Buyrak epitelial maqsadli mitoxondrial transkripsiya faktor A etishmovchiligi og'ir kistoz kasalligi bilan bog'liq bo'lgan progressiv mitoxondriyal depletsiyaga olib keladi.
Mar 23, 2022
Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Ken Ishii, Hanako Kobayashi, Kensei Taguchi va boshqalar.
KIRISH
Mitoxondriyal (mt) disfunktsiya umumiy buyrak kasalliklarining yaxshi tan olingan patologik xususiyati bo'lib, hujayra shikastlanishi, yallig'lanish va fibrozni qo'zg'atishi mumkin. Buyrakdagi quvurli epiteliya hujayralari oksidlovchi fosforillanish (OXPHOS) natijasida hosil bo'lgan adenozin trifosfatga (ATP) juda bog'liq, chunki ular ko'p energiya sarflaydigan epiteliya tashish funktsiyalarini bajaradi. Shuning uchun samarali mt ATP ishlab chiqarishni ta'minlash normal buyrak funktsiyasi va tizimli elektrolitlar gomeostazi uchun juda muhimdir. Bundan tashqari, so'nggi dalillar mitoxondriyalarning genlarni tartibga solish, hujayra signalizatsiyasi va vositachi metabolitlar va reaktiv kislorod turlarini (ROS) hosil qilish orqali hujayra differentsiatsiyasida katta rol o'ynashini ko'rsatadi. umumiy buyrak kasalliklari yaxshi tushunilmagan.
Buyrak gomeostazasi va patogenezidagi mt funktsiyasini o'rganish uchun bizmaqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A(TFAM). TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)mt funktsiyasi, mt nusxasi sonining saqlanishi va mt DNKning strukturaviy barqarorligi uchun muhim bo'lgan yadroviy kodlangan omil, chunki u mt genomining replikatsiyasi va transkripsiyasini promotorli DNK orqali tartibga soladi.3 Sutemizuvchilar mt DNKsi 37 genni o'z ichiga oladi, ulardan 13 tasi kodlaydi. nafas olish zanjiri kompleksining oqsil bo'linmalari, 22 ta transfer RNK va 2 ribosoma RNKni kodlaydi. Shunday qilib,TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)mitoxondrial kodlangan sitoxrom b (MT-CYB), mitoxondriyal kodlangan sitoxrom c oksidaz subbirligi 1 (MT-CO1) va mitoxondrial kodlangan membrana subunitazasi kabi genlarning transkripsiyasi orqali mt elektron tashish va ATP sintezini tartibga solishda bevosita ishtirok etadi. 6 (MT-ATP6).3sizTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A), hujayralar OXPHOS orqali ATP ishlab chiqarish qobiliyatini yo'qotadi, sezilarli miqdorda mt ROS hosil qila olmaydi va mitoxondriyalar asta-sekin kamayib boradi.-Genetik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki,TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)normal embriogenez uchun zarur, chunki global homozigotTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)inaktivatsiya embrionning 10,5 kunigacha intrauterin o'limga olib keldi, heterozigota etishmovchiligi, garchi u mt nusxalar sonini -40 foizga kamaytirsa va nafas olish zanjiri etishmovchiligiga olib kelgan bo'lsa-da, embrionning o'limiga olib kelmadi. Shunday qilib, genetik maqsadliTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A) Hujayra differentsiatsiyasi va to'qimalar gomeostazida progressiv mt disfunktsiyasining rolini o'rganish uchun foydali eksperimental strategiyadir. ning hujayra turiga xos shartli inaktivatsiyasiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)OXPHOS va/yoki mt ROS generatsiyasi hujayraning differentsiatsiyasi, funktsiyasi va normal fiziologiyasi uchun juda muhim ekanligini taklif qildi.-1o
Yadro yoki mt gen mutatsiyalari natijasida yuzaga keladigan birlamchi mt buzilishlari buyrak kasalligi bilan namoyon bo'lishi mumkin, bu ko'pincha tubulointerstitsial shikastlanish yoki izolyatsiya qilingan naycha disfunktsiyasi sifatida namoyon bo'ladi.(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)buyrak kasalligiga olib kelishi haqida xabar berilmagan. Yaqinda, qisqartirildiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)ifoda surunkali buyrak kasalligi bilan bog'langan. tufayli mt yaxlitligini yo'qotishTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)inaktivatsiya sichqonlarda tubulointerstitial kasallik va buyrak etishmovchiligini keltirib chiqardi, bu qisman mt DNK stressidan kelib chiqqan tsiklik GMP-AMP sintaza (cGAS) - interferon genlarining stimulyatori (STING) ga bog'liq yallig'lanish reaktsiyalarining faollashishi bilan bog'liq edi.
Bu erda biz shartli sichqonlar haqida xabar beramizTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A) sinus oculis bilan bog'liq homeobox 2 (SIX2) - ifodalovchi nefron progenitor hujayralarida inaktivatsiya og'ir kist kasalligini rivojlantiradi va yosh balog'atga etmagan sichqonlar kabi buyrak etishmovchiligidan muddatidan oldin nobud bo'ladi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-sichqonlar nefron kamolotidagi nuqsonlar bilan tavsiflanadi, bu mt kamayishi, OXPHOSning pasayishi va glikoliz tomon metabolik siljish bilan bog'liq edi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7-buyrak epiteliysi. Kistik kasallikning og'irligini hisobga olgan holdaTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7-sichqonlar, biz polikistin-1 (Pkd1) yoki sistin-1 (Cys1) mutatsiyalari natijasida kelib chiqqan polikistik buyrak kasalligining (PKD) 2 ta modelini tahlil qildik. autosomal dominant polikistik buyrak kasalligi (ADPKD) bilan og'rigan bemorlarning to'qimalari. Biz buni aniqlaymizTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)Sichqoncha va inson PKD to'qimalarining kistalarida disregulyatsiya qilinadi. Birgalikda olib borilgan tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatadiki, TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)disregulyatsiya va mt yo'qolishi buyrak kistasi kasalliklarining o'ziga xos xususiyati bo'lib, ularning patogenezida muhim rol o'ynashi mumkin.
NATIJALAR
TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)SIX2 avlod hujayralarida inaktivatsiya buyrak etishmovchiligiga olib keladigan og'ir kist kasalligini keltirib chiqaradi
Buyrak epiteliysida mt funktsiyasini tekshirish uchun biz faolsizlantirdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)OLTI2-ekspressiv hujayralar, ular yig'uvchi kanaldan (CD) tashqari barcha nefron segmentlarini keltirib chiqaradi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)Six2 promotorining transkripsiya nazorati ostida yaxshilangan yashil floresan oqsili/Cre rekombinaz sintez oqsilini (eGFP/Cre) ifodalovchi bakterial sun'iy xromosomali transgenik sichqonlar bilan flokslangan allel (la-rasm).TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)eGFP/Cre trans-geni (Six2-eGFP/Cre plus; T fam) uchun flokslangan allel va heterozigotlar bundan buyon Six2-Tfam-/- mutantlar deb ataladi. Oltita2-Tfam-/- sichqonlari kutilgan Mendel nisbatida tug‘ilgan va tug‘ilish vaqtida vizual tekshirish orqali Crelittermate nazoratidan ajratilmagan. Biroq, oltita2- o'rtasidagi tana vaznidagi farqlarTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A){0}}mutantlar va Crelittermate nazorati tug‘ruqdan keyingi kungacha aniq bo‘ldi(P)14(5,7±0,mutantlar uchun 3g va nazorat uchun 7,5±0,3g,n{{11} } har biri, P=0.004; Qo'shimcha jadval S1). Oltita2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A) mutant sichqonlar nazorat guruhiga nisbatan kattalashgan buyraklar bilan tavsiflangan (buyrak/tana vazni nisbati 1,45% ± 0, mutantlar uchun 19 foiz va nazorat uchun 0,60 foiz ±0,02 foiz , har biri n=4, P<0.001; figure="" lb,="" supplementary="" table="" s1)and="" died="" between="" age="" p20="" and="" p30(figure="" lb).="" juvenile="" lethality="" in="" the="" mutant="" cohort="" was="" associated="" with="" renal="" failure="" from="" severe="" cystic="" disease="" with="" blood="" urea="" nitrogen="" levels="" of="" 68.40±5.32="" mg/dl="" for="" mutant="" mice="" versus="" 16.8±2.0mg="" dl="" for="" controls(n="6" and="" 7,="" respectively;=""><0.0001; figure="" lb="" and="" c).="" furthermore,="">TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7- mutantlarda sezilarli albuminuriya rivojlandi (siydik albumin/kreatinin nisbati=362,4 ± 75,18 mg/g, oltita2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)--mutantlar va mos ravishda P14, n=6 va 10 da nazoratlarda 43,58±3,39 mg/g;P;P<0.0001). this="" is="" consistent="" with="" the="" expression="" pattern="" of="" cre="" recombinase="" in="" six2="" nephron="" progenitor="" cells,="" which="" give="" rise="" to="" cap="" mesenchyme-derived="" renal="" tubules="" and="" podocytes.="" in="" contrast="" to="">TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-mutantlar, geterozigotli sichqonlarTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)normal rivojlangan SIX2 progenitor hujayralarining etishmovchiligi unumdor edi va ochiq buyrak kasalligi rivojlanmagan (Qo'shimcha rasm S1).
1-rasm|SIX2 avlod hujayralarida Tfam inaktivatsiyasi og'ir kist kasalligi va buyrak etishmovchiligiga olib keladi.(a) Tfam flokslangan allel ichidagi maqsadli ketma-ketliklarning eksperimental yondashuvini va joylashishini ko'rsatadigan sxema. Littermate nazorati (Cre ) va Six{0}}Tfammice dan ajratilgan umumiy genomik buyrak DNKsining polimeraza zanjiri reaktsiyasi tahlili (P) 7 yoshda; rekombinatsiyalanmaydigan Tfam flokslangan allel 2-lox (2) bilan belgilanadi; 1-lox bo'yicha rekombinatsiyalangan allel, wt bo'yicha yovvoyi turdagi allel; þ yoki - Six2-eGFP/Cre transgenining mavjudligi yoki yo‘qligini bildiradi. (b) Chap panellar, Cre nazorati va Six{7}}Tfam sichqonlaridan olingan buyraklar suratlari 20 yoshda. Buyrak og'irligi (KWs) tana vazniga (BW) foiz sifatida ifodalanadi (n ¼ 4-14). O‘ng panellar, Cre littermate nazorati (co) va Six{11}}Tfam sichqonlarida P7 (n ¼ 7 va 6) yoshidagi qon karbamid azoti (BUN) darajasi va Cre nazorati va oltitasi uchun Kaplan-Mayer omon qolish egri2- {16}}Tfam sichqonlari log-darajali test bilan solishtirilgan (n ¼ 10–13). (c) Cre nazorati va P7 va P29 yoshdagi Six{22}}Tfam sichqonlarining gematoksilin va eozin (H&E) bilan bo'yalgan va silliq mushak aktini uchun immunohistokimyo orqali tahlil qilingan formalin bilan biriktirilgan, kerosin o'rnatilgan buyrak bo'limlarining reprezentativ tasvirlari (ACTA2) va klaster differentsiatsiyasi (CD) antijeni 31. Raqam belgilarida kista tuzilmalari, yulduzchalarda esa glomerullar tasvirlangan. Butun buyrak kesmalari uchun ¼ 1 mm shtrixlar, yuqori quvvatli H&E tasvirlari uchun 100 mm va IHC tasvirlari uchun 50 mm. Ma'lumotlar o'rtacha SEM sifatida ifodalangan va 2-tailed Student's t-testi bilan tahlil qilingan. ***P <0,001. ushbu="" rasmni="" ko'rishni="" optimallashtirish="" uchun="" ushbu="" maqolaning="" onlayn="" versiyasiga="">www.kidney-international.org.
cistanche erkaklar foydalari
Oltita tahlili2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-sichqonchalar, ular ham ROSA26-ACTB-tdTomato,-eGFP Cre reporter allelini ifodalaydi, bu erda Six2-mT/mG deb ataladi;TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7 sichqonchalar, bu koʻpchilik kistli tuzilmalar ichida ekanligini koʻrsatadiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-buyraklar (qo'shimcha rasm S3). Ushbu topilmalar oltita2-da fosforlangan hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinaz (p-ERK) va -katenin darajalarining ortishi bilan mos keladi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- buyrak to'qimasi (Qo'shimcha rasm S3). Birgalikda olingan maʼlumotlarimiz shuni koʻrsatadiki, oltita2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ buyraklar ko'pincha buyrak kisti kasalliklari bilan bog'liq bo'lgan molekulyar xususiyatlarga ega.
Oltida nefronning yetilishi nuqsonli2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/sichqonchalar Chunki to'qimalarga xos bo'lgan sichqonlarga bir necha haftagacha vaqt ketishi mumkinTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)inaktivatsiya patologiyasini rivojlantirsa, biz keyingi oltitada buyrak kasalligining rivojlanish vaqtini ko'rib chiqdik2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A){0}}sichqonlar. Biz P0, P7 va P14 yoshdagi nazorat va mutant sichqonlarning buyraklarini yig'dik va baholash uchun butun buyrak ekstraktida gistologik usullar, immunofluoresans (IF) bo'yash va gen ekspressiyasi tahlilidan foydalandik. IF P0 yoshida SIX2 va E-kaderin uchun bo'yash buyraklar nazorat va Sic2- ekanligini ko'rsatdi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-gistologik jihatdan o'xshash edi. Kortikal nefrogen zona tuzilmalarining shakllanishi, masalan, SIX2 plyus qopqoq mezenximasi, E-kaderinni ifodalovchi siydik yo'llarining uchlari va buyrak pufakchalari va vergul shaklidagi va S shaklidagi tanalar kabi yangi paydo bo'lgan nefron tuzilmalari Oltita{{7}da bloklanmagan. }TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7- buyraklar (2a-rasm). Ushbu gistologik topilmalar nefrogen markerlarni kodlovchi genlarning ifoda darajalariga mos edi. Six2, juftlangan quti 2 (Pax2), LIM homeobox protein 1 (Lhx1) va spaltga o'xshash transkripsiya omili 1 (Sall) mRNK darajalari nazorat va Six o'rtasida sezilarli darajada farq qilmadi2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/sichqonlarning umumiy buyrak gomogenatlari P0 buyraklaridan (2b-rasm). Bu shuni taklif qildiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)SIX2 nefron pro-genitorlarida inaktivatsiya nefrogen tuzilmalarning shakllanishiga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi.
2-rasm|Six2-Tfam-7sichqonlarida nefronning yetilishi nuqsonli.(a) Cre~ nazorati va Six2-Tfam-/buyraklardagi formalin bilan biriktirilgan, kerosin bilan o'rnatilgan bo'limlarning vakillik tasvirlari (P) 0. Buyrak bo'limlari toluidin ko'k bilan bo'yalgan va sinus okulis bilan bog'liq homeobox 2 (SIX2) va E-kaderin (ECAD) ifodasi uchun immunofluoressensiya bilan tahlil qilingan. Ureter daraxtlari chiziqli oq chiziqlar bilan tasvirlangan. Qopqoq mezenximasi (CM), vergul shaklidagi tanasi (CSB), S shaklidagi tanasi (SSB) va siydik yo'llarining uchi (UT) izohlanadi. (b) Chap panel, Cre littermate nazorati (n =6) bilan solishtirganda, PO yoshidagi Olti{11}}Tfam-/mutantlarning umumiy buyrak homogenatlarida miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi orqali rivojlanish belgilarining nisbiy mRNK ifoda darajalari (har biri n =6). ). O'ng panel, nisbiy glomerulyar (glom) va nefron segmentiga xos genlar umumiy buyrak gomogenatlaridagi olti2-Tfam7mutantning P7 yoshidagi Cre-littermate nazorati bilan solishtirganda (har biri n =4). PT, proksimal tubula; mTAL, Henlening qalin ko'tarilgan a'zosi; DT, distal tubula; CD, yig'ish kanali. (c) P0, P7 va P14 yoshda Alcian ko'k/davriy kislota-Schiff (AB-PAS) bo'yalgan buyrak qismlari. O'qlar cho'tkasi chegarasi bo'lgan PAS-musbat kanalchalarni, yulduzchalarda glomeruliyalarni va raqam belgilarida pufak kanalchalarini, AB-PAS tasvirlari uchun Bars=100 um va toluidin ko'k rangga bo'yalgan tasvirlar uchun 50 um va IF tasvirlarini ko'rsatadi. Ma'lumotlar o'rtacha± SEM sifatida ifodalanadi;2-tailed Student's t-test;*P<><><0.001.agp1,aquaporin 1;agp2,aquaporin="" 2;lhx1,lim="" homeobox1;napi2a,="" sodium-phosphate="" cotransporter="" 2a;="" ncc,="" thiazide-sensitive="" sodium-chloride="" cotransporter;="" nkcc2,="" sodium-potassium-chloride="" cotransporter="" 2;pax2,="" paired="" box="" 2;="" sall1,="" spalt="" like="" transcription="" factor="" 1;="" scnn1a,="" epithelial="" sodium="" channel="" 1="" alpha="" subunit;="" trpv5,="" transient="" receptor="" potential="" cation="" channel="" subfamily="" v="" member="" 5;="" umod,="" uromodulin.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">www.kidney-international.org.
cistanche sharhlari
Yangi paydo bo'lgan nefron strukturasining shakllanishi to'xtatilmagan bo'lsa-da, alsiy ko'k/davriy kislotasi-Schiff va lotus tetragonolobus lektin bilan bo'yash oltita2-da nuqsonli terminal nefron kamolotini ko'rsatdi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A){0}}P yoshidagi sichqonlar0. Mutantli buyraklarda tubulali bazal membranalarni va cho'tka chegaralarini bo'yaydigan Alcian ko'k / davriy kislota-Schiff va proksimal tubula hujayralarining cho'tkasi chegarasida o'ziga xos oligosakkaridlarni aniqlaydigan lotus tetragonolobus lektinining ikkalasi ham kamayadi. 2c-rasmda P0, P7 va P14 vaqt nuqtalarida alsiy ko'k/davriy kislota-Schiff bo'yalishi ko'rsatilgan. Lotus tetragonolobus lektin gistokimyosi va P0, P7 va P14 vaqt nuqtalarida Vilms o‘simtasi 1 oqsili uchun IF bo‘yalishi S4 qo‘shimcha rasmda ko‘rsatilgan. PO yoshida lotus tetragonolobus lektin bilan ijobiy bo'yalgan nisbiy hudud 2,10 foiz ±0,51 foiz va 0,39 foiz ± 0,1 foizni tashkil etdi. yoshi P7 nazorat uchun mos ravishda 6,25 foiz ± 0,28 foiz va 6,2 foiz ±1,1 foiz (n=3-4, P=0.0004 va 0,0007, mos ravishda; Qo'shimcha rasm S4). Glomerulyar va nefron segmentiga xos belgilar podotsin, nefrin, aquaporin 1 (Agp1), natriy-fosfat kotransportatori 2a (NaPi2a), uromodulin, natriy-kaliy-kotransportyor2-ni kodlovchi genlar ekspressiyasining sezilarli darajada kamayishi ushbu gistologik topilmalarga mos keladi. (Nkcc2) va tiazidga sezgir natriy xlorid kotransportatori (Ncc) Six2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ sichqonlar (2b-rasm). Birgalikda bu maʼlumotlar shuni koʻrsatadiki, oltita2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- buyraklar etuk proksimal nefron segmentlari va glomeruliyalar sonining progressiv qisqarishini ko'rsatadi.
Chunki olti2-eGFP/Cre faoliyati natijasidaTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-qopqoq mezenximadan kelib chiqadigan nefron segmentlari yetishmasa, biz siydik yo'llari kurtaklari hosil bo'lgan CD epiteliya hujayralarining kamolotiga oltita ta'sir ko'rsatmasligini taxmin qildik2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ buyraklar. Ushbu tushunchaga mos keladigan narsa shundaki, distal kanalchada va CDda N-atsetil-D-galaktoza bilan reaksiyaga kirishadigan Dolichos biflorus aglutinin bilan bo'yash oltita2-da Dolichos biflorus aglutinin-musbat tuzilmalarining nisbatan haddan tashqari ko'pligini ko'rsatadi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- buyraklar. P7 yoshida Dolichos biflorus aglutinin uchun musbat bo‘yalgan joylar mutantlar uchun umumiy maydonning 13,91% ±0,9 foizini, nazorat uchun esa 1,93% ± 0,1 foizni tashkil etdi (n {{11} }, P=0.0002; Qo'shimcha rasm S4). CD epiteliya hujayralarida ifodalangan natriy kanali epiteliya 1 alfa sub birligi (Scnnla) yoki aquaporin 2 (Agp2) ning mRNK ifodasi bilan solishtirganda sezilarli darajada kamaymagan. boshqaruv (2b-rasm). Oltitadan farqli o'laroq2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-buyraklar,TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)CD epiteliya hujayralarini keltirib chiqaradigan homeobox B7 (HOXB7) progenitor hujayralarida inaktivatsiya, natijada CD nefron marker ifodasini yo'qotadi va engil quvurli kengayish, lekin sistogenez emas (Qo'shimcha rasm S5). Birgalikda olingan ma'lumotlarimiz yo'qotishdan dalolat beradiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)SIX2 progenitor hujayralaridagi funktsiya yangi tug'ilgan nefron tuzilmalarining rivojlanishiga to'sqinlik qilmaydi, lekin terminal nefronning kamolotini inhibe qiladi.
TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/-kistalarda umumiy nefron segment belgilari yetishmaydi
ning gistogenetik kelib chiqishini tavsiflashTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7buyrak kistalari, biz IF tahlillarini o'tkazdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/kidneys at age P14 and examined the expression of nephron segment markers megalin (proximal tubule), uromodulin (medullary thick ascending limb of Henle), thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter(distal tubule), and aquaporin 2(CD). The majority of cysts with a maximal diameter of>50 um did not express these segment-specific markers, indicating a lack of cellular differentiation(Figure 3a, Supplementary Figure S6). Furthermore, approximately 50% of cysts with a maximal diameter of >50 um uromodulinning intraluminal to'planishi bilan tavsiflanadi, bu proksimal kanalchaning distalidagi nefron segmentlaridan va Henlening pastga tushuvchi halqasidan kelib chiqishini ko'rsatadi (3b-rasm).
Shakl 3ITfam-/kistalar umumiy nefron segmentiga xos belgilarni ifodalamaydi.(a)Representative images of formalin-fixed, paraffin-embedded kidney sections from Six2-mT/mG; Tfam-mice at age postnatal day (P) 14 stained for enhanced green fluorescent protein (eGFP), megalin, uromodulin, thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter (NCC), and aquaporin 2(AQP2)by immunofluorescence (IF). 4'6-diamidino-2-phenylindole was used for nuclear staining (blue fluorescence). Arrows depict tubular structures expressing respective nephron segment-specific markers. Nephron segment marker expression was assessed in cysts with a maximal diameter of >50 um. (b) Six2-mT/mG dan formalin bilan biriktirilgan, kerosin bilan o'rnatilgan buyrak bo'limlarining vakillik tasvirlari; P14 yoshidagi Tfam{4}}sichqonlari IF tomonidan eGFP va uromodulin uchun bo'yalgan. Yulduzchalarda intraluminal uromodulinli kistalar tasvirlangan. Intraluminal uromodulinning mavjudligi maksimal diametri 50-100 um bo'lgan kistalarda yoki maksimal diametri 100 um dan katta kistalarda tekshirildi. Barlar =(a,b)100 um. Ushbu rasmni ko'rishni optimallashtirish uchun www.kidney-international.org saytida ushbu maqolaning onlayn versiyasiga qarang.
Mt funktsiyasi va morfologiyasida progressiv anomaliyalarTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7-epiteliya hujayralari
Metabolik oqibatlarning vaqt kursini tavsiflashTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)o'chirish, biz birinchi navbatda mRNK darajasini tekshirdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)vaTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-regulyatsiya qilingan mt-Col, mt-Cyb va mt-Atp6 daTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- PO, P7 va P14 yoshdagi buyraklar. Kutilganidek,TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A), mt-Col, mt-Cyb va nt-Atp6 mRNK darajalari sezilarli darajada kamaydi (4a-rasm). EGFP (Olti 2-mT/mG; Tfam-7sichqonlar) bilan belgilangan T fam-7- epiteliya hujayralari MT-CO1 oqsili ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi (Qo'shimcha rasm S7). mt DNK nusxasi soni 63 foizga kamaydi, bu mt kamayishi bilan mos keladi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)etishmovchilik (4a-rasm). Bundan farqli o'laroq, nikotinamid adenin dinukleotidini kodlovchi yadro genlarining ifodasi: ubiquinon oksidoreduktaza yadrosi 3 (Ndufs3) va suksinat dehidrogenaza kompleksi flavoprotein A subbirligi (Sdha) P0 yoshida ta'sirlanmagan va P14 yoshida kamaygan. (4a-rasm). mt geni va oqsil tahlilidan olingan ushbu topilmalar Tfam-/-epiteliyadagi mt nusxasi sonining progressiv yo'qolishiga mos keladi.
Keyinchalik metabolik ta'sirlarni o'rganib chiqdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)P7 yoshida izolyatsiya qilingan birlamchi proksimal tubula epitelial hujayralarida (PTEC) inaktivatsiya.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7 PTECs bazal kislorod iste'moli darajasida sezilarli pasayishlarni ko'rsatdi (mutantlar uchun 40,77 ± 4,10 va nazorat uchun 61,75 ± 5,18 pmol/min/10 hujayra, har biri n=3, P= 0,034 ), ATP bilan bog'langan nafas olish (mutantlar uchun 33,11 ± 3,91 va nazorat elementlari uchun 46,92 ± 4,91 pmol/min/10* hujayralar, har birida n=3, P=0,093), maksimal nafas (116,8 ± Mutantlar uchun 14,19 va nazorat elementlari uchun 225,5 ± 13,55 pmol/min/10* hujayralar, har birida n=3, P=0.005) va zaxira nafas olish qobiliyati (mutantlar uchun 76,05 ± 10,18 va 163,7 ± ga nisbatan). Boshqaruv uchun 8,61 pmol/min/10* katak, har birida n=3,P= 0.003; 4b-rasm).
cistanche reddit
Mtning kamayishi va shikastlanish darajasini yanada tavsiflash uchun biz ko'rib chiqdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- buyraklar transmissiya elektron mikroskopiya va 3-o'lchovli tuzilgan yorituvchi mikroskop (3D SIM). P7 yoshida mitoxondriyalar tartibsiz shakllar va havo sharlarini ko'rsatdilar, bu avvalgi tadqiqot natijalariga mos keladi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)nokaut sichqonlari. Transmissiya elektron mikroskopik tahlili shuni ko'rsatdiki, mitoxondriyalarning kattalashishi va g'ayritabiiy kristalar kabi strukturaviy anomaliyalari tug'ruqdan keyingi davrda rivojlangan, chunki mutantlar va nazorat o'rtasidagi morfologik farqlar P0 yoshida unchalik aniq bo'lmagan va yoshga qarab kuchaygan (4c-rasm). ).3D SIM mt hajmini va tarmoq hajmini Six2-mT/mG da tekshirish uchun ishlatilgan;TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ mutantlar P7 yoshida olti2-mT/mG nazorat qiluvchi sichqonlar bilan solishtirganda; mt hajmi IF bo'yash orqali kuchlanishga bog'liq anion-selektiv kanal 1 uchun bo'yalgan 25 dan 40 eGFP-musbat kortikal epiteliya hujayralarini tekshirib, har bir bo'limda 5 dan 8 gacha bo'lgan ko'ndalang kesimlarda o'lchandi. Biz eGFP-musbat hujayra boshiga umumiy mt hajmi sezilarli darajada kamayganligini aniqladik (mutantlar uchun 62,66 ± 16,46 um/hujayra va nazorat uchun 177,4±30,17 mkm'/hujayra, har biri n=3 , P= 0.0289) va umumiy hujayra hajmiga umumiy mt hajmining nisbati nazoratdagi 0.230 ±0,01 dan oltitada 0,089 ± 0,016 gacha o'zgarishi bilan bog'liq edi. 2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7 mutant (har biri n= 3, P=0.0017; 4c-rasm). Barcha tekshirilgan eGFP-musbat hujayralarda uchraydigan eng katta mt tarmoqni o'lchaydigan maksimal mt tarmoq hajmi oltita2-da kamaydi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ buyraklar（mutantlar uchun 143,2 ± 23,2 m² va nazorat qilish uchun 318,3 ± 49,45 um², har biri n= 3, P= 0,0327）. Birgalikda, ultrastruktura va SIM topilmalari va mt gen va oqsil tahlili natijalari mt nusxasi sonining progressiv yo'qolishiga mos keladi.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-7-epiteliy.
4-rasm| Tfam-/buyrak epiteliysi mitoxondriyaning progressiv kamayishi bilan tavsiflanadi.(a) Mitoxondrial (mt) genning miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi orqali tug'ruqdan keyingi kun (P) {0}}, P7 va P14 (nazorat ustidan o'zgarish, har biri n =6) va Cre~ littermate nazorati (ko) va Six2-Tfam-/sichqonlarning umumiy buyrak gomogenatlarida mt DNK tarkibi (P7). (b) Seahorse XFe24 platformasida Cre littermate nazorati va P7 yoshida oltita oilaviy buyrakdan ajratilgan birlamchi proksimal quvurli epiteliya hujayralarida (PTEC) kislorod iste'mol qilish darajasi (OCR). Oligomisin A (oligo A, adenozin trifosfat [ATP] sintazasini inhibe qilish), karbonil siyanid-p-triflorometoksifenilgidrazon (FCCP, ajratuvchi) va oksidlovchi rofofon ingibitorlari bilan ishlov berilgan nazorat va Tfam{11}}PTEClardagi OCR oʻlchovlari. va antimitsin A (AA). Shuningdek, hisoblangan bazal va maksimal nafas olish, ATP bilan bog'langan nafas olish va zaxira nafas olish qobiliyati (har birida n =3) ko'rsatilgan. (c) transmissiya elektron mikroskopi yordamida mitoxondriyalarning ultrastrukturaviy tahlili. Cre-control va Six{17}}Tfam-7sichqonlarining P0 va P7 yoshdagi buyrak qismlarining transmissiya elektron mikroskopik tasvirlari, Qizil strelkalar mitoxondriyalarni tasvirlaydi. Bar=500 nm. (d) Six2-mT/mG (ko) va olti2-mT/mG dan buyrak boʻlimlarining uch oʻlchovli tuzilgan yorituvchi mikroskop tasvirlari; Tfam-/-sichqonlar P7 yoshida. Kengaytirilgan yashil lyuminestsent oqsil (eGFP), sitoxrom c oksidaza subunit 4 (COXⅣ) va kuchlanishga bog'liq anion-selektiv kanal 1 (VDAC immunofluoressensiya bilan aniqlandi.4',6-diamidino-2-fenilindol (DAP) ) yadroviy bo'yash uchun (ko'k floresans) ishlatilgan.Oq chiziqli chiziqlar nazoratdagi buyrak tubulasini va mutant buyrakdagi kista lümenini tasvirlaydi va raqamli belgilar mutant buyrakdagi naychali lümenni yoki mutant buyrakdagi kist lümenini tasvirlaydi.Mt maydoni Imaris bilan aniqlangan. dasturiy ta'minot (Oxford Instruments, Abingdon, Buyuk Britaniya; n =3). eGFP-musbat hujayra (25-40 hujayra/namuna tahlil qilingan) uchun umumiy (tot) mt hajm (hajm), umumiy mt hajmining nisbati umumiy hujayra hajmi va har bir hujayra uchun mt tarmoqning maksimal (maksimal) o‘lchami. mt tarmoq o‘lchami har bir kesmada 5 ta hujayradan iborat bo‘lgan quvurli kesmada aniqlangan. Barlar =4 um. Ma’lumotlar ko‘rsatilgan. o'rtacha ± SEM sifatida va Student's t-testi bilan tahlil qilingan.*P<><><0.001, mt-atp6,="" mitochondrially="" encoded="" atp="" synthase="" membrane="" subunit="" 6;="" mt-co1,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" c="" oxidase="" 1;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b;="" ndufs3,="" nadh:="" ubiquinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" sdha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a;="" tfam,="" mitochondrial="" transcription="" factor="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">
TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)etishmovchilik buyrak epitelial metabolizmini glikoliz tomon siljitadi
Buyrakdagi PTEClar ATP hosil qilish uchun yog 'kislotasi - oksidlanish va OXPHOSdan foydalanadi va glyukoneogenetikdir. daraja Tam inaktivatsiyasi bilan bog'liq metabolik o'zgarishlar haqida qo'shimcha ma'lumotga ega bo'lish uchun biz Six2- buyraklarining RNK sekvensiyasi tahlilini o'tkazdik.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)P7 yoshida -/-va Cre~ littermate nazorat qiluvchi sichqonlar. Biz glikolizda ishtirok etadigan asosiy tartibga soluvchi genlar, masalan, geksokinaza 2 (Hk2) va enolaza 2 (Eno2) yuqori tartibga solinganligini aniqladik. Aksincha, trikarboksilik kislota siklida ishtirok etuvchi ko'pchilik genlarning ekspressiyasi pasaygan (masalan, izotsitrat dehidrogenaza 1[Idh1), yog' kislotasi oksidlanishida ishtirok etuvchi genlarning, masalan, atsetil koenzim A atsiltransferaza 1B (Acaalb) ekspressiyasi kamaygan. o'rta zanjirli asil-koenzim A dehidrogenaza (Acadm) (5a va b-rasm, S8 qo'shimcha rasm). Seahorse XFe24 platformasi (Agilent, Santa Clara, CA) yordamida P7 yoshida trikarboksilik kislota siklini boshqarishda ishtirok etuvchi genlar va mutant buyraklar ifodasining kamayishi bilan mos keladi. Mutant PTEClar bazal glikolizning sezilarli o'sishi bilan tavsiflangan (proton oqimi tezligi=117,4 ± 12.0mutantlar uchun 7 pmol/min va nazorat qilish uchun 73,34 ± 6,33 pmol/min, n {{25) }}, P=0.{{30}}032) va nazoratdagi 0,73 ± 0,08 dan glikolitik proton oqimi tezligiga nisbatan mt kislorod iste'moli nisbatining pasayishi. mutant PTEClarda 0,34 ± 0,02 gacha (n=3, P=0,0074). Birgalikda bu ma'lumotlar shundan dalolat beradiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/- epiteliya hujayralari OXPHOS va yog 'kislotasi oksidlanishidan glikolizga metabolik siljishni boshdan kechirdi (5d-rasm).
5-rasm]Buyrak epitelial mitoxondrial transkripsiya omili A (TFAM) etishmovchiligi glikolizning kuchayishi va yog 'kislotalari almashinuvining anormalligi bilan bog'liq.(a) Six2-Tfam-/- va Cre-littermate nazorati (ko) sichqonlaridan ajratilgan butun buyrak korteksining RNK ketma-ketligi orqali metabolik gen ekspressiyasini tug'ruqdan keyingi kun (P) 7 (n {{6) da tahlil qilish }} har biri). Glikoliz va trikarboksilik kislota siklida ishtirok etadigan differentsial tartibga solinadigan metabolik genlar ko'rsatilgan. mRNK ifodasi statistik jihatdan sezilarli darajada oshgan genlar qizil rangda, ifodasi kamaygan genlar esa yashil rangda ko'rsatilgan.(b) miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (n=4-6) orqali tanlangan differentsial tartibga solinadigan genlarning mRNK ifoda darajalari. (c) Oltita{8}}Tfam-7mutant sichqonlarida yog‘ kislotalari almashinuvi o‘zgargan. P14 yoshda Six2-Tfam-7va Crelittermate nazorat qiluvchi sichqonlarning moyli qizil rangli O ga bo'yalgan buyrak qismlarining vakillik tasvirlari. Oklar moy qizil O-musbat hujayralarga ishora qiladi va sian soni xarajatni tasvirlaydi. Bar=10 um.(d) Cre littermate nazoratidan ajratilgan birlamchi proksimal quvurli epiteliy hujayralarining (PTEC) glikolitik oqimi tahlili va har biri P7 (n=4 yoshda olti2-Tfam-/buyrak) ) Seahorse XFe24 platformasida. Nazoratdagi glikolitik protonning chiqishi tezligi (gliko PER) va 2-deoksiglyukoza (2-DG) va oksidlovchi fosforillanish inhibitörleri rotenon va antimitsin A(AA) bilan ishlov berilgan Tfam-7PTECsning reprezentativ o‘lchovlari ko‘rsatilgan. . Shuningdek, boshlang'ich darajadagi o'rtacha gliko PER va mitoxondrial (mt) kislorod iste'moli darajasi (OCR) gliko PERga nisbati ko'rsatilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalanadi va Student's t-test yordamida tahlil qilindi. (Davomi)
QisqartirilganTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)Sichqoncha va inson PKD to'qimalarida ifodalanishi mt kamayishi bilan bog'liq
Chunki oltita2-TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ buyraklar PKD buyraklariga juda o'xshash edi, keyin biz buni baholadik.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)PKD to'qimalarida disregulyatsiya qilingan. Biz avval tekshirdikTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)va TFAM tomonidan boshqariladigan gen ifodasi 2 ta yaxshi tasdiqlangan genetik PKD sichqoncha modellarida.TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)Pkd1-/- va Cyspk/pk sichqonlarining butun buyrak gomogenatlarida mRNK darajalari sezilarli darajada kamaydi, ular Pkd1 yoki Cys1 mutatsiyalarini tashuvchidir. Bu mitoxondriyal va yadroviy kodlangan mt genlari, shuningdek, tartibga solinmagan glikolitik gen ekspressiyasining pasayishi bilan bog'liq edi. Six2-ga o'xshashTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)-/ buyraklar, Pkd1-7 va CysPkpk buyraklari Eno2 va Hk2 ko'tarilishi va fosfogliserat kinaz (Pkg)1, piruvatdehidrogenaza kinaz (Pdk)1 va Pdk4 transkript darajalarining sezilarli darajada pasayishi bilan tavsiflangan (6a-rasm).TFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)IF bo'yalishi bilan baholangan oqsil ifodasi, qo'shni bo'lmagan kistli kanalchalardagi epiteliya hujayralari bilan solishtirganda kist qoplamali epiteliya hujayralarida kamaydi (6b-rasm). Bu RNK floresansi in situ gibridizatsiyasi orqali mt-Co1 va mt-Atp6 ifodalarining kamayishi bilan bog'liq edi (6b-rasm, qo'shimcha S9-rasm); mt hajmi, 3D SIM tomonidan aniqlanganidek, qo'shni, kistsiz kanalchalarning epitelial hujayralari yoki oddiy nazorat buyraklarining PTEClari bilan solishtirganda 55 foizga kamaydi. Oddiy nazorat PTEC va PTEC o'rtasidagi mt hajmidagi farqlar topilmadi (6c-rasm).
6-rasm| Pkd1-7-va CysPkepk buyrak kistalarida mitoxondrial transkripsiya faktor A (TFAM) ifodasi kamayadi.(a) Pkd1-7va Cyskidneys (n=3-5)dagi mitoxondrial va yadroviy kodlangan mitoxondrial va glikolitik genlarning nisbiy mRNK ifoda darajalari (Cre littermate nazorati boʻyicha marta oʻzgarishi).(b) Buyrakning reprezentativ tasvirlari. Pkd1-7bo'limlari va tug'ruqdan keyingi kun (P) 22 da tahlil qilingan axlatni nazorat qiluvchi sichqonlar. Mitoxondriyal kodlangan sitoxrom c oksidaza 1(mt-Co1) va mitoxondriyal kodlangan ATP sintaza membranasi 6 (mt-Askriptp6) subbirligi uchun TFAM va RNK floresan in situ gibridizatsiyasi (RNK-FISH) uchun immunofluoresans (IF) bo'yalishi ko'rsatilgan. Oq o'qlar kuchli kamaytirilgan TFAM, mt-Co1 yoki mt-Atp6 ifodasi bilan kist qoplamali epiteliya hujayralarini aniqlaydi. Glomeruli gl bilan belgilanadi. TFAMni ifodalovchi quvurli tuzilmalar qizil floresan bilan aniqlanadi. Yulduzchalarda aniqlanishi mumkin bo'lgan mt-Co1 va mt-Atp6 transkriptlari bo'lgan quvurli epiteliya hujayralari tasvirlangan. IF tasvirlari uchun barlar=25 um va RNK-FISH tasvirlari uchun 10 mkm. （c） Uch o'lchovli tuzilgan yoritish mikroskopiyasi. Lotus tetragonolobus lektin (LTL) va IF sitokrom c oksidaza subunit 4 (COXIV) va kuchlanishga bog'liq anion-selektiv kanal 1 (VDAC) ifodasi uchun gistokimyo orqali tahlil qilingan Pkd{28}}buyraklarining buyrak qismlari tasvirlari ko'rsatilgan. Mitoxondriyal (mt) hajmi COXIV bo'yashga asoslangan Imaris dasturi yordamida aniqlandi. O'qlarda kista qoplamasi epiteliy hujayralari, raqam belgilarida kista yoritgichi, yulduzchalarda esa kista bo'lmagan tubulalar tasvirlangan. Kist qoplamali epiteliya hujayralari chiziqli chiziqlar bilan tasvirlangan. Chap panel uchun barlar=10 mkm va o'ng panel uchun 3 mkm. Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalanadi va Student's t-test * P yordamida tahlil qilindi<><0.01, and=""><0.001.eno2, enolase="" 2;="" hk2,="" hexokinase="" 2;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b:="" ndufs3.="" nadhubiguinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" pdk1,="" pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 1;="" pdk4.pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 4;="" ppargc1a,="" peroxisome="" proliferator-activated="" receptor="" gamma="" coactivator="" 1-alpha:="" pgk1,="" phosphoglycerate="" kinase="" 1:="" ptec,="" proximal="" tubule="" epithelial="" cell;="" sudha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">
ning yo'qolganligini tekshirish uchunTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)ifoda inson PKD ning umumiy molekulyar xususiyati bo'lib, biz 5 ADPKD bemoridan nefrektomiya namunalarini immunohistokimyo, IF bo'yash, RNK floresansi in situ gibridizatsiyasi va 3D SIM orqali tahlil qildik. QisqartirilganTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)ifodasi immunohistokimyoviy tahlil qilingan buyrak kistalarining 75,2 foizi ± 7,5 foizida kuzatilgan. Bu RNK floresansi in situ gibridizatsiyasi orqali MT-CO1 va MT-ATP6 ning kamayishi bilan bog'liq edi (7a-rasm, qo'shimcha S10-rasm); mt hajmi 3D SIM tomonidan baholanganidek, kist qoplamali epiteliya hujayralarida taxminan 70 foizga kamaydi (7b-rasm). Birgalikda 2 PKD sichqoncha modellari va inson ADPKD to'qimalarining tahlili shuni ko'rsatdiTFAM(maqsadli mitoxondriyal transkripsiya omili A)etishmovchilik va mt kamayishi PKD to'qimalarida tez-tez uchraydigan topilmalar bo'lib, buyrak kisti kasalligining patogeneziga ta'sir qilishi mumkin.
7-rasm| Polikistik buyrak kasalligi bo'lgan bemorlarning buyrak kistalarida mitoxondrial transkripsiya faktor A (TFAM) ifodasi kamayadi.(a) Oddiy inson buyragi va polikistik buyrak kasalligi (PKD) bilan og'rigan bemorlarning formalin bilan fiksatsiyalangan parafin o'rnatilgan bo'limlari TFAM ifodasi uchun immunohistokimyo, kuchlanishga bog'liq anion-selektiv kanal 1 (VDAC) uchun immunofluoresans (IF) orqali tahlil qilingan buyraklarning vakillik tasvirlari ) ifodasi va mitoxondrial kodlangan sitoxrom c oksidaza 1 (MT-CO1) va mitoxondriyal kodlangan ATP sintaza membranasining 6 (MT-ATP6) mRNK ifodasi uchun RNK floresan in situ gibridizatsiyasi orqali, strelkalar kista qoplamasi epiteliy hujayralarini, c belgilarini aniqlaydi. , yulduzchalarda esa glomerullar tasvirlangan. Bar=100 mkm past kattalashtirishli tasvirlar uchun va 10 um yuqori kattalashtirishli tasvirlar uchun (b) VDAC ifodasi uchun IF bilan tahlil qilingan inson PKD buyrak qismlarining 3-vakillik oʻlchovli tuzilgan yorituvchi mikroskopik tasvirlari.4',{ {17}}diamidino{18}}fenilindol (DAPl) yadroviy bo'yash uchun ishlatilgan (ko'k floresan). Chiziqli chiziqlar tubulalarni belgilaydi, raqam belgilari esa quvurli yoki kist yoritgichini tasvirlaydi. Mitoxondriyal (mt) hajmi Imaris dasturi yordamida aniqlandi (n=5). Bar =4 mkm.Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalanadi va Student's t testi yordamida tahlil qilindi.*P<0.05. to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">
