Cistanche polisaxarid qanday qilib melanogenezni pasaytiradi va oksidlovchi stressni kamaytiradi?
Mar 14, 2022
Qo'shimcha ma'lumot olish uchun quyidagi manzilga murojaat qiling:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche deserticola polisaxarid melanotsitlarda melanogenezni qo'zg'atadi va oksidlovchi stressni kamaytiradi
1Dermatologiya boʻlimi, Uchinchi Xiangya kasalxonasi, Markaziy Janubiy universiteti, Changsha, Xitoy
2 Urologiya bo'limi, Uchinchi Xiangya kasalxonasi, Markaziy Janubiy universiteti, Changsha, Xitoy
3Medicine eksperimental markazi, Uchinchi Xiangya kasalxonasi, Markaziy Janubiy universiteti, Changsha, Xitoy
Cistanchedesertikolako'p effektlarga ega, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing
Abstrakt: Pigmentatsiya kasalliklarining asosiy qismi sifatida vitiligo va akromik nevus kabi teri depigmentatsiyasi kasalliklari juda keng tarqalgan va hozir ko'proq e'tiborni tortmoqda. Depigmentatsiyaning patogenezi melanotsitlar disfunktsiyasi va yo'qolishini o'z ichiga oladi, bu irsiyat, otoimmunitet va oksidlovchi stress tufayli yuzaga kelishi mumkin. Ular orasida,oksidlovchi stressasosiy rol o'ynaydi; ammo, bir nechta klinik muolajalar oksidlovchi stress bilan shug'ullanishi mumkin. Xabar qilinganidek,Cistanchedesertikola polisakkarid(CDP) samarali antioksidantdir; shunga asoslanib, biz uning melanotsitlardagi rolini baholadik va mexanizmlarni yanada aniqladik. Ushbu tadqiqotda biz CDP inson epidermal melanotsitlarida (HEMs) va sichqonchaning melanomasi B16F10 hujayralarida melanogenezni rag'batlantirishi mumkinligini aniqladik, shuningdek, zebrafishlarda pigmentatsiyani keltirib chiqardi. Bundan tashqari, CDP mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) signal yo'lini faollashtirishi mumkin, so'ngra mikroftalmiya bilan bog'liq transkripsiya omili (MITF) va quyi oqim genlari TYR, TRP1, TRP2 va RAB27A ifodasini yuqori tartibga solishi mumkin. Aks holda, CDP melanotsitlardagi H2O2-sitotoksiklik va apoptozni susaytirishi mumkinligini aniqladik. Boshqa dalillar shuni ko'rsatdiki, CDP NRF2/HO-1 antioksidant yo'lini kuchaytirishi va hujayra ichidagi ROSni tozalashi mumkin. Xulosa qilib aytganda, CDP melanogenezni rag'batlantirishi va melanotsitlarni oksidlovchi stress shikastlanishining oldini olishi mumkin, bu CDP melanotsitlarning normal holatini saqlashga yordam beradi. Shunday qilib, CDP depigmentatsiya kasalliklarini davolash uchun yangi dori bo'lishi mumkin.
Kalit so‘zlar:
Cistanche deserticola polisakkarid, depigmentatsiya kasalligi, melanotsit, melanogenez, NRF2,oksidlovchi stress
1.KIRISH
Teri depigmentatsiyasining kasalliklari, masalan, vitiligo va akromik nevus, terining yamoqli yoki keng ko'lamli depigmentatsiyasi bilan tavsiflanadi.1 Teri lezyonlari kamdan-kam hollarda jiddiy jismoniy shikastlanishga olib keladi, ammo ular bemorning tashqi ko'rinishiga ta'sir qiladi va og'ir psixologik yukni, hatto ruhiy salomatlik buzilishlarini ham yaratadi.2 depigmentatsiyadagi asosiy patologik o'zgarishlar orasida melanotsitlar disfunktsiyasi va yo'qolishi kiradi, bu melanin sintezi va tashilishiga katta ta'sir qiladi3, bu esa terida melaninning etarli darajada to'planishiga olib keladi.
Depigmentatsiya bilan bog'liq mexanizmlar hozircha noma'lum, ammo tadqiqotlar ba'zi bir bog'liq omillarni aniqladi. Bir tomondan, melanotsitlar funktsiyasi qisman mikroftalmiya bilan bog'liq transkripsiya omiliga (MITF) bog'liq bo'lib, u melanogenez bilan bog'liq genlar, shu jumladan tirozinaz (TYR), tirozinaz bilan bog'liq protein 1 (TRP1), tirozinaz bilan bog'liq genlarning ifodalanishini rag'batlantirish uchun yaxshi ma'lum. protein 2 (TRP2), ras bilan bog'liq protein Rab-27a (RAB27A) va fassin aktin biriktiruvchi protein 1 (FSCN1).4 Bu genlar orasida TYR l-dopa oksidlanishi orqali melanin sintezida asosiy rol o'ynaydi. dopaquinone.5 Boshqa tomondan, tadqiqotlar melanotsitlar yo'qolishi uchun mas'ul bo'lishi mumkin bo'lgan irsiyat, atrof-muhit, autoimmunitet va oksidlovchi stress kabi bir nechta omillarning kombinatsiyasini taklif qiladi.6-9 Bu omillar orasida oksidlovchi stress eng muhimi hisoblanadi. .
Mexanizmlarioksidlovchi stressdepigmentatsiyaga olib keladigan omillar qisman aniqlangan; Reaktiv kislorod turlarining (ROS) haddan tashqari yuklanishi asosiy omillardan biridir.10 Depigmentatsiyada ROS haddan tashqari yuklanishi pro-va antioksidant tizimlar o'rtasidagi muvozanatni o'z ichiga oladi.11 Bu muvozanatsizlikda ishtirok etuvchi elementlardan biri eritroid yadro omili 2-bog'liqdir. omil 2/antioksidant javob elementi (NRF2/ARE) antioksidant yo‘lning buzilishi.12 Yo‘l NRF2 va gemoksigenaza-1 (HMOX-1, HO-1) kabi antioksidant fermentlardan iborat. , katalaza (CAT), glutation peroksidaza 1 (GPX1) va NAD(P)H xinondehidrogenaza 1 (NQO1) .13 Melanotsitlar haddan tashqari ROS ta'sirida bo'lganda, NRF2 yadroga o'tishi va saqlanib qolgan ARE bilan bog'lanishi mumkin, keyin esa rag'batlantiriladi. antioksidant fermentlarning ifodasi. Biroq, vitiligo kabi ba'zi depigmentatsiya kasalliklarida, buzilgan NRF2/ARE antioksidant yo'li ROSni samarali ravishda tozalay olmaydi.14 Depigmentatsiyada keng qo'llaniladigan klinik davolash usullariga topikal yoki tizimli kortikosteroidlar, kalsinevrin inhibitörleri, tor diapazonli ultrabinafsha B (NBUV1Bn;) kiradi. , 308-nm eksimer nuri, otologik epidermal transplantatsiya va an'anaviy xitoy tibbiyoti (TCM) terapiyasi. Kortikosteroidlar va kalsineurin inhibitörleri g'ayritabiiy immunitet faollashuvini kamaytirishi mumkin15, fototerapiyalar birinchi darajali davolash sifatida ishlatiladi; xususan, NBUVB melanotsitlar proliferatsiyasini va T-hujayralarini yo'q qilishni rag'batlantiradi,16 esa 308-nm eksimer nuri T hujayralari apoptozini qo'zg'atadi.17 Bundan tashqari, TCM terapiyasining ta'siri melanogenezni rag'batlantirish bilan bog'liq.18 Ma'lum darajada, bu usullar depigmentatsiyani yaxshilashga yordam beradi, ammo kasallikning rivojlanishini nazorat qilish qiyinligicha qolmoqda. Ayniqsa, ilgari e'tibordan chetda qolgan oksidlovchi stress uchun yangi davolash usullarini ishlab chiqish kerak.
Cistanche deserticola"cho'l jenshen" nomi bilan tanilgan.19 Uning tarkibiy qismlari etanol sabab bo'lgan jigar shikastlanishi va ichakning yallig'lanish giperplaziyasida foydalidir; u charchoqqa qarshi, yallig'lanishga qarshi va o'smaga qarshi reagent sifatida ham qo'llanilishi mumkin.20-22 Yaqinda Guo va boshq.Cistanche deserticola polisakkarid(CDP), uning asosiy komponentlaridan biri antioksidant va gepatoprotektiv faollikka ega20; yana ikkita tadqiqot uning kislorod-glyukoza etishmovchiligi/reperfuziyasi va osteoporoz sharoitida hujayralarni shikastlanishdan himoya qilishdagi rolini aniqladi.23,24 Biroq, depigmentatsiya kasalliklarida CDP ning roli aniqlanmagan. Bu erda biz CDP v yoki yo'qligini tasdiqlashni maqsad qilganmizoksidlovchi stressmelanogenezga ta'sir qiladi va melanotsitlarni oksidlovchi stressdan himoya qiladi.
2.|MATERIAL VA USULLAR
2.1|Kimyoviy moddalar va antikorlar
Cistanche deserticolapolisakkarid(CDP) va l-dopa Yuanye Biotec kompaniyasidan sotib olingan (tozaligi 98 foizdan yuqori yoki unga teng; Shanxay, Xitoy). Vodorod periks (H2O2), dimetil sulfoksid (DMSO), NaOH, Triton X-100, 4,5-dimetiltiazol-2-il-2,5-difeniltetrazolium bromid ( MTT) va Annexin V-FITC apoptozni aniqlash to'plami Sigma-Aldrichdan sotib olindi. 4 foiz neytral paraformaldegid Biosharp (Xefey, Xitoy) dan sotib olindi; Beyotime Biotec (Shanxay, Xitoy) dan Immunofluoressensiyali binoni to'plami (Alexa Fluor 488) va 2{15}}diklorofluoressen-diatsetat (DCFH-DA) sotib olindi. Sloarbio (Pekin, Xitoy) dan Fontana-Masson bo'yoq to'plami va nukleoplazmatik oqsillarni ekstraksiya qilish to'plami sotib olingan. Inson melanotsitlarini o'stirish qo'shimchasi (HMGS), Dulbecco-ning o'zgartirilgan Eagle muhiti (DMEM) va vosita 254 Gibco'dan sotib olingan. Homila sigir zardobi (FBS) BI (Kibbutz Beit-Haemek, Isroil) dan sotib olingan. Birlamchi antikorlar -aktin, TYR, TRP2, RAB27A, FSCN1, ERK, p-ERK, JNK, p-JNK,
p38, p-p38, NRF2 va HO-1 Cell Signaling Technology’dan, MITF uchun asosiy antikor Sent-Jon laboratoriyasidan, p-MITF uchun asosiy antikor Affinity Biosciences’dan, birlamchi antikordan sotib olindi. GAPDH uchun Bioworld'dan va TRP1 uchun asosiy antikor EMD Millipore'dan sotib olindi.
2.2| Hujayra madaniyati va davolash
Sichqoncha melanomasi B16F10 hujayralari 10 foiz FBS va 1 foiz penitsillin-streptomitsin antibiotik aralashmasi bilan to'ldirilgan o'rta DMEMda o'stirildi. Inson epidermal melanotsitlari (HEMs) inson sunnat terisidan ajratilgan (oldingi tadqiqotimizga qarang25) va HMGS, 5 foiz FBS va 1 foiz penitsillin-streptomitsin antibiotik aralashmasi bilan to'ldirilgan 254 muhitda o'stirilgan. Barcha hujayralar ho'l inkubatorda 37 daraja haroratda 5 foiz CO2 bilan o'stirildi. CDP DMSO da eritildi va suyultirildi
foydalanishdan oldin vosita bilan DMSO ning yakuniy konsentratsiyasi 0,1 foizdan past edi. Ishlatishdan oldin H2O2 vosita bilan suyultirildi.
2.3|Zebra baliqlarini yetishtirish va davolash
Zebrafish embrionlari va muhiti EzeRinka Biotech kompaniyasidan sotib olindi. Eksperimental protokol Markaziy Janubiy Universitetining Etika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Zebrafish 12-quduq plastinkalarida yorug‘likdan 37 daraja uzoqlikda o‘stirildi va turli konsentratsiyali CDP bilan ishlov berildi. Har kuni zebrafishning boshlari va dumlaridagi melaninlarni kuzatish va qayd etish uchun teskari mikroskopdan foydalanilgan. Kuzatishdan so'ng biz vositani o'zgartirdik va CDP ni qayta qo'shdik. Zebrafish dumlaridagi melanin zichligi Image J bilan o'lchandi va qiymatlar integratsiyalashgan optik zichlik (IOD) sifatida taqdim etildi.
2.4| Hujayra hayotiyligi
Hujayra hayotiyligi MTT tahlili yordamida o'lchandi. CDP ning sitotoksikligini tekshirish uchun HEM va B16F10 hujayralar 96-quduq plitalariga 2 × 1{{30}}3 hujayra/quduq zichligida joylashtirildi va hosil bo‘lgunga qadar ekildi. hujayralar plitalarga biriktirilgan. Keyin hujayralar 24, 48 yoki 72 soat davomida turli konsentratsiyalarda (0, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80, 160 va 320 ug/ml) CDP bilan ishlov berildi. O'lchovdan oldin har bir quduqqa 20 mkl MTT qo'shildi va plitalar 4 soat davomida 37 daraja haroratda inkubatsiya qilindi. Shundan so'ng, biz supernatantni tashladik va formazan kristallarini eritish uchun har bir quduqqa 160 mL DMSO qo'shdik. 490 nm da absorbans qiymati multimode plastinka o'quvchi (PerkinElmer) tomonidan o'lchandi. H2O2- induktsiya qilingan sitotoksiklik holatida CDP ta'sirini o'rganish uchun HEM va B16F10 hujayralari 96-quduq plastinkalariga 4 × 103 hujayra/quduq zichligida qo'yildi. Hujayralar 24 soat davomida turli xil konsentratsiyali CDP (0, 20, 40 yoki 80 ug/ml) bilan ishlov berildi, shu nuqtada biz har bir quduqqa H2O2 (yakuniy konsentratsiyalar: HEMlar uchun 500 mkm va B16F10 hujayralari uchun 1,0 mm) qo'shdik. va hujayralarni yana 24 soat davomida inkubatsiya qildi. Biz CDP bilan ishlov berilgan va salbiy nazorat (NC) guruhlarini o'rnatdik. Aniqlash bosqichlari yuqorida tavsiflanganidek edi.
2.5|Melanin tarkibining NaOH tahlili
Hujayralar {0}} mm Petri kosalarida yetishtirildi va 48 soat davomida turli konsentratsiyalarda (0, 20, 40 va 80 ug/ml) CDP bilan ishlov berildi, so‘ng tripsin bilan hazm qilindi va 1 ga yig‘ildi. 5-ml naychalar. Biz hujayralarni ikki marta distillangan suv bilan yuvdik, ularni 1 ml etanolda qayta suspenziya qildik va melaninni chiqarish uchun ularni vorteks qildik. Keyin aralashmani santrifüj qildik (200 g, 5 daqiqa) va supernatantni tashladik, har bir kolbaga 1 ml 10% DMSO (1 mm NaOH eritmasi bilan suyultirilgan) qo'shdik va cho'kmani to'xtatdik. Melaninni eritib yuborish uchun biz suspenziyani suv hammomida 80 daraja haroratda 1 soat davomida inkubatsiya qildik. Nihoyat, biz 200 mL suyuqlikni 96-quduq plastinkasiga o'tkazdik va 470 nm da absorbans qiymatini o'lchash uchun multimodli plastinka o'quvchidan foydalandik.
2.6|Tirozinaza faolligini o'lchash
Hujayralar {0}} mm Petri kosalarida yetishtirildi va o'lchashdan oldin CDP bilan ishlov berildi, tripsin bilan hazm qilindi va 1.5-ml naychalarga to'plandi va ikki marta fosfat tamponli tuz (PBS) bilan yuvildi. ). Biz har bir namunadan 1{9}}6 ta hujayrani yangi kolbaga o‘tkazdik va santrifüjdan so‘ng supernatantni tashladik, so‘ngra hujayra pelletiga 1 ml 0,5 foiz Triton X-100 qo‘shdik va aralashmani 0 darajada 15 daqiqa davomida pishiring. Shundan so'ng biz substrat sifatida 1 ml l-dopa (1 mm, 0,1 M fosfat buferi bilan suyultirilgan) qo'shdik va eritmani aralashtirdik, 200 mkl aralashmani 96-quduq plastinkasiga o'tkazdik. zudlik bilan o'lchadi va 10 daqiqada (A10) o'lchovni takrorlab, multimodli plastinka o'quvchi yordamida 475 nm da absorbans qiymatini (A0) o'lchadi. Tirozinaza faolligi (A{22}}A0)/105 tomonidan hisoblangan va natijalar salbiy nazoratga nisbatan foiz (foiz) sifatida ifodalangan.
2.7| Fontana-Masson melanin bilan bo'yash
Hujayralar 12-quduq plastinkalarida 50 foiz zichlikka erishilguncha yetishtirildi. Davolanishdan so'ng hujayralar 30 daqiqa davomida 4 foiz neytral paraformaldegid bilan mahkamlangan va distillangan suv bilan yuvilgan. Keyin har bir quduqqa 500 mkl Fontana ammiak-kumush eritmasini qo'shdik va melaninni bo'yash uchun plitalarni qorong'i joyda 16 soat davomida saqladik. Keyin hujayralarni distillangan suv bilan besh marta yuvdik (har safar 1 daqiqa) va ularni 500 mL giposulfitda 5 daqiqa davomida namlashtirdik; nihoyat, biz giposulfitni olib tashladik va hujayralarni yana 1 daqiqa davomida distillangan suv bilan yuvib tashladik. Keyin melaninlarni kuzatish va yozib olish uchun teskari mikroskopdan foydalandik.
2.8|RNK ekstraktsiyasi va miqdoriy teskari transkripsiya-polimeraza zanjiri reaktsiyasi
Hujayralar 6-quduq plastinkalarida yetishtirildi. Davolanishdan so'ng hujayralar tripsin bilan hazm qilindi va 1.5-ml naychalarga yig'ildi. Biz hujayralarni ikki marta PBS bilan yuvdik, so'ngra 1 ml lizis buferini qo'shdik, aralashmani vorteks qildik va hujayralarni to'liq lizizlash uchun 5 daqiqa davomida muzga naychalarni joylashtirdik. RNK Total RNK to'plami (Omega Bio-Tek) yordamida ekstraksiya qilindi va ReverTra Ace qPCR RT Master Mix (TOYOBO) yordamida teskari transkripsiya qilindi (RT). Miqdoriy teskari transkripsiya-polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) KODSYBR qPCR Mix (TOYOBO) yordamida amalga oshirildi. RT aralashmasining reaksiya hajmi 20 mkl, PCR aralashmasining reaksiya hajmi esa 20 mkl edi (cDNA 1-8 mkl, MIX 10 mkl, primer F 1 mkl, primer R 1 mkl, 20 mkl ga DEPC H2O qo‘shing. ). Tajribalar protokollarga muvofiq amalga oshirildi. Primerlarning ketma-ketligi S1-jadvalda keltirilgan.
2.9|Protein ekstraktsiyasi va Western blot / immunofluoresans
Hujayralar 100-mm Petri idishlarida yetishtirildi. Davolanishdan so'ng hujayralar tripsin bilan hazm qilindi va 1.5-ml naychalarga yig'ildi. Biz hujayralarni ikki marta PBS bilan yuvdik, so'ngra 1 mm fenilmetilsulfonil ftorid (Termo Fisher) va 1:100 suyultirilgan fosfataza inhibitori kokteyli (Roche) bilan to'ldirilgan 500 mL RIPA lizis tamponiga (Termo Fisher) qo'shdik. Yadro va sitoplazma oqsili ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq Nukleoplazmatik oqsilni ekstraktsiya to'plamidan foydalangan holda ekstraksiya qilingan. Biz naychalarni 30 daqiqa muzga joylashtirdik va hujayralarni to'liq parchalash uchun ularni har 5 daqiqada vorteks qildik. Biz hujayralarni santrifüj qildik (200 g, 4 daraja, 15 daqiqa), supernatantni yangi naychaga o'tkazdik va BCA protein tahlili to'plami (KeyGEN Biotec) yordamida umumiy oqsil kontsentratsiyasini o'lchadik. Biz oqsillarni 5 × yuklash buferi (Beyotime Biotec, Xitoy) bilan 100 daraja 10 daqiqa qaynatib oldik, keyin ularni -80 darajada saqladik. G'arbiy blotingda poliakrilamid gel elektroforez (PAGE) usuli qo'llanildi va har bir guruhning 20 ug proteini ajratildi va poliviniliden ftorid membranasiga o'tkazildi. Antigen blokirovka qilingandan so'ng, biz membranani 1:1000 nisbatda suyultirilgan birlamchi antikorda 4 daraja 16 soat davomida inkubatsiya qildik, so'ngra membranani PBST bilan yuvdik va uni 1:10 000 suyultirilgan lyuminestsent antikorda 1 soat davomida 37 daraja haroratda inkubatsiya qildik. . Floresan intensivligi Odyssey CLx Imaging System (LI-COR) yordamida aniqlandi. Immunofluoressensiya Immunofluoresans binoni to'plami (Alexa Fluor) yordamida amalga oshirildi.
488) birlamchi antikorni 1:100 suyultirish bilan.
2.10|Hujayra apoptozini o'lchash
Hujayralar {0}} mm Petri idishlarida o'stirildi va 24 soat davomida turli konsentratsiyalarda (0, 20, 40 va 80 ug/ml) CDP bilan ishlov berildi va H2O2 qo'shildi ( yakuniy konsentratsiyalar: HEMlar uchun 500 mkm, B16F10 hujayralari uchun 1,0 mm) har bir quduqqa va yana 24 soat davomida inkubatsiya qilinadi. Biz, shuningdek, CDP-davolagan va NC guruhlarini o'rnatdik. Davolanishdan so'ng biz hujayralarni EDTAsiz tripsin bilan hazm qildik va ularni naychalarga to'pladik, so'ngra hujayralarni ikki marta PBS bilan yuvdik va ularni 100 mL PBSda qayta suspenziya qildik. Hujayralar protokolga muvofiq Annexin V-FITC apoptozni aniqlash to'plami bilan bo'yalgan va oqim sitometriyasi (FCM) bilan aniqlangan. Apoptoz tezligini tahlil qilish uchun FlowJo dasturi ishlatilgan.
2.11| Hujayra ichidagi ROS o'lchovi
Hujayralar {0}} quduq plastinkalarida yetishtirildi va 24 soat davomida turli konsentratsiyalarda (0, 20, 40 va 80 ug/ml) CDP bilan ishlov berildi, biz unga H2O2 qo'shdik (yakuniy konsentratsiyalar: 500). HEMlar uchun mkm,
B16F10 hujayralari uchun 1.0 mm) har bir quduqqa boshqasiga inkubatsiya qiling
24 soat va CDP bilan ishlov berilgan va NC guruhlarini o'rnating. Davolanishdan so'ng biz barcha muhitni va FBSni olib tashlash uchun hujayralarni ikki marta PBS bilan yuvdik, so'ngra DCFH-DA probini vosita bilan 1: 1000 nisbatda suyultirdik va har bir quduqqa qo'shdik. Biz hujayralarni 37 daraja haroratda 30 daqiqa davomida inkubatsiya qildik va ularni sarumsiz vosita bilan uch marta yuvdik. dan foydalandik
floresansni kuzatish va yozib olish uchun teskari floresan mikroskop, so'ngra floresans intensivligini o'lchash uchun ImageJ dan foydalanilgan.
2.12|Statistika va tahlil
Ushbu ishdagi ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida taqdim etilgan va statistik tahlil GraphPad Prism (versiya 7.0) yoki SPSS (versiya 22.0) va Student's yordamida amalga oshirildi. t-testi yoki bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) bir nechta guruhlarni taqqoslash uchun ishlatilgan. WB oqsil bantlarining kulrang qiymati GAPDH yoki -aktin bilan standartlashtirilgan. P <.05 qiymatlari="" muhim="" deb="" hisoblandi.="" barcha="" tajribalar="" kamida="" uch="" marta="">
3|NATIJALAR
3.1|CDP HEM va B16F10 hujayralarida melanogenezni keltirib chiqardi
Ishni boshlashdan oldin biz MTT tahlilidan HEM va sichqoncha melanomasi B16F10 hujayralarida CDP ning potentsial sitotoksikligini tekshirish uchun foydalandik. Hujayralar 24, 48 yoki 72 soat davomida turli konsentratsiyalarda CDP bilan ishlov berildi. HEM hayotiyligi testi shuni ko'rsatdiki, konsentratsiyalar 320 ug/ml dan past bo'lganda, CDP hujayra hayotiyligiga ta'sir qilmaydi; ammo 24, 48 va 72 soatlarda konsentratsiya 320 ug/ml ga yetganligi sababli hayotiylik sezilarli darajada kamaydi (P < .05;="" 1a-rasm).="" b16f10="" hujayralarining="" hayotiyligi="" cdp="" 320="" ug/ml="" (p="">< .01)="" ga="" etganida="" 48="" va="" 72="" soatlarda="" ham="" kamaydi,="" lekin="" pastroq="" konsentratsiyalarda="" hech="" qanday="" o'zgarish="" kuzatilmadi="" (1b-rasm).="" keyin="" biz="" cdp="" ning="" melanogenezdagi="" rolini="" oldindan="" o'rganib="" chiqdik="" va="" uning="" ta'sirini="" hemlardagi="" melanotsitlarni="" ogohlantiruvchi="" gormon="" (-msh;="" konsentratsiyalar:="" 20,="" 100="" va="" 400="" nm)="" va="" dmso="" (0,1="" foiz)="" bilan="" solishtirdik.="" melaninni="" bo'yash,="" tirozinaz="" faolligi="" va="" melanin="" tarkibini="" tahlil="" qilish="" natijalari="" cdp="" melanogenezni="" rag'batlantirish="" uchun="" -msh="" bilan="" solishtirish="" mumkinligini="" ko'rsatdi,="" 0,1="" foiz="" dmso="" bilan="" davolash="" esa="" hech="" qanday="" farq="" qilmadi="">
Shunga ko'ra biz qidiruvimizni yanada takomillashtirdik. HEMlar 48 soat davomida turli konsentratsiyalarda (20, 40 va 80 ug/mL) CDP bilan ishlov berildi; melaninning bo'yalishi, melanin miqdori va tirozinaz faolligi tahlillari o'tkazildi va ularning barchasi konsentratsiyaga bog'liq holda CDP bilan davolashdan so'ng sezilarli o'sishni ko'rsatdi, bu 80 ug/ml guruhida cho'qqisiga chiqdi (P < .05,="" 2a-c-rasm)="" .="" keyin="" melanogenez="" bilan="" bog'liq="" genlarning="" (mitf,="" tyr,="" trp1,="" trp2,="" rab27a="" va="" fscn1)="" mrnk="" va="" oqsil="" darajasini="" o'lchadik.="" cdp="" hemlarda="" ushbu="" genlarning="" mrnk="" darajasini="" sezilarli="" darajada="" oshirdi="" (p=""><.05; s2a-rasm).="" bundan="" tashqari,="" mitf,="" tyr,="" trp1="" va="" rab27a="" oqsillari="" darajasi="" oshdi,="" fosforlangan="" mitf="" ning="" umumiy="" mitfga="" nisbati="" (p="">< .05),="" trp2="" va="" fscn1="" esa="" hech="" qanday="" farq="" ko'rsatmadi="" (2d,="" e-rasm).="" natijalar="" shuni="" ko'rsatdiki,="" cdp="" melanogenezni="" rag'batlantirishi="" va="" inson="" melanotsitlarida="" melanogenez="" bilan="" bog'liq="" genlarning="" ekspressiyasini="" oshirishi="">
Bundan tashqari, biz B16F10 hujayralari bilan CDP ta'sirini qayta tekshirdik va B16F10 hujayralarining melanin miqdori sezilarli darajada oshganligini aniqladik (P <.01; s2b-rasm).="" bundan="" tashqari,="" cdp="" sezilarli="">
3.2|CDP zebrafishlarda melanogenezga yordam berdi
CDP targ'ib qila oladimi yoki yo'qligini tekshirishmelanogenezin vivo, biz zebrafish embrionlaridan foydalandik. Zebrafish embrionlari to'rt guruhga bo'lingan va doimiy ravishda turli xil konsentratsiyalarda (20, 40 va 80 ug / ml) o'rta (NC) yoki CDP bilan davolangan; melanin granulalarining zichligi va tarqalishi har kuni kuzatilgan va qayd etilgan. Zebrafish embrionlari o'sib ulg'aygan sayin, biz melanin zichligi asta-sekin bosh va quyruqlarda oshib borishini aniqladik. 3-kuni, guruhlararo farqlar ajralib turardi va biz 6-kuni tajribani tugatmagunimizcha farq ortib bordi (3A-rasm). Biz zebrafish dumlaridagi melanin zichligini o'lchash uchun Image J dan foydalandik; CDP bilan davolash qilingan guruhlardagi melanin zichligi nazorat guruhiga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (P <.05;>
3.3|CDP HEM va B16F10 hujayralarida MAPK signal yo'lini faollashtirdi
CDP targ'ib qilish mexanizmlarini ochib berishmelanogenez, biz HEMlarni turli konsentratsiyalarda CDP bilan davolashdik (20, 40 va
48 soat davomida 80 ug/ml) va MAPK signalizatsiya yo'lida ERK, JNK va p38 oqsillarining fosforlangan va umumiy darajasini o'rganib chiqdi. Western bloting bilan o'lchanadigan bo'lsak, p-ERK, p-JNK va p-p38 darajalari CDP davolashdan so'ng oshdi (P <.05), ularning="" umumiy="" darajalari="" esa="" o'zgarmadi="" (4a,="" b-rasm).="" tajribalar="" b16f10="" hujayralari="" bilan="" takrorlandi="" va="" erk,="" jnk="" va="" p38="" oqsillarining="" fosforlangan="" darajalari="" oshirildi="" (p=""><.05), lekin="" umumiy="" mapk="" darajalari="" o'zgarmadi="" (4c,="" d-rasm),="" hemlardagi="" natijalarga="" mos="" keladi.="">
3.4|CDP zaiflashgan H2O2-induktsiya
HEM va B16F10 hujayralarida sitotoksiklik va apoptoz
Biz H2O2 ni simulyatsiya qilish uchun foydalandikoksidlovchi stressmuhit va CDP ning melanotsitlardagi rolini yanada o'rganib chiqdioksidlovchi stress. HEMlarda ishlatiladigan H2O2 ning yakuniy kontsentratsiyasi 500 mkm, B16F10 hujayralarida esa 1,0 mm edi. CDP ning H2O{8}}sitotoksikligiga ta'sirini o'rganish uchun biz HEM va B16F10 hujayralarini turli konsentratsiyalarda (20, 40 va 80 ug/ml) CDP bilan 24 soat davomida oldindan ishlov berdik, keyin H2O2 qo'shdik va ularni davolashda davom etdik. kuzatish va MTT tahlilini o'tkazishdan oldin 24 soat davomida.
H2O2 HEMlarda, CDP bilan oldindan davolangan guruhlarda aniq membrana to'kilishiga va hujayra qisqarishiga olib keldi, vaziyat engillashdi. Faqatgina CDP bilan davolash hech qanday ta'sir ko'rsatmadi (5A-rasm). MTT tahlili shunga o'xshash natijani ko'rsatdi, chunki H2O2 bilan davolash HEM hayotiyligini pasaytirgan, CDP esa bu zararli ta'sirni sezilarli darajada yaxshilagan.
3.5|CDP HEMs va B16F10 hujayralarida H2O2-induktsiyalangan hujayra ichidagi ROSni tozaladi
H2O{1}}induktsiya qilingan sitotoksiklik va apoptozni kamaytirish uchun CDP mexanizmlarini o'rganish uchun biz DCFH-DA floresansi yordamida HEM va B16F10 hujayralarida hujayra ichidagi ROSni aniqladik.
4|MUHOKAZA VA XULOSALAR
Ushbu tadqiqotda biz HEM va B16F10 hujayralarida CDP rolini o'rgandik. Birinchi marta biz CDP targ'ib qilishi mumkinligini aniqladikmelanogenezmelanotsitlarda va zebrafishlarda pigmentatsiyani rag'batlantiradi. Keyingi tajriba MAPK signalizatsiya yo'li CDP davolash ostida faollashtirilganligini ko'rsatdi. Biz uning rolini batafsil o'rganib chiqdikoksidlovchi stressva CDP melanotsitlarda H2O2- keltirib chiqaradigan sitotoksiklik va apoptozni susaytirishi mumkinligini aniqladi; Shu bilan birga, CDP NRF2/HO-1 antioksidant yo'lini faollashtirishi va hujayra ichidagi ROSni tozalashi mumkin.oksidlovchi stresssharoitlar.
Mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazasi MITF ni tartibga solishda ishtirok etadigan muhim yo'l bo'lib, uning ifodalanishiga yordam beradigan asosiy transkripsiya omilidir.melanogenez-bog'liq genlar va keyinchalik melanin sintezi va transportiga ta'sir qiladi.26,27 Bizning tadqiqotimizda CDP davolashdan so'ng melanotsitlarda ERK, JNK va p38 faollashuvi sezilarli darajada oshdi; shu bilan birga, MITF/p-MITF va MITF tomonidan boshqariladigan TYR, TRP1, TRP2 va RAB27A ifodalari
mos ravishda tartibga solindi. Shunday qilib, biz CDP ni taklif qilamiz
targ'ib qilishmelanogenezMAPK yo'lini faollashtirish orqali, lekin CDP MAPKlarni qanday faollashtirishi noma'lumligicha qolmoqda. So'nggi tadqiqotlarga ko'ra, toll-o'xshash retseptor 4 (TLR4) melanotsitlarda yuqori darajada ifodalangan va melanogenezda ishtirok etadi.28,29 TLR4 lipopolisakkaridni (LPS) 30 maxsus bog'lashi mumkin bo'lgan muhim transmembran oqsilidir; Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, LPS melanogenezni keltirib chiqarishi mumkin.29 Qizig'i shundaki, bir nechtapolisakkaridlarMAPK va yadro omili kappa beta (NF-kB) kabi o'simliklar yoki qo'ziqorinlardan olingan ma'lumotlarga ko'ra faollashtirilgan TLR va quyi oqim signalizatsiya yo'llari. ling yo'li va targ'ib qiladimelanogenez. Bundan tashqari, nukleotidlarni bog'laydigan oligomerizatsiya domeniga o'xshash retseptorlari (NLR) hujayra ichidagi ligandlarni taniydi va MAPK va NF-kB signalizatsiya yo'llarining faollashuvini ta'minlaydi. va NLRlarga ta'sir qiladi.35,36 Shunday qilib, CDP melanotsitlarga kirib, NLR orqali MAPK signalizatsiya yo'lini tartibga solishi mumkin. Biroq, bu farazni tasdiqlash uchun qo'shimcha tadqiqotlar talab qilinadi.
Bugungi kunga qadar olib borilgan ba'zi tadqiqotlar o'simliklardan foydalanish haqida xabar berdipolisakkaridlarmelanogenezda melanin ishlab chiqarishni inhibe qilish uchun.37,38 Biroq, ushbu tadqiqotda CDP melanogenezni rag'batlantirdi.
melanotsitlar va bu ta'sir -MSH bilan solishtirgandan so'ng yanada tasdiqlandi. CDP ham o'ziga xosdirpolisakkarido'tlardan olingan, biz CDP ning qarama-qarshi ta'siri CDP va boshqa o'rtasidagi tarkibiy farqlar bilan bog'liq bo'lishi mumkin deb taxmin qilamiz.polisakkaridlar. Polisaxaridlar monosaxaridlarning polimerizatsiyasi natijasida hosil bo'ladi, lekin monosaxaridlar turi, mono-saxarid tarkibi, glikozid bog'i, yon zanjir tuzilishi va molekulyar og'irligi bo'yicha o'zgaruvchan bo'ladi39,40; bu omillar ularning biologik funktsiyalarini aniqlaydi deb o'ylashadi.41 Mavjud tadqiqotlar CDP tuzilishini taklif qildi va CDP tuzilishi keyinchalik uning funktsiyasiga ta'sir qilishini taklif qildi.42 Shunday qilib, CDPni to'liq tushunish va farazimizni tasdiqlash uchun ko'proq dalillar kerak.
Melanogenez - qarshilik ko'rsatishning muhim himoya mexanizmi
ultrabinafsha shikastlanishi va tana gomeostazini saqlab turish43; bir vaqtning o'zida
vaqt o'tishi bilan melanotsitlar ROS haddan tashqari yuklanishi kabi noqulay muhitlarga osongina ta'sir qiladi.11 Ma'lumki, ROS rag'batlantirishda ishtirok etadi.melanogenez, mexanizmlardan biri MAPK larni faollashtirishdir.44 Ammo tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bu ta'sir faqat ma'lum bir ROS darajasida mavjud bo'lib, ROS ortiqcha yuklanishi melanogenezni sezilarli darajada buzadi.45 ROS, MAPK va melanogenez o'rtasidagi munosabatlar turli sharoitlarda o'zgaruvchan, shuning uchun, pro-va antioksidant tizimlar o'rtasidagi muvozanat muhim ahamiyatga ega. Vitiligo kabi depigmentatsiya kasalliklarida muvozanatsiz antioksidant tizim va nazoratsiz ROS yuklanishi melanotsitlarga zarar etkazadi va hujayra hayotiyligini pasaytiradi.11,46 Ushbu tadqiqotda biz hujayralardagi ROS yuklanishini taqlid qilish uchun H2O2 ning turli kontsentratsiyasidan foydalandik va HEMlar ularga nisbatan past bardoshlik ko'rsatdi. H2O2 B16F10 hujayralariga qaraganda. Melanositlar H2O2 bilan davolash qilinganda, ularning hayotiyligi va apoptoz darajasi yomonlashdi, ammo
CDP oldindan ishlov berish tendentsiyani qisman o'zgartirishi mumkin. Shu bilan birga, ROS tozalandi. Xabar qilinganidek, NRF2/ARE antioksidlanish yo'lini faollashtirish teri hujayralarida ROSni tozalashning asosiy usuli hisoblanadi.14 Bizning tajribalarimizda melanotsitlardagi NRF2 va H2O-1 oqsil darajasi CDPsiz H2O2 bilan davolashdan keyin yuqori tartibga solingan; bu H2O2-induktsiyasini bildiradioksidlovchi stressNRF2/HO-1 yo'lini faollashtirishi mumkin, ammo bu oksidlanish-qaytarilish muvozanatini saqlash va hujayrani shikastlanishdan himoya qilish uchun etarli emas. Biroq, CDP bilan oldindan ishlov berish NRF2/HO-1 antioksidant yo'lini kuchaytirdi va muvozanatni tikladi. Shunday qilib, biz CDP NRF2/HO-1 antioksidlanish yo'lini faollashtirish va ROSni tozalash orqali melanotsitlarni oksidlovchi stress shikastlanishidan himoya qilishini taklif qilamiz.
Biz faqat CDP davolashning melanotsitlardagi ROS yoki NRF2/HO-1 ga ta'siri yo'qligini aniqladik. Bu natija shuni ko'rsatadiki, CDP oksidlovchi stress ostida oksidlanish-qaytarilish balansiga ta'sir qilishi mumkin, ammo normal sharoitlarda emas. Bundan tashqari, NRF2/HO-1 antioksidlanish yo'li PI3K, NF-kB va MAPK signalizatsiya yo'llari bilan tartibga solinadi.47,48 Bizning tadqiqotimizda CDP MAPK signalizatsiya yo'lini faollashtira oldi. CDP yuqori tartibga soluvchi MAPKlar orqali NRF2/HO-1 yo'lini faollashtirishi mumkin. Slominski ta'kidlaganidek, melanotsitlar tartibga soluvchi tarmoqda ishtirok etadigan stress sensori bo'lib, ularning funktsiyalari atrof-muhitga javoban tez o'zgarishi mumkin.49 Biz CDP roliga melanotsitlar holati ta'sir qilishini taklif qilamiz, u antioksidantga ta'sir qilmasdan melanogenezni rag'batlantirishi mumkin. tizim normal sharoitda, ammo oksidlanish-qaytarilish muvozanatini tiklaydioksidlovchi stresssharoitlar. Shuning uchun melanotsitlar funktsiyasi va omon qolishi CDP tomonidan ikki xil usulda saqlanishi mumkin. CDP melanotsitlarga gomeostazni saqlashga yordam beradi, bu ham melanogenezning muhim funktsiyasidir.50,51
Xulosa qilib aytganda, CDP targ'ib qilishi mumkinmelanogenezmelanotsitlar
MAPK signalizatsiya yo'lini faollashtirish orqali. CDP NRF2/HO-1 antioksidant yo'lini faollashtirish va oksidlovchi stress sharoitida hujayra ichidagi ROSni tozalash orqali melanotsitlarning omon qolishini yaxshilashi mumkin. Bizning topilmalarimiz mazmunli, chunki ular CDP ikkalasini ham targ'ib qila olishini ko'rsatadimelanogenezva melanotsitlarni himoya qiladioksidlovchi stressmelanotsitlar disfunktsiyasi va yo'qolishi uchun javobgar bo'lishi mumkin bo'lgan shikastlanish. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, CDP depigmentatsiya kasalliklarini davolashda yangi dori bo'lishi mumkin.
MAQDAT
Ushbu ish Xitoyning Milliy tabiiy fanlar jamg'armasi (81703101-son), Markaziy Janubiy universitetining Uchinchi Sianya kasalxonasining Yangi Xiangya iste'dodlari loyihalari (JY201623 va № 20170301), Hunan provinsiyasining Tabiiy fanlar jamg'armasi (№ 20170301) tomonidan qo'llab-quvvatlandi. No 2018JJ3788 va No 2018JJ3793) va Hunan sog'liqni saqlash komissiyasi loyihasi (№ C2019173). Doktor Yibo Xu tadqiqotning asosiy qismini bajardi va qo'lyozmani yozdi; Professor Jing Chen va Qinghai Zeng tadqiqotni ishlab chiqdilar va qo'lyozma yozishga rahbarlik qildilar; Professor Jinhua Huang, Lihua Huang va Hong Xiang texnik yordam ko'rsatdi va ma'lumotlarni tahlil qildi; Doktor Yixiao Li, Ling Jiang, Yujie Ouyang, Yumeng Li, Lun Yang va Xiaojiao Zhao tajribalarning bir qismiga hissa qo'shdilar.
MANFATLAR to'qnashuvi
Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini tasdiqlaydilar.
MA'LUMOTLAR MAVJUDLIGI HAQIDA BAYON
Ushbu tadqiqot natijalarini tasdiqlovchi ma'lumotlar tegishli muallifdan asosli so'rov bo'yicha mavjud.
ADABIYOTLAR
1. Bleuel R, Eberlein B. Vitiligoni terapevtik boshqarish. J Dtsch Dermatol Ges. 2018;16:1309-1313.
2. Taieb A, Meurant JM. Vitiligoni davolashda psixologik aralashuvlarga ustunlik berishimiz kerakmi? J Eur Acad Dermatol Venereol. 2018;32:2053-2054.
3. Pikardo M, Dell'Anna ML, Ezzedine K va boshqalar. Vitiligo. Nat Rev Dis Primerlari. 2015;1:15011.
4. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Sutemizuvchilar terisida melanin pigmentatsiyasi va uning gormonal regulyatsiyasi. Physiol Rev. 2004;84:1155-1228.
5. Slominski A, Zmijewski MA, Pawelek J. L-tirozin va L-dihidroksifenilalanin melanotsitlar funktsiyalarining gormonga o'xshash regulyatorlari sifatida. Pigment hujayrali melanoma Res. 2012;25:14-27.
6. Spritz RA. Umumiy irsiy aloqalar umumiy vitiligo va otoimmun tiroid kasalligi. Qalqonsimon bez. 2010;20:745-754.
7. Lin X, Tang LY, Fu WW, Kang KF. Xitoyda bolalar vitiligosi: 620 ta holatda klinik profillar va immunologik topilmalar. Am J Clin Dermatol. 2011;12:277-281.
8. Boehncke WH, Brembilla NC. Yallig'lanishli teri kasalliklarida avtoreaktiv T-limfotsitlar. Old immunol. 2019;10:1198.
9. Iannella G, Greko A, Didona D va boshqalar. Vitiligo: patogenezi, klinik variantlari va davolash usullari. Autoimmun Rev. 2016;15:335-343.
10. Forrester SJ, Kikuchi DS, Hernandes MS va boshqalar. Metabolik va yallig'lanish signalizatsiyasida reaktiv kislorod turlari. Circ Res. 2018;122:877-902.
11. Denat L, Kadekaro AL, Marrot L va boshqalar. Melanotsitlar oksidlovchi stressning qo'zg'atuvchisi va qurboni sifatida. J Invest Dermatol. 2014;134:1512-1518.
12. Qiu L, Song Z, Setaluri V. Oksidlanish stressi va vitiligo: Nrf2-ARE
signalizatsiya aloqasi. J Invest Dermatol. 2014;134:2074-2076.
13. Hayes JD, Dinkova-Kostova AT. Nrf2 tartibga solish tarmog'i redoks va vositachi metabolizm o'rtasidagi interfeysni ta'minlaydi. Trends Biochem Sci. 2014;39:199-218.
14. Marrot L, Jons C, Perez P, Meunier JR. Nrf2 ning ahamiyati
(foto) - inson epidermisining melanotsitlari va keratinotsitlarida oksidlovchi stressga javob berish yo'li. Pigment hujayrali melanoma Res. 2008;21:79-88.
15. van Geel N, Speeckaert R, Mollet I va boshqalar. In vivo vitiligo induksiyasi va terapiya modeli: ikki marta ko'r, randomizatsiyalangan klinik sinov. Pigment hujayrali melanoma Res. 2012;25:57-65.
16. Nicolaidou E, Antoniou C, Stratigos A, Katsambas AD. Vitiligo davolashda tor polosali ultrabinafsha B fototerapiyasi va 308-nm eksimer lazer: ko'rib chiqish. J Am Acad Dermatol. 2009;60:470-477.
17. Novak Z, Bonis B, Baltas E va boshqalar. Ksenon xlorid ultrabinafsha B lazeri
tor diapazonli ultrabinafsha B. J Photochem Photobiol B Biolga qaraganda psoriazni davolashda va T hujayra apoptozini qo'zg'atishda samaraliroq. 2002;67:32-38.
18. Xu P, Su S, Tan C va boshqalar. Eclipse herba, Polygoni multiflora radix preparator va Rehmanniae radix preparatorining suvli ekstraktlarining melanogenezga va inson melanotsitlarining migratsiyasiga ta'siri. J Etnofarmakol. 2017;195:89-95.
19. Van T, Chjan X, Xie V.Cistanche deserticolaYC Ma, "Desertginseng": sharh. Am J Chin Med. 2012;40:1123-1141.
20. Guo Y, Cao L, Zhao Q va boshqalar. Dastlabki tavsiflari, antioksidant va gepatoprotektiv faolligipolisakkariddanCistanche deserticola. Int J Biol Macromol. 2016;93:678-685.
21. Cai RL, Yang MH, Shi Y va boshqalar. dan feniletanoidga boy ekstraktining charchoqqa qarshi faolligiCistanche deserticola. Phytother Res. 2010;24:313-315.
22. Chjan H, Xiang Z, Duan X va boshqalar. dan oligosakkaridlarning antitumor va yallig'lanishga qarshi ta'siriCistanche deserticolaorqa miya jarohati bo'yicha ekstrakt. Int J Biol Macromol. 2019;124:360-367.
23. Liu Y, Vang H, Yang M va boshqalar.Cistanche deserticola polisakkaridlarPC12 hujayralarini OGD/RP sabab bo'lgan shikastlanishdan himoya qiladi. Biomed Pharmacother. 2018;99:671-680.
24. Song D, Cao Z, Liu Z va boshqalar.Cistanche deserticola polisakkaridRANKL signalini va reaktiv kislorod turlarini ishlab chiqarishni inhibe qilish orqali osteoklastogenez va suyak rezorbsiyasini susaytiradi. J hujayra fiziol. 2018;233:9674-9684.
25. Fu C, Chen J, Lu J va boshqalar. TUG1 ning past tartibga solinishi melanogenez va UVB tomonidan qo'zg'atilgan melanogenezga yordam beradi. Exp Dermatol. 2019;28:730-733.
26. Johannessen CM, Jonson LA, Piccioni F va boshqalar. Melanositlar nasli dasturi MAP kinaz yo'lining inhibisyoniga qarshilik ko'rsatadi. Tabiat. 2013;504:138-142.
27. Vachtenheim J, Borovansky J. Melanotsitlarda pigment shakllanishining "transkripsiya fiziologiyasi": MITF ning markaziy roli. Exp Dermatol. 2010;19:617-627.
28. Yu N, Zhang S, Zuo F va boshqalar. Madaniyatli inson melanotsitlari 2-4, 7 va 9-funktsional tollga o'xshash retseptorlarni ifodalaydi. J Dermatol Sci. 2009;56:113-120.
29. Ahn JH, Park TJ, Jin SH, Kang HY. Inson melanotsitlari funktsional Toll-o'xshash retseptorlarini ifodalaydi 4. Exp Dermatol. 2008;17:412-417.
30. Reed SG, Carter D, Casper C va boshqalar. GLA oilasi yordamchilari faoliyatining o'zaro bog'liqligi. Semin immunol. 2018;39:22-29.
31. Guo MZ, Meng M, Feng CC va boshqalar. RomanpolisakkaridCraterellus cornucopioides dan olingan, TLR4-NF-kappaB yo'lini tartibga solish orqali immunosupressiv sichqon modellarida immunomodulyatsion faollikni oshiradi. Oziq-ovqat funktsiyasi. 2019;10(8):4792-4801.
32. Wei W, Xiao HT, Bao WR va boshqalar. TLR-4 Astragalusning signalizatsiya yo'llarida vositachilik qilishi mumkinpolisakkaridRAW264.7 hujayralarining RAP induksiyalangan sitokin ifodasi. J Etnofarmakol. 2016;179:243-252.
33. Chen H, Yang D, Xan F va boshqalar. Bakterial T6SS effektori EvpP Ca(2 plus) ga bog'liq MAPK-Jnk yo'lini inhibe qilish orqali NLRP3 yallig'lanish faollashuvini oldini oladi. Hujayra xost mikrobi. 2017;21:47-58.
34. Levy M, Shapiro H, Thaiss CA, Elinav E. NLRP6: ko'p qirrali Nate immun sensori. Trends Immunol. 2017;38:248-260.
35. Chen YS, Chen QZ, Vang ZJ, Hua C. Ganoderma lucidumning yallig'lanishga qarshi va gepatoprotektiv ta'siripolisakkaridlarKunming sichqonlarida uglerod tetraklorid sabab bo'lgan jigar shikastlanishiga qarshi. Farmakologiya. 2019;103:143-150.
36. Tian Z, Liu Y, Yang B va boshqalar. AstragaluspolisakkaridNLRP3 yallig'lanishini inhibe qilish orqali sichqon kolitini susaytiradi. Planta Med. 2017;83:70-77.
37. Jiang L, Huang J, Lu J va boshqalar. Ganoderma lucidumpolisakkaridIL-6/STAT3/FGF2 yo'li orqali keratinotsitlar va fibroblastlarning parakrin ta'sirini inhibe qilish orqali melanogenezni pasaytiradi. J hujayra fiziol. 2019;234:22799-22808.
38. Cai ZN, Li V, Mehmood S va boshqalar. ning ta'siripolisakkaridFMP-1 Morchella esculenta dan B16F10 hujayralarida melanogenez va zebrafish. Oziq-ovqat funktsiyasi. 2018;9:5007-5015.
39. Chjan C, Li Z, Zhang CY va boshqalar. Molekulyar xususiyatlari va bioaktivligipolisakkaridlarbedadan (Medicago sativa L.). Oziq moddalar. 2019;11:1181.
40. Coconi Linares N, Di Falco M, Benoit-Gelber I va boshqalar. Iz komponentlarining mavjudligi Aspergillus nigerning guar saqichiga molekulyar javobini sezilarli darajada kengaytiradi. Yangi biotexnologiya. 2019;51:57-66.
41. Ma H, Zhang K, Jiang Q va boshqalar. O'simlikning xarakteristikasipolisakkaridlarDendrobium officinale'dan ko'p xromatografik va mass-spektrometrik usullar bilan. J Chromatogr A. 2018;1547:29-36.
42. Dong Q, Yao J, Fang JN, Ding K. Ikkita sovuq suvli ekstraktsiyaning strukturaviy tavsifi va immunologik faolligipolisakkaridlardanCistanche deserticolaYC Ma. Uglevod Res. 2007;342:1343-1349.
43. Slominski AT, Zmijewski MA, Plonka PM va boshqalar. UV nurlari teri orqali miya va endokrin tizimga qanday tegadi va nima uchun. Endokrinologiya. 2018;159:1992-2007.
44. Schalke S. Giperpigmentatsiya kasalliklari bo'yicha yangi ma'lumotlar. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2017;31(5-ilova):18-21.
45. Glassman SJ. Vitiligo, reaktiv kislorod turlari va T-hujayralari. Clin Sci. 2011;120:99-120.
46. Ristow M. Antioksidantlar haqidagi haqiqatni ochish: mitohormesis ROS sabab bo'lgan sog'liq uchun foydalarni tushuntiradi. Nat Med. 2014;20:709-711.
47. Balogun E, Hoque M, Gong P va boshqalar. Curcumin Nrf2 va antioksidantga javob beruvchi elementni boshqarish orqali gem oksigenaza-1 genini faollashtiradi. Biochem J. 2003;371:887-895.
48. Paine A, Eiz-Vesper B, Blasczyk R, Immenschuh S. Signaling to
gemoksigenaz-1 va uning yallig'lanishga qarshi terapevtik salohiyati.
Biochem Pharmacol. 2010;80:1895-1903.
49. Slominski A, Paus R, Schadendorf D. Epidermisdagi "sezgi" va tartibga soluvchi hujayralar sifatida melanotsitlar. J Teor Biol. 1993;164:103-120.
50. Slominski RM, Zmijewski MA, Slominski AT. Melanomada melanin pigmentining roli. Exp Dermatol. 2015;24:258-259.
51. Slominski A, Kim TK, Brozyna AA va boshqalar. Melanoma xulq-atvorini tartibga solishda melanogenezning roli: melanogenez HIF-1alfa ifodasini va HIFga bog'liq yordamchi yo'llarni rag'batlantirishga olib keladi. Arch Biochem Biophys. 2014;563:79-93.