Iridoid va asiklik monoterpen glikozidlari, kankanozidlar L, M, N, O va P Cistanche Tubulosa dan
Mar 06, 2022
Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) - Shimoliy Afrika, Arabiston va Osiyo mamlakatlarida tarqalgan Salvadora yoki Calotropis turlarining ildizlarida o'sadigan ko'p yillik parazit o'simlik.1) Bu o'simlikning poyasi (yaponchada Kanka-nikujuyou) an'anaviy ravishda iktidarsizlik, bepushtlik, lumbago va tana zaifligini davolashda, shuningdek, qon aylanishini rag'batlantiruvchi vosita sifatida ishlatiladi. Yigirma to'rtta feniletanoid aminoglikozidlar, shu jumladan H1, H2, I, J1, J2, K1 va K2 kankanozidlar va Cistanchetubulosa yangi poyalaridan ikkita asillangan oligosidlar.5,6) Bundan tashqari, asosiyfeniletanoid glikozidlar,echinakozid, akteozid,va izoakteozid25-100 mg/kg dozada D-galaktozamin (D-GalN)/lipopolisakkarid taʼsirida sichqonlarning shikastlangan jigarida sarum aspartat aminotransferaza (sAST) va alanin aminotransferaza (sALT) darajalarining oshishiga toʻsqinlik qilishi aniqlandi. po).Gepatoprotektiv faoliyat uchun feniletanoid glikozidlarning strukturaviy talablari ham aniqlandi.5) Cistanchetubulosa yangi poyalari tarkibidagi tarkibiy qismlar bo'yicha davom etayotgan tadqiqotda biz yana o'n bitta iridoid glikozidni, shu jumladan kankanozidlarni L (1), M (2) ajratib oldik. va N (3), kankanosidlar O (4) va P (5), uchta fenilpropanoidlar va to'rtta lignanlarni o'z ichiga olgan etti asiklik monoterpen glikozidlari. Ushbu maqola beshta yangi birikmaning (1-5) izolatsiyasi va tuzilishini aniqlash bilan bog'liq.
C. tubulosa ning yangi poyalari (Xitoyning Sintszyan provinsiyasi, Urumuchi shahrida etishtirilgan) metanol ekstrakti (yangi poyasidan 8,36 foiz) olish uchun qayta oqim ostida metanol bilan ekstraksiya qilindi. Metanol ekstraktidan H2O- va MeOH bilan ajratilgan fraktsiyalar (mos ravishda 5,63 foiz va 2,73 foiz) Diaion HP-20 ustunli xromatografiyasi (H2O→MeOH) orqali yuqorida tavsiflanganidek olingan.5) MeOH-elyutlangan fraksiya SiO2 va ODS ustunli xromatografiyaga va nihoyat kankanosidlarni L (1, 0.0026 foiz), M (2, 0.{{ berish uchun HPLC oʻtkaziladi. 27}}001 foiz ), N (3, 0.00{{60}}7 foiz ) , O (4, 0.0{{90}}2{{105}} foiz ) va P (5, {{118} }.0002 foiz ), 6-deoksikatalpol3,7) (6, 0.197 foiz), bartsioside3,7) (7, 0.0583 foiz ), glurozid3,7) (8, 0.0443 foiz), kankanoisid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 foiz ), mussaenosid kislotasi3,7) (10, 0,0056 foiz), 8- epilogan kislotasi3,8) (11, 0,0023 foiz), 8-epideoksilogan kislotasi3,7) (12, 0,0004 foiz), genipozid kislotasi3,7) (13, 0,0040) foiz ), kankanoside E3) (14, 0,0026 foiz ), (2E,6Z)-8-b D-glyukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadien kislotasi3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 foiz), (2E,6E){{95 }},7-dimetil-8-gidroksioktadien-1-il-ObD-glu copyranosid10) (16, 0,0082 foiz), 8-gidroksigeraniol 8-Ob-D-glukopiranozid11 ) (17, 0,0044 foiz), betulalbusid A12) (18, 0,0004 foiz), ignabargli ferin13) (19, 0,0002 foiz), syringin13) (20, 0,0015 foiz), sinapik aldegid 4-,co12side (Opy128) 0,0001 foiz ), ( )-pinoresinol ObD-glyukopiranozid4,8,15) (22, 0,0010 foiz), eukommin A16) (23, 0,0002 foiz), izoekommin A17) (24, 0,0010 foiz) Ob-ring ) va (arinol) glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 foiz).
Cistanche tubulosajinsiy funktsiyani yaxshilash
Kankanosidlarning tuzilmalari L (1), M (2) va N (3)
Kankanoside L (1) salbiy optik aylanishga ega bo'lgan oq kukun shaklida olingan (MeOH da [a]D 26 45,7). Uning IQ spektri 3433 va 1{{20}}80 sm 1 da glikozidlar qismidan dalolat beruvchi kuchli so‘rilish zonasini ko‘rsatdi. Ijobiy va manfiy ion rejimlarida 1 marta tez atom bombardimon qilish (FAB)-MS mos ravishda m/z 371 [M Na] va 347 [MH] da kvazimolekulyar ion cho'qqilarini ko'rsatdi va molekulyar formula C15H24O9 sifatida aniqlandi. yuqori aniqlikdagi FAB-MS o'lchovi bilan. 1 ning 1,0 M xlorid kislotasi (HCl) bilan kislotali gidrolizi D-glyukozani ajratib oldi, bu optik aylanish detektori yordamida HPLC tahlili orqali aniqlandi. 3—6) 1 ning 1 H- va 13C-NMR spektrlari (CD3OD, 1-jadval, 2), turli NMR tajribalari bilan tayinlangan,19) to'rtta metilen [d 1.43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1.73 (1H, br dd, J) uchun belgilanishi mumkin bo'lgan signallarni ko'rsatdi. taxminan 12, 14 Gts, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= taxminan 8, 14 Gts, 6b-H), 3,50 ( 1H, gdd, J 2,4, 12,5, 13,0 Gts, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=taxminan 5, 13 Gts, 3b-H), 3,78, 4,12 (har biri 1H, ikkalasi ham d, J 13,1 Gts, 10-H2)], ikkita metin [d 2,15 (1H, dd, J 7,2, 8,9 Gts, 9-H) va 2,23 (1H, m, 5- H)] va atsetal guruhi [d 4,81 (1H, d, J 8,9 Gts, 1-H)] b-glyukopiranosil qismi bilan birga [d 4,70 (d, J 7,9 Gts, 1 -) H)]. 1-rasmda ko'rsatilganidek, 1-da 1 H-1H korrelyatsiya spektroskopiyasi (1 H-1 H COSY) tajribasi qalin chiziqlar bilan yozilgan qisman tuzilmalar mavjudligini ko'rsatdi. 1-dagi geteroyadroviy koʻp bogʻlanish korrelyatsiyasi (HMBC) tajribasida quyidagi protonlar va uglerodlar oʻrtasida uzoq masofali korrelyatsiyalar kuzatildi (1-H va 3-C, 8-C; {{ 124}}H va 1-C; 7-H va 8-C, 10-C; 9-H va 8-C; {{131} }}H2 va 7-C, 8-C; 1-H va 1-C) 1-rasmda koʻrsatilganidek. Keyin 1 ning nisbiy stereostrukturasi fazaga sezgir yadro bilan tavsiflangan. Quyidagi proton juftlari (1-H va 3a H; 3a-H va 4a-H; 3b-H va 4b-H; 4b-H) oʻrtasidagi NOE korrelyatsiyasini koʻrsatadigan Overhauser takomillashtirish spektroskopiyasi (fazaga sezgir NOESY) tajribasi va 5-H, 9-H; 5- H va 6b-H, 9-H; 6a-H va 7-H; 7-H va 10-H2), 1-rasmda ko'rsatilganidek. 1 ning 1 H- va 13C-NMR spektrlari asosiy iridoid tarkibiy qismi 6-deoksikatalpol (6) spektrlari bilan bir-biriga qo'shilishi mumkin edi, bundan kelib chiqadigan signallar bundan mustasno. to'yingan d-laktol qismiga. Nihoyat, 6 ning gidrogenatsiyasi 1 ni berdi, shuning uchun kankanozid L ning stereostrukturasi 3,4- dihidro{179}}deoksikatalpol (1) ekanligi aniqlandi.
Kankanoside M (2) salbiy optik aylanishga ega bo'lgan oq kukun shaklida olingan (MeOH da [a]D 26 18,7). 2 ta IR spektri gidroksil, d-lakton, olefin va efir qismlariga bog'liq bo'lgan 3433, 1736, 1655 va 1{23}}76 sm 1 dagi yutilish zonalarini ko'rsatdi. 2 ning musbat ionli FAB-MS spektri m/z 353 [M Na] da kvazimolekulyar ion cho'qqisini ko'rsatdi va molekulyar formula yuqori aniqlikdagi ijobiy ion FAB-MS o'lchovi bilan C15H22O8 sifatida aniqlandi. 1,0 M HCl ajralib chiqqan D-glyukoza bilan 2 kislota gidrolizi. 2 ning 1 H- va 13C NMR spektrlari (CD3OD, 1, 2-jadvallar) to'rtta metilenga tayinlanadigan signallarni ko'rsatdi [d 1,66, 2,11 (har biri 1H, ikkala m, 4-H2), 2,15, 2,75 (har biri 1H). , ikkalasi ham m, 6-H2), 4,29 (1H, gdd, J 2,8, 8,4, 14,3 Gts, 3b-H), 4,32, 4,51 (har biri 1H, ikkalasi ham d, J 13,1 Gts, 10- H2), 4.35 (1H, ddd, J 3.1, 6.7, 14.3 Gts, 3a-H)], ikkita metin [d 2.97 (1H, m, 5-H), 3.82 (1H, br s, {{ 84}}H)], olefin [d 5.94 (1H, m, 7-H)] va toʻyingan lakton guruhi (d C 174.9) bilan birga bD-glyukopiranosil qismi [d 4.32 (1H, d) , J 7,9 Hz, 1 -H)]. 1-rasmda ko'rsatilganidek, 2-dagi 1 H–1H COZY tajribasi qalin chiziqlar bilan yozilgan qisman tuzilmalar mavjudligini ko'rsatdi va HMBC tajribasida quyidagi proton va uglerod juftlari o'rtasida uzoq masofali korrelyatsiyalar kuzatildi ({{105) }}H va 1-C; 7-H va 9-C; 9-H va 1-C, 8-C; {{112} }H2 va 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H va 10-C). 2 ning nisbiy stereostrukturasi fazaga sezgir NOESY tajribasi bilan tavsiflangan bo'lib, u quyidagi proton juftlari (3a-H va 4a-H; 3b-H va 4b-H; 4b-H va 5- o'rtasidagi NOE korrelyatsiyasini ko'rsatdi. H;5-H va 6b-H, 9-H) 1-rasmda ko'rsatilgandek.
Kankanoside N (3) manfiy optik aylanish bilan oq kukun sifatida ajratilgan (MeOH da [a]D 25 24,6). 3 ning musbat ionli FAB-MS da m/z 371 [M Na] da kvazimolekulyar ion tepaligi kuzatildi. C16H28O8 molekulyar formulasi yuqori aniqlikdagi FAB-MS o'lchovi bilan aniqlandi. 1.0 M HCl ajralib chiqqan D-glyukoza bilan 3 kislota gidrolizi. 1 H- va 13C-NMR ma'lumotlari (CD3OD, 1, 2-jadvallar) metilga tayinlanishi mumkin bo'lgan signallarni ko'rsatdi [d 1.07 (3H, d, J 7,2 Gts, 10-H3)] , to'rtta metilen {d 1,37, 1,87 (har biri 1H, ikkalasi ham m, 7-H2), 1,65, 1,81 (har biri 1H, ikkalasi ham m, 6-H2), [3,65 (1H, dd, J 9,1) , 9,8 Gts), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Gts), 11-H2] va [3,70 (1H, dd, J 3,3, 12,0 Gts), 3,88 (1H, m), {{ 71}}H2]}, toʻrt metin [d 1.69 (1H, m, 4-H), 1.75 (1H, m, 9-H), 2.06 (1H, m, 8- H), 2.16 (1H, m, 5-H)] va yarimasetal guruhi [d 4.67 (1H, d, J 7.4 Hz, 1-H)] bilan birga bD-glyukopiranosil qismi [ d 4,26 (1H, d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. 3 ning iridoid tuzilishi 1 H–1 H COZY va HMBC tajribalari bilan aniqlandi va nisbiy stereostruktura 1-rasmda ko'rsatilganidek, fazaga sezgir NOESY tajribasi bilan tavsiflandi. Shunday qilib, 3 ning sterostrukturasi ko'rsatilganidek aniqlandi.
Kankanosidlarning tuzilmalari O (4) va P (5)
Kankanosidlar O (4) va P (5), C16H26O8, shuningdek, salbiy optik aylanishlarga ega bo'lgan oq kukunlar sifatida olingan (4: [a]D 23 26,1; 5: [a]D 21 32,7 ham MeOH da). 4 va 5 IR spektrlari 4 uchun 3433, 1696, 1647 va 1{69}}76 sm 1 va 3434, 1701, 1647 va 1{{96} da yutilish zonalarini ko'rsatdi. }76 sm 1 uchun 5, glikozidik, karboksil va olefin funktsiyalari bilan bog'liq. Ularning UV spektrlari 217 nm da umumiy yutilish maksimalini ko'rsatdi, bu ikkalasida b-to'yinmagan karboksilik kislota qismi mavjudligini ko'rsatdi. 4 va 5 dan ajralib chiqqan D-glyukozaning kislotali gidrolizi, b glyukozidaza bilan fermentativ gidrolizi natijasida 4 va 5 (2E,6E)-8-gidroksi-2,6-dimetil{{39} hosil qildi. }},{{4{115}}}oktadesenik kislota20) (4a) va (2E,6E)-8-gidroksi-3,7- dimetil{{ 48}}, 6-oktadesenik kislota21) (5a), mos ravishda. 4 ning 1 H- va 13C-NMR ma'lumotlari (CD3OD, 2, 3-jadvallar) ikkita metilga tayinlanadigan signallarni ko'rsatdi [d 1,71 (3H, br s, 10- H3), 1,81 (3H, d, J 1,0 Hz). , 9-H3)], uchta metilen {d 2.19 (2H, br t, J taxminan 7 Hz, 5-H2), 2.36 (2H, m, 4-H2), [ 4.24 (1H, dd, J 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J 6.2, 12.0 Hz), 8-H2]} va ikkita trialmashtirilgan olefinlar [d 5.41 (1H, gdd, J 1.2, 6,2, 7,6 Gts, 7- H), 6,75 (1H, tq, J 7,2, 1,0 Gts, 3-H)] bilan birga bD glyukopiranosil qismi [d 4,34 (d, J 7,8 Gts, 1) -H)]. 13C-NMR 4 spektridagi uglerod signallarini 4a bilan taqqoslaganda, 8- pozitsiyasida glikozillanish siljishi kuzatildi (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). 2-rasmda ko'rsatilganidek, glyukozid bog'lanishining holati HMBC tajribalari bilan ham tasdiqlangan. Natijada, 4 ning stereostrukturasi (2E,6E)-8-bD-glyukopiranosiloksi-2,{{{ 143}}dimetil{144}},6-oktadesenik kislota. Boshqa tomondan, 5 ning 1 H- va 13C-NMR ma'lumotlari (CD3OD, 2, 3-jadvallar) (2E,6E)-8-gidroksi-3,{{158} mavjudligini ko'rsatdi. }dimetil-2,6-oktadesenik kislota qismi [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9-H3), 2,24 ( 2H, m, 4-H2), 2.27 (2H, m, 5-H2), 4.05, 4.20 (har biri 1H, ikkalasi ham br d, J taxminan 12 Gts, 8-H2) , 5.47 (1H, tq, J 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5.67 (1H, br s, 1-H)] bD-glyukopiranosil qismi bilan birga [d 4.23 (d, J) 7,7 Hz, 1 -H)]. 5-dagi bD-glyukopiranosil qismining ulanishi 2-rasmda ko'rsatilganidek, HMBC tajribalari asosida aniqlandi. Bundan tashqari, 8-pozitsiyadagi signallar uchun odatiy glikozillanish siljishi kuzatildi (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). Yuqorida qayd etilgan dalillar asosida 5 ning stereostrukturasi (2E,6E)-8-bD-glyukopiranosiloksi-3,7-dimetil-2,{ {230}}okta dienoik kislota.
L929 hujayralarida o'simta nekrozi faktor-a (TNF-a) tomonidan qo'zg'atilgan sitotoksiklikka tarkibiy qismlarning ta'siri
TNF-a hujayra apoptozini induktsiya qilish orqali turli organlar shikastlanishiga vositachilik qilishi ma'lum. Jigar holatida TNF-a ning biologik ta'siri jigar toksinlari, ishemiya/reperfuzion, virusli gepatit va alkogol ta'sirida jigar shikastlanishiga aloqador bo'lgan.22—24) Shuning uchun TNF-a muhim hisoblanadi. Yallig'lanishga qarshi va gepatoprotektorlarni kashf qilish maqsadi. Yuqorida qayd etilgan kontseptsiya asosida biz TNF-a-sezgir hujayra liniyasi bo'lgan L929 hujayralarida TNF-a-induktsiyali hujayra o'limida tabiiy mahsulotlardan himoya tarkibiy qismlarini tekshirdik. Piper Chaba, 26—29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33—35) va Sapindus rarak, 36—38) TNF-a ning qoʻzgʻatuvchi taʼsirida namoyon boʻlishi aniqlandi. -L929 hujayralarida induktsiya qilingan sitotoksiklik. C. tubulosa ning feniletanoid tarkibiy qismlari (masalan, echinacoside, acteosid va isoacteosid, va boshqalar) 5) ham bu sitotoksiklikni inhibe qilganligi sababli, biz 4-jadvalda ko'rsatilganidek, iridoid, fenilpropanoid va lignan tarkibiy qismlarini qo'shimcha tekshirdik. Natijada, kankanoside. (9, inhibisyon: 100 mMda 16,3 2.0 foiz), mussaenosid kislotasi (10, 44,7 8,7 foiz), 8-epiloganik kislota (11, 10,7 0,4 foiz), 8-gidroksigeraniol 8-ObD-glyukopiranozid (17, 21,3 2,4 foiz) va ()-pinoresinol ObD-glukopiranozid (22, 22,3 1,6 foiz) faollikni ko'rsatishi aniqlandi. Ularning faoliyati echinakozid (IC50 31,1 mM), akteozid (17,8 mM) va izoaseteozid (22,7 mM) dan zaifroq bo'lsa-da, asosiy feniletanoid tarkibiy qismlari.5)
Eksperimental
Spektral va fizik ma'lumotlarni olish uchun quyidagi asboblar ishlatilgan: maxsus aylanishlar, Horiba SEPA-300 raqamli polarimetri (l 5 sm); UV spektrlari, Shimadzu UV-1600 spektrometri; IQ spektrlari, Shimadzu FTIR-8100 spektrometri; Ichki standart sifatida tetrametilsilanli 1 H- va 13C-NMR spektrlari, JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MGts) va JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) spektrometrlari; FAB-MS va yuqori aniqlikdagi FAB-MS, JEOL JMS-SX 102A massa spektrometri; HPLC detektori, Shimadzu RID-10sinishi indeksi, Shimadzu SPD-10A UV–VIS va Shodex OR-2 optik aylanish detektorlari. HPLC ustuni, Cosmosil 5C{25}}MS-II va pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) va (250 20 mm id) ustunlari mos ravishda analitik va tayyorgarlik maqsadlarida ishlatilgan.
Xromatografiya uchun quyidagi eksperimental sharoitlardan foydalanilgan: normal fazali silikagel ustunli xromatografiya (CC), silikagel 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63—210 toʻr, sferik, neytral); teskari fazali silikagel CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) va Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100—200 mesh); normal fazali TLC, silikagel 60F254 (Merck, 0,25 mm) bilan oldindan qoplangan TLC plitalari; teskari fazali TLC, silikagel RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm) bilan oldindan qoplangan TLC plitalari; teskari fazali HPTLC, silikagelli RP{23}} WF254S (Merck, 0,25 mm) bilan oldindan qoplangan TLC plitalari, aniqlash 1 foiz Ce(SO4)2–10 foiz suvli H2SO4, so‘ngra isitish orqali purkash orqali erishildi. .
O'simlik moddasi
Ushbu element oldingi hisobotda tasvirlangan.
Ekstraktsiya va izolyatsiya
C. tubulosa ning yangi poyalari (2,98 kg) nozik kesilgan va 3 soat davomida reflyuks ostida metanol bilan uch marta ekstrakte qilingan. Erituvchining past bosim ostida bug'lanishi metanolik ekstraktni (249,1 g, 8,36 foiz) beradi. Metanol ekstrakti Diaion HP{7}} CC (5.0 kg, H2O→MeOH) ga o'tkazilib, H2O- va MeOH bilan ajratilgan fraktsiyalar (167,84 g, 5,63 foiz va 81,21 g, 2,73 foiz) hosil bo'ldi. mos ravishda). MeOH bilan ajratilgan fraksiya (61.00 g) normal fazali silikagel CC [1,8 kg, CHCl3- MeOH-H2O (15 : 3 : 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] yetti kasr [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0,89 g), 4 (10,69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) va 7 (4,6{{104}} g)], avval aytib o'tilganidek.5) 1-qism (1,12 g) teskari fazali silikagel CC [55 g, MeOH-H2O (4) bilan ajratilgan. 0 : 60, v/v)→MeOH] beshta kasrni berish uchun [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267.0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{80}} (31{{ 156}},9 mg) va 1-5 (91,4 mg)]. Fraksiya 1-1 (132,8 mg) HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN-1 foiz suvli AcOH (1{{166}) yordamida yanada tozalandi. } : 90, v/v)] kankanosid M (2, 2,8 mg, 0.{{203}}{{22{{24{{248) }}}}}}01 foiz ), bartsiozid (7, 5,2 mg, 0.0002 foiz), sinapik aldegid {{1{{295} }}6}}O- bD-glyukopiranozid (21, 1,4 mg, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 foiz). Fraksiya 1-2 (267.{{350}} mg) HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 foiz suvli AcOH (7 : 93,) yordamida yanada tozalandi. v/v)] berish (2E,6E)-3,7-dimetil-8-gidroksioktadien{{13{{360}}}}il-O- bD -glyukopiranozid (16, 15,8 mg, {{370}}.{{4{411}}6}}007 foiz), 8-gidroksigeraniol 8-ObD glyukopiranozid (17, 5,2 mg, 0,0002 foiz), ( )-pinoresinol ObD-glyukopira nozid (22, 22,0 mg, 0,0010 foiz ), eucommin A (23, 5,0 mg, 0,0002 foiz), iskamin A (24, 21,3 mg, 0,0010 foiz) va ()-syringaresinol ObD-glyukopiya ranozid (25, 98,0 mg, 0,0044 foiz). Fraksiya 2 (9,56 g) teskari fazali silikagel CC [400 g, MeOH–H2O (10: 90, v/v)→MeOH→aseton] bilan ajratilib, beshta fraksiya [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g) va 2-5 (31,9 mg) ], avval tavsiflanganidek.5) Fraksiya 2-2 (500,0 mg) HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 foiz suvli AcOH (5 : 95, v/v) ga duchor qilindi. )] kankanosid L (1, 6,6 mg, 0,0026 foiz ) va 6-deoksikatalpol (6, 455,5 mg, 0,182 foiz) hosil bo‘ladi. 2-3 (1,00 g) fraksiya HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 foizli suvli AcOH (7 : 93, v/v)] ga o‘tkazildi va yetti fraksiya [Fr] hosil qilindi. . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [ 7 (380,6 mg) , 0,0581 foiz )], 2-3-6 [ glurozid (8, 285,1 mg, 0,0435 foiz )] va 2-3-7 (84,9 mg)]. Fraksiya 2-3-4 (106,6 mg) HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN–1 foizli suvli AcOH (5: 95, v/v)] yordamida yanada tozalanib, salidrosid bilan birga 6 (68,4 mg, 0,0134 foiz) hosil qildi5) (13,7 mg, 0,0027 foiz). Fraksiya 2-4 (1,16 g) HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 foiz suvli AcOH (15:85, v/v) va Cosmosil pNAP, CH3CN-1 foiz suvli AcOH (10 : 90 yoki 15: 85, v/v)] kankanosidlarni N (3, 15,6 mg, 0,0007 foiz), O (4, 44,1 mg, 0,0020 foiz) va P (5, 4,2 mg, 0,0002) hosil qiladi. foiz), 6 (24,0 mg, 0,0011 foiz), 8 (17,7 mg, 0,0008 foiz), kankanoisid A (9, 22,3 mg, 0,0010 foiz), 8-epideoksilogan kislotasi (12, 8,1 mg, 0,00), kankanosid E (14, 58,1 mg, 0,0026 foiz), (2E,6Z)-8-bD-glyukopiyali ranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienik kislota (15, 31,0 mg, 0,0014 foiz), 16 (168,6 mg, 0,0075 foiz), 17 (94,3 mg, 0,0042 foiz), betulalbusid A (18, 8,1 mg, 0,0004 foiz), ignabargli (19,03,0 foiz) ) va shprisin (20, 33,9 mg, 0,0015 foiz). Fraksiya 4 (10,69 g) teskari fazali silikagel CC [500 g, MeOH–H2O (30 : 70, v/v)→MeOH→aseton] bilan ajratilib, to‘rt fraksiya [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g) va 4-4 (792,8 mg)], avvalroq tasvirlanganidek.5) fraksiya 4-1 (500,0 mg) HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 foizli suvli AcOH (10 : 90, v/v)] bilan tozalanib, mussaenosid kislotasi (10, 39,1) hosil bo‘ldi. mg, 0,0031 foiz ) va genipozid kislotasi (13, 51,2 mg, 0,0040 foiz). 5 fraksiyasi (8,84 g) teskari fazali silikagel CC [400 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70, v/v)→MeOH→aseton] bilan ajratilib, yetti fraksiya [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) va 5-7 (130,1 mg)], avvalroq tavsiflanganidek.5) 5-1 fraksiyasi (870,2 mg) HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN orqali yanada tozalandi. –1 foiz suvli AcOH (5 : 95, v/v)] dan 10 (55,3 mg, 0,0025 foiz) va 8-epilogan kislota (11, 51,5 mg, 0,0023 foiz) hosil bo‘ladi.
Kankanoside L (1): oq kukun, [a]D 26 45,7 (c 0,48, MeOH). Yuqori aniqlikdagi ijobiy ionli FAB-MS: C15H24O9Na [M Na] uchun hisoblangan 371.1318; Topildi 371.1309. IQ (KBr, sm 1): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MGts, CD3OD) d: 1-jadvalda keltirilgan. 13C-NMR (150 MGts, CD3OD) d C: 2-jadvalda berilgan. Ijobiy- ion FAB-MS m/z: 371 [M Na]. Salbiy-ion FAB-MS m/z: 347 [MH].
Kankanoside M (2): oq kukun, [a]D 26 18.7 (c 0.11, MeOH). Yuqori aniqlikdagi ijobiy ionli FAB-MS: C15H22O8Na [M Na] uchun hisoblangan 353.1212; Topildi 353.1208. IQ (KBr, sm 1): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MGts, CD3OD) d: 1-jadvalda keltirilgan. 13C-NMR (150 MGts, CD3OD) d C: jadvalda keltirilgan. 2. Musbat-ion FAB-MS m/z: 353 [M Na].
Kankanoside N (3): oq kukun, [a]D 25 24,6 (c 1.00, MeOH). Yuqori aniqlikdagi ijobiy ionli FAB-MS: C16H28O8Na [M Na] uchun hisoblangan 371.1682; 371.1686 topildi. IQ (KBr, sm 1): 3415, 2874, 1076, 1028. 1H- NMR (600 MHz, CD3OD) d: 1-jadvalda keltirilgan. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: 2-jadvalda keltirilgan. Musbat-ion FAB-MS m/z: 371 [M Na].
Kankanoside O (4): oq kukun, [a]D 23 26.1 (c 2.30, MeOH). Yuqori aniqlikdagi ijobiy ionli FAB-MS: C16H26O8Na [M Na] uchun hisoblangan 369.1525; Topildi 369.1528. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4.04). IR (KBr, sm 1): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: 3-jadvalda keltirilgan. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: jadvalda keltirilgan. 2. Pozitiv ion FAB-MS m/z: 369 [M Na].
Kankanoside P (5): oq kukun, [a]D 21 32.7 (c 0.18, MeOH). Yuqori aniqlikdagi ijobiy ionli FAB-MS: C16H26O8Na [M Na] uchun hisoblangan 369.1525; 369.1520 topildi. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4.08). IR (KBr, sm 1): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MGts, CD3OD) d: 3-jadvalda keltirilgan. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: jadvalda keltirilgan. 2. Pozitiv ion FAB-MS m/z: 369 [M Na].
Kankanosidlarning kislotali gidrolizi L—P (1—5): 1.0 M HCl (1.0 ml) dagi 1—5 (har biri 1.0 mg) eritmalari 3 soat davomida 8{27}} daraja isitiladi. Sovutgandan so'ng, reaksiya aralashmasi Amberlite IRA-400 (OH shakli) bilan neytrallashtirildi va qatronlar filtrlash orqali olib tashlandi. Past bosim ostida erituvchi chiqarilgandan so'ng, qoldiq Sep-Pak C18 kartrij ustuni (H2O→MeOH) bilan ajratildi. H2O bilan ajratilgan fraksiya quyidagi sharoitlarda HPLC tahlilidan o‘tkazildi: HPLC ustuni, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokio, Yaponiya); aniqlash, optik aylanish [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokio, Yaponiya); mobil faza, CH3CN–H2O (85: 15, v/v); teng tezlik 0,8 ml/min]. 1-5 gacha bo'lgan H2O bilan ajratilgan fraktsiyalarda mavjud bo'lgan D-glyukoza identifikatsiyasi ularning saqlanish vaqtini va optik aylanishini haqiqiy namuna bilan solishtirish orqali amalga oshirildi [tR 17,9 min (ijobiy)].
{0}}Deoksikatalpol (6) 6 (12.0 mg) suspenziya va 10% palladiy uglerod (5.{14}} mg) ni gidrogenlash MeOH (2,0 ml) xona haroratida H2 atmosferasida 2 soat davomida aralashtiriladi. Katalizator filtrdan o'tkazildi va filtrat 1 (12,0 mg, miqdor) hosil qilish uchun pasaytirilgan bosim ostida kondensatsiya qilindi.
Kankanosidlar O (4) va P (5) ning b-glyukozidaza bilan fermentativ gidrolizi H2O (1,5 ml) dagi 4 (8,{5}} mg) eritmasiga b-glyukozidaza (4,7 mg, bodomdan, Oriental Yeast Co., Tokio, Yaponiya) va eritma 37 daraja 24 soat davomida aralashtiriladi. Reaksiya EtOH (5.0 ml) qoʻshilishi bilan soʻndiriladi, aralash pasaytirilgan bosim ostida kondensatsiyalanadi. Qoldiq EtOAc bilan ekstraksiya qilindi va erituvchining bug'lanishi (2E,6E)-8-gidroksi-2,{{20}}dimetil-2,{{22} }oktadesenik kislota20) (4a, 3,9 mg, 92 foiz). Shunga o'xshash protsedura orqali (2E,6E)-8-gidroksi-3,7-dimetil-2,6-oktadesenik kislota21) (5a, 0,9 mg, 94 foiz) ) kankanosid P (5, 1,8 mg) dan olingan.
Bioassay usuli L929 hujayralarida TNF-a-induktsiyali sitotoksiklikka inhibitiv ta'siri oldingi maqolada tasvirlangan usul bilan tekshirildi.5)
Statistika Qiymatlar SEM bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) va Dunnett testidan so'ng statistik tahlil uchun foydalanilgan. 0.05 dan kichik ehtimollik (p) qiymatlari muhim deb topildi.
cistanche o'ti
