Cistanche feniletanol glikozid ichak to'sig'i va ichak mikrobiotasining miselalkolik jigar kasalligiga ta'siri
Mar 18, 2024
Annotatsiya:
Maqsad:Sichqoncha modelialkogolli jigar kasalligi(ALD) Lieber-Decarli spirtli suyuq ozuqa tomonidan tashkil etilgan va ta'siriCistanche feniletanoid glikozidlari(CPhGs) ichak to'sig'i va ALD sichqonlarining ichak mikrobiota tarkibi muhokama qilindi.
Usul: 36 ta C57BL/6N urg'ochi sichqonlar tasodifiy ravishda normal guruhga, CPhGs normal guruhga, model guruhiga va CPhGs past, o'rta va yuqori dozali guruhlarga (175 mg · kg -1, 350 mg · kg{{6) bo'lingan. }}va 700 mg·kg-1), 6 sichqon bilan. Liber-Dekarli spirti suyuqligidan foydalangan holda ALD sichqoncha modelini yaratish. CPhGs dozalari guruhiga va CPhGs normal guruhiga har kuni tegishli dozalarda CPhGsby gavage berildi. Avtomatik biokimyoviy analizator sarum ALT, AST, TG va TC darajasini aniqladi. Jigarning serumTNF-, IL-1, LPS, LBP, D-LA, DAO va LBP Elishay tomonidan aniqlandi. Jigar gomogenati namunalarida TG va TC darajalari kolorimetriya yordamida aniqlandi. Jigar to'qimalari yog'li qizil O va HE bo'yoqlari bilan bo'yalgan. Ichak to'qimalari HE va AB-PAS bo'yoqlari va Muc2 immunohistokimyosi bilan bo'yalgan. Oddiy guruh, CPhGs normal guruhi, model guruhi va yuqori dozali CPhG guruhining ichak tarkibi to'plangan va ichak mikrobiotasi ketma-ketlashtirilgan.
Natija: ALD modeli muvaffaqiyatli o'rnatildi. Oddiy guruh bilan solishtirganda sarum ALT, AST va TG darajalari, model guruhida jigar TG va TC darajalari sezilarli darajada oshdi (P).<0.05). Histopathology showed that compared with the normal group, the liver cells in the model group showed obvious steatosis. Compared with the model group, the levels of serum TG liver TG, and TC in the CPhGs dose group decreased significantly (P<0.05). The serum ALT, AST, TNF-α, IL-1β, LPS, and LBP in the CPhGs high dose group were also significantly decreased (P<0.05). Compared with the model group, the number of fatty liver cells in the CPhGs high dose group was significantly reduced, the microvilli structure of jejunum epithelial cells was intact, and the expression of Muc2 was reduced in the colon.Compared with the model group, the flora of the CPhGs high dose group changed significantly (P<0.05). Compared with the normal group, the Allobaculum was significantly up-regulated in the model group (P<0.05). Compared with the model group, the abundance of Akkermansia in the CPhGs high dose group was significantly increased (P<0.01). Akkermansia was negatively correlated with Allobaculum (r = -0.701, P<0.01).
Xulosa: CPhG'lar ALD sabab bo'lgan ichak to'sig'ining shikastlanishini kamaytirishi mumkin, bu mumkinAkkermansiya va allobakulumning ko'pligi va tuzilishini tartibga solish orqali himoya rolini o'ynaydi., va ichak shilliq qavatining gomeostazasiga ta'sir qiladi.
Kalit so‘zlar:CPhG'lar; alkogolli jigar kasalligi; ichak to'sig'i; ichak mikrobiotasi
40% EXINAKOSID VA 16% AKTEOSID BO'LGAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRATI
Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp% 2fTel:+86 15292862950}
Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:
https://www.xjcistanche.com% 2fcistanche-shop
Spirtli ichimliklar muhim xavf omillaridan biriga aylandibutun dunyo bo'ylab surunkali kasalliklar.Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti tomonidan e'lon qilingan "Alkogol va salomatlik bo'yicha 2018 yilgi global hisobot" shuni ko'rsatadiki, 2016 yilda dunyo bo'ylab taxminan 3 million kishi spirtli ichimliklarni haddan tashqari iste'mol qilish natijasida vafot etgan, bu umumiy ko'rsatkichning 5,3 foizini tashkil qiladi [1]. Mamlakatimizda spirtli ichimliklar tufayli kelib chiqadigan jigar kasalliklari yildan-yilga ortib bormoqda va aholi salomatligining jiddiy muammosiga aylangan jigar sirrozining [2] sabablari bo‘yicha ikkinchi o‘rinda turadi. Alkogolli jigar kasalligining (ALD) boshlanishi va rivojlanishi mexanizmlari murakkab va ko'p sonli, asosan etanol metaboliti atsetaldegid va reaktiv kislorod turlarining jigarga zarar etkazish mexanizmi [3]. Ular orasida ALD rivojlanishida "ichak-jigar o'qi" ning roli katta e'tiborni tortdi [4-5]. Jigar alkogolning oksidlovchi metabolizmining asosiy joyidir. Uzoq muddatli og'ir ichish jigarga bevosita zarar etkazishi mumkin, bu esa ALD paydo bo'lishiga olib keladi [6]. Jigar steatozi - spirtli ichimliklarni iste'mol qilgandan keyin erta reaktsiya. Inson ichak mikrobiotasi (GM) 10 trillionni tashkil etadi [7]. Ichak florasi, viruslar, zamburug'lar va metabolitlardan tashkil topgan mikroekologik muvozanat.
Balans, ya'ni ichak mikroekologiyasi ALDning "ichak-jigar o'qi" orqali rivojlanishi bilan chambarchas bog'liq, ammo tegishli mexanizmlar hali ham noaniq [8-9]. Ichak to'sig'i va florasi "ichak-jigar o'qi"da ustunlik qiladi va GM disregulyatsiyasi va yallig'lanish omillarining haddan tashqari ko'payishi ALD [10-11] paydo bo'lishi va rivojlanishida muhim rol o'ynaydi.
Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, jiddiy GM disregulyatsiyasi va yallig'lanish omillarining haddan tashqari namoyon bo'lishi ALD ning paydo bo'lishi va rivojlanishi davrida sodir bo'ladi [12]. Uzoq muddatli surunkali qabul qilish yoki ko'p miqdorda spirtli ichimliklarni qisqa muddatli qabul qilish ichak o'tkazuvchanligini o'zgartiradi, bu ichak LPS ning portal qon aylanishiga kirishiga olib keladi, yallig'lanish reaktsiyasini keltirib chiqaradi va jigar shikastlanishini kuchaytiradi [12-13].
Cistanche Shinjondagi oʻziga xos xitoy dorivor materiali sifatida Vu Puning Vey va Jin sulolalari davridagi “Materia Medica”, Song sulolasining “Materia Medica toʻplami” va Min sulolasining “Materia Medica toʻplami”da qayd etilgan [14] ]. Zamonaviy farmakologik tadqiqotlar Cistanche feniletanoid glikozidlari (CPhGs) yallig'lanishga qarshi va jigar fibroziga qarshi [15-16] muhim rol o'ynashini aniqladi. Biroq, hozirgi vaqtda CPhGlar ALDda ichak to'siqni funktsiyasini yoki ichak florasini tartibga solishi va gepatoprotektiv ta'sir ko'rsatishi bo'yicha tadqiqotlar etishmasligi mavjud.
Ushbu tadqiqot Alkogolli ichimliklarni suiiste'mol qilish va alkogolizm bo'yicha Milliy institutni (NIAAA) [17] CPhGlarning ALD ichak mikroekologiyasiga ta'sirini o'rganish uchun qisqa muddatli alkogolli jigar shikastlanishi sichqoncha modelini yaratish uchun Lieber-Decarli spirtli suyuq ozuqasidan foydalangan. Ta'sir qilish. ALD modeli sichqonlarida CPhGlarning ichak to'siqlari funktsiyasi va ichak mikrobiota gomeostaziga ta'siriga alohida e'tibor qaratildi. Bu ichak mikroekologiyasi nuqtai nazaridan CPhGlarning gepatoprotektiv mexanizmini ochib berishga yordam beradi va dori ishlab chiqish uchun eksperimental ma'lumot beradi.
1. Materiallar
1.1 Hayvonlar
SPF darajasidagi C57BL/6N urg'ochi sichqonlar, 17~20 g, Beijing Vitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.dan sotib olingan, sertifikat raqami SCXK (Pekin) 2021-0006. Shinjon tibbiyot universiteti (SYXK (yangi) 2022-0003) Hayvonlar tajriba markazining SPF muhitida hayvonlar yetishtirildi va tajribalar oʻtkazildi. qattiq
Shinjon Tibbiyot Universiteti (IACUC-20220127-4) Hayvonlar boʻyicha eksperimental etika qoʻmitasining hayvonlar farovonligi va axloqiy talablariga rioya qiling.
1.2 Reaktivlar
Mutlaq etanol, izopropil spirti (Tyanjin Damao kimyoviy reagent fabrikasi, partiya raqamlari mos ravishda 20230201 va 20190103); Lieber-Decarli nazorat suyuq ozuqa, Lieber-Decarli spirtli suyuq ozuqa (Daitz Biotechnology (Wuxi) Co., Ltd., mos ravishda 710027 va 710260 uchun partiya raqamlari);
Paraformaldegid fiksatori, Karnoy fiksatori va elektron mikroskopni fiksatori (Wuhan Sevier Biotechnology Co., Ltd., partiya raqamlari mos ravishda CR2208028, CR2305094 va CR2210001); LBP fermenti bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) to'plami, TNF-ELISA to'plami, IL-1
Elisa Kit, D-La Elisa Kit, tg Coleritimetrik sinov to'plami (Vuhan Yilerite Biotexnologiya Cit (Wuhan Yilerite Biotexnologiya Cit, CBE 00 L44233397),
GY010XN08244, GY03P04Z5104 va GY02DHB82603); LPS ELISA to'plami (Wuhan Fein Biotechnology Co., Ltd., partiya raqami U3126I069T); ALT tahlil to'plami, AST tahlil to'plami, TG tahlil to'plami va TC tahlil to'plami (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd. Co., Ltd., partiya raqamlari: 140122014, 140223002, 141722001 va 14162201); HE bo'yash eritmasi, to'yingan Oil Red O bo'yash eritmasi, AB-PAS bo'yash eritmasi; Muc2 asosiy antikor, echki sichqonchaga qarshi ikkilamchi antikor (Wuhan Sevier Biotechnology Co., Ltd., partiya raqamlari mos ravishda G1005, G1015, G1049, GB11344 va GB23301).
1.3 Dori vositalari
dan Cistanche ekstrakti sotib olindiXinjiang Hotan Dichen Pharmaceutical and Biological Co., Ltd. (echinaseasid 40% dan katta yoki unga teng, verbaskozid 16% dan katta yoki teng, feniletanoid glikozid 85% dan katta yoki teng, partiya raqami 20230103).
1.4 Asboblar
BS-240VET avtomatik biokimyoviy analizator (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.); HT7800 transmissiya elektron mikroskopi (Hitachi Manufacturing Co., Ltd., Yaponiya).
2. Usul
2.1 Guruhlash va hayvonlar modelini yaratish
36 sichqon tasodifiy ravishda oddiy guruhga, an'anaviy qo'llash guruhiga, model guruhiga va CPhGs past, o'rta va yuqori dozali guruhlarga bo'lingan (175 mg · kg -1, 350 mg · kg -1 va 700 mg · kg{{ 6}}), har bir guruh 6. Barcha sichqonlarga birinchi navbatda Liber-Dekarli nazorat suyuqligi berildi va 3 kun davomida ovqatlanishga moslashtirildi. normal
Nazorat guruhi va oddiy dozalash guruhi Liber-Dekarli nazorat suyuqligi bilan oziqlangan; model guruhi va CPhGs past, o'rta va yuqori dozali guruhlar LieberDecarli spirtli suyuq ozuqa bilan oziqlangan. Tajribaning 4-kunidan boshlab model guruhi va past, o'rta va yuqori dozali CPhG guruhlari alkogol ozuqasining alkogol kontsentratsiyasini asta-sekin 0% dan 5% gacha oshirdi va 5% spirtli ozuqani ushlab turdi. tajriba tugaydi va materiallarni yig'ishdan 9 soat oldin bosiladi. 0.2 ml·10 g-1 30% etanol bilan oshqozonga yuborildi.
Barcha tasma hozir tayyorlanadi va ishlatiladi va yangi ozuqa har kuni 17:00 dan 19:00gacha almashtiriladi. Har kuni sichqonlarning ovqatlanishini, faolligini va ruhiy holatini kuzating. Model guruhidagi sichqonlar beparvolik, faollikning pasayishi va oziq-ovqat iste'molining kamayishi kabi mast holatda paydo bo'lganda, bu modellashtirish muvaffaqiyatli ekanligini ko'rsatadi [17]. Past, o'rta va yuqori dozali CPhG guruhlari va oddiy administratsiya guruhi alkogolli ozuqa bilan oziqlantirishni boshlaganda, tegishli konsentratsiyadagi CPhGs eritmasi har kuni jami 14 kun davomida, qolganida esa oddiy sho'r suv bilan o'ralgan.
2.2 Umumiy kuzatish
Har kuni sichqonlarning ovqatlanishi, faoliyati, ruhiy holati va ajralib chiqishi kuzatilgan; modellashtirish va giyohvand moddalarni iste'mol qilish vaqtida sichqonlarning o'lim holati va vazni qayd etilgan. Organ koeffitsienti=organ massasi/(tana massasi/100)×100%.
2.3 Tajriba hayvonlarini tanlash
12 soat davomida oziq-ovqat va suvdan mahrum bo'lgandan so'ng, sichqonlar behushlik qilindi, ko'z olmalari olib tashlandi va qurbonlik qilishdan oldin qon yig'ildi. Eng katta lobdagi jigar to'qimasi paraformaldegid eritmasida mahkamlangan. Jejunal to'qima tezda muz ustida ajratildi va elektron mikroskop fiksatorida o'rnatildi; 3 sm uzunlikdagi jejunal va yo'g'on ichak to'qimalari (tarkibini yuvmasdan) ajratildi va Karnoy fiksatoriga o'rnatildi. Yana 3 sm jejunum va yo'g'on ichak to'qimalari (tarkib fiziologik sho'r suv bilan yuviladi) paraformaldegid eritmasida o'rnatiladi. Barcha ichak segmentlarining tarkibi fermentlarsiz steril krioviallarga yig'ilib, suyuq azotda tez muzlatilgan va keyin saqlash uchun -80 darajali muzlatgichga o'tkazilgan.
2.4 Elishay va sarum va jigar to'qimalarining gomogenat ko'rsatkichlarini kolorimetrik aniqlash
Avtomatik biokimyoviy asbob sarum ALT, AST, TG va TC darajasini aniqlash uchun ishlatilgan; Elishay usuli sarum TNF-, IL-1, LPS, LBP, DAO va D-LA darajalarini va jigar LBP darajasini aniqlash uchun ishlatilgan. Ko'rsatmalarga muvofiq ishlang. Jigar to'qimasini bir hil holga keltirish uchun 0.05~1.00 g yangi jigar to'qimasini oling, og'irlik (g) nisbatiga ko'ra 2~8 daraja izopropil spirt qo'shing: hajm (ml) { {9}}:9, gomogenlash uchun maydalang va 20000 g·min-1 15 daqiqada santrifüj qiling, supernatantni oling va sinov uchun muz ustiga qo'ying va ko'rsatmalarga muvofiq ishlang. Jigar to'qimalarining homogenat namunalarida TG va TC darajasini kolorimetrik aniqlash.
2.5 Jigar to'qimalarining patologiyasini aniqlash uchun HE va Oil Red O bo'yash
Gematoksilin-eozin bilan bo'yash (HE) uchun fiksatsiyalangan jigar to'qimasi olib tashlandi, kerosin bilan kesildi, HE bo'yaldi va suvsizlandi va o'rnatildi. Fikslangan jigar to'qimasi olib tashlandi, muzlatilgan holda kesildi, izopropil spirt bilan yuvildi, Oil Red O bilan bo'yaldi, muhrlandi va yorug'lik mikroskopi ostida kuzatildi.
2.6 Ichak to'qimalarining patologik kuzatuvini aniqlash uchun HE va AB-PSA bo'yash
Jejunal to'qima olib tashlandi va HE bo'yash uchun paraformaldegid eritmasiga o'rnatildi; yo'g'on ichak to'qimasi olib tashlandi va AB-PAS bo'yash uchun Karnoy fiksatorida o'rnatildi. Immunogistokimyo bosqichlari: kerosin bo'laklarini suvsizlantirish, antigen olish, endogen peroksidazani blokirovka qilish, sarumni blokirovka qilish, birlamchi antikor qo'shish, ikkilamchi antikor qo'shish, rang paydo bo'lgandan keyin hujayra yadrolarini bo'yash, suvsizlantirish va o'rnatish va yorug'lik mikroskopida kuzatish. Jejunal to'qima olib tashlandi, 1 mm × 1 mm × 1 mm kichik bo'laklarga bo'linib, hayzdan oldin, post-fiksatsiyalangan, suvsizlangan, ko'milgan, polimerizatsiya qilingan va ultra yupqa kesilgan. Har bir guruhdagi jejunal epiteliya hujayralarining mikrovilli o'zgarishlari transmissiya elektron mikroskop ostida kuzatildi.
2.7 16S usuli yordamida ichak florasining ketma-ketligi va tahlili
V3-V4 hududi 341F (5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3') va 806R (5'-GGACTACNNNGGGTATCTAAT) asosida oddiy guruh, normal dozalash guruhi, model guruhi va yuqori dozali CPhG guruhining ichak tarkibi -3'), bakteriyalar hamjamiyatini sekvensiyalash uchun 16S rDNK yuqori oʻtkazuvchanlik sekvensiyasi texnologiyasidan foydalangan holda. Ushbu tadqiqotdagi ketma-ketlik tajribasi Shenzhen Microtech Technology Group Co., Ltd tomonidan yakunlandi. Ushbu tadqiqotda ichak mikrobiotasini ketma-ketlashtirish ma'lumotlari PRJNA1006676 loyihasi ostida Milliy Biotexnologiya Axborot Markaziga yuklangan.
Amplikon ketma-ketligi variantlari (ASV) tahlil natijalari asosida Alfa xilma-xilligi, Beta xilma-xilligi tahlili, tur tasnifi annotatsiyasi va farq tahlili amalga oshiriladi. Ular orasida Alpha xilma-xillik indeksi asosan Shannon indeksini va Chao1 indeksini o'z ichiga oladi va statistik test Wilcoxon testidan foydalanadi; PCoA
Guruhlar orasidagi farqlarni tahlil qilish uchun Anosim yordamida asosiy koordinata tahlili (PCoA) amalga oshirildi; LEfSe guruhlar o'rtasida sezilarli farqlarga ega turlarni olish uchun LEfSe) tahlil qilish uchun ishlatilgan. Bioinformatika tahlili Microtech Alliancening Bioincloud Platformasi (https://www.bioincloud.tech) vositalari yordamida amalga oshirildi.
2.8 Statistik tahlil
Barcha o'lchov ma'lumotlari igh̅± 𝑠 sifatida tavsiflanadi. Oddiy taqsimotga bo'ysunadigan va dispersiya testining bir xilligini qondiradigan ma'lumotlar uchun dispersiyaning bir omilli tahlili qo'llaniladi. Aks holda, parametrik bo'lmagan test qo'llaniladi. Ma'lumotlar SPSS 24 yordamida statistik tahlil qilinadi.0. P<0.05 means the difference is statistically significant.
