Buyrak toshining shakllanishini qanday oldini olish va kamaytirish mumkin?

qo'shimcha ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com

Ⅰ Ⅱ qism: Buyrak toshlari paydo bo'lishining dastlabki bosqichida TGF‑ 1/Smad signali orqali faollashtirilgan fosfolipid skramblaza tomonidan boshqariladigan fosfatidilserin eversiyasi

Xiu Guo Gan1 · Xay Tao Xu1 · Zhi Hao Vang

qo'shimcha ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com

Kirish

Urolitiyoz odamlarga ta'sir qiladigan eng keng tarqalgan kasalliklardan biri bo'lib, ko'plab urologik asoratlar bilan bog'liq [1]. Ma'lumotlarga ko'ra, kaltsiy oksalat (CaOx) madaniyatli buyrak naychalari hujayralarini shikastlaydi, shundan so'ng hujayra membranasi fosfatidilserin (PS) in vitroda muhim rol o'ynash uchun ichki qatlamdan tashqi qatlamga aylanadi.buyrak toshlarishakllanishi [2]. Shunga o'xshash topilmalar hujayra darajasida o'tkazilgan turli tadqiqotlar [3-6] tomonidan bildirilgan. Shu bilan birga, CaOx vositachiligidagi shikastlanish natijasida kelib chiqqan buyrak tubulalari hujayralarida PSning tashqi ko'rinishining mexanizmi noaniqligicha qolmoqda. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, kaltsiy oksalatning yuqori konsentratsiyasi reaktiv kislorod turlarining (ROS) haddan tashqari ishlab chiqarilishiga olib keladi [7], bu keyinchalik buyrak kanalchalari hujayralarida PSning tashqi ko'rinishiga yordam beradi, bu esa CaOx kristallarining yadrolanishi va o'sishiga olib keladi [8]. ROS va lipid peroksidatsiyasi fosfolipid skramblazasini (PLSCR) [9] kuchli faollashtiradi, glutation, Q10 koenzimi yoki idebenon (sintetik koenzim Q10 homologi) kabi ROSni tozalash vositalariga ta'sir qilish PLSK1-neyoz kasalligining faollashuvini kamaytiradi. . Hujayra membranasiga bog'langan PLSCR[11] konsentratsiya gradienti bo'ylab membrananing har ikki tomonida PS ning tez ikki tomonlama harakatini katalizlashga qodir bo'lgan uchta fosfolipidni aylantiruvchi fermentlardan biri sifatida ishlaydi [12]. Fiziologik sharoitda hujayra membranasi assimetrik holatda bo'ladi va PLSCR membranaga ta'sir qilmaydi [13]. Biroq, eukaryotik hujayralar shikastlanishidan so'ng, PLSCR faollashadi va PSni ichki qatlamdan tashqi qatlamga o'tkazadi [14,15]. Bundan tashqari, PLSCRin xitoy hamster tuxumdonining K1 hujayralarining haddan tashqari ekspressiyasi PSning tashqi ko'rinishini rag'batlantiradi va apoptoz paytida PS ning hujayra yuzasiga tashqariga harakatlanishini kuchaytiradi [16]. Shuning uchun biz PLSCR ROS faollashuvi orqali buyrak tubulasi hujayra membranasida PSni tashqilashtirishda ham ishtirok etadi deb taxmin qildik.

Oksalatdan kelib chiqqan ROS ishlab chiqarishning potentsial molekulyar mexanizmi ROS ishlab chiqarishda rol o'ynashi mumkin bo'lgan TGF- 1/Smad signalizatsiyasini induksiyalash orqali sodir bo'ladi [17,18]. Haqiqatan ham TGF- 1/Smad signalizatsiyasi glomerulonefrit, buyrak interstitsial fibrozi va nefrolitiaz kabi ko'plab buyrak kasalliklarida ishtirok etadi[19]. Bundan tashqari, TGF{6}} bilan ishlov berilgan mononuklear hujayralar hujayra membranasida PSning ichki qatlamdan tashqi qatlamga siljishiga olib keladigan PSeksternalizatsiyani namoyon qiladi [20]. Biroq, bizning ma'lumotimizga ko'ra, TGF- 1/Smad signalizatsiyasi va buyrak kanalchalari hujayralari membranalarida PSeversion o'rtasidagi bog'liqlik noma'lumligicha qolmoqda. Biz faraz qildikki, TGF- 1 kalamushning dastlabki bosqichida PLSCRni faollashtirib, buyrak kanalchalari hujayralari membranalarida PS eversiyasida ishtirok etadi.buyrak toshlariROS vositachiligida shakllanish.

Shunday qilib, biz TGF- 1/Smad signalizatsiyasi ROS faollashuvi orqali PS tashqi ko'rinishini rag'batlantiradimi yoki yo'qmi va TGF buyrak kanalchalari hujayra membranasida PLSCRni faollashtiradimi yoki yo'qligini tekshirdik.buyrak toshlariin vitro va in vivo rivojlanishi, shu bilan etiologiyasi uchun nazariy asos yaratiladibuyrak toshlarishakllanishi.

Buyrak kasalligi uchun Cistanche DHT-ga bosing

Materiallar va uslublar

Erta bosqichdagi CaOx buyrak toshlari shakllanishining kalamush modeli

Og'irligi 200±20 g bo'lgan oltmishta toza 3-oylik Wistar kalamushlari Xarbin tibbiyot universitetining Hayvonot eksperimental markazi tomonidan taqdim etilgan va xona haroratida (22 daraja ±2 daraja) va 50-70 foiz namlikda joylashtirilgan. 3 kunlik moslashuvchan naslchilikdan so'ng ular tasodifiy uchta guruhga bo'lingan (20 kalamush / guruh) - nazorat,buyrak toshlari, vabuyrak toshlariplyus SB431542 (TGF- 1/Smad signalizatsiya yo'li inhibitori).

Buyrakdagi toshshakllanishi buyrak tubulasi hujayralarining shikastlanishidan keyin erta patologik o'zgarish sifatida boshlanadi [21,22]. Ushbu jarohatlar jarayonini o'rganish uchun erta bosqichdagi kalamush modelibuyrak toshlarishakllanishi tashkil etilgan, chunki standartlashtirilgan yondashuv hali xabar qilinmagan. Buyrak tubulyar hujayralari shikastlanishidan keyingi dastlabki o'zgarishlarni kuzatish uchun biz Liet al. [23]. Qisqacha aytganda, nazorat guruhidagi kalamushlarga kuniga 2 ml distillangan suv og'iz orqali yuborilgan, kalamushlarga esa og'iz orqali yuborilgan.buyrak toshlariGuruhga har kuni 2 ml 1% etilen glikol eritmasi va 1% NHCl eritmasi og'iz orqali yuborilgan. ichida kalamushlarbuyrak toshlariplus SB431542 guruhi SB431542 ko-erituvchi (5 mg/kg, S1067; Selleckchem, Shanxay, Xitoy) bilan har 7 kunda intraperitoneal AOK qilingan [24]. Oziq-ovqat va suv ad libitum bilan ta'minlangan. 14-kuni kalamushlar anestetikning haddan tashqari dozasi (pentobarbital natriy, 200 mg/kg, qorin bo'shlig'iga yuborish orqali) evtanizatsiya qilindi va ularning buyraklari kesildi. Chap buyraklar keyingi oqsilni aniqlash uchun darhol suyuq azotda saqlanib qoldi. O'ng buyraklar mahkamlangan, so'ngra suvsizlangan va kerosin mumi ichiga kiritilgan. Barcha hayvonlar tadqiqotlari Milliy sog'liqni saqlash institutlari laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanmasiga muvofiq o'tkazildi. Eksperimental protseduralar Harbin tibbiyot universitetining birinchi filial kasalxonasining Hayvonlar tajribasidan foydalanish etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (Tasdiqlash raqami: 2020005, Xarbin, Xitoy).

Buyrak to'qimalarida kristal shakllanishi

To'qimalar namunalari Pizzolato usuli [23] yordamida bo'yalgan va CaOx kristallari qutblangan yorug'lik optik mikroskopi ostida kuzatilgan (Sinico Optical Instrument Co., Shenzhen, Xitoy). Pizzolato-musbat hududlar ImageJ 1.49v (Milliy Sog'liqni saqlash institutlari, AQSh) yordamida kesmalarning umumiy to'qima maydonining ruxsat etilgan yoshi sifatida o'lchandi va ifodalandi.

Oqim sitometriyasi orqali in vivo jonli ravishda buyrak quvurli hujayra membranasida PSni aniqlash

Buyrak epiteliya hujayralarining PS ta'siri yuqorida tavsiflanganidek, flüoresan izotiosiyanat (FITC) bilan belgilangan Annexin V bo'yash tahlili yordamida baholandi [2]. Hujayralar (har bir guruhda) konfokal lazer mikroskopida (Olimp, Tokio, Yaponiya) kuzatildi. PSning tashqi ko'rinishi miqdori Annexin V-musbat hujayralar ulushi sifatida aniqlandi. Namunalarning Annexin V floresansi oqim sitometri yordamida o'lchandi (488 nm qo'zg'alish / 530 nm emissiya; Beckman Coulter, Brea, CA, AQSh).

Buyrak tubulasi hujayra membranasidagi TGF- 1 va Smad7 darajasini western blot usuli bilan o‘lchash

Muzlatilgan to'qimalar namunalari qayta tiklangandan so'ng, protein ProteoExtract (M-PEK) (MERCK Co., Kenilworth, NJ, AQSH) tabiiy membrana oqsili ekstraktsiyasi to'plami yordamida ekstraksiya qilindi va protein kontsentratsiyasi Bio-Rad oqsil tahlili yordamida aniqlandi. to'plam (Hercules, CA, AQSh) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Keyinchalik, 4{28}}ug protein 8 foizli SDS-poliakrilamid jelga (100 V stacking gel, 200 V erituvchi jel) 1 soat davomida 300 mA elektrod doimiy oqimida yuklandi. Jel tarkibidagi oqsillar nitrotsellyuloza membranasiga o'tkazildi (Kexing Co., Pekin, Xitoy), 5 foizli yog'siz sut kukunida 37 daraja haroratda 1 soat davomida blokirovka qilindi va qo'ylarga qarshi kalamush TGF 1 (kalamushlarga qarshi TGF 1) bilan kechasi 4 daraja C da inkubatsiya qilindi. ab208466; Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) va Smad7 (66,478; Proteintech, Wuhan, Xitoy) antikorlari [25]. Horseradish peroksidaza bilan belgilangan quyonga qo'ylarga qarshi ikkilamchi antikor qo'shildi (1:400; Nakasugi Jinqiao Co., Pekin, Xitoy) va 37 daraja haroratda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Signal kengaytirilgan xemiluminesans reagenti (Abcam) yordamida aniqlandi. Ijobiy diapazonlar Gel-Pro 4.0 gel optik zichlik tahlili dasturi yordamida tahlil qilindi va kümülatif optik zichlik (IOD qiymati) o'lchandi, R-qiymati nisbiy protein tarkibini quyidagicha ifodalaydi: R=yo'naltiruvchi IOD qiymati GAPDH ning PLSCR (maqsad)/mos yozuvlar IOD qiymati (mos yozuvlar oqsili).

Hujayra madaniyati va RNK aralashuvi

Buyrak epitelial hujayra liniyasi (MDCK xujayralari, CCL34, parchalar 53-90; ATCC, Manassas, VA, AQSh) Dulbekkoning o'zgartirilgan Eagle muhitida antibiotiklar bilan to'ldirilgan (10{{1{14}) o'stirildi. }}} U/ml penitsillin, 100 mg/ml streptomitsin; Life Technologies, Karlsbad, CA, AQSh) va 10 foizli homila sigir zardobi (Life Technologies Co.) 37 daraja haroratda 5 foiz CO, atmosferada va 0,25 foiz subkulturada. tripsin va 1 mM etilendiamintetraasetik kislota (Life Technologies Co., CA, AQSH). Hujayralar 2 soat davomida CaOx (0,5 mM; Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh) va 0,5 mM CaOx va 100 ug/ml neytrallovchi anti-TGF- 1 antikori (R&D Systems, Minneapolis) bilan ishlov berildi. , MN, AQSh) 2 soat. Barcha tajribalar uch nusxada amalga oshirildi.

PLSCRin PS eversiyasining rolini aniqlash uchun buyrak tubulali epiteliya hujayralari PLSCR siRNA [26] bilan transfektsiya qilindi. siRNK Anhui General Biological System (Anhui, Xitoy; 1-jadvalga qarang) tomonidan ishlab chiqilgan va sintez qilingan. LipofektaminTM 2000(Sunshine Biotechnology Co., Ltd., Shanxay, Xitoy) ishlab chiqaruvchining koʻrsatmalariga muvofiq transfeksiya uchun ishlatilgan. . 24 soatlik transfeksiyadan so'ng hujayralar tripsin bilan hazm qilindi, 1000 × g da 5 daqiqa davomida santrifüj qilindi, PBS bilan ikki marta yuvildi va yana santrifüj qilindi. Supernatant tashlab yuborildi va pellet zichligi 1 × 10 daraja hujayralar / ml bo'lgan bir hujayrali suspenziya hosil qilish uchun PBSda to'xtatildi. FAM (karboksifloressein) ifodasining ijobiy darajasi oqim sitometriyasi bilan aniqlanganidek 93 foiz ± 5 foizni tashkil etdi. TGF 1 va PLSCR o'rtasidagi munosabatni qo'shimcha baholash uchun hujayralar 2 soat davomida 0,5 mM CaOx yoki 10 ng/mL TGF- 1 bilan ishlov berildi va keyinchalik PLSCR siRNK bilan transfektsiya qilindi.

G'arbiy blot orqali buyrak tubulali hujayra membranalarida PLSCR darajasini o'lchash

Protein ProteoExtract (Chemical Book Co., Pekin, Xitoy) tabiiy membrana oqsili ekstraktsiyasi to'plamidan foydalangan holda ekstraksiya qilingan va oqsil kontsentratsiyasi Bio-Rad protein tahlili to'plami (Noble-Ryder Co., Pekin, Xitoy) yordamida aniqlangan. Keyinchalik, 4{26}} ug protein 8 foizli SDS-poliakrilamid jelga (stacking gel 100 V, rezolyutsiya jeli 200 V) 1 soat davomida 300 mA doimiy oqimda yuklandi. Jel tarkibidagi oqsillar nitrotsellyuloza membranasiga (Kexing Co., Shenzhen, Xitoy) o'tkazildi va 5% yog'siz sut bilan 1 soat davomida 37 ° C da to'sib qo'yildi va qo'ylarga qarshi kalamush PLSCR monoklonal antikori (1: 200, PAB781HuO1; Abcam, Guanchjou, Xitoy). Xren peroksidazasi bilan belgilangan quyonga qo'ylarga qarshi ikkilamchi antikor qo'shildi (1:400) va aralashma 1 soat davomida 37 daraja C da inkubatsiya qilindi. Membranani yuvgandan so'ng, signal kuchaytirilgan xemiluminesans reagenti bilan aniqlandi (Abcam, Guang-chjou, Xitoy). Ijobiy chiziqlar Gel-Pro 4.0gel optik zichlik tahlili dasturi yordamida tahlil qilindi va IOD qiymati o'lchandi, R-qiymati yuqorida tavsiflangan nisbiy protein tarkibini ifodalaydi.

1-jadval PLSCR uchun siRNK ketma-ketligi

Membran fosfatidilserin taqsimotini o'lchash

Hujayra membranasining PS eversiyasi miqdori Kim va boshqalar [27] tomonidan tasvirlangan floresan söndürme usuli yordamida aniqlandi. va bizning tadqiqot guruhimiz [2], floresan zond sifatida nitrobenzol-2-oksa-1,3-diazol(NBD, Shanxay, Xitoy). PS ni hujayra membranasining tashqi qatlamida NBD bilan belgilab qo'ygandan so'ng, hujayralar 5 mM diizopropilflorofosfat o'z ichiga olgan PBSda o'stirildi. Shundan so'ng, kaltsiy oksalat (1.0 mM) bo'lgan PBS qo'shildi va hujayralar 37 darajada inkubatsiya qilindi. Har 10 daqiqada teng miqdorda hujayra suspenziyasi chiqariladi va RF{10}} spektroflorometr (Shimadzu, Kyoto, Yaponiya) yordamida floresans intensivligi qayd etildi. Spektrofluorometrning sozlamalari quyidagicha edi: 530 nm emissiya to'lqin uzunligi uchun 10 nm yoriq kengligi; va 470 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligi uchun 5 nm yoriq kengligi. Keyinchalik, o'rtacha floresan qiymati (FT) 50-yillarda qayd etildi. O'rtacha pasaytirilgan floresan intensivligi (FD) hujayraning tashqi qatlamidan NBD floresansini o'chirish uchun ditionit eritmasidan foydalangandan keyin ham qayd etilgan. Shundan so'ng, hujayra membranasini o'tkazuvchanlik uchun 1 foiz (w/v) Triton X-100 qo'shildi. Keyin hujayra membranasining ichki qatlamidan NBD floresansi o'chirildi va floresans intensivligi (FO) qayd etildi. Ichki lobulalardagi NBD-PS ulushi keyinchalik quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan: ichkilashtirilgan NBD-PS ning foiz yoshi=100×[(FD-FO)/(FT-FO)].

PSni tashqilashtirish foizi NBD-PSni ichkilashtirishni o'lchash uchun ishlatiladigan printsipga muvofiq aniqlandi. Tashqi lobulalardagi NBD-PS ulushi ham quyidagi tenglama yordamida hisoblangan: tashqi lobulalardagi NBD-PS ulushi=100×[(FT-FD)/(FT-FO)].

Statistik tahlil

Uzluksiz o'zgaruvchilar o'rtacha±standart og'ish sifatida ifodalanadi. Parametrik bo'lmagan juftlashtirilgan darajali yig'indi testi, t-testi va chi-kvadrat testi qo'llanildi. Barcha tahlillar SPSS dasturi 19.0(SPSS, Inc., Chicago, IL, AQSH) yordamida amalga oshirildi. P bilan natijalar<0.05 were="" considered="" statistically="">

Natijalar

TGF- 1/Smad signalizatsiyasi in vivo PS tashqi ko'rinishini rag'batlantiradi

Sichqoncha modelining buyrak to'qimalarida kristal shakllanishi

Erta bosqichdagi kalamush modelini yaratishbuyrak toshlarishakllanishi, etilen glikol va ammoniy xlorid kalamushlarning oshqozoniga 2 hafta davomida kiritildi, so'ngra har bir buyrak bo'limi raqamli mikroskop bilan tekshirildi. Nazorat guruhi namunalarida 14-kuni (1A-rasm) kristall shakllanishisiz normal buyrak quvurli tuzilmalari kuzatildi. Qachon dan buyrak to'qimalaribuyrak toshlariguruhi mikroskopda kuzatilgan, buyrak kanalchalari ko'rinadigan mikrokristallar bilan kengaygan ko'rinadi; Ba'zi buyrak kanalchalarida CaOx kristallarining vaqti-vaqti bilan to'planishi kuzatildi, bu erta bosqichdagi kalamush modeli muvaffaqiyatli yaratilganligini ko'rsatadi.buyrak toshlaribuyrak kanalchalari hujayralarining shikastlanishi va shakllanishi.

Buyrak naychali hujayra membranasida PS ning mavjudligi

PS qayta taqsimlanishini aniqlash uchun hujayra yuzasida PS bilan bog'langan lyuminestsent molekula bo'lgan Annexin V-FITC keng qo'llaniladi. Bizning tadqiqotimizda MDCK hujayralari normal nazoratda,buyrak toshlari, vabuyrak toshlariplus SB431542 guruhlari konfokal lazer mikroskop ostida kuzatilgan (Fig.1B). PS-versiya darajasi o'sdibuyrak toshlariguruh nazorat guruhidagi bilan solishtirganda (P<0.05, fig.1c,="" d),="" whereas="" cells="" in="" the="">buyrak toshlariplyus SB431542 guruhi PSning tashqi ko'rinishidagilarga qaraganda past bazal darajasini ko'rsatdibuyraktoshguruh (P<0.05, fig.="" 1c,="">

TGF- 1 va Smad7 darajalarini o'lchash

TGF- 1 darajasibuyrak toshlariGuruh western bloting usuli bilan aniqlangan. Odatda western blot 2A-rasmda TGF- 1 darajasining densitometrik tahlili bilan birga ko'rsatilgan. Qiymatlar nazorat qiymatlari bilan normallashtirildi va TGF- 1 ning tubulinga nisbati sifatida ifodalandi. Etilen glikol va NH Cl qo'shilishi TGF- 1 darajasini sezilarli darajada oshirdi va nazorat hujayralaridagilarga nisbatan Smad7 darajasini pasaytirdi (2A-rasm); ammo, SB431542 plyus etilen glikol va NH bilan davolash etilen glikol va NH, Cl bilan ishlov berilgan hujayralardagiga nisbatan TGF- 1 darajasini sezilarli darajada pasaytiradi va Smad7 darajasini oshiradi.

TGF in vitro renal tubula hujayra membranasida PLSCR faolligini faollashtiradi

PLSCR

PLSCR darajasi western bloting tomonidan baholandi. Hujayralar 2 soat davomida CaOx bilan ishlov berildi. PLSCR darajasi nazorat hujayralarida ahamiyatsiz edi, lekin CaOx guruhida sezilarli darajada oshdi (P<0.05, fig.2b).plscr="" overexpression="" was="" inhibited="" following="" treatment="" with="" the="" anti-tgf-β1="" antibody.="" after="" the="" transfection="" of="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" with="" plscr="" sirna,="" plscr="" expression="" significantly="" reduced=""><0.05,>

Buzilgan NBD-PS ichki harakat

PLSCR faoliyatini baholash uchun buyrak tubulasi epitelial hujayra membranasida PS ning ichki va tashqi harakatlarini aniqladik. PLSCR PS ning tashqi varaqdan plazma membranasining ichki varag'iga o'tishiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini baholash uchun biz floresan yorliqli PS (NBD-PS) ni plazma membranasining tashqi varag'iga birlashtirdik va uning ichkilashtirilishini kuzatdik (3-rasm). Nazorat va CaOx guruhlarida MDCK hujayralari tomonidan ichkilashtirilgan NBD-PS miqdori mos ravishda taxminan 46,2 va 17,8 foizni tashkil etdi. Shunday qilib, CaOx guruhi hujayralarida PSni ichkilashtirish tezligi nazorat guruhi hujayralariga qaraganda ancha past edi (P).<0.01, fig.3a).="" however,="" the="" level="" of="" internalized="" nbd-ps="" in="" the="" anti-tgf-β1+caox="" group="" increased="" to="" 34.2%,="" which="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" caox="" group=""><0.01, fig.3a).="" after="" the="" transfection="" of="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" with="" plscr="" sirna,="" the="" level="" of="" internalized="" nbd-ps="" significantly=""><0.05, fig.3b,="">

Shakl 1 Kristal shakllanishi va PSning tashqi ko'rinishi nazorat, buyrak toshlari va buyrak toshlari va SB431542 guruhlarida kuzatildi.

A) 14-kuni buyrak to‘qimalarida kristall hosil bo‘lishi; strelka mikrokristalli tuzilmalarni ko'rsatadi. (B) MDCK hujayralari konfokal lazer mikroskopida kuzatilgan.

(C) Eversiya tezligining oqim sitometrik chizmalari. (D) Eversiya darajasi (foiz). Uchburchak P ni bildiradi<0.05 vs.="" control.="" asterisk="" indicates=""><0.05 vs.="">buyrak toshlariguruh

Kengaytirilgan NBD‑PS tashqi harakat

PSning tashqi ko'rinishiga oksalat ta'sir qiladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun MDCK hujayralari hujayra ichidagi NBD-PS bilan belgilandi va uning harakatlanish darajasi aniqlandi. Kuluçka muhitida qoramol zardobidagi albumin (v/v 1%) mavjud bo'lib, u tezda sirtda ifodalangan NBD-PSni chiqaradi. NBD-PS ning taxminan 34,5 foizi nazorat hujayralarida tashqi varaqaga ko'chib o'tdi, CaOx guruhi hujayralarida PSning tashqariga o'tish tezligi umumiy ichki etiketli NBD-PS bilan solishtirganda 75,3 foizga ko'tarildi, bu sezilarli darajada katta edi. nazorat guruhi hujayralarida (P<0.01, fig.3a).to="" determine="" whether="" tgf-β1="" causes="" ps="" eversion="" in="" renal="" tubule="" cell="" membranes="" by="" activating="" plscr,="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" were="" transfected="" with="" plscr="" sirna.="" after="" plscr="" sirna="" transfection,="" the="" externalization="" rate="" was="" lower="" than="" that="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox=""><0.01 for="" both,="" fig.3b,="">

2-rasm TGF- 1/Nazorat, buyrak toshlari va buyrak toshlari plyus SB431542 guruhlarida Smad ifodasi va buyrak tubulasi hujayra membranasida PLSCR ifodasi.

(A)TGF- 1/Smad ifodasi. (B) nisbiy fosfolipid skramblaza (PLSCR) darajalari va ifodasi GAPDH.P.<>

Uchburchak P ni bildiradi<0.05 vs.control.="" the="" round="" dot="" indicates=""><0.05 vs.="" the="" caox="" group.="" pound="" sign="" indicates=""><0.05 vs.="" tgf-β1="">

QISM Ⅱ UCHUN SHU YERGA BOSING