Cistanche kimyoviy faol moddalarini aniqlash usuli

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com

X500R QTOF tizimi yordamida Cistanche Desertikolaning kimyoviy komponentlarini aniqlash

Li Yuejie, Cheng Xaiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Osiyo Tinch okeani ilovalarini qo'llab-quvvatlash markazi (Shanxay), Xitoy

Kirish

Cistanche deserticolabirinchi marta "Shen Nong Materia Medica" da qayd etilgan; u "Dayun", "Rousong Rong" va "Zong Rong" nomi bilan ham tanilgan. An'anaviy o'simlik dori sifatida u buyrakni oziqlantirish, qon oqimini yaxshilash, laksatif, immunitetni rag'batlantirish va boshqa ta'sirga ega [1]. 1983 yilda yapon olimi X. Kobayashi va boshqalar kimyoviy tarkibini o'rganishga kirishdilarCistanche Deserticol[2] va o'shandan beri bu so'nggi 30 yil ichida mahalliy va xorijda katta qiziqish uyg'otgan Xitoy tibbiyoti tadqiqotlarida mashhur mavzuga aylandi.Cistanche Deserticolfenolik moddalarni o'z ichiga olgan o'simliklar sinfiga kiradiglikozidlar, iridoidlar va ularningglikozidlar, va lignanlar va ularningglikozidlar.

Quadrupole vaqt-of-flight (QTOF) massa spektrometriyasi asta-sekin tadqiqot uchun ajralmas holga kelgan Xitoy tibbiyotining tarkibiy qismlarini aniqlash uchun sezgir va o'ziga xos vositadir. Ushbu texnologiya muhim ma'lumotlarni olish va namuna ma'lumotlarini eng keng qamrovli olish imkonini beruvchi yagona in'ektsiyalarni retrospektiv tahlil qilish orqali an'anaviy texnik qiyinchiliklarni engib o'tdi. Aniq ommaviy va yuqori aniqlikdagi TOF-MS va TOF-MS/MS ma'lumotlaridan foydalanish bir vaqtning o'zida yuqori aniq maqsadli va maqsadli bo'lmagan sifatli tahlil qilish imkonini beradi. Biroq, asboblarning ishlashi va dasturiy ta'minotdan foydalanishning murakkabligi ushbu texnologiyaning tarqalishi va rivojlanishini sezilarli darajada cheklab qo'ydi. Bu erda biz inqilobiy yangi N-tipli geometriyaga asoslangan TOF yo'lidan, intuitiv dasturiy ta'minotdan va Xitoy tibbiyoti komponentlarini identifikatsiyalashda foydalanish uchun qulay bo'lgan aniq molekulyar og'irlik texnikasidan foydalanadigan yangi QTOF tizimini taqdim etamiz.

Ushbu usulning afzalliklari quyidagilardan iborat:

1. X500R bardoshli, sanoat tomonidan tasdiqlangan Turbo VTM ion manbai va havo pardasi gaz interfeysi dizaynidan foydalanadi, bu kuchli ifloslanishga qarshi xususiyatga ega;

2. SCIEX OS Software yagona platformada integratsiyalashgan olish, qayta ishlash va hisobot berish funksiyalariga ega; interfeys intuitiv, o‘zlashtirish oson va har qanday tajribaga ega bo‘lgan tahlilchilar yuqori sifatli, ishonchli ma’lumotlarni olishini ta’minlash uchun bir marta bosish orqali avtomatik sozlash tuzatishga ega;

3. Xitoy tibbiyoti tarkibiy qismlarini aniqlash uchun ma'lumotlarni qayta ishlash uchun SCIEX OS dasturiy ta'minotidan foydalanish oddiy va foydali ma'lumotlarni tezda olish imkonini beradi, shuning uchun ;

4. MS / MS spektrlarini o'z ichiga olgan Xitoy tibbiyot kutubxonalaridan aniqroq va ishonchli identifikatsiya natijalarini oladi;

5. Yuqori aniqlikdagi MS/MS Xitoy tibbiyoti maʼlumotlar bazalari “Xitoy farmakopiyasi” 1-qism TCM faol moddalariga asoslangan; Farmakopeyadagi komponentlarga havolalar va o'tlar tarkibidagi faol moddalar, shu jumladan 900 ga yaqin birikmalar mavjud

cistanche deserticola samaradorligini oshiradi

Eksperimental jarayon

1. TOF-MS-IDA MS/MS rejimidan foydalanib, namunani kiriting va bir vaqtning o'zida birlamchi prekursor ionlari va mos keladigan ikkilamchi spektrlarni oling;

2. SCIEX OS dasturiy ta'minotidan maqsadli skrining, maqsadli birikmalar va ikkilamchi spektrlarni tasdiqlash, shuningdek, Xitoy tibbiyoti standartlari va mos keladigan usullarni tekshirish aniqlik va ish unumdorligini oshirishi mumkin.

3. SCIEX OS Software dasturining maqsadli boʻlmagan identifikatsiya ish jarayoni natijalarni tekshirish uchun kutubxona qidiruvlari va ChemSpider’da toʻliq nomaʼlum qidiruvlardan foydalanadi, bu esa oddiyroq ish jarayoni bilan koʻproq komponentlarning aniqlanishini taʼminlaydi.

Namunalar va oldindan ishlov berish usuli

Namuna manbasi:

Shanxay dorixonalaridan dilimlangan holda sotib olingan

Oldindan ishlov berish usuli:

1. Dilimlar kukun hosil qilish uchun ezilgan;

2. 0.9mg tortildi va 40 daqiqa davomida 3ml metanolga botirildi;

3. 2-bosqichdan olingan namuna 1 soat ultratovushlangan;

4. Namuna sifatida foydalanish uchun santrifüjlash va supernatantni olib tashlash amalga oshirildi.

Suyuq xromatografiya (LC) shartlari

Xromatografik ustun: XSelect HSS T3, 2.1*150mm, 3.5µm;

Mobil faza: Gradient elyusiyasi ishlatilgan

Mobil faza: A 0,1 foiz chumoli kislotasi suvi-2mM NH4FA

B - 95% asetonitril-5% suv-2mM NH4FA

Oqim tezligi: 0,5 ml/min

Ustun harorati: 40ºC

Kiritilgan miqdor: 5µL

Mass-spektrometriya usuli:

Skanerlash usuli: TOF MS-IDA-15 MS/MS sifatli skriningi

ESI ion manba parametrlari:

Havo pardasi gazi CUR: 35psi; IS kuchlanishi: 5500V/-4500V

Manba harorati: 600ºC

Atomlashtiruvchi gaz GAS1: 55psi; Yordamchi gaz GAS2: 60psi

Asboblar rejimini qidirish:

Bir marta bosish (pastki o'ngda MS Check-ni tanlang), to'liq avtomatlashtirilgan TOF-MS va TOF-MS/MS tuzatish rejimi har qanday tajriba darajasidagi tahlilchilar aniq, ishonchli va takrorlanadigan ma'lumotlarni olishini ta'minlaydi.

Ijobiy va manfiy ion rejimi BPClari:

Murakkab identifikatsiya qilish tartibi

1. Maqsadli komponentni identifikatsiya qilish ish jarayoni

1.1: Molekulyar formulalarni qidirish

Faqat kimyoviy birikma nomi va molekulyar formula talab qilinadi; Ular to'g'ridan-to'g'ri kiritilishi yoki ishlov berish usulini yaratish uchun Excelning nusxalash va joylashtirish funksiyasi yordamida import qilinishi mumkin

Natijalar jadvali yaratilgandan so'ng, miqdoriy va sifat natijalarini bir xil oynada ko'rish mumkin. Qizil/yashil indikator tizimi massa aniqligini, ushlab turish vaqtini, izotop turini va ma'lumotlar bazasini moslashtirish orqali identifikatsiyaga ishonchni ko'rsatish uchun ishlatiladi.

SCIEX OS dasturiy ta'minoti foydalanuvchilarga natijalarni filtrlash va faqat qabul qilish mezonlariga javob beradigan va foydalanuvchi tomonidan belgilangan ishonch oralig'iga to'g'ri keladigan birikmalarni ko'rsatish imkonini beradi. Katta ma'lumotlar bazalarida maqsadli natijalarni tezda topishi mumkin.

MS/MS spektrlarining TCM ma'lumotlar bazasi ikkilamchi moslashishga imkon beradi va ishonchliroq natijalar beradi (ma'lumotlar bazasidagi kul rang MS/MS ma'lumotlarini bildiradi)

Adabiyotda fenolik moddalarning nomlari va molekulyar formulalari mavjudglikozidfaol moddalar. Maqsadli komponentlarni aniqlash uchun yuqoridagi jarayondan foydalanib, namunada 39 turdagi fenolik glikozidlar mavjudligi aniqlandi:

Fenolikdan tashqariglikozidfaol komponentlar, Cistanche shuningdek, iridoidlar, glikozidlar va lignanlar kabi ko'plab birikmalarni o'z ichiga oladi. Identifikatsiya natijalari quyidagicha:

Iridoidlar, glikozidlar va lignanlarni aniqlash ro'yxati:

1.2: Ma'lumotlar bazasini qidirish:

TCM ma'lumotlar bazasida mos keladigan identifikatsiyadan 53 ta birikma olindi: 43 ta ijobiy ion, 22 ta manfiy ion va 12 ta takrorlash, quyida keltirilgan. Faol fenolikdan tashqariglikozidlar, iridoidlar, glikozidlar va lignanlar, Cistanche ham o'z ichiga oladi

2. Maqsadli bo'lmagan komponentlar tahlili

Maqsadli bo'lmagan komponentlarni identifikatsiyalash noma'lumlarning tasnifi va turini aniqlash uchun o'rnatilgan ChemSpider qidiruv funktsiyasi bilan amalga oshirilishi mumkin. Maqsadli bo'lmagan komponentni identifikatsiya qilish uchun oddiygina "maqsadli bo'lmagan" rejimni tanlang va molekulyar formulalarni qidirish ishlov berish usulini ishlab chiqadi. Ish jarayoni quyidagicha:

To'liq noma'lumlar uchun molekulyar formulalar bo'yicha qidiruv natijalari TOF MS massa spektrining pastki qismidagi eng yuqori brauzer oynasida ko'rsatiladi; ChemSpider ma'lumotlar bazasini qidirish bilan natijalar ustuvorlik bo'yicha ro'yxatga olinadi va ChemSpider-da olingan tizimli ma'lumotlar olingan MS/MS spektri bilan avtomatik ravishda taqqoslanadi va tezkor identifikatsiya qilish uchun ikkilamchi fikr-mulohazalarni ta'minlaydi.

Xulosa

1. Yuqori aniqlikdagi ma'lumotlarni tezkor yig'ish; bitta in'ektsiya yuqori aniqlikdagi TOF MS va MS / MS ma'lumotlarini berdi, 39 ta aniqlanishi mumkin bo'lgan fenolik glikozid faol komponentlari va 16 ta iridoidlar, lignanlar va glikozidlar;

2. Ikkilamchi spektrlarning TCM ma'lumotlar bazasi qo'shimcha mos keladigan ma'lumotlarni taqdim etadi va dasturiy ta'minot avtomatik ravishda ma'lumotlar bazasiga mos keladigan ball beradi. Skordan foydalanib, Xitoy tibbiyotining tarkibiy qismlarini osongina, tez va aniq aniqlash mumkin;

3. Qurilma oddiy va har qanday darajadagi tajribaga ega bo'lgan tahlilchilar yuqori sifatli, ishonchli ma'lumotlarni olishini ta'minlash uchun bir tegish bilan avtomatik sozlashni tuzatishga ega;

4. Yangi SCIEX OS dasturiy ta'minot versiyasi ma'lumotlarni yig'ish, qayta ishlash (miqdoriy va sifat), ko'rsatish, hisobot berish va ma'lumotlar bazasini boshqarishni birlashtiradi. Ko'p foydalanuvchilar intuitiv va ishlatish uchun qulay interfeys bilan duch keladigan qiyinchiliklarni hal qiladi;

5. Maqsadli va maqsadli bo'lmagan skrining ish oqimlari oddiy va o'rnatilgan usul qo'llanmasi foydalanuvchilarga usullarni aniq va tez yaratishga yordam beradi.

Ma'lumotnomalar

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, XXR farmakopiyasi [S]. Pekin: Milliy farmakopiya komissiyasi, 2015 yil

2. Ley, Song Zhihong, Tu Pengfey; Cistanche jinsiga mansub o'simliklarning kimyoviy tarkibi bo'yicha tadqiqot yutuqlari, "Xitoy o'simlik tibbiyoti", 34-jild, № 5, 2003 yil, 473-476.