Diosminning kaltsiy oksalat buyrak toshlarini shakllantirish jarayonlariga ikki tomonlama modulyatsiya qiluvchi ta'siri: kristallanish, o'sish, agregatsiya, kristall hujayralar yopishishi, buyrak quvurli hujayralariga ichkiizatsiya va hujayradan tashqari matritsa orqali bostirib kirish
Mar 16, 2022
qo'shimcha ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com
Supaporn Xamchuna,b,c,1, Sunisa Yoodeea,1, Thongboonkerdga tashrif buyuringa,*
aTibbiy proteomika bo'limi, Tadqiqot va ishlanmalar bo'limi, Siriraj kasalxonasi tibbiyot fakulteti, Mahidol universiteti, Bangkok 10700, Tailand
bTibbiyot texnologiyalari boʻlimi, Ittifoqdosh sogʻliqni saqlash fanlari maktabi, Phayao universiteti, Phayao 56000, Tailand
cIntegratsion molekulyar biotibbiyot bo'yicha mukammallik bo'limi, Ittifoqdosh sog'liqni saqlash fanlari maktabi, Phayao universiteti, Phayao 56000, Tailand
Kalit so'zlar: bioaktiv birikma, flavonoid, inhibitor, modulyator, nefrolitiaz, promotor, urolitiyoz
ANTRACT
Diosminbir necha farmakologik ta'sirga ega meva va o'simliklarda joylashgan tabiiy flavon glikozid (bioflavonoid). Turli kasalliklarda/buzilishlarda xun takviyesi yoki terapevtik vosita sifatida keng qo'llanilgan. Tavsiya etilgan bo'lsa-da, uning himoya mexanizmlaridan dalolat beradibuyraktosh kasalligi (nefrolitiaz / urolitiyoz), ayniqsa, eng keng tarqalgan turi bo'lgan kaltsiy oksalat (CaOx) monohidrat (COM) noaniq bo'lib qoldi. Ushbu tadqiqotda biz tizimli ravishda ta'sirini baholadikdiosmin(2,5-160 nM da) ning turli bosqichlaridabuyraktosh hosil bo'lish jarayonlari, shu jumladan COM kristallanishi, kristall o'sishi, agregatsiyasi, kristall-hujayralar yopishishi, buyrak quvurli hujayralariga ichkiizatsiya va hujayradan tashqari matritsa (ECM) orqali bostirib kirish. Natijalar shuni ko'rsatdidiosminBarcha qayd etilgan COM buyrak tosh jarayonlarida dozaga bog'liq modulyatsiya qiluvchi ta'sir ko'rsatdi.Diosminkristallanish jarayonida MAQOMOTI kristal soni va massasini sezilarli darajada oshirdi, ammo kristall hajmi va o'sishini kamaytirdi. Vaholankidiosminkristall agregatsiyasini rag'batlantirdi, kristall-hujayralarning adezyonini va buyrak naychalari hujayralariga ichkilashishini inhibe qildi. Nihoyat, diosmin ECM orqali kristall bostirib kirishiga yordam berdi. Bizning ma'lumotlarimiz diosminning COMga ham inhibe qiluvchi va rag'batlantiruvchi ta'sirini ko'rsatadigan dalillarni taqdim etadibuyraktosh shakllanishi jarayonlari. Diosminning ikki tomonlama modulyatsiya qiluvchi faoliyatiga asoslanib, uning urolitiyozga qarshi roli shubhali va undan foydalanishda ehtiyot bo'lish kerak.buyraktosh kasalligi.
1.Kirish
Diosmin(3′,5,7-trigidroksi-4'-metoksiflavon-7-ramnoglyukozid) tabiiy bioflavonoid boʻlib, koʻpincha turli oʻsimliklar va mevalarda, asosan sitrus turlarida uchraydi. [1,2]. U boshqa flavonoid gesperidindan sintezlanishi yoki olinishi mumkin [1,2]. Diosminning o'zi yoki gesperidin bilan birgalikda surunkali venoz etishmovchilik va gemorroy kabi venoz va limfa kasalliklarini davolash uchun flebotropik dori sifatida keng qo'llaniladi [3,4]. Bundan tashqari, diosmin antioksidant va yallig'lanishga qarshi [5,6], anti-mutagen va anti-neoplastik xususiyatlar [7,8], antibiotiklar [9], antihiperglisemik xususiyatlar [9] kabi boshqa biologik va farmakologik faollikni ham namoyish etadi. 10] va ko'p a'zolarning shikastlanishiga qarshi himoya ta'siri, ya'ni,
yurak-qon tomir [11], retinal [12],buyrak, jigar va miya shikastlanishi [13].
Buyraktosh kasalligi (yoki nefrolitiyoz/urolitiyoz) buyrakda hosil bo'lgan va to'plangan qattiq toshlardan kelib chiqadi va dunyoning barcha hududlarida odamlarga yuqori takrorlanish darajasi bilan ta'sir qiladi [14-17]. Turli xil qo'zg'atuvchi kristallar orasida kaltsiy oksalat (CaOx), ayniqsa monohidrat shakli (COM) tosh hosil qiluvchilarda (buyrak toshlari bo'lgan bemorlarda) topilgan eng patogen va eng keng tarqalgan kristalli komponent hisoblanadi [18]. Mexanik jihatdan, COM kristallari eng kuchli yopishqoqlik qobiliyatiga ega va buyrak tubulali epiteliya hujayralariga eng ko'p sitotoksik ta'sir ko'rsatadi [19,20]. Tosh patogenezi davomida Randallning blyashka modeli ham, intratubulyar gipotezasi ham COM tosh hosil bo'lish jarayonlarining umumiy xususiyatlariga ega, jumladan COM kristallanishi, o'sishi, agregatsiyasi, buyrak tubulali hujayralari yoki buyrak tos bo'shlig'ida sirt yopishish orqali ushlab turish, hujayralarga ichkiizatsiya va invaziya. hujayradan tashqari matritsa (ECM) orqali buyrak interstitsiyasi [21,22].
So'nggi paytlarda ko'plab tadqiqotlar dorivor o'simliklar / mevalar va ularning bioaktiv birikmalaridan foydalangan holda yangi va / yoki takroriy tosh shakllanishining oldini olishga qaratilgan dori-darmonlarni topishga qaratilgan. Bir qator oldingi hisobotlar shuni ko'rsatdiki, ba'zi biologik faol birikmalar, ayniqsa, bir nechta dorivor o'simliklardan/mevalardan olingan fenolik birikmalar (polifenol, flavonoid, flavon glikozid va boshqalar) patogen mexanizmlarga qarshi profilaktik ta'sir ko'rsatadi.buyrakin vitro va in vivo tosh kasalligi [23-25]. Ushbu foydali moddalar orasida bir nechta hisobotlarda diosmin hayvonlar modellarida buyrak to'qimalarida CaOx kristallarining cho'kishining oldini olishi mumkinligini ko'rsatdi [26,27]. Shu bilan birga, COM buyrak toshlarining shakllanishida uning aniq modulyatsiya qiluvchi roli (inhibisyon yoki rag'batlantirish) va mexanizmlari (bosqichlari yoki tosh shakllanishi jarayonlari) o'rganilmagan. Ushbu tadqiqot shunday ta'sirlarni tizimli ravishda baholadidiosmin(2,5-160 nM da) ning turli bosqichlaridabuyraktosh hosil bo'lish jarayonlari, shu jumladan kristallanish, kristall o'sishi, agregatsiya, kristall-hujayra yopishishi, buyrak quvurli hujayralariga ichkiizatsiya va ECM orqali bostirib kirish.
ga bosingBuyrak funktsiyasi uchun Cistanche tubulosa dozasi
2. Materiallar va usullar
2.1. Diosmin tayyorlash
Diosmin(Tokio Chemical Industry; Tokio, Yaponiya) 100 foizli dimetil sulfoksid (DMSO) (Sigma-Aldrich; Sent-Luis, MO) bilan eritildi va ishchi alikvotlar 2,5, 5, 10, 20, 40, yakuniy konsentratsiyalarda tayyorlandi. COM kristallariga ta'sirini o'rganish uchun 80 va 160 nM. Bundan tashqari, barcha tajribalarda salbiy nazorat sifatida 100 foiz DMSO ishlatilgan.
2.2. Hujayra madaniyati
Nefronning distal quvurli segmentidan (ATCC; Manassas, VA) olingan MDCK buyrak quvurli epitelial hujayra chizig'i Eagle minimal muhim muhitida (MEM) (Gibco; Grand Island, NY) 10 foiz homila sigir zardobi (FBS) bilan to'ldirilgan, 60 U/ml penitsillin G (Sigma-Aldrich) va 60 ug/ml streptomitsin (Sigma-Aldrich). Hujayralar 37 ◦C da 5 foiz CO2 bo'lgan namlangan inkubatorda saqlangan.
2.3. COM kristallanish tahlili
MAQOMOTI kristallanishi avval tavsiflanganidek amalga oshirildi [28,29]. Qisqacha aytganda, kristallanish buferidagi 10 mM CaCl2⋅2H2O dan (tarkibida 10 mM Tris-HCl va 90 mM NaCl mavjud) (pH 7,4) {{12} quduq plastinkasining har bir qudug'iga (Corning Inc.; Corning,) qo'shildi. NY). Teng hajmda (4 ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yokidiosmin(2,5, 5, 10, 2{20}}, 40, 80 yoki 160 nM) CaCl2 bilan aralashtirildi. Nihoyat, kristallanish tamponidagi 1,0 mM Na2C2O4 dan 500 ul keyin CaCl2 va Na2C2O4 ning yakuniy konsentratsiyasini mos ravishda 5 mM va 0,5 mM qilish uchun qo'shildi. Aralash 25 ◦C da 1 soat davomida inkubatsiya qilindi va keyin tekshirildi. Kristal tasvirlar Nikon Eclipse Ti-S teskari fazali kontrastli yorug'lik mikroskopi (Nikon; Tokio, Yaponiya) ostida kamida 15 ta yuqori quvvatli maydonlardan (HPF) tasodifiy tarzda olingan. Kristal o'lchami va soni NIS Element D dasturiy ta'minot versiyasi 4.11 (Nikon) yordamida har bir namuna uchun kamida 15 HPF dan o'lchandi. Kristal massasi 15 ta HPFdagi kamida 100 ta kristaldan quyidagi formula yordamida hisoblangan: Kristal massasi (µm2/HPF)=Har bir maydondagi o‘rtacha kristall hajmi (mkm2) × Har bir maydondagi kristallar soni (/HPF) ( 1)
2.4. COM kristalining o'sishi tahlili
Kristal o'sish tahlili yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi [30,31].
Qisqacha aytganda, kristallanish buferidagi 10 mM CaCl2⋅2H2O va 1,0 mM Na2C2O4 ning teng hajmi (500 ul) { ning har bir qudug'ida (1:1) (v/v) aralashtiriladi. {12}}quduq plitasi. To'liq kristallanishni ta'minlash uchun aralash 1 soat davomida 25 ◦C da inkubatsiya qilindi. Bu nuqtada (T0), kristallanish buferining teng hajmi (4 ul) (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yokidiosmin(2,5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 yoki 160 nM) har bir quduqqa qo'shildi va aralashma 60 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi (T60). T0 va T60 da kristall tasvirlar Nikon Eclipse Ti-S teskari fazali kontrastli yorug'lik mikroskopi ostida kamida 15 ta HPFdan tasodifiy tarzda olingan. T0 va T60 da kristall o'lchamlari NIS Element D dasturiy ta'minotining 4.11 versiyasi (Nikon) yordamida o'lchandi, kristall o'sishi (D Kristal o'lchami bilan ifodalanadi) quyidagi formula bo'yicha 15 HPFdagi kamida 100 ta kristaldan hisoblab chiqilgan: D Kristal o'lchami (µm2)=T60 da kristall oʻlchami − T0 da kristall oʻlchami (2)
2.5. COM kristallarini yig'ish tahlili
Kristal agregatsiyasi tahlili avval tavsiflanganidek amalga oshirildi [32,33]. COM kristallari kristall o'sishi tahlilida yuqorida aytib o'tilganidek, 50- ml konussimon naychada (Corning Inc.) kattaroq hajmda hosil qilingan va keyin 2000 g da 5 daqiqa davomida santrifüjlash orqali yig'ib olingan. Supernatant tashlandi, COM kristallari esa uch marta metanol bilan yuvildi. 2000 g da 5 daqiqa davomida boshqa santrifüjdan so'ng, metanol tashlab yuborildi va kristallar kechasi 25 ° C da havoda quritildi. COM kristallari (quruq vazni 1000 mkg) quduq plastinkasining (Corning Inc.) 6-har bir qudug‘ida 1 ml kristallanish tamponida qayta suspenziya qilindi. Teng hajmda (4 ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yokidiosmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 yoki 160 nM) har bir quduqdagi COM kristalli suspenziyasiga qo'shildi. Plastinka chayqaladigan inkubatorda (Zhicheng; Shanxay, Xitoy) 1 soat davomida 150 rpm va 25 ◦C da doimiy ravishda chayqatildi. Shundan so'ng, COM kristall agregatining shakllanishi ("bir-biriga mahkam bog'langan uch yoki undan ortiq individual COM kristallari yig'ilishi" [32] sifatida ta'riflangan) Nikon Eclipse Ti-S teskari fazali kontrastli yorug'lik mikroskopi ostida tekshirildi va tasvirlandi. MAQOMOTI kristalli agregatlar soni har bir quduq uchun kamida 15 tasodifiy HPF dan hisoblangan.
2.6. COM kristal-hujayra yopishish tahlili
Kristal-hujayra adezyon tahlili ilgari tasvirlanganidek amalga oshirildi [34,35]. Qisqacha aytganda, COM kristallari yuqorida aytib o'tilganidek, 50- ml konussimon naychada hosil qilingan va keyin 2000 g da 5 daqiqa davomida santrifüjlash orqali yig'ilgan. Supernatant tashlandi, COM kristallari esa uch marta metanol bilan yuvildi. 2000 g da 5 daqiqa davomida boshqa santrifüjdan so'ng, metanol tashlab yuborildi va kristallar kechasi 25 ° C da havoda quritildi. Kristallar hujayralar bilan aralashuvdan oldin 30 daqiqa davomida UV nurli nurlanish bilan zararsizlantirildi.
MDCK xujayralari (2 × 105 hujayra / quduq zichligida) birlashuvchi monolayerni olish uchun 6-quduq plitasining (Corning Inc.) har bir qudug'ida 48 soat davomida ekilgan va o'stirilgan. Keyin madaniyat muhiti COM kristallarini qo'shishdan oldin yangilandi (har bir ml madaniyat muhitiga 100 mkg quruq og'irlikdagi kristallar). Teng hajmda (4 ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yokidiosmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 yoki 160 nM) har bir quduqqa qo'shildi. Hujayralar yana 1 soat davomida 37 ◦C da 5 foiz CO2 bilan namlangan inkubatorda inkubatsiya qilindi. Shundan so'ng, hujayralar besh marta PBS bilan kuchli yuvildi va Nikon Eclipse Ti-S teskari fazali kontrastli yorug'lik mikroskopi ostida tasvirlandi. Buyrak quvurli hujayra yuzasiga yopishgan qolgan COM kristallari soni har bir quduq uchun kamida 15 tasodifiy maydondan hisoblangan.
Buyrak funktsiyasi uchun Cistanche
2.7. COM kristalini ichkilashtirish tahlili
Flüoresans bilan belgilangan MAQOMOTI kristallari ilgari ta'riflanganidek yaratilgan [36,37]. Kristallanish uchun ishlatiladigan kimyoviy moddalarning tarkibi/kontsentratsiyasi oddiy (yorliqlanmagan) kristallar uchun yuqorida aytib o'tilgandek edi, lekin 0,1 mkg/ml flüoresan izotiosiyanat (FITC) (Thermo Scientific Pierce; Rockford, IL) Na2C2O4 bilan aralashtirishdan oldin CaCl2⋅2H2O eritmasiga qo'shiladi. Keyingi bosqichlar (kristallanish va yig'ish) yuqorida aytib o'tilganidek amalga oshirildi, lekin qorong'uda.
Buyrak tubulali epiteliya hujayralariga kristall ichkiizatsiyasini baholash uchun MDCK hujayralari (2 × 105 hujayra / quduq zichligida) urug'lantirildi va 6-quduq plastinkasining (Corning Inc.) har bir qudug'ida 48 soat davomida o'stirildi. birlashgan monoqatlam. Hujayra monoqatlami FITC etiketli COM kristallari (1000 µg kristal/ml muhit) bilan namlangan inkubatorda 5% CO2 37 ◦C da 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Shundan so'ng, hujayralar PBS bilan yuvildi va ichki bo'lmagan (ham yopishgan, ham yopishmaydigan) kristallarni yo'q qilish uchun tripsin-EDTA eritmasi bilan inkubatsiya qilindi. Ichki kristallarga ega hujayralar foizi oqim sitometri (BD Accuri C6) (BD Biosciences; San-Xose, CA) yordamida jami 10 000 ta orttirilgan hodisadan hisoblangan. Oddiy (yorliqsiz) COM kristallari bilan inkubatsiya qilingan hujayralar shovqin va musbat floresan signalining chegarasini oldindan belgilash uchun ishlatilgan. Keyin musbat floresan signallari bo'lgan hujayralar hisoblandi va bunday foizni hisoblash uchun foydalanildi.
2.8. ECM tahlili orqali COM kristalining ishg'ol etilishi
COM kristallari yuqorida ta'riflanganidek, kristallarni yig'ish va kristal-hujayra yopishish tahlillari uchun tayyorlangan. Kristall bosqinchilik tahlili ilgari o'rnatilgan protokolga muvofiq amalga oshirildi [38,39]. Qisqacha aytganda, kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat), albumin (Sigma-Aldrich) (ijobiy nazorat) bilan qoplangan jami 20 mkg COM kristallari yokidiosmin(2,5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 yoki 160 nM) 200 ul MEMga qo'shildi. Keyinchalik, PBS tarkibidagi 200 ul 0,3 pM Lys-plazminogen (Fitzgerald Industries international; Acton, MA) aralashtirildi va kristall-oqsil kompleksi bilan 37 ◦C da 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Bog'lanmagan plazminogen 2000 g da 5 daqiqa davomida santrifüjlash yo'li bilan tashlandi va pellet bir marta PBS bilan yuvildi. Shundan so'ng, PBSdagi 100 ul 0,15 pM urokinaz plazminogen faollashtiruvchisi (uPA) (Fitzgerald Industries International) kristal-oqsil-plazminogen/plazmin kompleksi bilan aralashtirildi. Keyin aralash ECM migratsiya kamerasi ichidagi matritsa jelining ustiga qo'shildi va 37 ° C da inkubatsiya qilindi. 24-soatlik inkubatsiyadan so'ng, migratsiya kamerasining yuqori qismida qolgan eritma doka yoki qog'oz to'qimasi yordamida olib tashlandi. Matritsa jeli ichidagi ishg'ol qilingan MAQOMOTI kristallari so'ngra differentsial shovqin kontrasti (DIC) rejimi (Nikon H600L) bilan yorug'lik mikroskopi yordamida tasvirlangan. NIS Element D dasturiy ta'minot versiyasi 4.11 (Nikon) yordamida bir kameradagi kamida 15 ta kam quvvatli maydonlardan (LPF) kristall bostirib kirish masofasi o'lchandi va o'rtacha hisoblandi.
2.9. Statistik tahlil
Yuqoridagi barcha tajribalar uch nusxada (uchta mustaqil tajriba) amalga oshirildi va miqdoriy ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida xabar qilinadi. Tukeyning post-hoc testi bilan bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida bir nechta taqqoslashlar amalga oshirildi. O'zgaruvchilar o'rtasidagi bog'liqlikni aniqlash uchun Pearson korrelyatsiya testi o'tkazildi. Barcha statistik tahlillar SPSS dasturi (18-versiya) (IBM SPSS; Armonk, NY) yordamida amalga oshirildi. P qiymati 0.05 dan kichik boʻlsa, statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi.
3. Natijalar
3.1. Diosminning COM kristallanishiga ta'siri
Kristallanish asosiy bosqichlardan biridirbuyrakbarcha turdagi tosh shakllanishi jarayonlari. 1-soatlik kristallanishdan keyin yoki ularsizdiosminturli konsentratsiyalarda (2,5, 5, 10, 20, 40, 80 yoki 160 nM), COM kristalining o'lchami va soni o'lchandi va kristall massasi hisoblandi. Kristallanish buferi va suyultiruvchi DMSO mos ravishda bo'sh va salbiy nazorat sifatida xizmat qildi. Ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, disominning barcha dozalari (2,5-160 nM) kristal hajmini sezilarli darajada kamaytirdi, ammo bo'sh va salbiy nazorat bilan solishtirganda kristallar sonini dozaga bog'liq ravishda oshirdi (1A-1C-rasm). Kristal soniga mos ravishda kristall massasi dozaga qarab ortdi (1D-rasm). Umuman olganda, bu ma'lumotlar diosmin COM kristallanishini (neokristallar) rag'batlantirayotganini ko'rsatadi.
3.2. Diosminning COM kristalining o'sishiga ta'siri
Modulyatsiya effektidiosminCOM kristalining o'sishi neokristallar mavjud bo'lmaganda, dastlabki kristallanish bosqichi tugagandan so'ng 60-minutlik keyingi inkubatsiyadan so'ng kristal o'lchamidagi o'zgarishlarni (D Kristal hajmi) o'lchash yo'li bilan baholandi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, disominning barcha dozalari (2,5-160nM) bo'sh va salbiy nazorat bilan solishtirganda D kristall hajmini dozaga bog'liq ravishda sezilarli darajada kamaytirdi (2-rasm). Ushbu topilmalar diosmin COM kristalining o'sishini inhibe qilishini ko'rsatadi.
3.3. Diosminning COM kristalli birikmasiga ta'siri
Kristal o'sishiga qo'shimcha ravishda, bir-biriga mahkam yopishgan alohida kristallarni yig'ish ham muhim bosqichdir.buyraktosh patogenezi. Kristall agregatsiyasining yuqori darajasi oxir-oqibatda toshning kengayishiga va kichik buyrak naychalari lümeninin obstruktsiyasiga olib kelishi mumkin. Bo'sh va salbiy boshqaruv elementlari bilan solishtirish,diosmin10-160nM da COM kristall agregatlarining dozaga bog'liq ravishda ko'payishi (3-rasm). Ushbu natijalar diosminning COM kristalli agregatsiyasiga yordam berishini ko'rsatadi.
Buyrak funktsiyasi uchun Cistanche
3.4. Diosminning COM kristal-hujayra yopishishiga ta'siri
Qo'zg'atuvchi kristallarni ushlab turish hal qiluvchi qadamlardan biridirbuyraktosh hosil bo'lishi va kristallarning siydik chiqishi bilan birga chiqib ketishiga yo'l qo'ymaydigan kristall-hujayra yopishishi bilan qo'zg'atilishi mumkin. Shunday qilib, biz modulyatsiya faolligini baholadikdiosminCOM kristal-hujayra yopishish bo'yicha. Ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, 5-160 nM da diosmin bo'sh va salbiy nazorat bilan solishtirganda dozaga bog'liq ravishda buyrak quvur hujayralarida COM kristallarining yopishish qobiliyatini sezilarli darajada kamaytirdi (4-rasm). Ushbu ma'lumotlar diosminning COM kristalli hujayra yopishishini inhibe qilishini ko'rsatadi.
3.5. Diosminning COM kristalining buyrak quvurli hujayralariga kiritilishiga ta'siri
Adezyondan so'ng, ba'zi COM kristallari buyrak naycha hujayralariga kiritilishi va bir nechta keyingi hujayrali javoblarni keltirib chiqarishi mumkin [37,40]. Kristalni ichkilashtirish FITC etiketli COM kristallari yordamida baholandi va oqim sitometriyasi bilan miqdori aniqlandi. Oddiy MAQOMOTI kristallari (yorliqsiz) texnik shovqinni olib tashlash va floresans intensivligi FITC signalidan bo'lishini ta'minlash uchun ishlatilgan. Bo'sh va salbiy nazorat bilan solishtirganda, ichki kristalli hujayralar ulushi sezilarli darajada kamaydi.diosmindozaga bog'liq holda 10-160nM da (5-rasm). Topilmalar shuni ko'rsatadiki, disomin buyrak naychalari hujayralariga COM kristalining ichkilashuvini inhibe qiladi.
3.6. Diosminning ECM orqali COM kristall bostirib kirishiga ta'siri
ECM orqali kristall bostirib kirishi davomida patogen/buzg'unchi jarayondirbuyrakturli yallig'lanish reaktsiyalari va kaskadlarni qo'zg'atishi mumkin bo'lgan tosh patogenezi, shu bilan kasallikning mexanizmlarini yomonlashtiradi. Biz ushbu hodisani kristall-oqsil kompleksining plazminogen-plazmin faolligiga asoslangan belgilangan protokol yordamida tekshirdik [38,39]. Natijalar shuni ko'rsatdiki, disominning barcha dozalari (2,5-160nM) dozaga bog'liq bo'lgan tarzda ECM orqali COM kristalli bosqinini sezilarli darajada oshirdi (6-rasm). Qizig'i shundaki,diosmin160 nM da COM kristall invaziyasini albumin bilan solishtirish mumkin bo'lgan, bu COM kristall bosqinining ma'lum kuchli promouteri [41] (6-rasm). Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, diosmin ECM orqali COM kristallarining kirib kelishiga kuchli yordam beradi.
1-rasm. ta'siridiosminCOM kristallanishi haqida. Kristallanish tahlili teng hajmda (4ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yoki diosmin (2,5-160nM) bilan amalga oshirildi. (A): 1- soat kristallanishdan keyingi har bir holatda kristall morfologiyasi. Asl kattalashtirish barcha panellar uchun 400 × edi. (B): Kristal o'lchami. (C): Kristal raqami. (D): Kristal massasi ("Materiallar va usullar" bo'limidagi Formula 1ga qarang) 15 HPFda kamida 100 ta kristaldan tahlil qilindi. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *=b< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" dmso.="">
2-rasm. ning ta'siridiosminCOM kristalining o'sishi bo'yicha. Kristallanish o'sishi tahlili kristallanish tugallangandan so'ng (neokristallanishni oldini olish uchun) teng hajmda (4ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yoki diosmin (2,5–160nM) bilan amalga oshirildi. (A): T0 va T60 da har bir holatda kristall morfologiyasi. Asl kattalashtirish barcha panellar uchun 400 × edi. (B)-(J): Har bir guruhda T0 va T60 da alohida kristallardan o'lchangan kristall o'lchamlari gistogrammasi. (K): D kristall o'lchami ("Materiallar va usullar" bo'limidagi 2-formulaga qarang) 15 HPFda kamida 100 ta kristaldan tahlil qilindi. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *= p < 0,05="" va="" bo'sh="" nazorat;="" #="p">< 0,05="" va="">
3-rasm. ning ta'siridiosminCOM kristallarini yig'ish bo'yicha. Kristal agregatsiyasi tahlili teng hajmda (4ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yoki diosmin (2,5-160nM) bilan amalga oshirildi. (A): Yig'ilgan COM kristallarining mikrograflari (nuqtali doiralar bilan belgilangan). Asl kattalashtirish barcha panellar uchun 400 × edi. (B): Kristal agregatlar soni har bir quduqdagi kamida 15 tasodifiy HPF dan hisoblangan. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *=p< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="" dmso.="">
4-rasm. ning ta'siridiosminCOM kristal-hujayra yopishish bo'yicha. Kristal-hujayraga yopishish tahlili teng hajmda (4ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yoki diosmin (2,5-160nM) bilan amalga oshirildi. (A): PBS bilan kuchli yuvish orqali bog'lanmagan kristallarni olib tashlagandan so'ng, hujayra monoqatlamiga mahkam yopishgan qolgan kristallarning mikrografikasi. Asl kattalashtirish barcha panellar uchun 200 × edi. (B): Birlashtirilgan kristallar soni har bir quduqdagi kamida 15 tasodifiy maydondan hisoblangan. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *= b<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p"><0.05 vs.="">
5-rasm. ning ta'siridiosminBuyrak tubulali hujayralariga COM kristallarini ichkilashtirish bo'yicha. Kristalni ichkilashtirish tahlili FITC etiketli COM kristallari (FITC-COM) yordamida amalga oshirildi, oddiy (yorliqlanmagan) COM kristallari esa fon/shovqinni olib tashlash uchun ishlatilgan. Tahlil teng hajmda (4ul) kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat) yoki diosmin (2,5–160nM) bilan amalga oshirildi. (A): 0,1 foiz tripsin/2,5 mM EDTA bilan ichkilashtirilmagan kristallarni olib tashlagandan so'ng hujayralar hajmini (y-o'qi) va FITC-flüoresans intensivligini (x-o'qi) oqim sitometrik nuqta-syujet tahlili. (B): Ichki FITC etiketli COM kristallari bo'lgan hujayralar ulushi. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *= b<0.05 vs.="" fitc-com="" +="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" fitc-com="" +="" dmso.="">
6-rasm. ning ta'siridiosminECM orqali MAQOMOTI kristalli bostirib kirishda. ECM tahlili orqali kristall bostirib kirish kristallanish buferi (bo'sh nazorat), DMSO (salbiy nazorat), albumin (ijobiy nazorat) yoki diosmin (2,5-160nM) bilan qoplangan COM kristallari yordamida amalga oshirildi. (A): ECM migratsiya kamerasi orqali bosib olingan yoki ko'chib o'tgan MAQOMOTI kristallarining mikrograflari. Asl kattalashtirish barcha panellar uchun 100 × edi. (B): Kristallni bosib olish masofasi har bir kamerada kamida 15 tasodifiy LPFdan o'lchandi. Har bir satr 3 ta mustaqil tajribadan olingan ma'lumotlarning o'rtacha ± SEM ni ifodalaydi. *= b<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="">
4. Munozara
Buyrak tosh kasalligi uning ichida tosh hosil bo'lishidan kelib chiqadibuyrakva pelvokalitsial tizim. Buyrak toshlarining paydo bo'lishining keng tarqalgan jarayonlariga COM kristallanishi, o'sishi, agregatsiyasi, kristal-hujayra yopishishi bilan tutilishi va ECMga boy buyrak oraliqlari orqali kirib borish kiradi [21,22]. Turli xil dori-darmonlar va/yoki ozuqaviy qo'shimchalar yordamida ushbu kasallikning oldini olish uchun bir nechta urinishlar mavjud. So'nggi dalillarning ko'pchiligi flavonoidlar, flavon glikozidlari va tsitrus mevalaridan olingan boshqa birikmalar buyrak tosh kasalligi va boshqa kasalliklarga profilaktik ta'sir ko'rsatishi mumkinligi haqida xabar berdi [23-25]. Bular orasida,diosmin, asosan tsitrus mevalarida topilgan tabiiy flavon glikozid va gesperidin hosilasi [1,2] jarohati va shikastlanishiga qarshi profilaktik rol o'ynashi taklif qilingan.buyrakto'qima [13,42]. Bundan tashqari, uning urolitiyozga qarshi roli hayvonlar modellaridan foydalangan holda bir necha oldingi tadqiqotlarda xabar qilingan [26,27]. Shunga qaramay, buyrak toshlarining oldini olishda diosminning foydali ta'siri va asosiy mexanizmlari noaniq bo'lib qoldi. Shunday qilib, biz COM kristallaridagi diosminning modulyatsiya faolligini ko'rib chiqdik. COMning turli bosqichlarida tizimli tahlillar o'tkazildibuyraktosh shakllanishi, shu jumladan kristallanish, kristall o'sishi, agregatsiya, kristal-hujayra yopishishi, buyrak quvurli hujayralariga ichkiizatsiya va ECM orqali bostirib kirish.
Og'iz orqali qabul qilingandan keyindiosmin, odamlarda uning plazma darajasi {0}},5 dan 200ng/ml (yoki 0,8-300nM) gacha [43,44]. Maksimal plazma kontsentratsiyasi (Cmax) taxminan 50ng/ml (yoki 85nM) [43,44]. Shu sababli, bizning tadqiqotimizda ishlatilgan diosmin dozalari (2,5-160 nM) uning farmakokinetikasi uchun farmakologik jihatdan tegishli diapazonda edi. DMSO tavsiya bo'yicha diosminni to'liq eritish uchun suyultiruvchi sifatida ishlatilganligi sababli, DMSO ma'lumotlarni sharhlashga xalaqit beradigan suyultiruvchining o'zidan hech qanday ta'sir yo'qligiga ishonch hosil qilish uchun bo'sh nazoratga qo'shimcha ravishda ushbu tadqiqotda salbiy nazorat sifatida ishlatilgan. Barcha tahlillarda ma'lumotlar DMSO dan sezilarli ta'sirlar kuzatilmaganligini va salbiy nazoratdan olingan barcha miqdoriy ma'lumotlar bo'sh nazorat bilan solishtirish mumkinligini ko'rsatdi.
COM kristallanish tahlili shuni ko'rsatdiki, barcha kontsentratsiyalardiosmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 va 160nM) COM kristall hajmini kamaytirishi mumkin, lekin boshqa tomondan, kristallar sonini ko'paytiradi. Kristal massasi kristall hajmi va sonining yakuniy mahsuloti bo'lganligi sababli va MAQOMOTI kristallanish darajasini aks ettirish uchun ko'proq mos keladi, keyin biz diosminning ushbu kristall indeksiga ta'sir qilganligini baholadik. Ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, diosminning barcha kontsentratsiyasi kristall soni haqidagi ma'lumotlarga mos keladigan COM kristall massasiga rag'batlantiruvchi ta'sir ko'rsatdi. Kristallanishdan so'ng, MAQOMOTI kristallari keyingi bosqich uchun kattaroq hajmgacha o'sishi mumkinbuyraktosh shakllanishi.
Kristallanishdan farqli o'laroq, barcha konsentratsiyalarda diosmin dozaga bog'liq holda COM kristalining o'sishiga inhibitiv ta'sir ko'rsatdi. Oldingi ba'zi tadqiqotlar CaOx kristallarining eruvchanligini glikozillanish bilan gidroksiantrakinonlar hosilalari yordamida oshirish mumkinligini xabar qildi [45]. Bundan tashqari, bunday bioaktiv birikmalarda shakar mavjudligi, ehtimol molekulyar tuzilishdagi gidroksil guruhlari tufayli erkin kaltsiy ioni bilan bog'lanishi mumkin va shu bilan CaOx kristallarining shakllanishiga to'sqinlik qiladi [45,46]. Diosmin, shuningdek, ushbu mexanizm asosida COM kristallanish jarayonida erigan kaltsiy va oksalat ionlarining buyrak quvur suyuqligidagi COM kristalli zarrachalariga o'tishiga ta'sir qilishi mumkin.
Shunga qaramay, COM kristallarining yig'ilishi 10-160 nM tomonidan targ'ib qilindidiosmin, diosminning kristall agregatlarini hosil qilish uchun alohida kristallarni bir-biriga bog'lash uchun biriktiruvchi yoki yopishtiruvchi molekula sifatida harakat qilish qobiliyatini nazarda tutadi. Ushbu bog'lanish, shuningdek, alohida kristallar orasidagi yopishtiruvchi ko'priklarning rivojlanishiga olib keladi va COM kristallarining katta strukturasini shakllantirishga olib kelishi mumkin, bu esa tosh nidusning ichida osongina cho'ktirishga yordam beradi.buyrak[32].
Buyrak naychalari hujayralari yuzasida kristallarning yopishishi orqali COM kristallarini ushlab turish buyrak toshlarini shakllantirishning yana bir muhim bosqichi sifatida aniqlandi [47]. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, diosmin COM kristallarining MDCK buyrak quvur hujayralarining apikal sirtlari bilan bog'lanish uchun yopishqoq qobiliyatini kamaytirishi mumkin. Ba'zi bir oldingi tadqiqotlar CaOx kristallari bilan qoplangan yoki buyrak quvur hujayralarida ifodalangan glikozaminoglikanlar (polisaxarid birikmalari) CaOx kristallarining buyrak naycha hujayralariga yopishish qobiliyatiga xalaqit berishi mumkinligini ko'rsatdi [48]. Bundan tashqari, kristall retseptorlarining buyrak quvurli hujayralarida ifodalanishi kristal-hujayra yopishishini belgilovchi hal qiluvchi mexanizmlardan biridir [21]. CaOx kristallari apikal membranalarning, xususan, mikrovillilarning shikastlanishiga olib kelgan bo'lsa-da, epigallokatexin gallat (EGCG) kabi ba'zi polifenollar kristalli hujayra yopishishi va hujayra shikastlanishining oldini oladi [49]. Bundan tashqari, turli xil o'simlik ekstraktlaridagi flavonoid moddasi siydik pH darajasini oshirib, kristall hujayra yopishishini inhibe qilishga olib kelishi haqida xabar berilgan [50,51]. Balki,diosminBundan tashqari, COM tomonidan qo'zg'atilgan bunday hujayra shikastlanishini susaytirishi va shu bilan kristall hujayra yopishishini kamaytirishi mumkin.
COM kristalining ichkilashuvi asosan aktin sitoskeleti vositachiligidagi makropinotsitoz yo'li orqali endotsitoz orqali paydo bo'lishi ko'rsatilgan [40]. Quercetin kabi flavonoidlar makropinositoz uchun zarur bo'lgan aktin sitoskeletoniga ta'sir qilishi haqida xabar berilgan [52,53]. Bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatdiki, diosmin MDCK hujayralarining COM kristallarini o'zlashtirish qobiliyatini sezilarli darajada kamaytirdi. Diosminning bunday inhibitiv ta'siri makropinotsitoz yo'liga to'g'ridan-to'g'ri ta'sir qiluvchi hujayralar ichidagi aktin sitoskeletini yig'ish yoki tashkil etish bilan bog'liq bo'lishi mumkin [54,55].
Ichkilashtirishdan so'ng, COM kristallari endolizosomalar tomonidan parchalanib, buyrak interstitsialida erkin kaltsiy va oksalat ionlarining ko'payishiga olib keldi [37]. Kaltsiy va oksalat ionlarining bunday ko'payishi buyrak interstitsialida COM neokristalizatsiyasiga olib kelishi mumkin [56,57]. Bundan tashqari, interstitsial COM kristallarining mavjudligi qattiq birikma va paracellular adezyon to'siqlari nuqsonlari bo'lishi mumkin, buning natijasida paracellular o'tkazuvchanligi va kristall translokatsiyasi kuchayadi [58-60]. Keyinchalik bu kristallar ECM orqali buyrak interstitiumiga kirib borishi va keyinchalik bir nechta yallig'lanish reaktsiyasi va to'qimalarning shikastlanishiga olib kelishi mumkin [58-60]. Ushbu tadqiqotda biz ECM migratsiya kamerasi orqali COM kristallarining ishg'ol etilishi diosminning barcha kontsentratsiyasi tomonidan qo'zg'atilganligini kuzatdik. Diosmin COM kristall sirtlari bilan bog'lanishi va ECM migratsiya kamerasida kristall migratsiyasini boshqargan plazminogen-plazmin tizimi bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkin [38,39].
Buyrak uchun Cistanche
ChunkidiosminCOM tosh hosil bo'lishining turli jarayonlariga ham inhibe qiluvchi, ham rag'batlantiruvchi ta'sir ko'rsatdi, shuning uchun biz Pearson korrelyatsiya testi yordamida ularning munosabatlarini aniqladik. Korrelyatsiya tahlili shuni ko'rsatdiki, kristall soni ham kristal o'lchami, ham kristall o'sishi (D Kristal o'lchami) bilan teskari bog'liqdir (7A va B-rasm). Kristal o'lchami kristall o'sishi bilan kuchli bog'liq (7C-rasm), lekin kristall massasi bilan teskari bog'liq (7D-rasm). Nihoyat, kristall massasi ham kristall soni, ham kristal agregatsiyasi bilan kuchli korrelyatsiya qildi (7E va F-rasm). Korrelyatsiya tahlilidan ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, kristall soni va kristall massasi kristallanishni aks ettirish uchun kristall hajmiga qaraganda ko'proq mos keladi (7A, D va E-rasm). Bundan tashqari, kristallanish jarayonida neokristallarning o'lchami oldindan hosil bo'lgan kristallarning o'sishi bilan bog'liq (7C-rasm), kristallanish darajasi (kristal soni va kristall massasi bilan aks ettirilgan) kristall agregatsiya darajasi bilan chambarchas bog'liq (7E-rasm va F). Biroq, bu korrelyatsiyalar, ehtimol, diosmin ta'siriga xosdir, boshqa modulyatorlarning ta'siri esa bir xil korrelyatsiyaga ega bo'lishi mumkin yoki bo'lmasligi mumkin. Misol uchun, fibronektin kristall massasini pasaytiradi va kristallarning o'sishini inhibe qiladi, lekin kristall agregatsiyasini rag'batlantiradi [31]. Bundan tashqari, buzilmagan yashovchan Escherichia coli kristall hajmi va massasini oshiradi, lekin kristall soniga ta'sir qilmaydi [33]. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, turli xil COM kristalli tahlillari o'rtasidagi korrelyatsiya barcha modulyatorlar uchun universal emas.
Va nihoyat, biz turli xil tahlillardan olingan natijalarni umumlashtirdik va ularni patogen mexanizmlar bilan birlashtirdik.buyraktosh kasalligi (8-rasmdagi sxemalarga qarang). Korrelyatsiya tahlilidan diosmin kristallanishni rag'batlantiradi (8A-rasm). Kristallanish va kristall o'sishi o'rtasida,diosminkristallanishni rag'batlantirish orqali quduq muvozanatini saqlaydi, lekin boshqa tomondan, kristall o'sishini inhibe qiladi (8B-rasm). Faqatgina COM kristallariga ta'sir qiladigan barcha ta'sirlarga kelsak (hujayralar va ECMni ham hisobga olmagan holda), diosminning rag'batlantiruvchi faolligi COM kristallari ustidagi inhibe qiluvchi faolligidan ko'ra muhimroqdir, chunki u kristallanishni ham, kristall agregatsiyasini ham rag'batlantiradi, lekin faqat kristal o'sishini inhibe qiladi ( 8C-rasm). Kristallanish kuchaygan bo'lsa-da, kristall hajmi kamayadi va o'sishni inhibe qilish bilan bog'liq (7C-rasm). Ushbu ma'lumotlar Kavanagh va boshqalar tomonidan e'lon qilingan natijalarga mos keladi. [61-63], kristallanishning kuchayishi eritmadagi kaltsiy va oksalat ionlarining o'ta to'yinganligini pasayishiga olib keladi va shu bilan o'sishni kamaytiradi. Biroq, kristallarning o'sishi uni belgilovchi yagona omil emasbuyraktosh patogenezi [64], ayniqsa kristall massasi ko'payib ketganda va kristall agregatsiyasining kuchayishi bilan bog'liq bo'lsa (7F-rasm), bu kristall materiallarning kichik quvurli segmentlarga (intratubulyar gipotezada) yopishib qolish ehtimolini oshirishi mumkin va shu bilan kuchayadi. tosh shakllanishi ehtimoli. Bundan tashqari, oldingi tadqiqot bizning topilmalarimiz bilan mos keladigan ma'lumotlarni ko'rsatdi, bu kristallar sonining ko'payishi kristallarning yig'ilishi va toshning kengayishi bilan bog'liqligini ko'rsatdi [63].
7-rasm. Korrelyatsiya tahlili. (A) – (F): COM kristall soni, kristall o'lchami, D kristall o'lchami, kristall massasi va bir qator kristall agregatlar o'rtasidagi korrelyatsiya Pearson korrelyatsiya testi bilan tahlil qilindi..
8-rasm. ning modulyatsiya effektlarini umumlashtiruvchi sxemalardiosminCOM dabuyraktosh shakllanishi jarayonlari. (A): Diosminning COM kristallanishiga ta'siri. (B): Diosminning COM kristallanishiga va kristall o'sishiga ta'siri. (C): Diosminning COM kristallanishi, o'sishi va agregatsiyasiga ta'siri. (D): Diosminning butun COM buyrak toshlarini shakllantirish jarayonlariga ta'siri.
Buyrak tubulyar hujayralari va ECM bilan o'zaro ta'siri hisobga olinsa, ikki tomonlama ta'sirning global suratidiosminCOM buyrak tosh shakllanishi bo'yicha ancha aniq bo'ladi (Fig. 8D). Diosmin kristall-hujayralarning yopishishini inhibe qiladi va shu bilan kristallning hujayralarga kirishini kamaytiradi. Buni izohlash mumkinki, COM kristallarining kichik o'lchamlari, bizning yaqinda o'tkazilgan tadqiqotimizda [34] va boshqa guruh tomonidan o'tkazilgan oldingi tadqiqotda [65] xabar qilinganidek, kattaroq bo'lganlarga qaraganda, buyrak naycha hujayralarini bog'lash uchun kamroq yopishqoqlik qobiliyatiga ega. Kichikroq COM kristallarining kamroq yopishish qobiliyati ularning hujayra yuzasiga kamroq yopishtiruvchi kuchi va ular bilan bog'langan COM kristalli retseptorlari sonining kamroqligi bilan bog'liq bo'lib, ular mos ravishda atom kuchi mikroskopiyasi va proteom tahlili bilan aniqlanadi [34]. Diosmin, shuningdek, kristallarning ichki tuzilishini inhibe qiladi. E'tibor bering, ichkilashtirish jarayoni ehtiyotkorlik bilan talqin qilinishi kerak bo'lgan ikki qirrali qilichdir. Hujayralar endolizosomalar tomonidan kristallarni yo'q qilish uchun foydalanadigan himoya mexanizmlaridan birida ichkiizatsiya yoki endotsitoz. Shu bilan birga, buzilmagan kristallarning parchalanishi hujayra ichidagi bo'limdan buyrak interstitiumiga o'tishi mumkin bo'lgan erkin kaltsiy va oksalat ionlarini hosil qiladi, bu erda ular neokristallarni hosil qilishi mumkin [56,57]. Boshqa tomondan, diosmin buyrak toshlarining patogenezi uchun muhim mexanizmlardan biri bo'lgan (ayniqsa, Randall blyashka modelida) ECM orqali kristall invaziyasiga yordam beradi [58-60]. Umuman olganda, 8D-rasmda diosminning MAQOMOTI ga barcha dual modulyator ta'siri jamlanganbuyraktosh shakllanishi jarayonlari. Shuni ta'kidlash kerakki, ushbu rag'batlantiruvchi va inhibe qiluvchi ta'sirlarning muvozanatini aniq hisoblash mumkin emas (matematik tenglamadan farqli o'laroq). Bundan tashqari, tosh hosil bo'lish jarayonlariga aralashishi mumkin bo'lgan bir qator boshqa endogen va ekzogen omillar ham mavjud. Va nihoyat, diosmin buyrak toshlarining shakllanishiga bir qancha bilvosita ta'sir ko'rsatadi, jumladan, uning antioksidant va yallig'lanishga qarshi xususiyatlarini [5,6] hisobga olish kerak. Shuning uchun, bu dual modulatory ta'siri yakuniy natijasidiosminCOM dabuyraktosh hosil bo'lishi in vivo jonli tadqiqot va katta kohort istiqbolli tadqiqotiga muhtoj.
5. Xulosalar
Xulosa qilib aytganda, biz bu erda diosminning dozaga bog'liq holda COM kristalli modulyatsiyasiga ikki tomonlama ta'siri haqida xabar beramiz. U COM kristalining o'sishini, kristalli hujayralar yopishishini va buyrak naychalari hujayralariga kirishini inhibe qiladi.diosminECM orqali MAQOMOTI kristallanishi, agregatsiyasi va bostirib kirishiga yordam beradi. Shuning uchun uning urolitiyozga qarshi roli shubhali va buyrak tosh kasalligida foydalanish uchun ehtiyot bo'lish kerak.
CRediT mualliflik hissasi bayonoti
Supaporn Khamchun: Konseptualizatsiya, Metodologiya, Dasturiy ta'minot, Validatsiya, Rasmiy tahlil, Tekshiruv, Ma'lumotlar kuratsiyasi, Yozish - original qoralama, Vizualizatsiya, Sunisa Yoodee: Konseptualizatsiya, Metodologiya, Dasturiy ta'minot, Validatsiya, Rasmiy tahlil, Tekshiruv, Ma'lumotlar kuratsiyasi, Yozish - original loyiha, Vizualizatsiya, Thongboonkerdga tashrif buyuring: kontseptsiya, metodologiya, dasturiy ta'minot, tasdiqlash, manbalar, yozish - ko'rib chiqish va tahrirlash, nazorat, loyihani boshqarish, moliyalashtirish.
Manfaatlar to'qnashuvi bayonoti
Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qiladilar.
Minnatdorchilik
Biz Kittiya Suwannakudning texnik yordami uchun minnatdormiz. Ushbu ish PMU-B va Tailand tadqiqot jamg'armasi (IRN60W0004) orqali Milliy Oliy Ta'lim Ilmiy tadqiqotlar va innovatsion siyosat kengashi (NXPO) tomonidan qo'llab-quvvatlandi. VT, shuningdek, Siriraj kasalxonasi tibbiyot fakulteti "Chalermphrakiat" granti tomonidan qo'llab-quvvatlanadi.
Ma'lumotnomalar
[1] A. Bogucka-Kocka, M. Voznyak, M. Feldo, J. Kockich, K. Shevchik,Diosmin- izolyatsiyalash usullari, o'simlik materiallari va farmatsevtika formulalarida aniqlash va klinik foydalanish, Nat. Prod. Kommun. 8 (2013) 545–550.
[2] Y. Zheng, R. Zhang, W. Shi, L. Li, H. Liu, Z. Chen, L. Wu, Metabolizm va tabiiy sog'liq uchun foydali birikma diosminning farmakologik faoliyati, Oziq-ovqat funktsiyasi. 11 (2020) 8472–8492.
[3] MR Sezarone, G. Belkaro, L. Pellegrini, A. Ledda, G. Vinsigerra, A. Ricci, A. Di Renzo, I. Ruffini, G. Gizzi, E. Ippolito, F. Fano, M. Dugall , G. Acerbi, U. Kornelli, M. Xosoi, M. Kakkio, Venoruton vs Daflon: surunkali venoz etishmovchilikda hayot sifatiga ta'sirini baholash, Angiologiya 57 (2006) 131-138.
[4] KA Lyseng-Williamson, CM Perry, Mikronlashtirilgan tozalangan flavonoid fraktsiyasi: surunkali venoz etishmovchilik, venoz yaralar va gemorroyda qo'llanilishini ko'rib chiqish, Dorilar 63 (2003) 71-100.
[5] AS Shalkami, M. Hassan, AG Bakr, Yallig'lanishga qarshi, sirka kislotasi keltirib chiqaradigan yarali kolitda diosminning antioksidant va antiapoptotik faolligi, Hum. Exp. Toksikol. 37 (2018) 78–86.
[6] M. Berkoz, Diosmin NF-kappaB va MAPK signal yo'llari, Gen. Physiol orqali lipopolisakkaridlar keltirib chiqaradigan RAW264.7 makrofaglarida proinflamatuar vositachilarni bostiradi. Biofizika. 38 (2019) 315–324.
[7] M. Rajasekar, K. Suresh, K. Sivakumar, Diosmin 7,12 dimetilbenz (a) antrasen induktsiyasi bilan bogʻliq boʻgʻoz karsinogenezi, Biomedda STAT{1}} signalizatsiyasini modulyatsiya qilish orqali apoptozni keltirib chiqaradi. Farm. 83 (2016) 1064–1070.
[8] A. Lewinska, J. Adamczyk-Grochala, E. Kwasniewicz, A. Deregowska, M. Wnuk, Diosmin tomonidan qo'zg'atilgan qarish, apoptoz va turli xil p53 holati va ERK faolligi ko'krak saratoni hujayralarida autofagiya, Toksikol. Lett. 265 (2017) 117–130.
[9] AC Pushkaran, V. Vinod, M. Vanuopadath, SS Nair, SV Nair, AK Vasudevan, R. Biswas, CG Mohan, amoksitsillin-klavulan kislotasi bilan repurposed dori diosmin birikmasi mikobakteriyalarning o'sishini sinergetik inhibe qiladi, Sci. Rep. 9 (2019) 6800.
[10] CC Hsu, MH Lin, JT Cheng, MC Wu, sitrus flavonoidi bo'lgan diosminning antihiperglisemik ta'siri I-toifa diabetik kalamushlarda endogen beta-endorfin orqali qo'zg'atiladi, Clin. Exp. Farm. Fiziol. 44 (2017) 549–555.
[11] O. Senthamizhselvan, J. Manivannan, T. Silambarasan, B. Raja,DiosminOldindan davolash yurak faoliyatini yaxshilaydi va ishemiya/reperfuziyadan keyin kalamush qalbida oksidlovchi stressni bostiradi, Eur. J. Pharm. 736 (2014) 131–137.
[12] N. Tong, Z. Zhang, Y. Gong, L. Yin, X. Vu, Diosmin kalamush retinani ishemiya / reperfuzion shikastlanishdan himoya qiladi, J. Ocul. Farm. U erda. 28 (2012) 459–466.
[13] AE Elhelaly, G. AlBasher, S. Alfarraj, R. Almeer, EI Bahbah, MMA Fouda, SG Bungau, L. Aleya, MM Abdel-Daim, gesperidin va diosminning akrilamiddan kelib chiqqan jigar, buyraklarga qarshi himoya ta'siri, va kalamushlarda miya oksidlovchi zarar, Environ. Sci. Ifloslanish. Res. Int. 26 (2019) 35151–35162.
[14] C. Thongprayoon, AE Krambeck, AD qoidasi, haqiqiy yukni aniqlashbuyraktosh kasalligi, Nat. Ruhoniy Nefrol. 16 (2020) 736–746.
[15] K. Bishop, T. Momah, J. Ricks, Nephrolithiasis, Prim. Xizmat 47 (2020) 661–671.
[16] A. Viljoen, R. Chaudhry, J. Bycroft, Renal toshlar, Ann. Klin. Biochem 56 (2019) 15–27.
[17] PM Ferraro, R. Marano, A. Primiano, J. Gervasoni, M. Bargagli, G. Rovere, PF Bassi, G. Gambaro, nefrolitiazli bemorlarda tosh tarkibi va qon tomirlarining kalsifikatsiyasi, J. Nephrol. 32 (2019) 589–594.
[18] G. Shubert, Tosh tahlili, Urol. Res. 34 (2006) 146–150.
[19] A. Vinaiphat, S. Aluksanasuwan, J. Manissorn, S. Sutthimethakorn, V. Thongboonkerd, Buyrak naycha hujayralarining kaltsiy oksalat kristallarining differensial turlari va dozalariga javobi: integrativ proteom tarmog'i tahlili va funktsional tadqiqotlar (Proteomika 1717) ), 1700192.
[20] P. Peerapen, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Protein tarmog'ini tahlil qilish va buyrak tubulali epiteliya hujayralarida kaltsiy oksalat kristallari tomonidan qo'zg'atilgan sitotoksiklikning funktsional tadqiqotlari, Proteomiks 18 (2018), 1800008.
[21] KP Aggarval, S. Narula, M. Kakkar, C. Tandon, Nefrolitiyoz: buyrak tosh shakllanishining molekulyar mexanizmi va modulyatorlar tomonidan o'ynagan muhim rol, Biomed. Res. Int. 2013 yil (2013 yil), 292953 yil.
[22] VN Ratkalkar, JG Kleinman, Tosh hosil bo'lish mexanizmlari, Clin. Rev. Suyak konchisi. Metab. 9 (2011) 187–197.
[23] X. Zeng, Y. Xi, V. Jiang, flavonoidlar va flavonoidlarga boy o'simlik ekstraktlarining urolitiyozga qarshi himoya rollari: sharh, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 59 (2019) 2125–2135.
[24] MC Nirumand, M. Hajialyani, R. Rahimi, MH Farzaei, S. Zingue, SM Nabavi, A. Bishayee, oldini olish va boshqarish uchun parhez o'simliklaribuyraktoshlar: preklinik va klinik dalillar va molekulyar mexanizmlar, Int. J. Mol. Sci. 19 (2018) 765.
[25] S. Ahmad, MM Hasan, H. Khan, ZA Mahmood, S. Patel, The mechanistic insight of polifenols in kaltsiy oksalat urolithiasis yumshatish, Biomed. Farm. 106 (2018) 1292–1299.
[26] VV Prabhu, D. Sathyamurthy, A. Ramasamy, S. Das, M. Anuradha, S. Pachiappan, eksperimental kalamushlarda kimyoviy sabab bo'lgan urolitiyozda diosminning (sitrus flavonoidi) himoya ta'sirini baholash, Pharm. Biol. 54 (2016) 1513–1521.
[27] A. Nurafshon, S. Karbalay-Doust, F. Karimi,Diosminkalamushlarda nefrolitiazda kaltsiy oksalat cho'kmasini va to'qimalarning degeneratsiyasini kamaytiradi: stereologik tadqiqot, Koreyalik J. Urol. 54 (2013) 252–257.
[28] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Chutipongtanate, Kaltsiy oksalat kristallarining turlari va morfologiyalarini belgilovchi omillar: molyar konsentratsiyalar, buferlash, pH, aralashtirish va harorat, Clin. Chim. Acta 367 (2006) 120–131.
[29] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Sinchaikul, ST Chen, distal buyrak tubulyar hujayralarida kaltsiy oksalat monohidrat kristalidan kelib chiqqan sitotoksiklikning proteomik tahlili, J. Proteome Res. 7 (2008) 4689–4700.
[30] P. Amimanan, R. Tavichakorntrakool, K. Fong-ngern, P. Sribenjalux, A. Lulitanond, V. Prasongwatana, C. Vongkham, P. Boonsiri, WJ Umka, V. Thongboonkerd, Escherichia coli bo'yicha cho'zilish omili Tu Buyrak toshlari bilan og'rigan bemorlarning siydigidan ajratilgan kaltsiy oksalat kristalining o'sishi va to'planishiga yordam beradi, Sci. 7 vakil (2017) 2953.
[31] S. Khamchun, K. Sueksakit, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, fibronektinning kaltsiy oksalat kristallanishi, o'sishi, agregatsiyasi, buyrak tubulyar hujayralariga yopishishi va hujayradan tashqari matritsa orqali bostirib kirishiga modulyatsion ta'siri, J. Biol. Inorg. Kimyo. 24 (2019) 235–246.
[32] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Kaltsiy oksalat kristalining yig'ilish darajasini baholash uchun agregatsiya indekslarini aniqlash va tizimli tahlil qilish, Front. Kimyo. 5 (2017) 113.
[33] R. Kanlaya, O. Naruepantawart, V. Thongboonkerd, Flagellum yashovchan Escherichia coli ning kaltsiy oksalat kristallanishiga, kristall o'sishiga va kristall agregatsiyasiga ta'sirini targ'ib qilish uchun javobgardir, Front. Microbiol 10 (2019) 2507.
[34] P. Peerapen, V. Thongboonkerd, turli o'lchamdagi kaltsiy oksalat monohidrat kristallarining differentsial bog'langan oqsillari va yopishtiruvchi qobiliyatlari, Int. J. Biol. Makromol. 163 (2020) 2210–2223.
[35] K. Fong-ngern, K. Sueksakit, V. Thongboonkerd, Yuzaki issiqlik zarbasi oqsili 90 buyrak tubulyar epiteliya hujayralarining apikal membranasida kaltsiy oksalat kristali uchun potentsial retseptor bo'lib xizmat qiladi, J. Biol. Inorg. Kimyo. 21 (2016) 463–474.
[36] S. Chaiyarit, S. Mungdee, V. Thongboonkerd, Kristal-hujayra o'zaro ta'siri va ichkilashtirishni o'rganish uchun kaltsiy oksalat kristallarining radioaktiv bo'lmagan belgilari, Anal. 2-usul (2010) 1536–1541.
[37] S. Chaiyarit, N. Singhto, V. Thongboonkerd, buyrak quvur hujayralari ichiga ichki kaltsiy oksalat monohidrat kristallari degradatsiyaga uchraydi va endolizosomalar tomonidan eritiladi, Chem. Biol. O'zaro ta'sir qilish. 246 (2016) 30–35.
[38] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, Plazminogen/plazmin faolligiga asoslangan hujayradan tashqari matritsa orqali kaltsiy oksalat kristalining invaziyasiga oqsillarning targ'ib qiluvchi ta'sirini baholash uchun yangi tahlil, Talanta 101 (2012) 240-245.
[39] V. Chiangjong, V. Thongboonkerd, Kaltsiy oksalat kristallari buyrak kanali hujayralaridan enolaza{1}} sekretsiyasini oshirdi, bu esa keyinchalik buyrak interstitiumi orqali kristall va monotsitlar invaziyasini kuchaytirdi, Sci. 6 vakil (2016) 24064.
[40] R. Kanlaya, K. Sintiprungrat, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Makropinositoz kaltsiy oksalat kristallarining buyrak quvur hujayralariga, Cell Biochem endositozining asosiy mexanizmidir. Biofizika. 67 (2013) 1171–1179.
[41] S. Sassanarakkit, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, StoneMod: ma'lumotlar bazasibuyrakEksperimental dalillar bilan tosh modulyatsiya qiluvchi oqsillar, Sci. 10 vakil (2020) 15109.
[42] G. Eraslan, ZS Sarica, LC Bayram, MY Tekeli, M. Kanbur, M. Karabacak, Diosminning aflatoksin bilan bog'liq jigar va buyrak shikastlanishiga ta'siri, Environ. Sci. Ifloslanish. Res. Int. 24 (2017) 27931–27941.
[43] R. Russo, D. Chandradhara, N. De Tommasi, ikkisining qiyosiy bioavailabilitydiosminsog'lom ko'ngillilarga og'iz orqali yuborishdan keyin formulalar, Molecules 23 (2018) 2174.
[44] JQ Silveyra, TB Sezar, JA Manthey, EA Baldwin, J. Bai, S. Raithore, sog'lom odamlarda yangi siqilgan apelsin sharbatining bir martalik dozasini iste'mol qilishdan keyin flavanon glikozidlarining farmakokinetikasi, J. Agric, tijoratda qayta ishlangan apelsin sharbati. . Oziq-ovqat kimyosi. 62 (2014) 12576–12584.
[45] A. Frackowiak, P. Skibinski, W. Gawel, E. Zaczynska, A. Czarny, R. Gancarz, kaltsiy oksalat kristallarini eritish va inhibe qilish qobiliyatiga ega gidroksiantrakinonning glikozid hosilalari sintezi. Buyrak toshlarini davolashda potentsial birikmalar, Evr. J. Med. Kimyo. 45 (2010) 1001–1007.
[46] F. Grases, J. Perello, B. Isern, RM Prieto, distrofik kalsinoz cutisni oldini olish uchun miyo-inositol geksafosfat asosidagi kremni o'rganish, Br. J. Dermatol. 152 (2005) 1022–1025.
[47] V. Thongboonkerd, Kristal-hujayra o'zaro ta'sirining proteomikasi: buyrak toshlarini o'rganish uchun model, Hujayralar 8 (2019) 1076.
[48] CF Verkoelen, Buyrak tosh kasalligida kristalni ushlab turish: glikozaminoglikan gialuronan uchun hal qiluvchi rol? J. Am. Soc. Nefrol. 17 (2006) 1673–1687.
[49] K. Fong-ngern, A. Vinaiphat, V. Thongboonkerd, kaltsiy oksalat kristalli tomonidan induktsiya qilingan buyrak quvurli epiteliya hujayralarida mikrovillar shikastlanishi va epigallokatexin{2}}gallatning himoya roli, FASEB J. 31 (2017) 120 -131.
[50] J. Chjou, J. Jin, X. Li, Z. Zhao, L. Zhang, Q. Vang, J. Li, Q. Zhang, S. Xiang, Desmodium styracifoliumning umumiy flavonoidlari gidroksi- hosil bo'lishini susaytiradi. Sichqonlarda L-prolin keltirib chiqaradigan kaltsiy oksalat urolitiyozi, Urolitiyoz 46 (2018) 231-241.
[51] J. Manissorn, K. Fong-ngern, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, Siydik pH ning kaltsiy oksalat kristallanishiga, kristall-hujayra yopishishiga va buyrak quvur hujayralariga ichkilashishiga ta'sirini tizimli baholash, Sci. Rep. 7 (2017) 1798.
[52] S. Cui, J. Qian, P. Bo, aktin sitoskeleton aralashuvi orqali quercetin bilan oldindan davolash natijasida kelib chiqqan Candida albicans fagotsitoziga inhibitiv ta'sir, J. Tradit. Chin. Med. 33 (2013) 804–809.
[53] S. Cui, Q. Vu, J. Vang, M. Li, J. Qian, S. Li, Quercetin iNOS / FAK / paxillin yo'lini bostirish va sitoskeleton, hujayra yopishishlarini modulyatsiya qilish orqali LPS tomonidan qo'zg'atilgan makrofag migratsiyasini inhibe qiladi. . Migr. 13 (2019) 1–12.
[54] Y. Li, WG Gonsales, A. Andreev, V. Tang, S. Gandi, A. Cunha, D. Prober, C. Lois, ME Bronner, Makropinositoz vositachiligidagi membranani qayta ishlash F-ni yetkazib berish orqali neyron cho'qqisi migratsiyasini boshqaradi. lamellipodiyga aktin, Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 117 (2020) 27400–27411.
[55] H. Inaba, K. Yoda, H. Adachi, F-aktin-bog'lovchi RapGEF GflB Dictyosteliumda samarali makropinositoz uchun zarur, J. Cell Sci. 130 (2017) 3158–3172.
[56] A. Xan, Tarqalishi, urolitiyozga ta'sir qiluvchi patofizyologik mexanizmlar va omillar, Int. Urol. Nefrol. 50 (2018) 799–806.
[57] AP Evan, EM Worcester, FL Coe, J. Uilyams Jr., JE Lingeman, Insonning buyrak toshini shakllantirish mexanizmlari, Urolitiyoz 43 (1-ilova) (2015) 19-32.
[58] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Mitoxondrial disfunktsiya vabuyraktosh kasalligi, old. Fiziol. 11 (2020 yil), 566506.
[59] SR Xon, tosh shakllanishining "qattiq zarracha" modelining gistologik jihatlari: hayvonlarni o'rganish, Urolitiyoz 45 (2017) 75–87.
[60] VY Bird, SR Khan, toshlar qanday hosil bo'ladi? Tosh shakllanishi haqidagi nazariyalarni birlashtirish mumkinmi? Ark. Esp. Urol. 70 (2017) 12–27.
[61] JP Kavanagh, Kaltsiy oksalat kristallanishini o'rganish usullari va ularni urolitiyoz tadqiqotlarida qo'llash, Scanning Microsc. 6 (1992) 685–704, muhokama 704-5.
[62] JP Kavanagh, L. Jones, PN Rao, inson va sun'iy siydikning turli konsentrasiyalarida kaltsiy oksalat kristallanish kinetikasi, doimiy kaltsiy va oksalat nisbati, Urol. Res. 27 (1999) 231–237.
[63] NK Saw, PN Rao, JP Kavanagh, A. nidus, kristalluriya va agregatsiya: toshni kattalashtirish uchun asosiy ingredientlar, Urol. Res. 36 (2008) 11–15.
[64] A. Borissova, GE Goltz, JP Kavanagh, TA Wilkins, Reverse engineering of the buyrak: modeling kaltsiy oksalat monohydrate kristalization in nefron, Med. Biol. Eng. Hisoblash. 48 (2010) 649–659.
[65] LA Thurgood, ES Sorensen, RL Ryall, intrakristalli va sirt bilan bog'langan osteopontinning kaltsiy oksalat dihidrat kristallarining Madin-Darby it buyragi (MDCK) hujayralariga ultrafiltrlangan inson siydigida biriktirilishiga ta'siri, BJU Int. 109 (2012) 1100–1109.
