Mishyak qo'shimchasi tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyragidagi eritroid 2-bog'liq 2 omil yadroviy omilini bostirish orqali oksidlovchi stressni keltirib chiqaradi.

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ANTRACT

Ushbu tadqiqot mishyak qo'shimchasining tuxum qo'yish qobiliyatiga, tuxum sifatiga, jigar va buyrak gistopatologiyasiga, shuningdek jigar va oksidlovchi stressga ta'sirini o'rganib chiqdi.tuxum qo'yuvchi tovuqlarning buyraklari. Bundan tashqari, stressning molekulyar mexanizmini aniqlash uchun eritroid yadro omili {0}} bilan bog'liq bo'lgan omil 2 (Nrf2) - Kelchga o'xshash ECH bilan bog'liq protein 1 (Keap1) yo'li o'rganildi. Besh yuz oʻn ikki 40-haftalik Hyline White tuxum qoʻyuvchi tovuqlar tasodifiy tarzda 4 ta guruhga 8 tadan va har bir qamoqxonada 16 ta tovuqdan ajratildi. 4 guruhga kiritilgan mishyak dozalari 0.95, 20.78, 40.67 va 60.25 mg/kg. Natijalar shuni ko'rsatdiki, dietaga mishyak qo'shilishi tovuq kunlik tuxum ishlab chiqarishni (P, 0.05), o'rtacha tuxum vaznini (P, 0.05), Haugh birliklarini (P, 0.05), albumin balandligini (P, 0.05) sezilarli darajada kamaytirdi. , va tuxum qobig'ining mustahkamligi (P, 0,05). Mishyak qo'shimchalari jigarda mishyak va gistopatologik shikastlanishlarning to'planishiga olib keldi.buyrak. Shunga ko'ra, dietaga mishyak qo'shilishi zardobdagi alanin aminotransferaza (P, {0}}.05), aspartat aminotransferaza (P, 0.05) darajasini sezilarli darajada oshirdi. , qon karbamid azoti (P, {{10}}.05) va siydik kislotasi (P, 0.05) darajalari. Mishyak ta'siridan so'ng, superoksid dismutaza (SOD) (P, 0,05), katalaza (P, 0,01), glutation reduktaza (P, 0,05), glutation peroksidaza (P, 0,05) va glutation tarkibi (P, 0,05) ning faolligi. sezilarli darajada kamaydi, malondialdegid darajasi esa jigar va buyrakda sezilarli darajada oshdi (P, 0,05). Buyrak marganets superoksid dismutaz geni ifodasi va SOD faolligi bundan mustasno, antioksidant ferment faolligi va jigar va buyrakda antioksidant ferment genining ekspressiyasi o'rtasida ijobiy korrelyatsiya yuzaga keldi. Bundan tashqari, jigar va buyrak Nrf2 mRNK ifodasi antioksidant gen ifodasi bilan ijobiy korrelyatsiya qilingan va Keap1 mRNK ifodasi bilan salbiy bog'liq edi. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, mishyak qo'shilishi tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyraklarida Nrf2-Keap1 yo'lini bostirish orqali oksidlovchi stressni keltirib chiqardi.

Kalit so‘zlar:mishyak, tuxum qo'yuvchi tovuq, Nrf2-Keap1 yo'li, oksidlovchi stress, buyraklar

KIRISH

So'nggi yillarda kontsentratsiyaning ortib borishida ekologik xavflar paydo bo'lishi aniqlandi. Mishyak parranda go'shti ozuqalarida juda past konsentratsiyada bo'lsa ham, yuqori darajada metalloid toksikant hisoblanadi. Uning parranda go'shtidagi fiziologik roli yaxshi aniqlangan, chunki u metionin metabolitlarini, shu jumladan sisteinni sintez qilish uchun zarurdir. Parrandalar ozuqasida tavsiya etilgan mishyak kontsentratsiyasi {0}},012 va 0,050 mg/kg orasida (Balo s va boshq., 2019). Biroq, avvalgi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, parranda em-xashakidagi mishyak kontsentratsiyasi hayvonlarning tolerantlik darajasidan yuqori bo'lishi mumkin, agar parranda go'shti tarkibida dengiz o'tlari, kup karbonat, kup sulfat pentahidrat, ikki mis xlorid trigidroksid yoki temir karbonat mavjud bo'lsa (Adamse va boshqalar, 2017). . Kazi va boshqalar. (2013) parranda em-xashakidagi mishyakning broyler tovuqlarining sog'lig'iga ta'sir qilish ehtimoli yuqori ekanligini ma'lum qildi. Parranda em-xashakidagi mishyakning haddan tashqari ko'pligi va uning parrandalarga toksikologik ta'siri hali ham jiddiy muammolardir. Haddan tashqari mishyak hayvonga kirsa, u immunotoksiklik, nafas olish toksikligi, yurak-qon tomir toksikligi, gepatotoksiklik, gepatotoksisite, nefrotoksiklik, neyrovirulentlik, reproduktiv toksiklik va genotoksiklik kabi turli xil salbiy ta'sirlarni keltirib chiqarishi mumkin. Mishyakning visseral organlarga toksikologik ta'siri birinchi navbatda sutemizuvchilar tadqiqotlarida hujjatlashtirilgan bo'lib, mishyak jigar va buyrak funktsiyalari uchun xavf tug'diradi (Waalkes va boshq., 2004; Mazumder, 2005; Zheng va boshq., 2014). Shunga qaramay, oziq-ovqat mishyak ta'sirining tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyragiga toksikologik ta'siri hali ham aniq emas. Hayvonlarda mishyakning toksikligi oksidlovchi stress bilan chambarchas bog'liq bo'lib, bu pro/antioksidant muvozanatini buzadi (Flora, 2011). Mishyak hujayraga kirganda, u hujayra ichidagi glutation (GSH) bilan bog'lanadi yoki uni oksidlaydi, bu esa erkin radikallarning paydo bo'lishiga olib keladi. Ma'lumki, sitoprotektiv genlar bir qator hujayra ichidagi transkripsiya omillari, jumladan, yadro omili bilan bog'liq bo'lgan eritroid 2-faktor 2 (Nrf2), faollashtiruvchi oqsil 1 va yadro omili kappa-B (Kwak va boshq., 2001) bilan boshqarilishi mumkin. ). Nrf2 transkripsiya omili hujayralardagi stress darajasini tartibga soluvchi muhim molekuladir. Tinch sharoitda Nrf2 asosan sitoplazmada joylashgan Kelchga o'xshash ECH bilan bog'langan protein 1 (Keap1) bilan o'zaro ta'sir qiladi. Oksidlanish stressi qo'zg'atilganda, Nrf2 Keap1 molekulasidan ajralib chiqqandan so'ng sitoplazmadan yadroga o'tadi va keyin sitoprotektiv genlarning ifodalarini faollashtiradi (Motohashi va Yamamoto, 2004). Shundan so'ng, sitoprotektiv genlar quyi oqimdagi antioksidant fermentlarning, jumladan superoksid dismutaza (SOD), glutatyon reduktaza (GR), glutation peroksidaza (GSH-Px) va katalaza (CAT) faoliyatini yanada tartibga soladi. Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, Nrf2 transkripsiya omili sutemizuvchilarda mishyak tomonidan qo'zg'atilgan stressda ishtirok etadi (Sinha va boshq., 2013). Shu bilan birga, mishyak ta'sirining tuxum qo'yadigan tovuqlarda oksidlovchi stress ta'siriga aniq ta'siri tushunarsizligicha qolmoqda. Ushbu tadqiqotda biz mishyak qo'shimchasining tuxum qo'yadigan tovuqlarda tuxum qo'yish qobiliyatiga, tuxum sifatiga, sarum biokimyoviy ko'rsatkichlariga, jigar va buyraklardagi gistopatologik o'zgarishlarga va oksidlovchi stressga ta'sirini o'rgandik. Bundan tashqari, Nrf{30}}Keap1 yo'li jigar va molekulyar mexanizmni aniqlash uchun o'rganildi.buyraklartuxum qo'yuvchi tovuqlar. Ushbu tadqiqot jigarda mishyak zaharliligining biologik nazariyasi haqida ba'zi tushunchalarni beradi.buyraktuxum qo'yuvchi tovuqlar.

cistanche reddituchunbuyrak og'rig'ini engillashtiring

MATERIALLAR VA USLUBLAR

Ushbu tadqiqot Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Hayvonlar ustida o'tkazilgan barcha eksperimental protseduralar Xitoy hayvonot fanlari laboratoriyasi assotsiatsiyasiga muvofiq amalga oshirildi.

Hayvonlar, parhezlar va eksperimental dizayn

Besh yuz o‘n ikki {0}} haftalik Hyline White tuxum qo‘yuvchi tovuqlar tana holati o‘xshash bo‘lib, tasodifiy tanlab olindi va 4 guruhga ajratildi. Har bir guruhda 16 ta qushning 8 ta nusxasi bor edi. Arsenik 4 xil konsentratsiyada (0, 20, 40 va 60 mg/kg; arsanilik kislota shaklida) bazal makkajoʻxori-loviya ratsioniga qoʻshilgan (1-jadvalga qoʻshimcha). Yemdagi mishyak kontsentratsiyasi avvalgi metodologiyaga muvofiq gidrid hosil qiluvchi atomik yutilish spektrometriyasi bilan o'lchandi (Dos Passos va boshq., 2012). 4 guruhdagi mishyakning haqiqiy konsentratsiyasi 0,95, 20,78, 40,67 va 60,25 mg/kg ni tashkil etdi. Qushlar 1 ta oziqlantiruvchi va 2 ta ko'krak qafasi bilan jihozlangan qafaslarda (60 ! 50 ! 50 sm3) boqilgan va har bir katakka 2 ta tovuq joylashtirilgan. Butun tajriba davri davomida tovuqlar ozuqa va ichimlikdan erkin foydalanish imkoniyatiga ega edi. Butun tajriba 10 hafta davom etdi, jumladan, 1-haftalik sozlash davri va 9-haftalik rasmiy tajriba davri.

Tuxum qo'yish samaradorligi va tuxum sifati

Butun eksperimental davrda tuxum qo'yish samaradorligi har kuni, jumladan, ozuqa iste'moli, tovuq kunlik tuxum ishlab chiqarish va tuxum vazni (EW) qayd etilgan. Har bir guruhdagi ozuqa iste'moli va EWni aniqlash sezgir vazn o'lchovi (XS2002S, Mettler Toledo, Tsyurix, Shveytsariya) yordamida amalga oshirildi. Ozuqa konversiya nisbati (FCR) quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan: FCR 5 grammdagi ozuqa iste'moli / grammdagi tuxum massasi. Har bir guruhdan jami 40 ta tuxum, tajriba oxirida tuxum qo'yilgandan keyin 24 soat ichida tuxum sifati parametrlarini o'lchash uchun tasodifiy tarzda yig'ildi. Tuxumlar sezgir tarozi (XS2002S, Mettler Toledo) yordamida tortildi. Shundan so'ng, Haugh birligi, albumin balandligi, sarig'i rangi va tuxum qobig'ining mustahkamligi raqamli tuxum sinov qurilmasi (DET6000, Nabel Co. Ltd., Kioto, Yaponiya) tomonidan aniqlandi. Tuxum qobig'ining ichki membranasi bilan qalinligi tuxumning o'tkir, o'rta va to'mtoq mintaqalarida dial o'lchagich mikrometri yordamida aniqlangan.(547-350, Mitutoyo, Kawasaki, Yaponiya) va o'rtacha qiymatlar statistik tahlil uchun ishlatilgan.

Namunalar to'plami

O'stirish tajribasidan so'ng, har bir guruhdan 32 ta qush tasodifiy tanlab olingan va bo'yin tomirlarini kesish orqali evtanizatsiya qilingan. Qon namunalari steril santrifüj naychalarida yig'ildi va zardobdagi biokimyoviy ko'rsatkichlarni o'lchash uchun darhol laboratoriyaga yuborildi. Shundan so'ng, qushlar parchalanib, jigar vabuyraklarqorin bo'shlig'idan olib tashlandi. Jigar vabuyraknamunalar 4 qismga bo'lingan. Bir qismi gistopatologik tekshirish uchun zudlik bilan 4 foizli paraformaldegidga biriktirilgan. Qolgan 3 qism oksidlovchi stress parametrlarini, mishyak cho'kmasini va gen ifodasini aniqlash uchun darhol suyuq azotda saqlangan.

Arsenik cho'kma tahlili

Tuxum sifatini o'lchagandan so'ng, sarig'i albumindan ajratilgan. Albom va sarig'da mishyakning to'planishi oldingi metodologiyaga muvofiq gidrid hosil qiluvchi atomik absorbsiya spektrometriyasi bilan o'lchandi (Dos Passos va boshq., 2012). Butun tuxumda mishyakning to'planishi albumin va sarig'idagi mishyak miqdorini yig'ish orqali hisoblab chiqilgan. Xuddi shunday, jigarda mishyak to'planishini aniqlash uchun gidrid hosil qiluvchi atomik absorbsiya spektrometriyasidan foydalanilgan.tuxum qo'yuvchi tovuqlarning buyragi(Dos Passos va boshqalar, 2012).

Sarum biokimyoviy indekslarini aniqlash

Umumiy protein, albumin, globulin, alanin aminotransferaza (ALT) va aspartat aminotransferaza (AST) darajalari jigar faoliyatini baholash uchun muhim ko'rsatkichlardir. Ushbu parametrlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq tegishli tahlil to'plamlari (Nankin Jiancheng Bioengineering Institute, Nankin, Xitoy) yordamida o'lchandi. Qondagi karbamid azoti (BUN), siydik kislotasi (UA) va kreatinin (CT) darajalari buyraklar faoliyatini baholash uchun muhim ko'rsatkichlar bo'lib, aniqlash to'plamlari (Nankin Jiancheng bioengineering instituti) yordamida aniqlangan.

Gistopatologik o'zgarishlar

4 foizli paraformaldegidda fiksatsiyalangan jigar va buyrak to‘qimalari 70, 80, 90, 95 va 100 foizli etanolda suvsizlanib, oxir-oqibat kerosinga solingan. To'qimalar 6- mm qalinlikdagi bo'laklarga bo'lingan va keyin gematoksilin va eozin bilan bo'yalgan. Shundan so'ng, jigarda gistopatologik o'zgarishlarni kuzatish vabuyrakto'qimalarni optik mikroskop ostida patolog tomonidan amalga oshirildi (Olympus, Melville, NY).

Lipid peroksidatsiyasi (LPO) va antioksidant ferment faolligini tahlil qilish

SOD, CAT, GR va GSH-Px faoliyati, shuningdek, jigar va buyraklardagi malondialdegid (MDA) va GSH tarkibi tegishli tahlil to'plamlari (Nankin Jiancheng Bioengineering Institute) tomonidan aniqlangan. Qisqacha aytganda, MDA tarkibi tiobarbiturik kislota va MDA o'rtasidagi reaktsiyaga asoslangan spektrofotometrik usul bilan o'lchandi (Janero, 1990). GR faolligi va GSH tarkibi 5,{3}} ditiobis (2-nitrobenzoy kislotasi) yordamida aniqlangan (Carlberg va Mannervik, 1985; Abegg va boshq., 2012). SOD faolligi nitroko'k tetrazoliumning qaytarilishi va ksantin oksidaza o'rtasidagi inhibitiv reaktsiyaga ko'ra aniqlandi. CAT faolligi barqaror vodorod peroksid ammoniy molibdat kompleksini shakllantirish asosida aniqlandi (Aebi, 1984). GSH-Px faolligi t-butil gidroperoksidning pasayishini baholash orqali aniqlandi (Wheeler va boshq., 1990).

Jami RNK izolyatsiyasi va real vaqtda miqdoriy PCR

Jami RNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga binoan Trizol RNAiso Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA) bilan jigar va buyrak to'qimalaridan ajratildi. RNK namunalari PrimeScript RT Reagent Kit (TaKaRa, Dalian, Xitoy) yordamida cDNKga teskari transkripsiya qilindi. Marganets superoksid dismutazasi (MnSOD), mis-sink superoksid dismutazasi (CuZnSOD), CAT, GR, GSH-Px, Nrf2, Keap1 va uy xo'jaligi geni (b-aktin) uchun oldinga va teskari primerlar 2-jadvalda keltirilgan. Gen ko'pligi StepOnePlus Real-Time PCR tizimi (ABI 7500, Applied Biosystems, Foster City, CA) bilan o'lchandi. Velosipedda aylanish shartlari 30 soniya davomida 95 C, keyin 5 soniya davomida 95 C, 10 soniya davomida 59 C va 30 soniya davomida 72 C bo'lgan 35 tsikldan keyin. mRNK ifodasidagi katlama farqi real vaqtda PCR samaradorligidan foydalangan holda nisbiy miqdorni aniqlash usuli yordamida o'lchandi va barcha guruhlar o'rtasidagi nisbiy KT o'zgarishlarini solishtirish uchun b-aktin darajasiga normallashtirildi (Livak va Shmittgen, 2001).

Statistik tahlillar

Barcha ma'lumotlar o'rtacha 6 SE sifatida ifodalanadi. Statistik tahlil SPSS 20.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) versiyasidan foydalangan holda bir tomonlama ANOVA yordamida amalga oshirildi. Guruhlar orasidagi farqlar sezilarli bo'lganda (P, 0.05 bilan ko'rsatilgan), o'rtacha ko'rsatkichlar Tukeyning post hoc bir nechta taqqoslashlari uchun halollik bilan muhim farqi bilan solishtirildi. Pearson korrelyatsiyalari ikki o'zgaruvchan korrelyatsiya tahlili bilan tahlil qilindi (SPSS 20.0 versiyasi, SPSS Inc.). Muhimlik va korrelyatsiya koeffitsientlari mos ravishda "p" va "r" sifatida ifodalanadi.

NATIJALAR

Tuxum qo'yish samaradorligi va tuxum sifati {0}}.95 mg/kg mishyak guruhidagilar bilan solishtirganda, tovuq kunlik tuxum ishlab chiqarish va EW 60,25 mg/da sezilarli darajada kamaydi. kg mishyak guruhi (P, 0.05). Biroq, oziq-ovqat mishyak ozuqa iste'moli yoki FCRga ta'sir qilmadi (1-jadval). {{2{22}}}}.95 mg/kg mishyak guruhidagi bilan solishtirganda, Haugh birligi 40.67 mg/kg (P, 0.05) va 60.25 mg da sezilarli darajada kamaydi. /kg (P, 0,05) mishyak guruhlari. Bundan tashqari, albumin balandligi va tuxum qobig'ining kuchi 20,78 mg / kg mishyak guruhida 0,95 mg / kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan sezilarli darajada kamaydi, 40,67 mg / kg mishyak guruhida platoda bo'ldi va 60,25 da keskin kamaydi. mg/kg mishyak guruhi (P, 0,05). Ratsiondagi mishyak sarig'i rangi yoki tuxum qobig'ining qalinligiga ta'sir qilmadi (1-jadval)

Arsenikning cho'kishi

Mishyakning albuminda (P, {0}}.05), sarig'ida (P, 0.05) va butun tuxumda cho'kishi. (P, 0.05) dietali mishyakning dozasi 0,95 dan 60,25 mg/kg gacha ko'tarilganligi sababli sezilarli darajada oshdi (2-jadval). Xuddi shunday, dietali mishyak dozasi 0,95 dan 60,25 mg / kg gacha ko'tarilganligi sababli, mishyakning jigarda (P, 0,05) va buyrakda (P, 0,05) cho'kishi sezilarli darajada oshdi (2-jadval).

Tuxum sifati va tuxumda mishyakning cho'kishi o'rtasidagi korrelyatsiya tahlili

Albomdagi mishyakning cho'kishi Haugh birligi (r {0}}.622, P, 0.{{10}}1), albumin bilan salbiy bog'liq edi. balandligi (r 5 20.878, P, 0.01) va tuxum qobig'ining mustahkamligi (r 5 20.897, P, 0.{{ 30}}1). Ayni paytda, sarig'ida mishyakning cho'kishi ham Haugh birligi (r 5 20.654, P, 0.01), albumin balandligi (r 5 20.893, P, 0.01) va salbiy bog'liq edi. tuxum qobig'ining mustahkamligi (r 5 20.902, P, 0.01). Xuddi shunday, butun tuxumda mishyakning cho'kishi va Haugh birligi (r 5 20.640, P, 0.01), albumin balandligi (r 5 20.888, P, 0.01) o'rtasida salbiy munosabatlar aniqlandi. , va tuxum qobig'ining mustahkamligi (r 5 20.902, P, 0.01) (3-jadval)

Sarum biokimyoviy indekslari

{0}}.95 mg/kg mishyak guruhidagilar bilan solishtirganda, ALT darajasi 20.78 mg/kg (P, 0)da sezilarli darajada oshdi.{ {16}}5), 40,67 mg/kg (P , 0,05) va 60,25 mg/kg (P , 0,05) mishyak guruhlari. Shu bilan birga, 60,25 mg / kg mishyak guruhidagi AST darajasi 0,95 mg / kg mishyak guruhidagilarga nisbatan sezilarli darajada oshdi (P, 0,05). Ratsiondagi mishyak zardobdagi umumiy protein yoki albumin darajasiga ta'sir qilmadi (4-jadval).

{0}}.95 mg/kg mishyak guruhidagilar bilan solishtirganda, 60,25 mg/kg mishyak guruhida BUN va UA darajalari sezilarli darajada oshdi (P, 0,05), mishyakning oziq-ovqat bilan ta'siri esa yo'q. zardobdagi KT darajasiga ta'sir qiladi (4-jadval).

Gistopatologik o'zgarishlar

Jigar to'qimalarining ko'rinishi {0}}.95 mg/kg mishyak guruhida normal va o'zgarmagan. Biroq, oziq-ovqat mishyakining dozasi 20,78 dan 60,25 mg/kg gacha oshgani sayin, o't yo'llarining proliferatsiyasi, gepatotsitlar steatozi va markaziy venaning deformatsiyasi og'irlashdi (1A-1D-rasmlar). Buyrak to'qimalarining ko'rinishi 0,95 mg / kg mishyak guruhida normal va o'zgarmagan. Shu bilan birga, 20,78 mg / kg mishyak guruhida 0,95 mg / kg mishyak guruhiga nisbatan kuchli glomerulyar qisqarish kuzatildi. Ratsiondagi mishyakning dozasi 40,67 dan 60,25 mg / kg gacha ko'tarilganligi sababli, buyrak kanalchalarining kengayishi, quvurli fibroz va gialinizatsiya yanada og'irlashdi (1E-1H-rasm).

Oksidativ stress biomarkerlari

{0}},95 mg/kg mishyak guruhidagilar bilan solishtirganda, jigar MDA darajasi 60,25 mg/kg mishyak guruhida sezilarli darajada oshdi (P , {{12} }.05) va buyrak MDA darajalari 20,78 mg/kg (P, 0,05), 40,67 mg/kg (P, 0,05) va 60,25 mg/kg (P, 0,05) mishyakda sezilarli darajada oshdi. guruhlar (2A-rasm). Jigarda GSH darajasi vabuyrak20,78 mg/kg mishyak guruhida 0,95 mg/kg mishyak guruhidagilarga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (P, 0.05) , va 40.67 va 60.25 mg/kg mishyak guruhlarida platoda joylashgan (2B-rasm). Jigar SOD faolligi 0,95 mg/kg mishyak guruhiga nisbatan 40,67 mg/kg (P, 0,05) va 60,25 mg/kg (P, 0,05) mishyak guruhlarida sezilarli darajada kamaydi. Buyrak SOD faolligi 20,78 mg / kg mishyak guruhida 0,95 mg / kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan sezilarli darajada kamaydi va 40,67 va 60,25 mg / kg mishyak guruhlarida platoga ko'tarildi (2C-rasm). Jigarda CAT faolligi vabuyraksezilarli darajada kamaydi, chunki parhez mishyak dozasi {0}},95 dan 60,25 mg/kg gacha ko'tarildi (P, 0.05, rasm 2D). 0.95 mg/kg mishyak guruhidagi bilan solishtirganda, jigar va buyrakdagi GR faolligi 60.25 mg/kg mishyak guruhida sezilarli darajada kamaydi (P, 0.05, 2E-rasm). ). Bundan tashqari, 0,95 mg / kg mishyak guruhi bilan solishtirganda, jigar GSH-Px faolligi 60,25 mg / kg mishyak guruhida (P, 0,05) sezilarli darajada kamaydi va buyrak GSH Px faolligi 20,78 mg / kg mishyak guruhida keskin kamaydi. (P, 0,05) va 40,67 va 60,25 mg / kg mishyak guruhlarida platoda (2F-rasm).

Antioksidant fermentlar, Nrf2 va Keap1 molekulalarining gen ifodalari

Jigar CuZnSOD genining ekspressiyasi 20.78 mg/kg mishyak guruhida 0.95 mg/kg mishyak guruhiga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (P, 0.{{16} }5) va 40.67 va 60.25 mg/kg mishyak guruhlarida platoda joylashgan. Buyrak CuZnSOD gen ekspressiyasi 40.67 mg/kg (P , 0.05) va 60.25 mg/kg (P) da sezilarli darajada kamaydi. , 0.05) mishyak guruhlari 0.95 mg/kg mishyak guruhiga nisbatan (3A-rasm). 0.95 mg/kg mishyak guruhi bilan solishtirganda, 20.78 mg/kg mishyak guruhida (P, 0.{{73) jigarda MnSOD gen ifodasi sezilarli darajada kamaydi. }}5) va 4{{80}}.67 va 60.25 mg/kg mishyak guruhlarida platoda joylashgan. Buyrak MnSOD gen ifodasi guruhlar orasida sezilarli darajada farq qilmadi (3B-rasm). Jigar CAT genining ekspressiyasi 2{94}},78 mg/kg mishyak guruhida {{105}},95 mg/kg mishyak guruhiga (P, 0,05) va platoga nisbatan sezilarli darajada kamaydi. 40,67 va 60,25 mg/kg mishyak guruhlarida. Buyrak CAT genining ekspressiyasi 20,78 mg / kg mishyak guruhida 0,95 mg / kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan sezilarli darajada kamaydi va 40,67 mg / kg mishyak guruhida platoga ko'tarildi va 60,25 mg / kg mishyak guruhida keskin kamaydi. mishyak guruhi 0,95 mg/kg mishyak guruhi bilan solishtirganda (P, 0,05, 3C-rasm). Jigar va buyrakda GR genining ifodasi 20,78 mg/kg mishyak guruhida 0,95 mg/kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan sezilarli darajada kamaydi va 40,67 va 60,25 mg/kg mishyak guruhlarida platoga ko'tarildi (3D-rasm). Bundan tashqari, jigarda GSH-Px genining ekspressiyasi sezilarli darajada kamaydi, chunki dietali mishyak dozasi 0,95 dan 40,67 mg / kg (P, 0,05) gacha ko'tarildi va keyin 60,25 mg / kg mishyak guruhida platoga ko'tarildi. Buyrak GSH-Px geni ifodasi 0,95 mg / kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan 20,78 mg / kg mishyak guruhida sezilarli darajada kamaydi va 40,67 va 60,25 mg / kg mishyak guruhlarida platoda (3E-rasm). Jigar va buyrakdagi Nrf2 genining ekspressiyasi 20,78 mg/kg mishyak guruhida 0,95 mg/kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan sezilarli darajada kamaydi va 40,67 va 60,25 mg/kg mishyak guruhlarida platoga ko'tarildi (4A va 44C-rasmlar). ). Bundan farqli o'laroq, jigar va buyraklardagi Keap1 genining ekspressiyasi 20,78 mg / kg mishyak guruhida 0,95 mg / kg mishyak guruhiga (P, 0,05) nisbatan keskin oshdi va 40,67 va 60,25 mg / kg mishyak guruhlarida platoda (rasmlar) 4B va 4D).

Nrf2- Keap1 yo'li bilan bog'liq korrelyatsiya tahlillari

CuZnSOD gen ifodasi (jigar, r {0}}.613, P, 0,01;buyrak, r {0}}.687, P, 0.{{10}}1), CAT (jigar, r 5 0.738, P , 0.01; buyrak, r 5 0.903, P, 0.01), GR (jigar, r 5 0.477, P, 0.05; buyrak, r 5 0.485, P, 0.05) va GSH-Px (jigar, r 5 0.450, P, 0.05; buyrak , r 5 0.767, P, 0.01) jigar va buyrakda va u patik MnSOD gen ifodasi (r 5 0.707, P, 0.01) ularning tegishli sponding faoliyati bilan ijobiy korrelyatsiya qilingan. antioksidant fermentlar. Bundan tashqari, Nrf2 gen ifodasi CuZnSOD (jigar, r 5 0.756, P, 0,01) gen ifodalari bilan ijobiy bog'liq edi;buyrak, r {0}}.736, P, 0.01), CAT (jigar, r 5 0.893, P, 0.01;buyrak, r {0}}.740, P , {{10}}.01), GR (jigar, r 5 0 .837, P, 0,01; buyrak, r 5 0,915, P, 0,01) va GSH-Px (jigar, r 5 0,822, P, 0,01; buyrak, r {{17} }.722, P , 0.01) jigarda vabuyrak, va jigar MnSOD gen ifodasi (r {0}}.720, P, 0.01). Nrf2 va Keap1 mRNK ekspressiyasi o'rtasida salbiy bog'liqlik mavjud edi (jigar, r 5 20.746, P, 0,01;buyrak, r {0}}.771, P , 0,01) jigar va buyrakda. Bundan tashqari, MnSOD gen ifodasi va SOD fermentativ faolligi yoki Nrf2 mRNK ifodasi o'rtasida hech qanday bog'liqlik yo'q edi.tuxum qo'yuvchi tovuqlarning buyraklari(5-jadval).

MUHOKAZA

Mishyak tabiatda hamma joyda uchraydigan va zaharli metalloiddir. U odamlar va hayvonlarda gepatotoksisite, nefrotoksiklik, neyrovirulentlik, immunotoksiklik, yurak-qon tomir toksikligi, gepatotoksiklik va reproduktiv toksiklik kabi bir qancha toksikozlarni keltirib chiqaradi (Mandal va Suzuki, 2002). Mishyak hayvonlarning reproduktiv tizimini eng ishonchli tarzda nishonga oladi. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, parhez roksarson ta'siri tuxum qo'yish tezligi va tuxum ishlab chiqarishni buzadi (Chiou va boshq., 1999; Zhang va boshq., 2017). Ushbu tadqiqotda mishyak qo'shimchalari tuxum qo'yish qobiliyatini, shu jumladan tuxum ishlab chiqarishni va EWni sezilarli darajada kamaytirdi. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, oziq-ovqat mishyak qo'shilishi tuxumda mishyak to'planishiga olib keladi va tuxum sifatini pasaytiradi (Chiou va boshq., 1998; Zhang va boshq., 2017). Ushbu tadqiqotda, oziq-ovqat mishyak qo'shimchasi Haugh birligini, albumin balandligini va tuxum qobig'ining kuchini sezilarli darajada kamaytirdi. Sariq rangi va tuxum qobig'ining qalinligidan tashqari, tuxumda mishyakning cho'kishi va tuxum sifati parametrlari o'rtasida salbiy bog'liqlik aniqlandi. Bu shuni ko'rsatadiki, Haugh birligi, albumin balandligi va tuxum qobig'ining kuchi tuxumda mishyakning cho'kishiga ta'sir qilishi mumkin. Ma'lumki, tuxum qobig'idagi palizad qatlami qalinligi tuxum qobig'ining qalinligini belgilovchi omil hisoblanadi (Ruiz va Lunam, 2000), pigment cho'kishi esa sarig'i rangini belgilaydi. Shunday qilib, biz dietaga mishyak qo'shilishi tuxum qo'yadigan tovuqlarning tuxumlaridagi pigment cho'kmasining palizad qatlamining qalinligiga ta'sir qilmasligini taxmin qildik. Rivojlanayotgan dalillar shuni ko'rsatadiki, jigar va buyrak kasalliklari sutemizuvchilarda mishyak ta'siridan keyin keng tarqalgan (Liu va Waalkes, 2008; Huang va boshq., 2009). Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, mishyak ta'siri jigarda gistopatologik lezyonlarni, shu jumladan to'qimalarning disorientatsiyasini, peliozni va vakuolizatsiyani, shu jumladan Channa punctatusdagi gepatotsitlarning karyoliz, apoptoz va nekrozi bilan birga keladi (Roy va Bhattacharya, 2006). Ushbu tadqiqotda biz o't yo'lining proliferatsiyasi, gepatotsitlar steatozi va jigarda markaziy venaning deformatsiyasida jiddiy o'zgarishlarni kuzatdik, chunki dietali mishyak dozasi 20,78 dan 60,25 mg / kg gacha ko'tarildi. Roy va Bhattacharya (2006) shuningdek, mishyak ta'siri glomerulusning qisqarishiga, buyrak kanalchalarida tartibsizliklarga va Bowman bo'shlig'ining ko'payishiga olib kelishini aniqladilar. Hozirgi tergovda, dietali mishyak dozasi sifatida

20,78 dan 60,25 mg / kg gacha ko'tarildi, buyrak gistopatologik o'zgarishlar juda og'ir edi, shu jumladan buyrak kanalchalarining kengayishi, glomerulyar qisqarish va quvurli fibroz va gialinizatsiya, bu avvalgi tadqiqotga mos keladi (Roy va Bhattacharya, 2006). Oldingi hisobotlarga ko'ra, sarum AST va ALT darajalari jigar yallig'lanish reaktsiyasi va fifibrozning surrogat belgilari ekanligi isbotlangan (Vang va boshq., 2008; Xattob va boshq., 2015). Ushbu tadqiqotda qon zardobida AST va ALT darajasining oshishi mishyak ta'siridan keyin jigar yallig'lanish reaktsiyasi kuchayganligini ko'rsatdi, bu tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigarida kuzatilgan histopatologik o'zgarishlarga mos keladi. Patel va Kalia (2013) shuningdek, Wistar kalamushlarida mishyak qo'zg'atadigan gepatotoksisite sarum ALT va AST darajasining oshishi bilan namoyon bo'lishini aniqladilar. Buyrak funktsiyasi muntazam ravishda qon zardobidagi BUN, KT va UA darajalari bilan nazorat qilinadi. Biz qon zardobida BUN va UA darajalari sezilarli darajada oshganini va zardobdagi KT darajasi dietaga mishyak qo'shilgandan keyin ortib borishini aniqladik, bu shuni anglatadiki,buyrakzararlartuxum qo'yadigan tovuqlarda mishyak ta'siridan kelib chiqqan, bu avvalgi tadqiqotlarga mos keladi (Liu va boshq., 2000). Mishyak ta'siridan kelib chiqadigan to'qimalarning shikastlanishi oksidlovchi stress bilan chambarchas bog'liqligi aniqlangan (Jomova va boshq., 2011). Oksidlanish stressi qo'zg'atilganda, hujayra ichidagi reaktiv kislorod turlari (ROS) hujayra ichidagi MDA darajalari bilan kuzatilishi mumkin bo'lgan LPO ni keltirib chiqaradi (Storey, 1996). Ushbu tadqiqotda jigar va buyraklardagi MDA darajalari mishyak qo'shilishidan so'ng sezilarli darajada oshdi, bu jigarda oksidlanish shikastlanishini ko'rsatishi mumkin bo'lgan LPO ning ko'payishini anglatadi.tuxum qo'yuvchi tovuqlarning buyraklari.GSH hujayra ichidagi oksidlovchi stressni tartibga solishda ham muhim rol o'ynaydi (Finkel va Xolbruk, 2000). 0,95 mg / kg mishyak guruhidagilar bilan solishtirganda, GSH darajasi

Mishyakning yuqori konsentratsiyasi bilan davolash qilingan guruhlarda sezilarli darajada kamaydi, bu mishyak jigar va antioksidant qobiliyatini susaytirish uchun GSH bilan bog'lanishi mumkinligini ko'rsatadi.buyrak.Flora va boshqalar. (1997) mishyak ta'sirida GSH kontsentratsiyasini pasaytiradi va jigarda aniq lezyonlarni keltirib chiqaradi.buyraklarkalamushlar. Bundan tashqari, hujayra ichidagi antioksidant fermentativ tizimlar SOD, CAT, GR va GSH-Px (Finkel va Holbrook, 2000) kabi oksidlovchi stressdan himoya qilish uchun himoya rollarini ta'minlaydi. Ushbu tadqiqotda, oziq-ovqat mishyak qo'shimchasi tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyragidagi SOD, CAT, GR va GSH-Px faoliyatini sezilarli darajada kamaytirdi. Antioksidant tizimlar hujayra ichidagi ROSning ortiqcha miqdorini zararsizlantira olmasa, LPO tufayli oksidlovchi shikastlanish yuzaga keladi, bu esa o'z navbatida antioksidant fermentlarning faoliyatini susaytirishi mumkin. Oldingi tadqiqot xuddi shunday xabar berganki, mishyak kalamush buyragida oksidlovchi stressni keltirib chiqaradi (Sener va boshq., 2016). Antioksidant fermentlar oqsillardir va transkripsiya darajasida genlar tomonidan boshqarilishi mumkin. Ushbu tadqiqotda mishyak ta'siri CuZnSOD, CAT, GR va GSHPx ning mRNK ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi. Bundan tashqari, CuZnSOD, CAT, GR va GSH-Px genlarining ekspressiyasi antioksidant fermentlarning faolligi bilan ijobiy bog'liq bo'lib, mishyak ta'siri mRNK ifodasini inhibe qilish orqali antioksidant fermentlarning faolligini kamaytiradi. Xuddi shunday, simob ta'siridan keyin tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyragida antioksidant fermentlarning faolligi va gen ekspressiyasi o'rtasidagi bog'liqlik haqida xabar berilgan. Shu bilan birga, mishyak qo'shimchasi MnSOD ifodasiga ta'sir qilmadibuyrak.Buning sababi SOD bir nechta izofermentlarga ega bo'lishi va uning faoliyati MnSOD geni ta'sir qilmasligi bo'lishi mumkin. Nrf2 oksidlovchi stressga qarshi himoya tizimida muhim rol o'ynaydi. Bazal sharoitda Nrf2 sitoplazmadagi Keap1 bilan bog'lanadi. Hujayra ichidagi ROS darajasi Keap1 ning reaktiv tiol guruhlarini o'zgartirish uchun etarlicha yuqori bo'lgandan so'ng, Nrf2 yadroga osonroq o'tadi va u erda antioksidantga javob beradigan tirnash xususiyati keltirib chiqaradi.

element va keyin quyi oqimdagi himoya genlarini faollashtiradi (Sinha va boshq., 2013). Ushbu tadqiqotda biz mishyak ta'siri Nrf2 gen ifodasini va quyi oqimdagi antioksidant fermentlarning ifodasini sezilarli darajada kamaytirganini aniqladik. Mishyak ta'siridan so'ng Nrf2 va quyi oqimdagi antioksidant ferment genlarining pastga regulyatsiyasi shuni ko'rsatdiki, mishyak jigarda Nrf2 gen ifodasini bostirish orqali antioksidant ferment genlarining ekspressiyasini inhibe qiladi vabuyrak. Bundan tashqari, Keap1gene ekspresyonining kuchayishi Nrf2 va antioksidant ferment gen ekspresyonu bilan salbiy bog'liq edi, bu sitoplazmatik Keap1 ning ko'tarilishi Nrf2 translokatsiyasini sitoplazmadan yadroga o'tkazishini anglatadi (Kensler va boshq., 2007). Shunga o'xshash tadqiqot shuni ko'rsatdiki, hujayra ichidagi Nrf{5}}Keap1 yo'li mishyak ta'siriga javoban faollashtirilmagan (Janasik va boshq., 2018). Shunga qaramay, avvalgi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, mishyak ta'siri oksidlovchi shikastlanishdan himoya qilish uchun Nrf2-Keap1 yo'lini kuchaytiradi (Massrieh va boshq., 2006). Ushbu topilmalar ushbu tadqiqotga zid emas. Oksidlanish stressining dastlabki bosqichlarida Nrf2-Keap1 ning himoya ta'siri oksidlanish stressining oldini olish uchun faollashtirilishi mumkin. Shunga qaramay, Nrf2-Keap1 yo'li mishyakning yuqori dozasi bilan uzluksiz ta'sir qilish natijasida kelib chiqadigan oksidlovchi shikastlanishlarga qarshi tura olmaydi (Kensler va boshq., 2007). Shundan so'ng, Nrf2- Keap1 yo'li inhibe qilinishi va tuxum qo'yadigan tovuqlarning jigari va buyraklarida hujayra ichidagi oksidlanish shikastlanishi yoki hatto apoptoz paydo bo'lishi mumkin. Mavjud natijalarni hisobga olgan holda, ushbu tadqiqot tuxum qo'yadigan tovuqlarda mishyak ta'sirida jigar va buyrak antioksidantlarini himoya qilish uchun ba'zi yangi dalillarni taqdim etadi va birinchi marta mishyak qo'zg'atadigan oksidlovchi stressda Nrf2-Keap1 yo'lining markaziy rolini ochib beradi. . Xulosa qilib aytganda, mishyak qo'shimchasi tuxum qo'yadigan tovuqlarning tuxum qo'yish qobiliyatini va tuxum sifatini pasaytirdi. Jigarda gistopatologik shikastlanishlar vabuyrakdietali mishyak ta'siridan keyin. Bundan tashqari, oziq-ovqat mishyak ta'siri tuxum qo'yadigan tovuqlarda Nrf2-Keap1 yo'lini buzish orqali jigar va buyrakda oksidlovchi stressni keltirib chiqardi.