Oksidativ stress buyrak shikastlanishiga olib kelishi mumkinligini bilasizmi?

Batafsil ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com

Ⅰ qism: O'tkir buyrak shikastlanishidan keyingi oksidlovchi stress o'pka hujayralari kiprikchalarining buzilishiga va ularning bronxoalveolyar yuvish suyuqligiga chiqishiga va o'pka shikastlanishiga olib keladi, bu Idh2 yo'q qilinishi bilan kuchayadi.

Yong Kvon Xana, Ji Su Kim, Gvan Beom Li, Jae Hang Lim, Kvon Mu Park

1.Kirish

O'tkir buyrak shikastlanishi(AKI) turli klinik sharoitlarda, jumladan, shok, sepsis, organ transplantatsiyasi va qon tomir jarrohligida uchraydi [1-3]. AKI (O'tkir buyrak shikastlanishi) uzoqdagi organlarga, jumladan, o‘pka, jigar, yurak va miyaga zarar yetkazadi [4-9]. AKIdan keyin bu uzoq organ shikastlanishi (O'tkir buyrak shikastlanishi)yomon natijalar uchun asosiy xavf omili sifatida tan olingan [5,9]; shuning uchun uzoq organlarning shikastlanishini tegishli davolash OKI bilan og'rigan bemorlarning natijalarini yaxshilash uchun muhimdir (O'tkir buyrak shikastlanishi). Biroq, AKI bilan bog'liq aniq mexanizmlar (O'tkir buyrak shikastlanishi)-uzoq organlarning shikastlanishi aniqlanishi kerak.

O'tkir buyrak kasalligi va cistanche yon ta'siri uchun Cistanche uchun bosing

Kiprikchalar hujayra yuzasidan tsentrioladan hosil bo'lgan proyeksiyalar bo'lib, ularda mikronaychalarga asoslangan sitoskeleton (aksonema) mavjud bo'lib, u siliyer membrana bilan o'ralgan. Kipriklar tuzilishi va harakatchanligi bilan ajralib turadi va ular harakatsiz kirpikchalar (birlamchi kiprikchalar) yoki harakatlanuvchi kirpiklar sifatida belgilanadi. Birlamchi kiprikchalar yakka, harakatsiz, mikronaychaga asoslangan 9 va 0 aksonemal antennaga o'xshash organellalar bo'lib, ular hujayra membranasidan chiqib ketadi va bir nechta signal yo'llari muvofiqlashtirish orqali hujayradan tashqari signallarni hujayra ichiga uzatadi [10-12 ]. Ko'p, 9 va 2 ta aksonemal tuzilishga ega bo'lgan harakatchan siliyalar asosan nafas olish yo'llari va tuxum yo'llarida joylashgan bo'lib, materiallarni tashish vazifasini bajaradi [10,13]. Ko'payib borayotgan dalillar shuni ko'rsatdiki, siliya shakllanishi va faoliyatidagi nuqsonlar insonning turli kasalliklari, shu jumladanpolikistik buyrak kasalliklariva birlamchi siliyer diskineziya [14-20]. Bundan tashqari, yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, kiprikchalarning buzilishi patologik sharoitlar ta'sirida sodir bo'ladi va bu buzilish hujayra shikastlanishi va disfunktsiyasiga vositachilik qilishda ishtirok etadi [15-20].

To‘plangan dalillar buni ko‘rsatdibuyrakishemiya-reperfuziya (IR), AKI sababi (O'tkir buyrak shikastlanishi), uzoq organlarning shikastlanishiga olib keladi [6-8,21]. Uzoq a'zolarning shikastlanishi yallig'lanish reaktsiyalari, hujayra o'limi va omon qolishi bilan bog'liq signal yo'llarining o'zgarishi vaoksidlovchi stress [8,22-24]. Oksidativ stressOrganlarning buzilishiga olib kelishi mumkin bo'lgan hujayra tarkibiy qismlarining disfunktsiyasi bilan bevosita bog'liq va asosiy sabablardan biri sifatida tan olingan.buyrakIR tomonidan qo'zg'atilgan uzoq organlarning shikastlanishi [21,25,26]. Biz buni avvalroq ko'rsatgan edikbuyrakIR va sisplatin bilan qo'zg'atilgan AKI (O'tkir buyrak shikastlanishi)ichida birlamchi kiprikchalar uzunligini o'zgartiradibuyrakepiteliya hujayralari kiprikchalarni yig'ish, demontaj qilish va buzish (desiliya, to'kish yoki parchalanish) orqali [17-19]. Bu jarayonlar reaktiv kislorod turlari (ROS) vaoksidlovchi stress. vodorod periks konsentratsiyasi va darajasiga qaraboksidlovchistress; past H2O2 konsentratsiyasi birlamchi kiprikcha uzunligining uzayishiga olib keladi, yuqori H, O konsentratsiyasi esa buzilishni keltirib chiqaradi [17-20]. Bundan tashqari, biz shikastlanganlarning birlamchi kipriklari buzilganligini aniqladikbuyrakNaychali epiteliya hujayralari siydik bilan chiqariladi va bu buzilish va ekskretsiya antioksidant bilan davolash orqali oldini olish mumkin [17-20]. Rodriges-Ribera va boshqalar. ning mahsuloti bo'lgan malondialdegid kabi reaktiv karbonil birikmalari ham xabar qilinganoksidlovchi stress, odamda birlamchi siliya yo'qolishiga olib keladibuyrakproksimal tubula hujayralari [27]. Shuning uchun biz AKI deb taxmin qildik (O'tkir buyrak shikastlanishi)- o'tkir o'pka shikastlanishi (ALD) va hujayra shikastlanishi siliya va o'pka hujayralari bilan bog'liqoksidlovchistressva oldini olishoksidlovchistressAKI ni kamaytiradi (O'tkir buyrak shikastlanishi)- o'pkaning shikastlanishi. Ushbu tadqiqotda biz buni tekshirdikbuyrakIR-induktsiyali AKI (O'tkir buyrak shikastlanishi)siliya va o'pka hujayralarining buzilishiga olib keladi va agar shunday bo'lsa, bu buzilishlar bilan bog'liqmi?oksidlovchiB. Shu maqsadda biz farmakologik va genetik yondashuvlarni, shu jumladan izotsitrat dehidrogenaza 2 (Idh2) o'chirilgan sichqonlardan foydalanishni qo'lladik. IDH2 mitoxondriyada lokalizatsiya qilingan fermentdir [28]. Mitoxondriyada IDH2 izotsitratning -ketoglutaratga oksidlovchi dekarboksillanishini katalizlaydi, bunda tioredoksin va glutatyon antioksidant tizimining muhim omili bo'lgan NADP ning NADPH ga kamayishi bilan birga keladi [29-32]. Bundan tashqari, bronxoalveolyar yuvish suyuqligida (BALF) siliyer oqsillar va parchalar mavjudligi o'pka shikastlanishidan dalolat beradimi yoki yo'qligini tekshirdik. Biz bu erda birinchi marta AKI haqida xabar beramiz (O'tkir buyrak shikastlanishi)o'pka hujayralari kiprikchalarining buzilishiga va ularning BALFga chiqishiga hamda o'pka shikastlanishiga sabab bo'ladi, bu esa IDH2 yo'q qilinishi bilan kuchayadi.

oksidlovchi stress buyrak shikastlanishiga olib keladi

2. Materiallar va usullar

Hayvonlarni tayyorlash.

Barcha tajribalar 8-10-haftalik erkak C57BL/6 sichqonlari (Koatech, Pyongteek, Gyeonggi-do, Koreya), urgʻochi Idh2 geni oʻchirilgan (Idh2~/) va yovvoyi turdagi (dh2 plus /) yordamida oʻtkazildi. )sichqonlar [28]. Sichqonlarga suv va standart sichqoncha choviga bepul kirishga ruxsat berildi. Hayvonlarni o'rganish Koreya Respublikasining Kyungpook Milliy universitetining hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Ikki tomonlama buyrak ishemiyasini qo'zg'atish uchunbuyraklarpentobarbital natriy (60 mg/kg BW) bilan behushlik ostida yonbosh kesmalari orqali, so'ngra pedikulalar ta'sirlangan.buyraklarmikroanevrizma qisqichlari yordamida 35 daqiqa davomida to'liq klemplangan. Xuddi shu tartib, bundan mustasnobuyrakpedikulani qisish, soxta operatsiyada amalga oshirildi. Jarrohlik amaliyotlari davomida harorat bilan boshqariladigan isitish moslamasi (FHC, Bowdoin, ME, AQSH) yordamida tana harorati 36,5 daraja -37 darajada ushlab turildi. Ba'zi sichqonlarga {{4} }}(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-oks-il-4-arilamino)-2-oksoetiltrifenilfosfoniy xlorid (Mito--TEMPO,{{14} }},7 mg/kg BW;Sigma, Sent-Luis, MO, AQSh) operatsiyadan 17 va 1 soat oldin (oldindan ishlov berish) yoki operatsiyadan 6 soat keyin (davolashdan keyingi).

Tajribalar oxirida o'pka vabuyrakto'qimalar suyuq azotda muzlatilgan yoki mos ravishda biokimyoviy va gistologik tadqiqotlar uchun PLP (4 foiz paraformaldegid, 75 mM L-lizin, 10 mM natriy periodat: Sigma) eritmasi bilan biriktirilgan perfuziyada. Muzlatilgan to'qimalar zarur bo'lgunga qadar -70 darajada saqlanadi.

BALF to'plami.

BALF pentobarbital natriyning haddan tashqari dozasini in'ektsiya qilish orqali sichqonlarni evtanizatsiya qilishdan keyin to'plangan. O'pkaning oqishi BALFdagi oqsil kontsentratsiyasi va hujayralar sonini aniqlash orqali baholandi. BALFni to'plash uchun chap o'pkaning bronxlari mikroanevrizma qisqichlari yordamida to'liq klemplangan. Traxeyaga igna kiritildi va 0,8 ml sovuq fosfat-buferli fiziologik eritma (PBS) o'ng o'pka bo'laklariga asta-sekin yuborildi. BALF shpritsning pistonini bir marta tortib olish orqali yig'ildi. BALFdagi jami hujayralar soni va oqsil kontsentratsiyasi mos ravishda gematositometr va BCA tahlil to'plami (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusets, AQSh) yordamida darhol tahlil qilindi. BALF western blotting tahlili uchun zarur bo'lgunga qadar -70 darajada saqlangan.

Buyrakfunktsiyasi. Sichqonlardan qon geparinlangan shprits yordamida olingan. Qondagi karbamid azotining (BUN) plazmadagi kontsentratsiyasi Vitros 250 kimyoviy analizatori (Jonson va Jonson, Nyu-Brunsvik, NJ, AQSh) yordamida aniqlangan.

Davriy kislota-Schiff (PAS) va gematoksilin va eozin (H&E) bo'yash.

PLP bilan tuzatilganbuyrakva o'pka to'qimalariga kerosin solingan, mikrotom yordamida 3-mkm qalinlikdagi bo'laklarga bo'lingan (Leica, Bensheim, Germaniya-many) va shisha slaydlarga o'rnatilgan.Buyrakva o'pka bo'limlari PAS va H&E bilan bo'yalgan. Thebuyrakzararball yuqorida tavsiflanganidek, tergovchilar tomonidan ko'r-ko'rona baholandi [3,19].

Western blot tahlili.

Western blotting avval tasvirlanganidek amalga oshirildi [3]. Vestern bloting uchun ishlatiladigan antikorlar quyidagilar edi: anti{1}}gidroksi nominal (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, AQSH), anti- -tubulin (Santa Kruz, CA, AQSH) , anti-atsetillangan -tubulin (ac{6}}tubulin, Sigma), anti-marganetsga qaram superoksid dismutaza (MnSOD; Calbiochem, San-Diego, CA, AQSH), anti-katalaz (Fitzgerald, Concord, MA, AQSH) , anti-ADP-ribosilatsiya omiliga o'xshash protein 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, AQSH), anti-izotsitrat dehidrogenaza 2 (IDH2; Santa Cruz), anti-optik atrofiya 1 (Opal; BD Bioscience, San-Diego, CA ), parchalanishga qarshi 1 (Fis1; Sigma), anti-dinamin bilan bog'liq protein 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSh) va antigliseraldegid 3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, AQSh).

Immunofluoresan bo'yash.

Deparafinizatsiyadan so'ng, bo'laklar 1 daqiqa davomida {0}}, 2 foiz Triton X-100 (Sigma) o'z ichiga olgan PBS da inkubatsiya qilindi va keyin PBS da 10 daqiqa davomida yuvildi. Antigen epitopini ochish uchun bo'laklar 10 mm natriy sitrat tamponida (pH 6,0) 10 daqiqa qaynatiladi, 20 daqiqa sovutiladi va keyin har bir yuvishda 5 daqiqa davomida PBS bilan uch marta yuviladi. Bo'limlar 30 daqiqa davomida PBS (blokirovka qiluvchi bufer) dagi 3 foizli sigir zardobi albumini bilan bloklandi va keyin bir kechada 4 daraja haroratda anti-Arll3b antikori bilan inkubatsiya qilindi. Yuvishdan so'ng, bo'limlar FITC-konjugatsiyalangan echkiga qarshi quyon IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, AQSh) bilan 60 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi va keyin har biri 5 daqiqa davomida PBS bilan 3 marta yuvildi. Hujayra yadrolari 4'-6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma) yordamida bo'yalgan.

O'pka to'qimalarida superoksidni o'lchash.

Superoksid darajalari ilgari ta'riflanganidek dihidroetidiy (DHE; Sigma) yordamida o'lchandi 【33,34】. Qisqacha aytganda, 1 ml oldindan qizdirilgan (37 daraja) PBS ichidagi 10 mkM DHE, 20 ul o'pka to'qimasi lizatini o'z ichiga olgan 96-quduq plastinkasiga qo'shildi. Plastinka har 10 daqiqada jami 30 daqiqa davomida 530 nm / 620 nm qo'zg'alish / emissiya filtrlarida o'qildi.

IL o'lchovi-6.

Plazma va BALFdagi IL-6 darajalari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga (BD Bioscience) muvofiq Elishay tahlil to'plamidan foydalangan holda Elishay tahlili orqali aniqlandi.

Statistika.

Barcha ma'lumotlar GraphPad Prism 7 dasturi (San-Diego, CA, AQSh) yordamida tahlil qilindi. Natijalar o'rtacha ± standart xato (SEM) sifatida ifodalanadi. Statistik tahlil Studentning t-testi va Tukeyning post hoc protsedurasi bilan dispersiyaning bir tomonlama tahlili yordamida amalga oshirildi. P-qiymatlari bo'lganda farqlar statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi<>

3. Natijalar

1. Buyrak IR o'pka shikastlanishiga olib keladi.

Kutilganidek, sezilarli morfologik zararbuyraklar(1A va B-rasm) va plazmadagi BUN miqdorining oshishi (1C-rasm) ikki tomonlama 35 daqiqadan keyin 4 va 24 soatdan keyin kuzatildi.buyrakishemiya. O'pkada neytrofillarning ko'payishi va alveolyar devorning qalinlashishi 4 va 24 soatdan keyin kuzatildi.buyrakishemiya (1D-rasm). Bundan tashqari, o'pka to'qimalarida limfotsitlar antijeni 6 kompleksi lokusu G6D (Ly6G, monotsitlar, granulotsitlar va neytrofillar uchun marker) ifodalanishining ko'payishi reperfuziya vaqtiga bog'liq (1E va F-rasm) kuzatildi. Keyin plazmadagi interleykin{6}} (IL-6) kontsentratsiyasi ortdibuyrakIQ, ishemiyadan keyin 4 soatdan keyin eng yuqori nuqtaga etadi (1G-rasm). BALFdagi I-6 va oqsil kontsentratsiyasi hamda umumiy hujayralar soni buyrak ishemiyasidan keyin 4 va 24 soatdan keyin asta-sekin o'sib bordi (1H-J-rasm). 35 daqiqadan keyin 24 soatda omon qolish darajasibuyrakIR taxminan 92 foizni tashkil etdi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).

Qachonbuyrakishemik vaqt 45 minutgacha uzaytirildi, plazmadagi BUN konsentratsiyasining post-ishemik o'sishi va BALFdagi umumiy protein konsentratsiyasi va hujayralar soni 35 daqiqadan so'ng ishemiyadan (Fig.1K-M) ko'proq edi. Ushbu ma'lumotlar o'pkaning shikastlanishiga sabab bo'lganligini ko'rsatadibuyrakIQ shikastlanish darajasiga bog'liqbuyrakjarohat.

1-rasm. Buyrak IR dan keyin o'pkaning gistologik va funktsional shikastlanishi. C57BL / 6 erkak sichqonlari 35 (A-M) va 45 (K-M) minut ikki tomonlama buyrak ishemiyasi yoki soxta operatsiyaga duchor bo'ldi. Buyrak, o'pka, qon va BALF operatsiyadan 4 va 24 soat o'tgach to'plangan. BALF Materiallar va usullarda tasvirlanganidek to'plangan. (A-J) Sichqonlar 35 daqiqa ishemiyadan keyin 4 yoki 24 soat davomida qurbon qilingan. (A, B)Buyrakbo'limlar (3 mkm) PAS bilan bo'yalgan vabuyrakquvurli shikastlanish baholandi. (C, K) BUN konsentratsiyasi plazmada o'lchandi. (D) O'pka qismlari (3 mkm) H&E bilan bo'yalgan. (E, F) o'pka to'qimasida Ly6G ifodasi g'arbiy blot bilan tahlil qilindi. GAPDH yuklash nazorati sifatida ishlatilgan. Bandlarning zichligi ImageJ dasturi yordamida o'lchandi. (G, H) IL-6 kontsentratsiyasi plazma va BALFda o'lchandi. (I, J, L, M) Protein konsentratsiyasi va umumiy hujayra soni BALFda o'lchandi. (K-M) Sichqonlar ishemiyadan 35 yoki 45 daqiqadan so'ng 4 soatdan keyin qurbon qilindi. Natijalar o'rtacha ± SEM (n=3-6) sifatida ifodalanadi. *p < 0.05="" va="" sham.="" †p="">< 0,05="" va="" 4="" soatdan="" keyin="" ishemiya="" yoki="" ishemiya="" 35="" daqiqadan="">

2. Buyrak IRo'pka epiteliya hujayralari kiprikchalarining buzilishiga olib keladi va bu bo'laklar BALFga chiqariladi.

O'pka to'qimalarining bo'limlari va BALF yuklangan slaydlar anti-ADP-ribosilatsiya omiliga o'xshash protein 13B (Arl13B, siliya belgisi) antikori bilan immuno-bo'yalgan. Alveolalarning luminal qismida va o'pkaning terminal bronxiolalarida Arll3B ijobiy signallari kuzatildi (2A-rasm). ning o'pkasida Arl13B-musbat signalning yo'qolishi kuzatildibuyrakIR-ma'muriy sichqonlar (Fig.2A). Arll13B-musbat signalning bu yo'qolishi keyin asta-sekin ortdibuyrakvaqt o'tishi bilan ishemiya (2A-rasm). BALFda buyrak ishemiyasidan so'ng turli uzunlikdagi Arl13B-musbat zarrachalar kuzatildi va BALFdagi Arl13B-musbat zarrachalar soni ishemiyadan keyin vaqt o'tishi bilan asta-sekin oshdi (Fig.2B va C). O'pka to'qimalarida Arl13B, atsetillangan -tubulin (ak- -tubulin, granulotsitlar va neytrofillar) ifodasi reperfuziya vaqtiga bog'liq bo'lgan tarzda kuzatildi (1E va F-rasm). Keyin plazmadagi interleykin-6 (IL-6) kontsentratsiyasi ortdibuyrakIQ, ishemiyadan keyin 4 soatdan keyin eng yuqori nuqtaga etadi (1G-rasm). BALFdagi I-6 va oqsil kontsentratsiyasi hamda umumiy hujayralar soni buyrak ishemiyasidan keyin 4 va 24 soatdan keyin asta-sekin o'sib bordi (1H-J-rasm). 35 minutlik buyrak infraqizil tekshiruvidan keyin 24 soatda omon qolish darajasi taxminan 92 foizni tashkil etdi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).

Qachonbuyrakishemik vaqt 45 minutgacha uzaytirildi, plazmadagi BUN konsentratsiyasining post-ishemik o'sishi va BALFdagi umumiy protein konsentratsiyasi va hujayralar soni 35 daqiqadan so'ng ishemiyadan (Fig.1K-M) ko'proq edi. Ushbu ma'lumotlar o'pkaning shikastlanishiga sabab bo'lganligini ko'rsatadibuyrakIQ shikastlanish darajasiga bog'liqbuyrakjarohat.

2-rasm. Buyrak IR dan so'ng BALFga chiqarilgan o'pka hujayralari kipriklari va ularning bo'laklari va oqsillaridagi buzilish.C57BL/6 erkak sichqonlari 35 daqiqa davomida ikki tomonlama buyrak ishemiyasi yoki soxta operatsiyaga duchor bo'ldilar. O'pka to'qimasi va BALF Materiallar va usullarda tasvirlanganidek operatsiyadan 4 va 24 soat o'tgach to'plangan. (A) O'pka bo'limlari (5 mkm) anti-Arl13B antikori yordamida immunofluoresan bo'yalgan; yashil rang Arl13B-musbat ekanligini ko'rsatadi. Hujayra yadrolarini ko'rish uchun DAPI bo'yog'i (4′,6-diamidino-2-fenilindol; ko'k) ishlatilgan. O'q uchlari kirpiklarni ko'rsatadi. (B) BALF (1{29}} ul) anti-Arl13B antikori yordamida immunofluoresan bo'yalgan shisha slaydga qo'yildi; yashil rang Arl13B-musbat (n=3) ekanligini bildiradi. (C) Arl13B-musbat zarrachalar soni floresan mikroskop ostida hisoblangan (n=3). (D–G) Arl13B, atsetillangan{24}}tubulin (ac{25}}tubulin) va BALFdagi -tubulin (-tubulin) ifodalari western blotting orqali tahlil qilindi. Bandlarning zichligi ImageJ dasturi yordamida o'lchandi. Natijalar o'rtacha ± SEM (n=3) sifatida ifodalanadi. *p < 0.05="" va="" sham.="" †p=""><0,05 va="" ishemiyadan="" 4="" soat="" o'tgach.="" javob:="" alveolalar,="" sil="" kasalligi:="">

3. Buyrak IR ham o'pka to'qimasida, ham BALFda superoksid va oksidlovchi stress darajasini oshiradi.

BuyrakIQ o'pka to'qimasida super-oksid darajasini oshirdi (3A-rasm), IDH2 (Fig.3B va C) ifodasini kamaytirdi, lekin MnSOD va katalaza emas (3B.DE-rasm). Ushbu topilmalar buyrakning IQ ta'sirida o'pka shikastlanishi ROS darajasining oshishi bilan bog'liqligini ko'rsatadi.oksidlovchi stresso'pkada. Bunga dalil sifatida o'pka to'qimasida lipid peroksidlanish mahsuloti bo'lgan 4-gidroksi nominal (4-HNE) darajasi 4 va 24 soatdan keyin sezilarli darajada oshdi.buyrakishemiya(3F-D-rasm). 4-HNE o'pka to'qimalarining deyarli barcha sohalarida, jumladan alveolalar va bronxiolalarda kuzatilgan (3H va D-rasm. Bundan tashqari, 8-gidroksi-2'-deoksiguanozin ({{) ifodasi 7}}OhdG), deoksi-guanozinning oksidlangan hosilasi sifatida DNK oksidlanishining taniqli belgisi, o'pka epitelial hujayralarida ham sitozolda, ham yadrolarda ko'paygan.buyrakishemiya (Fig.3J va K. BALFda 4-HNE ifodasi ham keyin oshdi.buyrakishemiyareperfuziya vaqtiga bog'liq holda (3L, M-rasm). Bundan tashqari, buyrak ishemik vaqti 45 daqiqagacha uzaytirilganda, o'pkada HNE ifodasining post-ishemik o'sishi 35 daqiqadan keyin ko'proq bo'ldi.buyrakishemiya (Fig.3N, O). Ushbu natijalar mitoxondriyal DNK ham, yadro DNKsi ham ROS hosil bo'lishining kuchayishi va olib tashlash tizimlaridagi buzilishlar tufayli oksidlovchi shikastlanganligini ko'rsatadi, bu esa o'pka epiteliya hujayralarining shikastlanishi bilan bog'liqligini ko'rsatadi.oksidlovchi stress.

3-rasm. Buyrak IR dan keyin o'pka to'qimalarida oksidlovchi stress. C57BL / 6 erkak sichqonlari 35 (A-O) va 45 (N, O) daqiqada ikki tomonlama buyrak ishemiyasi yoki soxta operatsiyaga duchor bo'ldi.O'pka vabuyrak35 daqiqa yoki 45 daqiqa ishemiyadan keyin 4 va 24 soatdan keyin yig'ib olingan. (A-M) Sichqonlar 35 daqiqa ishemiyadan keyin 4 yoki 24 soat davomida qurbon qilingan. (A) O'pka to'qimasidagi superoksid darajasi Materiallar va usullarda (n=3-5) tavsiflanganidek o'lchandi. (B-E) o'pka to'qimasida IDH2, katalaza va MnSOD ifodasi western bloting (n {{10}}) bilan tahlil qilindi. Yuklash nazorati sifatida GAPDH ishlatilgan. (C-E) Bandlarning zichligi ImageJ dasturi yordamida o'lchandi. (F, G) 4-O'pkadagi HNE ifodasi western blotting yordamida tahlil qilindi va tarmoqli zichligi ImageJ (n=4) yordamida o'lchandi. (H–K) O‘pka qismlari (3 mkm) anti-4-HNE va 8-OHdG antikorlari yordamida immunohistokimyoviy bo‘yalgan va gematoksilin yordamida qarama-qarshi bo‘yalgan; jigarrang 4-HNE- va 8-OHdG-musbat (n {{20}}) ekanligini bildiradi. (I, K) 4-HNE- va 8-OHdG-musbat signallarining intensivligi i-Solution dasturi (n=3) yordamida oʻlchandi. (L, M) 4-BALFdagi HNE ifodasi western blotting orqali tahlil qilindi va tarmoqli zichligi ImageJ (n=3) yordamida oʻlchandi. (N, O) Sichqonlar ishemiyadan 35 daqiqa yoki 45 daqiqadan keyin 4 soatdan keyin qurbon qilindi. 4-O‘pkadagi HNE ifodasi western blotting yordamida tahlil qilindi va tarmoqli zichligi ImageJ (n=3) yordamida o‘lchandi. Natijalar o'rtacha ± SEM (n =3–5) sifatida ifodalanadi. *p <0,05 va="" sham.="" †p="">< 0,05="" va="" ishemiyadan="" 4="" soat="" o'tgach="" yoki="" 35="" daqiqa="" ishemiya.="" (ushbu="" rasm="" afsonasidagi="" rangga="" havolalarni="" talqin="" qilish="" uchun="" o'quvchi="" ushbu="" maqolaning="" veb-versiyasiga="" havola="">

Hujayralarda, mitoxondriyalar. asosiy ROS ishlab chiqaruvchi hujayra ichidagi organella fiziologik va patologik sharoitlarga moslashish uchun odatda termoyadroviy va bo'linishdan o'tadi. Ushbu termoyadroviy va parchalanish jarayonlaridagi buzilish hujayra disfunktsiyasi va shikastlanishiga olib kelishi mumkin [36]. Oldingi tadqiqotlar buni ko'rsatdioksidlovchistressmitoxondriyal sintez va parchalanishning normal dinamikasini buzadi, natijada mitoxondriyal disfunktsiya va hujayra shikastlanishiga olib keladi [32,36-38]. Biz mitoxondrial bo'linish va termoyadroviy tartibga soluvchi oqsil ifodalarini aniqlash orqali mitoxondrial dinamikani baholashga harakat qildik. Mitoxondriyal bo'linishni tartibga soluvchi Fis1 va Drp1 ifodalari sichqonlarning o'pkasida sezilarli darajada oshdi.buyrakishemiya(4A-C-rasm). Biroq, mitoxondriyal termoyadroviyni tartibga soluvchi OPA1 ifodasi buyrak IR tomonidan sezilarli darajada o'zgarmadi (Fig.4A, D). Ushbu ma'lumotlar o'pka hujayralarida mitoxondrial sintez va bo'linish muvozanati AKI natijasida buzilganligini ko'rsatadi. (O'tkir buyrak shikastlanishi).

4-rasm. Buyrak IR dan keyin o'pkada mitoxondrial dinamikaning o'zgarishi. C57BL / 6 erkak sichqonlari 35 daqiqa davomida ikki tomonlama buyrak ishemiyasi yoki soxta operatsiyaga duchor bo'ldi.O'pka ishemiyadan 4 va 24 soat o'tgach yig'ib olingan. (A-D) o'pka to'qimalarida Drp1, Fis1 va OPA1 ifodalari g'arbiy blot bilan tahlil qilindi. Yuklash nazorati sifatida GAPDH ishlatilgan. Bandlarning zichligi ImageJ dasturi yordamida o'lchandi. Natijalar o'rtacha ± SEM (n=4) sifatida ifodalanadi. *p < 0.05="" va="" sham.="" †p=""><0,05 va="" ishemiyadan="" 4="" soat="">

4. Mitoxondriyaga xos antioksidant bilan davolash buyrakning IQ ta'siridan kelib chiqqan o'pka shikastlanishini va o'pka siliyasining buzilishini kamaytiradi.

Mitoxondriyaning rolini tasdiqlashoksidlovchistressyoqilganbuyrakIR-induktsiyali o'pka shikastlanishi va o'pka epitelial hujayrasi siliya buzilishi, biz mitoxondriyaga xos antioksidant bo'lgan Mito-TEMPO bilan oldindan davolash (5A-D-rasm yoki davolashdan keyingi (5J-L-rasm)) buyrakning IR-induktsiyasini inhibe qiladimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik.oksidlovchistress, I-6 ishlab chiqarish va C57BL/6 erkak sichqonlarining o'pkalarida desiliatsiya. Mito-TEMPO bilan dastlabki davolash (5A-D-rasm), lekin keyingi davolash emas (5J-L-rasm) qon plazmasidagi BUN va IL-6 kontsentratsiyasining oshishini sezilarli darajada inhibe qildi (5A va B-rasm). shuningdek, BALFdagi IL-6 konsentratsiyasi, umumiy oqsil kontsentratsiyasi va umumiy hujayralar soni (5C-E-rasm). Mito-TEMPO bilan oldindan ishlangan sichqonlarning BALF tarkibidagi Arl13B, ac- -tubulin va -tubulin ifodalari transport vositasida ishlov berilgan sichqonlardagiga qaraganda kamroq edi (5F-I-rasm). Ushbu tadqiqotda, Davolanishdan keyingi 6-soat o'pkani himoya qilmadibuyrakIQ (5J-L-rasm). Bu natijalar shuni ko'rsatadiki, erta ROS ishlab chiqarish, uning to'planishi vaoksidlovchistressAKIga muhim hissa qo'shishi mumkin (O'tkir buyrak shikastlanishi)- o'pkaning shikastlanishi. Superoksid darajalari va 4-O'pka to'qimasida HNE ifodasi (6A-C) va BALFda (6D va E) Mito-TEMPO bilan oldindan ishlangan sichqonlarda transport vositasi bilan ishlov berilgan sichqonlarga qaraganda kamroq edi. Bu natijalar shundan dalolat beradibuyrakIR-induktsiyali o'pka shikastlanishi va o'pka epiteliya hujayralarining desiliatsiyasi mitoxondrial bilan bog'liq.oksidlovchistress.

5-rasm. Mitoxondriyaga yo'naltirilgan antioksidant bo'lgan Mito-TEMPO tomonidan buyrakning IQ ta'siri ostida o'pka shikastlanishi va siliya buzilishining oldini olish. C57BL / 6 erkak sichqonlari 35 daqiqa davomida ikki tomonlama buyrak ishemiyasiga duchor bo'ldi.Ba'zi sichqonlarga Mito-TEMPO (Mito-T, 0.7 mg/kg BW, ip) ishemiyadan 17 va 1 soat oldin, ikki marta, (A-I) yoki ishemiyadan 6 soat keyin (J-) qo'llangan. L). O'pka, BALF va qon ishemiyadan 24 soat o'tgach yig'ib olindi. (A, J) Plazmadagi BUN konsentratsiyasi o'lchandi. (B, C) Plazma va BALFdagi IL-6 kontsentratsiyasi Elishay tahlil to'plami yordamida o'lchandi. (D, E, K, L) BALFdagi oqsil kontsentratsiyasi va hujayra soni o'lchandi. (F–I) Arl13B, atsetillangan {{10}}tubulin (ac{11}}tubulin) va BALFdagi -tubulin (-tub) ifodalari western blotting orqali tahlil qilindi. Bandlarning zichligi ImageJ dasturi yordamida o'lchandi. Natijalar o'rtacha ± SEM (n=4) sifatida ifodalanadi. *p <0,05 avtomobilga="">

QISM Ⅱ UCHUN SHU YERGA BOSING