Yishen Tonglong qaynatmasining kalamushlarda yaxshi prostata giperplaziyasiga IL-6/STAT3 signalizatsiya yoʻli orqali terapevtik taʼsiri va mexanizmini oʻrganish

 

Abstrakt

Maqsad:Interleykin (IL)-6/signal o'zgartiruvchisi va transkripsiya (STAT)3 signalizatsiya yo'lining faollashtiruvchisi orqali kalamushlarda prostata bezining yaxshi giperplaziyasiga (BPH) Yiqi Wenshen Tonglong qaynatmasining (bu erda Yishen Tonglong qaynatmasi deb qisqartiriladi) meliorativ ta'siri va mexanizmini tekshirish.

Usullari:Erkak Sprague-Dawley (SD) kalamushlari kastratsiya qilindi va keyin BPH modelini yaratish uchun teri ostiga testosteron propionat AOK qilindi. Kalamushlar tasodifiy ravishda quyidagi guruhlarga ajratildi (n=12/guruh): model; Yishen Tonglong qaynatmasi past va yuqori dozali guruhlar (15 va 30 g / kg); STAT3 faollashtiruvchi guruhi (Colivelin, 1 mg/kg); va kombinatsiyalangan yuqori dozali Yishen Tonglong qaynatmasi (30 g / kg) + Colivelin (1 mg / kg) guruhi. Qo'shimcha 12 ta erkak SD kalamushlar soxtalashtirilgan guruh sifatida xizmat qildi. Yishen Tonglong qaynatmasi va / yoki Colivelin bilan guruhga xos davolanishdan so'ng biz prostata indeksini (PI) va estradiol (E2) / testosteron (T) nisbatini baholadik; gematoksilin-eozin (HE) va Massonning trikromli bo'yalishi bilan prostata histomorfologiyasi va fibrozni baholadi; immunohistokimyo bilan o'lchangan Ki-67 ifodasi; prostata to'qimasi va zardobida Elishay tomonidan aniqlangan IL-6 va IL-1 darajalari; va Western blotting yordamida kollagen I/III va IL-6/STAT3 yo'li bilan bog'liq oqsillarni aniqladi.

Natijalar:Shaxs bilan solishtirganda, model guruhi sezilarli prostata giperplaziyasi va fibrozni ko'rsatdi, bunda PI, Ki-67 optik zichligi, to'qima/zardob IL-6 va IL-1, kollagen I/III, IL-6 protein va p-STAT3/STAT3 sezilarli darajada oshgan, E2/T ning sezilarli kamayishi (P <0.5). Model guruhiga nisbatan Yishen Tonglong qaynatmasining past va yuqori dozalari giperplaziya va fibrozni engillashtirdi, PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kollagen I/III, IL-6 protein va p-STAT3/STAT3 ni kamaytirdi va E2/T ni oshirdi (barchasi P <0,05). Yuqori dozali qaynatma past dozaga qaraganda ko'proq yaxshilanishlarni ta'minladi (P <0,05). Kolivelinning o'zi giperplaziya va fibrozni kuchaytirdi va PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kollagen I/III, IL-6 va p-STAT3/STAT3 ni oshirib, E2/T ni kamaytirdi (P <0,05). Kolivelinni birgalikda qo'llash yuqori dozali damlamaning afzalliklarini susaytirdi, bu yuqoridagi barcha ko'rsatkichlarni faqat yuqori dozali damlama bilan solishtirganda sezilarli darajada yomonlashtirdi (P <0,05).

Xulosa:Yishen Tonglong qaynatmasi yallig'lanishni yumshatadi va kalamushlarda BPH patologiyasini hech bo'lmaganda qisman IL-6/STAT3 signalizatsiya yo'lining faollashuvini bostirish orqali yaxshilaydi.

Kalit so‘zlar:IL-6/STAT3 signalizatsiyasi; Yishen Tonglong qaynatmasi; yaxshi xulqli prostata giperplaziyasi; prostatit kasalliklarini davolash uchun o'simlik

 

Cistanche o'simlik qo'shimchalari

 

 

 

Prostata salomatligi uchun yangi tcm o'ti haqida batafsil ma'lumot

 

 

 

Kirish

Benign prostata giperplaziyasi (BPH) o'rta va katta yoshdagi erkaklarda pastki siydik yo'llarining keng tarqalgan obstruktiv obstruktiv kasalligi bo'lib, epiteliya va stroma proliferatsiyasi va prostata kengayishi bilan tavsiflanadi, bu hayot sifatini sezilarli darajada yomonlashtiradigan siydikning ikkilanishi, chastotasi va shoshilinchligiga olib keladi [1,2]. Yallig'lanish BPH patogenezining asosiy omilidir; epiteliy va stromal silliq mushaklarning ko'payishi va fibrotik qayta qurishga yordam beradi. Shuning uchun infektsiyaga qarshi va yallig'lanishga qarshi strategiyalar BPH ning oldini olish va boshqarish uchun samaralidir [3,4].

IL-6 - to'qima hujayralarida keng tarqalgan pleiotrop yallig'lanishga qarshi sitokin. Yallig'lanish dasturlarini ishga tushirish uchun STAT3 ni faollashtiradi [5]. IL-6/STAT3 faollashuvini inhibe qilish quyi oqim proinflamatuar vositachilarni kamaytiradi, yallig'lanish kaskadlarini to'xtatadi, gipertrofiya bilan bog'liq immun infiltratsiya va fibrozni kamaytiradi va natijada BPH rivojlanishini sekinlashtiradi [6,7]. Demak, IL-6/STAT3 BPHda oqilona terapevtik maqsaddir.

Yishen Tonglong qaynatmasi - bu Yinni oziqlantirish va Yangni qo'llab-quvvatlash, Qi va buyrakni tonlash va namlikni yo'qotish bilan qon aylanishini rag'batlantirish kabi an'anaviy funktsiyalarga ega klassik Xitoy o'simlik formulasi. Klinik jihatdan u nam-issiqlik va buyrak Qi etishmovchiligi bilan qonning turg'unligi tufayli dizuriya uchun ishlatiladi va prostata yallig'lanishini va BPHdagi giperplastik o'zgarishlarni susaytirishi haqida xabar berilgan [8]. BPHdan tashqari, u inson prostata saratoni hujayralarining ko'payishini inhibe qiladi, apoptozni rag'batlantiradi va bosqin va migratsiyani bostiradi [9]. Tarmoq farmakologiyasi va molekulyar o'rnatish prostata kasalliklari modulyatsiyasi bilan bog'liq asosiy maqsadlarga AKT1, IL-6 va VEGFA va boshqalarni o'z ichiga oladi [10]. Ushbu nazariy asos va oldingi dalillarga asoslanib, biz Yishen Tonglong qaynatmasi IL-6/STAT3 signalini bostirish orqali BPHni yaxshilaydi, deb taxmin qildik. Biz bu gipotezani kalamush BPH modelida sinab ko'rdik.

Materiallar va usullar

Hayvonlar

Erkak SD kalamushlar, SPF darajasi, 200-230 g, 6-7 haftalik, Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd. (SCXK [Yue] 2022-0060) dan olingan. Kalamushlar 12 soat yorug'lik / qorong'u davrlar, 50-60% namlik va 23-25 ​​daraja ostida qafas uchun 4 dan kam yoki teng bo'lgan joyda joylashtirildi.

 

Reaktivlar va asboblar

 

Yishen Tonglong qaynatmasi xom o'tlar: Anemarrhena asphodeloides (Chji Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), Rehmannia glutinosa tayyorlangan ildiz (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Zhu Yuppo o), DiosScorea (Yasita) Ling), Paeonia suffruticosa po'stlog'i (Mu Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli qayta ishlangan lateral ildiz (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), Prunus persica urug'i (Tao Ren), Vaccarid Xigets (Seget) plantago-aquatica (Ze Xie). Pekin Tongrentang (Anguo) Xitoy Herbal Slices Co., Ltd dan olingan.

Colivelin (HY-P1061), MCE (AQSh).

Testosteron propionat (sofligi 98%, T7260); IL‑1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd kalamush uchun ELISA to'plamlari.

HE bo'yash to'plami (ab245880), anti-p‑STAT3 (ab76315), Masson to'plami (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-kollagen I (ab270993), anti-Ki‑67 (ab166318), anti-Ki‑67 (ab166918), anti‑IL‑6 (ab259341), HRP eshaklari quyonlarga qarshi ikkilamchi (ab205722), kalamush IL‑6 ELISA (ab234570), Abcam (AQSh).

Anti‑ ‑aktin (AF5003), Beyotime (Shanxay).

Parafin mikrotomi HS‑2205 (Olabao, Jinan), KP‑PH100S mikroskop (Shenzhen KEPUS), UMR‑9600 mikroplata oʻquvchi (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 va PROTEAN quvvat manbalari (Bio‑Rad, AQSH).

BPH modeli va guruhlash

Kalamushlar natriy pentobarbital (45 mg/kg, 3% vazn/v, intraperitoneal) bilan behushlik qilindi, moyaklar eksteriorizatsiya qilindi va jarrohlik yo'li bilan olib tashlandi. 3 kunlik tiklanishdan so'ng, kalamushlar 21 kun davomida har kuni testosteron propionat (zaytun moyida 5 mg / kg) teri ostiga yuborilgan. Yalpi kengayish va gistopatologik giperplaziya BPH ni modellashtirish muvaffaqiyatini tasdiqladi [11]. Sham kalamushlari orxidektomiyasiz skrotum kesmasidan o'tkazildi va vosita zaytun moyi oldi.

 

Tayyorlash va boshqarish

Yishen Tonglong qaynatmasining bitta retsepti quyidagilarni o'z ichiga oladi: Chji Mu, Huang Bay, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Vang Bu Liu Xing, Ze Xie (har biri 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (har biri 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (har biri 10 g). O'tlar ikki marta suv bilan qaynatiladi, filtratlar birlashtiriladi va 1,5 yoki 3,0 g / ml gacha konsentratsiyalanadi. Kolivelin sho'r suvda 0,1 mg/ml gacha eritildi.

Past va yuqori dozali damlama guruhlari: gavaj 15 yoki 30 g / kg (1,5 yoki 3,0 g / ml da 10 ml / kg), qo'shimcha ravishda intraperitoneal sho'r suv (10 ml / kg).

Kolivelin guruhi: gavaj fiziologik eritmasi (10 ml / kg) va intraperitoneal Kolivelin 1 mg / kg (10 ml / kg 0,1 mg / ml).

Yuqori doz + Kolivelin guruhi: gavaj 30 g/kg qaynatma plyus Kolivelin 1 mg/kg ip

Sham va model guruhlari: gavaj tuzi va ip sho'r suvi (10 ml / kg).
Barcha muolajalar 21 kun davomida kuniga bir marta o'tkazildi.

 

Prostata indeksi va E2/T; Namuna to'plami

Yakuniy davolanishdan yigirma to'rt soat o'tgach, kalamushlar behushlik qilindi (yuqoridagi kabi). Tana massasi va prostata nam og'irligi PI=prostata ho'l vazni/tana massasini hisoblash uchun qayd etilgan. Qorin bo'shlig'i aorta qoni to'plangan, sarum olish uchun santrifüj qilingan (2000 rpm, 15 minut). E2 va T Elishay tomonidan o'lchandi va E2 / T hisoblab chiqilgan; qolgan sarum -80 darajada saqlanadi. Taxminan 0,7 g prostata to'qimasi oqsil tahlillari uchun suyuq azotda muzlatilgan; qolgan qismi mahkamlangan, suvsizlangan, kerosin bilan to'ldirilgan va ~ 5 mkm da bo'lingan.

HE va Massonning bo'yalishi

Ksilol va gradusli etanollarda (100%, 90%, 80%, 75%) deparafinizatsiyadan so'ng hidratsiya o'tkazildi. Bo'limlar ishlab chiqaruvchi ko'rsatmalariga muvofiq HE va Masson to'plamlari bilan bo'yalgan (har biri 3 ta slayd), keyin yuvilgan, suvsizlangan, tozalangan va mikroskopga o'rnatilgan.

 

Hujayra proliferatsiyasi uchun immunohistokimyo

Deparafinizatsiya/gidratatsiyadan so'ng bo'laklar 3% H2O2 bilan ishlov berildi, echki zardobi bilan bloklandi va anti-Ki-67 (1:150) bilan bir kechada inkubatsiya qilindi. Aniqlashda DAB xromogenli SP to'plami ishlatilgan. Rasmlar olindi va ImageJ tomonidan Ki‑67 optik zichligi aniqlandi.

 

Prostata va qon zardobida IL-6 va IL-1 uchun ELISA

Muzlatilgan prostata to'qimalari maydalangan, RIPA buferida gomogenlashtirilgan va umumiy protein lizatlarini olish uchun santrifüj qilingan (3000 rpm, 20 min). Protein konsentratsiyasi BCA tomonidan aniqlangan. Alikvotlar (0,2 ml) to'qima lizati va eritilgan sarum Elishay tomonidan IL-6 va IL-1 uchun tahlil qilindi.

Kollagen I/III va IL‑6/STAT3 yo‘li oqsillari uchun Western Blot
Denatüratsiyalangan namunalar (100 daraja) SDS-PAGE bilan ajratildi va nitroselülozaga o'tkazildi. Membranalar kollagen I, kollagen III, ‑aktin, IL‑6, STAT3 va p‑STAT3 uchun molekulyar og‘irlik bo‘yicha bo‘lingan. 3% BSA blokirovkasidan so'ng, birlamchi antikorlar, so'ngra HRP bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar qo'llanildi. Tarmoqlar xemiluminesans orqali vizualizatsiya qilingan va ImageJ bilan miqdori aniqlangan.

 

Statistika

Ma'lumotlar bir tomonlama ANOVA va SNK‑q post hoc testlari bilan SPSS 26.0 yordamida tahlil qilindi.

 

Natijalar

 

BPH modellashtirish muvaffaqiyati: soxta bilan solishtirganda, model guruhi prostata hajmi va gistologik giperplaziya va fibrozda aniq o'sishni ko'rsatdi. PI, Ki‑67 optik zichligi, prostata/zardob IL‑6 va IL‑1, kollagen I/III, IL‑6 va p‑STAT3/STAT3 sezilarli darajada oshdi, E2/T esa pasaygan (P <0,05).

Yishen Tonglong qaynatmasining terapevtik ta'siri: 15 va 30 g / kg dozalari prostata kengayishi va fibrozni yumshatdi. Ushbu muolajalar PI, Ki‑67, IL‑6, IL‑1, kollagen I/III, IL‑6 oqsili va p‑STAT3/STAT3 ni sezilarli darajada pasaytirdi va E2/T ni oshirdi (P <0,05). Yuqori doza past dozaga nisbatan yuqori ta'sir ko'rsatdi (P <0,05).

STAT3 faollashuvining ta'siri: Kolivelin prostata giperplaziyasi va fibrozini kuchaytirdi va E2 / T ni modelga nisbatan kamaytirganda yallig'lanish va fibrotik belgilarni yanada oshirdi (P <0,05).

Kolivelin bilan antagonizm: Kolivelin bilan birgalikda davolash yuqori dozali damlamaning foydasini zaiflashtirdi, yallig'lanish / fibrotik ko'rsatkichlarni oshirdi va E2 / T ni faqat yuqori dozali damlama bilan solishtirganda kamaytiradi (P <0,05).

 

Munozara

Mexanik asos: IL-6/STAT3 o'qi prostata to'qimasini qayta qurish bilan bog'liq bo'lgan markaziy yallig'lanish yo'lidir. IL-6 bog'lanishi JAK/STAT3 signalizatsiyasini faollashtiradi, proinflamatuar va profibrotik genlarning transkripsiyasini rag'batlantiradi, epiteliya/stroma proliferatsiyasini, immun-hujayra infiltratsiyasini va hujayradan tashqari matritsa biriktirilishini rag'batlantiradi. Bizning topilmalarimiz - o'simlik formulasini yaxshilash va STAT3 faollashtiruvchisi bilan yomonlashuv - Yishen Tonglong qaynatmasi IL-6/STAT3 faollashuvini susaytirish orqali BPHni engillashtiradigan sabab-mexanik aloqani qo'llab-quvvatlaydi.

 

O'simlik formulasi istiqboli (prostatit muammolarini davolash uchun o'simlik): Komponentli o'tlar BPH va prostatitga o'xshash yallig'lanishga tegishli qo'shimcha harakatlarni ta'minlaydi:

Nam issiqlikni tozalash va yallig'lanishga qarshi: Chji Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (Paeonia qobig'i), Ze Xie (Alisma).

Qi/Buyrak tonifikatsiyasi va endokrin modulyatsiyasi: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Kornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).

Qon faollashuvi va antifibrotik potentsial: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (shaftoli yadrosi), Vang Bu Liu Xing (Vaccaria).

Yangni isitish va mikrosirkulyatsiyani yaxshilash: Rou Gui (Cinnamon), Fu Zi (Aconite, qayta ishlangan).

Tendon / suyakni qo'llab-quvvatlash va tosda qon aylanishi: Niu Xi (Achyranthes).

Ushbu sinergiya birgalikda yallig'lanishli sitokinlarni (IL-6, IL-1), proliferatsiyani (Ki-67) va fibrozni (kollagen I/III) kamaytirishi mumkin, bu G'arb blotlarida kuzatilgan IL-6/STAT3 signalizatsiyasini bostirishga mos keladi. E2/T ning ko'tarilishi jinsiy steroid muhitining qisman muvozanatini ko'rsatadi, bu ham prostata o'sishi dinamikasiga ta'sir qilishi mumkin.

Klinik tarjima va cheklovlar: Ushbu klinikadan oldingi ma'lumotlar BPH va prostatitga o'xshash yallig'lanish uchun istiqbolli bo'lsa-da, odamlarga ekstrapolyatsiya qilish ehtiyotkorlikni talab qiladi. Dozani o'zgartirish, ko'p o'simlik preparatlari sifatini nazorat qilish va o'tlar va dori vositalarining o'zaro ta'siri qo'shimcha o'rganishni talab qiladi. Shunga qaramay, yo'lga yo'naltirilgan dalillar (qaynatma bilan foyda, STAT3 faollashuvi bilan zarar va yo'l ko'rsatkichlari) prostatit va BPH muammolarini davolash uchun o'tga asoslangan yondashuvni klinik tadqiq qilish uchun nazariy asosni mustahkamlaydi.

 

Xulosa

Yishen Tonglong damlamasi IL-6/STAT3 faollashuvini inhibe qilish va dozaga bog'liq samaradorlik bilan yallig'lanish va profibrotik signalizatsiyani kamaytirish orqali BPH kalamushlarida prostata giperplaziyasi va fibrozni engillashtiradi. Ushbu topilmalar uning an'anaviy qo'llanilishini mexanik jihatdan qo'llab-quvvatlaydi va BPH va prostatit bilan bog'liq holatlar uchun o'tga asoslangan terapiya sifatida keyingi rivojlanish uchun zamonaviy, yo'lga asoslangan mantiqiy asosni beradi.

 

Ma'lumotnomalar

[1–13] Asl matnda keltirilganidek.