Cistanche Salsada immunomodulator omillar

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Shinjiro MARUYAMA," Koji YAMADA, Xirofumi TACHIBANA

Cistanche salsa(CAMever) G.Bek, Orobanchaceae - Yaponiyada sharqona dorivor tonik sifatida ishlatiladigan parazit o'simlik. Oldingi tadqiqotimizda biz C, salsa ekstrakti inson Ivmph tugunining limfotsitlarida IgM va IgG ishlab chiqarishni kuchaytirganini aniqladik. Bundan tashqari, C, salsa dializat (CSD) a3 bo'lgan dializ membranasi yordamida tayyorlangan.500-Da molekulyar og'irligi kesilgan inson B-hujayra liniyasida IgM ishlab chiqarishni kuchaytirdi BALL-1; Bundan tashqari, u hujayralarning ozgina ko'payishiga olib keldi. Biroq, aksincha, CSD inson Burkittning lenfoma hujayra liniyasi Namalvada apoptoz bilan birga o'sishni inhibe qildi. Ushbu natijalar CSD tarkibida limfotsitlarga xos bo'lgan faol tarkibiy qismlarning mavjudligini ko'rsatadi, Hozirgacha bu tarkibiy qismlarning kimyoviy xossalari aniqlanmagan. Ushbu tadqiqotda biz CSD ning faol tarkibiy qismlarining kimyoviy xususiyatlarini o'rgandik. B-hujayra liniyalarida yuqorida aytib o'tilgan ikkala faoliyat ham CSD ni avtoklav bilan davolash orqali faollashtirilmagan. Jel filtrlash ustuni xromatografiyasidan foydalanib, biz faol fraksiyalarning cho'qqilari turli fraktsiyalarda to'planganligini aniqladik. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, CSD tarkibida kamida 2 turdagi faol tarkibiy qismlar mavjud va ular polisaxaridlar bo'lishi mumkin, chunki ular suvda eriydigan yuqori molekulyar og'irlikdagi tarkibiy qismlar va termostabildir.

Kalit so'zlar: Cistanche salsa, yuqori molekulyar og'irlik, IgM, o'sishni inhibe qilish.

Kirish

Cistanche salsa(CA Meyer) G.Bek, Orobanchaceae - Yaponiyada sharqona dorivor tonik sifatida ishlatiladigan parazit o'simlik. Xitoyda bu o'simlik buyrak etishmovchiligi va nevrasteniyani davolashda ishlatiladigan muhim an'anaviy tibbiyot hisoblanadi. In vitro tadqiqotlari orqali biz C. salsaning immunitet tizimiga ta'siri haqida allaqachon xabar bergan edik. Birinchidan. biz C. salsa ekstrakti inson limfa tugunlari limfotsitlarida IgM va IgG ishlab chiqarishni kuchaytirganligini ko'rsatdik. Ikkinchidan, biz C. salsa dializatini (CSD) 3,500-Da molekulyar og'irlikdagi kesishgan dializ membranasi yordamida tayyorlanganligini ko'rsatdik, inson B-hujayra liniyasi BALL-1da IgM ishlab chiqarishni kuchaytirdi; Bundan tashqari, u hujayra proliferatsiyasini kichik darajada qo'zg'atdi.2 Bundan tashqari, CSD teskari ta'sirga ega bo'lib, u inson Burkittning lenfoma hujayra chizig'ida apoptoz bilan birga o'sishni inhibe qiladi, Namalva.3) Bu topilmalar CSD ning bu ta'siri bilan bog'liqligini ko'rsatdi. B hujayralarining faollashuvi, apoptoz esa B-hujayralarining differentsiatsiyasi uchun zarur bo'lgan sitokinlar va hujayra-hujayra aloqasi kabi boshqa signallarning etishmasligidan kelib chiqqan; ammo, CSD ning kimyoviy xossalari oldingi tadqiqotlarning hech birida aniqlanmagan. Shuning uchun, ushbu tadqiqotda biz CSD tarkibidagi faol tarkibiy qismlarning kimyoviy xususiyatlarini o'rgandik.

Materiallar va uslublar

CSD avvalgi tadqiqotimizda xuddi shu usul bilan tayyorlangan. CSD fosfat tamponlangan sho'r suvda (PBS) 2 0 mg/ml da eritildi. Tayyorlangan eritma (0,8 ml) qo'llashdan oldin filtrdan (0,22 um) o'tkazildi va keyin bir xil eritma bilan TOYOPEARL HW-40F ni o'z ichiga olgan ustunlar orqali elutildi. (1.0×96.5 sm; Tosoh Corp, Yaponiya), TOYOPEARL HW-55F(1.0 × 98.0 sm; Tosoh Corp., Yaponiya) , va Sephacryl S-400HR(1.0×98.0 sm; GE Healthcare UK Ltd.,.Angliya); va keyin 1 ml (30 tomchi) fraktsiyalar yig'ildi. Jellarning bo'sh hajmini va fraksiyalangan tarkibiy qismlarning taxminiy molekulyar og'irligini (MW) aniqlash uchun ko'k dekstran (BD) (Sigma-Aldrich Japan KK, Yaponiya); va Leuconostoc spp. (Sigma-Aldrich Japan KK, Yaponiya) dan olingan ma'lum MVt dekstranlari, ya'ni MW2, 000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3) va 6 kDa (D4); va siyanokobalamin (VB12, MW: 1355,4) (Wako Pure Chemical Industries Ltd., Yaponiya) ishlatilgan. Har bir fraksiyadagi jami shakar va oqsil miqdori mos ravishda fenol-sulfat kislota usuli va Lowry usuli yordamida PIERCETM bicinchoninic acids (BCA) protein tahlili to'plami (Thermo Fisher Scientific Inc., AQSH) yordamida aniqlandi. Tegishli standartlar sifatida glyukoza va sigir zardobidagi albumin ishlatilgan. Bundan tashqari, har bir fraktsiyaning 320 nm (A: 2o) da absorbansi o'lchandi. Moviy dekstran va siyanokobalaminning elutsiya cho'qqilari 260 nm da ularning absorbans qiymati bo'yicha, ma'lum MVt dekstranlarning cho'qqilari esa fenol-sulfat kislota usuli yordamida aniqlandi. CSD termostabilligini baholash uchun 20 daqiqa davomida 120 gradusda avtoklavda o'tkazildi. Bioassaylarda hujayra madaniyati va IgM ni o'lchash avvalgi tadqiqotimizda xuddi shu usul bilan amalga oshirildi.

Cistanche salsa ekstrakti

Natijalar va muhokama

1-rasmda HW-40F da CSD ning gel filtrlash ustuni xromatogrammalari ko'rsatilgan. Shakl la dan D4 dekstran belgisi asosida faol tarkibiy qismlarning MVt 6 kDa dan ortiq ekanligi taxmin qilingan. Bundan tashqari, CSD faoliyati, ya'ni IgM ishlab chiqarishni kuchaytirish va o'sishni induktsiya qilish, avtoklav bilan ishlov berish orqali faollashtirilmagan (2-rasm), garchi ba'zi tarkibiy qismlar yig'ilib, CSD 0 orqali o'tgandan keyin yo'qolgan.{{6} }um filtri. CSD va avtoklavlangan CSD ning elutsiya naqshlari deyarli bir xil edi, ammo avtoklavlangan CSDda IgM ishlab chiqarishni kuchaytirishning nisbiy faolligi ishlov berilmagan CSDga qaraganda past edi. Ba'zi sabablarga ko'ra, agregatlar faol tarkibiy qismlarni ushlab turgan yoki ba'zi faol tarkibiy qismlar faol bo'lmagan. HW-55F da xromatografiya natijalari 2 turdagi immunomodulyator omillarning mavjudligini ko'rsatdi: birinchisi, fr. № 32. yuqori molekulyar og'irlikdagi faol tarkibiy qism (HCS) bo'lib, u IgM ishlab chiqarishni kuchaytira oladi, ikkinchisi esa fr. no.50, hujayra proliferatsiyasini inhibe qila oladigan o'rta molekulyar og'irlikdagi faol tarkibiy qism (MCS) edi (3-rasm). Biroq, HCS va MCS (mos ravishda fr.no.32 va 50) uchun olingan cho'qqilar ma'lum MW dekstranlari kabi keskin emas edi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan). Ushbu kuzatishlar CSD tayyorlash jarayonida sun'iy ravishda hosil bo'ladigan qo'shimcha mahsulotlar, osonlik bilan yo'q bo'lib ketadigan va bir nechta birliklarni o'z ichiga olgan faol tarkibiy qismlarning polimerlari yoki turli xil original MWga ega bo'lgan turli xil faol tarkibiy qismlar mavjudligini ko'rsatadi. Xromatogrammalardagi elutsiya naqshlari shuni ko'rsatadiki, HCS va MCS dan sof tarkibiy qismlarni olish oson emas, chunki yuqorida aytib o'tilganidek, bir oz boshqacha MWga ega bo'lgan turli xil tarkibiy qismlar mavjud. Har ikkisi ham faol tarkibiy qismlarning aralashmasi bo'lsa-da, HCS 70 kDa dan ortiq MVt tarkibiy qismlarini, MCS esa 6 kDa dan ortiq MVtni o'z ichiga oladi. HCS HW-55F da ajratilgan diapazondan tashqaridagi fraktsiyada elutsiya qilindi. Sephacryl-S400.da HCS ning bir qismi (fr.no.36) MW 2,000 kDa bo'lgan D1 belgisi bilan bir xil fraktsiyada elutsiya qilingan (4-rasm). Umuman olganda, polisaxaridlar va oqsillar o'simlik ekstraktlarida suvda eriydigan yuqori MVt tarkibiy qismlari sifatida hisobga olinadi. Deyarli barcha funktsional oqsillar issiqlik bilan ishlov berish orqali faollashtirilmaganligi sababli, ular polisaxaridlar kabi ko'rinadi. Biroq, Park et. al. ökse o'ti (Viscum album L., Viscaceae) ekstraktidan tayyorlanadigan viskotoksin deb ataladigan termostabil sitotoksik kichik protein haqida xabar berishgan.4Bundan tashqari, viskotoksinlar insonning tabiiy qotil hujayralarining immunomodulyatsion faolligini oshirishi ko'rsatilgan.53-rasmda, MCS. past MVtga ega, oqsilning yuqori miqdorini ko'rsatadi. Ushbu faktlarni hisobga olgan holda, MCS oqsil bilan bog'langan polisakkarid8 yoki viskotoksinlar kabi termostabil oqsil bo'lishi mumkin. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, 2 ta faol tarkibiy qism polisaxaridlar bo'lishi mumkin. Aks holda, MCS termostabil oqsillar bo'lishi mumkin.

Ma'lumotnomalar

1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: neyron hujayralarida TNF alfa-induktsiyali apoptozga tubuloside B ning himoya ta'siri.Acta Pharmacol. Sin., 25, 1276-1284, 2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, X.:Cistanche salsa ekstraktiinsonning B hujayralarida IgM ishlab chiqarishni kuchaytirdi, BALL-1.J. Savdo. Med., 24, 209-211, 2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche salsainson Burkittning lenfoma hujayra liniyasi Namalvada induktsiya qilingan apoptoz ekstrakti. J.Trad. Med., 25, 24-27, 2008.

4) Park. JH, Hyun, CK, Shin HK: Issiqlik bilan ishlangan ökse o'tidagi komponentlarning sitotoksik ta'siri (Viscum albomi). Cancer Let, 139, 207-213, 1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Mistletoe viskotoksinlari tabiiy qotil hujayra vositachiligidagi sitotoksiklikni oshiradi. Eur.J. Biochem.,269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M., Yang, LX: Polisaxarid-K (PSK) ning saratonga qarshi ta'siri va mexanizmlari: saraton immunoterapiyasining oqibatlari. Antikanser Res., 22, 1737-1754, 2002.

cistanche qo'shimchalari