2 Omicron variantini BNT162b2 yoki Coronavac vaktsinasi oluvchilardan sarumlar yordamida neytrallash. Clin Infect Dis. 2022;75(1):e822–e826. https://doi.org/10. 1093/cid/ciab1041.

19 Liu L, Iketani S, Guo Y va boshqalar. SARS-CoV-2 ning Omicron variantida namoyon bo'ladigan antikorlarning ajoyib qochishi. Tabiat. 2022;602(7898): 676–681.

20 Iketani S, Liu L, Guo Y va boshqalar. SARS CoV-2 Omicron subliniyalarining antikorlardan qochish xususiyatlari. Tabiat. 2022;604(7906):553–556.

21 Chen Y, Li C, Liu F va boshqalar. Yoshga bog'liq SARS-CoV-2 infektsiyasi va sichqoncha modelidagi immun javobidagi o'zgarishlar. Yangi paydo bo'lgan mikroblar yuqadi. 2022;11(1):368–383.

22 Chjan X, Goncalves R, Mosser DM. Sichqoncha makrofaglarining ajratilishi va xarakteristikasi. Curr Protoc Immunol. 2008;83(1): 14:14.1.1-14.1.14.

23 Li C, Chen Y, Zhao Y va boshqalar. Koronavirus kasalligi 2019 (COVID-19) mRNK vaksinasini tomir ichiga yuborish sichqoncha modelida oʻtkir mioperikarditni keltirib chiqarishi mumkin. Clin Infect Dis. 2022;74(11): 1933–1950 yillar.

24 Li C, Chen YX, Liu FF va boshqalar. Suriya hamster modelida virusga qarshi kurash boshlanganidan keyin 3 kun ichida inaktivatsiya qilingan vaktsina orqali kuchli oʻtkir respirator virusli koronavirus 2 (SARS-CoV-2) dan kutilmagan ijobiy himoyaga ega vaksina bilan kuchaytirilgan kasallikning yoʻqligi. Clin Infect Dis. 2021;73(3):e719–e734.

25 Vogel AB, Kanevskiy I, Che Y va boshqalar. BNT162b vaktsinalari rezus-makakalarni SARS-CoV-2 dan himoya qiladi. Tabiat. 2021;592(7853):283–289.

26 Li AC, Chjan AJ, Chan JF va boshqalar. Og'iz orqali SARS-CoV-2 inokulyatsiyasi oltin rangli suriyalik hamsterlarda virus tarqalishi bilan subklinik respirator infektsiyani aniqlaydi. Cell Rep Med. 2020;1(7):100121.

27 Meyerholz DK, Bek AP. Tadqiqotda to'qima bo'yoqlarini takrorlanadigan skorlama tamoyillari va yondashuvlari. Lab Invest. 2018;98(7): 844–855.

28 Chu H, Shuai H, Hou Y va boshqalar. Yuqori patogenli koronavirus keltirib chiqaradigan apoptozni nishonga olish virus patogenezini va kasallikning og'irligini kamaytiradi. Sci Adv. 2021;7(25):eabf8577.

29 Chu H, Hou Y, Yang D va boshqalar. Koronaviruslar replikatsiya uchun xost sistein aspartik proteazdan foydalanadi. Tabiat. 2022;609(7928):785–792.

30 Chjan AJ, Li C, To KK va boshqalar. Tollga o'xshash retseptor 7 agonisti imikimod grippga qarshi vaktsina bilan birgalikda BALB/c sichqonlarida A(H1N1)pdm09 gripp virusi infektsiyasiga qarshi gumoral immun javoblarni tezlashtiradi va kuchaytiradi. Clin vaktsinasi immunol. 2014;21(4):570–579.

31 Li C, To KKW, Zhang AJX va boshqalar. TLR7 agonisti imikimod va inaktivlangan gripp virusi zarralari bilan birgalikda stimulyatsiya sichqonchaning B hujayralari faollashishiga, differentsiatsiyasiga va tezlashtirilgan antigenga xos antikor ishlab chiqarishga yordam beradi. Old immunol. 2018;9:2370.

32 Zhou R, To KK, Wong YC va boshqalar. O'tkir SARS-CoV-2 infektsiyasi dendritik hujayralar va T-hujayralarning javoblarini buzadi. Immunitet. 2020;53(4): 864–877.e5.

33 Chen S, Chjou Y, Chen Y, Gu J. fastp: o'ta tezkor barcha birida FASTQ preprotsessor. Bioinformatika. 2018;34(17):i884–i890.

34 Edgar R. URMAP, o'ta tez o'qiladigan mapper. PeerJ. 2020;8:e9338.

35 Kim D, Paggi JM, Park C, Bennett C, Salzberg SL. HISAT2 va HISAT-genotip bilan grafik asosidagi genomni moslashtirish va genotiplash. Nat Biotexnol. 2019;37(8):907–915.

36 Pertea M, Pertea GM, Antonescu CM, Chang TC, Mendell JT, Salzberg SL. StringTie RNK-seq o'qishlaridan transkriptomani yaxshilangan qayta qurish imkonini beradi. Nat Biotexnol. 2015;33(3):290–295.

37 Love MI, Huber W, Anders S. DESeq2 bilan RNK-seq ma'lumotlari uchun qatlam o'zgarishi va dispersiyani mo''tadil baholash. Genom Biol. 2014;15(12):550.

38 Yu G, Vang LG, Xan Y, Xe QY. clusterProfiler: gen klasterlari orasida biologik mavzularni solishtirish uchun R to'plami. OMICS. 2012;16(5):284–287.

39 Miao YR, Xia M, Luo M, Luo T, Yang M, Guo AY. ImmuCellAI sichqonchasi: sichqonchaning immun hujayralarining ko'pligini va immun mikro muhitni tasvirlash uchun har tomonlama bashorat qilish uchun vosita. Bioinformatika. 2021;38:785.

40 Shuai H, Chan JF, Yuen TT va boshqalar. Rivojlanayotgan SARS-CoV-2 variantlari tur tropizmini murinlarga kengaytiradi. biotibbiyot. 2021;73:103643.

41 Gu H, Chen Q, Yang G va boshqalar. Vaktsina samaradorligini tekshirish uchun BALB/c sichqonlarida SARS-CoV-2 moslashuvi. Fan. 2020;369(6511):1603– 1607.

42 Halfmann PJ, Iida S, Iwatsuki-Horimoto K va boshqalar. SARS-CoV-2 Omikron virusi sichqonlar va hamsterlarda zaiflashgan kasallikni keltirib chiqaradi. Tabiat. 2022;603(7902):687–692.

43 Krause PR, Fleming TR, Longini IM va boshqalar. SARS-CoV-2 variantlari va vaktsinalari. N Engl J Med. 2021;385(2):179–186.

44 Corbett KS, Nason MC, Flach B va boshqalar. Noinsoniy primatlarda SARS-CoV-2 ga qarshi mRNK-1273 vaktsinasi bilan himoyalanishning immun bogʻliqligi. Fan. 2021;373(6561):eabj0299.

45 Hamer M, Geyl CR, Kivimäki M, Batty GD. Ortiqcha vazn, semizlik va COVID uchun kasalxonaga yotqizish xavfi-19: Birlashgan Qirollikdagi kattalar ishtirokidagi jamoaviy tadqiqot. Proc Natl Acad Sci AQSh. 2020;117(35):21011–21013.

46 Mannar D, Saville JW, Zhu X va boshqalar. SARS-CoV-2 Omikron varianti: antikorlardan qochish va spike protein-ACE2 kompleksining kriyo-EM tuzilishi. Fan. 2022;375(6582):760–764.

47 Chjan Y, Huang K, Vang T va boshqalar. SARS-CoV-2 yoshi BALB/c sichqonlarida tez moslashadi va odatdagi pnevmoniyani keltirib chiqaradi. J Virol. 2021;95(11):e02477.

48 Huang H, Zhu Y, Niu Z, Zhou L, Sun Q. SARS-CoV-2 N501Y tashvishli variantlari va ularning sichqoncha orqali yuqishi mumkin. Hujayra o'limi farq qiladi. 2021;28(10):2840–2842.

49 Niu Z, Zhang Z, Gao X va boshqalar. N501Y mutatsiyasi retseptorlarning ulanishini kuchaytirish orqali sichqonlarga SARS-CoV-2 ning turlararo uzatilishini ta'minlaydi. Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):284.

50 Chu H, Chan JF, Yuen KY. SARS-CoV-2 tadqiqotida hayvonlar modellari. Nat usullari. 2022;19(4):392–394.

51 Briand F, Sencio V, Robil C va boshqalar. Parhezdan kelib chiqqan semirish va NASH SARS-CoV-2-yuqtirilgan oltin hamsterlarda kasallikning tiklanishiga putur etkazadi. Viruslar. 2022;14(9):2067.

52 Port JR, Adney DR, Schwarz B va boshqalar. Yog‘li yuqori shakarli dietadan kelib chiqqan lipidlar almashinuvidagi o‘zgarishlar suriyalik hamsterda COVID-19 og‘irligining biroz oshishi va tiklanishning kechikishi bilan bog‘liq. Viruslar. 2021;13(12):2506.

53 Zhang YN, Zhang ZR, Zhang HQ va boshqalar. Sichqonchaga moslashtirilgan SARS-CoV-2 bilan kasallangan semiz sichqonlarning kasallanishi ortdi. Hujayra diski. 2021;7(1):74.

54 Akbar AN, Gilroy DW. Qarish immuniteti COVIDni kuchaytirishi mumkin-19. Fan. 2020;369(6501):256–257.

55 Rebello CJ, Kirwan JP, Greenway FL. Semizlik, SARS-CoV-2da eng ko'p uchraydigan kasallik: leptin bog'liqmi? Int J Obes. 2020;44(9):1810–1817.

56 Mullen M, Gonsales-Peres RR. Leptin tomonidan qo'zg'atilgan JAK / STAT signalizatsiyasi va saraton o'sishi. Vaktsinalar (Bazel). 2016;4(3):26.

57 Zhu A, Chen Z, Vang Y va boshqalar. Odamlarda SARS-CoV-2 infektsiyasiga va ACE2 insoniylashtirilgan sichqonlarga immun javoblari. Fundam Res. 2021;1(2):124–130.

58 Achkar JM, Casadeval A. Silga qarshi antikor vositachiligidagi immunitet: vaktsinani ishlab chiqish uchun ta'sir. Hujayra xost mikrobi. 2013;13(3):250–262.

59 Casadeval A, Pirofski LA. Antikor vositachiligidagi immunitet uchun yangi sintez. Nat immunol. 2011;13(1):21–28.

60 Israelow B, Mao T, Klein J va boshqalar. SARS-CoV -2 sichqon modellarida virusni tozalash va himoya qilishning adaptiv immun determinantlari. Sci Immunol. 2021;6(64):eabl4509.

61 Smit AG, Sheridan PA, Tseng RJ, Sheridan JF, Bek MA. Gripp virusi bilan kasallangan semiz sichqonlarda dendritik hujayralar funktsiyasining selektiv buzilishi va antigenga xos CD 8+ T-hujayralarining javoblari. Immunologiya. 2009;126(2):268–279.

62 Macia L, Delacre M, Abboud G va boshqalar. Semiz sichqonlarda dendritik hujayralar funksionalligi va barqaror holat sonining buzilishi. J Immunol. 2006;177(9):5997–6006.

63 Honce R, Schultz-Cherry S. Semizlikning A grippi virusi patogenezi, immun javobi va evolyutsiyasiga ta'siri. Old immunol. 2019;10:1071.

64 Frasca D, Blomberg BB. Semirib ketish sichqoncha va inson B hujayralarida yosh nuqsonlarini tezlashtiradi. Old immunol. 2020;11:2060.

65 Kennedi DE, Knight KL. B-limfopoezning adipotsitlar va IL{1}}miyeloiddan kelib chiqqan supressor hujayralari tomonidan inhibe qilinishi. J Immunol. 2015;195(6):2666–2674.

66 Pham TD, Chng MHY, Roskin KM va boshqalar. Yuqori yog'li diet insulin qarshiligi bilan bog'liq bo'lgan B-hujayra repertuaridagi tizimli o'zgarishlarni keltirib chiqaradi. Shilliq qavat immunol. 2017;10(6):1468–1479.

67 Alu A, Chen L, Ley H, Vey Y, Tian X, Vey X. Intranazal COVID-19 vaktsinalari: skameykadan yotoqgacha. EBioMedicine. 2022;76:103841.

68 Tiboni M, Casettari L, Illum L. SARS CoV-2 ga qarshi burun orqali emlash: mushak ichiga vaktsinalarga sinergik yoki muqobilmi? Int J Pharm. 2021;603:120686.

69 Klein SL, Flanagan KL. Immunitet reaktsiyalarida jinsiy farqlar. Nat Rev Immunol. 2016;16(10):626–638.