Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticolaning hujayra suspenziyasi madaniyatida qo'ziqorin elisitori tomonidan feniletanoid glikozidlar ishlab chiqarishni yaxshilash.

Cui-tao Lu¹,∗ va Xing-guo Mei²

Kalit so'zlar Cistanche deserticola, qo'ziqorin elimitatori,feniletanoid glikozid, o'simlik hujayralari madaniyati

Abstrakt
Qachon, o'sishning 15-kuni, dan elicitorFusarium solani40 mg l ga qo'shildi^-1 uchunCistanche deserticolahujayra suspenziyasi madaniyatlari, echinacoside, acteosid va jami tarkibifeniletanoid glikozidlarMadaniyatli hujayralardagi (PeGs) keyingi 27 kun ichida 100% dan 15 mg g gacha ko'tarildi.^-1quruq og'irligi, 9 mg g-1 quruq og'irligi va 57 mg g^-1 mos ravishda quruq og'irlik. Yakuniy biomassa (1,3 mg quruq og'irligi ml^-1) ta'sir qilmadi.

Cistanche deserticola

Kirish

Cistanche deserticolaMa. (Orobanchaceae), Xitoyning mahalliy o'ti an'anaviy tibbiyotda turli xil davolanish uchun keng qo'llaniladi, shu jumladan tinchlantiruvchi yoki immunitetni kuchaytiruvchi vosita (Hsu va boshq. 1995, Chang va boshq. 1995).Feniletanoid glikozidlar(PeGs) asosiy bioaktiv metabolitlardirCistanche deserticola(Xiong va boshq. 2000) va echinacoside, acteosid, cisacteosid, isoacteosid, 2-acetylakteosid, cistanoside A va osmanthuside B (Vang va boshq. 2000) kabi ko'plab komponentlardan iborat. Ushbu mahsulotlarga bo'lgan talabning ortishi va ularning tez pasayishi bilanCistanche deserticolao'simliklar, hujayra madaniyati jozibador muqobil ishlab chiqarish vositasi bo'ladi. Ko'pgina elimitatorlar (ayniqsa, qo'ziqorin elimitatorlari) o'simlik hujayralari madaniyatida metabolit ishlab chiqarishni kuchaytirishi mumkin (Vang va boshq. 2001). Li va boshqalar. (1998) Fusarium solani qo'ziqorin elisitori ikkalasining ildiz tizimidan ajratilganligini aniqladi.Cistanche deserticolava uning xo'jayini Halaxylon ammodendron kalli tarkibidagi aminokislotalarni yaxshilashi mumkinCistanche deserticolaAmmo bu kallus chizig'idagi PeGs tarkibidagi o'zgarishlar ularning tadqiqotida qayd etilmagan. Ushbu ishda F.solani elimisitorining umumiy PeG va ikkita asosiy bioaktiv PeG (exinakozid va akteozid) biosinteziga hamda hujayra oʻsishi oʻzgarishiga taʼsiri suspenziya kulturasida oʻrganilgan.Cistanche deserticola.

Materiallar va uslublar

O'simlik hujayralari madaniyati
Kallus tarozidan kelib chiqqanCistanche deserticolava Gamborgning B5 muhitida saqlanadi (1968), 0,5 mg indol-3-sirka kislotasi l bilan to'ldiriladi.^-1, 2 mg kinetin l^-1,va 1 g kazein gidrolizat l^-1. Sterilizatsiyadan oldin pH 6 ga o'rnatildi. Barcha tajribalar 250 ml chayqaladigan kolbalarda o'tkazildi, ularning har biri 100 ml muhitni o'z ichiga olgan aylanadigan shakerda (120 rpm va 25 daraja) qorong'ilik ostida. Emlash taxminan 100 g yangi og'irlikda edi^-1.

cistanche deserticolaning samarali tarkibi--feniletanoid glikozid

Qo'ziqorin elimitatorini tayyorlash

Qo'ziqorin shtammini, Fusarium solani ajratish va qo'ziqorin elisitorini tayyorlash yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi (Li va boshq. 1998, Yu va boshq. 2001). Har xil miqdorda (uglevod ekvivalenti) zamburug'li elimitator 15-kun (jami kultura davri 42 kun) chayqaladigan kolba kulturalariga qo'shildi.

Biomassaning to'planishi va hayotiyligini tahlil qilish
Chayqaladigan kolbadagi hujayralar distillangan suv bilan yuviladi va doimiy og'irlikda quritiladi. Shunday qilib, quruq vazn aniqlandi. Hujayra hayotiyligi (hujayra populyatsiyasidagi tirik hujayralar ulushi) 2,3,5-trifeniltetrazolium xloridning kamayishi bilan aniqlangan (Towill va Mazur 1975).

feniletanoid glikozidningcistanche deserticola

Ekinakozid, akteozid va jami tarkibini aniqlashfeniletanoid glikozidlar(PeGs)
PeGlarning ekstraktsiyasi Du & Liu (1993) usuli bo'yicha amalga oshirildi. Muzlatib quritilganCistanche deserticolahujayralar 70 foiz (v/v) etanol bilan ekstraksiya qilingan. Etanol fraktsiyasi konsentratsiyalangan, suv bilan to'yingan etil asetat bilan yog'sizlangan va keyin suv bilan to'yingan n-butanol bilan yuvilgan. N-butanol fraktsiyasi konsentratsiya qilindi, suvda eritildi, makroporli qatronlar ustuniga (AB{5}}, Nankay universitetining kimyoviy mahsuloti, Tyantszin, Xitoy) yuklandi va suv va metanol bilan ketma-ket elutildi. Metanol fraktsiyasi yig'ildi va umumiy PeGs tarkibi 334 nm da standart sifatida echinacoside yordamida aniqlandi. Ekinakozid va akteozid UV detektori (334 nm) bilan HPLC tizimida (suvlar) Nova Pak C18 ustuni (250 × 4,6 mm) yordamida aniqlandi.

Natijalar

Qo'ziqorin elimitatorining biomassa to'planishiga va umumiy PeGs biosinteziga ta'siri Zamburug'li elimitatorning hujayra biomassasiga va umumiy PeGs to'planishiga ta'siri qo'shilgan dozaga (uglevod ekvivalentlari) bog'liq. 1-rasmda ko'rsatilganidek, elisitorning past dozalari quruq og'irlik uchun qulay ediCistanche deserticolahujayralar. Cho'qqisi 20 mg l dagi elisitor bilan edi^-1(1,76 mg quruq og'irlik ml beradi^-1).
Jami PeGs to'planishi 20 mg l gacha bo'lgan qo'ziqorin elisitori tomonidan sezilarli darajada yaxshilandi.^-1va 80 mg l^-1. Elisitor 40 mg l-1 eng yuqori hosilni (57 mg g) oldi^-1), bu elisitor bo'lmagan nazorat madaniyatida olinganidan ikki baravar ko'p. Keyingi tajriba 40 mg1 da qo'ziqorin elimitatoridan foydalanilgan^-1.

1-rasm. Suspenziya hujayra madaniyatida quruq hujayra og'irligi va umumiy PeG to'planishi.Cistanche deserticolaqo'ziqorin elimitatorining turli dozalariga javoban. 15-da zamburug'li elimitator qo'shilgan. Namunalar yana 27 kundan keyin olindi. ▲, oxirgi quruq hujayra og'irligi; ◆, PeG ning umumiy tarkibi. Qiymatlar uch nusxadagi natijalarni anglatadi va xato chiziqlari standart og'ishlarni ifodalaydi.

Hujayra o'sishi va PeGs biosintezining vaqt kursi
2-rasmda kulturalar 40 mg l ga o'tkazilgandan so'ng hujayra hayotiyligi va suspenziya hujayralarining PeGs (exinakozid va akteozid) biosintezi vaqti ko'rsatilgan.^-115-da qo'ziqorin elimitatori. Keyingi 27 kunlik madaniyatda, echinacoside va acteosid, ikkita asosiy bioaktiv PeGs.Cistanche deserticola, ikkalasi ham sezilarli darajada oshdi. 39-kun maksimal to'planishga erishildi va 14,7 mg g ga etdi^-1quruq og'irligi va 8,9 mg g^-1 mos ravishda quruq og'irlik. Elisitor bilan ishlov berilgan madaniyatlar va nazorat o'rtasida hujayra hayotiyligida sezilarli farq kuzatilmadi.

2-rasm. Hujayraning yashovchanligi va suspenziya hujayra madaniyatida echinakozid va akteozid biosintezi.Cistanche deserticoladavolashdan keyin 40 mg l^-1qo'ziqorin elimitatori. 15 d.◆ muhitga zamburugʻli qoʻziqorin qoʻshildi, echinakozid bilan elimsitor bilan ishlov berildi; ◇, echinacoside-nazorat; ●, akteozid bilan elimitsion bilan ishlov berilgan;○,

akteozid nazorati; ▲, hujayra hayotiyligi-elicitor bilan ishlov berilgan;△ , hujayra hayotiyligi-nazorat. Qiymatlar uch nusxadagi natijalarni anglatadi va xato chiziqlari standart og'ishlarni ifodalaydi.

Munozara

Qo'ziqorinlardan olingan ko'plab komponentlar (hujayra devori bo'laklari, polisakkaridlar, oligosakkaridlar, glikoproteinlar va boshqalar) ko'plab o'simlik hujayralari turlari bilan ikkilamchi metabolit ishlab chiqarishda turli qo'ziqorin elisitatorlari sifatida ishlatilgan. Ushbu maqolada Fusarium solani qo'ziqorin shtammidan olingan gomogenat (asosan polisaxaridlardan iborat) ildiz tizimidan ajratilgan.Cistanche deserticolava Halaxylon ammodendron hujayra madaniyatida PeG biosintezi uchun samarali elimitator ekanligi ko'rsatilgan.Cistanche deserticola. Hujayralarda PeG sintezini rag'batlantirish uchun ushbu elimitatordan foydalanish nafaqat muhim edi, balki paydo bo'lgandan keyin ko'p o'tmay namoyon bo'ldi. Bu xulosa o'simlik hujayralari madaniyati bo'yicha o'tkazilgan ba'zi oldingi tadqiqotlar bilan kelishilgan (Vang va boshq. 2001).

Li va boshqalarning oldingi tadqiqotida. (1998), F.solani zamburugʻli elisitori oʻstiruvchi muhitga qoʻshilganda, kallus urugʻidan kelib chiqqan.Cistanche deserticolakeyingi uzoq muddatli subkulturada tirik qolishi va iridoid ishlab chiqarishni kuchaytirishi mumkin edi. U ekilgan hujayralar mikroorganizmlar tomonidan hujumga uchraganida kasallikka chidamlilikning ikkilamchi metabolitlarini sintez qilishi mumkinligini ko'rsatdi. Bizning tajribamizda iridoidlar aniqlanmagan bo'lsa-da, biz F. solani polisaxaridlaridan PeGlarni ishlab chiqarishda samarali qo'ziqorin elimitatorlari sifatida foydalanish mumkinligini ko'rsatdik.Cistanche deserticolahujayralar.

cistanche deserticolaning samarali tarkibi--feniletanoid glikozid

Kimdan: ' takomillashtirishfeniletanoid glikozidlarning hujayra suspenziyasi madaniyatida qo'ziqorin elisitori tomonidan ishlab chiqarishCistanche deserticolaCui-tao Lu tomonidan¹,∗ & Xing-Guo Mei²

----Biotechnology Letters 25: 1437–1439, 2003. © 2003 Kluwer Academic Publishers. Niderlandiyada chop etilgan.

Ma'lumotnomalar

Chang Y, Vu X, Vang SN, Cheng HC (1995) ning kuchli ta'sirini o'rganish.Cistanche deserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Bek. va Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. Xitoy J. Chin. Mater. Med. 26: 143–146.
Du NS, Liu JL (1993) aniqlashfeniletanoid glikozidlarichidaCistanche deserticolamakrovezikulyar qatronlar spektrofotometriyasi yordamida. Nat. Prod. Res. Rivojlantiring. 5: 30–33.

Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Soya ildiz hujayralari suspenziya madaniyatining ozuqaviy talablari. Exp. Hujayra Res. 50: 151–158.

Hsu WH, Chu SH, Sheng LC, Yuan KW, Mao CN (1995) Kimyoviy tarkibiy qismlar va farmakologik ta'sirlarni o'rganish.Cistanche deserticolaMa. va Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Chin. An'ana. O't. Giyohvand moddalar 26: 143–146.

Li S, Vu X, Dong XC, Zheng X, Zheng JH, Lou ZC (1998) Fusarium solani elimitatorining aminokislotalar tarkibiga ta'siri.Cistanche deserticolakallus. Xitoy J. Northwest Pharm. 13: 247–248.
Towill LE, Mazur P (1975) 2,3,{3}}trifeniltrazolium xloridning o'simlik to'qimalari madaniyati uchun yashovchanlik tahlili sifatida kamayishi bo'yicha tadqiqotlar. mumkin. J. Bot. 53: 1097–1102.
Vang CG, Wu JY, Mei XG (2001) Taxus Chinensis hujayra madaniyatida zamburug'larni chiqarish va o'rta yangilanish orqali Taxol ishlab chiqarish va chiqarilishini kuchaytirish. Ilova. Mikrobiol. Biotexnologiya. 55: 404–410.
Vang YM, Chjan SJ, Luo GA, Xu YN, Xu JP, Liu L, Chju Y, Vang HJ (2000) tahlilifeniletanoid glikozidLC/ESI- MS/MS tomonidan Cistanchis o'tlarining ekstraktida. Acta Pharm. Gunoh. 35: 839–842.
Xiong QB, Yasuhiro Tezukay, Takuji Kaneko, Li HY, Le Quan Tran, Koji Xase, Tsuneo Namba, Shigetoshi Kadota (2000) Faollashtirilgan makrofaglarda feniletanoidlar tomonidan azot oksidini inhibe qilish. Yevro. J. Pharm. 400: 137–144.
Yu LJ, Lan WZ, Qin WM, Xu HB (2001) Taxus Chinensis xujayra suspenziyasi madaniyatlarida salitsil kislotasining qo'ziqorin elitsitori bilan qo'zg'atilgan membran-lipid peroksidatsiyasiga va Taxol ishlab chiqarishga ta'siri. Proc. Biokimyo. 37: 477–482.