Ko'p terapevtik birikmalar tabiiy ravishda ko'p bo'lgan organik resurslardan ajratilgan

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Ko'p terapevtik birikmalar tabiiy ravishda ko'p bo'lgan organik resurslardan ajratilgan bo'lib, ular xavfsiz va samarali biologik faollikka ega bo'lgan birikmalarning iqtisodiy va barqaror manbalarini taklif qilishi mumkin. Kosmetika sanoatida qarishga qarshi ta'sirga ega tabiiy birikmalar katta qiziqish bilan izlanadi. Shunday qilib, biz Rubusfraxinifolius barglaridan turli xil ekstraktlar tayyorladik va terining qarishiga qarshi himoya ta'siri bo'lgan birikmalarni ajratish uchun ferment inhibisyon tahlillaridan foydalandik. Rubus fraxinifolius Poirdan ikkita triterpenoid ajratilgan. barglari. Tuzilmalar spektroskopik tahlillar (LC-ESI-MS, 1D/2D NMR) va hisobot ma'lumotlari bilan taqqoslash bilan tavsiflangan. Murakkab 1 va 2 2,3-O-etilen glikol,19-gidroksiurs-12-en-23,28-dioik kislota va 2,{{15} sifatida aniqlandi. }O-propandiol,19-gidroksiurs-12-en-28-oy kislotasi. Metanol ekstrakti va izolatlar elastaz va tirozinazaga inhibitiv ta'siri uchun baholandi. 1 va 2 birikmalar elastazni ICso 122,199 ug/mL va 98,22 ug/mL bilan inhibe qildi, shuningdek, mos ravishda ICso 207,79 ug/army va 221,51 ug/ml tirozinazni inhibe qildi. Molekulyar ulanish ikkala birikmaning fermentlarga yaqinligini isbotladi.

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Garchi erishish qiyin bo'lsa-da, odamlar uchun xavfsiz bo'lgan tabiiy qarishga qarshi moddalarni mo'l-ko'l tabiiy resurslardan iqtisodiy va barqaror ravishda yig'ish mumkin. Rubus (Rosaceae) ning 700 ga yaqin turlari butun dunyo bo'ylab tarqalgan, garchi tropiklarda bir nechta turlari mavjud. Bu nasl ozuqa moddalari (shakar, vitaminlar va boshqalar), ikkilamchi metabolitlarni (triterpenoidlar, flavonoidlar, polifenollar va boshqalar) o'z ichiga oladi va ko'plab qarishga qarshi ta'sirga ega (antioksidant, chumoli elastaz, chumoli tirozinaza, kollagenazaga qarshi, ultrabinafsha nurlanishga qarshi, yallig'lanishga qarshi, yarani davolovchi va boshqalar)1. Bundan tashqari, Rubus turlari, shuningdek, turli xil biologik faolliklarga ega bo'lgan turli triterpenlarni o'z ichiga olganligini xabar qildi -'.

Indoneziyada R. fraxinifolius Poir. (Rosaceae) Java, Borneo va boshqalarda tarqalgan va xalq orasida "shahar" nomi bilan mashhur.cistanche nimaBundan tashqari, ba'zi mahalliy fermerlar bu o'simliklarni yig'ib olishadi va berry mevalari odatda yangi yoki muzlatilgan holda iste'mol qilinadi. Bizning oldingi tadqiqotimiz R. frascinifolius ildiz ekstrakti elastaz, tirozinazni inhibe qilish va antioksidant sifatida faollikka ega ekanligini ko'rsatdi8. Ba'zi boshqa tadqiqotlar ham R. fraxinifoliusning bargi va mevasi kuchli antioksidant faollikka ega ekanligini ko'rsatdi?10. Biroq, R. fraxinifoliusni o'rganish juda kam o'rganilgan va kimyoviy tarkibiy qismlarni o'rganish haqida xabar berilmagan.

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Elastaz serin proteaza fermenti bo'lib, terining elastik tolasi (elastin) parchalanishi orqali terining ajinlari yoki sarkmalarida hal qiluvchi rol o'ynaydi va terining elastikligini yo'qotadi. Ulardan biri teri fibroblastidan olingan elastazdir. Shunday qilib, terining qarishiga olib keladigan elastin tolasi degradatsiyasining moderatorlari sifatida elastaz inhibitörleri kosmetik preparatlar uchun agentlar sifatida e'tiborni tortdi,12. Melanogenez tirozinaza vositasida amalga oshiriladi va ikki bosqichli reaktsiya orqali melanin biosintezini tartibga soladi. Dastlabki bosqichda L-tirozin L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA) ga gidroksillanadi. Ikkinchi bosqichda L-DOPA tegishli O-xinongacha oksidlanadi. Shuning uchun, tirozinaz inhibitiv faolligi bo'lgan tabiiy birikmalar odatda melanin bilan giperpigmentatsiyani inhibe qiluvchi va shuning uchun terining oqartirilishini qo'llab-quvvatlaydigan kosmetika sohasida qo'llaniladi.Qarishga qarshi sistancheElastaz va tirozinaza fermenti inhibitörleri dermatologik kasalliklarni davolash uchun terini oqartiruvchi, qarishga qarshi yoki ajinlarga qarshi vositalar sifatida ishlab chiqilishi mumkin44.

Ushbu tadqiqot R.fraxinifolius barglaridan ursan triterpenoidlarini ajratib oldi va elektrosprey ionizatsiyasi massa spektroskopiyasi (ESI-MS) va 'H NMR, |3CNMR va 2D NMR (DEPT, HSQC, HMQC va HMBC) yordamida spektroskopik tahlillarda ularning strukturalarini aniqladi. Keyinchalik, biz xom ekstraktlar, fraktsiyalar va izolyatsiya qilingan birikmalarning elastaz va tirozinaz inhibitiv faolligini tahlil qildik.

Ushbu tadqiqotda ikkita tanlangan birikmaning faolligi silika usulida ham kuzatildi. DockThorl516 yordamida molekulyar oʻrnatish yondashuvi amalga oshirildi. Ushbu tadqiqotda foydalanilgan makromolekulalar oqsil maʼlumotlar bankidan (RCSB PDB, 2000) tirozinaz va elastaz uchun mos ravishda 2y9x va 3hgp identifikatorlari bilan 718 dan olingan. PyMOL1920 bilan kuzatilgan.

Natijalar va muhokama

The ethyl acetate and methanolic extracts of R. fraxinifolius leaves showed potential as elastase inhibitors with percent inhibitory>100 ug/ml da 40 foiz, n-geksan ekstrakti esa faollikka ega emas edi (1-rasm). Ba'zi Rubuslar, shuningdek, elastazni inhibe qiluvchi faollikni ham ko'rsatdilar, masalan, R. Sanctus (% 14.68-49.20 100 ug/ml）, R.compactus, R. robustus va boshqalar.221. Shunday qilib, biz vakuumli suyuqlik xromatografiyasi / VLC yordamida faol ekstraktlarni fraktsiyalarga ajratdik va har biridan ll fraksiyalarni yig'dik. Etil asetat ekstraktining fraksiyalari zaif elastaz inhibitör faolligini ko'rsatdi (<20% in="" 100="" ug/ml),but="" some="" methanol="" fractions="" showed="" potential="" activity="" in="" these="" assays.="" we="" choose="" metha-nol="" fraction="" 8(m8)for="" further="" isolation="" because="" it="" hadthe="" largest="" yield(57%)="" and="" also="" have="" elastase="" inhibitory="" activity(44.82%).m8="" was="" further="" partitioned="" and="" purified="" over="" silica="" gel="" and="" through="" a="" sephadex="" column,="" and="" two="" amorphous="" powders="" were="">

Izolyatsiyalar suyuqlik xromatografiyasi-mass spektroskopiyasi (LCMS), 'H va 13CNMR, DEPT, geteroyadroviy yagona kvant kogerentligi (HSQC), heteronuklear ko'p kvant korrelyatsiyasi (HMQC) va heteronuklear ko'p bog'lanish korrelyatsiyasi (HMBC) yordamida aniqlangan va tavsiflangan. 1-jadvalda birikmalarning NMR spektral ma'lumotlari ko'rsatilgan.

Murakkab 1: amorf oq kukun sifatida ajratilgan. Ushbu birikma uchun LCMS-ESI spektrlari m/z 543,32[MH]t da molekulyar ion cho'qqisini ko'rsatdi, bu C32H48O- molekulyar formulasini to'qqizta to'yinmaganlik ekvivalenti bilan ko'rsatdi. IQ spektrlari gidroksilga (3,343,4 sm) mos keladigan yutilish maksimalini aniqladi. olefinik (1,684 sm-1) funktsional guruhlar. Bundan tashqari, I birikmaning H NMR spektrlari metin protonining (CH) 2,6 lik singli signalini aniqladi, bu ursan tipidagi H-18 uchun xarakterli signaldir. 19-O-almashinuvi bilan triterpenlar. Triterpen tipidagi 19a-gidroksiursan ham 2,6 ppm atrofidagi hududda odatiy proton signaliga ega. Himoyalanmagan bu signal boshqa ordinal metilen proton signallaridan keskin farq qilishi mumkin, u 5,28(t,J=6Gts) olefinik proton (H12) tufayli xarakterli siljish bilan.cistanche beefíciosHMQC(13Cx'H) va HMBC(15Cx'H) spektrlari "H va l3C" kimyoviy siljishlarining to'liq va aniq bajarilishiga yordam berdi. {5}}(2a-rasm). Boshqa o'ziga xos belgilar beshta metil singl uchun 1,89,1 da topildi.02,0,82,1,32,1,20(har biri,H24-27;29), metil dublet og 0,92(d,) J=6 Hz) va olefin proton signali 5,30 (t, J=7 Gts, H-12). Hozirgi 13CNMR spektrlari 32 ta uglerod rezonanslarini ko'rsatadi va DEPT va HMQC spektrlari bilan ikkita karbonil uglerodlari (DC183.70,C-28 va 8-178.96,C-23), olefinli uglerodni ko'rsatdi. oc 127.23,C-12, olefin toʻrtlamchi uglerod(oc139.49,C-13), kislorodli toʻrtlamchi uglerod (o-72.7, C-19 ）, o'nta alifatik metilen va oltita metil uglerod. d-127.23（C-12）va 139,49(C-13) da ikkita olefinli uglerod ursan-triterpenoid tipiga xos edi. Etilen glikol (-OCH-CH-O-) mavjudligini ko'rsatadigan boshqa signal d4,62（d, J=11,5 Hz）,4,05（d, J=11 da signallarda ko'rsatilgan. 5 Hz）,3.52（d, J=11.5Hz）va 4.06（d, J=11.5Hz） va d61.27（t）va 63.20（t） bilan quvvatlanadi. HMBC spektrlarida uzoq masofali korrelyatsiya mavjudligiga asoslangan C-2va C-3. Demak, 1-birikma 2,3-O-etilen glikol,19-gidroksiurs-12-en-23,28-dioik kislota sifatida aniqlandi (3a-rasm).

Murakkab 2: oq amorf kukun sifatida olindi.MS-ESI m/z 527,33 [MH]t (hisoblangan. 528,3815 uchun). LCMS-ESI spektrlarida molekulyar ion cho'qqisi m/z 527,33 [MH]t da mavjud bo'lib, CH Os molekulyar formulasini ko'rsatadi, bu 8 daraja to'yinmaganlikni talab qiladi."IQ spektri gidroksilga (2,927,8 sm{) mos keladigan yutilish maksimalini o'z ichiga olgan. {15}}) va olefinik (1,686sm-1) funktsional guruhlar. Bundan tashqari, "2 birikma uchun HNMR spektrlari 2,42 da singletni ko'rsatdi, bu {{24) ursan tipidagi triterpenning H18 ga xosdir. }}O-almashtirish.Radiatsiyaga qarshi Cistanche ekstraktiBoshqa o'ziga xos xarakterli spektrlar og1.22 0.76,0.97,0.69,1.30va 1.17(har biri,H) da oltita metil singli borligini o'z ichiga oladi. -24-28,H-30), 0,91 (d,J=7Gts) chastotada metil dublet va 5,37 (d, J=7 Gts) olefin proton signali, H-12). Tegishli l3(CNMR va DEPT spektrlari 33 ta uglerod rezonansini ko‘rsatadi, HSQC va HMQC spektrlari esa karbonil uglerod (oc 182.23, C-28), olefinli uglerod (d-129) mavjudligini ko‘rsatadi.36, C -12）, olefin toʻrtlamchi uglerod (d-140.24, C-13), kislorodli toʻrtlamchi uglerod (oc73.68, C-19), oʻn bir alifatik metilen va yettimetil uglerodlar. Bu maʼlumotlar 2-birikmada ursan-triterpenoid skeleti borligini koʻrsatdi. Boshqa signallar og 3.22(d,J=11 da 1,{38}}propandiol funktsional guruhi mavjudligini koʻrsatadi. ,5 Gts),3,42(d,J=10,5Hz),1,38(m),1,51(m)va 4,02(d,J=11,5Hz) va 3,36(t, J{ {57}}.5Hz).Uning funktsional guruhi C2-C3 bilan uzoq masofali korrelyatsiyaga ega. Ushbu natijalarga asoslanib, 2 birikma 2,3-O-Propandiol,{{ 66}}gidroksiurs-12-en-28-oy kislotasi(2b va 3b-rasmlar). Shunga o'xshash birikma Rubus ksantokarpusdan ajratilgan 2,3-O-izopropiliden kislotani azoblaydi.7

1-jadvalda barcha 'H va ''C NMR spektrlari qiynoq kislotasi (TA/2a,3a,19-trigidroksi-12-ursen{5}}oy kislotasi）²) bilan solishtirilgan. Rubusning bir necha turlarida topilgan ursane triterpenoid-p Tormentik kislota 1 va 2 birikmalari bilan kuchli o'xshashliklarga ega edi, faqat C-23 va C31-33 bilan bog'liq kimyoviy siljishlar farqlanadi. DEPT, HMQC va HMBCexperiments (2-rasm).

Triterpenoid kislotasi tabiiy o'simlik ovqatlarida keng tarqalgan. U turli xil bioaktivlikka ega: gipoglikemik ta'sir, yallig'lanishga qarshi va anti-aterojenik xususiyatlar tomirlarning silliq mushaklari hujayralarining ko'payishini kamaytiradi va buyrak, prostata va melanoma saraton hujayralari liniyalarida antiproliferativ faolliklarga ega2426. Shuning uchun, bu birikmalar bir xil skeletga ega bo'lganligi sababli, ular tegishli potentsial faoliyatga ega.

4-rasmda izolatlarning inhibitiv elastaz va tirozinaz faolligi ko'rsatilgan. In vitro fermentlarni inhibe qilish tahlillaridan olingan ma'lumotlar standart og'ish (SD) sifatida ifodalangan. 1 va 2 birikmalar elastazni ICso 122,199 va 98,22 ug/ml bilan, shuningdek, mos ravishda ICso 207,79 va 221,51 ug/ml bilan tirozinazani inhibe qildi. Ba'zi pentatsiklik triterpenoidlar (ursolik kislota va oleanolik kislota) elastazni inhibe qilish faolligini qayd etdi2728. Murakkab 2 ning elastazani inhibe qilish qiymati ham 1-birikmadan past. Ikkala birikma ham 90,39 ug/ml ICso qiymatiga ega bo'lgan musbat nazorat oleanolik kislotaga qaraganda kamroq inhibisyon faolligiga ega edi. Kelishuvga ko'ra, oldingi tadqiqotlar oleanolik kislota uchun ICso 76,5 ug / ml va ursolat kislotasi uchun 31,0 ug / ml ICso qiymatini ko'rsatdi28. Pentatsiklik triterpenlarning ilgari xabar qilingan kinetik tahlillari shuni ko'rsatdiki, bu birikmalar neytrofil elastazani raqobatbardosh va teskari ravishda inhibe qiladi. Xuddi shu tadqiqotda molekulyar o'rnatish tajribalari shuni ko'rsatdiki, molekulyar iskala qismi 28-COOH va pentatsiklik triterpenlardagi qo'sh bog'lar ularning inhibitiv faoliyati uchun zarurdir.

Yoshi bilan yuzaga keladigan muammolardan biri bu giperpigmentatsiya.cistanche o'tShunday qilib, terini oqartiruvchi vositalar yoki yangi depigmentatsiyani izlash davom etmoqda. Tirozinazni bostirish melanogenezga qarshi harakat qilishi mumkin ". Fig.4da ko'rsatilganidek, metanol ekstrakti va I va 2 birikmalari tirozinaz inhibitörleri sifatida o'rtacha faollikni ko'rsatdi.

Ushbu tadqiqotda molekulyar docking tanlangan birikmalarning tirozinaz va elastaz bilan bog'lanish faolligini ularning maqsadlari sifatida tahlil qilish uchun ham ishlatilgan. Ishlatilgan kristall tuzilmalar 2Y9X, inhibitor tropolon bilan Agaricus bisporus dan tirozinazning kristalli tuzilishi; va BHGP, kuchli peptidil inhibitori FR130180 bilan komplekslangan cho'chqa pankreatik elastazasining kristalli tuzilishi. Ikkalasi ham tanlangan, chunki ular ushbu tadqiqotning in vitro tahlili uchun ishlatiladigan bir xil organizmdan olingan. Makromolekulalar, shuningdek, ferment konformatsiyasining faol holatini olish uchun tegishli inhibitorlari bilan bog'langan. Kokristallar molekulyar o'rnatish maqsadining markazi sifatida birikmaning bog'lanish ehtimolini qisqartirish uchun ishlatilgan, shuning uchun ball olish jarayoni yanada samarali bo'ladi.

Molekulyar ulanishdan, 5 va 6-rasmlarda ko'rsatilganidek, ikkala birikma uchun o'rtacha bog'lanish yaqinliklari olingan. Yaqinlik bashorati har bir birikmaning yuqori energiya pozasini hisobga olgan holda turli ligandlarni tartiblash uchun ishlatiladi, yaxshiroq energiya pozasi bashorati quyidagicha ko'rsatiladi: pastroq bog'lanish afinites ballari16. Belgilangan ingibitor tropolonni qayta tiklash o'rtacha -7,41 kkal/mol bog'lanish yaqinligi bilan amalga oshirildi. 1 va 2 birikmalarining tirozinazaga oʻrtacha bogʻlanish darajasi mos ravishda -7,84 kkal/mol va -8,37 kkal/mol edi (2-jadval). Ikkala birikma ham inhibitorga qaraganda yaxshiroq yaqinlikka ega ekanligi taxmin qilingan.

Shu bilan birga, elastaseredokingning o'rtacha bog'lanish afinitesi -7,84 kkal/mol edi. 1 va 2 birikmalarning elastazaga oʻrtacha bogʻlanish koʻrsatkichlari mos ravishda -7.58kkal/mol va -8.06 kkal/mol edi. Natija 1-birikmaning kokristaldan pastroq yaqinliklarga ega ekanligini ko'rsatgan bo'lsa ham, u biroz farq qiladi (<0.5 kcal/mol)compared="" to="" the="" inhibitor="" used="" hence="" the="" scores="" may="" ovelrlap31.="" these="" scores="" showed="" that="" both="" compounds="" were="" predicted="" to="" have="" affinities="" toward="" the="" enzymes,="" which="" is="" in="" conjunction="" with="" the="" in="" vitro="" assay="">

Usullari

Umumiy eksperimental jarayonlar. 'H va' NMR spektrlari JEOL JNM-ECZ500R/S1 asbobi yordamida 500 MGts chastotada qayd etilgan. Infraqizil (IR) spektrlari FTIR, IRPrestige-21, Shimadzu yordamida o'lchandi. Boshqa tahlillar Waters UPLC-MIS XEVO G2-XS QTof asbobi, VersaMax Microplate o'quvchi va BioTek ELX800 Microplate Reader, lore qoplangan alyuminiy plitalar TLC-Silica gel 60 GF254 (Merck, Darmshtadt, Germaniya) yordamida amalga oshirildi. , ustunli xromatografiya (CC) Silika gel 60 (Merck, Darmshtadt, Germaniya) yordamida ochiq xromatografiya uchun 70-230 mesh va vakuumli xromatografiya uchun 230-400 mash bilan amalga oshirildi. O'simlik materiallari. R. fraxinifolius barglari 2018-yil dekabr oyida G‘arbiy Yavadagi Pangrango tog‘idagi plantatsiya maydonidan 4343 fut balandlikda yig‘ilgan. Namuna Indoneziya instituti Biologiya ilmiy-tadqiqot markazida botanik (doktor Joni Setijo) tomonidan aniqlangan. Sciences, Indoneziya, namuna raqami 033/IPH.1.01/If.07. O'simlik materiallarini yig'ish fermerdan ruxsat olgan va institutsional qoidalar va ko'rsatmalarga muvofiq bo'lgan.

Ekstraktsiya va izolyatsiya. Havoda quritilgan chang barglari (2300 g) tegishli ekstraktlarni olish uchun gradient erituvchi (n-geksan, EtOAc va MeOH) bilan Soxhlet apparati yordamida ekstraksiya qilindi, so'ngra aylanadigan bug'latgich bilan bug'landi. va vakuumli pech. Metanol ekstrakti (291 g) va etil asetat ekstrakti (65 g) silikagelga adsorbsiya qilindi va vakuumli suyuqlik xromatografiyasi/VLC amalga oshirildi, EtOAc: MeOH (1:0 dan 0:1 gacha) bosqichma-bosqich gradienti bilan elutildi. har bir ekstrakt uchun kasr hosil qiladi (Eal-Xall va M1-Mill va). TLCda vanillin sulfat reagentlari bilan ijobiy reaksiyaga ega bo'lgan shunga o'xshash fraktsiyalar birlashtirildi. Fraksiya unumi: Eal-3 (2,27 g);Ea4-6(8,47 g);Ea7-8(12,9 g);Ea9-11 (22,3 g); va M1-3 (4,89 g);M4-5 (5,1 g);M6-7 (6,02g);M8(166,42g);M9(10,53g);M{{38 }} (2,9 g). Barcha fraktsiyalar inhibitor elastaz faolligi uchun topshirildi, Fr. M8 eng katta hosil berdi va kuchli faollikka ega edi. Fr. M8 silikagel ustida CC orqali ketma-ket bo'linadi (eluent CH2Cl2/MeOH bosqichma-bosqich gradient bilan) va Sephadex LH-20 ustuni yordamida tozalanadi (CHCl3-MeOH 100:10, v/v. Ikki fraksiya bilan elyut). qattiq tabiatni ko'rsatdi va ikkita izolat olish uchun xloroform va metanol bilan kristallandi: birikma 1 (18 mg) va: 2 (31 mg) Barcha izolatlarning tozaligi ikki o'lchovli TLC tomonidan baholandi va 5 foiz sulfat yordamida dog'ni vizualizatsiya qildi. metanoldagi kislota, so'ngra plitalarni 110 daraja 5 daqiqa davomida isitish.

Kristallar aniqlandi va suyuq xromatografiya-massa spektroskopiyasi (LCMS), LH va '3C buzilishlarini polarizatsiya o'tkazish (DEPT) NMR, geteroyadroviy yagona kvant kogerentligi (HSQC), heteronuklear ko'p kvant korrelyatsiyasi (HMQC) va heteronuklear ko'plik orqali kuchaytirish yordamida aniqlandi va tavsiflandi. bog'lanish korrelyatsiyasi (HMBC).

Elastazni inhibe qilish tahlili. Elastazni inhibe qilish tahlili ilgari ta'riflanganidek, ba'zi o'zgartirishlar bilan amalga oshirildi32. Qisqacha aytganda, Nunc -96 quduq mikrotitr plitalarida, 20-mL alikotlari 0.8-Trizma darajasidagi bazaviy buferda （pH 8.0 birlik/ml PPE. ） 20- mkl namunalar bilan aralashtirildi va aralashmalar Trizma darajasidagi asosiy tamponda 180 mL gacha suyultirildi. Sinov ekstraktlari 15 daqiqa davomida ferment bilan oldindan inkubatsiya qilindi va N-suksinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (A3PVN; 2,9 mM) substratining 20-mL alikotlari qo'shildi va yana 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Ijobiy nazorat va bo'sh quduqlar o'z navbatida oleanolik kislota va suvni o'z ichiga olgan. Tajribalar uch nusxada o'tkazildi va inhibisyon stavkalari absorbsiyaga qarab aniqlandi; VersaMax mikroplata o'quvchi yordamida 401 nm. Foiz inhibisyoni quyidagi tenglama yordamida hisoblangan:

Bu yerda E - ferment reaksiyasining absorbsiyasi, Eb - ferment blankining absorbsiyasi, T - sinov namunasining absorbsiyasi, Tb - sinov blankining absorbsiyasi. qiymatlar konsentratsiyaga (50,75,100,125,150 ug/ml) nisbatan foizli elastaz inhibisyonining chiziqli grafigidan ham aniqlandi. Tirozinazni inhibe qilish tahlili. Tirozinazni inhibe qilish DOPA-xrom hosil bo'lish usuli yordamida, avvalroq biroz o'zgartirishlar bilan aniqlangan. Qisqacha aytganda, 96-quduq plastinkalarida 20 mkl alikot DMSO (nazorat) yoki turli konsentratsiyadagi sinov birikmalari 40 mkl alikvotlar 30 U/ml qo‘ziqorin tirozinazasi (Sigma Aldrich) va 100- mL alikvotlar bilan aralashtiriladi. 0.1-M fosfat buferi （pH 6,8）. Ular xona haroratida 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Reaksiyalar har bir quduqqa 10 mML-DOPA ning 4 mkl alikotlarini qo'shish va 37 daraja 20 daqiqa davomida inkubatsiya qilish bilan boshlandi. Keyin tirozinaza faolligi 475 nm da absorbansni o'lchash orqali aniqlandi. Kojik kislota ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. Tajribalar uch nusxada o'tkazildi. Tirozinazni inhibe qilish foizi quyidagi tenglama yordamida hisoblangan:

Bu yerda E - ferment reaksiyasining absorbsiyasi, Eb - ferment blankining absorbsiyasi, T - sinov namunasining absorbsiyasi, Tb - sinov blankining absorbsiyasi. konsentratsiyaga (250,125,62,5,31,25,15,6 ug/ml) qarshi foizli elastaz inhibisyonining chiziqli grafigidan ham qiymatlar aniqlandi.

Molekulyar ulanish. Ushbu tadqiqotda silikada farmakologik faollik shifokor yordamida molekulyar o'rnatish bilan bashorat qilingan. Maqsadli molekulyar biriktirish faol saytning markazi sifatida kokristallangan ligand yordamida amalga oshirildi. Struktura 2Y9X qo'ziqorin tirozinazasining inhibitori bo'lgan tropolon bilan tirozinaza molekulyar biriktirilishi uchun uning kokristali sifatida ishlatilgan. Molekulyar oʻrnatish joyining markazi -10.032;-28.769 va -43.467 da mos ravishda X, Y va Z oʻlchamlari sifatida aniqlanadi. A zanjiri foydalanish uchun ajratildi va Holmium atomi UCSF Chimera yordamida tuzilishdan olib tashlandi.

Ushbu tadqiqotda 3HGP, cho'chqa elastazasi tuzilishi ham qo'llanilgan. FR130180, chunki kokristal molekulyar o'rnatish joyining markazi sifatida ishlatilgan. X, Y, Z o'lchamlari uchun koordinatalar mos ravishda 12,453,9,237 va 1,199 edi. Bog'lanish yaqinligi har bir molekulyar o'rnatish hisobining eng yaxshi o'nta konformeridan tahlil qilindi.

Ushbu maqola Scientifc Reports|dan olingan (2021) 11:20452|https://doi.org/10.1038/s41598-021-99970-x