Sistanche glyeozidlarining uyqusiz model kalamushlarda kognitiv va sinaptik plastisiyani o'rganishga ta'siri

ANTRACT

Maqsad:Cistanche glikozidlari sinaptik plastisitni tartibga solish orqali uyqusiz model kalamushlarning o'rganish va kognitiv funktsiyasini yaxshilashi mumkinligini o'rganish.

Usullari: Ellikta erkak Wistar kalamush tasodifiy bo'sh nazorat guruhiga (Nazorat), platforma nazorat guruhiga (PC), model guruhiga (Model),Cistanche guruhi glikozidlari (GCs), va estazolam guruhi (Est). Sichqonlarning uyqudan mahrum bo'lish modeli o'zgartirilgan ko'p platformali suv muhiti usuli bilan tayyorlangan. Sichqonlarning fazoviy kognitiv funktsiyasi va hissiy o'zgarishlarini aniqlash uchun Morris suv labirintasi va ochiq maydon testi ishlatilgan. Nissl bo'yash nerv hujayralarining morfologiyasi va miqdoridagi o'zgarishlarni kuzatish uchun ishlatilgan.kalamushlarning hipokampal CAl maydoni. Western blot va R'T - PCR sinaptofizin (SY'N), postsinaptik membrana zich moddasi 95 (PSD -95) va ifoda darajasini aniqlash uchun ishlatilgan.miyadan kelib chiqqan neyrotrofik omil (BDNF). 

Natijalar;Morris suv labirintining natijalari Nazorat guruhi bilan solishtirganda ko'rsatdikalamushlarning o'rganish va kognitiv qobiliyatiModellar guruhida sezilarli darajada kamaydi (P<0. 05 ), and the learning and memory function of rats wasyaxshilangan GCs davolash ( P <0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05 ), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05 ), the resting time increased ( P <0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T - PCR showed that the BDNF ning protein va gen ifoda darajalariMlodel guruhidagi , SYN va PSD -95 sezilarli darajada kamaydi ( P<0. 05 ), while after treatment with GCs, the expression levels ofBDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05). Conclusion: Glycosides of cistanche may af. feet synaptic plasticity by regulating the expression of synaptic-related markers, thereby improving the learning and cognitive function of sleep deprivation model rats.

UCHUN O'TGAN CISTANCHE FORMULAYASI QO'SHIMCHALARIO‘QISH VA KOGNITIV FUNKSIYANI TAKMONLASH

Kalit SO‘ZLARCistanche glikozidlari; Gippokamp; Uyqusizlik; O'rganish va xotira; Anksiyete; Sinaptik plastika

Uyqu buzilishi (SD)aanormal uyquning funktsional buzilishikabi bir qator murakkab omillar tufayli yuzaga kelganuyqusizlik, xayolparastlik, vaoson uyg'onish. Yaqin o'tkan yillarda,SD kasalligiasta-sekin ortib bormoqda. Tegishli tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, SD sabab bo'lishi mumkinyurak-qon tomir kasalliklari,metabolik disfunktsiya,immunitet kasalliklari, vamarkaziy asab tizimiAltsgeymer kasalligi kabi degenerativ kasalliklar [1]. SD hipokampal neyronlarga oksidlovchi zarar etkazishi, kognitiv disfunktsiyani keltirib chiqarishi va tashvish va depressiya kabi kayfiyat o'zgarishiga olib kelishi mumkin [2]. Cistanche deserticola Xitoyda ham dori, ham oziq-ovqat sifatida ishlatilishi mumkin bo'lgan qimmatbaho dorivor materialdir. Buyrakni tonlash va qi bilan to'ldirish, ichaklarni namlash, ichak harakatini rag'batlantirish va yangni kuchaytirish ta'siri bor. Cistanche deserticolaning asosiy ekstrakti, sistanche glikozidlari (GC) antioksidant, antiapoptotik, jigarni himoya qiluvchi va neyroprotektiv ta'sirga ega [3]. Bizning oldingi tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, GClar antioksidant va antiapoptotik rol o'ynab, SAMP8 sichqonlarining o'rganish va kognitiv funktsiyasini yaxshilashi mumkin [4].

Tegishli tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, SD sabab bo'lgan kognitiv disfunktsiya sinaptik plastisiya bilan chambarchas bog'liqdir [5]. Biroq, GKlarning sinaptik plastisiyani tartibga solish mexanizmi va uyqu etishmasligidan kelib chiqqan kalamushlarda o'rganish va xotira buzilishi va kognitiv pasayishni yaxshilash haqida bir nechta hisobotlar mavjud. Shu sababli, ushbu tadqiqot GC larning sinaptik bilan bog'liq belgilarning ifodasini tartibga solish orqali sinaptik plastisiyaga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini o'rganishga qaratilgan bo'lib, shu bilan kalamushlarning o'rganish va kognitiv funktsiyasini uyqudan mahrum qilish modellari bilan yaxshilaydi va GC uchun o'rganish va kognitiv davolash uchun yangi davolash g'oyalari va rejalarini taqdim etadi. uyqu buzilishidan kelib chiqqan buzilish.

1 Materiallar va usullar

1.1 Eksperimental hayvonlar

Og'irligi 280 dan 300 g gacha bo'lgan 6 dan 8 haftagacha bo'lgan erkak Wistar kalamushlari hayvonlar ishlab chiqarish litsenziyasi [SCXK (Pekin) 2019-0010] bilan Pekin Sibeifu shahridan sotib olingan. Barcha hayvonlar Baotou tibbiyot kollejining Hayvonlar tajriba markazida quyidagi sharoitlarda saqlanadi: harorat (24 ± 1) daraja, namlik 50% dan 55% gacha, 12 soat yorug'lik va 12 soat qorong'i, oziq-ovqat va suvga cheklovlar yo'q. Ushbu tajriba maktab axloq qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan [Baoyi Lunshen 2022 No (63)].

1. 2 Asosiy reaktivlar va asboblar

Cistanche deserticola jami glikozidlari Chengdu Xiyu Cistanche Biotechnology Co., Ltd.dan sotib olingan (partiya raqami: KSM20220609011); Estazolam tabletkalari CSPC Pharmaceutical Group Ouyi Pharmaceutical kompaniyasidan sotib olindi (partiya raqami: 044220343); oqsillarni yuklash buferi (P1015), RIPA lizis buferi (R0010), xemiluminesans eritmasi (PE0010) va boshqalar Pekin Solebaodan sotib olingan; 95 (PSD-95) antikor (AB192757) va sinaptofizin (SYN) antikoridagi (ab32127) postsinaptik zichlik moddasi Abcam, AQSh kompaniyasidan sotib olindi; miyadan olingan neyrotrofik omil (BDNF) (48503-2) va -aktin (52901) AQShning SAB kompaniyasidan sotib olingan; echkining quyonga qarshi IgG ikkilamchi antikori (SA00001-20) Proteintech kompaniyasi, AQShdan xarid qilingan; kalamush melatonini (MT) va ELISA ilmiy tadqiqot to‘plami (MM{15}}R1) Jiangsu Enzyme Immunoassay Industry Co., Ltd. kerosin kesgichidan (Leica, Germaniya) xarid qilingan; optik mikroskop (Leica, Germaniya);

Morris suvli labirint, ochiq maydon sinov qutisi (Shanxay Xinruan); vertikal elektroforez apparati (Beijing Liuyi kompaniyasi); rangsizlantiruvchi silkituvchi (Beijing Liuyi kompaniyasi); oqsillarni ko'rishni tahlil qilish tizimi (Shanghai Tanon Technology); floresan miqdoriy PCR asbobi (Xi'an Tianlong Technology Co., Ltd.).

1.3 Eksperimental usullar

1.3.1 Hayvonlarni guruhlash va dori vositalarini kiritish

50 erkak Wistar kalamush tasodifiy bo'sh nazorat guruhiga (Nazorat guruhi), platforma nazorat guruhiga (Platforma nazorati, shaxsiy kompyuter guruhi), model guruhiga (Model guruhi), Cistanche deserticola guruhining umumiy glikozidlariga (GCs guruhi) bo'lingan. , 50 mg/kg) va estazolin guruhi (Est guruhi, 0,54 mg/kg), har bir guruhda 10 ta kalamush. Nazorat guruhi va PC guruhiga gavaj orqali 0,9% fiziologik eritma berildi. Modellashtirish boshlanganidan keyin barcha guruhlar har kuni ertalab soat 7 da gavaj qilindi va gavaj 21 kun davom etdi.

1.3. 2. Uyqusiz hayvonlar modelini tayyorlash

Uyqudan mahrum bo'lish modeli modifikatsiyalangan ko'p platformali suv muhiti usuli yordamida yaratilgan [6]. Tajriba uskunasi 130 sm × 50 sm × 45 sm to'rtburchaklar polietilen qatronli suv idishi edi. Suv idishida diametri 5 sm va balandligi 20 sm bo'lgan kichik platforma qo'yildi. Kompyuter guruhining platformasi diametri 10 sm va balandligi 20 sm edi. Suv idishi taxminan 18 sm chuqurlikdagi suv bilan to'ldirilgan va suv harorati (20 ± 1) darajada ushlab turilgan. Eksperiment boshlanishidan bir hafta oldin, kalamushlar atrof-muhit bilan tanishish uchun har kuni 60 daqiqa davomida uyqusiz qutiga joylashtirildi. Model o'rnatilgandan so'ng, Nazorat guruhidan tashqari, har bir guruhning kalamushlari 21 kun ketma-ket uyqusiz qolish uchun har kuni ertalab soat 8 dan 20: 00 gacha kichik platformaga joylashtirildi.

Barcha kalamushlar oziq-ovqat va suvdan erkin foydalanishlari mumkin edi va platformada erkin harakatlanishdi. Yorug'lik va qorong'ulik davri har kuni 12 soat edi.

1. 3. 3 Morris suv labirintida tajriba

Morris suv labirintini 4 ta maydonga bo'lib, suv bilan to'ldirdi va platforma 4-kvadrantga joylashtirildi. Suv yuzasi platformadan taxminan 2 sm balandlikda edi. Suvga oziq-ovqat mahsuloti melanin qo'shildi va suv harorati (25 ± 1) darajada ushlab turildi. (1) Joylashuvni aniqlash bo'yicha navigatsiya tajribasi: Har bir hududning markazi tanlandi va kalamushlar muloyimlik bilan suvga joylashtirildi. Ularga erkin izlanishga ruxsat berildi. Sichqonlarning maqsadli platformani 60 soniya ichida topishi uchun ketgan vaqt qayd etildi. Platformani topa olmagan kalamushlar platformaga olib borildi va 20 soniya davomida turishdi. Trening 5 kun davom etdi. (2) Fazoviy tadqiqot sinovi: 6-kuni platforma olib tashlandi va kalamushlar devorga qarshi 2-kadrantning markazidan suvga joylashtirildi. Sichqonlarning 120 soniya ichida platformadan necha marta o‘tgani va ularning 4-kvadrantda qolgan vaqti qayd etilgan.

1. 3. 4 Ochiq dala tajribasi

100 sm × 100 sm × 50 sm o'lchamdagi eksperimental quti ishlatilgan va qutining pastki qismi 9 ta katakchaga bo'lingan. Har bir kalamush guruhi 60 daqiqa davomida yopiq muhitga moslashish uchun oldindan ochiq daladagi eksperimental xonaga joylashtirildi. Tajribaning boshida sinov kalamushlari navbatma-navbat ochiq daladagi eksperimental qutining sobit burchaklariga joylashtirildi va kalamushlarning 5 daqiqa ichida turish vaqti, harakat masofasi va statik vaqti xatti-harakatlar tahlili dasturi yordamida qayd etildi. Eksperiment davomida atrof-muhit tinch bo'lishi kerak edi va birinchi kalamushning hidi keyingi kalamushning xulq-atvoriga ta'sir qilmasligi uchun eksperimental qurilma ikki tajriba oralig'ida mos ravishda suv va spirt bilan artdi.

1. 3. 5 Fermentga bog'liq immunosorbent tahlili (ELISA)

Sichqonlarda qon zardobidagi MT darajasini aniqlash Sichqonlar qorin bo'shlig'iga in'ektsiya yo'li bilan behushlik qilindi va qorin aortasidan 5 ml qon yig'ildi. Xona haroratida 30 daqiqa kutgandan so'ng, qon sarum olish uchun santrifüj qilindi. Har bir quduqqa 40 mkl namuna suyultiruvchi qo'shildi, so'ngra sinovdan o'tkaziladigan 10 mkl namuna qo'shildi. Sızdırmazlık plyonkasi bilan yopishtirilgandan so'ng, plastinka 30 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilindi. 5 marta yuviladi, 50 mL ferment yorlig'i eritmasi qo'shiladi va plastinka muhrlangan plyonka bilan yopiladi va 30 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilinadi. 5 marta yuviladi, so'ngra rang beruvchi eritma va reaktsiyani tugatish eritmasi navbat bilan qo'shiladi. Har bir quduqning OD qiymati 450 nm to'lqin uzunligidagi ferment yorlig'i bilan o'lchandi.

1. 3. 6 Nissl bo'yash

Har bir guruhdan uchta kalamush tanlab olindi va miya to'qimalari dekapitatsiya yo'li bilan olib tashlandi va 4% polioksietilen eritmasi bilan mahkamlandi. To'qima suvsizlangan, mum eritmasiga botirilgan, ko'milgan va an'anaviy usullar bilan kesilgan. Dilimlar 5 mkm qalinlikda saqlangan, PBS bilan yuvilgan, 0.1% toluidin ko'k bilan 0.5 soat davomida bo'yalgan, 95% spirt bilan ajratilgan, 100% spirt bilan suvsizlangan, shaffoflashtirilgan. ksilen bilan, va neytral saqich bilan muhrlangan. Mikroskop ostida kalamush hipokampusining CA1 hududidagi neyronlarning morfologiyasi va sonidagi o'zgarishlar kuzatildi va tasvirlar yig'ildi.

1. 3. 7 Western blot tajribasi

Har bir guruhdan to'rtta kalamush tanlab olindi va gippokamp dekapitatsiya yo'li bilan ajratildi. Hipokampus to'qimasi muzli hammom muhitida RIP A lizis buferi bilan aralashtirildi va supernatantni olish uchun to'qima santrifüj qilindi. Protein konsentratsiyasi BCA usuli bilan aniqlandi. 20 ug protein elektroforez uchun protein yuklash buferi bilan qo'shildi. Protein elektroforezi tugagandan so'ng, membrana 300 mA doimiy oqimga o'tkazildi, 5% yog'siz sut kukuni bilan bloklandi, asosiy antikor bir kechada 4 daraja inkubatsiya qilindi va ikkilamchi antikor xona haroratida 2 soat davomida inkubatsiya qilindi. Rangni ishlab chiqish eritmasi ishlatilgandan so'ng, protein bantlari kimyoluminesans ko'rishni tahlil qilish tizimi yordamida statistik tahlil qilindi.

1. 3. 8 RT-PCR tajribasi

Hipokampal to'qimalarning gomogenatini tayyorlash uchun har bir guruhdan uchta kalamush tanlangan. To'qima suyuqligidagi umumiy RNK Trizol usuli bilan ajratildi va konsentratsiyasi o'lchandi. Teskari transkripsiya uchun tezkor cDNK sintezi to'plami ishlatilgan va sinaptik bilan bog'liq protein mRNKning nisbiy ifoda darajasini aniqlash uchun flüoresan miqdoriy to'plam yordamida flüoresan miqdoriy kuchaytirish reaktsiyasi amalga oshirildi. Natijalar 2-DDCt yordamida tahlil qilindi. Primer ketma-ketliklari 1-jadvalda ko'rsatilgan.

1-jadval RT-PCR primer ketma-ketliklari

1.4 Statistik usullar

Oddiy taqsimotga mos keladigan ma'lumotlar natijalari o'rtacha ± standart og'ish (x ± s) sifatida ifodalangan va statistik tahlil GraphPad Prism 9.5 dasturi yordamida amalga oshirilgan. Bir tomonlama dispersiya tahlili bir nechta namunalar orasidagi taqqoslash uchun ishlatilgan va P < 0.05 farq statistik jihatdan ahamiyatli ekanligini ko'rsatdi.