Proton terapiyasining o'simta hujayralarini o'ldirishga va gepatotsellyulyar karsinoma uchun immun mikro muhitga ta'siri

Abstrakt: Proton terapiyasi (PT) bilan radioterapiya foton terapiyasiga nisbatan dozimetrik afzalliklarga ega, bu gepatotsellyulyar karsinoma (HCC) uchun radioterapiyaning terapevtik oynasini kengaytirishga yordam beradi. Biz HCC ning PTga javobini baholadik va asosiy mexanizmlarni ko'rib chiqdik. PT nurlanishidan kelib chiqqan javobni tekshirish uchun hujayra va hayvonlar tajribalari uchun inson jigari saraton hujayralari HepG2 va HuH7 va sichqonchaning jigar saratoni hujayralari qatori Hepa1-6 tanlangan. PT nurlanishidan keyingi biologik o'zgarishlar va immunologik javob o'rganildi. In vitro eksperimentlar fotonli radiatsiya terapiyasi bilan solishtirganda PTdan keyin hujayra omon qolishida sezilarli farqni ko'rsatmadi. Sichqoncha o'simtasi modelida o'smalar PT nurlanishidan 12 kun o'tgach kichikroq bo'lgan. Asosiy o'zgarishlar orasida DNK shikastlanishining kuchayishi, IL{5}} darajasining ko'tarilishi va tartibga solinadigan immun o'simta mikromuhiti kiradi. In vitro va in vivo jonli protein tahlili shuni ko'rsatdiki, PT o'simta hujayralarida ifodalangan dasturlashtirilgan hujayra o'limi ligand 1 (PD-L1) darajasini oshirdi va miyeloid kelib chiqadigan bostiruvchi hujayralarni (MDSC) jalb qildi. PD-L1 ning o'sishi nurlanish dozasi bilan ijobiy bog'liq edi. Hepa1-6 singenik sichqoncha modellarida PT ning anti-PD-L1 bilan kombinatsiyasi faqat PT bilan solishtirganda o'simta o'sishi kechikishini oshirdi, bu o'simtani infiltratsiya qiluvchi T hujayralarining ko'payishi va mikro muhitda MDSC ishga tushirilishi bilan bog'liq edi. Bundan tashqari, PT asosiy HCC o'simtasiga qo'llanilganda, anti-PD-L1 antikorlari bilan davolash qilingan sichqonlar kichikroq sinxron nurlanmagan o'smalarni ko'rsatdi. Xulosa qilib aytganda, HCC ning PTga bo'lgan javobi o'simta hujayralarini o'ldirish va o'simta mikro muhitidagi immunologik javob bilan aniqlandi. Antitumor immunitetini oshirish uchun anti-PD-L1 antikori bilan kombinatsiya PT bilan davolash qilingan HCC uchun terapevtik sinergizm uchun javobgar edi. Bizning natijalarimizga asoslanib, biz PT anti-PD-L1 bilan birgalikda HCC uchun istiqbolli terapevtik siyosat bo'lishi mumkinligini taklif qilamiz.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

Kalit so'zlar: HCC; proton terapiyasi; PD-L1; immunitetga ega

1.Kirish

Gepatotsellyulyar karsinoma (HCC) global miqyosda tarqalgan saraton bo'lib, janubi-sharqiy Osiyoda nisbatan yuqori darajada uchraydi [1]. Bemorlarning ko'pchiligi rivojlangan o'smalar va/yoki jigar faoliyatining yomonligi tufayli yomon prognozga ega. An'anaga ko'ra, jigar saratonini davolash uchun ma'lum dozada radiatsiya terapiyasi (RT) radiatsiyadan kelib chiqqan gepatitning yuqori xavfi bilan bog'liq. Radioterapiya usullarini takomillashtirish HCC uchun RT terapevtik oynasini kengaytirishga yordam berdi. Proton terapiyasi (PT) bilan RT ning rivojlanishi HCC uchun RT dan foydalanishni diqqat markaziga olib keldi [2,3]. PT saratonni davolashda, ayniqsa HCC, bosh va bo'yin saratoni va ko'krak saratoni uchun an'anaviy foton terapiyasidan dozimetrik afzalliklarga ega. Oxirgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, RT tomonidan qo'zg'atilgan biologik o'zgarishlar, shu jumladan DNK shikastlanishi, oksidlovchi stress va immun hujayralarni tartibga solishda PT va fotonlar o'rtasida ekvivalent nisbiy biologik samaradorlik dozalarida farqlar bo'lishi mumkin [4-7]. PT ning radiobiologik ta'sirini keyingi tekshirish saraton kasalligini davolash uchun istiqbolli PT strategiyalarini ishlab chiqish imkoniyatini beradi. Klinik sharoitda RT va immunoterapiyaning kombinatsiyasi ko'plab ko'rsatkichlar uchun istiqbolli hisoblanadi [8,9]. Surunkali yallig'lanish HCC rivojlanishiga moyil bo'lganligi sababli, HCC immunoterapiya uchun potentsial maqsaddir [10]. RT o'simta mikromuhitiga proimmunogen va immunosupressiv ta'sir ko'rsatadi [9]. RT immunogen hujayralar o'limini qo'zg'atishi va o'smaga qarshi immun hujayra infiltratsiyasini kuchaytirishi ko'rsatilgan bo'lsa-da [11,12], bir qancha tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, RT sitokinlar va immunitetni tartibga soluvchi hujayralarni qo'zg'atishi mumkin, bu esa ko'proq immunosupressiv o'sma mikro muhitini keltirib chiqaradi. Immunoterapiya va RT kombinatsiyasi o'simta reaktsiyasini faqat ikkala usul bilan solishtirganda kuchaytiradi va RT tomonidan qo'zg'atilgan immunosupressiv ta'sirlarni bekor qiladi [13,14]. Bir qator klinik va klinik tadqiqotlar foton RT va immunoterapiya bilan davolash HCCda o'sma nazoratiga ijobiy ta'sir ko'rsatishini ko'rsatdi [15,16]. Bizning ma'lumotimizga ko'ra, radio-induktsiyali immunitet reaktsiyalariga oid deyarli barcha hisobotlar fotonlarga asoslangan nurlanish bilan olingan. PTga javob berish uchun mas'ul bo'lgan mexanizmlarni yaxshiroq tushunish HCC uchun yanada kuchli terapevtik yondashuvlarga olib kelishi mumkin. O'simta nazorati va immun javob uchun mas'ul bo'lgan PT ning biologik ta'siri qo'shimcha tekshirishni talab qiladi. Shuning uchun biz PT bilan radiatsiya ta'sirini va o'simta mikromuhitidagi immun javobni baholashni maqsad qildik. Shuningdek, biz PT va PD-L1 blokadasining kombinatsiyasi HCC o'simtasini nazorat qilishda sinergik ta'sir ko'rsatadimi yoki yo'qligini tekshirdik.

2. Materiallar va usullar

2.1. Hujayra madaniyati 

Inson jigari saraton hujayralari qatori HepG2 va sichqon jigari saraton hujayralari qatori Hepa1-6 Bioresurslarni yig'ish va tadqiqot markazidan olingan. Bundan tashqari, HuH7 xujayralari, inson gepatomasi hujayra liniyasi, doktor Yen-Hao, Chen (Kaohsiung Chang Gung Memorial kasalxonasi, Tayvan) tomonidan muloyimlik bilan taqdim etilgan. Hujayra liniyalaridan foydalanish institutsional tadqiqot axloq qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (№ 00464-2021120952922). Hujayra chiziqlari 10% homila sigir zardobi (FBS) bilan to'ldirilgan Dulbekkoning o'zgartirilgan Eagle muhitida (DMEM) o'stirildi. Bundan tashqari, inson monositik THP-1 hujayralari RPMI 1640 madaniyat muhitida saqlangan. THP{9}} monotsitlari shartli muhitda inkubatsiya qilinganda M1 yoki M2 makrofaglarga ajratilishi mumkin [17,18]. PT ning saraton hujayralarining M2 makrofagi differentsiatsiyasini qo'zg'atish qobiliyatiga ta'sirini aniqlash uchun PT nurlanishi bilan yoki bo'lmagan HuH7 hujayralari M2 makrofag polarizatsiyasi tugashidan 24 soat oldin 6-quduq plitalariga ekilgan. 24 soatlik kokulturadan so'ng, M2 makrofag belgisi bo'lgan CD163 ifodasi makrofaglar bilan tahlil qilindi. Ko'p rangli floresans bilan faollashtirilgan hujayra tahlili (FACS) FACS kalibrli oqim sitometri (BD Biosciences) yordamida differentsiatsiyalangan makrofaglardan tayyorlangan bitta hujayrali suspenziyalarda amalga oshirildi va CD163 uchun immuno-bo'yash floresans bilan belgilangan monoklonal antikor yordamida amalga oshirildi. In vitro eksperimentlar Chang Gung memorial kasalxonasining qo'shma laboratoriyasida o'tkazildi, u xizmat ko'rsatish platformalarini, shu jumladan hujayralarni saralash, ko'p rangli hujayra analizatori va konfokal mikroskopni taqdim etdi.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

2.2. Nurlanish

Protonlarning nisbiy biologik samaradorligi 1,1 ga o'rnatildi va nisbiy biologik samaradorlik (RBE) dozasi proton dozasini ushbu qiymatga ko'paytirish orqali hisoblandi [19]. Ushbu tadqiqotda biz RT tomonidan qo'zg'atilgan ta'sirni baholash uchun RBE dozasidan foydalandik. Protonli radioterapiyada doza jismoniy dozani 10% ga, ya'ni proton RBE dozasini=jismoniy proton dozasini × 1,1 ga oshirish orqali Gy (RBE) sifatida belgilanadi. Hujayralar va sichqonlar RBE dozasi bilan foton yoki PT nurlanishi orqali mahalliy RT oldi. Foton nurlanishi Varian 21EX va Eclipse davolashni rejalashtirish yordamida amalga oshirildi. In vitro, eksponent o'sib borayotgan hujayralar foton nurlanish tahlili uchun 6 MV nur yordamida 0, 3, 6 va 9 Gy bir martalik dozalari bilan nurlantirildi. PT uchun qalam nurlarini skanerlash (PBS) orqali nurlanish turli proton dozalarida (0, 3, 6, 9 va 12 Gy (RBE)) amalga oshirildi, energiya 93,6-109,2 MeV va hujayralar uchun 72-143,2 MeV ga to'g'ri keladi. va sichqonlar, mos ravishda. Hujayra va sichqoncha nurlanishi klinik sharoitlarni taqlid qilish uchun hujayralarni Bragg cho'qqisining (SOBP; hujayra PT uchun 1 sm kengligi, sichqonchaning PT nurlanishi uchun 6 sm kengligi) o'rtasiga joylashtirish orqali o'tkazildi (1a, b-rasm). Proton nurlanishi kasalxonamizda (Sumitomo Heavy Industries, Ltd., Tokio, Yaponiya) ishlatiladigan siklotron tomonidan amalga oshirildi, bu doimiy va yuqori intensiv proton nurini hosil qiladi. RT maydonining o'lchami abskopal ta'sirni o'rganish uchun 20 × 10 sm2, PT in vivo jonli ravishda o'simtani yo'q qilish ta'sirini tekshirish uchun 20 × 15 sm2 yoki PT in vitro ta'sirini tekshirish uchun 20 × 20 sm2 edi. Ray Station RT dozasini hisoblash uchun ishlatiladigan davolashni rejalashtirish tizimi edi (versiya 8.1, Ray Search Laboratories, Stokgolm, Shvetsiya).

Shakl 1. PT uchun preklinik model. Eksperimental proton nurlari in vitro (a) va hayvonlar o'simtalari modellari uchun dizaynlashtirilgan (jigar o'simtasini nurlantirish uchun RT maydoni, ko'k chiziq; abskopal effektni tekshirish uchun RT maydoni, qizil chiziq) (b).

2.3. T-hujayra proliferatsiyasi tahlili

PT saraton hujayralari va miyeloiddan olingan bostiruvchi hujayralar (MDSC) ning CD8+ T-hujayra proliferatsiyasiga ta'sirini tartibga sola oladimi yoki yo'qligini tekshirish uchun biz stimulyatsiyadan keyin CD{3}} T hujayralarining ko'payishini o'lchadik. Anti-CD8 mikrobonchalari yordamida ajratilgan CD8+ T hujayralari karboksifluoresein suksinimidil ester (CFSE) bilan etiketlandi va PTdan 48 soat o'tgach, saraton hujayralari bor yoki yo'qligida CD11b+ hujayralari bo'lgan 96-quduq plitalariga ekildi. CD{11}} T hujayralarining ko'payishi anti-CD3/CD28 boncuklar tomonidan rag'batlantirildi (Invitrogen, Waltham, MA, AQSh). CFSE floresan bo'yalishi stimulyatsiyadan 3 kun o'tgach oqim sitometriyasi yordamida tahlil qilindi.

2.4. Periferik qonning mononukulyar hujayralaridan (PBMCs) CD14+HLA-DR-induktsiyasi

MDSClarning yangi kichik to'plami CD14 ifodasi mavjudligi, ammo saraton bilan kasallangan bemorlarning periferik qonida inson leykotsitlar antijeni (HLA) - DR ekspresyonu (CD 14+ HLA-DR−) yo'qligi asosida aniqlandi. Xabar qilinishicha, PBMCda CD14+HLA-DR- hujayralarining g'ayritabiiy to'planishi o'sma immunitetidan qochishga yordam beradi va saraton prognozi bilan bog'liqdir [20-22]. MDSClarni induktsiya qilishda PT nurlanishining rolini baholash uchun PT-nurlangan saraton hujayralari bilan 24 soat davomida inkubatsiya qilingan PBMC'lardan CD14+HLA-DR-miyeloid hujayralarining foizi baholandi. CD14+HLA-DR− miyeloid hujayralarining nisbati va PD-L1 ifoda darajasi FACS (BD Biosciences, San-Xose, CA, AQSh) yordamida tahlil qilindi.

2.5. Klonogen tahlil

Klonogen tahlillar RT ning reproduktiv hujayraning omon qolishini yo'qotishiga ta'sirini tekshirish uchun ishlatilgan. Hujayra kulturalari nurlantirildi va keyin koloniya shakllanishi uchun 37 ◦C da inkubatsiya qilindi. 10 kundan keyin koloniyalar o'rnatildi va koloniyalarni hisoblash uchun kristalli binafsha rang bilan bo'yaldi. Koloniyalar qoplama samaradorligini va ma'lum bir RBE dozasida omon qolgan fraktsiyalarni aniqlash uchun ball oldi. Omon qolish ulushi RT ta'siridan keyingi koloniyalar soni bo'lib, qoplama samaradorligi uchun tuzatish kiritiladi.

2.6. Singenik (ektopik va ortotopik) o'sma modellari

Hayvonlarning barcha tadqiqotlari hayvonlarni o'rganish bo'yicha barcha tegishli axloqiy qoidalarga mos keldi va shifoxonamizning eksperimental hayvonlar qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Hayvonlar tajribalari Chang Gung memorial kasalxonasining laboratoriya hayvonlari markazida o'tkazildi, u Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish xalqaro assotsiatsiyasi (AAALAC) tomonidan to'liq akkreditatsiyaga ega. Biz C57BL/6J sichqonlaridan jigar o'simtasi implantatsiyasi modeli sifatida foydalandik. Ektopik va ortotopik o'simta modelida o'simta hujayralari (Hepa 1-6 1 × 106 hujayralar) teri ostiga o'ng son mintaqasiga implantatsiya qilingan va/yoki jigar gumbazi sohasiga intraoperativ implantatsiya qilingan. Jigar o'smalarining PT in vivo jonli javobini o'rganish uchun Hepa1-6 saraton hujayralari implantatsiyasidan 14 kun o'tgach, o'smalarga 12 Gy (RBE) uchun mahalliy PT nurlanishi berildi (1b-rasm). Nazorat sichqonlari soxta nurlanishga duchor qilindi. PT ning o'simtaga ega bo'lgan immunokompetent xostlarga abskopal ta'sirini bartaraf etish uchun biz bir vaqtning o'zida Gepa1-6 saraton hujayralarini o'ng son (birlamchi o'simta) va yuqori orqa (ikkilamchi sinxron o'simta) ichiga joylashtirdik. O'simta implantatsiyasidan o'n to'rt kun o'tgach, 12 Gy (RBE) bilan PT birlamchi o'simtaga yuborildi, lekin ikkilamchi sinxron o'simtaga emas. Keyin ko'rsatilgan vaqt nuqtalarida o'simta o'sishini (shu jumladan birlamchi nurlangan va sinxron nurlanmagan o'smalarni) kuzatdik. Anti-PD-L1 ning PT vositachiligida mahalliy o'sma nazorati va abskopal ta'siriga ta'sirini o'rganish uchun o'simtali sichqonlarga PT nurlanishidan so'ng darhol va har 2 kunda bir marta 250 mkg antiPD-L1 antikorining intraperitoneal dozasi berildi. tajribalar. Sichqonchaga qarshi PD-L1 (B7-H1, 10F.9G2) antikori Bio X Cell (Livan, NH, AQSh) dan olingan.

Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.7. In Vivo MDSC oqimining sitometrik tahlillari

MDSC Gr1 va CD11b miyeloid-hujayra nasli differentsiatsiya antijenlarining birgalikda ifodalanishi bilan tavsiflanadi. Shuning uchun biz Ly{6}}G va Ly-6C dagi umumiy epitop bilan reaksiyaga kirishadigan o'ziga xos anti-Gr1 antikoridan va sichqonchaning MDSClarini CD11b sifatida aniqlash uchun CD11b (BD Pharmingen) ga xos antikordan foydalandik. + Gr1+ [23]. Bundan tashqari, miyeloid differentsiatsiya antijeni Gr-1 anti-Ly-6G va anti-Ly6C antikorlari tomonidan tan olingan ikkita epitopdan iborat. CD11b+Gr-1+ MDSC populyatsiyasi ikkita asosiy kichik to‘plamdan iborat edi: Ly-6G ni ifodalovchi granulotsitik fenotipli hujayralar va Ly6C ni ifodalovchi monositik fenotipli hujayralar. MDSClarning yangi kichik to'plami sichqonlarda CD11b + Ly6G- sifatida belgilangan monositik MDSClar sifatida aniqlandi. Sichqonlar nurlanishni olgandan keyin nurlanishning MDSCni ishga olishiga ta'sirini o'rganish uchun FACS va immunofloressensiya tahlillarini o'tkazdik. FACS ovqat hazm qilish va CD11b, Gr1 va LY6G uchun floresan bilan belgilangan monoklonal antikorlar (BD PharMingen) bilan immuno-bo'yashdan so'ng butun o'sma va taloqdan tayyorlangan bitta hujayrali suspenziyalarda o'tkazildi. MDSC foizi yuqorida aytib o'tilgan monoklonal antikorlar bilan ko'p rangli oqim sitometriyasi orqali o'lchandi. FACSda salbiy nazorat sifatida izotipga xos antikorlar ishlatilgan.

2.8. Statistik tahlil

Namunalar Student's t-test yordamida tahlil qilindi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xato (SD) sifatida taqdim etiladi. Barcha uyali tajribalar har bir holat uchun uchta biologik replikatsiyadan iborat [24] va kamida uch marta mustaqil ravishda amalga oshirildi. In vivo tajribalar uchun har bir guruhda oltita hayvon ishlatilgan va kamida ikkita mustaqil tajriba o'tkazildi. Agar boshqacha ko'rsatilmagan bo'lsa, statistik ahamiyatga ega ekanligini ko'rsatish uchun p < 0.05 ehtimollik darajasi olingan.

3. Natijalar:

3.1. HCCning PTga javobi HCCning javobi

Odam va sichqon saraton hujayralari 0, 3, 6 yoki 9 Gy (RBE) ning bitta PT dozasiga ta'sir ko'rsatdi va 48 soatda hujayra o'limi va koloniya hosil qiluvchi hujayralarning omon qolish ulushi tekshirildi va solishtirildi. foton-RT bilan. PT va foton-RT o'rtasidagi ekvivalent RBE da hujayraning omon qolishida sezilarli farq yo'q edi (2a, b-rasm). P-H2AX hosil bo'lishi DNKning ikki zanjirli uzilishlariga uyali javobdir va kalretikulin ta'sirining mavjudligi va yuqori harakatchanlik guruhi 1 qutisi (HMGB1) RT tomonidan qo'zg'atilgan immunogenlik hujayra o'limining belgilari bo'lib xizmat qiladi [25-27]. Shakl 2c da ko'rsatilganidek, RT RTdan 24 soat o'tgach DNK shikastlanishining ortishi bilan bog'liq bo'lgan kalretikulin va HMGB1 ifodasini kuchaytirdi. Oldingi tadqiqot [28] foton-RT IL-6 ni ko'targanligi haqida xabar berdi, bu HCC ning RTga chidamliligi bilan bog'liq edi. Ma'lumotlar (2c, d-rasm) PT IF va real vaqtda RT PCR yordamida tahlil qilingan jigar saratoni hujayralarida IL{24}} darajasini PTdan keyin 24 va 48 soatda ko'targanligini ko'rsatadi. PT tomonidan IL{28}} ning ortishi IL6 promotor faolligi bilan bogʻliqligini qoʻshimcha tavsiflash uchun biz IL-6 promotor konstruksiyalarini ifodalovchi vektor bilan barqaror transfektsiyalangan HepG2 va HuH7 hujayralari yordamida lusiferaza faolligi tahlillarini oʻtkazdik (2e-rasm). . Miqdoriy ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, PT 6 Gy (RBE) dan keyin 48 soatda IL{34}} promouter faolligini nazorat hujayralari bilan solishtirganda oshirgan.

3.2. Immunokompetent xostda PT davolashga javob

In vivo, hayvonlarning o'smalari modellari saratonga qarshi yangi strategiyalarning samaradorligini bashorat qilishda muhim vositadir. Biz PT ning HCC o'simtasini nazorat qilish bo'yicha ta'sirini o'rganish uchun singenik sichqon o'simtasi modellaridan foydalandik. Flüoresan molekulyar tomografiya (FMT) in situ tahlili va o'simta hajmini o'lchash orqali o'simta faolligini kuzatish asosida biz sham-RT bilan solishtirganda PTdan 12 kundan keyin o'simta glyukozasini qabul qilish faolligi sezilarli darajada pasayganligini va kichikroq o'smalar mavjudligini aniqladik (3a-rasm, b). PTga javob berish uchun mas'ul bo'lgan mexanizmni qo'shimcha tekshirish uchun biz PT yoki sham nurlanishidan 3 kun o'tgach, o'smalar yordamida FACS va immunofluoresans tahlillarini o'tkazdik. Kalretikulinga ta'sir qilish past dozali RT tomonidan qo'zg'atilgan apoptozning immunogen ko'rsatkichidir va HMGB1 yuqori dozali RT tomonidan induktsiya qilingan hujayra o'limi bilan bog'liq [29]. Bundan tashqari, IL-6 RT tomonidan qo'zg'atilgan immun modulyatsiyada rol o'ynashi xabar qilingan [30]. Ilgari biz IL{14}} ifodasi foton RT tomonidan tartibga solinganligi va IL6 ning ko'payishi jigar o'smalarining radiatsiya reaktsiyasi bilan bog'liqligi haqida xabar bergan edik [28]. Shakl 3c, d da ko'rsatilganidek, PT DNK shikastlanishining ko'payishi bilan bog'liq o'simta hujayralari o'limini va soxta nurlanish bilan solishtirganda IL6 va HMGB1 ifodasini oshirdi.

3.3. PT tomonidan qo'zg'atilgan immunomodulyatsion ta'sirlar

Makrofag M2 polarizatsiyasining induktsiyasi nurlangan o'simta mikromuhitida asosiy immunosupressiv komponent ekanligi xabar qilingan [17,18]. PT M2 hujayralariga monotsitlar differentsiatsiyasini kuchaytirganligini tekshirish uchun biz M2 polarizatsiyasi uchun THP-1 monotsitlarini dam olish bosqichida (M0) shartli muhitda 72 soat davomida inkubatsiya qildik. Keyin biz M2 makrofag polarizatsiyasining tugashidan 24 soat oldin PT-nurlangan HuH7 hujayralari bilan yoki bo'lmagan madaniyat supernatantida kokultura orqali monositlardan makrofaglardagi M2 marker darajasini tahlil qildik. 4a-rasmda ko'rsatilganidek, makrofag madaniyatiga PT-nurlangan saraton hujayralari qo'shilishi in vitro makrofaglarda M2 marker CD163 ifodasini oshirdi. Biz PT ning saraton hujayralarining 48 soat davomida PT bo'lgan yoki bo'lmagan saraton hujayralari bilan kokultura orqali donorlarning periferik qonidagi monotsitlardan MDSClarni keltirib chiqarish qobiliyatidagi rolini o'rganib chiqdik. MDSClarning yangi kichik to'plami PBMCdagi CD14+HLA-DR-hujayralari tomonidan aniqlandi. 4b-rasmda PT nurlanishi nazorat bilan solishtirganda CD14+ HLA-DR-miyeloid hujayralarining yuqori chastotasi bilan bog'liqligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, PT-nurlangan saraton hujayralari bilan birgalikda o'stirilgan hujayralar to'plamida MDSC vositachiligida immunosupressiyaning funktsional belgisi bo'lgan iNOS ning yuqori ifodasi mavjud edi (4c-rasm). Bundan tashqari, CD163 M2 va M1 makrofaglarini ajratish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan M2 makrofaglarining fenotipik belgisi ekanligi tasdiqlangan. 4d,e-rasmda ko'rsatilganidek, PT o'simtali sichqonlarda monositik MDSClarning induktsiyasi bilan bog'liq bo'lgan PT-nurlangan o'smalarda CD163+ hujayralarining ko'payishiga olib keldi. RT immunogen hujayra o'limini qo'zg'atadi va immun hujayra infiltratsiyasini kuchaytiradi. MDSC vositachiligida T-hujayralarini bostirishda saraton hujayralarining funktsional oqibatlarida PT rolini qo'shimcha tekshirish uchun 6 Gy (RBE) bo'lgan yoki bo'lmagan o'simta hujayralari mavjudligida tartiblangan CD{37}} T hujayralarining ko'payishi baholandi. ) PT nurlanishi. Ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, MDSC-CD11b + hujayralari T-hujayra proliferatsiyasini kamaytirdi va PT-nurlangan o'simta hujayralari bilan inkubatsiya stimulyatsiyadan keyin CD8+ T hujayralari proliferatsiyasini qaytardi (4f-rasm).

Shakl 2. HCC ning PTga in vitro javobi. PT davolashning HuH7 hujayralarining hujayra o'limiga ta'siri. (a) ko'rsatilgan doza (RBE) uchun PTdan 48 soat o'tgach propidiy yodid va Annexin V bilan bo'yalgan lyuminestsent bilan faollashtirilgan hujayralarni saralash va (b) nazorat sharoitida omon qolish fraktsiyasi bilan normallashtirilgan nisbat bilan taqdim etilgan klonogen tahlillar bo'yicha hujayra omon qolish fraktsiyalari. 0, 3, 6 va 9 Gy (RBE) uchun qoplama hujayra raqamlari har bir quduq uchun mos ravishda 5{23}}0, 1000, 1500 va 3000 ni tashkil etdi. (c) PT tomonidan qo'zg'atilgan DNKning shikastlanishi va immunogenlik hujayra o'limi belgilari uchun immunofluoressensiya vakili slaydlar va miqdoriy ma'lumotlar bilan ko'rsatilgan (DAPI, ko'k; pH 2AX va kalretikulin, yashil; HMGB1 va IL6, qizil). Y o'qi maqsadli oqsil ifodalarida nisbiy katlama o'zgarishlarini ifodalaydi. (d) IL-6 darajalari PTdan 48 soat keyin real vaqt rejimida RT-PCR orqali tekshirildi. (e) HepG2 va HuH7 hujayralarining IL-6promotor-reportyor konstruktsiyalarini o'z ichiga olgan plazmidlar bilan barqaror transfeksiyasi. Qiymatlar ko'rsatilgan holatda reportyor plazmidning lyusiferaza faolligini katlama faollashtirish sifatida ifodalanadi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xatolar sifatida taqdim etiladi. * p <0,05

Shakl 3. Immunitetga ega sichqonlarda PT davolashga javob. Vakil tasvirlar va miqdoriy ma'lumotlar PT nurlanishi bilan yoki bo'lmagan holda 0, 3 yoki 12 kunlarda glyukoza qabul qilinishining FMT tahlili orqali aniqlandi (a). Y-o'qi soxta nurlanish bilan 0 kunlik o'simta qiymati bilan normallashtirilgan nisbatni ifodalaydi. 12 Gy (RBE) PT yoki soxta nurlanishdan keyin 12 kundan keyin sk o'simtalari bo'lgan sichqonlardan olingan o'simta rasmlari (b) vakillik tasvirlari va miqdoriy ma'lumotlari ko'rsatilgan. Y o'qi PT dan keyin ko'rsatilgan vaqtda o'simta hajmining nisbiy burma o'zgarishini ifodalaydi. IF (c) tomonidan DNKning shikastlanishi va FACS (d) tomonidan hujayra o'limi PTdan 3 kun o'tgach baholandi. Y o'qi - maqsadli protein ifodalarining nisbiy o'zgarishi va PTdan keyin 3 kun ichida hujayra o'lim darajasi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xatolar sifatida taqdim etiladi. * p < 0.05

3.4. Dasturlashtirilgan hujayra o'limi ligand 1 (PD-L1) ifodasida PTning roli

PD-L1 immun o'simta mikro muhitida muvozanatning muhim determinantidir [31]. PT jigar o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasini oshirdi va ifoda darajasi in vitro PT ning RBE dozasi bilan ijobiy bog'liq edi (5a, b-rasm). PT ning PD-L1 ga in vivo ta'sirini yanada tasdiqlash uchun biz IF va FACS yordamida sichqonchaning HCC o'smalarida PD-L1 ning ifoda darajasini tekshirdik. 5c,d-rasmdagi ma'lumotlar PTdan 3 kun o'tgach o'smalarda PD-L1 ifodasining sezilarli darajada oshishini ko'rsatadi. Shuningdek, biz PT o'smalardan tartiblangan CD11b + miyeloid hujayralari yordamida MDSC'larda PD-L1 ifodasini tartibga soladimi yoki yo'qligini tekshirdik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, PT tartiblangan CD11b + hujayralarida PD-L1 ifodasini oshirdi (5e, f-rasm).

3.5. PD-L1 ning HCC ning PT In Vivo ga javobiga ta'siri

PD-L1 ning immunokompetent xostlarda jigar o'smalarining PTga radiosensitivligida rol o'ynaydimi yoki yo'qligini aniqlash uchun PT 12 Gy (RBE) bilan mahalliy RT sichqonlarga teri ostiga implantatsiya qilingan o'smalarga anti-PD-L1 davosi bo'lgan yoki bo'lmagan holda qo'llanildi. Shakl 6a-c da ko'rsatilganidek, anti-PD-L1 nurlanishdan keyin hujayra proliferatsiyasining pasayishi va hujayra o'limining kuchayishi bilan bog'liq bo'lgan PT-induktsiyali o'simtani inhibe qilish ta'sirini kuchaytirdi. Bundan tashqari, anti-PD-L1 ning PT dan keyin immun o'sma mikro muhitiga tartibga soluvchi ta'sirini tasdiqlash uchun biz murin HCC ortotopik o'simta modeli yordamida immun javobini tekshirdik. Ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, anti-PD-L1 MDSC to'planishini susaytirdi va faqat PT bilan solishtirganda kichikroq o'smalar bilan bog'liq CD{15}} TILlarni ko'paytirdi (6d-f-rasm)

3.6. PD-L1 blokadasi PTdan keyin jigar saratoniga abskopal ta'sirni kuchaytiradi.

Radiatsiya uzoq, davolanmagan saraton joylariga abskopal ta'sir ko'rsatishi haqida xabar berilgan, ular immunomodulyatsiya qiluvchi dorilarni qo'llash orqali kuchaytiriladi [32-34]. Shunga ko'ra, biz jigar o'smalariga PT tomonidan qo'zg'atilgan abskopal ta'sirni va anti-PD-L1 antikori bilan birgalikda davolashning ta'sirini ko'rib chiqdik. Shakl 7a, b va qo'shimcha S1-rasmda ko'rsatilganidek, o'simtaga mahalliy PTni qo'llash o'ng son ustidagi nurlangan o'smalarda glyukoza almashinuvi past bo'lgan kichikroq o'smalarni keltirib chiqardi, ammo orqa tomonning yuqori qismidagi ikkilamchi nurlanmagan o'smalarda sezilarli o'smani inhibe qilmadi. , sham-RT guruhi bilan solishtirganda. PTdan so'ng darhol anti-PD-L1 antikori bilan birgalikda davolash PT bilan nurlangan maydonda o'simtani yo'q qilish ta'sirini kuchaytirdi va nurlangan maydondan tashqarida ikkilamchi o'smalarning regressiyasiga olib keldi. O'simtani infiltratsiya qiluvchi immun hujayralari tahlili shuni ko'rsatdiki, anti-PD-L1 MDSC to'planishini susaytirdi, CD{16}} TILlarni ko'paytirdi va mahalliy PTni birlamchi o'smalarga qabul qilgan sichqonlarning nurlanmagan o'smalarida hujayra proliferatsiyasini kamaytirdi (7c,d-rasm). Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, anti-PD-L1 o'simtaga qarshi immun javobni kuchaytirdi va mahalliy PT nurlanishidan keyin immunokompetent xostlarda abskopal ta'sirni kuchaytirdi.

Shakl 4. PT bilan bog'liq immun javob. M2 makrofag polarizatsiyasining oxirida hujayralardagi CD163 markerining ifodasi FACS (a) orqali tahlil qilindi (I: nazorat; II: + saraton hujayralari madaniyati supernatant; III: + saraton hujayralari; IV: +6 Gy (RBE) PT-nurlangan saraton hujayralari madaniyati supernatant; V: +6 Gy (RBE) PT-nurlangan saraton hujayralari). 48 soat davomida 0, 3 yoki 6 Gy (RBE) bilan nurlangan HuH7 xujayralari bilan yoki ularsiz inkubatsiya qilingan PBMC'lardagi CD14+HLA-DR− hujayralarining foizi tahlil qilindi (b) va ifoda Saralangan CD14+HLA-DR− hujayralaridagi iNOS soni IF (DAPI, ko‘k; iNOS, qizil) (c) orqali tahlil qilindi. PTdan 12 kun o'tgach, nurlangan o'smalardagi CD{18}} hujayralarining darajasi IF (DAPI, ko'k; CD163, qizil) (d) orqali tekshirildi va PT nurlanishining monositik-MDSC jalb qilinishiga ta'siri FACS orqali baholandi ( e). Bundan tashqari, T-hujayralarining ko'payish tezligi PT-nurlangan saraton hujayralari bilan inkubatsiyalangan yoki inkubatsiya qilinmasdan FACS orqali tekshirildi. Reprezentativ tasvirlar va miqdoriy ma'lumotlar ko'rsatilgan (f). Davolashda CD8+ T xujayralari anti-CD3/CD28 stimulyatorli MDSC borligida va PT nurlanishi bilan yoki bo'lmagan saraton hujayralari bilan birlashtirilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xatolar sifatida taqdim etiladi. * p < 0.05.

Shakl 5. PT ning PD-L1 ifodasiga ta'siri. PD-L1 darajalari (a) IF (DAPI, ko'k; PD-L1, yashil), (b) PT in vitrodan keyin 48 soat ichida inson va sichqon jigar saratoni hujayralari uchun FACS bo'yash va (c) FACS, va (d) in vivo 12 Gy (RBE) uchun PTdan keyin ko'rsatilgan vaqtlarda sichqon jigari o'smalari uchun IF. Y o'qi - PT dan keyin ko'rsatilgan sharoitlarda PD-L1 ifodasining nisbiy katlama o'zgarishi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xatolar sifatida taqdim etiladi. * p < 0.05. Bundan tashqari, PT nurlanishidan so'ng sichqonchaning CD11b + hujayralarida PD-L1 ifodasi (e) IF va (f) FACS tahlillari (CD11b + hujayralari, ko'k dog'lar) orqali baholandi.

Shakl 6. PD-L1 ning HCC ning PTga in vivo javobiga ta'siri. (a) Anti-PD-L1 terapiyasining o'simta o'sishi kechikishiga ta'siri. Y o'qi - bu PTdan keyin anti-PD-L1 tomonidan qo'zg'atilgan teri osti o'simtasi hajmining nisbiy katlam o'zgarishi. Ma'lumotlar tajriba vositalarini ifodalaydi, * p < {{10}}.05. (b) Annexin V-PI bo'yash bilan FACS yordamida baholangan davolash natijasida kelib chiqqan apoptozning in vivo ta'siri. Y o'qi - bu PTdan keyin hujayra o'lim darajasining nisbiy o'zgarishi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart xatolar sifatida taqdim etiladi. * p <0,05. (c) 12 Gy (RBE) uchun PTdan keyin ko'rsatilgan vaqtlarda o'smalarda RT ta'sir qilgan DNK shikastlanishi va Ki-67 uchun immunohistokimyo. (d) Anti-PD-L1 terapiyasining o'simta inhibisyoniga ta'siri ortotopik o'simta modelida baholandi. Vakillik tasvirlari va miqdoriy ma'lumotlar mahalliy PT nurlanishi yoki soxta nurlanishdan 12 kun o'tgach ko'rsatiladi. Y o'qi - jigar o'simtasi hajmining nisbiy katlam o'zgarishi. Ma'lumotlar eksperiment vositalarini ifodalaydi, * p <0,05. (e) PTdan 12 kun o'tgach nurlangan o'smalardagi ki67+, CD{28}}TIL va CD11b+ hujayralarining miqdori IF (DAPI, ko'k; ki-67 va CD3, yashil ranglar yordamida tekshirildi. CD11b, qizil). (f) Anti-PD-L1 ning PT nurlanishi bilan birlashtirilgan MDSC ishga olishiga ta'siri FACS yordamida baholandi

Shakl 7. PTdan keyin jigar saratoniga abskopal ta'sir. Yuqori orqa qismidagi nurlanmagan o'smalarning o'sishi FMT tahlili (a) va o'simta rasmlari (b) 12 Gy (RBE) uchun PT olgan sichqonlardan faqat o'ng son ustidagi birlamchi o'simtaga ko'rsatilgan vaqtlarda aniqlandi ( PT (+): sichqonlar o'ng son ustidagi birlamchi o'simtaga 12 Gy (RBE) olishdi, lekin yuqori orqa tarafdagi ikkilamchi o'simtaga emas). Nurlanmagan o'smalarning vakillik tasvirlari va miqdoriy ma'lumotlari anti-PD-L1 terapiyasi bilan yoki bo'lmagan holda PT nurlanishidan keyin 0, 3 va 12 kunlarda ko'rsatilgan. Y o'qi FMT qiymatining nisbiy o'zgarishini va PTdan keyin ko'rsatilgan vaqtda o'simta hajmini ifodalaydi. Bundan tashqari, IF yordamida mahalliy PTdan 12 kun o'tgach, ikkilamchi nurlanmagan o'smalarda ki-67 darajasi va CD11b+ hujayralari va CD3+ hujayralari infiltratsiyasining vakili tasvirlari ko'rsatilgan (DAPI, ko'k; ki{{16) }} va CD3, yashil; CD11b, qizil) (c). Ikkilamchi nurlanmagan o'simtada MDSC (d) ning to'planishi oqim sitometriyasi yordamida tahlil qilindi. Y o'qi - bu nisbiy burma o'zgarishi. Ma'lumotlar tajriba vositalarini ifodalaydi, * p < 0.05

4. Munozara

Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, PT tomonidan qo'zg'atilgan koloniya hosil qiluvchi hujayralarning yo'qolishi dozaga bog'liq va foton nurlanishidan kelib chiqqaniga o'xshaydi. Radiatsiya ta'sirida DNKning tuzatilmagan shikastlanish darajasi to'qimalarga xos radiatsiya reaktsiyasining asosiy omili hisoblanadi. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, PT tomonidan qo'zg'atilgan hujayra o'limi DNKning shikastlanish belgilari darajasining oshishi bilan bog'liq. O'simta bilan bog'liq bo'lgan bir nechta sitokinlar nurlanish bilan tartibga solinishi va o'simta mikro-muhitida immunitetning pastki guruhlarini jalb qilish va qutblanish qobiliyatiga ega ekanligi xabar qilinadi [35,36]. Ilgari biz IL{6}} ifodasi foton RT tomonidan tartibga solinganligi va IL6 ning ko'payishi jigar o'smalarining radiatsiya reaktsiyasi bilan bog'liqligi haqida xabar bergan edik [28]. Preklinik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, PT dan keyin yallig'lanish omillarining foton nurlanishiga qarshi, shu jumladan IL-6 uchun differensial regulyatsiyasi mavjud [6,7,37]. Biz uyali tajribalar yordamida PT nurlanishi dozaga bog'liq holda IL-6 ifoda darajasini ham oshirganini ko'rsatamiz. O'simtaning davolanishga javob berishiga o'simta hujayralarining ko'payishi va o'sma mikro muhiti ta'sir qiladi. Sichqoncha modellaridan foydalanish davolash javobini baholash uchun optimal strategiya hisoblanadi. Bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, hozirgi kunga qadar bir nechta preklinik qatorlar jigar o'smalarining PTga javobini taqdim etgan. Ushbu tadqiqotda jigar o'simtasi bo'lgan sichqonlarda PT tomonidan qo'zg'atilgan o'simta hujayralarining o'limi va o'simta o'sishi kechikishi haqidagi in vivo ma'lumotlar ko'rsatildi. Uyali radiosensitivlikka qo'shimcha ravishda, in vivo radioterapiyadan so'ng o'smaning qayta o'sishiga bir nechta yallig'lanish va stromal omillar ta'sir qilishi mumkin [38,39]. Immunitet bilan bog'liq bo'lgan turli xil quyi oqim ta'siri RT tomonidan qo'zg'atiladi, shu jumladan immunostimulyator va immunosupressiv ta'sirlar. RT immunogen hujayralar o'limini qo'zg'atish orqali saratonga qarshi immunitetni rag'batlantiradi, immun tizimining tarkibiy qismlariga yangi antijenlarni chiqaradi, bu esa effektor T hujayralarining yaxshilanishi va faollashishiga olib keladi. Boshqa tomondan, RT nurlangan mikromuhitga MDSClarni jalb qilish kabi immunosupressiv ta'sirga olib keladi [39,40]. MDSClarni jalb qilish RT dan keyin immunosupressiv o'sma mikro muhitini belgilovchi omil hisoblanadi. MDSC'lar saraton va boshqa patologik sharoitlarda immunitet reaktsiyalarining asosiy regulyatorlari sifatida paydo bo'ldi. Dalillar MDSC ning o'simta rivojlanishiga asosiy hissasini qo'llab-quvvatlaydi. Biz ilgari MDSC ning ortishi RT tomonidan qo'zg'atilishi mumkinligi va o'sish HCC hayvon modelida RT qarshiligi bilan bog'liqligi haqida xabar bergan edik [28]. Taqdim etilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, PT o'simtali sichqonlarda monositik MDSClarning induktsiyasi bilan bog'liq bo'lgan MDSC yollanishining faollashishiga olib keladi. Monotsitik MDSC sifatida aniqlangan MDSClarning yangi kichik to'plami bemorlarning periferik qonidan CD{24}}HLA-DR− monotsitlari va sichqonlarda CD11b+Ly6G- [20,23,41] sifatida aniqlanadi. T-hujayra inhibisyonining funktsional belgisi sifatida iNOS ifodasi MDSC funktsiyasini baholash uchun oltin standartdir [42]. Saraton hujayralari bilan PBMC inkubatsiyasidan foydalangan holda o'tkazilgan tajribalar shuni ko'rsatdiki, PT saraton hujayralarining monotsitlarda MDSClarni qo'zg'atish qobiliyatini oshirdi va hujayralar kichik to'plamida iNOS ifodasini oshirdi. Bundan tashqari, bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, CD11b + hujayralari bilan kokultura T-hujayra proliferatsiyasini kamaytirdi va PT-nurlangan saraton kokultura tajribalarida CD11b + hujayralarining T-hujayra proliferatsiyasiga bostirish qobiliyatini susaytirdi.

Miyeloid hujayralar avlodi ko'pchilik saraton bemorlarida mavjud bo'lgan va o'smaga qarshi immunitet hosil bo'lishini chuqur inhibe qiluvchi immunitetni susaytiruvchi hujayralar tarmog'ini tashkil etishi xabar qilingan. Makrofaglar, o'simta mikro muhitida ko'p miqdorda immun hujayralari surunkali yallig'lanishning muhim regulyatorlari hisoblanadi. Makrofaglar M2 fenotipiga qarab qutblanishi mumkin, bu esa immunosupressiv mikromuhitga yordam beradi [43]. O'simtalardagi mononuklear hujayralar, ehtimol, monotsitlar/monotsitik-MDSClardan o'simta bilan bog'langan M2 makrofaglarigacha bo'lgan turli xil differensiatsiya bosqichlarida mavjud. MDSC va o'simta bilan bog'liq M2 makrofaglari o'rtasidagi ushbu tarmoq M2 ni monositik MDSClardan ajratish mumkinligini ko'rsatadi. Dalillar shuni ko'rsatadiki, RT immun javobni modulyatsiya qilish uchun M1 / ​​M2 polarizatsiyasi bilan makrofaglarda tartibga soluvchi rol o'ynaydi [44,45]. Biz PT-nurlangan hujayralar bilan kokultura in vitro M2 markerlari va in vivo PT-nurlangan o'simtalarning ifodalanishini oshirganligini ko'rsatdik. Antikanser immun javoblarining faollashishi RT samaradorligi uchun juda muhimdir.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

HCC rivojlanishi va rivojlanishida bir nechta immun mexanizmlar muhim ahamiyatga ega va prognoz bilan bog'liq. PD1 va PDL1ni maqsad qilgan nazorat nuqtasi inhibitörleri rivojlangan HCC ga qarshi faol, bardoshli va klinik jihatdan foydalidir [46]. PD-L1, asosiy hujayrali biomarker, immunitetdan qochishda rol o'ynaydi, shu jumladan T-hujayralari vositachiligida immun nazoratini inhibe qilish va M2 makrofag polarizatsiyasini tartibga solish [13,31,47]. PD-1/PD-L1 o'qining yuqori regulyatsiyasi T hujayralarining sitotoksik ta'sirini bostirish uchun kuzatildi, bu esa o'simtadan qochadigan xost immun javoblarining sababi bo'lishi mumkin va nurlanishdan keyin o'simta hujayralarining to'liq nobud bo'lishi mumkin. PD-L1 gematopoetik hujayralarda, shu jumladan T hujayralarida, makrofaglarda va o'simta hujayralarida keng tarqalgan. PD-1/PD-L1 - bu T-hujayralarining anergiyasini keltirib chiqaradigan muhim immun nazorat nuqtasi. Immunitetni nazorat qilish punkti blokadasi bo'lgan PD-L1 ga antikorlar ba'zi saraton kasalliklarining adjuvan terapiyasi va rivojlangan HCC bemorlari uchun istiqbolli immunoterapiya sifatida tasdiqlangan [48,49]. PDL1 ingibitorlari klinik amaliyotda yoki HCC uchun ishlab chiqilayotgan tizimli terapiyaning asoslaridan biridir. Bundan tashqari, RT tomonidan qo'zg'atilgan immunosupressiv ta'sirlar ushbu immunosupressiv ta'sirlarni bekor qilish uchun radiatsiyani immunoterapiyaning turli shakllari bilan muvaffaqiyatli birlashtirish potentsialini ochib beradi. MDSClar immunitetni nazorat qilish punktining inhibisyoniga bemorning qarshiligiga hissa qo'shishi mumkin. Biz PT o'smalar va MDSClarda PD-L1 ning in vitro va in vivo jonli ravishda dozaga bog'liq holda ifodalanishini ko'targanligini ko'rsatdik. RT tomonidan qo'zg'atilgan immunosupressiv ta'sirlar ushbu immunosupressiv ta'sirlarni bekor qilish uchun nurlanishni immunoterapiyaning turli shakllari bilan muvaffaqiyatli birlashtirish potentsialini ochib beradi. Klinikadan oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, foton RT va immunoterapiya kombinatsiyasi o'sma nazoratini yaxshilash uchun terapevtik sinergizmni namoyish etadi [15]. Ma'lumki, RT va immunoterapiyaning kombinatsiyasi hali ham dastlabki bosqichda va RT dozasi, RT turlari yoki RT va immunoterapiya uchun ketma-ketlikning optimal spetsifikatsiyalari mavjud emas. Immunoterapiya bilan birgalikda PT nurlanishiga oid bu masalani tushuntirish uchun biz singenik o'sma modellarida jigar o'smalarini PT nurlanishi bilan anti-PD-L1 terapiyasini birlashtirdik. Anti-PD-L1 antikorlari bilan kombinatsiya jigar saratonini PT nurlanishiga sezgirlashini aniqladik, bu o'simta hujayralarining o'limining kuchayishi bilan bog'liq bo'lgan kichikroq o'simta tomonidan ko'rsatilgan. Bundan tashqari, anti-PD-L1 terapiyasi MDSC to'planishini inhibe qildi va PT-nurlangan o'smalarda CD{41}} T hujayralari filtratsiyasini oshirdi.

Klassik ravishda RT radiatsiya sohasida DNKning ichki shikastlanishi orqali o'simta hujayralarini o'ldiradigan mahalliy terapiya sifatida qaraladi. Bundan tashqari, radiatsiyaga abskopal javob yaxshi tasdiqlangan hodisa bo'lib, radiatsiya maydonidan tashqaridagi o'smalar ham davolanishga javob beradi. Abskopal ta'sir immun vositachilik bilan bog'liq deb hisoblanadi. Terapevtik dozalarda nurlanishdan foydalanilganda, o'simta ichidagi saraton hujayralarining bir qismi immunogen hujayralar o'limi orqali nobud bo'ladi. RT tomonidan qo'zg'atilgan o'simta hujayralarining o'limi o'ziga xos molekulyar signallarning paydo bo'lishi va immunitet tizimining tarkibiy qismlariga ko'proq antijenler taqdim etilishi bilan bog'liq. Xabar qilinishicha, RT immunitet bilan bog'liq abskopal ta'sirni keltirib chiqarishi mumkin, bu RT nafaqat maqsadli o'simtaga o'simtaga qarshi ta'sir ko'rsatadi, balki saratonning uzoq, davolanmagan joylariga ham antitumor ta'sir ko'rsatadi [32,50,51]. RT tomonidan qo'zg'atilgan omillar orasida radiatsiyaning saraton hujayralarini T hujayralari tomonidan tan olinishiga yordam berish qobiliyati abskopal ta'sir uchun alohida ahamiyatga ega. Bu ta'sir immunomodulyatsion vositalar yordamida kuchaytirilishi mumkin bo'lgan o'smaga qarshi immunitetni rag'batlantirish uchun o'simta hujayralarining o'limi bilan bog'liq. Bundan tashqari, pembrolizumab ob'ektiv remissiyalarning 15-20% ni keltirib chiqaradi, bu HCCda uzoq umr ko'rish bilan bog'liq [46]. Tekshirish punkti ingibitorlari bilan bog'liq muhim nuqta - ularning samaradorligi va xavfsizligi. Immunoterapiya barcha bemorlar uchun foyda keltirmasligi aniq. O'simtaning immunoterapiyaga chidamliligini qanday engish muhim masala. O'simta qarshiligining potentsial sabablari orasida ichki qarshilik va immunoterapiya faoliyatini neytrallashtiradigan giyohvandlikka qarshi antikorlarning rivojlanishi kiradi. Immunitetning kuchli stimulyatsiyasini olish uchun turli xil mahalliy terapiya ketma-ket yoki bir vaqtning o'zida tizimli immunoterapiya bilan birlashtirilishi mumkin. Immunoterapiya HCCdagi mahalliy aralashuvlar bilan uyg'unlashishi mumkin. HCC ko'pincha multifokal bo'lib, potentsial prekanseroz hududlar butun metaxron sifatida rivojlanadi. Bu erda biz PT ning anti-PD-L1 bilan kombinatsiyasi metaxron jigar o'smalarini nazorat qilishni kuchaytirish uchun PTning abskopal ta'sirini kuchaytiradimi yoki yo'qligini ko'rib chiqdik. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, PT ning anti-PD-L1 bilan kombinatsiyasi ikkilamchi nurlanmagan o'smalarda faqat PT yoki anti-PD-L1 tomonidan qo'zg'atilganlarga nisbatan kichikroq o'simta o'lchamlarini keltirib chiqardi. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, anti-PD-L1 bilan kombinatsiya mahalliy PT olgan sichqonlarning uzoqdagi nurlanmagan o'smalarida kengaytirilgan TILlar va zaiflashgan MDSC jalb qilinishi bilan bog'liq. Bu natijalar shuni ko'rsatadiki, anti-PD-L1 o'simtaga qarshi immunitetni kuchaytirdi, bu o'simtani o'ldirishning asosiy faolligi va mahalliy PT nurlanishini olgan o'simtali sichqonlarda abskopal ta'sir ko'rsatdi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

5. Xulosalar

Radioterapiya va immunoterapiyani birlashtirishning mantiqiy sababi shundaki, radiatsiya sinergik o'smaga qarshi immunitet hosil qilishi mumkin va immunoterapiya nurlangan o'simta mikromuhitida immunitetni bostirish reaktsiyalarini engib chiqadi. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, biz saraton hujayralariga biologik ta'sir qilishdan tashqari, PT o'simta mikro muhitida immun modulyatsiya ta'siriga ham ega ekanligini taklif qilamiz. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, anti-PD-L1 saratonga qarshi immunitetni keltirib chiqardi va keyinchalik birlamchi va uzoq o'smalarning PT nurlanishiga javobini kuchaytirdi. Anti-PD-L1 ni PT bilan birgalikda qo'llash HCCni davolash uchun istiqbolli strategiya bo'lishi mumkin.

Ma'lumotnomalar

1. Bray, F.; Ferlay, J.; Soerjomataram, I.; Sigel, R.-L.; Torre, L.-A.; Jemal, A. Global saraton statistikasi 2018: GLOBOCAN 185 mamlakatda 36 saraton kasalligi uchun dunyo bo'ylab insidans va o'lim ko'rsatkichlari. CA saratoni J. Clin. 2018, 68, 394–424. [CrossRef]

2. Chuong, M.; Kayzer, A.; Molitoris, J.; Mendez Romero, A.; Apisarnthanarax, S. Jigar saratoni uchun proton nurlari terapiyasi. J. Gastrointest. Onkol. 2020, 11, 157–165. [CrossRef]

3. Yoo, G.-S.; Yu, J.-I.; Park, H.-C. Gepatotsellyulyar karsinoma uchun proton terapiyasi: hozirgi bilim va kelajak istiqbollari. Jahon J. Gastroenterol. 2018 yil, 24, 3090–3100. [CrossRef]

4. Yuan, T.-Z.; Jan, Z.-J.; Qian, C.-N. Proton terapiyasining yangi chegaralari: saraton kasalliklarida qo'llanilishi. Saraton kasalligi. 2019, 39, 61. [CrossRef] [PubMed]

5. Deykmar, S.; Faccin, E.; Kazimova, T.; Knobel, P.-A.; Telarovich, I.; Tschanz, F.; Valler, V.; Winkler, R.; Yong, C.; Zingariello, D. DNK shikastlanishining tiklanishiga bog'liq bo'lgan proton nurlanishining nisbiy biologik samaradorligi. Br. J. Radiol. 2020, 93, 20190494. [CrossRef] [PubMed]

6. Luhr, A.; fon Neubek, C.; Krause, M.; Troost, EGC Proton nurlari terapiyasida nisbiy biologik samaradorlik - Hozirgi bilim va kelajakdagi muammolar. Klin. Tarjima. Radiat. Onkol. 2018, 9, 35–41. [CrossRef]

7. Girdhani, S.; Saks, R.; Hlatky, L. Proton nurlanishining biologik ta'siri: biz bilgan va bilmagan narsalar. Radiat. Res. 2013, 179, 257–272. [CrossRef]

8. Van Limbergen, E.-J.; De Ruysscher, D.-K.; Olivo Pimentel, V.; Markus, D.; Berbi, M.; Xyoben, A.; Rekers, N.; Ular, J.; Yaromina, A.; Dubois, L.-J.; va boshqalar. Radioterapiyani immunoterapiya bilan birlashtirish: o'tmish, hozirgi va kelajak. Br. J. Radiol. 2017, 90, 20170157. [CrossRef]

9. Shabason, J.-E.; Minn, A.-J. Radiatsiya va immunitetni nazorat qilish punkti blokadasi: dastgohdan klinikaga. Semin. Radiat. Onkol. 2017, 27, 289–298. [CrossRef] [PubMed]

10. Lu, C.; Rong, D.; Chjan, B.; Chjen V.; Vang, X.; Chen, Z.; Tang, W. Gepatotsellyulyar karsinomada immunosupressiv o'sma mikro muhitiga oid hozirgi istiqbollar: muammolar va imkoniyatlar. Mol. Saraton 2019, 18, 130. [CrossRef]

11. Berd, J.-R.; Monjazeb, A.-M.; Shoh, O.; MakGi, H.; Merfi, W.-J.; Krittenden, M.-R.; Gough, M.-J. Radiatsiya terapiyasidan kelib chiqqan o'sma nazoratini kuchaytirish uchun tug'ma immunitetni rag'batlantirish. Int. J. Radiat. Onkol. Biol. fizika. 2017, 99, 362–373. [CrossRef]

12. Bernshteyn, M.-B.; Krishnan, S.; Xodj, J.-V.; Chang, J.-Y. Immunoterapiya va stereotaktik ablativ radioterapiya (ISABR): davolovchi yondashuv? Nat. Ruhoniy Klin. Onkol. 2016, 13, 516–524. [CrossRef] [PubMed]

13. Pilones, K.-A.; Vanpouille-Box, C.; Demaria, S. Radioterapiya va immun nazorat nuqtasi inhibitörlerinin kombinatsiyasi. Semin. Radiat. Onkol. 2015, 25, 28–33. [CrossRef] [PubMed]

14. Ishixara, D.; Pop, L.; Takeshima, T.; Iyengar, P.; Xannan, R. Radiatsiya terapiyasi va saratonni davolash uchun immunoterapiyani birlashtirish uchun asoslar va dalillar. Saraton immunol. Immuno-boshqa. 2017, 66, 281–298. [CrossRef]

15. Li, Y.-H.; Tai, D.; Yip, C.; Choo, S.-P.; Chew, V. Gepatotsellyulyar karsinoma uchun kombinatsiyalangan immunoterapiya: radioterapiya, immun nazorat nuqtasi blokadasi va undan tashqari. Old. Immunol. 2020, 11, 568759. [CrossRef] [PubMed]

16. Choy, C.; Yoo, G.-S.; Cho, V.-K.; Park, H.-C. Gepatotsellyulyar karsinomada immun nazorat nuqtasi blokadasi bilan radiatsiya terapiyasini optimallashtirish. Jahon J. Gastroenterol. 2019, 25, 2416–2429. [CrossRef]

17. Genin, M.; Klement, F.; Fattaccioli, A.; Raes, M.; Michiels, C. THP-1 hujayralaridan olingan M1 va M2 makrofaglari saraton hujayralarining etoposidga javobini differentsial tarzda modulyatsiya qiladi. BMC saratoni 2015, 15, 577. [CrossRef] [PubMed]

18. Guo, F.; Feng, Y.-C.; Chjao, G.; Chjan, R.; Cheng, Z.-Z.; Kong, V.-N.; Vu, H.-L.; Xu, B.; Lv, X.; Ma, XM o'simtasi bilan bog'liq CD163 (+) M2 makrofag infiltratsiyasi bachadon bo'yni saratonida PD-L1 ifodasi bilan yuqori darajada bog'liq. Saraton boshqaruvchisi. Res. 2020, 12, 5831–5843. [CrossRef]

19. Kassetta, L.; Noy, R.; Swierczak, A.; Sugano, G.; Smit, H.; Wiechmann, L.; Pollard, J.-V. Sichqoncha va odam o'simtasi bilan bog'liq makrofaglarning izolyatsiyasi. Adv. Exp. Med. Biol. 2016, 899, 211–229.

20. Chikamatsu, K.; Sakakura, K.; Toyoda, M.; Takaxashi, K.; Yamamoto, T.; Masuyama, K. Bosh va bo'yinning skuamoz hujayrali karsinomasida CD14+ HLA-DR- hujayralarining immunosupressiv faolligi. Saraton fanlari. 2012, 103, 976–983. [CrossRef]

21. Chen, M.-F.; Kuan, F.-C.; Yen, T.-C.; Lu, M.-S.; Lin, P.-Y.; Chung, Y.-H.; Chen, V.-C.; Li, K.-D. IL{9}}stimulyatsiya qilingan CD11b+ CD14+ HLA-DR- miyeloiddan kelib chiqqan supressor hujayralar qizilo'ngachning skuamoz hujayrali karsinomasida prognoz va yomon prognoz bilan bog'liq. Oncotarget 2014, 5, 8716–8728. [CrossRef]

22. Paganetti, H. Proton nurlari terapiyasi uchun nisbiy biologik samaradorlik (RBE) qiymatlari. Biologik so'nggi nuqta, doza va chiziqli energiya uzatish funktsiyasi sifatida o'zgarishlar. fizika. Med. Biol. 2014, 59, R419–R472. [CrossRef] [PubMed]

23. Bronte, V.; Brandau, S.; Chen, S.-H.; Kolombo, M.-P.; Frey, A.-B.; Greten, T.-F.; Mandruzzato, S.; Myurrey, P.-J.; Ochoa, A.; Ostrand Rosenberg, S.; va boshqalar. Miyeloiddan olingan bostiruvchi hujayralar nomenklaturasi va tavsiflash standartlari bo'yicha tavsiyalar. Nat. Kommun. 2016, 7, 12150. [CrossRef]

24. Kertis, M.-J.; Bond, R.-A.; Spina, D.; Ahluvaliya, A.; Aleksandr, SPA; Giembycz, M.-A.; Gilchrist, A.; Xoyer, D.; Insel, P.-A.; Izzo, A.-A. Eksperimental dizayn va tahlil va ularning hisoboti: BJPda nashr qilish uchun yangi qo'llanma. Br. J. Farmakol. 2015, 172, 3461–3471. [CrossRef]

25. Xaykerval, S.-J.; Xagekyriakou, J.; MakManus, M.; Martin, O.-A.; Haynes, N.-M. Radiatsiya terapiyasi yordamida saraton kasalligiga qarshi immunitetni shakllantirish. Saraton Lett. 2015, 368, 198–208. [CrossRef] [PubMed]

26. Yuan, S.; Liu, Z.; Syu, Z.; Liu, J.; Chjan, J. Yuqori harakatchanlik guruhi qutisi 1 (HMGB1): Gematopoetik malign o'smalarning asosiy regulyatori. J. Gematol. Onkol. 2020, 13, 91. [CrossRef] [PubMed]

27. Suzuki, Y.; Mimura, K.; Yoshimoto, Y.; Vatanabe, M.; Ohkubo, Y.; Izava, S.; Murata, K.; Fuji, X.; Nakano, T.; Kono, K. Qizilo'ngachning skuamoz hujayrali karsinomasi bo'lgan bemorlarda kemoradioterapiya natijasida kelib chiqqan immunogen o'simta hujayralari o'limi. Saraton. Res. 2012, 72, 3967–3976. [CrossRef]

28. Chen, M.-F.; Hsieh, C.-C.; Chen, V.-C.; Lai, C.-H. Jigar o'smalarining radiatsiya reaktsiyasida interleykin-6 roli. Int. J. Radiat. Onkol. Biol. fizika. 2012, 84, e621–e630. [CrossRef] [PubMed]

29. Liao, Y.; Liu, S.; Fu, S.; Wu, J. HMGB1 radioterapiyada: o'simtaning radiosensitivligi va immunitetini tartibga soluvchi ikki boshli signal. Onkol. Maqsadlar Ther. 2020, 13, 6859–6871. [CrossRef]

30. Guo, Y.; Xu, F.; Lu, T.; Duan, Z.; Zhang, Z. Interleukin -6 saraton uchun maqsadli terapiyada signalizatsiya yo'li. Saraton kasalligini davolash. Rev. 2012, 38, 904–910. [CrossRef]

31. Afreen, S.; Dermime, S. Immunoinhibitor B7-H1 molekulasi saraton kasalligida potentsial maqsad sifatida: bir tosh bilan ko'plab qushlarni o'ldirish. Gematol. Onkol. Poyasi. Hujayra. U erda. 2014, 7, 1–17. [CrossRef]

32. Formenti, S.-C.; Demaria, S. O'simtani in situ vaktsinasiga aylantirish uchun radiatsiya terapiyasi. Int. J. Radiat. Onkol. Biol. fizika. 2012, 84, 879–880. [CrossRef]

33. Rodriges-Ruis, M.-E.; Vitale, I.; Xarrington, K.-J.; Melero, I.; Galluzzi, L. Radiatsiya bilan boshqariladigan hujayra o'limi signalining o'simta mikro muhitiga immunologik ta'siri. Nat. Immunol. 2020, 21, 120–134. [CrossRef]

34. Liu, Y.; Dong, Y.; Kong, L.; Shi, F.; Chju, X.; Yu, J. Immunitetni nazorat qilish punkti inhibitörleri bilan birgalikda radioterapiyaning abskopal ta'siri. J. Gematol. Onkol. 2018, 11, 104. [CrossRef] [PubMed] 35. Xill, R.-P. Nurlanishga o'simta javobining o'zgaruvchan paradigmasi. Br. J. Radiol. 2017, 90, 20160474. [CrossRef]

36. Mukerji, S.; Chakraborty, A. Radiatsiyadan kelib chiqqan kuzatuvchi hodisasi: radiatsiya terapiyasida tushuncha va ta'sir. Int. J. Radiat. Biol. 2019, 95, 243–263. [CrossRef] [PubMed]

37. Gameyro, S.-R.; Malamas, A.-S.; Bernshteyn, M.-B.; Tsang, K.-Y.; Vassantakart, A.; Sahoo, N.; Tikuvchi, R.; Pidikiti, R.; Guha, C.-P.; Han, S.-M.; va boshqalar. Proton yoki foton nurlanishi ta'sirida omon qolgan o'simta hujayralari umumiy immunogen modulyatsiya belgisiga ega bo'lib, ularni T hujayra vositachiligida o'ldirishga nisbatan sezgirroq qiladi. Int. J. Radiat. Onkol. Biol. fizika. 2016, 95, 120–130. [CrossRef]

38. Quyosh, Y.; Nelson, P.-S. Molekulyar yo'llar: Saraton terapiyasiga qarshilik ko'rsatishda mikromuhitga zarar etkazadigan javoblarni o'z ichiga oladi. Klin. Saraton Res. 2012, 18, 4019–4025. [CrossRef] [PubMed]

39. Kozin, S.-V.; Kamoun, V.-S.; Huang, Y.; Douson, M.-R.; Jain, R.-K.; Duda, D.-G. Miyeloid emas, balki endotelial prekursor hujayralarini jalb qilish mahalliy nurlanishdan keyin o'simtaning qayta o'sishini osonlashtiradi. Saraton Res. 2010, 70, 5679–5685. [CrossRef] [PubMed]

40. Kao, J.; Ko, E.-C.; Eyzenshteyn, S.; Sikora, A.-G.; Fu, S.; Chen, S.-H. Onkologiyada immunitetni bostiruvchi miyeloiddan kelib chiqqan bostiruvchi hujayralarni maqsad qilib olish. Krit. Rev. Onkol. Gematol. 2011, 77, 12–19. [CrossRef]

41. Xoechst, B.; Ormandy, LA; Ballmayer, M.; Lener, F.; Krüger, C.; Manns, deputat; Greten, TF; Korangy, F. Gepatotsellyulyar karsinomali bemorlarda miyeloid kelib chiqadigan supressor hujayralarining yangi populyatsiyasi CD4 (+) CD25 (+) Foxp3 (+) T hujayralarini keltirib chiqaradi. Gastroenterologiya 2008, 135, 234-243. [CrossRef] [PubMed]

42. Xsu, C.-Y.; Lin, Y.-C.; Chang, L.-Y.; Huang, S.-K.; Huang, C.-H.; Yang, C.-K.; Huang, C.-T.; Lin, C.-Y. Asetaminofen tomonidan qo'zg'atilgan murin jigar etishmovchiligida miyeloiddan olingan bostiruvchi hujayralarni ifodalovchi induksiyalangan azot oksidi sintazasining terapevtik roli. Old. Immunol. 2020, 11, 574839. [CrossRef]

43. Pollard, J.-V. O'simta o'qimishli makrofaglar o'simtaning rivojlanishi va metastaziga yordam beradi. Nat. Rev. Saraton 2004, 4, 71-78. [CrossRef] [PubMed]

44. Vang, L.-X.; Chjan, S.-X.; Vu, H.-J.; Rong, X.-L.; Guo, J. M2b makrofaglarning polarizatsiyasi va uning kasalliklardagi roli. J. Leukok. Biol. 2019, 106, 345–358. [CrossRef] [PubMed]

45. Chiang, C.-S.; Fu, S.-Y.; Vang, S.-C.; Yu, C.-F.; Chen, F.-H.; Lin, C.-M.; Xong, J.-H. Nurlanish o'simta gipoksiyasida m2 makrofag fenotipiga yordam beradi. Old. Onkol. 2012, 2, 89. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Sangro, B.; Sarobe, P.; Hervas-Stubbs, S.; Melero, I. Gepatotsellyulyar karsinoma uchun immunoterapiyadagi yutuqlar. Nat. Rev. Gastroenterol. Gepatol. 2021, 18, 525–543. [CrossRef]

47. Lu, D.; Ni, Z.; Liu, X.; Feng, S.; Dong, X.; Shi, X.; Chjay, J.; May, S.; Jiang, J.; Vang, Z.; va boshqalar. T hujayralaridan tashqari: o'simta bilan bog'liq makrofaglarda PD-1/PD-L1 rolini tushunish. J. Immunol. Res. 2019, 2019, 1919082. [CrossRef]

48. Cheng, A.-L.; Xsu, C.; Chan, S.-L.; Choo, S.-P.; Kudo, M. Gepatotsellyulyar karsinoma uchun immun nazorat nuqtasi inhibitörleri bilan kombinatsiyalangan terapiya muammolari. J. Gepatol. 2020, 72, 307–319. [CrossRef]

49. Hack, S.-P.; Spahn, J.; Chen, M.; Cheng, A.-L.; Kaseb, A.; Rahmat, M.; Li, HC; Yopp, A.; Chou, P.; Qin, S. IMbrave 050: davolovchi rezektsiya yoki ablasyondan so'ng yuqori xavfli gepatotsellyulyar karsinomada atezoli zumab va bevacizumabning III bosqich sinovi. Kelajak Onkol. 2020, 16, 975–989. [CrossRef]

50. Park, S.-S.; Dong, X.; Liu, X.; Xarrington, S.-M.; Krko, C.-J.; Grams, M.-P.; Mansfild, A.-S.; Furutani, K.-M.; Olivier, K.-R.; Kvon, E.-D. PD-1 Radioterapiyadan kelib chiqqan abskopal effektni cheklaydi. Saraton immunol. Res. 2015, 3, 610–619. [CrossRef]

51. Demariya, S.; Ng, B.; Devitt, M.-L.; Babb, J.-S.; Kavashima, N.; Liebes, L.; Formenti, S.-C. Uzoqda davolanmagan o'smalarni ionlashtiruvchi nurlanishni inhibe qilish (abskopal ta'sir) immun vositachiligida. Int. J. Radiat. Onkol. Biol. fizika. 2004, 58, 862–870. [CrossRef] [PubMed]