Etanol fenugreek ekstrakti: uning terining qarishiga qarshi molekulyar mexanizmlari va nanoenkapsulyatsiya orqali yaxshilangan funktsiyalari 2

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.5. LNF va fenugreek ekstraktining inson teri fibroblast hujayralarida hujayra hayotiyligi va kollagen ishlab chiqarishga ta'siri

Formulyatsiyalangan LNF ning sitotoksisitesini tekshirish uchun hujayralar bo'sh, LNF va fenugreek ekstraktlari bilan 24 soat davomida {0}} ug/ml (ikki marta suyultirish) bilan ishlov berildi. Hujayra hayotiyligi MTT tahlili yordamida o'lchandi. Shakl 6a da ko'rsatilganidek, ekstrakt bilan ishlangan hujayralarda hujayra hayotiyligi pasaygan, bo'sh va LNF bilan ishlangan hujayralarda esa hech qanday ta'sir kuzatilmagan. Ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, LNF ekstraktga qaraganda pastroq toksiklikni ko'rsatdi. Biz LNF ning inson dermal fibroblast hujayralarida kollagen ishlab chiqarishni induktsiya qilish qobiliyatini o'rganib chiqdik. Hujayralar 7 ug/ml ekstrakt va 1{{20}}0 ug/ml LNF (7 ug/ml ekstrakt ekvivalenti) bilan birga nazorat sifatida bo'sh zarrachalar bilan ishlov berildi, 7 uchun va 14 kun. Shakl 6b da ko'rsatilgandek, LNF bilan davolash uchun, bo'yalgan kollagen miqdori 7 va 14 kunlarda ekstrakti bilan davolash bilan solishtirganda mos ravishda 30 foizga va 50 foizga ko'paydi. Bundan tashqari, 2a-rasmda tuzilgan LNF kollagenazaga qarshi faollikni kuchaytirdi, chunki fenugreek ekstrakti (0,57±0,02mg/ml) bilan solishtirganda IC5o 0,21±0,03 mg/ml ga sezilarli darajada kamaydi. Ushbu natijalar LNF formulasi inson dermal fibroblast hujayralarida kollagen ishlab chiqarish induksiyasini kuchaytirishi va fenugreek ekstraktining anti-kollagenaza faolligini oshirishi mumkinligini ko'rsatdi. Fenugreek ekstraktining nano-formulyatsiyasi qarishga qarshi mahsulotlarning faol moddasi sifatida uning kuchini sezilarli darajada yaxshilaydi.

2.6. UV ta'siridan keyin MMP1, MMP9, IL-6 va IL-8 inhibisyonida tuzilgan LNFning roli

Keyinchalik biz LNF ning qarishga qarshi faolligi bo'yicha ba'zi mumkin bo'lgan mexanizmlarini o'rganib chiqdik. UV ta'siri terining qarishining asosiy regulyatorlaridan biridir, chunki u MMP1, MMP3 va MMP9 kabi kollagen kollapsini keltirib chiqaradigan matritsali metalloproteinaza (MP) oilasining ayrim a'zolarining ekspressiyasini keltirib chiqarishi haqida xabar berilgan [34,35] . Biz ultrabinafsha nurlanishining birgalikda o'stirilgan teri hujayralari uchun juda zaharli ekanligini kuzatdik (7a-rasm) va MMP1 va MMP9 sitokinlarini ishlab chiqarishni kuchaytirdi (7b-rasm). Bundan tashqari, fenugreek ekstrakti va formulali LNF bilan davolash sekretsiyani sezilarli darajada kamaytirishga muvaffaq bo'ldi. MMP1 va MP9 ning ultrabinafsha nurlanishidan keyin nazorat hujayralari bilan solishtirganda. Ushbu natijalar rutin va resveratrolni qarishga qarshi vosita sifatida davolash bilan mos edi. Ta'kidlash joizki, LNF bilan davolash qilingan hujayralardagi MMP1 va MMP9 ifodalarining kamayishi ekstrakti bilan ishlov berishdan sezilarli darajada past edi. Shunday qilib, LNF ultrabinafsha nurlanish ta'sirida MPI va MMP9 sekretsiyasini kamaytirishi va keyinchalik foto ta'sirida terining qarishini oldini olishi mumkin.

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Bundan tashqari, inson terisiga UVR ta'siri TNF- va interleykinlar, jumladan IL-1,IL-2, IL{{4} kabi yallig'lanish va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning faollashishiga vositachilik qilishi mumkin. }, va IL-8 [36]. Keyin biz LNF ning ultrabinafsha nurlari bilan stimulyatsiya qilingan yallig'lanishli sitokin ishlab chiqarishni, shu jumladan IL-6 va IL-8 ishlab chiqarishni inhibe qilish funktsiyasini ko'rib chiqdik. 7c-rasmda biz ultrabinafsha nurlanishi IL{{ ishlab chiqarishni sezilarli darajada oshirganini kuzatdik. 11}} va IL{12}} sitokinlar birgalikda yetishtirilgan teri hujayralarida. Fenugreek ekstrakti bilan davolashda nazorat bilan solishtirganda IL-6 va IL-8 ifodalarida sezilarli pasayish kuzatildi. Qizig'i shundaki, fenugreek ekstrakti bilan davolash rutin bilan solishtirganda ancha yuqori IL{16}} va IL-8 ingibitsiyasini ko'rsatdi, bunda bu inhibitiv faollik resveratrol bilan davolash qilingan guruhlarga o'xshash edi. Shunisi e'tiborga loyiqki, LNF bilan ishlangan hujayralardagi IL-6 va IL-8 ifodalari UV ta'siridan keyin fenugreek ekstrakti guruhiga nisbatan ancha past bo'lgan. Bu natijalar birgalikda LNF ultrabinafsha nurlar taʼsirida IL{23}} va IL{24}} ishlab chiqarishni potentsial ravishda inhibe qilishi va keyinchalik foto-stimulyatsiya qilingan terining yalligʻlanishi va terining qarishining oldini olishi mumkinligini koʻrsatdi.Natijada, bu natijalar fenugreekning etanolik ekstrakti va uning nano-formulyatsiyasi qarishni oldini olish uchun faol moddalar sifatida ishlatilishi mumkinligini ko'rsatadi.

3. Munozara

Fenugreek ekstrakti antioksidant, antiradikal va yallig'lanishga qarshi ta'sirga ega ekanligi bir necha tadqiqotlarda isbotlangan [29,37], ammo uning ajinlarga qarshi xususiyati hali ham foydalanilmagan. Ushbu tadqiqot birinchi bo'lib fenugreek ekstraktining anti-aging faolligini in vitro kollagenaz inhibitör tahlili yordamida aniqladi. Oldingi tadqiqotlar uzum pomasining ekstrakti [38], yashil choy ekstrakti [39] va qo'ziqorin ekstrakti [40] kabi kosmetik mahsulotlarning faol moddasi sifatida anti-kollagenaza faolligi bo'lgan o'simlik ekstraktlaridan foydalanishni taklif qildi. Bundan tashqari, fenugreek ekstraktining inson dermal fibroblast hujayralarida kollagen ishlab chiqarishga ta'siri hech qachon xabar qilinmagan. Tamara va boshqalar. (2006) kollagenni ko'paytirishga yordam beradigan fenugreek ekstraktining faol birikmasi sifatida rutin yordamida flavonoidlarning inson fibroblastlarida kollagen sinteziga ta'sirini ko'rsatdi [41]. Fenugreekning ushbu tadqiqoti uning qarishga qarshi istiqbolli qobiliyatini ko'rsatdi va rutinni biologik belgi sifatida ko'rsatdi.

Rutin (3),4',5.7-tetragidroksi-flavon-3-rutinosid) bu tadqiqotda ishlatilgan, chunki u bir qancha o'simliklarda, jumladan Fagopyrum esculentum Moench, Rutada qayd etilgan flavonol glikoziddir. graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l va fenugreek[17]Rutin antioksidant, sitoprotektiv, antikanserogen, neyroprotektiv va yurak-himoya faolligiga ega bo'lib, qarish va qarish bilan bog'liq kasalliklarning oldini olishda qo'llanilishini taklif qiladi. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, tayyorlangan ekstraktda rutinning yuqori miqdori mavjud bo'lib, u boshqa tadqiqotlarda fenugreek ekstrakti komponenti sifatida deyarli topilmagan yoki aniqlanmagan. Aksariyat boshqa tadqiqotlarda trigonellin fenugreek ekstraktining asosiy kimyoviy tarkibiy qismi sifatida qayd etilgan [18,37,38,42-47].

Hatto fenugreek ekstrakti ham qarishga qarshi vosita sifatida potentsial faollikka ega. Uning rangi va barqarorligi ushbu ilova uchun hali ham qiyin. Nanokapsulyatsiya barqarorlashtirish, hidni maskalash, suvda eruvchanligini oshirish, biologik birikmalar chiqarilishini nazorat qilish [48,49] va tabiiy mahsulotlarning tashqi ko'rinishini yaxshilashga qodir bo'lgan o'ziga xos texnologiya sifatida xabar qilingan. Ushbu tadqiqotda liponiosoma o'zining noyob xususiyatlari tufayli qo'llanilgan, ular gidrofil va hidrofobik qismlardan tashkil topgan bo'lib, ular turli xil eruvchan moddalarga ega bo'lgan keng doiradagi moddalarni qamrab olishi mumkin [50]. Biz lipozomalar va niosomalarning xususiyatlarini o'z ichiga olgan gibrid tashuvchi bo'lgan fenugreek ekstrakti kapsulalangan lipozomalarni (LNF) ishlab chiqdik. Ishlab chiqilgan LNF ning gibrid komponentlari lipozomalar va niosomalarning termal xususiyatlarini aks ettiruvchi DSC yordamida erish harorati bilan tasdiqlangan.

cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Korneum stratum - terining tashqi qatlami bo'lib, u zararli moddalarga qarshi samarali to'siq bo'lib, ularning teri bo'ylab tashishini cheklaydi. Biroq, nanotashuvchilardan foydalanish dorilar yoki moddalarning ushbu to'siq orqali kirib borishini kuchaytirish orqali transdermal etkazib berishni yaxshilashi isbotlangan [51]. LNF ning transdermal etkazib berishdagi ta'sirini o'rganish uchun ex vivo cho'chqa terisi penetratsiyasi qo'llanilgan, chunki uning anatomik xususiyatlari terining qalinligi, follikulyar tuzilishi va soch zichligi jihatidan asosan inson terisiga o'xshaydi [52]. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, LNF ning o'tkazuvchanligi fenugreek ekstrakti va rutinga qaraganda kattaroq va chuqurroq edi va LNF ning ajralish profili fenugreek ekstraktiga qaraganda sekinroq ajralib chiqdi, bu esa tuzilgan LNF teriga kirib boradigan ekstraktdan sezilarli darajada ustun ekanligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, formulali LNF anti-kollagenaza faolligini kuchaytirdi, chunki IC-A fenugreek bilan solishtirganda 0.205±0.03mg/ml ga sezilarli darajada kamaydi. ekstrakti (0,567±0,02 mg/ml). Ushbu natijalar LNF formulasi inson dermal fibroblast hujayralarida kollagen ishlab chiqarish induksiyasini kuchaytirishi va fenugreek ekstraktining anti-kollagenaza faolligini oshirishi mumkinligini ko'rsatdi. Fenugreek ekstraktining nano-formulyatsiyasi qarishni oldini olish uchun faol tarkibiy qism sifatida foydalanish qobiliyatini yaxshilashga yordam beradi.

Ultrabinafsha nurlanishiga ta'sir qilish terining tashqi qarishining asosiy omili bo'lib, u erta qarish yoki foto qarish deb nomlanadi [53.54]. Radiatsiya teri keratinotsitlari va fibroblastlarning hujayra yuzasi retseptorlarining faollashishiga olib keladi, bu dermal hujayradan tashqari matritsa ifodalarini, ayniqsa matritsa metalloproteinazalar oilasini (MPs) induksiyasiga olib keladi. UVA ning past dozalarida surunkali ta'sir qilish kollagenaza -1 (MMP1), stromelizin-1 (MMP3) va jelatinaza A (MMP2) [55] mRNK darajalarining ko'tarilishiga olib kelishi ko'rsatilgan. Natijada terining kollagen elastik tolalarining parchalanishi, shuningdek, yangi kollagen sintezining to'xtashi sodir bo'ladi. Bu hodisa terining himoya funktsiyalari tartibga solinmagandan so'ng, terining yaxlitligi, elastikligi va tuzilishiga ta'sir qiladi, ajinlar paydo bo'lishi va terining qarish belgilari [54,56]. Bundan tashqari, inson terisiga UVR ta'siri teridagi yallig'lanish kaskadining muhim regulyatori bo'lgan TNF-alfa ifodalanishiga vositachilik qiladi. UV nurlanishi, shuningdek, interleykin-2 (IL-2) va interleykin-6 (1L-6) kabi yallig'lanish va yallig'lanishga qarshi sitokin sekretsiyasi faollashuvini ham boshlaydi [36] . Natijada, bu UVR tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish reaktsiyasi qizarish, tirnash xususiyati va eritema belgilari bilan kuygan terining qo'zg'alishida muhim rol o'ynaydi [35.59].

Shunday qilib, erta qarish sabablarini oldini olish uchun ushbu profilaktika funktsiyalariga ega bo'lgan ba'zi yangi faol moddalarni topish ideal bo'ladi. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, LNF formulasi inson dermal fibroblast hujayralarida kollagen ishlab chiqarish induktsiyasini kuchaytirishi, UV ta'sirida MP1, MP9, IL-6 va IL-8 sekretsiyasini kamaytirishi mumkin. fenugreek ekstraktining anti-kollagenaz faolligini oshirish. Shu sababli, etanolik fenugreek ekstrakti va uning nano-formulyatsiyasi kosmetik mahsulotlarda yangi faol moddasi sifatida potentsial foydalanish bo'lishi mumkin va nanokapsulyatsiya fenugreek ekstraktining anti-aging agenti sifatida funktsiyasi va faolligini oshirishga qodir. 4. Materiallar va usullar

4.1.O'simlik materiallari va kimyoviy reagentlar

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98 foiz tozaligi), trisin buferi, clostridium histolyticum va FALGPA (N-[3(2-furil) akril)-Leu-Gly-Pro-Ala dan kollagenaza), to'g'ridan-to'g'ri qizil 80, pikrik kislota va dimetil sulfoksid edi. Sigma-Aldrichdan (Sent-Luis, MO, AQSH) sotib olingan asetonitril, etil asetat, mutlaq etanol, chumoli kislotasi, natriy degidrat fosfat, disodiy vodorod fosfat, xlorid kislota va natriy gidroksid Karlo Erbadan (Emmendingen, Germaniya) sotib olindi. Tijorat darajasidagi etanol Italmar Co., Ltd.dan (Bangkok, Tailand) sotib olindi. Xolesterin Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Tailand) dan sotib olindi. Propilen glikol va erituvchi aralashmasi S.Tong Chemicals Co,Ltd.dan sotib olindi. (Nonthaburi, Tailand). Sorbitan oleat Croda Co., Ltd. (Bangkok, Tailand) dan sotib olingan. Fosfolipid (Phospholipon 90G) Cargill Siam Ltd.dan (Bangkok, Tailand) sotib olindi. Tokoferol asetat Namsiang Co, Ltd (Bangkok, Tailand) dan sotib olindi. Konservant Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Tailand) dan sotib olingan. Paraformaldegid Himadia Laboratories (Mumbay, Hindiston) dan sotib olindi va 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid Calbiochem'dan xarid qilindi (Burlington, MA, AQSh).

4.2.Ekstraktsiya

Fenugreek urug'i kukuni (500 g) 3 kun davomida 95 foiz etanol (1: 5) bilan maydalangan. Ekstraksiya uch marta takrorlandi (3 × 2500 ml). Ekstraktning butun eritmasi filtrlanadi, etanol 100 mbar ostida 40 gradusda aylanadigan evaporatator yordamida bug'lanadi (Heidolf, Shvabax, Germaniya). Olingan ekstrakt yog'li sarg'ish-jigarrang pasta bo'lib, unumdorligi 5 foiz (w/w) bo'lib, u ishlatilgunga qadar 4 daraja haroratda saqlanadi.

4.3. Fenugreek ekstraktidagi rutinni UHPLC tasdiqlash va identifikatsiya qilish

Fenugreek ekstraktini tahlil qilish uchun standart marker sifatida rutin trihidrat ishlatilgan. UHPLC usuli chiziqlilik, aniqlik, aniqlik va sezgirlik nuqtai nazaridan ishlab chiqilgan va tasdiqlangan[31,32] Shimadzu LC-30 AD UHPLC tizimi, SPD-M20A diyot massiv detektori va avtomatik namuna oluvchi SIL-30AC. Usul SUPLECO Titan C18 ustunidan (5 sm × 2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, AQSh) 30 darajada foydalanilgan va 26{{ to‘lqin uzunligi aniqlangan. 19}} nm. Mobil faza Kenny va boshqalardan moslashtirilgan. [45]. Qisqacha aytganda, 0.0oʻta toza suvdagi(A) 5 foizli chumoli kislota eritmasi va atsetonitrildagi (B) 0.05 foiz hajmdagi chumoli kislotasi tayyorlandi. gradient rejimida 0,25 ml / min oqim bilan: boshlang'ich holati 1,0 minut uchun 10 foiz B bo'lgan, 3,5 daqiqa davomida 75 foiz B ga ko'tarilgan, 0,75 daqiqa davomida 10 foiz B gacha pasaygan va 0,25 daqiqa davomida ushlab turilgan.

4.4. Kollagenaz tahlili

Kollagenazaga qarshi faollikni aniqlash uchun kollagenaz tahlili o'tkazildi [60]. 25 mkL 50 mM trisin bufer eritmasi (pH7,5), 25 mkl 2 birlik/ml kollagenaza (clostridium histolyticum tipi IA) va 25 mkl namunadan iborat aralashma eritmasi tayyorlandi va xona haroratida 15 uchun inkubatsiya qilindi. min. Reaksiyani boshlash uchun aralashma eritmasiga 10 uL sintetik substrat va 2 mM N-[3-(2-Furil) akriloil-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) qo'shildi va inkubatsiya qilindi. 20 daqiqa davomida. Har bir supernatantning absorbsiyasining o'zgarishi 340 nm da o'lchandi (Synergy H1 mikroplatini o'quvchi) va ICso qiymatlari x o'qidagi namuna konsentratsiyasini va y o'qidagi foiz inhibisyonini ko'rsatadigan chiziqli regressiya egri chizig'ini chizish orqali hisoblab chiqilgan. Foiz inhibisyoni quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

4.5.Hujayra madaniyati

Inson dermal fibroblast hujayralari American Type Culture Collection'dan sotib olindi: ATCC (PCS-201-010) va abadiylashtirilgan inson keratinotsitlari (HaCaT) Cell Lines Service, Germaniyadan sotib olindi (Cat. No. 300493). Hujayralar Dulbekkoning o'zgartirilgan Eagle muhitida (DMEM) (Gibco, Buyuk Britaniya) 10 foizli FBS (Gibco, Buyuk Britaniya), 1 foiz penitsillin (100 birlik/ml) va streptomitsin (100 ug/ml) (Gibko, Sent-Luis) bilan to'ldirildi. , MO, AQSh). Hujayralar 5 foiz karbonat angidrid muhitida 37 daraja inkubatsiya qilindi.

4.6. Kollagen tarkibi va Pikrosirius Qizil binoni

Inson dermal fibroblast hujayralari 2,5 × 104 hujayra/quduqda 48 quduqli plastinkalarga ekilgan va 24 soat davomida inkubatsiya qilingan. Keyin hujayralar 7 va 14 kun davomida liponio-ba'zilar ekstraktisiz (bo'sh deb ko'rsatilgan), liponiosomani o'z ichiga olgan fenugreek ekstrakti (LNF) va fenugreek ekstrakti bilan turli konsentratsiyalarda ishlov berildi, 005 foizli. DMSO avtomobil boshqaruvi sifatida ishlatiladi. Ommaviy axborot vositalari har 2 kunda almashtirildi. Keyin hujayralar PBS bilan yuvildi va 100 ul 4 foizli PFA bilan 10 daqiqa davomida mahkamlandi. Hujayralar PBS (ikki marta) bilan yuvilgan va 100 uL 0,1 foizli to'g'ridan-to'g'ri qizil 80 eritmasi bilan 10 daqiqa davomida bo'yalgan. Bo'yashdan so'ng, ortiqcha bo'yoqni yuvish uchun 70 foizli etanolda 0,01 NHCl qo'shildi. Bo'yalgan kollagen 10 uL 0,5 N NaOH bilan eritildi va absorbans 540 nm da mikroplata o'quvchi (Synergy H1 mikroplastinka o'quvchi) yordamida o'lchandi. Kollagen tarkibining foizi quyidagi tenglama yordamida hisoblanadi:

4.7.Hujayra hayotiyligini tahlil qilish

Inson dermal fibroblast hujayralari 2 × 104 hujayra / quduqda 96 quduqli plastinkalarga ekilgan va 24 soat davomida inkubatsiya qilingan. Inkubatsiyadan so'ng, ekstraktisiz (bo'sh), LNF va fenugreek ekstraktisiz lipozomalarning turli konsentratsiyasi (0-100 ug/ml) qo'shildi va 24 soat davomida kultivatsiya qilindi. Keyin har bir quduqqa 100 mL MTT (1 mg/mL) qo'shildi va 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. Formazan mahsulotini eritish uchun DMSO qo'shildi. Absorbans mikroplata o'quvchi (Synergy Hl mikroplata o'quvchi) yordamida 570 nm da o'lchandi. Hujayra hayotiyligi foizi quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

4.8.Liponiosomalarning tuzilishi

Liposomani shakllantirish uchun gomogenlashdan keyin pre-emulsifikatsiya qo'llaniladi. Sferik lipidli ikki qatlam hosil qilish uchun fosfolipid va emulsifikator aralashmasi ishlatilgan va zarrachalarning qattiqligini oshirish uchun xolesterin ishlatilgan [15]. Qisqacha aytganda, soya lesitini, xolesterin va emulsifikator propilen glikolda tarqatildi va 2-jadvalda ko'rsatilganidek, 70-80 darajada (yog' fazasi) qizdirildi. Fenugreek ekstrakti propilen glikol/suvda (suv fazasi) eritildi va isitildi. bir xil suv hammomi. Ekstraktning suvli eritmasi lipid komponentlariga doimiy ravishda qo'shildi va yuqori tezlikda aralashtirish (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, AQSH) yordamida 8000-100 aylanish tezligida 5-10 daqiqa davomida bir hil holga keltirildi. Aralash sovutildi. 50 daraja va tokoferol asetat qo'shildi va LNF olish uchun yana 10 daqiqa gomogenlashtirildi. LNF morfologiyasi dinamik yorug'lik tarqalishi (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire) yordamida o'rganilgan gidrodinamik o'lchami, polidisperslik indeksi Pdl va zeta potentsialiga ega transmissiya elektron mikroskopida (TEM, JEOL, Peabody, MA, AQSh) kuzatildi. Buyuk Britaniya). Differensial skanerlash kalorimetri (DSC, Mettler Toledo DSC1) yordamida lipozomalarning erishi xatti-harakatini tasdiqlash tekshirildi. Namunaning yopishqoqligi raqamli Brookfield viskozimetri (HBDV-IIIU CP modeli) bilan o'lchandi. Qisqacha aytganda, 0,5 g namunalar ishlatilgan va yopishqoqlik atrof-muhit haroratida 20 daqiqa davomida 0,5 aylanish / min tezlikda boshqariladigan CP-40 mil yordamida tekshirilgan.

LNF ning barqarorligini baholash uchun zarralar 3 oy davomida 4 daraja, 25 daraja va 40 daraja ushlab turildi va zarracha hajmi va morfologiyasidagi o'zgarishlar tekshirildi.

Liposoma va shovqinli inkapsulyatsiya fenugreek ekstrakti (LF va NF) LNFga o'xshash usul yordamida tuzilgan. LF moy fazasiga sorbitan oleat qo'shilmasdan tayyorlangan, niosoma (NF) esa fosfolipid komponenti qo'shilmasdan tayyorlangan. Ularning fizik-kimyoviy tavsiflari qo'shimcha S1-jadvalda keltirilgan.

4.9.Enkapsulyatsiya samaradorligi va bioaktiv yuklanish foizlari

LNF ning inkapsulyatsiya samaradorligi (foiz EE) va bioaktiv yuklanishi (BL foizi) ultrafiltratsiya usuli yordamida kapsulalangan dori miqdorini aniqlash orqali hisoblangan. Rutin miqdori standart marker sifatida ishlatilgan. 20 mg/ml LNF DI suvda eritilgach, 4 soat davomida 80,{2}} aylanish tezligida santrifüj qilindi. Supernatant yig'ildi va keyin kapsullanmagan rutin ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiya texnikasi (UHPLC) [61] yordamida baholandi. EE va foiz BL quyidagi tenglamalar bilan hisoblab chiqilgan:

4.10.Frans diffuziya xujayrasi

7mg/ml fenugreek ekstrakti va LNFni in vitro o'tkazuvchanligi Franz diffuziya hujayralari tizimida o'rganildi [62]. Sintetik membrana (Biomax 5{7}}0 kDa ultrafiltratsiya diski, Merck, MA, AQSH) donor va retseptor bo'limi orasiga joylashtirilgan. PH 5,5 bo'lgan fosfat tampon tuzi (PBS) 50 rpm (37 daraja) da aralashtiriladi va retseptor muhiti sifatida ishlatilgan. Fenugreek ekstrakti va LNF donor hujayra qopqog'idagi membranaga surildi. Namunalar membrana orqali o'tkazilib, retseptorlar bo'linmasidan 0,2,4,6,8,12 va 24 soatda to'plangan. Kümülatif o'tkazuvchan rutin UHPLC texnikasi bilan baholangan va hisoblangan.

4.11. Cho'chqa terisining o'tkazuvchanligi

LNF ning cho'chqa terisi orqali o'tishi tasvirlangan massa mikroskopida (IMS, SHIMADZU, model: iMScopoe TRIO, Kyoto, Yaponiya) tasvirlangan. Cho'chqa terisi 1,5 × 1,5 sm2 ga kesilgan. Rutin, fenugreek ekstrakti va LNF kesilgan cho'chqa terisiga surtiladi va 24 soat davomida 4 daraja saqlanadi. Namunalar kriostat yordamida kesilib, indiy qalay oksidi bilan qoplangan shisha slaydga joylashtirildi va 9-aminoakridin matritsa moddasi (9-AA) bilan püskürtüldü. Namunalar-20 darajada saqlangan. tahlil qilishdan oldin. Rutinning optik tasvirlarining qoplamasi 609,15 m/z tezlikda tahlil qilindi.

4.12.Differentsial skanerlash kalorimetrlari (DSC) xarakteristikasi

Differensial skanerlash kaloriyametri (DSC, Mettler Toledo DSC1) [63] yordamida LNF ning erish nuqtasini aniqlash uchun differentsial skanerlash kalorimetriyasi (DSC) tahlili o'tkazildi. To'g'ri tortishdan so'ng, namunalar alyuminiy idishlarga solingan va qopqoq bilan yopilgan. Skanerlash jarayonida 40 ml / min tezlikda tozalangan azot gazi ostida 25 dan 350 darajagacha bo'lgan harorat oralig'ida 10 daraja isitish tezligi qo'llanildi. 4.13.Odamning birgalikdagi teri hujayralarini qurish

Inson dermal fibroblast hujayralari 8,5 × 104 hujayra / quduqda 12 quduqli kultura qo'shimchalariga (Korning, Korning, NY, AQSh) ekilgan va 24 soat davomida ekilgan. Dermal fibroblastning ikkinchi va uchinchi qatlamlari ketma-ket kunlarda birinchi qatlamga qayta-qayta qo'shilgan. Uchinchi qatlam qo'shilgandan 24 soat o'tgach, HaCaT hosil bo'lgan fibroblast qatlamlariga 8,5 × 10 daraja hujayralar / quduqda ekilgan va tajribadan oldin yana 24 soat davomida ekilgan.

4.14. Birgalikda o'stirilgan teri hujayralarida UV ta'siridan so'ng hujayra hayotiyligi va MMP sekretsiyasini o'rganish

Insonning birgalikda o'stirilgan teri hujayralari ijobiy nazorat sifatida 7 ug/ml ekstrakt va 100 ug/ml LNF (7 ug/ml ekstrakt ekvivalenti), 100 ug/ml blank va 10 ug/ml resveratrol bilan oldindan ishlov berildi. , 24 soat davomida. Birgalikda ishlab chiqarilgan teri hujayralari keyin ikki marta PBS bilan yuvildi va 5J / sm2 UVA va 30 mJ / sm2 UVB nurlanishiga ta'sir qildi (Solar Simulators, NY, AQSH). UV nurlanishidan so'ng, birgalikda o'stirilgan teri hujayralari sinovdan o'tgan namunalar bilan 24 soat davomida inkubatsiya qilindi. Keyin supernatant MMP1 va MP9 miqdorini aniqlash uchun yig'ildi. Insonning birgalikda o'stirilgan teri hujayralarida UV-induktsiyali MMP1 va MMP9 sekretsiyasi darajasi ishlab chiqarish protokollariga muvofiq ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlil to'plamlari (MMP1: ab215083 va MMP9: ab100610, abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) bilan o'lchandi.

UV ta'siridan so'ng insonning birgalikda o'stirilgan teri hujayralarining hayotiyligi CellTiter-Glo lyuminestsent hujayra hayotiyligini tahlil qilish to'plami (Promega, Madison, WI, AQSh) yordamida baholandi. 24 soatlik UV ta'siridan so'ng, birgalikda o'stirilgan teri hujayralari ikki marta PBS bilan yuvildi va har bir quduqqa 100 mkl Glo Lizis Buferi (Promega, Madison, WI, AQSh) qo'shildi. 10 daqiqa davomida inkubatsiyadan so'ng, 50 uL CellTiter-Glo reaktivi qo'shildi va xona haroratida 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Keyin lyuminestsent signal mikroplastinkali luminometr (SpectraMax L, Molecular Devices) yordamida o'lchandi.

4.15.Statistik tahlil

Natijalar o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida taqdim etildi. Muhim farqlar Student testi yoki bir tomonlama yoki ikki tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) va undan keyin Tukeyning post hoc testi (GraphPad Prism 9) orqali p qiymatlari bilan tahlil qilindi.<0.05 considered="" statistically="">

5. Xulosalar

Birgalikda ushbu tadqiqot ikkita muqobil taklifni ishlab chiqdi. Birinchidan, rutin nafaqat ultrabinafsha nurlanishdan himoya qilish va antioksidant moddalar nuqtai nazaridan kuzatilgan, balki xromatogramma barmoq izlarining standart belgisi va fenugreek urug'i kukuni ekstraktining qarishga qarshi faolligining asosiy ma'lumotnomasi sifatida ham ishlatilgan. Ikkinchidan, etanolik ekstraktning qarishga qarshi molekulyar mexanizmlari ko'rsatildi. Ekstrakt anti-kollagenaza faolligi, kollagen ishlab chiqarishni rag'batlantirish va kollagen degradatsiyasini inhibe qilish kabi yangi biologik xususiyatlarni ko'rsatdi, bu qarishga qarshi mahsulotlar uchun potentsial muqobil tabiiy qarishga qarshi vositaga ishora qiladi. Kapsülleme usullari bioaktiv birikmalar va kimyoviy va fizik buzilish jarayonlarini himoya qilish va ularning biologik faolligini foydalanishgacha uzaytirish uchun ishlatilishi mumkin. Ushbu usul o'simlik ekstraktlarining toksikligini ham kamaytiradi. Ushbu tadqiqotda ishlab chiqilgan lipozomalar juda barqaror va uzoq muddat chiqariladi. Nano-formulyatsiya, shuningdek, fenugreek ekstraktining qarishga qarshi xususiyatlarini oshirishi mumkin. Ushbu tadqiqot asosida biz LNFni terining qarishini oldini olishda istiqbolli faol komponent sifatida qo'llash mumkinligini taklif qilamiz.

Ushbu maqola Pharmaceuticals 2022, 15, 254 dan olingan. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals