Nano sut oqsili-shilimshiq komplekslari: xarakteristikasi va saratonga qarshi ta'siri 1-qism

Batafsil ma'lumot uchun murojaat qilingtina.xiang@wecistanche.com

Abstrakt: Thesaratonga qarshitabiiy birikmalarning faolligi yaqinda ko'p tarmoqli tadqiqotlarni jalb qildi. Ushbu tadqiqotda sut oqsillarining (MP) Isabgol qobig'i shilliq qavati (IHM) va Ziziphus Spina Christi shilliq qavati (NabM) bilan kompleksi o'rganildi. Shu nuqtai nazardan, sut oqsili shilimshiq komplekslarining (MPMC) fizik-kimyoviy xususiyatlari, jumladan, pH, Karr indeksi, suvda eruvchanligi va suvni yutish indekslari o'lchandi va oqim harakati o'rganildi. Bundan tashqari, aminokislotalar profili, oqsilning hazm bo'lishi va fenolik vaflavonoidlarMPMC tarkibi o'rganildi va komplekslarning mikro tuzilishi transmissiya elektron mikroskopiya yordamida vizualizatsiya qilindi. Theantioksidantva MPMC ning ikkita saraton hujayra chizig'iga, inson jigari saratoni HEPG-2 va ko'krak saratoni MCF-7 ga qarshi, ikkita oddiy hujayra chizig'i, ya'ni Bj-1 va MCF{{ bilan solishtirganda saratonga qarshi kuchlari. 3}}F, neytral qizil qabul qilish tahlili yordamida sinovdan o'tkazildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, MPMC DPPH, ABTS va HS radikallariga qarshi tozalash faolligiga ega. Bundan tashqari, MPMC Type-Fenton reaktsiyasida oksidlovchi stress natijasida kelib chiqqan DNK shikastlanishining oldini olish imkoniyatiga ega. Neytral qizil tahlil natijalari ikkala HEPG-2, MCF-7 o'sishini sezilarli darajada inhibe qilishini ko'rsatdi, Bj-1 va MCF-12F ga nisbatan sezilarli sitotoksik ta'sir aniqlanmadi. RT-qPCR natijalari apoptoz pro-apoptoz gen markerlari Caspase-3, p53, Baxning ko'tarilishi bilan aniqlangan MPMC rag'batlantirilgan apoptozni ko'rsatdi. Ayni paytda apoptozga qarshi Bcl-2 geni pasaytirildi. Shu bilan birga, MPMC bilan davolash qilingan oddiy hujayra liniyalarida sezilarli farq kuzatilmadi. Xulosa qilib aytganda, MPMC an'anaviy saraton kimyoterapiyalari bilan taqqoslanadigan faollik va minimal yon ta'sirga ega yangi saraton terapevtiklarini ishlab chiqishda ishlatilishi mumkin bo'lgan istiqbolli antikanser ob'ekt sifatida ko'rib chiqilishi mumkin. .

Kalit so'zlar: sut oqsillari; Isabgol qobig'ining shilimshiqligi; Nabeq shilimshiq; sut oqsillari shilimshiq komplekslari; saratonga qarshi faollik

Mahsulotlar haqida ko'proq ma'lumot olish uchun bosing

1.Kirish

Saraton2020 yilda 10 millionga yaqin o'lim bilan dunyo bo'ylab o'limning asosiy sababidir [1]. Erta tashxis qo'yish va yangi terapevtik vositalarning rivojlanishi saraton kasalligini engish uchun yagona umiddir. Kimyoterapiya va radiatsiya kabi an'anaviy saraton davolash usullari nisbatan qimmat va sezilarli yon ta'sirlar bilan birga keladi.

Shu sababli, ilmiy va tadqiqot qiziqishlari an'anaviy davolash usullariga nisbatan kamroq toksik yon ta'sirga ega bo'lgan antikanserogen potentsialga ega bo'lgan tabiiy birikmalardan (ya'ni, oqsillar, polisakkaridlar va polifenollar) foydalanishga intiladi.

PolisaxaridlarO'simlik manbalaridan olingan biologik faol xususiyatlari tufayli so'nggi paytlarda ko'proq e'tibor qaratilmoqda [2,3]. Ko'pgina tadqiqotlar foydali farmakologik ta'siri tufayli meva, sabzavotlar, don va o'tlar kabi tabiiy o'simlik manbalaridan bioaktiv polisaxaridlar va polifenollarni ajratishga qiziqish bildirgan [4].

Plantago ovata (Psyllium yoki Isabgol) va Ziziphus Spina-Christi (Nabeg yoki Sidr) biologik faol polisaxaridlarning ma'lum manbalari hisoblanadi. IHM va NabM istiqbolli bioaktiv materiallar sifatida tanlangan. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, sut oqsillari bilan IHM va NabM komplekslari jigar faoliyatini yaxshilaydi va yurak-qon tomir kasalliklari xavfini kamaytiradi [5]. Isabgol qobig'i diareya, ich qotishi, yarali kolit, irritabiy ichak sindromi, giperkolesterolemiya va diabetni davolashda samarali ekanligi isbotlangan. Bundan tashqari, isabgol qobig'ining yo'g'on ichak saratoniga qarshi antikanser ta'siri uning tarkibidagi tolalar bilan bog'liq bo'lib, u o'tish vaqtini qisqartirish orqali ta'sirini kamaytiradi. Bu ichak mikroflorasi bilan o't metabolizmining pasayishiga, najasning ko'payishi bilan o't kislotalarining suyultirilishiga, tolalar fermentatsiyasi tufayli mikrobial o't kislotalari almashinuvining o'zgarishiga, pH ning pasayishiga va qisqa zanjirli yog' kislotalarining ishlab chiqarilishiga yoki to'g'ridan-to'g'ri bog'lanishiga olib keladi. safro kislotalari va shuning uchun ularning metabolizmini oldini oladi [6]. Ziziphus Spina-Christi ning asosiy biologik faol komponentlari vitamin C, fenolik moddalar, flavonoidlar va triterpenik kislotalardir. Uning biologik faolligi saratonga qarshi, antibakterial, diabetga qarshi, antiproliferativ va antioksidant faollikni o'z ichiga oladi [7. Isabgol poʻstlogʻi va Nabeq mevalari mos ravishda Isabgol poʻstlogʻi (IHM) va Nabek shilimshiq (NabM) ishlab chiqarish uchun ishlatiladi [5].

Boshqa tomondan, saraton uchun proteinga asoslangan terapiya past sitotoksiklik, kuchli o'ziga xoslik va o'zgartirish qulayligi kabi asosiy xususiyatlar tufayli ortib borayotgan qiziqish uyg'otdi [8]. Muhim aminokislotalarning ozuqaviy ehtiyojlarini ta'minlashdan tashqari, sut oqsillari antioksidant, immunomodulyator, diabetga qarshi, antimikrobiyal va saratonga qarshi xususiyatlar kabi ko'plab funktsional xususiyatlarga ega biologik makromolekulalar qatoriga kiradi [9,10]. Masalan, sutdan olingan peptidlarning (ya'ni, -kazein va 1-kazein fragmentlaridan 90-95 va 90-96[Arg90-Tyr-Leudan ajratilgan -kazomorfinlar) saratonga qarshi faolligi. -Gly-Tyr-Leu95-(Glu96)]) sigir sutida aniqlangan sut oqsillari nafaqat ozuqaviy ahamiyatga ega, balki saraton kasalligining oldini olish va davolash uchun ham salohiyatga ega degan taxminni tasdiqlaydi [11,12]

Sut oqsillari va polisakkaridlar o'rtasidagi murakkablik, masalan, sut oqsillari-xitozan kompleksi, ilgari ularning tabiiy tarkibiy qismlarining funktsional xususiyatlarini oshirishga urinish sifatida ishlab chiqarilgan [13]. Mavjudligi va tayyorlanish qulayligi tufayli bunday komplekslar arzonroq saratonga qarshi davolash usullarini ishlab chiqishda foydalanish imkoniyatiga ega. Bunday terapevtiklar arzonroq bo'ladi va hozirda qo'llaniladigan kimyoterapevtiklar bilan taqqoslanadigan faollikni ko'rsatadi.

Sut oqsillari bilan bog'lanishning asosiy omillari hidrofobik va elektrostatik o'zaro ta'sirlar orqali kovalent bo'lmagan bog'lanishdir.polisakkaridlar[14]. Bundan tashqari, oqsillar pH 2 dan 11 gacha bo'lgan diapazonda boshqa komponentlar bilan o'zaro ta'sirga nisbatan hayratlanarli darajada chidamliligini ko'rsatadi. Muayyan pHda oqsilning sirt reaktivligi oqsil strukturasining ochilishi orqali ortadi [15].

Shu nuqtai nazardan, bizning guruhimiz yaqinda sut oqsili komplekslarining inson salomatligidagi funktsional roliga e'tibor qaratdi. Shu bilan birga, IHM yoki NabM bilan sut oqsili komplekslari antihiperlipidemik va jigarni himoya qilish xususiyatlarini ko'rsatdi [9]. Shunday qilib, oldingi tadqiqotlarga asoslanib, sut oqsili-polisakkarid komplekslari qiziqarli antikanser faolligiga ega bo'lishi mumkinligi taxmin qilingan. Bundan tashqari, hech qanday nashrlar sut oqsillari komplekslarining IHM va NabM bilan saratonga qarshi faolligini o'rganmagan. Shu sababli, ushbu tadqiqotning asosiy maqsadi yangi ishlab chiqarilgan sut oqsili shilimshiq komplekslarining fizik-kimyoviy xususiyatlarini, shu jumladan aminokislotalar profilini va ushbu komplekslarning funktsional xususiyatlarini tavsiflash edi. Bundan tashqari, IHM va NabM shilimshiqli sut oqsili komplekslarining insonning ikkita saraton hujayralariga (MCF7 va HEPG2) qarshi saratonga qarshi faolligi saratonsiz hujayra chiziqlari (Bi-1 va MCF-12F) bilan solishtirganda tekshirildi. ). Shuningdek, ishlab chiqarilgan sut oqsillari shilimshiq komplekslarining ta'sir qilish tartibini yoritib beramiz.

2. Natijalar va muhokama

2.1. Furye-transformatsion infraqizil (FTIR) spektroskopiyasi

IHM, MP va MP/IHM ning infraqizil spektrlari 1A-rasmda tasvirlangan. IHM spektri arabinoksilanlarning xarakterli tasmasi 100-1200 sm-1 da, amid I va amid II guruhlari uchun esa mos ravishda 1550 va 1650 sm-1 diapazoni koʻrsatdi. MP spektri mos ravishda amid I (asosan C{9}}O oqsillar cho‘zilishi) va sut uglevodlariga mos keladigan 1700-1600 va 1200-900 sm-I diapazonlarini ko‘rsatadi [16]. IHM va MP ning yuqorida qayd etilgan cho'qqilari IHM/MP kompleksi spektrida saqlangan. Xuddi shunday, NabM dagi galakturon kislotaning xarakterli chiziqlari NabM/MP kompleksi spektrida saqlanib qolgan (1B-rasm). Bu polisakkarid shilliq qavati va MP o'rtasida kimyoviy o'zaro ta'sir yo'qligini ko'rsatadi va shu bilan MP va polisaxaridlar (IHM va NabM) o'rtasida elektrostatik tortishishning taklif qilingan mexanizmini tasdiqlaydi. Bunday kuzatuvlar Vukic va boshqalarning kuzatuvlariga mos keladi, ular zardob suti oqsillari va pektin o'rtasida elektrostatik va hidrofobik o'zaro ta'sirlar orqali kompleks hosil bo'lishini xabar qildilar, bu esa kompleksning yaxshi mustahkamligiga olib keldi [17].

2.2. MP va MPMC ning fizik-kimyoviy va funksional xossalari

Ommaviy zichlik (BD), teginish zichligi (TD), Karr indeksi va pH o'lchovlari qiymatlari 1-jadvalda keltirilgan. MP ning BD va TD ko'rsatkichlari IHM dan yuqori edi va IHM sinovdan o'tgan namunalarning eng past hajmli va teginish zichligiga ega edi. . Xuddi shunday, MP/IHM kompleksi sezilarli darajada edi (p<0.05) lower="" bulk="" and="" tapped="" density="" compared="" to="" mp/nabm.="" the="" obtained="" results="" indicated="" that="" the="" distribution="" and="" solubility="" of="" mp="" have="" been="" improved="" by="" complexation="" with="" the="" ihm.="" carr's="" index="" is="" frequently="" used="" as="" an="" indication="" of="" the="" flowability="" of="" powders.="" the="" results="" in="" table="" 1="" show="" that="" carr's="" index="" of="" mpmc="" was="" significantly="" lower="" than="" ihm="" which="" indicated="" that="" nabm="" improved="" the="" flowability="" of="" mp.="" this="" was="" probably="" due="" to="" the="" lower="" carr's="" index="" value="" of="" mp(30.6±="" 0.10%)="" compared="" to="" ihm="" and="" nabm="" (57.58±0.14="" and="" 53.97±0.11%,="" respectively)which="" are="" vicious.ihm="" is="" alkaline="" (7.79="" ph)="" while="" mp="" and="" the="" complexes="" with="" polysaccharide="" mucilage="" were="" slightly="" acidic="" which="" came="" in="" accordance="" with="" previously="" reported="" results="">

WSI va WAI oziq-ovqat texnologiyasida muhim funktsional xususiyatlardir. 1-jadval MP ning WSI va WAI IHM va NabM bilan murakkablashganidan keyin sezilarli darajada oshganligini ko'rsatadi. Bu, ehtimol, Isabgol asosidagi materiallar suvda yaxshi eriydi va etarli miqdorda suv qo'shilgandan keyin quyuqlashtiruvchi ta'sir ko'rsatadi [19]. Bundan tashqari, Qaysrani va boshqalar. Isabgol poʻstlogʻining arabinoksilanlari quruq ogʻirligiga nisbatan oʻn baravargacha suvni ushlab turish qobiliyatiga ega ekanligini maʼlum qildi [20]. Bundan tashqari, MP/IHM MP/NabMga qaraganda yuqori WSI va WAIga ega, chunki IHM NabMga qaraganda yuqori WSI va WAIga ega. Bundan tashqari, MPM bilan solishtirganda MPMC uchun WSI foizining ortishi maqsadli faol komponentlarning terapevtik masalalarda foydalanishda tarqalish qobiliyatining oshishiga olib keldi [21]. Bu antikanser natijalarida aniq bo'lib, bu komplekslar MP ga qaraganda sitotoksik ta'sirga ega ekanligini ko'rsatdi.

2.3. Biologik faol komponentlar

2.3.1. PHM va NabM ning fenolik birikmalari

Oziq-ovqat tarkibida antioksidant va saratonga qarshi ta'sir ko'rsatadigan juda muhim bioaktiv birikmalar (ya'ni, fenolik va flavonoidlar) mavjud. HPLC tahlili 2-rasmda ko'rsatilganidek, Nab va IHM tarkibida ko'plab fenolik birikmalar mavjudligini tasdiqladi va miqdorini aniqladi. Natijalar gallik kislotasi (177,96 mg / kg), katexol (13,87 mg / kg) kabi turli xil biologik faol birikmalarning yuqori miqdorini ko'rsatadi. PHM ekstraktidagi p-gidroksibenzoy kislotasi (24,02 mg/kg), katexin (5,93 mg/kg) va rutin (123,70 mg/kg) va katexol (410,72 mg/kg) p-gidroksibenzoy kislotasi (426,71 mg/Kg) Chlorgen (72,05 mg/kg) Rutin (1750,57 mg/kg) va rozmarinik (1771,72 mg/kg) NabM (2A, B-rasm). Ushbu birikmalarning tarkibi sog'liq uchun juda muhimdir. Fenolik birikmalarning saratonga qarshi ta'siri ilgari xabar qilingan edi. Bu ta'sir asosan ushbu birikmalarning antioksidant ta'siri bilan bog'liq edi.

2.3.2. MP va MPMC ning umumiy fenolik, flavonoid va antioksidant faolligi

Bir qator hisobotlar shuni ko'rsatdiki, antioksidant xususiyatlarga ega bo'lgan birikmalar asosan saratonga qarshi faollikni ko'rsatadi [22]. NabM, IHM, MP va ularning komplekslarida jami fenolik (TP) va umumiy flavonoid (TF) miqdori aniqlandi (3A, B-rasm). Natijalar shuni ko'rsatdiki, TP va TF NabM va MP/NabMda IHM va MP/IHM bilan solishtirganda yuqoriroq bo'lgan. Biroq, TP va TF tarkibi MPC ga nisbatan MPda sezilarli darajada past edi. Bu natijalar Singx va boshq.[23] tomonidan bildirilgan ma'lumotlarga mos keldi. NabM ning TP va TF mos ravishda 1,6 GAE mg / 100 g quruq vazn va 47 mg CE / 100 g quruq vazn ekanligini aniqladilar. MP/NabM va MP/IHM komplekslari MP bilan solishtirganda TPda mos ravishda 309 foiz va 59 foiz va TFda 476 foiz va 123 foizga sezilarli o'sishni ko'rsatdi. MP ning IHM va NabM bilan konjugatsiyasi IHM va NabM ga mos keladigan TPC ning mos ravishda 23 va 36 foizini yo'qotishiga olib keldi. MP bilan komplekslashganda TF IHMda 44 foizga va NabMda 46 foizga kamaydi. Bu, ehtimol, MP ning past TP va TF bilan bog'liq edi.

MP/IHM va MP/NabM ning DPPH, ABTS va HS dan foydalangan holda MP bilan solishtirganda potentsial radikal tozalash faolligi 3C-E-rasmda ko'rsatilgan. Uchta antioksidant faolligidan olingan ma'lumotlar shunga o'xshash tendentsiyaga ega bo'lib, NabM ning IHMga qaraganda yuqori antioksidant faolligini ko'rsatdi va bu fenolik va fenollar natijalari kontekstida.

flavonoidlar tarkibi. MP ning antioksidant qobiliyati NabM va IHM bilan komplekslashgandan keyin oshdi. ABTS tahlili bundan mustasno, NabM ning antioksidant faolligi MP bilan konjugatsiya bilan oshdi. Antioksidant faollik MPMCning MP ga nisbatan yuqori antioksidant faolligiga ega ekanligini ko'rsatdi. Bizning farazimiz MP va polisakkaridlar o'rtasidagi mumkin bo'lgan o'zaro ta'sirga ishora qiladi, bu Li va boshqalar tomonidan ta'riflangan potentsial antioksidant faollikni olishga olib keladi. [24]. Ilgari, tozalash qobiliyati va fenolik / flavonoidlar tarkibi o'rtasida ijobiy bog'liqlik borligi xabar qilingan 5]. Biroq, biz oltingugurt o'z ichiga olgan aminokislotalar bilan boyitilgan yangi bioaktiv peptidlar ishlab chiqarilishini istisno qila olmaymiz, bu MPMC ning murakkab bo'lmagan komponentlarga nisbatan yuqori antioksidant faolligini tushuntiradi. Bundan tashqari, kichik peptidlar yuqori antioksidant xususiyatlarga ta'sir qiluvchi zardob fraktsiyalarida chiqariladi [4]. Va nihoyat, fenolik va flavonoid tarkibi turli saraton hujayralariga ta'sir qiladi. Bundan tashqari, in vitro hujayra madaniyati tahlillari davomida ushbu faoliyat va mexanizmlar kuzatildi. Fenolik moddalarning antioksidant va saratonga qarshi faolligi aromatik halqalardagi er-xotin bog'lanish va gidroksil o'rnini bosish bilan bog'liq [25].

2.4.MP va MPMC ning aminokislotalar profili

MP, NabM, MP/IHM va MP/NabMarening aminokislota profillari 4-rasmda ko'rsatilgan. MP va uning IHM va NabM bilan komplekslari aminokislotalar profillarida sezilarli farqlar yo'q edi. Bu shuni ko'rsatdiki, MP ning polisaxarid shilliq qavati bilan kovalent bo'lmagan o'zaro ta'siri sut oqsillari tarkibini o'zgartirmaydi. Natijalar MP va MPMC tarkibidagi glutamik kislotaning yuqori miqdorini ko'rsatadi (4-rasm) [26].

2.5. MP va MPMC larning reologik xossalari

2.5.1.Ko'rinadigan yopishqoqlik

S1-rasmda turli rpm qiymatlarida oqsil namunalarining viskozitesi ko'rsatilgan. IHM va NabM sekin aylanishda yuqori viskoziteye ega edi, lekin aylanish tezligi oshishi bilan yopishqoqlik sezilarli darajada kamaydi. Ushbu topilmalar Chen va Che bilan kelishilgan, ular yashil laverning suvda eruvchan shilimshiqligi (Monostroma iridium) kesish tezligini oshirish orqali pasayganligini qayd etgan [27].

S1-rasmdagi natijalar, shuningdek, MP ning IHM va NabM bilan komplekslashuvi MP ning ko'rinadigan yopishqoqligining sezilarli o'sishiga (p 0.05 dan kam yoki unga teng) olib kelganligini ko'rsatadi. Bu yopishqoqlikni kuchaytiruvchi ta'sirga ega bo'lgan IHM (gidrokolloid material) ning noyob xususiyatlari bilan bog'liq bo'lishi mumkin [28].

2.5.2.Oqim harakati

Sut oqsillari va ularning komplekslarining oqim harakati (kesish kuchlanishi/kesish tezligi egri chiziqlari) S2-rasmda tasvirlangan. Kesish tezligining oshishi bilan kesish stressi ortdi. Kesish kuchlanishi va kesish tezligi ma'lumotlarini kuch-qonun tenglamasiga o'tkazish, oqimning mustahkamlik indeksi (K) va oqim harakati indeksining (n) qiymatlari S1-jadvalda ko'rsatilgan.IHM va MP / IHM eng yuqori oqim mustahkamlik indeksiga ega edi. Buning sababi IHM ning suvda eruvchan shilimshiqligining yuqori viskozitesi, uning suvli muhitda suvni ushlab turish va jelleşme qobiliyatining yuqoriligi tufayli bo'lishi mumkin. Natijalar shuni ko'rsatdiki, IHIM, NabM va MP/IHM past n qiymati 0.25 dan 0.64 gacha bo'lgan qirqishni yupqalash xususiyatiga ega (Nyuton bo'lmagan suyuqliklar). Ushbu natijalar Ziziphus mauritiana [29] ning fizik-kimyoviy xususiyatlarini o'rgangan Thanatcha va Pranee bilan mos keldi. Boshqa tomondan, MP ning n qiymati taxminan 1(0,99) bo'lib, Nyuton oqimini ko'rsatadi. Xuddi shunday, MP/NabM kompleksi uchun n qiymati S1-jadvalda ko'rsatilganidek, 0,95 edi.

2.6.MP va MPMC ning differentsial skanerlash kalorimetriyasi

MP ning termal barqarorligini va uning IHIM va NabM bilan komplekslarini o'rganish uchun differentsial skanerlash kalorimetri ishlatilgan. MP va MPMC ning termogrammalari S3-rasmda, DSC parametrlari esa 2-jadvalda keltirilgan. MP termogrammasida aniq endotermik cho'qqi yo'qligi kuzatildi, lekin MP/IHM va a uchun sezilarli endotermik cho'qqi bor edi. MP/NabM uchun keng endotermik cho'qqi. Bu, ehtimol, erkin suvning asta-sekin yo'q qilinishi, NabM erish nuqtasi, sekin jelleşme va oqsil denaturatsiyasi bilan bog'liq [30].

Shuningdek, 2-jadvalda ko'rsatilganidek, MPM / IHM va MP / NabM (mos ravishda 148,24 va 121,4 daraja) bilan solishtirganda MP ning past denatürasyon harorati (101,44 daraja) bilan kuzatilganligi sababli, MPMC murakkab bo'lmagan oqsilga qaraganda issiqlikka bardoshli ekanligi qayd etildi. Bundan tashqari, MP ning parchalanish harorati 302,3 darajani tashkil etdi, harorat 350 C gacha ko'tarilganda MPMC ning buzilishi kuzatilmadi. Ushbu topilmalar sut oqsillarining termal barqarorligi protein birikmasini oldini olgan fenolik birikmalar bilan o'zaro ta'sir qilish natijasida ortganligini aniqlagan bir nechta tadqiqotlar bilan mos keldi [2,31].

Reaksiya paytida tizimga yoki tizimdan chiqadigan issiqlik entalpiya (AH). Murakkab bo'lmagan MP bilan solishtirganda MP/IHM va MP/NabM ning yuqori entalpiyasi sut oqsillari (zardob va kazein) va sut oqsillari va polisaxaridlar o'rtasidagi yuqori haroratda (Maillard reaktsiyasi) potentsial kimyoviy reaktsiyaga bog'liq bo'lishi mumkin. 31.

2.7.MP va MPMC ning transmissiya elektron mikroskopiyasi (TEM).

5-rasmda IHM, NabM, MP va MPMC ning mikro tuzilishi ko'rsatilgan. MPMC ning zarracha o'lchami nano diapazonda (114-250 nm) va u MP (191-300 nm) zarracha hajmidan kichikroq ekanligi aniqlandi. Bundan tashqari, MPMC ning TEM (5D, E-rasm) hosil bo'lgan komplekslarning tarvaqaylab ketgan naqshini ochib berdi. Bu sut oqsillari va polisaxaridlar o'rtasidagi elektrostatik tortishish bilan bog'liq bo'lishi mumkin Goh va boshqalar. [32]. Bundan tashqari, MP/IHM ning MP/NabM ga nisbatan kattaroq tarmoqlangan tuzilishi S1-rasmda ko'rsatilganidek, uning yuqori yopishqoqligi uchun javobgar bo'lishi mumkin.

2.8. MP va MPMC bo'yicha biologik tadqiqotlar

2.8.1. MP va MPMC ning saratonga qarshi faoliyati

MCF-12F va Bij{ bilan solishtirganda HepG-2 va MCF-7 hujayralariga MP va MPMC ning turli konsentratsiyali (1, 5, 10 va 20 ug/ml) sitotoksik ta'siri. {7}} normal hujayralar 6 va 7-rasmlarda tasvirlangan. MPMC mos ravishda HepG-2 va MCF-7 hujayralarida saratonga qarshi ta'sir ko'rsatdi. 6A, B-rasm. Dozaga javob beradigan egri chiziq yuqori konsentratsiyalarga javoban hujayra hayotiyligining pasayishini ko'rsatdi. Boshqa tomondan, MP va MPMC ning Bj-1 va MCF-12F normal hujayralariga sezilarli sitotoksik ta'siri kuzatilmadi (6C, D-rasm). Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, MP/NabM ning HepG-2 va MCF-7 saraton hujayralariga qarshi yuqori saratonga qarshi faolligi, IC50 qiymatlari mos ravishda 5,13 va 10,07 ug/ml. Bundan tashqari, MP / IHM tegishli nazorat bilan solishtirganda saraton hujayralari liniyalariga nisbatan o'rtacha sitotoksik ta'sir ko'rsatdi. Umuman olganda, bizning sitotoksik ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, MP ni IHM va NabM bilan komplekslash 3-jadvalda ko'rsatilganidek, murakkab bo'lmagan sut oqsillari bilan solishtirganda saratonga qarshi faollikni sezilarli darajada oshiradi. Bundan tashqari, Gep G{25}} hujayralari MP va MPMCga nisbatan sezgirroq ekanligi aniq bo'ldi. MCF{26}} hujayralari bilan solishtirganda, IC50 ning past qiymatlari bilan namoyon bo'ladi.

Sut oqsilidan olingan antitumor peptidlarning saratonga qarshi ta'siri ilgari xabar qilingan. Shu nuqtai nazardan, Jeong va Hong [33] -laktalbuminning tripsin gidrolizatlari inson suyak saratoni SJSA-1, inson kolorektal saratoni HCT 116 va inson oshqozon saratoni NCI-N87 hujayra liniyalariga sitotoksik ta'sir ko'rsatishini kuzatdilar. Aniqlanishicha, o-laktalbumin hujayra yuzasi modulyatorlari bilan o'zaro ta'sir qiladi va hujayra o'sish tezligini, hujayra ichidagi kaltsiyni va kaltsiyni tashish tezligini o'zgartiradi [34]. Shuni ta'kidlash kerakki, sigir laktoferrini dozaga bog'liq holda MCF7 hujayralarida apoptozni keltirib chiqardi [35]. Bundan tashqari, sutning kazein va zardob oqsili fraktsiyalari hayvonlar modelida o'smaga qarshi ta'sir ko'rsatdi, shuningdek, in vitro antiproliferativ faollikni ko'rsatdi [36]. Bundan tashqari, Elzoghby va boshqalar.[37] kazein nanopartikullari hidrofobik antikanser preparati flutamidni kapsulalash, preparatning chiqarilishini nazorat qilish, o'smaga qarshi faolligini yaxshilash va gepatotoksikligini kamaytirish uchun ishlatilishi mumkinligini xabar qildi.

IHIM va NabM ning saratonga qarshi ta'siri ilgari xabar qilingan edi [6,38]. MP va MPMC ning sitotoksik ta'siri kolorektal saratonga qarshi antikanser faolligini ko'rsatadigan glutamin, arginin va sistein kabi aminokislotalarning mavjudligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin [39]. Bu natijalar MPMC glutamik kislotasining yuqori miqdori bilan mos keladi (5-rasm).

2.8.2. p53, Bax, kaspaza-3 va Bd{5}} oqsillar darajasini aniqlash

MPMC ning sitotoksiklik mexanizmini tadqiq qilish uchun HepG-2, MCF-7 da apoptoz marker oqsillari p53, Bax, Kaspaza-3 va Bcl-2 darajasi aniqlandi. , Bj-1 va MCF-12F hujayra liniyalari MPMC ning IC0 bilan ishlov berilgan (8-rasm). Pro- va anti-apoptotik markerlar darajasi saraton hujayralari liniyalarida apoptoz induksiyasi bilan bog'liq [40,41]. Natijalar shuni ko'rsatdiki, HepG-2 va MCF-7 da MP/NabM va MP/IHMenhanced apoptoz, lekin MCF-12F va Bj-1 hujayra qatorlarida emas. Kaspaza-3, p53, Bax darajasi tegishli nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi (8-rasm), Bcl-2 protein esa barcha muolajalarda kamaydi. Qizig'i shundaki, MP apoptoz protein markerlarida ham sezilarli o'zgarishlarni ko'rsatdi. Bu saratonga qarshi tadqiqot natijalariga mos keldi va yuqorida muhokama qilinganidek, sut oqsilidan olingan bir qator peptidlarning sitotoksik ta'siri deb atash mumkin (2.8.1-bo'lim).

2.8.3. MPMC tomonidan RNH1 plazmidining oksidlovchi parchalanishidan DNK shikastlanishidan himoya qilish

RNH1 plazmid DNKsi agaroz gel elektroforezida yuqoridan pastga qarab ochiq aylana, chiziqli va o'ta o'ralgan dumaloq DNK shaklida uchta shaklga ega. Fenton reaktivining oksidlovchi stressi DNKning shikastlanishiga olib keldi. Keyinchalik DNK shakllari darajasi o'zgaradi. Biroq, ochiq dumaloq va chiziqli shakllar DNKning shikastlanishini ko'rsatadi va o'ta o'ralgan dumaloq DNK ko'proq himoya potentsialini ko'rsatadi. Ushbu tahlilda biz MP va MPMC o'zlarining IC50 darajasida oksidlovchi stressga javoban super o'ralgan dumaloq shaklning buzilishidan himoya qila oladimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik. Natijada, MP/NabM va MP/IHM DNK nazoratiga o'xshash yuqori himoya qobiliyatini ko'rsatdi (3 va 4-yo'llar, 9A-rasm). Boshqa tomondan, MP bilan ishlov berilgan DNKda DNK nazorati va faqat Fenton reaktivi bilan ishlov berilgan DNK bilan solishtirganda sezilarli farq kuzatilmadi (5-qator).

2.8.4. MPMC tomonidan DNKning zararlanishini genomik DNKning oksidlovchi parchalanishidan himoya qilish

PCR texnikasidan foydalangan holda, MPMC ning Fenton reaktsiyasi natijasida kelib chiqqan genomik DNK shikastlanishiga qarshi himoya xususiyatlari tekshirildi. Umuman olganda, DNKning shikastlanishi ma'lum genlarning nusxa ko'chirish sonini kamaytiradi, shuning uchun jel elektroforezida pastki tarmoqli intensivligini hosil qiladi. MP, MP/NabM va MP/IHM ning IC50 bilan va ularsiz Fenton reaktivi bilan inkubatsiya qilingan qon genomik DNKsining tarmoqli zichligi MTHFR geni sinovdan o'tkazildi. MP/NabM va MP/IHM (3 va 4-qator, 9B-rasm) DNK shikastlanishining oldini olgani va keyinchalik MTHFR shablonini kesish joyini himoya qilgani aniqlandi. Shu sababli, elektroforez jelida tegishli boshqaruv elementlariga nisbatan yuqori PCR mahsulot tasmasi intensivligi hosil bo'ldi (9B-rasm). Ushbu natijalar MPMC ning antioksidant faolligi DNKning shikastlanishiga vositachilik qiluvchi erkin radikallarni ishlab chiqarishni inhibe qilganligini ko'rsatdi.

2.8.5. Gen ifodasi

Olingan apoptoz oqsili markeriga muvofiq, RT-qPCR natijalari HepG-2, MCF-7 hujayralarini MP, MP/NabM va MP/IHM bilan inkubatsiya qilish pro-potenziyaning sezilarli darajada oshishiga olib kelganligini aniqladi. apoptotik mRNK markerlari, ya'ni Casp3, p53 va Bax, antiapoptotik marker Bcl-2ning ifoda darajasi sezilarli darajada pasaygan (10A-D-rasm). Kaspazlar apoptozning boshlanishi va davom etishida muhim rol o'ynaydigan aktyor oqsillaridir. Biroq, kaspaza 3 oqsilining ko'tarilishi apoptozning asosiy ichki yo'lining bajarilishini ko'rsatadi (10A, B-rasm), bu mitoxondriyal membrananing Bax tomonidan induktsiyalangan sitoxrom c chiqarilishi bilan ajralib chiqishi va kaspaza 9 faollashishi bilan tavsiflanadi. kaspaza 3 ning keyingi ulanishi [42]. Casp3, p53 va Baxning yuqori regulyatsiyasi, Bcl{20}} ifodasining kamayishi MP, MP/NabM va MP/IHM apoptozni qo'zg'atganini ko'rsatdi. Shu munosabat bilan, p53 stimulyatsiyalangan Bax ifodasini ko'tarilishi, o'z navbatida, sitoxrom c chiqarilishini, keyin esa kaspaza-9 va -3 faollashuvini keltirib chiqaradi. Biroq, antiapoptoz sifatida Bcl-2 sitoxrom c chiqarilishini inhibe qilishi ma'lum [43], davolash natijasida antiapoptotik marker gen Bcl-2ning mRNK transkript darajasi sezilarli darajada pasaydi. MP / NabM va MP / IHM bilan davolash, bu Bax-induktsiyasiz sitoxrom c chiqarilishini va keyingi apoptozni osonlashtiradi. Ushbu tadqiqotda MP / NabM (10-rasm) da kuzatilganidek, MP / IHM va MP ga nisbatan apoptozni jiddiy vositachilik qildi. MP/NabMor MP/IHMning kuzatilgan saratonga qarshi taʼsiri apoptozning ap{32}}bogʻliq yoʻlining modulyatsiyasi orqali sodir boʻladi, chunki uning oqsil va mRNK transkript darajasi sezilarli darajada yuqori tartibga solingan.

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun havolani bosing:https://www.xjcistanche.com/news/nano-milk-protein-mucilage-complexes-characte-55049190.html