Yo'g'on ichak saratonini samarali davolash uchun TLR agonisti va CD47-SIRP nazorat nuqtasi blokadasi bilan lipozomaga asoslangan koimmunoterapiya

Annotatsiya:

Antitumor immunitet saraton terapiyasining muhim tarkibiy qismi bo'lib, birinchi navbatda adaptiv immun javobni boshlash va shakllantirishda hal qiluvchi rol o'ynaydigan tug'ma immunitet reaktsiyasi orqali amalga oshiriladi. Rivojlanayotgan dalillar, tug'ma immun nazorat punktlari va naqshni aniqlash retseptorlarini, masalan, CD47 va Toll-like retseptorlari 7 (TLR7) saraton kasalligini davolash uchun istiqbolli terapevtik maqsadlar sifatida aniqladi. Yuqori yaqinlikdagi SIRP variantini (CV1) va inson IgG1 antikorining Fc fragmentini o'z ichiga olgan Fc-CV1 termoyadroviy oqsiliga asoslanib, biz Fc-CV1 ni imikimod (TLR7 agonisti) yuklangan lipozomalarga bog'laydigan preparatni qo'lladik. CILPs) CT26 ni faol ravishda nishonga olish. WT singenik yo'g'on ichak shishi modellari. In vitro tadqiqotlari shuni ko'rsatdiki, CILP erkin imikimodga nisbatan yuqori barqaror ajralib chiqish xususiyatlari va hujayralarni qabul qilish samaradorligini namoyish etdi. In vivo tahlillar shuni ko'rsatdiki, CILPlar o'smalarda samaraliroq to'planishi va nazorat guruhlariga qaraganda sezilarli darajada o'smani bostirish ta'sirini ko'rsatdi. Ushbu immunoterapiya preparati past dozalar va past toksiklik afzalliklariga ega edi. Ushbu natijalar immun nazorat nuqtasi blokadasi (ICB) terapiyasi va Fc-CV1 va imikimod yuklangan lipozoma preparati kabi tug'ma immunitet agonistlarining kombinatsiyasi o'smalarni davolash uchun yuqori samarali strategiya bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

Kalit so‘zlar:

imiquimod; lipozoma; Fc-CV1; immunoterapiya; yo'g'on ichak saratoni

1.Kirish

Dunyo aholisining sog'lig'iga jiddiy tahdid soladigan va sog'liqni saqlash tizimlariga og'ir yuk bo'lgan saraton kasalligining global tarqalishi yil sayin ortib bormoqda. Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti hisobotiga ko'ra, 2020 yilda dunyo bo'ylab 19,29 million yangi saraton kasalligi va 9,96 million saraton o'limi qayd etilgan [1]. Biroq, klinik diagnostika, jarrohlik, radiatsiya terapiyasi va kimyoterapiyaning doimiy rivojlanishi bilan saraton kasalliklarining umumiy omon qolishi va hayot sifati sezilarli darajada yaxshilandi. Ta'kidlash joizki, 1890-yillarda Coley vaktsinasidan kelib chiqqan immunoterapiya [2] ham radioterapiya, ham kimyoterapiyadan oldin paydo bo'lgan va so'nggi o'n yillikda saraton bemorlariga foyda keltirgan holda sezilarli yutuqlarga erishdi.

O'simta immunoterapiyasi o'zining mukammal biologik muvofiqligi va yuqori o'ziga xosligi bilan tan olingan va o'simta hujayralarini yo'q qilish uchun immun javoblarni keltirib chiqarishga qodir [3-5]. O'sma immunoterapiyasining ikkita asosiy strategiyasi immunitetni kuchaytirish va immunitetni normallashtirishdir [6]. Immunitetni kuchaytirish usullari asosan sitokin terapiyasi, o'smaga qarshi terapevtik vaktsinalar va monoklonal antikorlardan iborat. Tollga o'xshash retseptorlar (TLR) tug'ma immunitet tizimini faollashtirishdagi roli tufayli saraton immunoterapiyasi uchun potentsial maqsadlar hisoblanadi. TLR agonistlari immun adjuvant sifatida ishlab chiqilgan va turli xil TLR agonistlari klinik sinovlardan o'tmoqda [7]. Monofosforil lipid A va imikimod, TLR4 va TLR7 agonistlari mos ravishda oziq-ovqat va farmatsevtika idorasidan klinik qo'llash uchun ruxsat oldi [7-9]. Imiquimod, TLR7 agonisti [9], immun javoblarni faollashtiradi va TLR7 [10,11] ni ishga tushirish orqali o'smaga qarshi faollikni kuchaytiradi. Immunitetni normallashtirish strategiyasi nuqsonli adaptiv o'simta immun javobini tartibga soluvchi immun nazorat nuqtasi blokadasi (ICB) preparatlari bilan ifodalanadi. Birinchi nazorat nuqtasi inhibitori, ipilimumab 2011 yilda AQShda klinik qo'llash uchun tasdiqlanganidan beri, PD1/PDL1 inhibitörleri kabi immun nazorat nuqtasi inhibitörleri saraton immunoterapiyasida yutuq yaratdi [12-14]. PD1/PDL1 ga o'xshash moslashtirilgan immun nazorat punktlaridan tashqari, SIRP -CD47 kabi ba'zi tug'ma immun nazorat punktlari ham ko'pchilikning e'tiborini tortdi va antikor preparatlarini ishlab chiqishda katta qiziqish doirasiga aylandi [15-17].

SIRP -CD47 nazorat punkti birinchi marta 1999 yilda aniqlangan [18,19]. SIRP markaziy asab tizimining neyronlarida [20] va miyeloid hujayralarda, jumladan monositlar, makrofaglar, granulotsitlar va dendritik hujayralarda ifodalangan CD47 retseptoridir. CD47 deyarli barcha normal hujayralarda ifodalangan va ko'pchilik o'simta hujayralarida haddan tashqari ifodalangan "o'z-o'zini belgilovchi molekula" [21]. O'simta hujayralari yuzasida CD47 SIRP bilan bog'lanib, o'simta immunitetidan qochishning muhim vositasi bo'lgan makrofag-vositachi fagotsitozni inhibe qiladi [22]. CD47 va SIRP ning bog'lanishi bloklanganda o'simta mikromuhitidagi makrofaglarning fagotsitozi kuchayishi mumkinligi ko'rsatilgan [20-25]. Shu sababli, CD47/SIRP yo'lini bloklaydigan immun nazorat nuqtasi inhibitörleri ishlab chiqilgan va saraton kasalligini davolashda qo'llanilgan [26].

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ushbu tadqiqotda biz yo'g'on ichak saratonini davolash uchun imikimod va termoyadroviy oqsil (Fc-CV1) kombinatsiyasidan foydalandik. CV1 modifikatsiyalangan inson rekombinant SIRP oqsili boʻlib, CD47 ga asl oqsilga qaraganda 50{4}}barcha yuqori yaqinlikka ega [27]. Fc-CV1 inson IgG1 ning CV1 monomeri va Fc fragmenti asosida "Knobs-into-holes" texnologiyasidan foydalangan holda qurilgan. Imiquimod [28,29] bilan bog'liq zaif terapevtik samaradorlik va tizimli toksiklik cheklovlarini bartaraf etish uchun biz etanolni in'ektsiya usuli orqali nanoliposomalarni tayyorladik. Nanolipozomalar dori vositalarini yetkazib berishda past toksiklik xususiyatlariga ega [30,31]. Keyinchalik, imikimod Fc-CV1 bilan konjugatsiyalangan lipozomalarga o'ralgan. Va nihoyat, ushbu yangi nano-preparat TLR7 agonistlarini o'simta to'qimalariga faol ravishda etkazib berishi mumkin va ICB preparati va TLR agonisti sifatida ikki tomonlama funktsiyaga ega. U CD47+ CT26.WT singenik yo'g'on ichak shishi modelini davolash uchun ishlatilgan [32].

2. Natijalar va muhokama

2.1. LP (bo'sh lipozomalar), ILP (CD bo'lmagan47- maqsadli imikimod-kapsulalangan lipozomalar), CLP (CD47 maqsadli lipozomalar) va CILP (Fc-CV1 dan Imiquimodga (TLR7 agonisti) yuklangan) xarakteristikasi

CILPlar etanol in'ektsiyasi va ammoniy sulfat gradient usuli bilan muvaffaqiyatli tayyorlandi. 1A-rasmda CILP sintez jarayoni ko'rsatilgan. TEM tahlili CILPlar sharsimon va bir xil shaklda ekanligini ko'rsatdi (1B-rasm). Bundan tashqari, DLS natijasi to'rtta lipozomaning zarracha hajmi birmodal taqsimot ekanligini ko'rsatdi (1C-rasm). Bog'lanish tezligi (BR) SDS-PAGE tomonidan tekshirildi, u 1D, E-rasmda ko'rsatilgan. 1D-rasmda Fc-CV1 molekulyar og'irligi va dializlangan va oldindan dializlangan CILPlarning nisbiy tarmoqli yorqinligi ko'rsatilgan. BR 67,13 ± 37,10% deb hisoblangan. Image J elektroforetik chiziqlarni skanerlash densitometriyasi (1E-rasm), bu CD{14}}o'simta hujayralarini nishonga olish imkoniyatini beradi.

1-rasm. (A) CILP sintezining sxematik tasviri. (B) CILPlarning TEM tasviri

HPLC imikimodning inkapsulyatsiya samaradorligini (EE) aniqlash uchun ishlatilgan (Qo'shimcha S1 rasm). S1A qo'shimcha rasmida ko'rsatilganidek, bepul imikimod sezilarli bitta cho'qqini ko'rsatdi, CLP esa bir xil sinov sharoitida cho'qqiga chiqmadi (Qo'shimcha rasm S1B). Shuning uchun CILPlarni to'g'ridan-to'g'ri sinov sharoitida aniqlash mumkin. Kutilganidek, dializdan oldin va keyin CILPlarni aniqlash qiymatlari mos ravishda lipozomalardagi umumiy dori tarkibi va dori tarkibi sifatida qabul qilindi (Qo'shimcha rasm S1C, D). İmikimodning EE 85,44 ± 4,11% deb hisoblangan. Xabar qilingan passiv yuklovchi dori-darmonlarni yetkazib berish tizimi [33-35] bilan solishtirganda, bu tadqiqot yuqori inkapsulyatsiya samaradorligiga va qulayroq tayyorlash jarayoniga erishdi.

DLS LP diametrlari 111,567 ± 0,655 nm ekanligini ko'rsatdi, CLP, ILP va CILP esa 117,467 ± 0,340} biroz kattaroq hajmni ko'rsatdi. } nm, 120,233 ± 0,776 nm va 13{{30}}.033 ± 0,974 nm (1-jadval). Ushbu lipozomalarning o'lchamidagi o'zgarishlar Fc-CV1 va imiquimodning modifikatsiyasi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. PDI 0,1 ga yaqin edi (1-jadval), bu dori vositalarini tarqatishda juda bir hil ekanligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, LP, CLP, ILP va CILP ning zeta-potentsial qiymatlari −2,231 ± 0,167 mV, −2,492 ± 0,033 mV, −2,383 ± 0,070 mV va mos ravishda −2,070 mV va −2,07V (±0,07V) ga teng deb o‘lchandi. , sirt konjugatsiyalangan Fc-CV1 va kapsullangan imikimod lipozomalarning zaryadiga ozgina ta'sir qilganligini ko'rsatadi.

1-jadval. Mos ravishda LP, CLP, ILP va CILP diametrlari, zeta-potentsial, PDI va EE.

2.2. In vitro hujayralarni qabul qilish samaradorligi

CILPlarning hujayralarni qabul qilish samaradorligi yuqori kontentli tasvirlash tizimidan foydalangan holda CT26.WT hujayralari tomonidan qabul qilingan Cy5 ning floresans intensivligi orqali baholandi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, erkin Cy5 va ILP-Cy5 guruhlari bilan solishtirganda, CILPs-Cy5 guruhlari 30 daqiqalik inkubatsiyadan so'ng kuchli hujayralarni qabul qilish qobiliyatini namoyish etdi. Ushbu natijalar Fc-CV1 Fc-CV1 retseptorlari bilan o'ziga xos yaqinlik tufayli imikimod yuklangan lipozomalarning hujayra ichidagi etkazib berish qobiliyatini kuchaytirdi, bu esa o'simtaga qarshi yanada kuchli ta'sirga olib keldi.

Shakl 2. Erkin Cy5, ILPs-Cy5 va CILPs-Cy5 (qizil) bilan 0.5 soat davomida inkubatsiya qilingandan va DAPI (ko'k) bilan bo'yalgandan keyin CT26.WT hujayralarining tasvirlari. Masshtab satri: 50 mkm. (n {{10}}). * p <0,05; **** p <0,0001

2.3. Liposomalarning bo'shatish egri chiziqlari

Erkin imikimod, ILP va CILPlarning dori chiqarish egri chiziqlari simulyatsiya qilingan in vivo muhitda o'lchandi. 3-rasmda erkin imikimodning butunlay 1 soatdan so‘ng chiqarilishi ko‘rsatilgan, shu bilan birga ILP va CILP bilan qoplangan imikimodning chiqarish tezligi (RR) atigi 54,75 ± 4.012 soatda 8% va 39,70 ± 0,05% edi. , mos ravishda. Bundan tashqari, ILP va CILPlarda imikimodning sekin chiqarilishi lipozomalarning boshqariladigan dori-darmonlarni chiqarish xususiyati bilan yopilishi mumkin. ILP va CILPlarda imikimodning RR darajasi 96 soatda sezilarli farq ko'rsatmadi, bu "qo'yishdan keyingi" lipozomalarning membrana barqarorligiga ahamiyatsiz ta'sir ko'rsatganligini ko'rsatadi.

rasm 3. PBS da 37 ◦C da erkin imikimod, ILP va CILPlarning imikimod chiqarish egri chiziqlari. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (n=3) sifatida taqdim etiladi. * p < 0.05, ** p < 0,01

2.4. Sitotoksiklikni o'rganish

CILPlarning sitotoksikligini in vitroda o'rganish uchun CT26.WT hujayralarida CCK{0}} tahlili o'tkazildi. 4-rasmda ko'rsatilganidek, past konsentratsiyalarda (0,1-1 µg/ml) CILPlar sitotoksiklikni ko'rsatmadi, bu immunizatsiya terapiyasining xavfsizligiga mos keladi. Hujayra hayotiyligi 5 mkg/ml imikimod bilan davolashdan keyin biroz pasaygan, ehtimol ROS va endoplazmatik retikulum vositachiligida imikimod tomonidan qo'zg'atilgan immunogen hujayra o'limi tufayli [36]. Bundan tashqari, CILPlar nazorat guruhlariga nisbatan hujayra hayotiyligini sezilarli darajada pasayishiga olib keladi, bu imiquimod va Fc-CV1 ning sinergik ta'siri bilan bog'liq.

Shakl 4. 24 soat davomida Fc-CV1, imiquimod, CLP, ILP va CILP bilan ishlov berilgan hujayralarning hayotiyligi. Fc-CV1 va imikimodning kontsentratsiyasi ikkalasi ham 0–10 mkg/ml edi. * p < 0.05, ** p < 0.01, ns=sezilarli farqlar yoʻq

2.5. Biologik taqsimotni o'rganish

Shishlar va asosiy organlarda turli xil formulalarning tarqalishi va to'planishi terapevtik ta'sirga bevosita ta'sir qiladi. Vena ichiga yuborilgandan so'ng, 24 soatdan so'ng o'smalar va asosiy organlarda turli xil formulalarning tarqalishi va to'planishini baholash uchun yaqin infraqizil viviseksiya tizimi yordamida floresan signallari kuzatildi. 5-rasmda ko'rsatilganidek, ILPs-Cy5 va CILPs-Cy5 ning umumiy floresans intensivligi erkin Cy5 dan yuqori edi, bu lipozomalarning in vivo jonli ravishda uzoq aylanish xususiyatiga ega ekanligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, CILPs-Cy5 davolash guruhining floresans intensivligi o'simta to'qimalarida eng yuqori bo'lgan, bu Fc-CV1 ligandlarining o'simtaga qarshi ta'siri bilan bog'liq bo'lishi mumkin va shu bilan o'simtaga qarshi ta'sirni kuchaytiradi. Ajablanarlisi shundaki, jigar va taloqning floresans intensivligi boshqa organlarga qaraganda kuchliroq edi, bu, ehtimol, jigar va buyraklardagi retikuloendotelial tizim (RES) tomonidan lipozomalarning fagotsitozi bilan bog'liq [37].

Shakl 5. Vena ichiga yuborilgandan keyin 24 soat ichida o'smalar va asosiy organlarda Cy{1}}fluoressensiyaning tarqalishi. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (n=3) sifatida ko'rsatilgan. **** p < 0.0001

2.6. In Vivo o'simtani inhibe qilish tadqiqoti

Terapevtik jadval (6A-rasm) va turli preparatlarning ta'siri 6-rasmda ko'rsatilgan. PBS va LP guruhlari bilan taqqoslaganda, boshqa davolash guruhlari o'simtani bostiruvchi ta'sirlarni ko'rsatdi. Shunisi e'tiborga loyiqki, CILPlar bilan davolashdan keyin o'simta hajmi minimal bo'lgan, bu CILPlarning o'simtani bostirishning ajoyib ta'siriga ega ekanligini ko'rsatadi (6B-rasm).

Shakl 6. (A) CT26.WT o'simta modelida yo'g'on ichak saratoniga qarshi davolashning sxematik tasviri. (B) Davolanish davridagi o'sma hajmining o'sish egri chiziqlari. (C) nisbiy o'simta fotosuratlari va (D) 17-kundagi turli davolash guruhlaridan to'plangan o'simtaning og'irligi. (E) 0 kun bilan solishtirganda tana vaznining nisbiy tana vazni nisbati. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (n=5) sifatida taqdim etiladi. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.

Tajriba oxirida sichqonlar qurbonlik qilindi va turli preparatlarning terapevtik samaradorligini aniqlash uchun ularning o'simtalari kesildi, suratga olindi va tortildi. 6C, D-rasmda ko'rsatilganidek, CILPlarning davolash guruhi boshqa guruhlarga nisbatan eng kichik va engil o'smalarga ega bo'lib, CILPlarning eng katta o'simta bostiruvchi ta'sirga ega ekanligini ko'rsatdi. 2-jadval shuni ko'rsatadiki, CILPlarning o'simta o'sishini inhibe qilish darajasi 84,35% ni tashkil qiladi. Bundan tashqari, 84,35% o'smani bostirish darajasi CLP va ILP guruhlariga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi va bu "meni yemang" o'qini blokirovka qilish va immunitet reaktsiyasini faollashtirishning sinergik ta'siri borligini anglatadi. . In vitro (2,5-5 mkg/ml) ekvivalent preparat bilan solishtirganda, yuqori inhibisyon darajasi formulada faollashtirilgan immun javob bilan chambarchas bog'liq edi va in vitroda mavjud bo'lmagan immunitetdan qochish mexanizmini blokirovka qildi.

Jadval 2. Har xil davolash guruhlarining o'simta og'irligi va o'simta o'sishini inhibe qilish (TGI) ma'lumotlari.

2.7. CILPlar T-hujayra infiltratsiyasini va IFN sekretsiyasini oshiradi

O'smalarning immun hujayralari muhitini o'rganish uchun CILPlar tomonidan qo'zg'atilgan immun hujayra o'simtaga qarshi tahlil oxirida immunohistokimyoviy tahlil qilindi. CD4+ va CD{2}} T hujayralari CILPs guruhlari o'simta qismlarida ko'paygan (7-rasm). Fc-CV1 va imikimod terapiyasining birgalikda yuborilishi CD4+ va CD8+ T hujayralarining sezilarli infiltratsiyasiga olib keldi. Bundan tashqari, CILP bilan davolanayotgan o'smalarda sezilarli IFN sekretsiyasi mavjud edi, bu CILPlar Toll-ga o'xshash retseptor 7ni ishga tushirganligi va immun javobini faollashtirgani bilan bog'liq.

Shakl 7. Sichqoncha shishi to'qimalarining immunogistokimyosi; ijobiy hujayralar jigarrang rangga bo'yalgan. Masshtab satri, 50 mkm (n=5).

2.8. CILP biologik xavfsizligini baholash

CILP vositachiligidagi terapiyaning biologik xavfsizligi ham terapevtik baholashga kirish nuqtai nazaridan muhim ko'rsatkich edi. In vivo jonli ravishda o'simtani inhibe qilishni o'rganish davomida CILPlar davolash davrida sezilarli vazn yo'qotishiga olib kelmadi (6D-rasm). Jigar va buyrakning biokimyoviy ko'rsatkichlari sichqonlarning standart mos yozuvlar diapazoniga ko'ra normal diapazonda bo'lgan (3-jadval) va organ gistologiyasi sezilarli o'zgarishlarni ko'rsatmagan, bu CILPlarning biologik xavfsizligining mukammal ekanligini ko'rsatadi (8-rasm). Ushbu topilmalar saraton kasalligini davolash uchun xavfsiz va samarali immunoterapevtik vosita sifatida CILP potentsialini baholashda juda muhimdir.

Jadval 3. Jigar va buyrakning biokimyoviy ko'rsatkichlari

Shakl 8. Asosiy organlarning H&E (gematoksilin va eozin) bo'yalishi. Masshtab paneli, 50 mkm (n=3)

3. Materiallar va usullar

3.1. Materiallar

Imiquimod MedChem Express kompaniyasidan (Shanxay, Xitoy) sotib olingan. Fc-CV1 Antikor preparatlari va maqsadli terapiya davlat kalit laboratoriyasi tomonidan taqdim etilgan. Xolesterin, gidrogenlangan lesitin (HSPC), DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-NHS va DSPE-PEGCy5 Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (Xi'an, Xitoy) dan xarid qilingan. 40,{9}}diamidino-2-fenilindol (DAPI) Keygen Biotech kompaniyasidan (Nankin, Xitoy) olingan. Ammoniy sulfat Sinopharm (Shanxay, Xitoy) dan olingan. Metanol (xromatografik daraja) va asetonitril (xromatografik daraja) Aladdin Reagent kompaniyasidan (Shanxay, Xitoy) sotib olindi. Boshqa reagentlarning barchasi mahalliy analitik darajadagi. Sichqoncha yo'g'on ichak saratoni hujayra liniyasi CT26. WT Xitoy Fanlar akademiyasining Hujayra banki tomonidan taqdim etilgan. Hujayralar 5% CO2 va 95% havoda 10% FBS (Thermo Fisher Scientific, Nyu-York, NY, AQSh) o'z ichiga olgan RPMI 1640 muhitida hujayra inkubatorida o'stirildi. 4-6 haftalik ayol BALB/c sichqonlari Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd. (Jinan, Xitoy) tomonidan yetkazib berildi.

3.2. Bo'sh lipozomalarni tayyorlash

Birinchidan, 13,455 mg HSPC, 4,3595 mg DSPE-PEG2000 va 4,7095 mg xolesterin aniq tortildi va 0,1 ml etanolda eritildi (HSPC: DSPE-PEG2000: xolesterin {{12} 5,05:39,3 molyar nisbat). Ikkinchidan, etanol eritmasi shprits orqali oldindan qizdirilgan ammoniy sulfat eritmasiga (250 mM, 1 ml, 65 ◦C) tezlik bilan AOK qilindi va keyin magnit aralashtirish bilan 30 daqiqa davomida 65 ° C da inkubatsiya qilindi. Keyinchalik, tayyorlangan eritma polikarbonat membranalari (Avanti, Alabaster, AL, AQSh) orqali ketma-ket ekstrudirovka qilingan; hajmi mos ravishda 200 nm, 100 nm va 50 nm edi. Nihoyat, natijada olingan eritma lipid konsentratsiyasi 22,5 mg / ml bo'lgan bo'sh lipozomalar (LPs) edi.

3.3. CD47 maqsadli imiquimod-kapsullangan lipozomalarni tayyorlash

Birinchidan, DSPE-PEG2000-NHS ddH2O (60 ◦C) da eritildi va keyin Fc-CV1 bilan aralashtirildi va chayqaladigan stolda xona haroratida 5 soat davomida inkubatsiya qilindi (Fc-CV1: DSPPEG2000- NHS=12:1 molyar nisbat). Fc-CV1 va DSPE-PEG2000-NHS oʻrtasidagi bogʻlanishning kimyoviy reaksiya mexanizmi NHS esterining Fc-CV1 da birlamchi amin bilan reaksiyaga kirishishini oʻz ichiga olgan va jadval amin bogʻlanish konjugatini hosil qilgan. Tayyorlangan eritma proportsional ravishda LP bilan aralashtiriladi va Fc-CV1 ni lipozomalarga kiritish uchun 60 ◦C da 1 soat davomida inkubatsiya qilinadi, bu "qo'shishdan keyingi" [38] deb nomlanadi. Aralash nisbati 22,5 mg liposoma uchun 2,25 mg Fc-CV1 o'zgartirilgan edi. Keyin CD47 maqsadli lipozomalari (CLP) olindi.

Keyinchalik, CLPlar dializ paketiga (300 kDa) joylashtirildi va ammoniy sulfat va qoldiq Fc-CV1 ni tashqi suvli fazada olib tashlash uchun HEPES (10 mM, pH=7.4) ga qarshi 1 soat davomida dializ qilindi. Dializlangan CLPlar imikimod eritmasi (5 mg/ml) bilan xona haroratida 24 soat davomida 1 mg dan 7 mkmol umumiy fosfolipidlar nisbatida inkubatsiya qilindi va keyin kapsullanmagan imikimodni yo'q qilish uchun PBS (300 kDa) ga qarshi uch marta dializ qilindi. ammoniy sulfat gradienti texnikasi [39]. Keyin CILPlar olindi. Bundan tashqari, CD bo'lmagan maqsadli imikimod-kapsulalangan lipozomalar (ILP) tayyorlandi. CLP va ILPlar CILP uchun nazorat sifatida ko'rib chiqildi.

3.4. Xarakterlash

Ushbu lipozomalarning morfologiyasi transmissiya elektron mikroskopi (TEM, Joel, Tokio, Yaponiya) bilan suratga olingan. Ushbu lipozomalarning o'lchami, zeta-potentsial va polimer disperslik indeksi (PDI) Malvern's Zeta sizer ZSE (Malvern, Buyuk Britaniya) yordamida dinamik yorug'lik tarqalishi (DLS) va elektroforetik yorug'lik tarqalishi (ELS) bilan aniqlandi. Liposomalarga kiritilgan Fc-CV1 ning bog'lanish darajasi (BR) 15% natriy lauril sulfat-poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE) va Image J dasturi (Bethesda, MD, AQSh) bilan o'lchandi. Imikimodning inkapsulyatsiya samaradorligi (EE) yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC, Thermo Fisher Scientific, Nyu-York, NY, AQSh) orqali aniqlandi.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

3.5. In vitro hujayra o'zlashtirilishini o'rganish

Ushbu lipozomalarning in vitro hujayralari tomonidan qabul qilinishi CT26 da Cy5 ning kümülatif floresans intensivligi bilan aniqlandi. WT hujayralari. DSPE-PEG-Cy5 CILP va ILP (DSPE-PEG-Cy5: CILPs yoki ILPs=1: 5 massa nisbati) bilan mos ravishda 6{32}} ◦C da 1 soat, keyin esa floresan lipozomalar bilan inkubatsiya qilindi. CILPs-Cy5 va ILPs-Cy5 deb nomlangan. CT26.WT xujayralari 96-quduq plastinkalariga ekilgan va tasodifiy uch guruhga bo'lingan (1 × 104 hujayra/quduq, n=3). Hujayra qo'shilishi 50-70% ga etganidan so'ng, har bir guruh erkin Cy5, ILPs-Cy5 va CILPs-Cy5 bilan mos ravishda 30 minut davomida 37 ◦C da inkubatsiya qilindi, bunda Cy5 ning yakuniy konsentratsiyasi 1 mkg/ml ni tashkil etdi. 0,1 ml RPMI 1640 muhiti. Keyinchalik, hujayralar PBS bilan ikki marta yuvilgandan so'ng 15 daqiqa davomida 4% paraformaldegid bilan immobilizatsiya qilindi va keyin PBS bilan ikki marta yuvilganidan keyin 10 mkL DAPI (1 mkg / mL) bilan 10 daqiqa davomida bo'yaldi. Nihoyat, har bir hujayra guruhining qabul qilinishi PBS bilan ikki marta yuvilgandan so'ng, yuqori tarkibli tasvirlash tizimi (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, AQSH) tomonidan qayd etilgan.

3.6. Imiquimodning chiqarilishini o'rganish

Turli dori yuklangan lipozomalarning ajralib chiqish egri chiziqlari dializ usuli (300 kDa) yordamida amalga oshirildi va natijalar erkin imikimod eritmasi bilan solishtirildi. Qisqacha aytganda, 0.6 ml ILP, CILP va imikimod eritmasi dializ qoplariga alohida qadoqlangan va keyin 500 ml PBS eritmasiga (pH=7.4, 37 ◦C) joylashtirilgan. Oldindan belgilangan vaqt oralig'ida (0, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72 va 96 soat) va chiqish tezligi (RR) bo'yicha sumkalardan teng hajmdagi namunalar olingan. imikimod quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

Bu erda Sund va Sd mos ravishda turli vaqtlarda dializdan oldingi va dializlangan preparatlardagi imikimodning HPLC tepalik maydonini ifodalagan (n=3).

3.7. CILPlarning sitotoksikligi

CT{0}}.WT xujayralari 96-quduq plastinkasiga (1 × 104/quduq, n=3) ekilgan va birlashgunga qadar 100 mL RPMI 1640 muhitida kultivatsiya qilingan. 70% ga yaqinlashdi. CILPlarning sitotoksikligini aniqlash uchun RPMI 1640 muhiti har bir quduqdan olib tashlandi va o'rniga Fc-CV1 va imikimod konsentratsiyasi 0 dan 10 mkg/ml gacha bo'lgan CILP va RPMI 1640 muhitining murakkab eritmasi bilan almashtirildi. Hujayralar 24 soat davomida kompleks eritma bilan inkubatsiya qilindi. Bundan tashqari, xuddi shunday konsentratsiyada Fc-CV1, CLPs, imikimod eritmasi va ILPlar bilan ishlov berilgan hujayralar nazorat guruhlari deb hisoblangan. Tirik qolgan hujayralar CCK{17}} tahlili bilan 24 soatdan keyin aniqlandi va ishlov berilmagan hujayralarning hayotiyligi 100% deb hisoblandi.

3.8. Biologik taqsimotni o'rganish

To'qqizta ayol BALB/c sichqonlari teri ostiga CT26 bilan AOK qilingan. O'ng qanotdagi WT hujayralari (5 × 105) va bu o'simtali sichqonlar tasodifiy uchta guruhga bo'lingan (n=3). Shish hajmi kalibrlar yordamida o'lchandi va quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqildi:

O'simta hajmi 100 mm3 ga yetganda, erkin Cy5, ILP-Cy5 va CILPs-Cy5 0,4 mg/kg Cy5 dozasida vena ichiga yuborildi. Vena ichiga yuborilganidan 24 soat o'tgach, o'simta, yurak, jigar, taloq, o'pka va buyraklar chiqarildi. Shishlar va asosiy organlarning floresan signallari IVIS optik ko'rish tizimi (IVIS Lumina LT III, PerkinElmer, Waltham, MA, AQSh) tomonidan aniqlangan.

3.9. In Vivo o'simtani inhibe qilish tadqiqoti

O'ttiz besh ayol BALB/c sichqonlari tasodifiy ravishda etti guruhga bo'lingan (n=5) va 5 × 105 CT26. WT hujayralari har bir sichqonchaning o'ng qanotiga teri ostiga AOK qilingan. Sichqoncha o'simtasi hajmi taxminan 100 mm3 bo'lganida, davolash boshlandi. PBS, LPs, imiquimod, Fc-CV1, ILPs, CLPs va CILPs 0, 4, 8 va 12-kunlarda tomir ichiga yuborildi. Birinchi va ikkinchi in'ektsiyalarda imikimodning dozasi 2,5 mg / kg va 5 mg / kg ni tashkil etdi. uchinchi va to'rtinchi in'ektsiyalarda. Barcha in'ektsiyalarda Fc-CV1 dozasi 5 mg / kg ni tashkil etdi. Ushbu dozada organizmdagi preparat kontsentratsiyasi 2,5-5 mkg/ml ni tashkil etdi, bu in vitro tajribada hujayralarga sitotoksik ta'sir ko'rsatdi. Davolash paytida har kuni o'simta diametri va tana vazni o'lchanadi. 17-kuni sichqonlarning o'smalari olib tashlandi va ularning vazni o'lchandi. O'simta o'sishini inhibe qilish (TGI) quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan:

3.10. Immunogistokimyo

CD4, CD8 va IFN ni immunohistokimyoviy bo'yash standart protokolga muvofiq o'simta to'qimalarida amalga oshirildi. O'simta to'qimalari bo'limlarining kerosin qismini parafinsizlantirish va regidratatsiyadan so'ng, to'qimalarni qoplash uchun doiraga 3% BSA qo'shildi va u xona haroratida 30 daqiqa davomida muhrlandi. Bo'limlar CD4, CD8 va IFN antikorlari (Servicebio, Wuhan, Xitoy) bilan kechasi 4 ◦C da bo'yalgan va keyin xona haroratida 50 daqiqa davomida ikkilamchi antikor (HRP etiketli, Servicebio, Vuxan, Xitoy) bilan inkubatsiya qilingan. PBS bilan ikki marta yuvishdan keyin. Oxir-oqibat, bo'limlar DAB xromogen agenti bilan reaksiyaga kirishgandan so'ng, mikroskop ostida (Nikon, E100, Tokio, Yaponiya) vizualizatsiya qilindi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

3.11. CILP biologik xavfsizligini baholash

O'simtani inhibe qilish bo'yicha tadqiqot oxirida barcha o'smalar yig'ildi va bu o'smalarning og'irligi o'lchandi. Sichqonlarning qonida biokimyoviy ko'rsatkichlar, jumladan alanin transaminaza (ALT), aspartat transaminaza (AST), kreatinin (CREA) va karbamid (UREA) aniqlandi. Yangi o'simta to'qimalari va asosiy organlar 4% paraformaldegid bilan mahkamlangan va o'rnatish mashinasi yordamida kerosin ichiga kiritilgan (Wuhan Junjie Electronics, JB-P5, Wuhan, Xitoy). Qalinligi 5 mkm bo'lgan to'qimalar bo'laklari mikrotom orqali kesildi (Leica Instrument, RM2016, Shanxay, Xitoy) va keyin protokolga muvofiq gematoksilin va eozin (H&E) bilan bo'yalgan. Keyinchalik, bo'yash bo'laklari mikroskop ostida kuzatildi (Nikon, E100, Tokio, Yaponiya).

3.12. Statistik tahlil

Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi. Guruhlar orasidagi ahamiyatlilik darajasi Graphpad Prism 8 yordamida bir tomonlama ANOVA yordamida tekshirildi.0.2. p < 0.05 sezilarli farq sifatida aniqlandi.

3.13. Hayvonlar etikasi

Hayvonlarga tegishli barcha tartib va ​​tavsiyalar laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo‘yicha milliy ko‘rsatmalarga muvofiq Liaocheng universitetining Ilmiy tadqiqot etikasi bo‘yicha maxsus qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan (Tasdiqlash kodi: 2022111010; Tasdiqlash sanasi: 2022 yil 1 noyabr).

cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi

4. Xulosalar

Xulosa qilib aytganda, imikimod-kapsullangan CD{1}}maqsadli lipozomalar muvaffaqiyatli ishlab chiqildi va in vitro natijalari CILPlarning yaxshi barqaror chiqishi va aniq maqsadli ta'sirga ega ekanligini isbotladi. In vivo natijalar preparatni o'simta hujayralari tomonidan samarali qabul qilinishi mumkinligini ko'rsatdi va u immunitetning ikki tomonlama funktsiyasi va tug'ma immun nazorat nuqtasi blokadasi tufayli o'simtani davolashning ajoyib samaradorligi va biologik xavfsizligini namoyish etdi. Shuning uchun, Fc-CV1 bilan birlashtirilgan imiquimod-kapsulalangan lipozomalar CD47 ekspresyonu o'simtasini davolashni yaxshilash uchun yangi nanomikani va'da qilmoqda. Tug'ma immunitetga asoslangan immunoterapiya kelajakda ICB bilan sinergik birikmalar uchun o'simta o'sishiga qarshi umumiy strategiya bo'lib xizmat qilishi mumkin.

Ma'lumotnomalar

1. Sung, H.; Ferlay, J.; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bray, F. Global saraton statistikasi 2020: 185 ta mamlakatda 36 ta saraton kasalligi bo'yicha dunyo bo'ylab kasallanish va o'limning globokan taxminlari. CA saratoni J. Clin. 2021, 71, 209–249. [CrossRef] [PubMed]

2. Karlson, RD; Flickinger, JC, Jr.; Snook, AE Talkin' Toxins: Coleysdan zamonaviy saraton immunoterapiyasigacha. Toksinlar 2020, 12, 241. [CrossRef] [PubMed]

3. Barbari, C.; Fonteyn, T.; Parajuli, P.; Lamichhane, N.; Yakubskiy, S.; Lamichhane, P.; Deshmukh, RR immunoterapiyalari va immuno-onkologiya uchun kombinatsiya strategiyalari. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 5009. [CrossRef]

4. Hegde, PS; Chen, DS Saratonga qarshi immunoterapiyadagi eng yaxshi 10 ta muammo. Immunitet 2020, 52, 17–35. [CrossRef]

5. Jain, KK Shaxsiylashtirilgan immuno-onkologiya. Med. Princ. Amaliyot. 2021, 30, 1–16. [CrossRef]

6. Sanmamed, MF; Chen, L. Saraton immunoterapiyasida paradigmaning o'zgarishi: yaxshilashdan normalizatsiyagacha. Hujayra 2018, 175, 313–326. [CrossRef]

7. Husayn, V.M.; Liu, TY; Skvarchinski, M.; Toth, I. Toll-like retseptorlari agonistlari: Patentni ko'rib chiqish (2011-2013). Ekspert fikri. U erda. Pat. 2014, 24, 453–470. [CrossRef]

8. Chi, X.; Li, C.; Chjao, FS; Chjan, L.; Ng, TB; Jin, G.; Sha, O. Toll-like retseptorlari 7 agonistlarining o'simtaga qarshi faolligi. Old. Farmakol. 2017, 8, 304. [CrossRef] [PubMed]

9. Vang, Y.; Chjan, S.; Li, H.; Vang, X.; Chjan, T.; Hutchinson, MR; Yin, H.; Vang, X. Toll kabi retseptorlarning kichik molekulali modulyatorlari. Acc. Kimyo. Res. 2020, 53, 1046–1055. [CrossRef] [PubMed]

10. Le Mercier, I.; Pujol, D.; Sanlavil, A.; Sisirak, V.; Gobert, M.; Durand, I.; Dubois, B.; Treilleux, I.; Marvel, J.; Vlach, J.; va boshqalar. Intratumoral plazmasitoid dendritik hujayralar tomonidan o'simta rivojlanishi Tlr7 ligand bilan davolash orqali qaytariladi. Saraton Res. 2013, 73, 4629–4640. [CrossRef]

11. Ma, F.; Chjan, J.; Chjan, J.; Chjan, C. Tlr7 agonistlari Imiquimod va Gardiquimod sichqonlarda melanoma uchun DC asosidagi immunoterapiyani yaxshilaydi. Hujayra. Mol. Immunol. 2010, 7, 381–388. [CrossRef]

12. Billan, S.; Kaidar-Person, O.; Gil, Z. Immunoterapiya davridagi taraqqiyotdan keyin davolash. Lancet Onkol. 2020, 21, e463–e476. [CrossRef] [PubMed]

13. Darvin, P.; Toor, SM; Sasidxaran Nair, V.; Elkord, E. Immunitetni nazorat qilish punkti ingibitorlari: so'nggi taraqqiyot va potentsial biomarkerlar. Exp. Mol. Med. 2018, 50, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

14. Li, B.; Chan, HL; Chen, P. Immunitetni nazorat qilish punkti ingibitorlari: asoslar va muammolar. Curr. Med. Kimyo. 2019, 26, 3009–3025. [CrossRef] [PubMed]

15. Jia, X.; Yan, B.; Tyan, X.; Liu, Q.; Jin, J.; Shi, J.; Hou, Y. Cd47 / Sirpalpha yo'li saraton kasalligining immunitetidan qochish va immunoterapiya vositachiligida. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 3281–3287. [CrossRef]

16. Svoboda, DM; Sallman, DA Miyeloid malign o'simtalarda makrofaglarga yo'naltirilgan nazorat nuqtasi ingibitorlarining va'dasi. Eng yaxshi amaliyot va tadqiqot. Klin. Gematol. 2020, 33, 101221.

17. Lentz, RV; Kolton, MD; Mitra, SS; Messersmit, WA tug'ma immun nazorat nuqtasi ingibitorlari: tibbiy onkologiyada navbatdagi yutuqmi? Mol. Saraton Ther. 2021, 20, 961–974. [CrossRef]

18. Jiang, P.; Lagenaur, CF; Narayanan, V. Integrin bilan bog'langan oqsil P84 Neyron yopishish molekulasi uchun liganddir. J. Biol. Kimyo. 1999, 274, 559–562. [CrossRef]

19. Seyffert, M.; Kant, C.; Chen, Z.; Rappold, I.; Brugger, V.; Kanz, L.; Brown, EJ; Ullrix, A.; Buhring, HJ Inson signalini tartibga soluvchi oqsil leykemik miyeloid hujayralar quyi to'plamlarida emas, balki normalda ifodalanadi va uning Cd47 qarshi retseptorlari ishtirokida hujayra yopishishiga vositachilik qiladi. Qon 1999, 94, 3633–3643. [CrossRef]

20. Matlung, HL; Szilagyi, K.; Barclay, NA; van den Berg, TK Cd47-Sirpalpha signalizatsiya o'qi saraton kasalligida tug'ma immunitetni nazorat qilish nuqtasi sifatida. Immunol. Vahiy 2017, 276, 145–164. [CrossRef] [PubMed]

21. Oldenborg, Pensilvanya; Jeleznyak, A.; Fang, YF; Lagenaur, CF; Gresham, HD; Lindberg, FP Cd47 ning qizil qon hujayralarida o'zini o'zi belgilovchi roli. Fan 2000, 288, 2051–2054. [CrossRef]

22. Li, Z.; Li, Y.; Gao, J.; Fu, Y.; Hua, P.; Jing, Y.; Cai, M.; Vang, X.; Tong, T. Cd47-Sirpalpha immun nazorat punktining o'simta immunitetidan qochish va tug'ma immunoterapiyadagi roli. Hayot fanlari. 2021, 273, 119150. [CrossRef]

23. Hayot, SMG; Biankoni, V.; Pirro, M.; Jafariy, MR; Hatamipur, M.; Sahebkar, A. Cd47: Immun tizimidagi roli va saratonni davolashda qo'llanilishi. Hujayra. Onkol. 2020, 43, 19–30. [CrossRef]

24. Xuan, Y.; Ma, Y.; Gao, P.; Yao, Z. Targeting Cd47: Saraton immunoterapiyasi bo'yicha joriy tadqiqotlarning yutuqlari va tashvishlari. J. Torak. Dis. 2017, 9, E168–E174. [CrossRef]

25. Chjan, V.; Xuan, Q.; Syao, V.; Chjao, Y.; Pi, J.; Xu, X.; Chjao, X.; Syu, J.; Evans, Idoralar; Jin, H. Cd47/Sirpalpha o'qini maqsad qilib olgan o'simtaga qarshi muolajalardagi yutuqlar. Old. Immunol. 2020, 11, 18. [CrossRef] [PubMed]

26. Liu, X.; Pu, Y.; Kron, K.; Deng, L.; Kline, J.; Freyzer, VA; Xu, X.; Peng, H.; Fu, YX; Xu, MM Cd47 blokadasi immunogen o'smalarning T hujayra vositachiligida yo'q qilinishini qo'zg'atadi. Nat. Med. 2015, 21, 1209–1215. [CrossRef] [PubMed]

27. Vayskopf, K.; Ring, AM; Xo, CC; Volkmer, JP; Levin, AM; Volkmer, AK; Ozkan, E.; Fernhoff, NB; van de Rijn, M.; Vaysman, IL; va boshqalar. Saratonga qarshi antikorlar uchun immunoterapevtik yordamchi sifatida ishlab chiqilgan Sirpalfa variantlari. Fan 2013, 341, 88–91. [CrossRef]

28. Xiong, Z.; Ohlfest, JR Topikal Imiquimod intrakranial o'smalarga qarshi terapevtik va immunomodulyatsion ta'sirga ega. J. Immunother. 2011, 34, 264–269. [CrossRef]

29. Kamat, P.; Darvin, E.; Arora, H.; Nouri, K. Imiquimod terapiyasi bo'yicha sharh va bazal hujayrali karsinomalarni optimal boshqarish bo'yicha muhokama. Klin. Giyohvand moddalarni tekshirish. 2018, 38, 883–899. [CrossRef]

30. Liu, Y.; Kastro Bravo, KM; Liu, J. Maqsadli liposomal dori vositalarini etkazib berish: nanofan va biofizika nuqtai nazari. Nano o'lchovli Horiz. 2021, 6, 78–94. [CrossRef] [PubMed]

31. Farjadyan, F.; G'azemi, A.; Gohari, O.; Ruintan, A.; Karimi, M.; Hamblin, MR Nanofarmatsevtika va nanomedicilar Hozirda bozorda: muammolar va imkoniyatlar. Nanomedicine 2019, 14, 93–126. [CrossRef]

32. Chjou, X.; Jiao, L.; Qian, Y.; Dong, Q.; Quyosh, Y.; Chjen V.; Chjao, V.; Chjay, V.; Qiu, L.; Vu, Y.; va boshqalar. Azelnidipinni Cd47/Sirpalpha va Tigit/Pvr yo'llarini saraton immunoterapiyasiga yo'naltiruvchi ikkilamchi inhibitor sifatida qayta joylashtirish. Biomolekulalar 2021, 11, 706. [CrossRef]

33. Ni, K.; Luo, T.; Kulbert, A.; Kaufmann, M.; Jiang, X.; Lin, W. Nanoscale metall-organik ramka makrofaglarni modulyatsiya qilish va saraton immunoterapiyasini tashkil qilish uchun Tlr-7 agonistlari va anti-Cd47 antikorlarini birgalikda etkazib beradi. J. Am. Kimyo. Soc. 2020, 142, 12579–12584. [CrossRef]

34. Chen, Q.; Xu, L.; Liang, C.; Vang, C.; Peng, R.; Liu, Z. Immun-adjuvan nanopartikullar bilan fototermal terapiya Saratonning samarali immunoterapiyasi uchun nazorat nuqtasi blokadasi bilan birgalikda. Nat. Kommun. 2016, 7, 13193. [CrossRef] [PubMed]

35. Vey, J.; Long, Y.; Guo, R.; Liu, X.; Tang, X.; Rao, J.; Yin, S.; Chjan, Z.; Li, M.; U, Q. Ortotopik va metastatik ko'krak bezi saratonini samarali davolash uchun immun nazorat nuqtasi blokadasi bilan ko'p funktsiyali polimerik mitselli asosidagi kimyo-immunoterapiya. Acta Pharm. Gunoh. B 2019, 9, 819–831. [CrossRef]

36. Huang, SW; Vang, ST; Chang, SH; Chuang, KC; Vang, HY; Kao, JK; Liang, SM; Vu, CY; Kao, SH; Chen, YJ; va boshqalar. Imiquimod immunogen hujayralar o'limini qo'zg'atish orqali antitumor ta'sir ko'rsatadi va glikolitik inhibitör 2-deoksiglyukoza tomonidan kuchaytiriladi. J. Tergov. Dermatol. 2020, 140, 1771–1783.e6. [CrossRef] [PubMed]

37. Vang, B.; U, X.; Chjan, Z.; Chjao, Y.; Feng, W. Nanomateriallarning Vivo jonli metabolizmi: qon aylanishi va organlarni tozalash. Acc. Kimyo. Res. 2013, 46, 761–769. [CrossRef]

38. Axtari, J.; Rezayat, SM; Teymuri, M.; Alavizoda, SH; Geybi, F.; Badi, A.; Jaafari, MR Targeting, Bio-distributiv va o'simta o'sishini inhibe qiluvchi Anti-Her2 Affibody ulanishining liposomal doksorubitsinga Balb / C sichqonlari Tubo o'smalari yordamida. Int. J. Pharm. 2016, 505, 89–95. [CrossRef]

39. Vudl, MC; Papahadjopoulos, D. Liposoma tayyorlash va hajmini tavsiflash. Usullari Enzimol. 1989, 171, 193–217. [PubMed]