Epigallokatexin-3-Gallat yuklangan lipozomalar mikrogliya hujayralarining yallig'lanishiga yordam beradi va neyroproteksiyaga yordam beradi

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakt

mikroglia vositachiligida neyroinflamasyon asosan neyrodegenerativ kasalliklarning rivojlanishiga hissa qo'shishi tan olingan. Yashil choy tarkibidagi tabiiy antioksidant sifatida tanilgan epigallokatexin{1}}gallat (EGCG) mikrogliya orqali yallig'lanishni inhibe qilishi va neyronlarni himoya qilishi mumkin, ammo yuqori beqarorlik va past bioavailability kabi kamchiliklarga ega. Biz uning biologik mavjudligini yaxshilash uchun EGCG liposomal formulasini ishlab chiqdik va in vitro va in vivo neyroinflamasyon modellarida neyroprotektiv faollikni baholadik. EGCG yuklangan lipozomalar fosfatidilxolin (PC) yoki fosfatidilserin (PS) dan hidratsiya va membranani ekstruziya qilish usuli bilan E vitamini (VE) bilan yoki bo'lmagan holda tayyorlangan. Theyallig'lanishga qarshita'siri lipopolisakkarid (LPS) bilan induktsiyalangan BV-2 mikroglial hujayralar faollashuvi va Sprague Dawley kalamushlarining qora rangli moddalaridagi yallig'lanishga nisbatan baholangan. Hujayra yallig'lanish modelida sichqon BV{2}} mikroglial hujayralari LPS induksiyasidan 24 soat o'tgach, morfologiyasini oddiy sferoiddan faollashtirilgan shpindel shakliga o'zgartirdi. In vitro erkin radikal 22-difenil{6}}pikrilgidrazil (DPPH) tahlilida EGCG 3 daqiqa ichida DPPHning 80 foizini tozaladi. EGCG yuklangan lipozomalar hujayralarni qabul qilish tajribalarida 1 soatlik hujayra madaniyatidan keyin BV{10}} hujayralari tomonidan fagotsitlanishi mumkin edi. EGCG yuklangan lipozomalar BV-2 mikrogliyadan olingan azot oksidi va LPSdan keyin TNF ishlab chiqarishni yaxshiladi. In vivo Parkinson sindromi kalamush modelida EGCG yuklangan lipozomalarning bir vaqtning o'zida intra-nigral in'ektsiyasi LPS tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanishga qarshi sitokinlarni susaytirdi va vosita buzilishini tikladi. Biz EGCG yuklangan lipozomalar mikrogliya faollashuvini modulyatsiya qilish orqali neyroprotektiv ta'sir ko'rsatishini ko'rsatdik. Yashil choy va yuklangan lipozomalardan olingan EGCG kasallikni o'zgartiruvchi terapiya uchun qimmatli nomzod bo'lishi mumkin.Parkinson kasalligi (PD).

Kalit so‘zlar:neyroproteksiya; neyro yallig'lanish; Parkinson kasalligi; katexin; L- -fosfatidilxolin; fosfatidilserin

oldini olishParkinson kasalligikasallikbilan Cistanche ta'siricistanche

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsay 2,3, Tay-Vey Feng 2,3, Syao-Yu Vu 2, Che-Vey Chao 4, Ruey-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* va Ming Fa Xsieh 2,3,*

1 Neyroxirurgiya bo'limi, jarrohlik bo'limi, Changhua nasroniy kasalxonasi, 135 Nanxiao ko'chasi, Changhua shahri, Changhua okrugi 500, Tayvan; 83998@cch.org.tw

2 Biotibbiyot muhandisligi bo'limi, Chung Yuan xristian universiteti, № 200, Zhongbei ko'chasi, Zhongli tumani, Taoyuan shahri 320314, Tayvan;

3 Minimal invaziv tibbiy asboblar va texnologiyalar markazi, Chung Yuan xristian universiteti, № 200, Zhongbei ko'chasi, Zhongli tumani, Taoyuan shahri 320314, Tayvan

4 Bioscience texnologiyasi bo'limi, Chung Yuan xristian universiteti, № 200, Zhongbei ko'chasi, Zhongli tumani, Taoyuan shahri 320314, Tayvan.

1.Kirish

Asab tizimi shikastlanganda yoki infektsiyalanganda, mikrogliya hujayralari faollashadi va tarmoqqa aylanadi, natijada o'simta nekrozi omili- (TNF-), interleykin-1 ( kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ko'p miqdori haddan tashqari ko'payadi. IL-1), interleykin 6 (IL-6) va azot oksidi (NO) va reaktiv kislorod turlari (ROS) kabi yallig'lanish vositachilari. Nihoyat, asab hujayralari bu yallig'lanish vositachilaridan shikastlanadi, degeneratsiyalanadi yoki o'ladi. Yaqinda Parkinson kasalligi (PD), Altsgeymer kasalligi, Xantington kasalligi va Creutzfeldt-Jakob kasalligi kabi neyrodegenerativ kasalliklarga chalingan bemorlarning miyasida aniqlandi. , katta miqdordagi mikroglial hujayralar faollashadi va ortiqcha ifodalanadi [1-3]. Epidemiologik jihatdan PD ning sababi asosan neyroinflamatuar reaktsiya bilan bog'liq. TNF-, IL-1, IL{16}}, NO va ROS kabi yallig'lanish vositachilari miyaning striatumida topiladi [1,4-7]. Dopaminerjik neyronlarning degradatsiyasi mikrogliya hujayralari tomonidan boshqarilishi mumkin [8].

PDni keltirib chiqaradigan neyroinflamasyon jarayonidan oldin atrof-muhit toksinlari, jumladan, rotenon [9], lipopolisakkarid (LPS) [5,7] va g'ayritabiiy oqsil to'planishi [10] ta'siridan kelib chiqqan neyronlarning birlamchi shikastlanishi kuzatiladi. Zarar dopaminerjik neyronlarning shikastlanishiga va hatto apoptoziga olib keladi. Keyin mikrogliya hujayralari sitokinlarni chiqarish uchun faollashadi, natijada neyronlarning yallig'lanishi va o'limiga olib keladi va nihoyat PDga olib keladi.

Mikroglial hujayralar LPS tomonidan rag'batlantirilganda, LPS mikroglia hujayralarining sirt retseptorlari CD14 bog'lanish joyiga bog'lanadi. LPS-CD14 kompleksi MD2 bog'lovchisi bilan toll-o'xshash retseptorlari -4 (TLR4) transmembran oqsillari orqali bog'lanadi va keyin mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazlar (MAPK) va faollashtiruvchi transkripsiya omillari (yadro omili) tomonidan yaratilgan ko'plab xabarlarni uzatish yo'llarida ishtirok etadi. -kappa B, NF-kB). Gen transkripsiyasidan so'ng [5,11,12], mikroglial hujayralar TNF- va IL-1 kabi sitokinlarni chiqaradi yoki induksiyalangan azot oksidi sintaza (iNOS) va siklooksigenaza-2 (COX{) genlarini chiqaradi. {17}}), natijada prostaglandinlar yoki NO ajralib chiqadi. Bundan tashqari, halokatli ONOO erkin radikallari nikotinamid adenin dinukleotid fosfat (NADPH) oksidazdan hosil bo'lgan superoksid anionlarini iNOS dan hosil bo'lgan NO bilan birlashtirib, dopaminerjik neyronlarning o'limiga olib keladi [13]. Shuning uchun, ushbu tadqiqotda LPS PD ning in vitro modeli sifatida mikrogliya hujayralarining neyroinflamasiyasini qo'zg'atish uchun ishlatilgan.

Katexinlar tabiiy antioksidantlar bo'lib, hujayra shikastlanishining oldini oladi va o'simtaga qarshi, saratonga qarshi, qarishga qarshi, farmakologik nurlanishga qarshi va erkin radikallarni tozalash kabi ko'plab farmakologik foyda keltiradi [14]. Yashil choy og'irligi bo'yicha taxminan 10 foiz polifenollarni o'z ichiga oladi, shu jumladan epigallokatexin gallat (EGCG) deb ataladigan katta miqdordagi katexin. EGCG barcha yashil choy katexinlarida eng yuqori antioksidant faollik va erkin radikallarni tozalash qobiliyatiga ega va hujayralarni oksidlovchi stressning zararlanishidan himoya qilish uchun ROSni ushlab turishi mumkin [15]. EGCG shuningdek, yuqori yallig'lanishga qarshi ta'sirga ega bo'lib, u makrofaglar [16] tomonidan sitokinlar (TNF-, IL-2 va IL-8) sekretsiyasini, Akt signalizatsiya oqsillari va IkB oqsillarining fosforlanishini samarali ravishda inhibe qilishi mumkin. COX-2 ifodasini muvozanatlash va yallig'lanishga qarshi sitokinlar ishlab chiqarishni kamaytirish uchun yuqori oqimdagi MAPK oqsillarining fosforillanishini inhibe qilish orqali NF-kB ifodasini yoki AP{13}} transkripsiyasini kamaytiradigan yallig'lanish yo'llari [17].

Yaqinda EGCG -sinuklein (S) ning faol oligomerlarini bostirish tufayli PD uchun potentsial terapevtik yoki profilaktika sifatida xabar qilingan [18]. EGCG, shuningdek, in vitro [19-21] S agregatsiyasini oldini oladi va dopaminerjik neyronlarda sitoplazmatik S agregatsiyasi PDning mumkin bo'lgan patogenezi bo'lib, qora rangli dopaminerjik neyronlarning shikastlanishiga olib keladi [22]. Bundan tashqari, EGCG 1-metil{6}}fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) keltirib chiqaradigan neyrokimyoviy yoki funksional zararni tiklaydi va qora rangdagi ferroportinni tartibga soladi va kamaytiradi. oksidlovchi stress [23]. EGCG, shuningdek, MPTP bilan davolash qilingan sichqonlarda neyroprotektiv va immun himoya ta'siriga ega va neyroinflamatsiyani modulyatsiya qilishi va MPTP bilan qo'zg'atilgan PDda dopaminerjik neyron yo'qotilishidan himoya qilishi mumkin [24].

EGCG ning yallig'lanishga qarshi ta'siri o'rganildi. EGCG bostirilgan LPS BV-2 mikroglial hujayralarida iNOS ning YO'q ishlab chiqarilishini va ifodalanishini keltirib chiqardi. EGCG BV-2 hujayralarida TNF- va IL-1 kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ifodasini samarali tarzda inhibe qilishi mumkin [25]. Inson makrofaglarini EGCG bilan oldindan davolash TNF-, IL-1 va IL-6 kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlarning LPS induktsiyasini sezilarli darajada inhibe qildi [26]. Bundan tashqari, LPS-shikastlangan sichqonlarda EGCG bilan davolashdan so'ng, TLR{15}}NF-kB yo'lini modulyatsiya qilish orqali yallig'lanishga qarshi sitokin ishlab chiqarishni kamaytirdi [27]. Bundan tashqari, EGCG bilan yuklangan va -siklodekstrin (-CD) qo'shilishi bilan optimallashtirilgan poli(laktid-ko-glikolid) (PLGA) mikrosferalar sichqon BV ning in vitro modelida BV{22}} hujayralaridan NO ishlab chiqarishni samarali tarzda bostirishi mumkin edi. -2 LPS tomonidan qo'zg'atilgan mikroglial hujayralar, bu mikrosferalar faollashtirilgan mikroglial hujayralarning yallig'lanishini bostirishi mumkinligini ko'rsatadi [28].

Yashil choy kundalik ichimlik bo'lsa-da, katexinlarning samaradorligi past og'iz bioavailability tufayli samarasiz; shunday qilib, samarali farmatsevtik dozalash shakllari talab qilinadi. Nano-dori tashuvchisi erta metabolizmdan qochish, dori ta'sir qilish vaqtini uzaytirish va dori vositalarini etkazib berishni maqsad qilib qo'yishning afzalliklariga ega. Shu sababli, ushbu tadqiqot yallig'lanishga qarshi dozalash shakllari sifatida hujayra membranasiga o'xshash komponentlar bo'lgan fosfatidilxolin (PC) va fosfatidilserin (PS) ni o'z ichiga olgan lipozomalarni ishlab chiqishni maqsad qilgan. Yashil choy barglaridan olingan EGCG LPS tomonidan qo'zg'atilgan mikroglia hujayralarida yallig'lanish reaktsiyalarini sekinlashtirish uchun lipozomalarga yuklangan. Neyroproteksiya uchun PD ning in vivo modeliga EGCG yuklangan lipozomalarning terapevtik ta'siri ham baholandi.

2. Natijalar

2.1. EGCG ning ekstraktsiyasi

2.1.1. EGCG ekstrakti

Epigallokatexin{0}}gallat xarakteristikasi ma'lumotlarini qo'shimcha faylda topish mumkin (S1 va S2 rasmlar). 2.1.2. EGCG ning turli formulalari 1-jadvalda platsebo PS-, PS-EGCE- va PS-EGCG-VE lipozomalarining o'rtacha zarracha diametrlari platsebo PC-, PC-EGCE- va PC-EGCG-VE- dan kichikroq edi. mos ravishda lipozomalar. Kompyuter neytral va PS manfiy zaryadlanganligi sababli [29], bu qo'shimcha sirt potentsiali zarracha hajmiga ta'sir qilganligini ko'rsatadi. Barcha lipozomalarning polidisperslik indeksi (PDI) 0,22 dan kam edi, bu eritmadagi lipozomalarning tuzilishi barqaror ekanligini ko'rsatadi. PS ning manfiy zaryadlari PS-lipozomalar orasidagi sirt potentsialida itaruvchi kuchga olib keldi, bu agregatsiyadan qochib, PS-lipozomalarning hajmini kamaytiradi.

1-jadvalda tasvirlangan PS o'z ichiga olgan lipozomalarning inkapsulyatsiya samaradorligi/o'lchami tegishli shaxsiy kompyuter o'z ichiga olgan lipozomalarga qaraganda kattaroq/kichikroq edi [30]. PC-EGCG-VE-lipozomalari va PS-EGCG-VE-lipozomalarining inkapsulyatsiya samaradorligi mos ravishda PC-EGCG-lipozomalari va PS-EGCG-lipozomalariga qaraganda kengroq edi. Buning sababi shundaki, E vitamini yog'da eriydi, fosfolipid ikki qatlamli membrana ichiga joylashtirilgan va EGCG uchun antioksidant himoya vositasini ta'minlaydi.

2.2. In vitro hujayra tahlili

2.2.1. Hujayra hayotiyligi

50 dan 400 mkM gacha EGCG bilan ishlov berilgan hujayralarning hujayra hayotiyligi nazorat guruhiga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (1A-rasm). Bundan farqli o'laroq, 5 dan 25 mkMgacha bo'lgan hujayralarning hayotiyligi nazorat guruhi hujayralarining hayotiyligiga o'xshaydi. Ushbu tadqiqotda foydalanilgan EGCG kontsentratsiyasi 25 mkM ekanligi aniqlandi. Xuddi shunday, hujayra yallig'lanishini qo'zg'atish uchun ishlatiladigan LPS kontsentratsiyasi 1B-rasmga muvofiq 50 ng / ml ni tashkil etdi. 1C-rasmda barcha konsentratsiyali platsebo lipozomalari bilan birgalikda o'stirilgan hujayralarning hujayra hayotiyligi nazorat guruhiga nisbatan statistik ahamiyatga ega emas edi. Shuning uchun platsebo lipozomalari mikrogliya hujayralari uchun sitotoksik emas.

2.2.2. Hujayra morfologiyasi

Nazorat guruhining hujayra morfologiyasi (2A-rasm) va 25 mkM EGCG (2B-rasm) bilan ishlov berilgan hujayralar morfologiyasi sharsimon, 50 ng/ml LPS (2C-rasm) bilan ishlov berilgan hujayralar morfologiyasi esa shpindel shaklida edi. Biroq, 25 uM EGCG bilan ishlov berilgan va LPS tomonidan faollashtirilgan hujayralar morfologiyasi (2D-rasm) sharsimon edi. Bu EGCG LPS tomonidan qo'zg'atilgan faollashuvni inhibe qilishi mumkinligini ko'rsatdi. Shuning uchun EGCG ni oldindan davolash mikroglial hujayralarni faollashuvdan himoya qilib, neyroinflamatsiyaga inhibitiv ta'sir ko'rsatadi.

2.2.3. Chiqarish YO'Q

3A-rasmda 24 soatlik inkubatsiya paytida 5–1000 ng/ml LPS bilan induktsiya qilingan BV{1}} hujayralaridan NO ajralishi nazorat guruhidagi NO chiqarilishi bilan solishtirganda statistik jihatdan ahamiyatli edi. Hujayra yallig'lanishini faollashtirish uchun ishlatiladigan LPS kontsentratsiyasi 50 ng / ml ni tashkil etdi.

25 µM EGCG bilan ishlov berilgan BV-2 hujayralaridan chiqarilishi 3B-rasmda ko‘rsatilganidek, nazorat guruhiga nisbatan statistik ahamiyatga ega emas edi. Biroq, 24 soat davomida LPS bilan qo'zg'atilgan hujayra yallig'lanishi nazorat guruhiga nisbatan sezilarli o'sishni ko'rsatdi. 1 soat davomida 25-200 mkM EGCG bilan ishlov berilgan va keyin LPS bilan faollashtirilgan hujayralar faqat LPS bilan faollashtirilgan hujayralar guruhiga nisbatan statistik jihatdan sezilarli pasayish ko'rsatdi. EGCG 50–200 mkM dan oshganda NO chiqarilishi kamaymadi, chunki EGCG 50–200 mkM dan oshganida hujayra hayotiyligi pasaydi, 1A-rasmga muvofiq.

25 mkM EGCG bilan davolash qilingan hujayralarning NO ishlab chiqarilishi, so'ngra 50 ng/ml LPS bilan kelib chiqqan yallig'lanish nazorat guruhiga nisbatan statistik ahamiyatga ega emas edi (3C-rasm). Shu bilan birga, PC-EGCG-lipozomalari yoki PC-EGCG-VE-lipozomalari bilan davolash qilingan hujayralar guruhida chiqarilgan NO 50 ng / ml bilan LPS faollashuvidan so'ng, faqat LPS bilan davolash qilingan hujayralar guruhiga nisbatan sezilarli pasayish ko'rsatdi. PC-EGCG-lipozomalari yoki PC-EGCG-VE-lipozomalari bilan oldindan ishlangan hujayralardan NO ajralishi EGCG bilan oldindan ishlov berilgan hujayralar guruhidan NO ajralib chiqishidan yuqori edi, bu EGCG ning lipozomalardan sekin chiqishi bilan izohlanishi kerak.

2.2.4. Sitokin tahlili

Shakl 4A da, 24 soatdan keyin LPS bilan davolash qilingan hujayralarning TNF- konsentratsiyasi nazorat guruhi yoki hujayra madaniyati muhiti (DMEM) bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli o'sishni ko'rsatdi. Platsebo PC-liposomalari LPS bilan davolash qilingan hujayralarnikiga yaqin edi. Biroq, PS-EGCG-lipozomalari yoki PS-EGCG-VE-lipozomalari bilan oldindan ishlov berilgan hujayralar guruhidagi TNF-kontsentratsiyasi, keyin LPS faollashuvi LPS bilan davolash qilingan hujayralar bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli pasayish ko'rsatdi. TNF-ning bu kontsentratsiyasining pasayishi EGCG yuklangan lipozomalar LPS tomonidan qo'zg'atilgan mikroglial hujayralarning faollashuvini kamaytirishi mumkinligini ko'rsatadi. PS-EGCG-VE-lipozomalarning inhibitiv ta'siri PS-EGCG-lipozomalarga qaraganda yaxshiroq edi.

Hujayra membranasidagi fosfolipidlar araxidon kislotasini ishlab chiqarish uchun sitozolik fosfolipaz A2 (cPLA2) tomonidan gidrolizlanishi mumkin. Siklo-oksigenaza (COX) araxidon kislotasini prostaglandinga aylantiruvchi asosiy fermentdir. COX-2 va cPLA2 ko'pincha yallig'lanish yoki xavfli kasallik natijasida hosil bo'ladi [31-34]. Shakl 4Bda yallig'lanish 24 soat davomida 5-50 ng / ml LPS tomonidan qo'zg'atildi va LPS kontsentratsiyasi ortganda cPLA2 ifodasi oshdi. 4C-rasmda 24 soat davomida LPS (5–50 ng/ml) tomonidan qo'zg'atilgan COX-2 faolligi oshishi ko'rsatilgan. COX{17}} ifodasi 5–25 ng/ml LPS dan oshdi, 50 ng/ml da esa pasaydi. 4D-rasmda BV-2 hujayralari EGCG bilan oldindan ishlov berilganda va LPS bilan induktsiya qilinganda cPLA2 ifodasi kamaydi. LPS faollashtirilgan BV-2 hujayralarida COX-2 ifodasi nazorat guruhiga nisbatan oshdi (4E-rasm). EGCG, platsebo PS-lipozomalari, PS-EGCG-lipozomalari va PS-EGCG-VE-lipozomalari bilan oldindan davolangan hujayralar guruhida COX-2 sezilarli darajada kamaygan, so'ngra LPS yallig'lanish induksiyasi kuzatilgan. Ayniqsa, platsebo PS-lipozomalari bilan oldindan ishlangan hujayralardagi COX-2 ifodasi LPS tomonidan qo'zg'atilgan hujayralardagidan statistik jihatdan sezilarli farqga ega edi.

2.3. In Vivo hayvonlar sinovi

2.3.1. Hayvonlarning xulq-atvori

Sinov Amfetamin qo'llashdan keyin Parkinson kalamushlari tomonidan to'ldirilgan doiralar soni (5A-rasmda ko'rsatilgan) nazorat guruhidagi kalamushlar tomonidan to'ldirilgan doiralar soniga nisbatan sezilarli darajada oshdi. Parkinsonli kalamushlarning0 EGCG ning turli formulalari bilan muomala qilingan xatti-harakatlari nazorat guruhidagi kalamushlarga o'xshash edi. Ushbu ma'lumotlar EGCG nigrostriatal tizimning LPS tomonidan qo'zg'atilgan bir tomonlama lezyonlarini susaytirganligini ko'rsatdi. 2.3.2. Yallig'lanish belgilarini tahlil qilish Davolangan guruhdagi TNF- / GAPDH nisbati sindromli kalamushlarda topilgan nisbatga nisbatan sezilarli darajada past edi. IL{7}} tendentsiyasi TNF-trendiga o'xshash edi. In vivo natijalari in vitro tadqiqotlar natijalariga mos keladi. Davolangan guruhda miyadan kelib chiqqan neyrotrofik omil (BDNF) ifodasi LPS tomonidan qo'zg'atilgan guruhga o'xshash edi (5D-rasm). Biroq, bu natija PC-EGCG yuklangan lipozomalar tomonidan Parkinson sindromli kalamushlarda oyoq-qo'llarni muvofiqlashtirishning yaxshilanishi BDNF ifodasini oshirish orqali emas, balki neyro-yallig'lanish reaktsiyasini kamaytirish natijasida yuzaga kelganligini ko'rsatishi mumkin.

Bu, shuningdek, 24 soat davomida EGCG (10 mg / kg) bilan kalamushlarni oldindan davolash orqali TNF- va NO ishlab chiqarishni kamaytirish va 7 kundan keyin LPS bilan indüksiyani LPS bilan davolash qilingan kalamushlarga nisbatan kamayganligi haqidagi oldingi hisobotlarga mos keladi va EGCG ni tashkil qiladi degan xulosaga keldi. TNF- va NO chiqarilishining kamayishi tufayli LPS tomonidan qo'zg'atilgan neyrotoksiklik uchun potentsial terapevtik ta'sir.

3. Munozara

Ushbu tadqiqotda yashil choydan olingan EGCG ning tozaligi 90,5 foizni tashkil etgani va EGCG ning erkin radikallarni tozalash faolligi 3 minut ichida 80 foizdan ortiqroq bo'lganligi aniqlandi. EGCG ning yuqori konsentratsiyasi yoki uzoqroq reaktsiya vaqti bilan ortib borardi. PC-EGCG-VE- va PS-EGCG-VE-lipozomalarining zarracha o'lchami 161,5 va 142,9 nm bo'lib, ular qo'shimcha siklodekstrin (1-14 mkm) bilan PLGA mikrosferalarida [28] yuklangan EGCGnikidan kichikroq edi. . PC-EGCG-VE- va PS-EGCG-VE-lipozomalarining inkapsulyatsiya samaradorligi mos ravishda 60,2 va 76,8 foizni tashkil etdi. Ushbu natijalar shuni ko'rsatdiki, PS o'z ichiga olgan lipozomalar kichikroq, barqarorroq va PS dagi zaryad tufayli yuqori inkapsulyatsiya samaradorligiga ega va agregatsiyani oldini olish uchun lipozomalar o'rtasida itaruvchi kuchga olib keldi.

PS-EGCG- va PS-EGCG-VE-lipozomalari bilan oldindan ishlangan va keyin LPS tomonidan induktsiya qilingan hujayralardagi TNF-ning ifodalanishi LPS bilan induktsiya qilingan hujayralar bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli farqlarga ega edi va shunga o'xshash natijalar LPSda EGCG ni oldindan davolashda kuzatildi. BV-2 hujayralarida [25] va inson makrofaglarida [26] -induktsiyalangan TNF ifodasi. Xulosa qilib aytganda, EGCG bilan davolangan guruhning hujayra morfologiyasi va TNF- ifodasi LPS tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanishning inhibisyon ta'sirini ko'rsatdi.

Ushbu tadqiqotda EGCG ni oldindan davolash NO ning chiqarilishini kamaytirishi mumkin. EGCG yuklangan PLGA mikrosferalarini oldindan ishlov berish orqali LPS tomonidan qo'zg'atilgan BV-2 hujayralaridan NO ishlab chiqarishni bostirish bizning oldingi tadqiqotimizda ham tekshirilgan edi [28].

Ushbu tadqiqotda kalamushlarda Parkinson sindromi LPS tomonidan qo'zg'atilgan bir tomonlama qora rangli hududga zarar etkazish natijasida yuzaga keladi. Yana bir muhim topilma shundan iboratki, statistik miqdoriy tahlil orqali, EGCG yuklangan lipozomalar aylanish testida LPS tomonidan qo'zg'atilgan kalamush miyasining bir tomonlama o'rta miya nigrozin mintaqasiga zarar etkazishi va substansiyada TNF-neyroinflamatuar omillarni ishlab chiqarishi tufayli sindromni engillashtirishi mumkin. kalamush miyasining qora hududi EGCG yuklangan lipozomalar tomonidan ham kamayishi mumkin. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, LPS bilan qo'zg'atilgan Parkinson sindromida oyoq-qo'llarning muvofiqlashtirilishi va neyron yallig'lanishining kamayishi mahalliy ravishda EGCG yuklangan lipozomalarni yuborish bilan bog'liq, ammo BDNF ekspressiyasini oshirish bilan emas. Biroq, neyroprotektiv ta'sir uchun anti-neyroyallig'lanish natijalari zarurdir [35]. BV-2 faollashishi neyrotoksik bo'lgan va hujayra shikastlanishiga olib keladigan yallig'lanishga qarshi omillarni chiqaradi. BV-2 faollashuvining oldini olish orqali EGCG neyroprotektiv ta'sir ko'rsatadi. LPS tomonidan qo'zg'atilgan dentat girusidagi kattalar neyron ildiz hujayralarining proliferatsiyasi, omon qolish darajasi va neyronal differentsiatsiyasini yaxshilash uchun EGCG dan keyingi davolanish EGCG neyroinflamatuar kasalliklar uchun potentsial terapevtik vosita bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi [27].

Oldingi farmakokinetik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ekzogen PS qon-miya to'sig'ini (BBB) ​​kesib o'tishi mumkin, bunda u gipotalamusga yaqinlik qiladi [6] va og'iz orqali yuborish 1-4 soat ichida eng yuqori darajaga etadi. Bundan tashqari, PS o'z ichiga olgan lipozomalar yallig'lanishga qarshi vositachilarning sekretsiyasini rag'batlantirish uchun apoptotik hujayralarni taqlid qilishi aniqlandi, masalan, transformatsion o'sish omili - 1 (TGF- 1) (makrofaglardan hosil bo'lgan NO ni tartibga solish uchun) [36] va prostaglandin E2 (PGE2) in vitro makrofaglar va mikrogliya hujayralari tomonidan [6,37], shuningdek, in vivo [38] yallig'lanishni engillashtirishga yordam beradi. Shunga ko'ra, ushbu tadqiqotda ko'rsatilgan PS o'z ichiga olgan EGCG yuklangan lipozomalar kichikroq zarracha hajmi, yuqori inkapsulyatsiya samaradorligi va Parkinson sindromining mikrogliya hujayralarida va Vivo kalamush modelida faollashuvini inhibe qilishning afzalliklariga ega bo'lib, yallig'lanishga qarshi funktsiyani yaxshilaydi va neyroproteksiya.

Cheklov shundan iboratki, bizning tadqiqotimiz ba'zi etishmayotgan tahlillar bilan, masalan, neyroprotektiv ta'sir holatida o'tkazildi va NeuN bo'yalishi tekshirilmadi. Biz neyrotrofik omil sifatida faqat BDNF ni ham tahlil qildik. FGF2 va IGF2 ham e'tiborga olinishi kerak bo'lgan neyrotrofik omillardir [39].

5. Xulosalar

Katexinlarning past og'iz bioavailligini yaxshilash uchun ushbu tadqiqotda EGCG lipozomalarga yuklangan. PS o'z ichiga olgan lipozomalar kichikroq va barqarorroq ekanligi aniqlandi. U yuqori inkapsulyatsiya samaradorligiga ega va E vitamini qo'shilishi EGCG ni oksidlanishdan himoya qiladi va kapsülleme samaradorligini oshiradi. In vitro tadqiqotida, BV-2 hujayralaridan TNF- va NO ishlab chiqarish ifodalari LPS bilan induktsiyalangan BV-2 hujayralarida EGCG yuklangan lipozomalarni oldindan davolashdan so'ng kamaygan. Shuning uchun EGCG yuklangan lipozomalar inhibitor sifatida neyroinflamatuar javobda muhim rol o'ynagan. Foydali ta'sirlar neyroinflamatuar reaktsiyalarda hujayralarni apoptozdan himoya qilish edi.

In vivo tadqiqotda kalamushlarda LPS tomonidan bir tomonlama o'rta miya substantia nigra mintaqasiga qo'zg'atilgan Parkinson sindromi yaxshilandi. Neyro-yallig'lanish mexanizmi, shu jumladan TNF sekretsiyasi, EGCG yuklangan lipozomalarni davolashdan keyin inhibe qilingan. Biz EGCG miyadagi yallig'lanishni yumshatish orqali neyrodegenerativ kasalliklarni davolash uchun yanada qimmatli nomzod bo'lishini ko'rsatdik. Keyingi tekshiruv liposomaning hujayra ichiga kirishini va lipozomadan EGCG chiqishini kuzatish uchun lizosoma kuzatuvchisi yordamida yallig'lanish yo'llariga qaratilishi kerak.

Ma'lumotnomalar

1 Lull, ME; Blok, ML Mikroglial faollashuv va surunkali neyrodegeneratsiya. Neyroterapiya 2010, 7, 354-365. [CrossRef]

2. Ekdal, C.; Kokaia, Z.; Lindvall, O. Miyaning yallig'lanishi va kattalar neyrogenezi: mikrogliyaning ikki tomonlama roli. Neuroscience 2009, 158, 1021–1029. [CrossRef] [PubMed]

3. Vaysleder, R.; Nahrendorf, M.; Pittet, MJ Nanozarrachalar bilan tasvirlash makrofaglari. Nat. Mater. 2014, 13, 125–138. [CrossRef]

4. Papageorgiou, IE; Fetani, AF; Lyuen, A.; Heinemann, U.; Kann, O. Surunkali epileptik kalamushlarning hipokampusida mikroglial hujayralarning keng tarqalgan faollashuvi faqat qisman neyrodegeneratsiya bilan bog'liq. Miya tuzilishi. Funktsiya. 2015, 220, 2423–2439. [CrossRef] [PubMed]

5. Dutta, G.; Chjan, P.; Liu, B. Lipopolisakkarid Parkinson kasalligi hayvon modeli: Mexanik tadqiqotlar va dori kashfiyoti. Fundam. Klin. Farmakol. 2008, 22, 453–464. [CrossRef] [PubMed]

6. Otsuka, M.; Tsuchiya, S.; Aramaki, Y. Fosfatidilserindan tashkil topgan lipozomalar bilan ishlov berilgan makrofaglar tomonidan TGF- ishlab chiqarishda MAP kinazasi ERK ning ishtiroki. Biokimyo. Biofizika. Res. Kommun. 2004, 324, 1400–1405. [CrossRef]

7. Li, R.; Huang, Y.-G.; Fang, D.; Le, W.-D. (-) -Epigallokatexin gallat lipopolisakkaridlar tomonidan qo'zg'atilgan mikroglial faollashuvni inhibe qiladi va yallig'lanish vositachiligidagi dopaminerjik neyron shikastlanishidan himoya qiladi. J. Neurosci. Res. 2004, 78, 723–731. [CrossRef]

8. Liu, J.; Xong, Z.; Ding, J.; Liu, J.; Chjan, J.; Chen, S. Proteomik tadqiqotlar tomonidan aniqlangan LPS davolashdan so'ng yangi tug'ilgan kalamush mikrogliyalari tomonidan lizosomal fermentlarning ustun chiqishi. J. Proteome Res. 2008, 7, 2033–2049. [CrossRef]

9. Cho, X.-S.; Kim, S.; Li, S.-Y.; Park, JA; Kim, S.-J.; Chun, HS Yashil choy komponentining himoya ta'siri, L-theanine atrof-muhit toksinlari bilan qo'zg'atilgan neyron hujayralari o'limiga. Neyrotoksikologiya 2008, 29, 656-662. [CrossRef]

10. Mariani, MM; Kielian, T. Mikroglia markaziy asab tizimining yuqumli kasalliklarida. J. Neyroimmun farmakol. 2009, 4, 448–461. [CrossRef]

11. Santyago, RM; Barbieiro, J.; Lima, MM; Dombrowski, Pensilvanya; Andreatini, R.; Parkinson kasalligining intraneural MPTP, 6-OHDA, LPS va rotenon modellari tomonidan qo'zg'atilgan hayotiy, MA depressiv xatti-harakatlarning o'zgarishi asosan serotonin va dofamin bilan bog'liq. Prog. Neyro-psixofarmakol. Biol. Psixiatriya 2010, 34, 1104-1114. [CrossRef] [PubMed]

12. Liu, M.; Bing, G. Parkinson kasalligi uchun lipopolisakkarid hayvon modellari. Parkinson kasalligi. 2011, 2011, 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Vu, D.-C.; Teysmann, P.; Tieu, K.; Vila, M.; Jekson-Lyuis, V.; Ischiropulos, H.; Przedborski, S. NADPH oksidaza Parkinson kasalligining 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6-tetrahidropiridin modelida oksidlovchi stressga vositachilik qiladi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 2003, 100, 6145–6150. [CrossRef]

14. Rahmon, I.; Bisvas, SK; Kirkham, PA Yallig'lanishni tartibga solish va xun polifenollari tomonidan redoks signalizatsiyasi. Biokimyo. Farmakol. 2006, 72, 1439–1452. [CrossRef] [PubMed]

15. Valko, M.; Rodos, K.; Monkol, J.; Izakovich, M.; Mazur, M. Oksidlanish stressini keltirib chiqaradigan saratonda erkin radikallar, metallar va antioksidantlar. Kimyo. Biol. O'zaro ta'sir qilish. 2006, 160, 1–40. [CrossRef]

16. Albatta, Y.-J.; Chun, K.-S.; Cha, H.-H.; Xan, SS; Keum, Y.-S.; Park, K.-K.; Li, SS Yallig'lanishga qarshi fitokimyoviy moddalarning kimyoviy profilaktika ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizmlar: NF-kB faollashuvini bostirish orqali COX -2 va iNOS ni pastga regulyatsiyasi. Mutat. Res. Fundam. Mol. Mex. Mutagenez 2001, 480, 243-268. [CrossRef]

17. Renaud, J.; Nabavi, SF; Daglia, M.; Nabavi, SM; Martinoli, M.-G. Epigallokatexin{2}}gallat, Parkinson kasalligi uchun istiqbolli molekula? Yoshartirish Res. 2015, 18, 257–269. [CrossRef]

18. Yang, J.E.; Rho, KY; Li, S.; Li, JT; Park, JH; Bhak, G.; Paik, SR EGCG vositachiligida - Sinukleinning "faol oligomeri" tufayli yuzaga keladigan membranani buzish va sitotoksiklikni himoya qilish. Sci. Rep. 2017, 7, 1–10. [CrossRef]

19. Bieschke, J.; Russ, J.; Fridrix, RP; Ernxofer, DE; Vobst, H.; Noygebauer, K.; Wanker, EE EGCG etuk -sinuklein va amiloid-fibrillalarni o'zgartiradi va hujayra toksikligini kamaytiradi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 2010, 107, 7710–7715. [CrossRef]

20. Yoshida, V.; Kobayashi, N.; Sasaki, Y.; Ikebukuro, K.; Sode, K. Kichik molekulali ingibitorlar bilan modifikatsiyalangan -sinukleinning qisman peptidi -sinukleinning amiloid fibrilatsiyasini maxsus ravishda inhibe qiladi. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 2590–2600. [CrossRef] [PubMed]

21. Xu, Y.; Chjan, Y.; Quan, Z.; Vong, V.; Guo, J.; Chjan, R.; Yang, Q.; Dai, R.; MakGir, PL; Qing, H. Epigallokatexin gallat (EGCG) alfa-sinuklein agregatsiyasini inhibe qiladi: Parkinson kasalligi uchun potentsial agent. Neyrokimyo. Res. 2016, 41, 2788–2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li, Y.; Chen, Z.; Lu, Z.; Yang, Q.; Liu, L.; Jiang, Z.; Chjan, L.; Chjan X.; Qing, H. Parkinson kasalligini flotillinlar yo'li orqali davolash uchun "Hujayraga qaramlik" ikki maqsadli kuzatilishi mumkin bo'lgan nanoid. Teranostika 2018, 8, 5469. [CrossRef]

23. Xu, Q.; Langli, M.; Kanthasamy, AG; Reddy, MB Epigallocatechin gallate Parkinson kasalligining sichqoncha modelida neyrorescue ta'siriga ega. J. Nutr. 2017, 147, 1926–1931 yillar. [CrossRef] [PubMed]

24. Chjou, T.; Chju, M.; Liang, Z. (-)-Epigallokatexin-3-gallate Parkinson kasalligining MPTP tomonidan qo'zg'atilgan sichqoncha modelida periferik immunitetni modulyatsiya qiladi. Mol. Med. Rep. 2018, 17, 4883–4888. [CrossRef]

25. Park, E.; Chun, HS Yashil choy polifenol Epigallocatechin gallate (EGCG) LPS tomonidan qo'zg'atilgan BV-2 mikroglial hujayra faollashuvining oldini oldi. J. Hayot fanlari. 2016, 26, 640–645. [CrossRef]

26. Liu, J.-B.; Chjou, L.; Vang, Y.-Z.; Vang, X.; Chjou, Y.; Xo, V.-Z.; Li, J.-L. () - Epigallokatexin gallatning lipopolisakkarid vositachiligidagi sitotoksiklikka qarshi neyroprotektiv faolligi. J. Immunol. Res. 2016, 2016, 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong, K.-J.; Li, H.-G.; Kook, MS; Ko, H.-M.; Jung, J.-Y.; Kim, W.-J. Epigallokatexin{6}}gallate sichqonlarda TLR4-NF-kB signalizatsiya yo‘lini bostirish orqali LPS bilan kasallangan kattalar hipokampal neyrogenezini qutqaradi. Koreyalik J. Physiol. Farmakol. 2016, 20, 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng, C.-Y.; Pho, Q.-H.; Vu, X.-Y.; Chin, T.-Y.; Chen, C.-M.; Fang, P.-H.; Lin, Y.-C.; Xsieh, M.-F. Faollashgan mikroglial hujayralardagi yallig'lanishga qarshi xususiyatlar uchun epigallokatexinning siklodekstrin komplekslari bilan to'ldirilgan PLGA mikrosferalari{10}}gallat. Polimerlar 2018, 10, 519. [CrossRef]

29. Buszello, K.; Harnish, S.; Myuller, R.; Myuller, B. Ishqoriy yog 'kislotalarining Solutol HS 15® bilan o'zgartirilgan parenteral O/W emulsiyalarining xususiyatlari va barqarorligiga ta'siri. Yevro. J. Pharm. Biofarma. 2000, 49, 143–149. [CrossRef]

30. Shashi, K.; Satinder, K.; Bharat, P. To'liq sharh: Liposomalar. Int. Res. J. Pharm. 2012, 3, 10–16.

31. Vang, W.-Y.; Tan, M.-S.; Yu, J.-T.; Tan, L. Altsgeymer kasalligida mikrogliyadan chiqarilgan yallig'lanishga qarshi sitokinlarning roli. Ann. Tarjima. Med. 2015, 3. [CrossRef]

32. Smit, JA; Das, A.; Rey, SK; Banik, NL Neyrodegenerativ kasalliklarda mikrogliyadan chiqarilgan yallig'lanishga qarshi sitokinlarning roli. Miya Res. Buqa. 2012, 87, 10–20. [CrossRef] [PubMed]

33. Xu, X.; Li, Z.; Chju, X.; Lin, R.; Chen, L. Salidroside LPS-induktsiyali BV2 mikroglial hujayralarida NF-kB va MAPK signalizatsiyasi orqali hujayra harakatchanligini pasaytiradi. Evid. Asoslangan to'ldiruvchi alternativ. Med. 2014, 2014, 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer, BR; Ponserts, P.; Nouven, EJ Microglia: markaziy asab tizimining immunologiyasining darvozabonlari. J. Leukok. Biol. 2009, 85, 352–370. [CrossRef] [PubMed]

35. Li, D.-S.; Jeong, G.-S. Butein PI3K/Akt yo'lini faollashtirish orqali Nrf2/AREga bog'liq gem oksigenaza 1 ifodasi orqali neyroprotektiv va yallig'lanishga qarshi ta'sir ko'rsatadi. Br. J. Farmakol. 2016, 173, 2894–2909. [CrossRef]

36. Matsuno, R.; Aramaki, Y.; Tsuchiya, S. LPS bilan qo'zg'atilgan makrofaglar tomonidan nitrat oksidi ishlab chiqarishga salbiy zaryadlangan lipozomalarning inhibitiv ta'sirida TGF-ning ishtiroki. Biokimyo. Biofizika. Res. Kommun. 2001, 281, 614–620. [CrossRef] [PubMed]

37. Chjan, J.; Fuji, S.; Vu, Z.; Xashioka, S.; Tanaka, Y.; Shiratsuchi, A.; Nakanishi, Y.; Nakanishi, H. COX-1 va yuqori tartibga solinadigan prostaglandin E sintazalarining mikrogliya tomonidan fosfatidilserin lipozomasi bilan qo'zg'atilgan prostaglandin E2 ishlab chiqarishda ishtiroki. J. Neyroimmunol. 2006, 172, 112–120. [CrossRef]

38. Ramos, GK; Fernandes, D.; Charro, KT; Souza, DG; Teysheira, MM; Assreuy, J. Apoptotik taqlid: Fosfatidilserin lipozomalari in vivo jonli ravishda peroksizoma proliferator bilan faollashtirilgan retseptorlarni (PPAR) faollashtirish orqali yallig'lanishni kamaytiradi. Br. J. Farmakol. 2007, 151, 844–850. [CrossRef]

39. Abe, N.; Nishixara, T.; Yorozuya, T.; Tanaka, J. Patologik markaziy va periferik asab tizimlarida mikrogliya va makrofaglar. Hujayralar 2020, 9, 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen, C.-H.; Xsieh, M.-F.; Xo, Y.-N.; Huang, C.-M.; Li, J.-S.; Yang, C.-Y.; Chang, Y. Yangi ishlab chiqarilgan MPEG-PCL-greft-2-gidroksitsellyuloza membranasi orqali katexin teri o'tkazuvchanligini kuchaytirish. J. a'zosi. Sci. 2011, 371, 134–140. [CrossRef]

41. Parthasarati, S.; Bin Aziziy, J.; Ramanatan, S.; Ismoil, S.; Sasidxaran, S.; dedi, MIM; Mansor, SM Mitragyna speciosa (Rubiaceae oilasi) barglaridan suvli, metanolik va alkaloid ekstraktlarining antioksidant va antibakterial faolligini baholash. Molekulalar 2009, 14, 3964–3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Errera, D.; Molina, A.; Bulin, K.; Klinge, B. Periodontal kasalliklar va aterosklerotik kasallik bilan bog'liqlik. Periodontologiya 2000 2020, 83, 66-89. [CrossRef] [PubMed]

43. Batista, CRA; Gomes, GF; Kandelario-Jalil, E.; Fiebich, BL; de Oliveyra, ACP lipopolisakkaridlari bilan qo'zg'atilgan neyroinflammatsiya neyrodegeneratsiyani tushunish uchun ko'prik sifatida. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2293. [CrossRef]

44. Creese, I.; Burt, DR; Snyder, SH Dopamin retseptorlari bilan bog'lanishni kuchaytirish lezyondan kelib chiqqan xatti-harakatlarning o'ta sezgirligi bilan birga keladi. Fan 1977, 197, 596–598. [CrossRef] [PubMed]