1-qism:Akteozid interleykinga qarshi ta'sir qiladi-1 -Mitogen-faollashtirilgan oqsil kinazalarining modulyatsiyasi va NFKB uyali signalizatsiya yo'li orqali qo'zg'atilgan katabolik jarayonlar

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

HyangI Lim, 1 Do Kyung Kim, 1 Tae-Hyeon Kim, 1 Kyeong-Rok Kang

Osteoartrit (OA) sinovial bo'g'imlarda artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasidan kelib chiqadigan surunkali og'riqli og'riyotgan eng keng tarqalgan degenerativ kasallikdir.Akteozid, kofeoilfeniletanoid glikozid, mikroblarga qarshi, yallig'lanishga qarshi, saratonga qarshi, antioksidant, sitoprotektiv va neyroprotektiv ta'sir kabi turli xil biologik faollikka ega. Bundan tashqari, og'iz orqali yuborishakteozidyuqori dozada genotoksiklikka olib kelmaydi. Shuning uchun, ushbu tadqiqotning maqsadi antikatabolik ta'sirini tekshirishdirakteozidosteoartrit va uning antikatabolik signalizatsiya yo'liga qarshi.AkteozidOddiy hujayralar va asosiy kalamush xondrositlari sifatida ishlatiladigan sichqoncha fibroblasti L929 hujayralarining hayotiyligini kamaytirmadi.Akteozidmatritsa metalloproteinaz- (MMP-) 13, MMP-1 va MMP kabi xaftaga parchalanadigan fermentning ifodalanishi va faollashuvini bostirish orqali xondrositlar va artikulyar xaftaga IL{0}}induktsiyalangan proteoglikan yo'qotilishiga qarshi kurashdi. {6}}. Bundan tashqari, akteozid IL-1 bilan davolash qilingan asosiy kalamush xondrositlarida induksiyalanuvchi azot oksidi sintaza, siklooksigenaza-2, azot oksidi va prostaglandin E2 kabi yallig'lanish vositachilarining ifodasini bostirdi. Keyinchalik, IL-1 bilan davolash qilingan birlamchi kalamush xondrositlarida proinflamatuar sitokinlarning ekspressiyasi akteozid tomonidan kamaydi. Bundan tashqari, akteozid IL-1 bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlarida nafaqat mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazlarining fosforlanishini, balki fosforillanishini bostirish orqali NFKB ning sitozoldan yadroga o'tishini ham bostiradi. 5 va 10 mg / kg akteozidni og'iz orqali yuborish medial meniskusning beqarorligi natijasida hosil bo'lgan osteoartritli sichqoncha modelida artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini susaytirdi. Bizning topilmalarimiz shundan dalolat beradiakteozidartikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini susaytirish yoki oldini olish uchun istiqbolli potentsial antikatabolik vosita yoki qo'shimcha hisoblanadi.

sistanx-akteozid

1.Kirish

Osteoartrit (OA) sinovial bo'g'imlarda artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasidan kelib chiqadigan surunkali bo'g'im og'rig'i bilan kechadigan eng keng tarqalgan degenerativ qo'shma kasallikdir [1]. O'rtacha umr ko'rish davomiyligining oshishi tufayli sinovial bo'g'imlarda artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasi natijasida kelib chiqadigan harakatchanlik va surunkali bo'g'im og'rig'i bilan og'rigan OA tarqalishi menopauzadan keyin ayollarda 18% va erkaklarda 9,6% ni tashkil qiladi. ]. Dunyo bo'ylab OA tarqalishi yil sayin ortib borayotganiga qaramay, OA ning patofiziologik etiologiyasi haligacha noma'lum. Bunga qarish, jins, genetik meros, travmatik qo'shma shikastlanish va og'ir mexanik qo'shma yuk kabi juda murakkab va ko'p omilli xavf omillari sabab bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasi va surunkali og'riyotgan og'rig'ining rivojlanishi o'rtasidagi neyropatologik munosabatlar noma'lum [3]. Shunday qilib, OA bilan og'rigan bemorlarni klinik davolashning maqsadi surunkali bo'g'im og'rig'idan xalos bo'lish, farmakologik va farmakologik bo'lmagan yondashuvlar va bo'g'imlarni almashtirish jarrohligi yordamida tananing harakatchanligi va mexanik bo'g'imlarning funktsiyasini saqlashdir. Keksa yoshdagi aholining mexanik qo'shma funktsiyasini saqlab turish orqali hayot sifatini saqlab qolish uchun OAni oldini olish yoki susaytirish uchun uzoq muddatli biologik xavfsizlik bilan samarali aralashuv yoki qo'shimchalarni ishlab chiqish talabi ortib bormoqda.

1-rasmda ko'rsatilganidek, akteozid (CAS № 61276-17-3; C29H36O15) Verbascum chlorides [4], Buddleja globosa [5] va Plantago australis [6] kabi bir nechta o'simlik o'simliklaridan ajratilgan kofeoilfeniletanoid glikoziddir. Akteozid antimikrobiyal [5], yallig'lanishga qarshi [7], saratonga qarshi [8], antioksidant [9], sitoprotektiv [9] va neyroprotektiv ta'sir [10] kabi turli xil biologik faollikka ega. Bundan tashqari, akteozidni yuqori dozada og'iz orqali yuborish genotoksiklikka olib kelmaydi [11].

Shunday qilib, biz yallig'lanishga qarshi biologik xavfsizligi bo'lgan akteozidning yallig'lanishga qarshi sitokinlar, yallig'lanish mediatorlari, yallig'lanish-enjeksiyonlar va yallig'lanish jarayonlari kabi katabolik omillarni bostirish orqali artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasidan himoya qilish bilan bog'liq antikatabolik ta'sirga ega deb taxmin qildik. . Shu sababli, ushbu tadqiqotning maqsadi kalamush tizzasi bo'g'imining bo'g'im xaftasidan ajratilgan birlamchi xondrositlar yordamida in vitro va in vivo jonli ravishda jarrohlik yo'li bilan yaratilgan OA hayvon modelidan foydalangan holda akteozid tomonidan qo'zg'atilgan antikatabolik ta'sirlarni va uning hujayra signalizatsiya yo'lini o'rganish edi. sichqonlarning tizza bo'g'imida medial meniskusning beqarorligi.

dan akteozidcistanche

2. Usullar

2.1. Hujayra madaniyati. Birlamchi kalamush xondrositlari Institutsiya tomonidan tasdiqlangan protokolga (CIA-CUC2019-A0027) muvofiq kalamush (5-kunlik; Sprague-Dowley) tizza bo‘g‘imlarining artikulyar xaftagasidan ajratilgan. Chosun universiteti hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish qo‘mitasi, Kvanju, Koreya Respublikasi. Izolyatsiya qilingan birlamchi kalamush xondrositlari Dulbecco's Modifed Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) (Thermo Scientific, Rockford, IL, AQSH) 10 foizli homila sigir zardobi (FBS) bilan to'ldirilgan holda saqlangan. , Grand Island, NY, AQSH), antibiotiklar (50U/ml penitsillin va 50ug/ml streptomitsin) va 50ug/ml askorbin kislotasi. Oddiy sichqoncha fibroblasti L{15}} hujayra liniyasi American Type Culture Collection (ATCC) dan xarid qilingan. ATCC tomonidan taqdim etilgan ko'rsatmalarga ko'ra, L{16}} hujayralar Eaglening minimal muhim muhitida, 10% FBSni o'z ichiga olgan va 5% CO2 bilan 37 daraja namlangan inkubatorda o'stirilgan.

2.2. Hujayra hayotiyligini tahlil qilish. Dimetil tiazolil difeniltetrazolium tuzi (MTT) tahlili normal hujayra sifatida ishlatiladigan sichqoncha fibroblast hujayra liniyasi L929 hujayralari va akteozid bilan ishlov berilgan asosiy kalamush xondrositlarining hayotiyligini baholash uchun o'tkazildi. Qisqacha aytganda, L929 hujayralari va birlamchi kalamush xondrositlari 24 soat davomida madaniyat plitalarida 8 × 105 hujayra / ml hujayra zichligida o'stirildi va keyin 24 soat davomida 2,5, 5, 10, 25, 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berildi. MTT eritmasi bilan ishlov berilgandan so'ng, L929 hujayralari va xondrositlar 4 soat davomida ko'paytirildi. Inkubatsiyadan so'ng, hosil bo'lgan MTT kristallari to'liq dimetil sulfoksidda to'xtatildi va hujayra hayotiyligini baholash uchun spektrometr (Epoch mikroplatli spektrofotometr, BioTek®, Winooski, VT, AQSH) yordamida 570 nm da absorbans uchun o'lchandi.

2.3. Hujayra jonli/o'lik tahlili. Hujayraning omon qolishi Cell Live/Dead tahlil to'plami (Molecular Probes, Carlsbad, CA, AQSH) yordamida amalga oshirildi. hujayralar (qizil floresan bilan). Qisqacha aytganda, L929 xujayralari va birlamchi kalamush xondrositlari 24 soat davomida kamerali slaydlarda (Nunc® Lab-Tek® Chamber Slide™ tizimi; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) 8×105 hujayra/ml hujayra zichligida yetishtirildi va keyin 24 soat davomida 50 va 100 mkM akteozid. Kultivatsiyadan so'ng, ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq hujayraning omon qolish tahlili o'tkazildi. Shundan so'ng, bo'yalgan hujayralar floresan mikroskop yordamida tasvirlangan (Eclipse TE200; Nikon Instruments, Melville, NY).

2.4. Dimetilmetilen ko'k (DMMB) tahlili. DMMB tahlili IL-1 mavjudligi yoki yo'qligida 21 kun davomida akteozid bilan davolash qilingan asosiy kalamush xondrositlarida proteoglikan tarkibining o'zgarishini baholash uchun o'tkazildi. Birlamchi kalamush xondrositlarining xususiyatlarini 21 kun davomida saqlab turish uchun birlamchi kalamush xondrositlari (2×106 hujayra) 1 ml 1,2 foiz aljinatda to'xtatildi va keyin hujayra/alginat suspenziyasini 105 mM CaCl2 eritmasiga tomizish yo'li bilan kapsulalandi. Aljinat bilan qoplangan birlamchi kalamush xondrositlari DMEM/F12 da (tarkibida 10 foiz FBS, 50U/ml penitsillin, 50ug/ml streptomitsin va 50ug/ml askorbin kislota mavjud) 24 soat davomida yetishtirilib, so‘ngra DMEM/F12 foizga 24 soat davomida moslashtirildi. mini-insulin-transferrin-selen (mini-ITS) va 50ug / ml askorbin kislotasi. Keyinchalik, xondrositlar 21 kun davomida 1ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 50 yoki 100mkM akteozid bilan ishlov berildi. 21-kuni, birlamchi kalamush xondrositlari, avval aytib o'tilganidek, DMMB tahlili yordamida proteoglikan tarkibini baholash uchun yig'ildi [12]. Bundan tashqari, har bir hujayradagi proteoglikan miqdorini aniqlash va asosiy kalamush xondrositlarining ko'payishini baholash uchun hujayralar soni ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq PicoGreen (Molecular Probes, Carlsbad, CA) yordamida DNK tahlili bilan o'lchandi.

2.5. Sichqoncha artikulyar xaftaga to'qimalarining Ex Vivo Organ madaniyati. Artikulyar xaftaga to'qimalari 5- kunlik Sprague-Dawley kalamushlarining tizza bo'g'imlaridan ajratilgan va keyin 10 foiz FBS bilan to'ldirilgan DMEM/F12 da o'stirilgan. Keyinchalik, artikulyar xaftaga

namunalar 100 mkM akteozid bilan ishlov berildi7 kun davomida 10ng/ml IL-1 mavjudligi yoki yo'qligi. Madaniyat davri oxirida namunalar to'plangan va gistologik tahlil uchun 72 soat davomida 4 foizli paraformaldegidda mahkamlangan.

2.6. Gistologik tahlil. Safranin-O va tez yashil rangdan foydalangan holda gistologik tahlil 7 kun davomida 10 ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 100 mkM akteozid bilan ishlov berilgan artikulyar xaftaga proteoglikan yo'qolishini tekshirish uchun o'tkazildi. Qisqacha, mahkamlangan bo'g'im xaftaga namunalari etilendiamintetraasetik kislotada dekalsifikatsiya qilingan va keyin parafinga solingan. Shundan so'ng, artikulyar xaftaga o'z ichiga olgan tayyorlangan parafin bloklari ketma-ket 5 mkm qalinlikda kesilib, slaydlarga joylashtirildi. Keyinchalik artikulyar xaftaga tushadigan moddada proteoglikan yo'qotilishini baholash uchun Safranin-O va tez yashil rang berildi. Bundan tashqari, artikulyar xaftaga umumiy morfologiyasini kuzatish uchun gematoksilin va eozin bilan bo'yash amalga oshirildi.

2.7. Western Blotting. MMP-13, MMP-1, MMP-3, induksiyalanuvchi azot oksidi sintaza (iNOS) va siklooksigenaza-2 (COX) kabi katabolik omillarning ifodasini tekshirish uchun Western blotting amalga oshirildi. -2) va mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazlar va yadroviy omil-kappa B (NFKB) kabi uyali signalizatsiya molekulalarining o'zgarishi. Qisqacha aytganda, kalamush birlamchi xondrositlari 24 soat davomida 10ng/ml IL-1 bor yoki yo‘qligida 50 yoki 100mkM akteozid bilan ishlov berilgan. Shundan so'ng, kalamush birlamchi xondrositlari santrifüjlash yo'li bilan yig'ib olindi va ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq lizis buferi (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSH) yordamida lizing qilindi. Bundan tashqari, NFKB ning yadroviy translokatsiyasini tekshirish uchun kalamush birlamchi xondrositlari 24 soat davomida 10ng/ml IL-1 bor yoki yo‘qligida 50 yoki 100mkM akteozid bilan ishlov berilgan. Shundan so'ng sitozolik va yadro fraktsiyalari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq NE-PER™ yadroviy va sitoplazmatik ekstraksiya reagentlari (Thermo Scientific, Rockford, IL, AQSh) yordamida ekstraksiya qilindi. Birlamchi kalamush xondrositlaridan olingan umumiy oqsil kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq bitsinxonin kislotasi oqsilini tahlil qilish to'plami (Thermo Scientific, Rockford, IL, AQSh) yordamida aniqlandi. Bundan tashqari, kondrositlardan ajralib chiqadigan xaftaga tushadigan fermentlar darajasini aniqlash uchun shartli muhit to'plangan. Protein va shartli muhitning teng miqdori natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforezida (SDS-PAGE) elektroforez qilindi va keyin nitroselüloz membranalariga o'tkazildi. Keyinchalik MMP-13, MMP-1, MMP-3, iNOS, COX-2, fosfoERK1/2, jami-ERK1 ga qarshi maqsadli birlamchi antikorlar yordamida western blotting amalga oshirildi. /2, phosphop38, total-p38, fosfor JNK, jami JNK, phosphoNFKB, total NFKB, - aktin va lamin B. Immunoreaktiv chiziqlar kengaytirilgan kimilyuminesans tizimi (Thermo Scientific, Rokford) yordamida tasvirlangan. ishlab chiqaruvchining ko'rsatmasi va keyin Microchemi qurilmasi (DNR Bioimaging Systems, Quddus, Isroil) tomonidan tasvirlangan.

2.8. Miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qPCR) va miqdoriy real vaqtda PCR (qRT-PCR). Birlamchi kalamush xondrositlari 24 soat davomida 10ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 50 yoki 100mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq TRIzol reagenti (Invitrogen, Carlsbad, CA, AQSH) yordamida birlamchi kalamush xondrositlaridan umumiy RNK ajratildi. Umumiy RNK kontsentratsiyasi NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Rockford, IL, AQSh) yordamida o'lchandi. cDNK sintez qilish uchun 1ug RNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq ThermoScript teskari transkripsiya-PCR tizimi (Invitrogen, Carlsbad, CA, AQSH) yordamida teskari transkripsiya qilindi. cDNKning qPCR 2× TOPsimple™ DyeMIX-Taq (Enzynomics, Seul, Koreya Respublikasi) va TaKaRa PCR termal sikller qurilmasida (TaKaRa Bio Inc., Shiga, Yaponiya) maxsus primerlar yordamida amalga oshirildi. Shundan so'ng, maqsadli genlarning ifoda darajasini aniqlash uchun PCR mahsulotlari agaroz jelida elektroforezlandi. Glitseraldegid 3-fosfatdehidrogenaza (GAPDH) endogen nazorat sifatida ishlatilgan. Bundan tashqari, qRT-PCR uchun cDNK Eco™ Real-Time PCR tizimi (illumine Inc., San-Diego, CA, AQSh) yordamida kuchaytirildi. -Aktin endogen nazorat sifatida ishlatilgan. qPCR va qRT-PCR da qo'llaniladigan primerlarning ketma-ketligi mos ravishda 1 va 2-jadvallarda jamlangan.

cistanche (akteozid) foyda: immunitetni yaxshilash

3. Natijalar

3.1. Akteozid L929 xujayrasi va asosiy kalamush xondrositlarining yashovchanligiga ta'sir qilmaydi. Oddiy hujayralar sifatida ishlatiladigan sichqonchaning fibroblast hujayra liniyasi L929 24 soat davomida 2,5, 5, 10, 25, 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, L929 hujayralarida akteozidning sitotoksikligini baholash uchun MTT tahlili o'tkazildi. 2(a)-rasmda ko'rsatilganidek, L929 hujayralarining nisbiy hayotiyligi 94:8±8 foiz, 93:6±7 foiz, 100±5 foiz, 103:9±5 foiz, 126:1±8 foiz deb aniqlandi. , va nazorat bilan solishtirganda (100:02 ± 3 foiz) mos ravishda 2,5, 5, 10, 25, 50 va 100mkM akteozidlarda 122:7±4 foiz. Bundan tashqari, birlamchi kalamush xondrositlarida akteozidning sitotoksikligini tekshirish uchun MTT tahlili 2(b)-rasmda ko'rsatilganidek amalga oshirildi. 2,5, 5, 10, 25, 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlarining yashash qobiliyati 114 ± 4 foiz, 117: 8 ± 6 foiz, 123: 9 ± 5 foiz, 132: 6 ± 4 foiz, Nazorat bilan solishtirganda (100:4±5 foiz) mos ravishda 153:1±7 foiz va 142:1±6 foiz. Bundan tashqari, akteozidning L929 hujayralari va birlamchi kalamush xondrositlarining hayotiyligiga ta'sirini tasdiqlash uchun 2 (c)-rasmda ko'rsatilganidek, Cell Live/Dead tahlili o'tkazildi. Qizil floresan sifatida bo'yalgan o'lik hujayralar soni 24 soat davomida 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berilgan L929 hujayralari va birlamchi kalamush xondrositlari uchun ko'paymadi. Ushbu ma'lumotlar doimiy ravishda akteozidning belgilangan dozasi L929 hujayralari va birlamchi kalamush xondrositlarining hayotiyligiga ta'sir qilmasligini ko'rsatdi. Shunday qilib, L929 hujayralarida ham, birlamchi kalamush xondrositlarida ham toksik bo'lmagan dozalar bo'lgan 50 mkM akteozid va 100 mkM akteozid birlamchi kalamush xondrositlari yordamida in vitro tadqiqotlarida uning antikatabolik ta'sirini tekshirish uchun ishlatilgan.

3.2. Akteozid IL-1 -Birlamchi kalamush xondrositlarida proteoglikan yo'qotilishiga qarshi turadi. Alginat boncuklariga o'rnatilgan birlamchi kalamush xondrositlari 21 kun davomida 1ng/ml IL- 1 bor yoki yo'qligida 50 va 100mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, 3 (a)-rasmda ko'rsatilganidek, proteoglikan tarkibidagi o'zgarishlarni baholash uchun DMMB tahlili o'tkazildi. Nisbiy proteoglikan tarkibi nazorat bilan solishtirganda (103:8±) mos ravishda 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berilgan asosiy kalamush xondrositlarida 88:3±18:1 foiz va 86:8±16:3 foiz sifatida aniqlandi. 32:3 foiz). Nisbiy proteoglikan tarkibi akteozid bilan kamaygan bo'lsa-da, bu natijalar ahamiyatli emas edi. Biroq, 1ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlarida nisbiy proteoglikan miqdori sezilarli darajada 37:1±14:7 foizga kamaydi, ammo 50 va 100mkM akteozid proteoglikan tarkibini sezilarli darajada ±12:4 ga kamaytirdi. foiz va 64 ± 14:5 foiz, 1ng/ml IL-1 borligida. Keyinchalik, akteozid IL-1 - tomonidan qo'zg'atilgan proteoglikan yo'qotilishini bostiradimi yoki yo'qligini tekshirish uchun kalamush tizzasi bo'g'imlaridan ajratilgan artikulyar xaftaga 7 kun davomida 10 ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 100 mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, H&E bo'yash va safranin-O va tez yashil rang berish yordamida gistologik baholash 3 (b)-rasmda ko'rsatilganidek amalga oshirildi. H&E binoni yordamida morfologik o'zgarish kuzatilmadi; ammo safranin-O va tez yashil rangda qizil rang sifatida bo'yalgan proteoglikan nazoratdagiga nisbatan 100 mkM akteozid bilan ishlov berilgan artikulyar xaftagalarda o'zgarmasligini aniqladi. Biroq, og'riyotgan xaftaga 10ng/ml-1 proteoglikanning og'ir yo'qotilishi sabab bo'lgan va 100mkM akteozid 10ng/ml IL- 1 bilan ishlov berilgan bo'g'im xaftaga proteoglikan yo'qotilishini sezilarli darajada bostirgan. Birgalikda, bu ma'lumotlar akteozidning antikatabolik ta'sirga ega ekanligini ko'rsatadi, bu esa IL tomonidan induktsiya qilingan proteoglikan yo'qolishiga qarshi turish orqali artikulyar xaftaga degeneratsiyasini kechiktiradi.

3.3. Akteozid antikatabolik ta'sirga ega bo'lib, IL-1 bilan davolash qilingan birlamchi kalamush xondrositlarida MMP ifodasi va faollashuvini bostiradi. Akteozid tomonidan qo'zg'atilgan antikatabolik ta'sirning MMP ifodasi va faollashuvini bostirish bilan bog'liqligini tekshirish uchun birlamchi kalamush xondrositlari 24 soat davomida 10 ng/ml IL{7}} bor yoki yo'qligida 50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, MMPdagi o'zgarishlar tekshirildi. 4(a)-rasmda ko'rsatilganidek, birlamchi kalamushning shartli muhitida MMP-13, MMP-1 va MMP-3 kabi xaftaga tushadigan fermentlarning ifodasi sezilarli darajada oshdi. xondrositlar 10ng/ml IL-1 bilan ishlov berilganda, u dozaga bog'liq holda akteozid bilan kamaytirildi. Bundan tashqari, qPCR (4(b)-rasm) va qRT-PCR (4(c)-rasm) natijalari IL{20}} MMP-13, MMP{ kabi MMPlarning mRNK darajasini sezilarli darajada oshirganligini aniqladi. Birlamchi kalamush xondrositlarida {22}} va MMP-3. Biroq, ular birlamchi kalamush xondrositlarida dozaga qarab kamaydi50 va 100 mkM akteozid bilan ishlov beriladi. Bundan tashqari, 50 va 100 mkM akteozid 10 ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan kalamush asosiy xondrositlarida MMPlarning faollashuvini samarali ravishda bostirdi (4(d)-rasm). Birgalikda bu ma'lumotlar doimiy ravishda akteozidning xaftaga tushadigan fermentlarning ifodalanishi va faollashuvini bostiradigan antikatabolik ta'sirga ega ekanligini ko'rsatadi.

3.4. Akteozid birlamchi kalamush xondrositlarida IL{2}}induktsiya qilingan katabolik yallig'lanish vositachilari va proinflamatuar sitokinlarning ifodalanishi va ishlab chiqarilishini bostiradi. Akteozidning OA ga qarshi profilaktik ta'siri bor-yo'qligini aniqlash uchun birlamchi kalamush xondrositlari 24 soat davomida 10ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 50 va 100mkM akteozid bilan ishlov berildi. Shundan so'ng, yallig'lanish vositachilari, iNOS, COX-2 va PGE2 kabi reprezentativ katabolik omillardagi o'zgarishlar tekshirildi. Birlamchi kalamush xondrositlarida iNOS, COX-2 va PTGS-2 mRNK darajalari IL-1 tomonidan sezilarli darajada oshdi.

Biroq, ular akteozid bilan davolash qilingan asosiy kalamush xondrositlarida dozaga qarab kamaydi (5-rasm (a)). Bundan tashqari, akteozid nafaqat IL-1 bilan davolash qilingan birlamchi kalamush xondrositlarida iNOS va COX-2 ifodasini bostiribgina qolmay, balki ko'rsatilgandek NO va PGE2 nisbiy ishlab chiqarishni sezilarli darajada kamaytirdi. mos ravishda 5(c) va 5(d)-shakllarda. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, akteozid artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini qo'zg'atuvchi katabolik omillar sifatida ishlaydigan yallig'lanish vositachisi tomonidan qo'zg'atilgan proinflamatuar sitokinlarning ifodasini bostiradi. Shunday qilib, 10 ng/ml IL- 1 bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlarida proinflamatuar sitokinlarning 50 mkM akteozid tomonidan ekspressiv o'zgarishini tekshirish uchun 6-rasmda ko'rsatilganidek, sitokinlar majmuasi amalga oshirildi. kimyoatraktant- (CINC-) 2, CINC-3, siliyer neyrotrofik omil (CNTF), fraktalkin (CX3CL1), IL-1, IL- 1, leptin, monosit kimyoatrakant oqsili{{22} } (MCP-1), makrofag yallig'lanish oqsili- (MIP-) 3 va -nerv.IL-1 bilan davolash qilingan asosiy kalamush xondrositlarida o'sish omili (NGF) faqat IL-1 bilan solishtirganda. Birgalikda olingan ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, akteozid birlamchi kalamush xondrositlarida yallig'lanish vositachilari va yallig'lanish proinflamatuar sitokinlarini bostirish orqali artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini oldini oladi.

3.5. Akteozid IL-1 bilan davolash qilingan birlamchi kalamush xondrositlarida MAPK va NFKB fosforillanishini bostiradi. MAPK va NFKB ning proinflamatuar sitokin IL-1 o'zgarishiga qarshi akteozidlar tomonidan qo'zg'atilgan antikatabolik ta'sir bilan bog'liq bo'lgan hujayra signalizatsiya yo'llarini o'rganish uchun birlamchi kalamush xondrositlari 50 va 100 mkM IL yoki a{8} mavjudligi bilan davolash qilingan. }} 24 soat. Shundan so'ng, jami protein ekstrakte qilindi va western blotni amalga oshirish uchun SDS-PAGE jelida elektroforez qilindi. 7-rasmda ko'rsatilganidek, ERK1/2, p38 va JNK kabi MAPK IL-1 bilan davolash qilingan asosiy kalamush xondrositlarida sezilarli darajada fosforlangan, holbuki 50 va 100 mkM akteozid APK bilan solishtirganda sezilarli darajada fosforlangan. asosiy kalamush xondrositida nazorat qilish. Biroq, 50 va 100 mkM akteozid dozaga bog'liq ravishda birlamchi kalamush xondrositlarida IL{21}}induktsiyalangan MAPK fosforillanishini bostirdi. Bundan tashqari, 10ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlarida NFkB fosforillanishi dozaga bog'liq holda akteozid tomonidan asta-sekin kamaydi. Ushbu ma'lumotlar MAPK va NFKB uyali signalizatsiya yo'llari birlamchi kalamush xondrositlarida IL{26}} ga qarshi akteozid tomonidan induktsiya qilingan antikatabolik ta'sir bilan chambarchas bog'liqligini ko'rsatadi.

3.6. Akteozid birlamchi kalamush xondrositlarida IL-1 -induktsiyalangan NFKB fosforillanishini bostirish orqali NFKB ning sitozoldan yadroga o'tishini bostiradi. Akteozid NFKB ning sitozoldan yadroga o'tishini bostiradimi yoki yo'qligini tekshirish uchun birlamchi kalamush xondrositlari 10ng/ml IL-1 bor yoki yo'qligida 50 va 100ug/ml akteozid bilan ishlov berildi. 8(a)-rasmda ko'rsatilganidek, NFKB 10ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan asosiy kalamush xondrositlarining sitozolidan yadroga sezilarli darajada ko'chirildi. Biroq, u akteozid tomonidan dozaga bog'liq holda sezilarli darajada inhibe qilingan. Bundan tashqari, 10ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan asosiy kalamush xondrositlaridan olingan yadro fraktsiyasida NFKB darajasi oshirilgan bo'lsa-da, 8(b)-rasmda ko'rsatilganidek, akteozid bilan dozaga bog'liq holda kamaytirildi. 10ng/ml IL-1 bilan ishlov berilgan birlamchi kalamush xondrositlaridan olingan sitozolik fraktsiyada NFkB darajasi pasaygan, ammo akteozid dozaga qarab oshirilgan. Birgalikda bu ma'lumotlar IL-1 ga qarshi akteozid tomonidan qo'zg'atilgan antikatabolik ta'sirlar birlamchi kalamush xondrositlarida NFkB signalizatsiya yo'lini modulyatsiya qilishda sitozoldan yadroga o'tishni bostirishda ishtirok etishini doimiy ravishda ko'rsatadi.

3.7. Akteozid Jarrohlik DMM tomonidan qo'zg'atilgan tizza qo'shma OA hayvonlarida artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini susaytiradi. In vivo jonli ravishda akteozidlar keltirib chiqaradigan antikatabolik ta'sirlarni aniqlash uchun BALB/c sichqonlarining tizza bo'g'imlarida o'tkazilgan jarrohlik DMM tomonidan hosil qilingan OA bilan qo'zg'atilgan hayvonlarga og'iz orqali 5 va 1{14}}mg/kg akteozid 5 foizli etanolda eriydi. 8 hafta davomida har kuni. Shundan so'ng, tizza bo'g'imlari 9-rasmda ko'rsatilganidek, safranin-O va tez yashil rang yordamida gistologik jihatdan baholandi. DMM qo'zg'atgan OA hayvonlaridan ajratilgan tizza bo'g'imida artikulyar xaftaga yuzasining proteoglikan yo'qolishi va shikastlanishi sezilarli darajada oshdi. Biroq, akteozidni og'iz orqali yuborish proteoglikan yo'qotilishini va artikulyar xaftaga kamroq shikastlanishini bostirdi, faqat transport vositasi bilan solishtirganda. Bundan tashqari, Mankinning baholash balli OA hayvonlar guruhida (n =5, 3± 0:7) yetkazib berilgan avtomobilda faqat Naif (n =5, 0 bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi. :67 ± 0:5). Biroq, OA hayvonlar guruhiga (n =5) 5 va 1{29}}mg/kg akteozidni og'iz orqali yuborish Mankin reytingini 2±0:7 va 1:67 ± 0:5 ga kamaytirdi. , mos ravishda faqat avtomobil bilan solishtirganda. Birgalikda bu ma'lumotlar akteozidni og'iz orqali yuborish katabolik sharoitlarda sinovial bo'g'imlarda artikulyar xaftaga progressiv degeneratsiyasini susaytirishini ko'rsatadi.

cistanche (Akteozid) qo'shimcha: charchoqqa qarshi

Iltimos, 2-qismga bu yerni bosing