Oshqozon saratoni (GC) ovqat hazm qilish tizimi saratoni bilan kasallanish bo'yicha birinchi va ikkinchi o'lim bo'ldi

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Abstrakt

Platina dori bilan davolash oshqozon saratoni (GC) bilan og'rigan bemorlar uchun eng ko'p ishlatiladigan kimyoterapevtik strategiyalardan biridir. Biroq, terapevtik ta'sir ko'p jihatdan platina preparatlariga orttirilgan qarshilik tufayli qoniqarli emas. Shu sababli, asosiy mexanizmlarni yaxshiroq tushunish GC ning terapevtik samaradorligini sezilarli darajada oshirishi mumkin. Ushbu tadqiqotda biz GCda glyukoza bilan boshqariladigan protein 75 (GRP75) ning kimyoviy qarshilik bilan bog'liq funktsiyalari / mexanizmlari va klinik ahamiyatini o'rganishni maqsad qildik. Bu erda bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, SGC7901 hujayralari bilan solishtirganda, GRP75 ning sisplatinga chidamliligi (hujayralar (SGC7901 *)) sezilarli darajada yuqori bo'lgan. GRP75 ning ishdan chiqishi mitoxondriyal membrana potentsialini (MP) saqlanishini bekor qildi va eritroid yadro omilini inhibe qildi{{ 10}}bog'liq bo'lgan omil 2 (NRF2), fosfatidilinositol 3 kinaz/protein kinaz B (Pl3K/AKT), gipoksiya qo'zg'atuvchi omil 1a (HIF{17}}a) va c-myc, bu esa faollashuvni blokirovka qilishga olib keldi. Bu jarayonlar antioksidlanish/apoptoz qobiliyatini susaytirdi va SGC7901 "hujayralaridagi metabolik qayta dasturlashni o'zgartirdi, bu esa bu hujayralarni sisplatinga qayta sezgir bo'lishiga olib keldi. Biroq, SGC7901 hujayralarida GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi teskari ta'sirga olib keldi. Ksenograftlar modeli. Yuqorida qayd etilgan natijalarni tasdiqladi.Platina kimyoterapiyasi va meta-tahlil olgan GK bemorlarida GRP75 ning yuqori darajasi agressiv xarakteristikalar va yomon prognoz bilan ijobiy bog'liq bo'lgan, shu jumladan gastremiya bilan cheklanmagan. ichak saratoni va umumiy omon qolish uchun mustaqil bashoratchi edi. Birgalikda, bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatdiki, GRP75 GC ning sisplatinga chidamliligi bilan bog'liq va GRP75 platinaga chidamli hujayralardagi dori reaktsiyasini tiklash uchun potentsial terapevtik maqsad va GC bemorlarini klinik boshqarishda yordam beradigan yordamchi prognostik vosita bo'lishi mumkin.

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Kirish

Oshqozon saratoni (GC) Xitoyda ovqat hazm qilish tizimi saratoni bilan kasallanish bo'yicha birinchi va ikkinchi o'lim bo'ldi. Murakkab GC uchun hozirgi davolash usullari tizimli kimyoterapiya bilan birlashtirilgan jarrohlik operatsiyasi edi, ammo jarrohlikdan keyingi yuqori relaps tufayli uzoq muddatli omon qolish darajasi qoniqarli darajada past edi2. Klinik amaliyotda platina preparatlari ilg'or davolash uchun birinchi darajali vositalardan biri edi. GK kimyoterapiya 3. Shu bilan birga, dori vositalariga orttirilgan qarshilik har doim platina asosidagi davolanishning bir necha tsiklidan keyin yuzaga kelgan va yomon prognozni ko'rsatadi.sistanchShu sababli, potentsial mexanizmlarni yoritish va GC bemorlarida platina dorilariga qarshilikni bartaraf etishning yangi terapevtik strategiyalarini aniqlash juda muhim edi.

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Glyukoza bilan boshqariladigan protein 75 (GRP75) issiqlik zarbasi oqsillari oilasiga tegishli bo'lgan stressni qo'zg'atadigan molekulyar chaperon edi4. GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi insonning turli saraton kasalliklarida o'simta rivojlanishi bilan chambarchas bog'liq edi5-7. Bu erda, meta-tahlilni o'rganish orqali biz GRP75 ning yuqori darajasi bir nechta ovqat hazm qilish tizimining saraton kasalliklarida (yog'on ichak saratoni, xolangiokarsinoma va oshqozon osti bezi saratoni) sezilarli darajada yomon prognozni ko'rsatishini aniqladik. Dori qarshiligi uchun GRP75 ning inhibisyoni gepatotsellyulyar karsinoma va tuxumdon saratonida sisplatin va doksorubitsin qarshiligini o'zgartirdi ". GRP75 klassik tarzda sitoplazmada p53 ni ajratdi, bu p53 funktsiyasining inaktivatsiyasiga olib keldi va app-tozni bostirdi10. Oldingi tadqiqot GRP75 haqida xabar berdi. musbat o'smalar normal p53 funktsiyasi bo'lgan GCdagi GRP75 manfiy o'smalari bilan solishtirganda yomonroq prognozga ega edi. Biroq, p53 GCdagi eng tez-tez mutatsiyaga uchragan genlardan biri edi (bemorlarning 50 foizdan ko'prog'iga ta'sir qiladi) l2-15. Shuning uchun biz faraz qildik. p53 faolligining klassik repressiyasiga qo'shimcha ravishda, GRP75 mustaqil ravishda qo'llash orqali GCda platina dorilariga qarshilikni qo'zg'atish/saqlashda ishtirok etishi mumkin.

Ushbu tadqiqotda GRP75 ning yuqori ifodasi SGC7901 hujayralarida va ksenograftlar modelida sisplatin qarshiligiga hissa qo'shdi. Mexanik jihatdan, GRP75 antioksidlanish / apoptotik qobiliyatlarni va metabolik qayta dasturlash xususiyatlarini tartibga solish orqali sisplatinga qarshilik ko'rsatdi.Cistanche AvstraliyaGC bemorlarida GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi agressiv xususiyatlarga va yomon prognozga yordam berdi. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, GRP75 GCda sisplatin qarshiligini oshirdi va platina dori bilan davolashga javobni bashorat qilish uchun biomarker bo'lishi mumkin.cistanche foydalariGRP75 ga yo'naltirish GC tizimli kimyoterapiya haqida yangi tushunchani berishi mumkin.

Natijalar

GRP75 ning GC hujayra hayotiyligi tahlillarida sisplatinga chidamliligiga ta'siri SGC7901~ hujayralarining qarshiligini tekshirish uchun ishlatilgan, SGC7901 va SGC7901CR hujayralari uchun sisplatinning Ipsos (uM) ko'rsatkichlari: 5,518 va 72,416 (Fig). KM-Plotter ma'lumotlar bazalariga asoslanib, GRP75 ning ortib borayotgan ifodasi yomon prognozni ko'rsatdi (Fig.1B). Bundan tashqari, SGC7901CR hujayralarida GRP75 ifodalarining ota-ona SGC7901 hujayralari bilan solishtirganda sezilarli darajada oshgani (1C-rasm), bu GRP75 sisplatin qarshiligiga hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatadi. Ushbu gipotezani tasdiqlash uchun SGC7901~ xujayralari shifrlangan yoki GRP75 siRNK bilan transfektsiya qilindi va shifrlangan yoki GRP75 siRNA transfektsiyasilangan SGC7901CK hujayralari uchun sisplatinning IC50s (uM) mos ravishda: 50,83 va 20.{29} ({29}) 1D). Farqli o'laroq,

GRP75 ning GRP75 plazmidlarini SGC7901 hujayralariga transfektsiyasi orqali haddan tashqari ko'p ifodalanishi SGC7901 hujayralari transfektsiyasi uchun sisplatinning IC50 yoki GRP75 plazmidlari 3,825 va 6,98 ga teng ekanligini ko'rsatdi (Fig.1E). Birgalikda, bu natijalar GRP75 GCda sisplatinga qarshilikni saqlash/induktsiya qilishda hal qiluvchi rol o'ynaganligini ko'rsatdi, ammo mexanizmlar qo'shimcha tekshiruv bo'lib qoldi.

GRP75 asosidagi potentsial mexanizmlar sisplatinga qarshilikni keltirib chiqardi

GEO’dan GSE122130 (SGC7901CR va SGC7901) va GSE14209 (to‘qimalar, sisplatinga chidamli va sisplatinga sezgir) mikromassiv ma’lumotlar to‘plamini GEO’dan yuklab oldik, so‘ngra biz GO-Biological jarayonini va KEGG-Pathway’ni boyitish, DAVID1 tahliliga asoslangan holda amalga oshirdik. natijalar Fig.2A-D da ko'rsatilgan. SGC7901C* hujayralari va SGC7901 hujayralari o'rtasidagi biologik jarayonlarning muhim farqlari oksidlanish-qaytarilish, apoptotik jarayon (2A-rasm), KEGG yo'lini boyitish tahlili shuni ko'rsatdiki, DEG to'plamlari metabolik yo'llar va fosfatidilinositol-protein 3-kinaz bilan chambarchas bog'liq edi. (PI3K/AKT) yo'li (2B-rasm). Preparatga javob sisplatinga chidamli va sisplatinga sezgir o'simta to'qimalari o'rtasidagi biologik jarayonlarning muhim farqlariga kiritilgan va metabolik yo'l ham KEGG-yo'lni boyitish tahlilida asosiy aloqa bo'lgan (Fig.2C, D). Bundan tashqari, String ma'lumotlar bazasi yordamida GRP75 bilan sezilarli darajada o'zaro ta'sir qiladigan 60 ta oqsildan iborat tarmoq yaratilgan, so'ngra KEGG-Pathway tahlili natijasida metabolik yo'llar GRP75 va uning interaktorlari o'rtasida muhim rol o'ynagan (2E-rasm). Ushbu natijalarga asoslanib, biz antioksidlanish / apoptoz va metabolik qayta dasturlash sisplatinga qarshilikka olib keladigan GC ning omon qolishi va o'sishiga yordam berishi mumkinligini taxmin qildik. Biroq, GRP75ni tartibga solishda ishtirok etish mexanizmlari qo'shimcha o'rganishni talab qildi (2F-rasm).

GRP75 ning antioksidlanish va apoptozga qarshi ta'siri Bu erda hujayra ichidagi ROS darajasi SGC7901CR hujayralarida ota-ona hamkasblari bilan solishtirganda ko'tarildi (3A-rasm), bu SGC7901Ck hujayralari nisbatan yuqori oksidlovchi stress sharoitlariga duchor bo'lganligini ko'rsatadi. Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, GRP75 ROS ishlab chiqarishning muhim manbai bo'lgan MMP ni barqarorlashtirishda ishtirok etgan. Bu erda GRP75 ning nokdaunti sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan SGC7901CK hujayralarida MMP ning saqlanishini bekor qildi va GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi SGC7901 hujayralarida teskari ta'sir ko'rsatdi (3B-rasm).cistanche xolesterinKeyin, biz GRP75 va anti-oksidlanish va anti-apoptoz o'rtasidagi munosabatni tasdiqladik. 3C-rasmda ko'rsatilganidek, GRP75 ning nokdaun qilinishi SGC7901 da eritroid yadro omili-2-bog'liq 2 (NRF2) va uning quyi oqim maqsad genlari (HO-1 va NQO-1) darajasini pasaytirdi. ~ hujayralar va GRP75 ning ortiqcha ifodalanishi SGC7901 hujayralarida teskari ta'sir ko'rsatdi. Bundan tashqari, SGC7901CR hujayralarida GRP75 yoki NRF2 ning ishdan chiqishi sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan hujayra ichidagi ROS avlodlari, apoptoz (3D-rasm) va kaspaza{17}} faolligini (Qo'shimcha rasm S1) yanada kuchaytirdi. Bundan farqli o'laroq, SGC7901 hujayralarida GRP75 ning haddan tashqari ifodalanishi sisplatin bilan bog'liq ROS avlodlarini, hujayra apoptozini (3E-rasm) va kaspaza{24}} faolligini sezilarli darajada susaytirdi (Qo'shimcha rasm. S1). Ushbu natijalar GRP75 saqlanib qolgan/induktsiyalangan sisplatinga chidamliligi GC hujayralarida anti-oksidlanish va anti-apoptozni qo'zg'atish orqali bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

GRP75 ning metabolik qayta dasturlashga ta'siri Keyinchalik, biz GRP75 metabolik qayta dasturlashning o'zgarishini qo'shimcha ravishda o'rganib chiqdik. Ko'payib borayotgan dalillar shuni ko'rsatdiki, o'simta hujayralarining metabolizmi bitta metabolik yo'lda g'ayritabiiy o'zgarish emas, balki butun hujayrali metabolik tarmoqni qayta dasturlashdir7. Ko'pgina klassik onkogenlar yoki signalizatsiya yo'llari to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita metabolik qayta dasturlashda ishtirok etgan, masalan, PI3K/AKT, gipoksiyani qo'zg'atuvchi omil la (HIF-la), c-myc va boshqalar"'819. Shuning uchun biz GRP75 mavjudligini tekshirdik. GC hujayralarining metabolik qayta dasturlashida ishtirok etadi.4A-rasmda ko'rsatilganidek, biz SGC7901CR hujayralarida uning ota-ona SGC7901 hujayralari bilan solishtirganda p-AKT, HIF-la va c-myc darajalarining oshishini kuzatdik.Bundan tashqari, SGC7901CR hujayralarida GRP75 sisplatin tomonidan qo'zg'atilgan p-AKT, HIF-la va c-Myc oqsillari darajasini va ularning glikoliz bilan bog'liq quyi oqim maqsadlarini (HK2: heksokinaza 2; PDK1: piruvat dehidrogenaza kinaz l; va LDHA: laktat dehidrogenaza A zanjiri) pasaytirdi. Aksincha, SGC7901 hujayralarida GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi teskari ta'sir ko'rsatdi (4B, C-rasm).Bundan tashqari, SGC7901CR hujayralarida GRP75 yoki AKT ning nokdatuda glyukoza so'rilishi va hujayra hayotiyligi/o'sishi sisplatin ta'sirida sezilarli darajada pasaygan; SGC7901 hujayralarida GRP75 ning ortiqcha ifodalanishi sezilarli sisplatin tufayli glyukozani qabul qilish va hujayra hayotiyligi / o'sishi qobiliyatini oshirdi (2-rasm). 4D-F). Birgalikda, bu ma'lumotlar GRP75 ning GC hujayralarida saqlanib qolgan/induktsiyalangan sisplatinga chidamliligi p-AKT, HIF-la va c-myc vositachiligida metabolik qayta dasturlashda ishtirok etish orqali bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

Ksenograft modelida in vitro ma'lumotlarini tasdiqlash Keyin biz GRP75 ning in vivo potentsial klinik ahamiyatini o'rganib chiqdik. Ksenograft ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, faqat sisplatin bilan davolash yoki faqat GRP75 ni nokaut qilish o'simta o'sishini inhibe qilishi mumkin; ammo, sisplatin bilan davolash GRP75 nokdaun bilan birgalikda o'simta o'sishining sisplatin tomonidan inhibe qilinishini sezilarli darajada osonlashtirdi (5A-rasm). Bundan tashqari, IHC va qPCR tahlillari shuni ko'rsatdiki, sisplatin va GRP75 siRNA faqat sisplatin bilan davolash bilan solishtirganda Ki67, GRP75, NRF2, p-AKT va quyi oqim maqsadlari ifodalarini sezilarli darajada kamaytirdi, ammo apoptozni oshirdi (TUNEL bo'yash bilan aniqlangan, 5B-rasm). , C). Birgalikda bu natijalar shuni ko'rsatdiki, antioksidlanish / apoptozga qarshi qobiliyatlarni va metabolik qayta dasturlashni tartibga solish orqali GRP75 in vivo jonli omon qolish va o'sishni rag'batlantirdi, bu esa o'z navbatida GC ning sisplatinga chidamliligiga olib keldi.

GRP75 ni saratonni qo'zg'atuvchi xarakterli omil sifatida aniqlash va GRP75 ning GKdagi klinik ahamiyati

Keyin biz GC namunalarining ketma-ket bo'limlarida GRP75 ifodasini baholadik. 6A-rasmda ko'rsatilganidek, qo'shni o'simta bo'lmagan oshqozon to'qimalari bilan solishtirganda, GC to'qimalarida GRP75 ifodasining sezilarli darajada oshishi kuzatildi. GRP75 ning haddan tashqari ifodalanishi GC to'qimalarida IHC intensivligi ko'rsatkichi bo'yicha ko'rsatildi (6B-rasm). GRP75 uchun kuchliroq bo'yash, shuningdek, xavfli o'smalar bosqichining TNM tasnifi oshishi bilan ham kuzatildi (6C, D-rasm). Keyin, biz ushbu 116 ta GC namunasini ikki guruhga ajratdik (IHC intensivligiga ko'ra, "GRP75 past" va "GRP75 yuqori", 6E-rasm). "GRP75 yuqori" guruhidagi o'smalarning ko'ndalang diametrlari "GRP75 past" guruhiga qaraganda sezilarli darajada katta edi (6F-rasm). Biz GCda GRP75 ning klinik prognozini qo'shimcha tasdiqladik. Kaplan-Meyer omon qolish tahlili, shuningdek, "GRP75 yuqori" guruhidagi GC bemorlarining umumiy omon qolish darajasi "GRP75 past" guruhidagilarga qaraganda yomonroq ekanligini ko'rsatdi (6G-rasm).

Ko'p o'lchovli tahlil GRP75 umumiy omon qolish uchun mustaqil bashoratchi ekanligini aniqladi (1-jadval).cistanche deserticolaning yon ta'siri,Xulosa qilib aytganda, bu natijalar GRP75 ning GK rivojlanishida, sisplatin qarshiligida va yomon prognozda xarakterli rolga ega ekanligini ko'rsatdi. GRP75 ning yuqori darajasining meta-tahlili prognozli adabiyotlarni qidirish va tanlashning oqim diagrammasi va meta-tahlil S2 qo'shimcha rasmda ko'rsatilgan. HR qiymatini hisoblash va tahlil qilish uchun tasodifiy ta'sir modeli va qat'iy ta'sir modeli ishlatilgan, ularning ikkalasi ham GRP75 ning yuqori darajalari bemorning yomon natijalari bilan sezilarli darajada bog'liqligini ko'rsatdi. Birlashtirilgan HR 1,91 (95 foiz CI 1,62 dan 2,25 gacha), heterojenlik bilan (I'=0.0 foiz, p =0,559) (7A-rasm) edi. Keyin biz kichik guruh tahlilini o'tkazdik, bu oshqozon-ichak saratonida GRP75 ning ifoda darajasi (birlashtirilgan HR 1,99,95 foiz CI 1,64 dan 2,43 gacha) yomon omon qolish prognozi bilan muhim aloqaga ega ekanligini ko'rsatdi. Albatta, shunga o'xshash natijalar boshqa o'smalarda ham topilgan (birlashtirilgan HR 1,74,95 foiz CI 1,29 dan 2,33 gacha) (7B-rasm). Ikkalasi ham

Beggning huni syujeti va Egger testi kiritilgan tadqiqotlarning nashr etilishi mumkin bo'lgan moyilligini baholash uchun ishlatilgan. GRP75 va OS o'rtasidagi bog'lanishni tahlil qilishda Begg testi va Egger testining p-qiymati 0 edi.0 mos ravishda 76 va 0,024 (7C va D-rasm). Biroq, Egger testi nashrning noto'g'riligini baholashda yuqori sezuvchanlikka ega. Shunday qilib, natijalarimizni yanada ishonchli qilish uchun kesish va to'ldirish usuli qo'llanildi. 7E-rasmda ko'rsatilganidek, sobit ta'sirli modelda sozlangan HR 1,785 ni tashkil etdi (95 foiz CI 1,530 dan 2,081 gacha, p.<0.001), and="" in="" the="" random="" effect="" model="" was="" 1.792="" (95%="" ci="" 1.515="" to=""><0.001), which="" was="" not="" significantly="" different="" from="" overall="" hr.="" in="" our="" analysis,="" a="" high="" level="" of="" grp75="" showed="" a="" poor="" prognosis="" including="" but="" not="" limited="" to="" gastrointestinal="" cancer,="" which="" was="" highly="" consistent="" with="" our="">

Munozara

Ushbu tadqiqotda biz GC bilan og'rigan bemorlar uchun birinchi darajali kimyoterapevtik vositalardan biri, platina preparatlaridan foydalandik. Klassik tarzda, platina preparatlari DNK zanjirida guanin bilan kovalent bog'lanishi mumkin va shu bilan DNK2 ning replikatsiyasi va transkripsiyasini bloklaydi. Biroq, dori qarshiligi va kiruvchi nojo'ya ta'sirlar tufayli, GC bemorlarida qarshilikni bartaraf etish uchun yangi terapevtik strategiyalarni aniqlash juda zarur edi. Bundan tashqari, GC bemorlari sisplatinning bir necha kurslarini olgandan keyin dori qarshiligini rivojlantirdilar va bizning natijalarimiz SGC7901 hujayralari bilan solishtirganda sisplatinga sezilarli qarshilik ko'rsatishini ko'rsatdi.

GRP75 (mortalin/mot-2/HSPA9) inson saratonining boshlanishi va rivojlanishini tartibga solishda muhim rol o'ynadi-7. Yaqinda GRP75 ham kimyoterapiyaga chidamlilikda hal qiluvchi rol oʻynaganligi maʼlum boʻldi. “GRP75dan tashqari, boshqa issiqlik zarbasi oqsillari PI3K/AKT/NF-KB va boshqa yoʻllar orqali sisplatin qarshiligida muhim rol oʻynagan.21-24 Biroq, GRP75 va sisplatin qarshiligining molekulyar mexanizmi haqida kamdan-kam xabar berilgan.Bu yerda bizning tadqiqotimiz GRP75 oksidlanishga qarshi/apoptoz qobiliyatini oshirishi va metabolik qayta dasturlashni o‘zgartirishi, bu esa GC hujayralarida sisplatin qarshiligiga olib kelishini aniqladi. SGC7901~ hujayralari va bemorlardan olingan toʻqimalar namunalarida va dori chidamliligi, omon qolish, oʻsish va yomon natijalar bilan bogʻliq edi.Ayni paytda koʻp oʻlchovli tahlillar GRP75 umumiy omon qolish uchun mustaqil bashoratchi ekanligini aniqladi.Bundan tashqari, meta-tahlil shuni koʻrsatdiki, GRP75 ning yuqori darajasi yomon prognozni ko'rsatdi, shu jumladan GC bilan cheklanmagan, bu bizning tadqiqotimizga juda mos edi. sisplatin qarshiligini bartaraf etish va GC bemorlarning prognozini yaxshilash uchun yangi yondashuv bo'lishi kutilmoqda.

Fiziologik sharoitda hujayralar muqarrar ravishda tashqi omillar va hujayra ichidagi aerob metabolizmdan ROS ta'siriga duchor bo'lgan. Ikki qirrali qilich sifatida tegishli ROS hujayralarning normal faoliyatini tartibga soluvchi muhim signal molekulalari edi, ortiqcha ROS esa apoptozga olib keldi. Shuning uchun organizmda oksidlanish-qaytarilish muvozanatini va apoptotik jarayonlarni saqlab turish uchun aniq antioksidant tartibga solish tizimi mavjud edi 20. Biroq, fiziologik sharoitlardan farqli o'laroq, o'smalarning ROS darajasi odatda bir xil to'qimalarning kelib chiqishini normal nazorat qilishdan sezilarli darajada yuqori bo'lib, bu maxsus moddaning mavjudligini aniqladi. o'simta hujayralarida antioksidant tizim, ayniqsa dori-darmonlarga chidamli o'simta hujayralari27-29. Bizning natijalarimiz tasdiqladiki, SGC7901CR hujayralari SGC7901 hujayralari bilan solishtirganda nisbatan yuqori ROS darajasini namoyish etgan va GRP75 antioksidlanish/apoptoz qobiliyatini oshirgan. O'simta hujayralari uzoq vaqt davomida metabolik anormalliklarga ega edi. 1930-yillardayoq Otto Warburg o'simta hujayralari glikolizni afzal ko'rishini aniqladi. Kislorod etarli bo'lgan sharoitlarda ham o'simta hujayralari ATP hosil bo'lishi uchun yuqori glikoliz tezligini saqlab turdi. Ushbu g'ayritabiiy metabolik holat "Varburg effekti" deb nomlandi3031. Warburg effektiga asoslangan metabolik o'zgarishlar yaqinda metabolik qayta dasturlash deb nomlandi va bu o'zgarishlarni o'rganish GC hujayralari metabolizmini chuqurroq tushunish imkonini berdi. GC hujayralari va normal hujayralar nafaqat glyukoza almashinuvida, balki lipidlar va aminokislotalar almashinuvida ham metabolik farqlarni namoyon etishi ko'rsatildi³2-35.Bu tadqiqotda biz glyukoza almashinuvidagi o'zgarishlar asosiy omillardan biri ekanligini aniqladik. hujayra o'sishini ta'minlaydigan aloqalar, natijada GC sisplatin qarshiligiga olib keladi.

Yuqorida aytib o'tganimizdek, PI3K/AKT, HIF-la va c-myc kabi klassik onkogenlar va signalizatsiya yo'llari metabolik qayta dasturlashda bevosita yoki bilvosita ishtirok etgan. O'simta hujayralarida PI3K/AKT yo'lining faollashishi ko'plab metabolik faollikni kuchaytirdi. Birinchidan, u hujayralarga glyukoza, aminokislotalar va boshqa oziq moddalarni o'zlashtirishiga imkon berdi. Ikkinchidan, AKT gen ifodasi va ferment faolligiga ta'siri orqali glikoliz va laktat ishlab chiqarishni oshirdi va saraton hujayralarida War-burg ta'sirini keltirib chiqarish uchun etarli edi. Uchinchidan, bu yo'lning faollashishi makromolekulalar biosintezini kuchaytirdi va lipogen genlar va lipid sintezini rag'batlantirdi. Bundan tashqari, GRP{8}}faollashtirilgan AKT va hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan protein kinazalar 1 va 2 Bax konformatsion o'zgarishlarni va apoptozni 8 inhibe qildi. O'simta hujayralari glyukoza so'rilishini, glikolizni rag'batlantirish uchun HIF-la maqsadli genlarini yuqori tartibga solish orqali metabolik qayta dasturlashni o'z ichiga olgan gipoksiyaga moslashgan. sut kislotasini ishlab chiqarish va sekretsiyasi, glikogenni saqlash, glutamin mushuk-abolizmi³ va lipid tomchilarida triglitseridlarning to'planishiga yordam beradi³. Yaqinda GRP75 HIF-la bilan maxsus bog'lanishi va tashqi mitoxondriyal membranani nishonga olishi aniq bo'ldi. VDAC1 va HK2, bu apoptozning oldini oladi. C-myc metabolik qayta dasturlashda vositachilik qilishi mumkin edi va c-myc vositachiligidagi metabolik qayta dasturlash asosan mitoxondriyalarga ta'sir qilish orqali erishildi. Bir tomondan, c-myc shuningdek, glikolitik bilan bog'liq fermentlarning, jumladan LDHA, HK2 va PDK11938 ifodasini to'g'ridan-to'g'ri tartibga solish orqali glikolizni rag'batlantirdi. Boshqa tomondan, transkripsiya orqali glutamin metabolizmida ishtirok etadigan c-myc faollashtirilgan fermentlar o'simta hujayralarida mitoxondriyalar tomonidan glutamin. Ushbu ta'sir "glutaminoliz" deb ataladi. Bundan tashqari, GRP{27}}ortiqcha ifodalanishi siklin-B1 ni kamaytirdi va tuxumdon saratoni hujayralarining o'sishini rag'batlantirish uchun siklin-D1 va c-mycni ko'taradi*. Bizning hozirgi natijalarimizga asoslanib, biz GRP75 orqali GC sisplatin qarshiligining yangi tushunchasini o'simta metabolik qayta dasturlash tarmoqlarini tartibga solishda potentsial muhim bo'g'in sifatida taqdim etdik.

Xulosa

Xulosa qilib aytganda, biz GRP75 ning haddan tashqari ko'payishi antioksidlanish / apoptoz va metabolik qayta dasturlash tarmoqlarini tartibga solish orqali GC hujayralarida omon qolish / o'sishni rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatdik va shu bilan sisplatinga qarshilikni keltirib chiqaradi.

Materiallar va uslublar

Hujayralar, reaktivlar va madaniyat sharoitlari

GC cell lines, SGC7901 cells (mutant-type of p53), and cisplatin-resistance cells (SGC7901CB) were obtained from and STR identified by KeyGENE Bio Co. Ltd (Nanjing, China). Cisplatin(Pt(NH3)2Clz, >99.0 foiz tozalik), Sigma-Aldrichdan (Shanxay, Xitoy) xarid qilingan. Hujayralar RPMI{3}} muhitida (Gibco, Grand Island, NY, AQSH), 10 foizli homila sigir zardobi (FBS), 100 U/ml penitsillin, 100 ug/ml streptomitsin (Gibco) bilan to'ldirilgan va inkubatsiya qilingan. 37 daraja haroratda 5 foiz CO2. Sisplatinga chidamlilik fenotipini saqlab qolish uchun SGC7901CR hujayralari sisplatin (5 mkM) o'z ichiga olgan muhitda inkubatsiya qilindi.

Ksenograftlar va davolash usullari

Ushbu tadqiqot Nankin tibbiyot universiteti hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasi tomonidan ma'qullangan va hayvonlarga insoniy munosabatda bo'lgan va azob-uqubatlarni engillashtirishga qaratilgan. BALB/c yalang'och sichqonlari SLRC Laboratory Animal Center (Shanxay, Xitoy) dan olingan va biz avval aytib o'tganimizdek an'anaviy tarzda saqlanadi*l. Ksenograftni o'rganish uchun 100ul matrigeldagi 2x10 darajali SGC7901CK hujayralari 5 hafta davomida sichqonlarning yon tomonlariga teri ostiga AOK qilindi. GRP75 ning GC ning sisplatin qarshiligiga ta'sirini aniqlash uchun biz intratumoral va intraperitoneal in'ektsiya tahlilini o'tkazdik. Qisqacha aytganda, sichqonlar tasodifiy 4 guruhga bo'lingan (har bir guruh uchun 5 ta sichqon): (1) MOCK, (2) GRP75KD, (3) MOCK ＋ sisplatin va (4) GRP75 KD ＋ sisplatin. 100ul siRNK (si-Con yoki si-GRP75, 100nM) har 3 kunda intratumoral in'ektsiya edi. Sisplatin (5 mg / kg) terapiyasiga duchor bo'lgan guruhlar haftasiga 3 marta qorin bo'shlig'iga in'ektsiya qilingan, qolgan guruhlar esa teng miqdorda fiziologik eritma bilan perfuziya qilingan. Shishlar har hafta o'lchandi va ularning hajmlari quyidagi formula bo'yicha hisoblandi: V=Y (kengligi2 uzunlik). 5 hafta o'tgach, sichqonlar qurbon qilindi va o'simta to'qimalari qo'shimcha tekshirish uchun olib tashlandi.

Bemorlar va to'qimalar namunalari

Ushbu tadqiqot Nankin tibbiyot universitetining ikkinchi filiali kasalxonasi va Nankin tibbiyot universitetining Changzhou №2 ​​kasalxonasining tibbiy etika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan va ishtirokchining yozma roziligi har bir bemordan olingan. Klinik-patologik ma'lumotlar S1 qo'shimcha jadvalida keltirilgan. To'qimalarning mikroarrayi biz avval aytib o'tganimizdek, Zhuoli Biotechnology Co.Ltd (Shanxay, Xitoy) tomonidan qurilgan*

Hujayra transfeksiyasi

Transfeksiya uchun shifrlangan va pcDNA-3.1-GRP75-Bayroq General Biotech (Shanxay, Xitoy) tomonidan sintez qilingan; siRNKlar esa S2 qo'shimcha jadvalida keltirilgan. Hujayralar ishlab chiqaruvchining protokoliga ko'ra, lipofektamin 3000 reagenti (Invitrogen, Karlsbad, AQSh) orqali vaqtinchalik transfektsiya qilindi. Qisqacha aytganda, hujayralar RPMI 1640 muhitida 1×10 daraja zichlikdagi hujayralar 6-quduq plitalariga 10% FBS ni antibiotiksiz o'z ichiga olgan holda qo'yildi. 24 soat davomida inkubatsiyadan so'ng hujayralar 12 soat davomida 5 ng/ml shifrlangan yoki GRP{12}}Flag yoki 20 nM si-Con yoki si-GRP75 bilan vaqtincha transfektsiya qilindi. Transfeksiyadan so'ng hujayralar boshqa tajribalar uchun ishlatilishidan oldin yana 24 soat davomida 10% FBS bilan to'ldirilgan yangi muhitda o'stirildi.

Haqiqiy vaqtdagi miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qPCR) Amaldagi primerlar S3 qo'shimcha jadvalida keltirilgan. Umumiy RNK izolyatsiyasi, RNKning cDNKga transkripsiyasi va Applied Biosystems 7300HT mashinasi bilan qRT-PCR ishlashi bizning oldingi tadqiqotimizga ko'ra edi 2. cDNK yaxlitligini ta'minlash va ifodani normallashtirish uchun -aktin kuchaytirildi. Har bir gen ekspresyonidagi katlama o'zgarishlari 2-(4ACt) formulasi yordamida qiyosiy chegara sikli (Ct) usuli bilan hisoblab chiqilgan.

Ushbu maqola Dai va boshqalardan olingan. Hujayra oʻlimi kashfiyoti (2021) 7:140 https://doi.org/10.1038/s41420-021-00517-w