Pullet emlashning immunitetni rivojlantirish va uzoq umr ko'rishga ta'siri 1-qism

Annotatsiya:

Parrandalarning respirator kasalligi tijorat parrandalarida katta iqtisodiy yo'qotishlarga olib keladi. Uzoq umr ko'radigan parrandalarni erta yoshdan boshlab nafas yo'llarining patogenlaridan himoya qilish zarurati tufayli pulletlar uchun emlash dasturlari odatda yuqumli bronxit virusi (IBV), Nyukasl kasalligi virusi (NDV) va yuqumli kasalliklarni o'z ichiga olgan turli xil vaktsinalarni ketma-ket yuborishni o'z ichiga oladi. laringotraxeit virusi (ILTV). Ko'pincha emlashlar orasidagi interval faqat bir necha haftani tashkil qiladi, ammo bu qushlarda vaktsinalar qisqa vaqt ichida berilganda immunitetning rivojlanishi va muammolardan himoyalanish virusli interferensiya deb ataladigan narsa noma'lum. Bizning maqsadimiz IBV, NDV va ILTV ga qarshi ketma-ket qo'llaniladigan jonli zaiflashtirilgan vaktsinalar immunitetning rivojlanishi va uzoq umr ko'rishiga va uzoq umr ko'radigan qushlarning muammolaridan himoyalanishiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini aniqlash edi.

Oddiy pullet emlash dasturiga asoslanib, o'ziga xos patogensiz oq leghornlarga IBV, NDV va ILTV ga qarshi 16 haftalik (WOA) ga qarshi bir nechta jonli zaiflashtirilgan vaktsinalar qo'llanildi, shundan so'ng ma'lum guruhlar IBV, NDV yoki ILTV bilan e'tiroz bildirildi. 20, 24, 28, 32 va 36 WOA da. Qiyinchilikdan besh kun o'tgach, virus yuki, klinik belgilar, kriyostaz, traxeya gistopatologiyasi va sarum va ko'z yoshlaridagi antikor titrlari baholandi. Biz IBV, NDV va ILTV ga qarshi jonli susaytiruvchi vaktsinalar ketma-ket kiritilgan pulletlar kamida 36 hafta davomida IBV, NDV yoki ILTV bilan gomologik chaqiruvdan himoyalanganligini ko'rsatamiz va ushbu tadqiqotda ishlatiladigan emlashlar orasidagi interval (kamida 2 hafta) degan xulosaga keldik. ) himoya qilishga xalaqit bermadi. Ushbu ma'lumot juda muhim, chunki u bir nechta nafas yo'llarining patogenlariga qarshi ketma-ket yuboriladigan jonli zaiflashtirilgan vaktsinalardan iborat tipik pullet emlash dasturi har bir kasallik agentiga qarshi himoya immunitetini rivojlanishiga olib kelishi mumkinligini ko'rsatadi.

Immunitet haqida gapiradigan bo'lsak, inson tanasida immunitetni yaxshilaydigan ko'plab narsalar mavjud, masalan, Cistanche, shuningdek, biologik faol moddalarga boy, masalan, peptidlar, terpenlar, fenolik kislotalar va boshqalar, immunitet hujayralarining faollashishini rag'batlantirishi mumkin. immunitet hujayralarini yaxshilash. vazifasini bajaradi va tananing immunitetini oshiradi. Bu biologik faol moddalar organizmning otoimmün funksiyasini ham tartibga solib, faollashtirishi, inson immunitetini yanada yaxshilashi mumkin.

Cistanche qabul qilish uchun bosing

Kalit so‘zlar:

Yuqumli bronxit virusi; Nyukasl kasalligi virusi; yuqumli laringotraxeit virusi; emlash dasturi; immunitet; nafas olish kasalliklari; kriyostaz; antikor reaktsiyasi.

1.Kirish

Respirator virusli kasalliklarga qarshi emlash tijorat parrandachilik operatsiyalarida standart amaliyotdir. Tirik va o'ldirilgan vaktsinalar parranda go'shtiga qo'llaniladi va jonli vaktsinalar ko'pincha turli patogenlar uchun qo'llaniladi, chunki ular ommaviy qo'llanilganda samarali va nisbatan tejamkor [1]. Umuman olganda, jonli vaktsinalar mahalliy va hujayrali immunitetni keltirib chiqaradi va o'ldirilgan vaktsinalarga qaraganda kengroq himoya ta'sirini ta'minlaydi, o'ldirilgan vaktsinalar birinchi navbatda gumoral immunitetni keltirib chiqaradi va antigenga xosdir. Jonli vaktsinani qo'llashdan keyin erishilgan immunitetning davomiyligi qushning yoshi va turiga, ona immuniteti darajasiga, vaktsina tomonidan maqsad qilingan kasallikka, vaktsinaning immunogenligiga, vaktsinani qo'llash usuliga, kuchaytiruvchilar soni va orasidagi intervalga, virulentlik va o'xshashlikka bog'liq. dala chaqiruvi virusi, emlash va chaqiruv o'rtasidagi interval va xostning immuniteti [1-3].

Parranda koronavirusi yuqumli bronxit virusi (IBV) parrandalarning yuqori nafas yo‘llarining virusli patogeni bo‘lib, vazn ortishi va ozuqa samaradorligining pasayishiga, tuxum ishlab chiqarish va tuxum sifatining pasayishiga, o‘sishning sekinlashishiga va havosakkulitga olib keladigan ikkilamchi bakterial infeksiyaga olib keladi [4]. Virus dastlab yuqori nafas yo‘llarida, so‘ngra reproduktiv tizimda ko‘payadi va ba’zi shtammlar buyrakda shikastlanishga olib kelishi mumkin [4]. Infektsiyalangan qushlarda burun oqishi, yo'talish, aksirish va traxeyada toshmalar paydo bo'lishi mumkin [4]. Kasallik emlash orqali oldini oladi va jonli vaktsinalar odatda mahalliy immunitet va himoyani qo'zg'atish uchun ishlatiladi. Erta himoyalanish uchun odatda yosh qushlarga jonli vaktsinalar qo'llaniladi va qatlamlar va naslchilar ham jonli yoki faol bo'lmagan vaktsinalar bilan kuchaytiriladi, ular aylanma dala viruslariga o'xshashligiga qarab farqlanadi [2].

Nyukasl kasalligi (ND) parranda paramiksovirusining 1-toifa virulent shtammlari tufayli yuzaga keladi, u yaqinda parranda avulavirusi 1 (AAvV-1) sifatida qayta tasniflangan [5]. Virusning turiga qarab, ND infektsiyasining klinik belgilari yo'q bo'lishi mumkin yoki depressiya, ishtahani yo'qotish, nafas olish belgilari (burundan oqindi, hapşırma, yo'tal), tuxum ishlab chiqarish va tuxum sifatining pasayishi va nevrologik belgilar (tortikollis, aylanma, falaj) bo'lishi mumkin. ) [3]. Nyukasl kasalligi virusi (NDV) shtammlari embrionlardagi o'rtacha o'lim vaqtiga ko'ra lentogenik, mezogenik va velogenik sifatida tavsiflanadi [6]. Lentogen shtammlar past patogenli bo'lib, engil nafas yo'llari yoki ichak infektsiyalarini, keyin esa mezogen shtammlarni keltirib chiqaradi, velogenik izolatlar esa yuqori darajada patogen bo'lib, ko'pincha nevrologik belgilar va o'limga olib keladi [3]. NDV ga qarshi emlash rejimlari turlicha bo'lib, ular jonli, faolsizlangan va virus-vektorli vaktsinalarning kombinatsiyasidan foydalanishi mumkin [7]. Qo'shma Shtatlarda eng ko'p ishlatiladigan an'anaviy vaktsina shtammlari lentogenik B1 (yoki B1 shtammining virus klonlari) va LaSota shtammlarini o'z ichiga oladi [3].

Yuqumli laringotraxeit (ILT) parranda go'shtining o'tlangan alfaherpes virusi I keltirib chiqaradigan respirator kasalligi bo'lib, butun dunyoda iqtisodiy ahamiyatga ega [8]. ILT ning klinik ko'rinishlariga o'limning ko'payishi, tuxum ishlab chiqarishning kamayishi, tana vaznining kamayishi, kon'yunktivit, og'ir holatlarda qonli shilimshiq ekspektoratsiya bilan kechadigan traxeit, depressiya, og'ir nafas qisilishi va boshqa nafas yo'llarining patogenlariga sezuvchanlik kiradi. ILT virusiga (ILTV) qarshi jonli vaktsinalar tovuq embrioni (CEO) yoki to'qima madaniyati kelib chiqishi (TCO) bo'lishi mumkin, bunda ular mos ravishda tuxum yoki to'qima madaniyatida bir necha marta o'tkaziladi. ILT uchun rekombinant vaktsinalar tijoratda mavjud bo'lsa-da, CEO vaktsinasi butun dunyo bo'ylab ILTVga qarshi eng keng tarqalgan vaktsina hisoblanadi.

Tovuqlarni erta yoshdan boshlab turli virusli patogenlardan himoya qilish zarurati tufayli, emlash dasturlari odatda turli patogenlarga qarshi bir nechta vaktsinalarni o'z ichiga oladi. Turli parrandachilik tarmoqlarida namunaviy emlash rejimlari Merck veterinariya qo'llanmasida ko'rib chiqiladi, bunda emlashlar orasidagi interval ko'pincha bir necha haftani tashkil qiladi.

Biroq, emlashlar orasidagi intervallar qushlar har bir virusning qiyinchiliklariga qarshi etarli immunitetni rivojlantirish uchun etarli ekanligini ko'rsatadigan ma'lumotlar kam. Adabiyot shuni ko'rsatadiki, ketma-ket virusli infektsiyalar virusli interferensiyaga olib kelishi mumkin, bunda bir virus boshqa virusning xostdagi keyingi infektsiyasini va/yoki replikatsiyasini bloklaydi [9,10], ammo hozirgacha bu hodisa himoyaning pasayishiga olib keladimi yoki yo'qmi noma'lum. tovuqlarga ketma-ket yuborilgan attenuatsiyalangan jonli vaktsinalardan. Qizig'i shundaki, tovuqlar yoki kurkalarga viruslarni bir vaqtning o'zida yuborish virusning aralashuviga olib kelmaydi [11]. Ushbu tadqiqotda biz ketma-ket qo'llaniladigan, jonli zaiflashtirilgan virusli respirator kasalliklarga qarshi vaktsinalarning kombinatsiyasidan tashkil topgan odatiy tijorat emlash jadvali immunitetning rivojlanishi va uzoq umr ko'rishiga va gomologik muammolardan himoyalanishiga qanday ta'sir qilishini o'rganamiz.

2. Materiallar va usullar

2.1. Viruslar

Ushbu tadqiqotda MILDVAC-GA-98® (Merck Animal Health, Summit, NJ, AQSh) tijorat IBV vaktsinasidan foydalanilgan. Vaktsina ishlab chiqaruvchining tavsiyalariga muvofiq suyultirildi. Amaldagi sinov virusi IBV GA98/CWL0474/98 bo'lib, o'rtacha embrion yuqumli dozada (EID50) 103.19 da tayyorlangan. Virus titrlari Rid va Muench usuli bilan hisoblangan [12]. Tijoriy NDV vaktsinasi B1 (NEWHATCH-C2, Merck Animal Health, Summit, NJ, AQSH) emlash va sinov uchun ishlatilgan va ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq qayta tiklangan.

NDV ning mezogen va velogenik shtammlari BSL2 dan yuqori bioxavfsizlik darajasini talab qilganligi sababli, bu bizning laboratoriyamizda mavjud emas, bizning NDV dan himoyalanish bo'yicha eksperimental modelimiz virus titrlarini sezilarli darajada kamaytiradi yoki vaktsina virusi bilan ikkinchi ta'sirga (sinov) qarshi steril immunitetni o'z ichiga oladi. ILTV tijorat bosh direktori vaktsinasi (Trachivax® Merck Animal Health, Summit, NJ, AQSh) va patogen ILTV Georgia broyler shtammi 63140 [13] mos ravishda emlash va sinov uchun ishlatilgan. 63140 shtammi 3-dan 4-haftalik o'ziga xos patogensiz (SPF) tovuqlardan olingan tovuq buyrak hujayralarida ko'paytirildi [14]. CEO vaktsinasi ishlab chiqaruvchining tavsiyalariga binoan tayyorlangan. Emlashdan so'ng, o'rtacha to'qima madaniyati infektsion dozasi (TCID50) yuqorida tavsiflanganidek, tovuq buyrak hujayralarida ikkala virusni titrlash orqali tasdiqlandi [14].

2.2. Eksperimental dizayn

O'ziga xos patogensiz tuxumlar 18 kunlik inkubatsiyada olingan va Parrandachilik diagnostika va tadqiqot markazida, Afina, GA da tuxumdan chiqarilgan. Jo'jalar koloniya uylari va qalamlarida yangi qarag'ay talaşlariga joylashtirildi. Jo'jalar ishlab chiqaruvchilar tomonidan tavsiya etilgan 100 mkl dozada quyidagi sxema bo'yicha okulonazal yo'l orqali emlandi; IBV 1 DOA da, NDV 2 haftalik (WOA), IBV 4 WOA, ILTV 8 WOA, NDV 12 WOA va ILTV 16 WOA.

Bundan tashqari, nazorat guruhi emlanmagan. Gomologik sinovlar 20, 24, 28, 32 va 36 WOA da o'tkazildi va o'limlar sinovdan besh kun o'tgach amalga oshirildi (dpc). Qiyinchilikda qushlar to'rtta muolajadan birini oldi: IBV GA98, NDV B1, ILTV 63140 yoki hech qanday muammo yo'q. Vaqt nuqtasi bo'yicha har bir chaqiriq virusi uchun davolash guruhlari quyidagicha edi: emlanmagan, sinovdan o'tkazilmagan (n=9–10); emlangan, e'tirozsiz (n=9–10); emlangan, chaqirilgan (n=17–19); emlanmagan, muammoli (n=9–10). Barcha IBV bilan sinovdan o'tgan qushlar intranazal 100 µL uchun har bir qush uchun 1 × 103,2 EID50 olishdi. NDV sinovidan o'tgan barcha qushlar NDV B1 vaktsinasini ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq qayta tiklangan 100 mkl intranazal tarzda oldilar. ILTV sinovidan o'tgan barcha qushlar 63140 patogen shtammni har bir qush uchun 1 × 103,5 TCID50 dozasida ko'z tomchilari va burun ichi yo'llari o'rtasida teng ravishda bo'lingan 100 µLda qabul qildilar. IBV va NDV muammolari uchun qushlar nafas olish belgilari uchun 5 dpc da kuzatilgan, avvalroq [15]: 0=yo'q; 1=engil; 2=oʻrtacha; 3=og'ir. ILTV muammolari uchun qushlar yuqorida aytib o'tilganidek, nafas qisilishi, kon'yunktivit, depressiya va o'lim uchun 3 va 5 dpc da kuzatilgan [16].

Choanal yoriq (IBV- va NDV-challenge va 5 dpc da nazorat qushlar) yoki traxeya (ILTV sinovi va 3 va 5 dpc da nazorat qushlar) virus aniqlash uchun tampon qilindi va tamponlar PBS −80 ◦C da saqlangan. 28, 32 va 36 WOA da ko'zga granullangan NaCl qo'shib 50 µL ko'z yoshlar yig'ildi. Qon qanot yoki yurak ponksiyoni bilan to'plangan va antikorlarni aniqlash uchun sarum to'plash uchun mikrotsentrifuga naychasiga qo'shilgan. Qushlar inson tomonidan evtanizatsiya qilindi va Fabriciusning ko'z qovog'i, Harderian bezi (HG), timus, jigar, taloq, ko'richak bodomsimon bezlari va bursa virusni aniqlash uchun -80 ◦C da va 10 foiz neytral tamponlangan formalinda to'plandi va saqlangan. Traxeya olib tashlandi, bir qismi 10 foiz neytral tamponlangan formalinga joylashtirildi va traxeyaning qolgan qismi quyida tasvirlangan ikonostaz testi uchun to'qima madaniyati muhitiga botirildi. Jarayonlar Jorjiya universiteti hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan (AUP №: A2015 05-001-R2).

2.3. Siliostaz testi

Ikonostaz testi 37 ◦C da hujayra madaniyati muhitida (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) yig'ilgan traxeyalarda o'tkazildi. Har bir traxeya uchun qalinligi taxminan 1 mm bo'lgan beshta traxeya halqalari kesilgan va ular proksimal, o'rta va distal qismlarni ifodalagan [17,18]. Cilia faolligi teskari mikroskop yordamida kuzatilgan (Olimp, Center Valley, PA, AQSh). Baholash tizimi 0=barcha kipriklarning urishiga amal qiladi; kirpiklar urishining 1=75 foizi; kirpiklar urishining 2=50 foizi; kirpiklar urishining 3=25 foizi; 4=ilgari ta'riflanganidek [17] kiprikchalar urilmaydi. Har bir traxeya uchun mumkin bo'lgan maksimal ball - 20. Har bir traxeya halqasi uchta shaxs tomonidan baholandi va har bir traxeya uchun o'rtacha umumiy ball hisoblab chiqildi. Har bir guruh uchun ikonostazni himoya qilish balli quyidagi formula bo'yicha aniqlandi: 100 - [(guruh uchun individual ballar jami)/(guruhdagi shaxslar soni × 20) × 100] va undan katta yoki teng ball 50 gacha himoyalangan deb topildi.

2.4. Traxeya gistopatologiyasi

Har bir traxeyaning bir qismi 10 foiz neytral tamponlangan formalinda mahkamlangan, qayta ishlangan va kerosinga solingan va gematoksilin va eozin bilan bo'yash uchun 5-mkm bo'laklar kesilgan. IBV lezyonlari uchun epiteliya giperplaziyasi, limfotsitlar infiltratsiyasi va epiteliya desiliatsiyasi har bir traxeya uchun baholandi. Ballar quyidagicha aniqlandi: 1=normal, 2=fokal, 3=multifokal va 4=tarqoq, avvalroq [19]. NDV lezyonlari uchun tavsifiy tahlil o'tkazildi. ILTV lezyonlari uchun mikroskopik lezyonlar avval aytib o'tilganidek, 0-5 (normaldan juda og'irgacha) shkala bo'yicha baholandi [20].

2.5. RNK ekstraktsiyasi va miqdoriy teskari transkriptaza polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qRT-PCR)

IBV va NDVni aniqlash uchun har bir tampondan 50 µL PBS dan virusli RNK ekstraktsiyasi MagMAX™ Express{{{ 3}} Chuqur quduqli magnit zarrachalar protsessori (Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSh), ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Miqdoriy teskari transkripsiya polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qRT-PCR) ishlab chiqaruvchining protokoliga binoan AgPath-IDTM One-Step RT-PCR to'plami (Thermo Fisher, Waltham, MA, AQSh) bilan amalga oshirildi. Har bir 25-mL reaksiya aralashmasida 12,5 mkl 2× RT-PCR buferi, 10 mkM har bir primer, 4 mkM zond, 1 mkl 25× RT-PCR ferment aralashmasi va 5 mkl virusli RNK mavjud edi. qRT-PCR reaktsiyalari Applied Biosystems® 7500 Fast Realtime PCR tizimida (Life Technologies Ltd., Carlsbad, CA, AQSH) quyidagi sharoitlarda bajarildi: 30 daqiqa davomida 50 ◦C va 95 ◦C 15 daqiqa davomida bir tsikl. , keyin 1 s uchun 94 ◦C va 60 s uchun 60 ◦C 40 tsikl. IBV qRT-PCR uchun primerlar va zondlar avval chop etilgan [21] va ular IBV50GU391 (50 -GCT TTT GAG CCT AGC GTT-30 ), teskari primer IBV50GL533 ({)dan iborat. {38}}GCC ATG TTG TCA CTG TCT ATT G-30 ) va Taqman® ikki yorliqli IBV50G zond (50 -FAM-CAC CAC CAG AAC CTG TCA CCT C-BHQ{{45} }}). NDV qRT-PCR uchun primerlar va problar avval tasvirlangan [22] va NDV M plyus 4100 (5'-AGT GAT GTG CTC GGA CCT TC-3'), teskari NDV M primeridan iborat. -4220 (5'-CCT GAG GAG AGG CAT TTG CTA-3') va Taqman® ikki yorliqli probi NDV M plus 4169 (5'-FAM-TTC TCT AGC AGT GGG ACA GCC TGC) -BHQ1-3').

Primerlar Integrated DNA Technologies (Coralville, IA, AQSH) dan olingan va Taqman probi BioSearch Technologies (Novato, CA, AQSh) tomonidan sintez qilingan. Haqiqiy vaqtda RT-PCR komponentlari va termosikl parametrlari ilgari tasvirlangan [21]. Ma'lumotlar har bir guruhdagi barcha namunalar uchun o'rtacha sikl chegarasi (CT) qiymati sifatida ifodalanadi, tuxumlarda virusni aniqlash bilan bog'liq bo'lgan ushbu test uchun aniqlash chegarasiga asoslangan ijobiy KT qiymatlari [23].

Har bir qRT-PCR reaktsiya plitasi RNK ekstraktsiya nazorati va ijobiy nazorat sifatida standart egri chiziqni o'z ichiga oladi. Standart egri chiziq uchun shablon sifatida allantoik suyuqlikdan ajratilgan GA98 IBV ishlatilgan. Salbiy nazorat elementlari ham har bir plastinkaga kiritilgan va RNKsiz PCR reagentlaridan iborat edi.

2.6. DNK ekstraktsiyasi

ILTV uchun umumiy DNK yuqorida tavsiflanganidek, MegaZorb® DNK ekstraktsiyasi miniprep 96-quduqlari to'plami (Promega, Madison, WI, AQSH) yordamida traxeya tamponlaridan olingan [24].

2.7. qPCR

ILTVda UL44 virusli geni fragmentini va tovuq alfa 2- kollagen geni fragmentini kuchaytiruvchi real vaqtda ikki tomonlama PCR tahlili amalga oshirildi [25].

2.8. Qon zardobidagi yuqumli bronxit virusi (IBV)ga xos IgG antikor titrlari

IBV-ga xos IgG titrlari tijorat IgG fermenti bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) IBV antikorlari test to'plami (IDEXX, Westbrook, ME, AQSH) yordamida aniqlandi. Qisqacha aytganda, sarum namunalari (−20 ◦C da saqlanadi) 1:500 nisbatda suyultirildi va protsedura ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq amalga oshirildi.

2.9. Ko'z yoshi bilan ajratilgan IBVga xos IgA antikor titrlari

Ko'z yoshi IBVga xos IgA tijorat IgG ELISA IBV antikorlari testi to'plami (IDEXX, Westbrook, ME, AQSH) yordamida aniqlandi. Qisqacha aytganda, ko'z yoshlari PBSda ikki marta ketma-ket suyultirildi va ikki nusxadagi quduqlarda bir kechada 4 ◦C da inkubatsiya qilindi. Barcha yuvish bosqichlari PBS-Tween 20 (0,05 foiz Tween 20) yordamida amalga oshirildi. Plitalar 23 °C da 2 soat davomida monoklonal sichqonchani tovuqga qarshi IgA-BIOT (1:1000, klon A-1, Southern Biotech, Birmingham, AL, AQSH), keyin 1 soat davomida Streptavidin-HRP da inkubatsiya qilindi. 1:4000, Southern Biotech, Birmingem, AL, AQSH). Yakuniy antikorlarni aniqlash bosqichlari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq yakunlandi. Oxirgi nuqta titrlari 650 nm to'lqin uzunligida qayd etilgan optik zichlik (OD) yirtiq namunalarsiz inkubatsiya qilingan 12 nazorat qudug'ining o'rtacha qiymatidan kamida uchta standart og'ish yuqori bo'lgan eng past suyultirish haqida xabar berish orqali aniqlandi. Qoldiq substrat yoki havo pufakchalari tufayli aniq rangi o'zgargan quduqlardan olingan ma'lumotlar tahlildan chiqarib tashlandi va natijalar oxirgi nuqta titrining log2 sifatida xabar qilindi.

2.10. Statistik tahlil

Ma'lumotlar Prism v.6.0 dasturi (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, AQSh) yordamida tahlil qilindi. Virusli yuk ma'lumotlari uchun har bir yig'ish davrida davolash guruhlarini solishtirish uchun Dunnetning posttesti bilan bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) ishlatilgan. Boshqa barcha ma'lumotlar har bir yig'ish davrida davolash guruhlarini solishtirish uchun Dunnning posttesti bilan Kruskal-Uollis testi yordamida tahlil qilindi. Muhim farqlar p < 0.05 da aniqlandi.

3. Natijalar

3.1. Yuqumli bronxit virusi

IBV GA98 bilan sinovdan o'tgandan keyin 5 kun ichida emlangan/imtihon qilingan qushlar 24 WOA da ko'richak bodomsimonidan tashqari barcha to'qimalar namunalarida va barcha to'qimalar namunalarida ijobiy nazorat bilan solishtirganda RNK yukini sezilarli darajada kamaytirdi (1-jadval). Vaktsinatsiyalangan nazorat guruhlarida IBV RNK 20 va 24 WOA da ko'richak bodomsimon bezlari va 20 WOA xoanal yoriqdan tashqari barcha yig'ish vaqtlarida aniqlanmagan. Barcha to'qimalarda salbiy nazoratdagi IBV yuklari 24 WOA HG salbiy nazoratidan tashqari barcha yig'ish vaqtlarida avval xabar qilinganidek [23] 36,17 dan katta yoki teng KT qiymati yordamida aniqlash chegarasidan past bo'lgan.

Qiyinchilikdan keyingi 5 kun ichida o'lchangan IBV infektsiyasining klinik belgilari, 28 WOAdan tashqari barcha haftalarda ijobiy nazorat bilan solishtirganda, emlangan / sinovdan o'tgan qushlarda sezilarli darajada kamaydi, ammo emlangan / sinovdan o'tgan qushlar orasida klinik belgilar ko'rsatkichlari tendentsiyalari son jihatdan past edi (2-jadval). . Nazorat qilinmagan manfiy va emlangan nazorat qushlarida klinik belgilar yo'q edi va emlangan/cheklangan qushlardagi belgilar shubhasiz nazoratdagi belgilardan sezilarli darajada farq qilmadi.

1-jadval. IBV bilan sinovdan 5 kun o'tgach, xoanal yoriq, Harderiya bezi, kon'yunktiva va ko'richak bodomsimonidan to'plangan yuqumli bronxit virusi (IBV) RNK uchun o'rtacha miqdoriy teskari transkripsiya polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qRT-PCR) tsikli chegarasi (CT) qiymatlari GA98 20, 24, 28, 32 va 36 haftaliklarda. Harflar (a-d) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05).

Jadval 2. Klinik belgilar va mikroskopik lezyonlar IBV GA98 sinovidan keyin 5 kun o'tgach o'lchandi. Harflar (a–b) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p < 0.05).

Barcha guruhlardagi traxeyalarning gistopatologik tekshiruvi normal chegaralardan fokalgacha, multifokal minimal va o'rtacha darajadagi limfotsitik traxeit; ammo, ijobiy nazoratlarda o'rtacha limfotsitar infiltratsiya tez-tez kuzatilgan. Barcha haftalarda desiliatsiya yoki o'tkir traxeya nekrozi bo'lgan emlangan / qiyinchilikka uchragan qushlarning nisbati ijobiy nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaydi va salbiy va emlangan nazoratlardan farq qilmadi (2-jadval).

Ciliostasis, defined as the cessation of tracheal ciliary movement, was measured at 5 DPC, and the number of birds positive for cryostasis and cryostasis protection scores was calculated for each group (Figure 1). At all collection times, vaccinated/challenged birds were protected from cryostasis (scores were >50) va ijobiy nazorat himoyalanmagan (ballar<50). The non-challenged negative controls and vaccinated controls were protected (scores were >50) barcha yig'ish vaqtida.

Figure 1. Ciliostasis protection scores among tracheas were collected 5 days post-challenge with IBV GA98 for different groups of birds challenged at 20, 24, 28, 32, and 36 weeks of age (WOA). Groups with a protection score >50 (gorizontal chiziq) himoyalangan va himoya ball bilan guruhlar<50 are not protected. Fractions above each bar represent the proportion of birds positive for cryostasis for the respective group. −/− = non-vaccinated/non-challenged, +/− = vaccinated/non-challenged, +/+ = vaccinated/challenged, −/+ = non-vaccinated/challenged.

IBVga xos IgG titrlari 5 DPCda to'plangan sarumda o'lchandi. 32 WOA dan tashqari har doim ham sinovdan o'tkazilmagan, ham sinovdan o'tgan guruhlardagi emlangan qushlar emlanmagan va qiyin guruhlardagi emlanmagan qushlarga nisbatan sezilarli darajada yuqori titrlarni ko'rsatdi (2-rasm). 32 WOA da, emlangan qushlardagi titrlar, sinov holatidan qat'i nazar, ijobiy nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada yuqori edi. 36 WOA ga qadar emlangan/cheklangan qushlardagi titrlar emlangan/cheklangan qushlarning titrlari sezilarli darajada yuqori bo'lganida, emlangan nazoratdagi titrlardan sezilarli darajada farq qilmadi. Salbiy nazorat bilan solishtirganda, emlangan / sinovdan o'tgan qushlar har doim sezilarli darajada yuqori titrlarga ega edi.

IBVga xos IgA titrlari 28, 32 va 36 WOA da 5 DPCda yig'ilgan ko'z yoshlarida o'lchandi. 28 WOA da, emlangan / sinovdan o'tgan qushlardagi titrlar shubhali bo'lmagan salbiy nazoratdagi titrlarga nisbatan sezilarli darajada yuqori edi (3-rasm). 32 WOA da emlangan/imtihonga uchragan qushlar ijobiy nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada past titrlarni ko'rsatdi. Bundan tashqari, emlangan / sinovdan o'tgan qushlar 28 WOA da emlangan / shubhasiz guruhga qaraganda sezilarli darajada yuqori titrlarga ega edi. Boshqa muhim farqlar aniqlanmadi. Viruslar 2019.

2-rasm. Sarumdagi IBVga xos IgG titrlari 20, 24, 28, 32 va 36 WOA da sinovdan o'tgan qushlarning turli guruhlari uchun IBV GA98 bilan sinovdan 5 kun keyin to'plangan. Harflar (a-c) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05). −/−=emlanmagan/cheklanmagan, plyus /−=emlangan/imtihonsiz, plyus / plyus=emlangan/imtihon qilingan, −/ plyus=emlanmagan/imtihonsiz.

3-rasm. 20, 24, 28, 32 va 36 WOAda sinovdan o'tgan qushlarning turli guruhlari uchun IBV GA98 bilan sinovdan 5 kun o'tgach yig'ilgan IBVga xos IgA titrini yirtib tashlang. Harflar (a-c) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05). −/−=emlanmagan/cheklanmagan, plyus /−=emlangan/imtihonsiz, plyus / plyus=emlangan/imtihon qilingan, −/ plyus=emlanmagan/imtihonsiz.

3.2. Nyukasl kasalligi virusi (NDV)

NDV B1 bilan 5 dpc da emlangan/imtihonga uchragan qushlar aniqlanmaydigan RNK yuklariga ega bo'lgan yoki barcha yig'ish vaqtlarida va namuna olingan barcha to'qimalarda musbat nazorat titrlariga nisbatan sezilarli darajada past yuklangan (3-jadval). Oldin xabar qilinganidek, KT qiymati 35 dan katta yoki unga teng.0 dan foydalangan holda, shubhali bo'lmagan salbiy nazorat va emlangan nazorat RNK virusi uchun manfiy edi [22].

Jadval 3. NDV B1 vaktsinasi bilan sinovdan 5 kun o'tgach, xoanal yoriq, Harderian bezi va kon'yunktivadan olingan NDV RNK uchun o'rtacha qRT-PCR KT qiymatlari. Harflar (a–c) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasidagi sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p < 0.05).

5 dpc da o'lchangan klinik belgilar musbat nazoratlarda 20 WOA da muhim edi, shundan so'ng ijobiy nazoratdagi klinik belgilar boshqa davolash guruhlaridan hech qanday farq qilmadi (4-jadval). Har qanday vaqtda emlangan/imshonlangan qushlar va nazorat ostida bo'lmaganlar o'rtasida klinik belgilarda sezilarli farqlar mavjud emas edi. Barcha haftalarda traxeyaning gistopatologik tekshiruvi normal chegaralarda bo'lgan yoki fokaldan multifokal minimaldan engilgacha bo'lgan limfotsitar traxeitni aniqladi va guruhga bog'liq farqlar yo'q edi.

Traxeya ham kriyostaz uchun baholandi va hech bir guruh kriyostazni ko'rsatmadi.

Emlangan/qiyinchi qushlar va emlangan nazoratdagi NDVga xos sarum IgG titrlari barcha yig'ish vaqtlarida ham ijobiy, ham salbiy nazoratdagi titrlardan sezilarli darajada yuqori bo'lgan (4-rasm). Har qanday vaqtda emlangan/englangan qushlar va emlangan nazorat o'rtasida titrlarda sezilarli farq yo'q edi. Shunga o'xshab, emlanmagan/imtihon qilinmagan va salbiy nazoratlar o'rtasida titrlarda sezilarli farq aniqlanmadi, 28 WOA bundan mustasno, bunda emlanmagan/imtihon qilinmagan nazoratlarning titrlari sezilarli darajada yuqori bo'lgan.

Jadval 4. Klinik belgilar NDV B1 sinovidan keyin 5 kun o'tgach o'lchandi. Harflar (a–b) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p < 0.05).

4-rasm. Sarumdagi NDV-ga xos IgG titrlari 20, 24, 28, 32 va 36 WOA da sinovdan o'tgan qushlarning turli guruhlari uchun NDV B1 vaktsinasi bilan sinovdan 5 kun o'tgach to'plangan. Harflar (a-c) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05). −/−=emlanmagan/cheklanmagan, plyus /−=emlangan/imtihonsiz, plyus / plyus=emlangan/imtihon qilingan, −/ plyus=emlanmagan/imtihonsiz.

3.3. Yuqumli laringotraxeit virusi (ILTV)

ILTV shtammi 63140 bilan 5 dpc da, emlangan/imtihon qilingan qushlar barcha yig'ish vaqtlarida va barcha to'qimalarda musbat nazoratga qaraganda virusli DNK yuklarini sezilarli darajada kamaytirgan (5-jadval). Traxeya va HGdagi DNK yuklari aniqlanmaydi yoki past edi va ilgari xabar qilinganidek 38,0 dan katta yoki unga teng bo'lgan KT qiymatidan foydalangan holda manfiy bo'lgan, shubhasiz salbiy va emlangan nazoratdagi DNK yuklaridan sezilarli darajada farq qilmadi [26]. Kon'yunktivada emlangan/imtihonga uchragan qushlardagi DNK yuklari shubhasiz manfiy va emlangan nazoratdagi DNK yuklaridan sezilarli darajada yuqori bo'lgan, 28 WOA bundan mustasno, bunda emlangan/cheklangan qushlar va emlangan nazoratlar o'rtasida sezilarli farq aniqlanmagan.

Jadval 5. Patogen ILTV shtammi 63140 bilan sinovdan 5 kun o'tgach traxeya, Harderiya bezi va kon'yunktivadan to'plangan ILTV DNK uchun o'rtacha qPCR KT qiymatlari. Harflar (a-c) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05).

Klinik belgilar va virusli DNK 3 DPCda sinovdan o'tgan qushlarda aniqlandi, ammo traxeyadagi virus yuki ortishi bilan ijobiy nazorat belgilaridagi belgilar 5 dpc ga kuchaygan (6-jadval). 5 dpc da o'lchangan klinik belgilar ko'rsatkichlari, klinik belgilar soni kamaytirilganda, 36 WOAdan tashqari barcha yig'ish punktlarida, ijobiy nazorat bilan solishtirganda, emlangan/qiynoqqa solingan qushlarda sezilarli darajada kamaydi. Barcha salbiy nazoratlar va emlangan nazoratlar klinik belgilarga ega emas edi va emlangan/qiynoqqa solingan qushlardagi klinik belgilar ushbu nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada farq qilmadi, klinik belgilar ko'rsatkichlari sezilarli darajada yuqori bo'lgan 36 WOA bundan mustasno.

6-jadval. Klinik belgilar ILTV 63140 sinovidan keyin 5 kun o'tgach o'lchandi. Harflar (a-b) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05).

Traxeya gistologik tekshiruvi normal chegaralar ichida yoki barcha guruhlardagi traxeyalarda minimal va engil limfotsitar traxeitning diffuz fokusli ekanligini aniqladi. Ijobiy nazorat uchun 20 va 28-haftalarda mos ravishda 3/9 va 1/10, sinsitiya va intranuklear qo'shimchalar bilan o'tkir fokal nekrotizan traxeitga ega edi (5-rasm).

Shakl 5. Trakeal mikroskopik lezyonlar 20 haftalik infektsiyali laringotraxeit infektsiyasiga mos keladi. (A) Yadro ichidagi qo'shimchalar bilan ko'p sonli sintsitiya (strelka). (B) Xuddi shu guruhdagi boshqa traxeya yadro ichidagi qo'shimchalar bilan sintsitiyani ko'rsatdi (o'q).

Guruhlarning birortasiga mansub qushlarning traxeyalarida ikonostaz kuzatilmadi.

Qiyinchilikdan 5 kun o'tgach to'plangan sarumdagi ILTVga xos IgG titrlari, ijobiy va salbiy nazorat bilan solishtirganda, emlangan qushlarda ham muammoli, ham qiyin bo'lmagan guruhlardan sezilarli darajada yuqori bo'lgan (6-rasm).

Shakl 6. Sarumdagi ILTVga xos IgG titrlari 20, 24, 28, 32 va 36 WOA da sinovdan o'tgan qushlarning turli guruhlari uchun ILTV shtammi 63140 bilan sinovdan 5 kun keyin to'plangan. Harflar (a-b) har hafta uchun emlash va qiyinchilik guruhlari o'rtasida sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p <0,05). −/−=emlanmagan/cheklanmagan, plyus /−=emlangan/imtihonsiz, plyus / plyus=emlangan/imtihon qilingan, −/ plyus=emlanmagan/imtihonsiz.

For more information:1950477648nn@gmail.com