Yallig'lanishni sezuvchi katalaza taqlid qiluvchi nanozimlar mahalliy oksidlovchi stressni bartaraf etish orqali buyrakning o'tkir shikastlanishini engillashtiradi

Abstrakt

Ma'lumot: TheReaktiv kislorod turlari (ROS)va to'qimalarning shikastlanishiga muhim hissa qo'shadigan yallig'lanish turli kasalliklar bilan bog'liqligi yaxshi ma'lum. Buyrak gipoksiyaga moyil va ROSga nisbatan zaif. Shunday qilib, o'rtasidagi shafqatsiz tsikloksidlovchi stressva buyrakgipoksiya muhim hissa qo'shadining rivojlanishigasurunkali buyrak kasalligiva nihoyat,yakuniy bosqich buyrak kasalligi. Shunday qilib, ROSga boy yallig'lanish joyiga terapevtik vositalarni etkazib berish va terapevtik vositalarni chiqarish mumkin bo'lgan yechimdir.

Buyrak kasalligi uchun yangi o'tlar

Natijalar: Biz katalaza taqlid qiluvchi 1-dodekantiol stabillashgan Mn3O4 (dMn) ni barqaror yuklash orqali uzoqroq aylanuvchi, yallig'lanishni sezuvchi, ROS-ni tozalaydigan ko'p qirrali nano platformani ishlab chiqdik.3O4) ROS-sezgir nanomiya ichidagi nanozarrachalarhujayralar (PTC), natijada ROSga sezgir nanozim (PTC-M) hosil bo'ladi. Hidrofobik dMn3O4ichiga nanozarrachalar yuklanganPTC misellari qon aylanish jarayonida erta bo'shatishning oldini oladi va ROSga javob beruvchi terapevtik vosita sifatida ishlaydi.yuklangan dMn ning chiqarilishi3O4bir marta u yallig'lanish joyiga etib bordi.

Kalit so‘zlar:Mn3O4 nanozarralari, nanozimlar, yallig'lanish,Ishemiya - reperfuziya, Buyrak

Fon

Acute kidney injury (AKI) is the term that covers a broad spectrum of renal function deterioration ranging from small changes in serum creatinine level to conditions requiring renal replacement therapy [1]. The KDIGO (Kidney disease: improving global outcomes) guidelines define AKI as an increase in serum creatinine of either>0.3  mg/dL within 48  h,>Etti kun ichida boshlang'ich darajadan 1,5 baravar ko'paydi yoki siydik hajmining kamayishi<0.5 ml/kg/hour for six hours [1]. AKI is one of the rising global health problems that cause high morbidity and mortality and economic burden [2]. The incidence of AKI defined by the KDIGO guidelines was 21.6% in adults in in-hospital settings [3]. AKI may lead to several complications, including metabolic acidosis, hyperkalemia, uremia, volume overload, and damage to other organ systems, including death. Despite advances in medicine, mortality from AKI is still high. According to a meta-analysis of studies in in-hospital settings, AKI-associated mortality was reported to be 23.9% in adults [3]. The mortality rate of dialysis-requiring AKI patients exceeds 50% [4]. AKI increases the long-term risk of subsequent AKI, progressive chronic kidney disease (CKD), and end-stage renal disease (ESRD) [5]. Eventually, AKI increases socioeconomic and healthcare burdens. Nevertheless, there is no clear treatment for AKI to date. When AKI occurs, conservative treatments such as removing the causative factors, controlling water and electrolyte imbalances, performing renal replacement therapy, if necessary, and waiting for renal function to recover are applied.

Ishemiya-reperfuzion shikastlanish (IRI)qon oqimining vaqtincha qisqarishi yoki toʻxtab qolishi, soʻngra reperfuziya natijasida kelib chiqadigan organ shikastlanishi boʻlib, shok, miokard infarkti, ishemik insult, katta jarrohlik va organ transplantatsiyasi kabi turli klinik vaziyatlarda uchrashi mumkin. Buyrak IRI AKI ning asosiy sabablaridan biri bo'lib, bu buyrak funktsiyasining tez pasayishiga olib keladi. Buyrak ishemik insultlarga ayniqsa sezgir bo'lgan organ bo'lib, shikastlangan quvurli epitelial hujayralar keyinchalik chiqindilarning chiqarilishini, suv, elektrolitlar va kislota-ishqor muvozanatini nazorat qilishni buzadi [6]. IRIda buyrak tubulasi hujayralarining shikastlanish mexanizmi reperfuziya paytida hosil bo'lgan reaktiv kislorod turlari (ROS) tufayli yallig'lanishni o'z ichiga olishi ma'lum [6-8]. Shu sababli, IRIni davolashda ROS tozalashni qo'llashga urinishlar bo'lgan. Biroq, uning haqiqiy klinik qo'llanilishi yuqori sezuvchanlik reaktsiyalarini o'z ichiga olgan tizimli nojo'ya ta'sirlar haqidagi xavotirlar tufayli cheklangan. Edaravone kabi antioksidantlarni qabul qilish allaqachon IRIda ROSni tozalash uchun ishlatilgan. Biroq, u bir nechta nojo'ya ta'sirlar bilan birga keldi va shuning uchun nanozimlar (tabiiy fermentga o'xshash faollikni ko'rsatadigan nanomateriallar) kabi yangi va samarali antioksidantlarga talablar qo'yildi [9-13]. Yao va boshqalar. Mn3O4 nan zarralari ko'plab fermentlarni taqlid qiluvchi faollikka, ya'ni superoksid dismutaza va katalaza taqlid qiluvchi faollikka, shuningdek, gidroksil radikallarini tozalash faolligiga ega ekanligini aniqladi [11]. Mn3O4 V2O5, CeO2, Co3O4, MnFe2O4 va Fe3O4 kabi boshqa fermentlarga qaraganda kuchliroq ROSni tozalash qobiliyatiga ega ekanligi va boshqa marganets oksidi turlaridan (MnOx (MnO2, MnO va Mn2O3) yaxshiroq ekanligi ko'rsatilgan.

1-rasm PTC-M ni tayyorlash va ta'sir qilish tartibini ko'rsatadigan sxematik rasm A PTC-M sintezi, B PTC-M ning ta'sir qilish mexanizmi (1) PTC-M ni tomir ichiga yuborish (2) AOK qilingan PTC-M qonda aylanadi va yallig'lanish joyida to'planadi (3) yallig'lanish joyida mavjud bo'lgan ichki ROS tufayli PTC-Mning beqarorligi (4) yallig'lanish joyida yuklangan dMn 3O4 ning chiqishi (5) chiqarilgan dMn3O4 ROS tozalashni katalizlaydi. (6) yallig'lanish, apoptoz va fibrozni kamaytirish (7) buyrak shikastlanishini engillashtirish va (8) buyraklar faoliyatini yaxshilash

Natijalar

dMn3O4 nanozarrachalari va polimer konjugatlarining sintezi va xarakteristikasi

Te dMn3O4 NPlar kopripitatsiya usuli yordamida sintez qilindi va 1-dodekantiolning tiol guruhlari yordamida stabillashdi (2A-rasm). Dala-emissiya o'tkazuvchan elektron mikroskopiya (FE-TEM) tahlili dMn3O4 NPlarning o'rtacha hajmi 2{{10}} nm (18.0±0,6 nm) dan kichik ekanligini ko'rsatdi (2B-rasm). ). 1-qo'shimcha fayl: S1A va S1B-rasmda tayyorlangan dMn3O4 ning tasvirlari va sxematik ko'rinishi ko'rsatilgan. Energiya dispersiv rentgen spektroskopiyasi (EDS) ma'lumotlari Mn3O4 dan Mn va SH-C12 dan oltingugurt va uglerod mavjudligini ko'rsatdi (2C-rasm va 1-qo'shimcha fayl: S1C-rasm). X-nurli foton spektroskopiyasi (XPS) tahlili natijalari 641,42 eV va 653,23 eV da joylashgan ikkita cho'qqidan iborat bo'lgan Mn 2p ning XPS spektrini tasvirladi va bu cho'qqilar mos ravishda Mn 2p3/2 va Mn 2p1/2 ga tegishli (1-rasm). 2D va 1-qo'shimcha fayl: S2-rasm). Ushbu ikki cho'qqi orasidagi energiya bo'shlig'i 11,81 eV ni tashkil etdi, bu Mn3O4 uchun xabar qilingan adabiyotlarga yaxshi mos keladi. 2E-rasmda ko'rsatilganidek, dMn3O4 NPlarining rentgen nurlari chang diffraktsiyasi (XRD) naqshida, barcha o'lchangan diffraktsiya cho'qqilari hausmannit Mn3O4 ning standart namunasiga yaxshi mos keldi [ICDD: # 001–1127], bu ularning yuqori kristalliligini tasdiqlaydi. tabiat. ROSga javob beradigan PTC konjugati bosqichma-bosqich kimyoviy reaktsiyalar orqali tayyorlangan, bu erda terminal karboksilat guruhi bilan tioketal (TK) bog'lovchisi birinchi o'lchamda bo'lgan. Keyin TK bog'lovchisining karboksilik guruhi PEG-TK hosil qilish uchun EDC/NHS reaktsiyasi yordamida metoksi-PEG aminining (PEG-AM) amino guruhiga konjugatsiya qilindi. Nihoyat, PEG-TK ning boshqa karboksilik guruhi EDC/NHS reaktsiyasi orqali yana stearaminning amino guruhiga konjugatsiya qilindi [15]. ROS javob bermaydigan kompyuter konjugati stearik kislotani PEG-AM ga konjugatsiya qilish orqali tayyorlangan. PTC va PC tarkibi 1 H yadro magnit-rezonans (NMR) spektroskopiyasi bilan tahlil qilindi (Qo'shimcha fayl 1: S3-rasm). NMR spektrlari C18 ning metil va metilen protonlariga mos keladigan d 0,83 va 1,23 ppm da xarakterli cho'qqilarni ko'rsatdi. d 3.6 da choʻqqisi PEG ning O–CH2–CH2- ga toʻgʻri keldi. PTC va shaxsiy kompyuterlarda C18 ni almashtirish darajasi (DS %) mos ravishda 78% va 46% deb hisoblangan.

PTC‑M fermentini tayyorlash va tavsiflash

Te ROS-sezgir nano mitsellalar (PTC) dMn3O4 bilan yuklangan, natijada PTC-M. PTC-M ni tayyorlash uchun PTC ning dMn3O4 ozuqa nisbati (20%) ishlatilgan. Tayyorlangan PTC va PTC-M ning gidrodinamik diametri, zeta potentsiali va FE-TEM tasvirlari 3A-rasmda va 1-qo'shimcha faylda ko'rsatilgan: S4A-rasm. PTC ning FE-TEM tasvirlari bir xil zarracha o'lchamlari bilan sferik nano mitsellalarni namoyish etdi. PTC-M ning gidrodinamik diametri dMn3O4 yuklangandan so'ng hidrofobik bo'shliqda dMn3O4 to'planishi tufayli biroz oshdi, zeta potentsiali esa PEG himoyasi tufayli ikkala nanomitselda ham salbiy bo'lib qoldi. PTC va PTC-M ning FE-TEM tasvirlari bir tekis taqsimlangan zarralarni ko'rsatdi. Yuklash tarkibi va inkapsulyatsiya samaradorligi mass-spektrometrik tahlil yordamida hisoblab chiqilgan va mos ravishda 10±3% va 17±6% deb hisoblangan. dMn3O4 mavjudligi PTC-M ning FE-TEM tasvirlarida ko'rindi (3A-rasm), bu PTC-M ning EDS tahlili bilan qo'shimcha ravishda tasdiqlandi, Mn3O4 dan Mn, oltingugurt va SH-C12 dan uglerod va uglerodni ko'rsatdi. , PEG dan azot va kislorod (Qo'shimcha fayl 1: S5-rasm). Termogravimetrik (TGA) tahlili o'tkazildi va dMn3O4 yuklanishi 12% deb hisoblandi (Qo'shimcha fayl 1: S6B-rasm). dMn3O4 (PC-M) bilan yuklangan ROS-sezgir bo'lmagan mitsellar ham xuddi shu usul bilan nazorat sifatida tayyorlangan.

PTC-M ning ROS-javob beqarorligi va dMn3O4 ning chiqarilishida TK aloqasining rolini tasdiqlash uchun PTC-M H2O2 qo'shib, ROS sharoitlariga ta'sir qildi. Boshqaruv sifatida biz ROS-sezgir bo'lmagan PC-M dan foydalandik. PTC-M ham, PC-M ham nanomitsellalarda mahkam o'ralgan dMn3O4 bilan sferik morfologiyani namoyish etdi, ammo H2O2 bilan davolashdan so'ng, PTC-M ning yuqori yig'ilishi buzildi, so'ngra dMn3O4 ajralib chiqdi. FE-TEM tasvirlarida ko'rsatilganidek yig'ilgan, PC-M esa H2O2 ta'siridan keyin ham barqaror tuzilmalarni ko'rsatdi (3B-rasm va 1-qo'shimcha fayl: S4B-rasm). PTC-M ning ROS sezgirligi qo'shimcha fayl 1: S7-rasmda ko'rsatilganidek, gidrodinamik diametr va zeta potentsialidagi o'zgarishlarni PC-M bilan solishtirish orqali tasdiqlandi. ROS-sezgir bo'lmagan PC-M ning gidrodinamik diametri va zeta potentsiali H2O2 qo'shilgandan keyin sezilarli farqni ko'rsatmadi. Biroq, ROS-sezgir PTC-M gidrodinamik o'lchamlarni qisqartirdi, ehtimol TK sinishi orqali PEG himoyasini olib tashlash, natijada strukturaning beqarorlashishiga olib keldi. H2O2 qo'shilgandan so'ng, zeta potentsiali manfiydan musbat zaryadga qaytdi, bu PEGni olib tashlash va bug'lanish ta'siriga bog'liq bo'lishi mumkin. Biz H2O2 mavjudligi yoki yo'qligida gidrodinamik diametrlarni kuzatish orqali vaqt o'tishi bilan barqarorlikni tekshirish orqali o'lchamdagi o'zgarishlarni o'rganib chiqdik (3C-rasm). H2O2 qo'shilgandan so'ng, gidrodinamik diametrlar 10 soniya ichida sezilarli darajada kamaydi, olti kungacha vaqt o'tishi bilan boshqa o'zgarishlar bo'lmadi, holbuki PTC-Mning o'zi tajriba davomida barqaror o'lchamlarni ko'rsatdi, bu PTC-M ning yaxshi kolloid barqarorligini ko'rsatadi. Shuningdek, biz 10% FBS da barqarorlikni tekshirdik va PTC-M 4 kungacha yaxshi barqarorlikni ko'rsatganini kuzatdik (Qo'shimcha fayl 1: S9-rasm). Gidroksidinamik diametrlar va zeta potentsial o'zgarishi ham ROS-sezgir va sezgir bo'lmagan bo'sh nano mitsellalar (PTC va PC) bilan tasdiqlangan (Qo'shimcha fayl 1: S8-rasm). ROS mavjudligi yoki yo'qligidagi barcha qiyosiy tadqiqotlar tayyorlangan nanomollarning yoki yakuniy dMn3O4 PTC-M fermentining barqarorligi va ROS sezgirligini ko'rsatdi.

2-rasm dMn3O4 sintezi va tavsifi dMn 3O4 sintezining sxematik tasviri, B FE-TEM tasvirlari, C EDS tahlili, D XPS spektri va dMn3O4 NPlarining E XRD naqshlari

Biz dMn3O4 NP-yuklanishi tufayli yakuniy PTC-M fermentining H2O2 yo'q qilish xususiyatini qo'shimcha tekshirdik. Bu fyuchers tsent probi sifatida tereftalik kislota (TA) yordamida sinovdan o'tkazildi. TA H2O2 bilan reaksiyaga kirishib, 425 nm da lyuminestsent tepalikka ega 2-gidroksiter ftalik kislota hosil qildi. dMn3O4 H2O2 ni suv va kislorodga aylantiradi va shuning uchun floresan intensivligi pasayadi, bu 3D-rasmda ko'rsatilganidek, katalaza faolligini tasdiqlaydi. Te PTC-M vaqt o'tishi bilan H2O2 mavjudligida bo'sh mitsel PTC bilan solishtirganda floresan intensivligining kuchli pasayishini ko'rsatdi. PTC-M ning katalazaga o'xshash faolligi 1-qo'shimcha faylda ko'rsatilganidek, konsentratsiyaga ham bog'liq edi: S10-rasm. PTC-M ning kislorod ishlab chiqarish quvvati H2O2 borligida O2-maxsus lyuminestsent Ru(DDP) zondi yordamida yana tasdiqlandi. Ru(DDP) ning o'nta shahridagi floresans O2 borligida pasayadi, bu O2 ni samarali ishlab chiqarishni taklif qiladi. 3E-rasmda ko'rsatilganidek, Ru(DDP) ning floresans intensivligi PTC-M guruhida H2O2 borligida kamaydi, holbuki PTC-faqat guruhda H2O2 mavjudligi floresansning ozgina pasayishini ko'rsatdi (3F-rasm), PTC-Mda kislorod ishlab chiqarishga olib keladigan katalaza faolligini tasdiqlash. Nihoyat, biz kislorodni aniqlash o'lchagich yordamida PTC-M ning H2O2 yo'q qilish xususiyatini tasdiqladik. 3G-rasmda ko'rsatilganidek, PTC-M tomonidan kislorod ishlab chiqarish dastlabki vaqt ichida oshdi, keyin esa sekin o'sish kuzatildi, PTC bo'sh mitsellar esa kislorod ishlab chiqarishni ko'rsatmadi. H2O2 ning nomutanosibligi PTC-M guruhida kislorod pufakchalari hosil bo'lishi bilan kuzatildi Qo'shimcha fayl 1: rasm S11A. Bundan tashqari, PTC-M faqat dMn3O4 bilan solishtirganda kislorodning yuqori ishlab chiqarilishini ko'rsatdi, ehtimol, PTC-Mda dMn3O4 ning yaqin qadoqlanganligi sababli, erkin dMn3O4 bilan solishtirganda uni reaktsiya uchun qulayroq qiladi (Qo'shimcha fayl 1: rasm). S11B). FE-TEM da ko'rsatilganidek, nano mitsellalar H2O2 bilan ishlov berish tufayli bo'shashgan bo'lsa ham, dMn3O4 hali ham PTC-M ichida mavjud bo'lishi mumkin, bu esa erkin dMn3O4 bilan solishtirganda yuqori katalaza faolligiga olib keladi. Bularning barchasi birgalikda PTC-M ning katalaza taqlid qiluvchi faolligini tasdiqladi.

In vitro hujayra hayotiyligi va hujayralarni qabul qilish

Hujayra ichiga taqsimlangan ROS-sezuvchan-PTC ning uyali so'rilishini va ROSga sezgir bo'lgan shaharni va foydali yukning chiqarilish naqshini tasdiqlash uchun biz PTCni in vitro sharoitida kompyuter bilan solishtirdik. Birinchidan, biz tayyorlangan PTC, PC, PTC-M va PC-M ning HK-2 hujayralarida WST-1 tahlili orqali hujayra hayotiyligini tekshirdik (Qo'shimcha fayl 1: S12-rasm). Bo'sh mitsellalar kam hujayra o'limiga uchradi, lekin dMn3O4-yuklangandan so'ng hujayraning hayotiyligi pasaydi, ammo o'zgarish statistik ahamiyatga ega emas edi. Bo'sh mitsellalar sitotoksik bo'lmaganligi sababli, hujayra hayotiyligining ozgina o'zgarishi sirtdan adsorbsiyalangan dMn3O4 tufayli bo'lishi mumkin. PTC-M va PC-M ning IC50 qiymati mos ravishda 130,41 va 247,17 ug/ml deb aniqlandi (4A-rasm). Nano mitsellalarning hujayra ichidagi so'rilishini va taqsimlanishini batafsil o'rganish uchun IR780 namunaviy dori sifatida ishlatilgan va qiziqarli mikroskopiya yordamida IR780 ning floresans intensivligini vizualizatsiya qilish uchun IR780 yuklangan PTC nanomicells, PTC-IR780 tayyorlandi (Evos FL Auto 2, Thermostif Fisheric). , AQSH) (4B-rasm). Nazorat guruhi sifatida biz ROS-sezgir bo'lmagan PC-IR780 ning qabul qilinishini ham tahlil qildik. PC-IR780 bilan solishtirganda, PTC-IR780 HK-2 hujayralarida ko'proq so'rilishini ko'rsatdi (Qo'shimcha fayl 1: S13-rasm). ROS bo'lmagan sharoitlarda PTC-IR780 ning yaxshi qabul qilinishining aniq sababi aniq emas, ammo bu PTC hujayra madaniyati sharoitida normal ROS darajasiga ozgina sezuvchanligini ko'rsatishi mumkin, bu esa PEG ekranining sirtni tark etishiga olib keladi. zaryad biroz ijobiy. PC-IR780 H2O2 bilan davolash natijasida kelib chiqqan ROS yoki gipoksiya sabab bo'lgan ROS sharoitlaridan qat'i nazar, sezgir bo'lmaganligi sababli shunga o'xshash qabul qilish naqshini ko'rsatdi, PTC-IR780 esa hujayralar ichida boshqa tarqalish modelini ko'rsatdi, bu IR780 ning yaxshilangan chiqarilishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. hujayralar ichida. PTC-Mda hujayra o'limining kuchayganligini ko'rsatadigan oldingi hujayra hayotiyligi ma'lumotlari (Qo'shimcha fayl 1: S11-rasm) ham PTC ning kompyuterga nisbatan yaxshilangan hujayra o'zlashtirilishi tufayli bo'ladi. IR780 yodidi juda hidrofobik bo'yoq bo'lib, hujayra membranasiga yuqori yaqinlik ko'rsatishi mumkin va ROS ta'siridan qat'i nazar, juda yorqin signalni ko'rsatadi. Flüoresans mikroskopiyasi yordamida olingan ma'lumotlarni qo'llab-quvvatlovchi floresan faollashtirilgan hujayralarni saralash (FACS) tahlili (4C-rasm) orqali o'rtacha floresans intensivligini (MFI) tekshirish orqali hujayrani qabul qilish yanada tahlil qilindi. Ko'rsatilganidek, MFI boshqa guruhlarga nisbatan ROS sezgir PTC IR780 guruhida eng yuqori bo'lib, hujayralardagi IR780 ning kengaytirilgan chiqarilishini tasdiqlaydi. Keyinchalik Quan MFI ni turli guruhlardan bog'ladik (4D-rasm), bu mikroskopiya ma'lumotlarini qo'llab-quvvatladi, bu PC-IR780 hatto ROS-induktsiyali sharoitlarda ham hujayralarni qabul qilishda sezilarli farq ko'rsatmadi, PTC IR780 esa uyali aloqada sezilarli o'sishni ko'rsatdi. ROS sabab bo'lgan sharoitlarda davolashda qabul qilish. PTC ning hujayrali qabul qilinishi PTC-M bilan davolashdan keyin hujayralardagi qoldiq Mn ni tekshirish orqali ham aniqlandi. 4E-rasmda ko'rsatilganidek, PTC-M HK-2 hujayralarida konsentratsiyaga bog'liq o'zlashtirilishini ko'rsatdi. Shunday qilib, bu natijalar nanomitsellalarning yaxshilangan ichkilashuvini va nanomisellalarning ROS vositachiligida demontaj qilinishi tufayli hujayralar ichida tezlashtirilgan chiqarilishini umumlashtiradi.

PTC-M ning hujayra darajasidagi oksidlovchi stress sharoitlariga ta'sirini o'rganish uchun HK-2 hujayralarida in vitro tadqiqotlar o'tkazdik. HK-2 xujayralari ROS vakili H2O2 bilan rag'batlantirildi (5A-rasm). H2O2 gem oksigenazini (HO) -1 ifodasini kuchaytirdi, bu PTC-M bilan birgalikda davolash bilan yaxshilandi (5A-rasm). Hujayra ichidagi ROS o'zgarishi naqshini tekshirish uchun Te 2',7'-diklorodihidrofuoressein diasetat (DCF DA) tahlili o'tkazildi. H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan HK{15}} hujayralari yuqori floresans intensivligini ko'rsatdi, ammo PTC-M bilan birgalikda davolashdan so'ng, floresans intensivligi kamaydi (5B-rasm). Te BAX/BCL-2 nisbati H2O2 bilan davolash orqali oshirildi, u ham PTC-M bilan davolash orqali tiklandi, bu apoptozdan himoyalanishdan dalolat beradi (5C-rasm). H2O2 bilan ishlov berilgan HK-2 hujayralari PTC-M tomonidan oldini olingan, aneksin V+/PI- bo'yalishining sezilarli progressiv o'sishini ko'rsatdi (5D-rasm). H2O{33}}induktsiyalangan ERK, JNK va p38 fosforillanishi ham PTC-M bilan birgalikda davolash orqali bostirildi, ammo fosforlangan P38 ning sezilarli kamayishi kuzatilmadi (5C-rasm). Ushbu ma'lumotlar PTC-M buyrak tubulali epiteliya hujayralarida ROS-induktsiya qilingan apoptotik jarayonlarni bostirishini ko'rsatadi.