Ikkinchi qism DsbA-L mitoxondrion vositachiligidagi quvurli hujayra apoptozidagi VDAC1 bilan o'zaro ta'sir qiladi va o'tkir buyrak kasalligining rivojlanishiga hissa qo'shadi

Natijalar

1. Ishemik shikastlanish BUMPT hujayralarida va sichqonlar va bemorlarning buyraklarida DsbA-L ifodasini keltirib chiqardi.

Ishemik shikastlanish DsbA-L ifodasini keltirib chiqarganligini tekshirish uchun biz 2 soat davomida ATPning BUMPT hujayralarini yo'qotdik va keyin ularni umumiy 4 soat davomida tiklashga ruxsat berdik. RT-qPCR va immunoblotting natijalari shuni ko'rsatdiki, DsbA-L ifodasi I/R 2-0 da induksiyalangan, I/R 2-2 da cho'qqisiga yetgan va keyin asta-sekin I/R da ko'rinadigan darajaga kamaygan. 2-0 (1a, e va i-rasm). DsbA-L ning immunofluoresans bilan bo'yalishi ushbu topilmalarni yanada tasdiqladi va DsbA-L asosan BUMPT hujayralari sitoplazmasida ifodalanganligini ko'rsatdi (1-rasm m va n). Bundan tashqari, ishemiya (28 daqiqa) va reperfuziya shikastlanishi (24 soat va 48 soat) bilan davolangan C57BL / 6 sichqonlarida DsbA-L ifodasini aniqladik. RT-PCR va immunoblotting natijalari shuni ko'rsatdiki, DsbA-L ifodasi 24 soatlik reperfuziyadan keyin sichqon buyragining korteksida ham, tashqi medullasida ham paydo bo'lgan va reperfuziyadan 48 soat o'tgach cho'qqisiga etgan (1-rasm b, c, f, g , j va k). Ushbu topilmalar DsbAL ning immunohistokimyoviy bo'yalishi bilan yanada tasdiqlangan (1-rasm o va p). Nihoyat, biz DsbA-L ning ifoda darajalari ishemiya tufayli kelib chiqqan AKI bo'lgan bemorlarda qo'zg'atilganligini tekshirdik. Bu natijalar DsbA-L mRNK va oqsil darajasi ishemiya sabab bo'lgan OKI bilan og'rigan bemorlarda MCD bilan og'rigan bemorlarga nisbatan sezilarli darajada oshganligini ko'rsatdi (1-rasm. d, h va l). Bu natijalar DsbA-L ning immunofluoresans bo'yalishi bilan qo'shimcha tasdiqlandi (1-rasm. q va r).

Shakl 1. DsbA-L sichqonlar va bemorlarning BUMPT hujayralari va buyraklarida I/R tomonidan induktsiya qilingan. BUMPT hujayralaridagi I/R modeli 10 mM antimitsin A va 1,5 mM kaltsiy ionofori tomonidan 2 soat davomida induktsiya qilingan va 0, 2 va 4 soat davomida tiklangan. I / R sichqon modeli 28 daqiqa davomida ikki tomonlama buyrak ishemiyasi va 24 va 48 soat davomida reperfuziya bilan qo'zg'atildi. Buyrak biopsiya namunalari I/R-induktsiyali AKI bilan og'rigan bemorlar va Minimal o'zgarish kasalligi (MCD) bemorlaridan to'plangan. (ad) BUMPT hujayralarida, sichqonlarning buyrak kortikal to'qimalarida va medulla va buyrakdan tashqarida I / R holati bo'lgan yoki bo'lmagan bemorlarda DsbA-L ifodasini RT-qPCR aniqlash. (e- h) BUMPT hujayralarida, kortikal to'qimalarda, medulla va buyraklardagi bemorlarda I / R modeli ostida BUMPT hujayralarida DsbA-L va b-tubulinning immunoblot tahlili. (i- l) DsbA-L va b-tubulin oqsili ifodasining densitometriya tahlili. (m, o va q) I / R holati bo'lgan yoki bo'lmagan sichqonlarning BUMPT hujayralari va buyraklarida DsbA-L ning immunofluoresans va immunohistokimyoviy bo'yalishi. (n, p va r) DsbA-L bo'yashning miqdoriy tahlili. Asl kattalashtirish x 400. Skar paneli: o va q da 10µM, m100µM. Har bir tajriba (e- h, m, o va q) o'xshash natijalar bilan mustaqil ravishda 6 marta takrorlandi. Ikki guruhli taqqoslash uchun ikki dumli Student t-testlari ishlatilgan. (a- d, i- l, n, p va r). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.

Cistanche afzalliklarini bilish uchun shu yerni bosing

2. PT-DsbA-LKO sichqonlarida IR-induktsiyali buyrak shikastlanishi, quvurli hujayra apoptozi va mitoxondriyal shikastlanishlar zaiflashdi.

PT-DsbA-L-WT va PT-DsbA-L-KO sichqonlari ishemiya (28 daqiqa) va reperfuziya shikastlanishi (24 soat va 48 soat) bilan yoki ularsiz davolangan. Ushbu muolajadan so'ng biz qo'shimcha tekshirish uchun qon va buyrak to'qimalarining namunalarini oldik. Funktsional jihatdan, I / R-induktsiyali buyrak funktsiyasining yomonlashishi PT-DsbA-L-WT sichqonlarida qon karbamid azoti (BUN) va kreatinin darajasining oshishi bilan tavsiflanadi; bu ta'sir PT-DsbA-L-KO sichqonlarida sezilarli darajada zaiflashdi (2a va b-rasm). Gistologiya va TUNEL tahlillari, shuningdek, PT-DsbA-L-WT sichqonlarida I/R tomonidan sezilarli to'qimalar shikastlanishi va apoptozni keltirib chiqarganligini tasdiqladi, garchi bu PT-DsbA-L-KO sichqonlarida yaxshilangan bo'lsa ham (2c, d, f-rasm). va g). Qizig'i shundaki, elektron mikroskopiya (EM) tahlillari shuni ko'rsatdiki, PT-DsbA-L-KO sichqonlari I / R tomonidan qo'zg'atilgan mitoxondriyal shikastlanishning sezilarli darajada susayganligini ko'rsatdi (2-rasm e va h). Immunoblotting shuningdek, PT-DsbA-LKO sichqonlarida parchalangan kaspaza-3 darajasi, mitoxondriyalarda Bax to'planish tezligi va sitozolga sitoxrom c (Cyt-c) chiqishi kamayganligi ham tasdiqlandi (2-rasm). I- o). RT-qPCR tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, PT-DsbA-L-KO NRF1 va PCG{41}}a I/R (2-rasm, p va q) tufayli kelib chiqqan kamayishini qaytardi, bu esa immunoblotting tahlili bilan tasdiqlandi ( 2-rasm r- t). Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, DsbA-L I / R tomonidan qo'zg'atilgan AKIda hal qiluvchi rol o'ynagan.

Shakl 2. PT-DsbA-L-KO sichqonlarida IR-induktsiyali buyrak shikastlanishi, quvurli hujayra apoptozi, mitoxondriyaning shikastlanishi va Bax, Cytc va ajralgan kaspaza3 ning ifodalanishi. PT-DsbA-L-KO va PT-DsbA-L-WT littermate sichqonlarining ikki tomonlama buyrak arteriyalari 28 daqiqa davomida mahkamlangan va keyin IR modelini yaratish uchun 48 soat davomida chiqarilgan. (a) BUN (b) Sarum kreatinin (c) Gematoksilin va eozin bilan bo'yash. (d) TUNEL-musbat hujayralarning vakillik bo'limlari. (e) Elektron mikroskop yordamida mitoxondriya morfologiyasini aniqlash. (f) Tubulyar shikastlanish darajasi. (g) TUNEL-musbat hujayralar soni. (h) Mitoxondriyaning shikastlanish darajasi. (i) Yorilgan kaspaza3 va DsbA-L ifodasining immunoblot tahlili va mitoxondriyal va sitozolik fraktsiyalarda BAX va Cyt-c ifodasi. b-tubulin va GAPDH mos ravishda butun lizat yoki sitozolik yukni nazorat qilish sifatida ishlatilgan. COX IV mitoxondriyalarni yuklashni nazorat qilish vositasi sifatida ishlatilgan. (j- o) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. (p va q) NRF1 va PCG-1 ifodasini RT-qPCR aniqlash. (r) NRF1 va PCG-1a ifodasining immunoblot tahlili. (s va t) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. Asl kattalashtirish x 400 yoki x6000. Skar paneli: 100µM in c&d 20µM in e. Har bir tajriba (ce, I va r) o'xshash natijalar bilan mustaqil ravishda 6 marta takrorlandi. Ko'p guruhli taqqoslash uchun bir tomonlama ANOVA ishlatilgan. (a, b,f- h, jo, pq&s- t). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus sham group. * P<0.05 versus PT-DsbA-L-WT with IR group.

Sitstanche tubulosa

3. BUMPT hujayralarida DsbA-L vositachiligida I / R induktsiya qilingan apoptoz

DsbA-L I / R tomonidan qo'zg'atilgan BUMPT hujayralarida apoptozga vositachilik qiladimi yoki yo'qligini tekshirish uchun biz BUMPT hujayralarini DsbA-L siRNA bilan transfektsiya qildik va keyin bu hujayralarni ATP dan 2 soat davomida yo'qotdik; keyin hujayralar 2 soat davomida tiklanishiga ruxsat berildi. FCM tahlillari shuni ko'rsatdiki, DsbA-L siRNA BUMPT hujayralarida I / R sabab bo'lgan apoptozni sezilarli darajada susaytirgan (3a-rasm). Immunoblotting tahlillari shuni tasdiqladiki, DsbA-L siRNK ajraladigan kaspaza-3 ifodasining I/R sabab bo'lgan ko'payishini, mitoxondriyadagi Baxning to'planishini va Cyt-c ning sitozolga ko'payishini bostirgan (rasm). 3 b- h). RT-qPCR tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, I/R NRF1 va PCG{15}}a ifodasini bostirgan, bu esa DsbA-L siRNK tomonidan qaytarilgan (3-rasm i va j). Immunoblotting natijalari RT-qPCR topilmalariga mos keldi (3-rasm, km). Bundan farqli o'laroq, DsbA-L plazmidi BUMPT hujayralarida I/R-induktsiyali apoptozni kuchaytirdi, bo'lingan kaspaza-3 ifodasini oshirdi, Bax to'planishini oshirdi va Cyt-c ning sitozolga chiqishini oshirdi (rasm). 3 o- u). RT-qPCR tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, I/R NRF1 va PCG-1a ifodasini bostirgan, bu DsbA-L plazmidi tomonidan kuchaytirilgan (3-rasm v va w). Immunoblotting natijalari RT-qPCR topilmalarini yanada tasdiqladi (3-rasm x-z). Ushbu ma'lumotlar DsbA-L apoptoz jarayonini, shuningdek ishemik shikastlanish paytida mitoxondriyal disfunktsiyani vositachiligini tasdiqladi.

Shakl 3. BUMPT hujayralarida ajralgan kaspaza3, BAX va Cyt-c ning IR-induktsiyali ifodasi DsbA-L vositachiligida. DsbA-L ning plazmidi va siRNKsi BUMPT hujayralariga transfektsiya qilindi va keyin 2 soat davomida ATP kamayishi va 2 soat davomida tiklanishiga ta'sir qildi. (a&n) BUMPT hujayralari apoptozining oqim sitometriyasi tahlili. (b&o) Immunoblotlar parchalangan kaspaza3 va DsbA-L ifodasini va mitoxondriyal va sitozolik fraktsiyalarda BAX va Cyt-c ifodasini tahlil qildilar. b-tubulin va GAPDH mos ravishda butun lizat yoki sitozolik yukni nazorat qilish sifatida ishlatilgan. COX IV mitoxondriyalarni yuklashni nazorat qilish vositasi sifatida ishlatilgan. (c- h, va q- u) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. (i,j va v, w) RT-qPCR NRF1 va PCG-1a ifodasini aniqlaydi. (k va x) NRF1 va PCG-1a ifodasining immunoblot tahlili. (l, m va y, z) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. Har bir tajriba (a, b, k, n, o va x) o'xshash natijalar bilan mustaqil ravishda 6 marta takrorlandi. Ko'p guruhli taqqoslash uchun bir tomonlama ANOVA ishlatilgan. (c- j,c- m, p- w & y, z). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Cistanche qo'shimchasi

4. DsbA-L VDAC1 bilan ATP kamayishi sodir bo'lgan BUMPT hujayralarida, shuningdek, sichqonlar va AKI bilan og'rigan bemorlarning buyraklarida o'zaro ta'sir ko'rsatdi.

Oldingi natijalar shuni ko'rsatdiki, tashqi mitoxondriyal membrananing muhim oqsili bo'lgan kuchlanishga bog'liq anion kanal-1 (VDAC1) hujayra apoptozisida ishtirok etadi36 Bizning yaqinda o'tkazilgan tadqiqotimiz DsbA-L ning mitoxondriyalarda ham ifodalanganligini ma'lum qildi. Shunday qilib, biz DsbA-L AKI rivojlanishini tartibga solish uchun VDAC1 bilan o'zaro ta'sir qilgan deb taxmin qildik. Immunoprecipitatsiya (IP) natijalari shuni ko'rsatdiki, anti-VDAC1 antikori ikkala VDAC1 va DsbA-L oqsillarini tortib olgan, anti-DsbA-L esa butun nazorat lizatlarida va BUMPT hujayralarining I/R guruhlarida DsbA-L va VDAC1ni cho'ktirgan va sichqonlarning buyraklari va bemorlarning buyraklari (4a-rasm). Bundan tashqari, BUMPT hujayralarining mitoxondrial lizatlari sichqonlarning buyraklari va bemorlarning buyraklari ham DsbA-L va VDAC1 ko-IP uchun ishlatilgan; topilmalar butun lizat uchun topilmalar bilan mos edi (4b-rasm). DsbA-L ning tuzilishi nukleotidlarni bog'lovchi domen/ATPase domenini (aminokislotalar 1-51), aminokislotalar domenini (NTD), dimerlanish uchun spiral mintaqani (aminokislotalar 56-178) va karboksil-terminal domeni (CTD; aminokislotalar 185-216) (4c-rasm). VDAC1 tuzilishiga asoslanib, dasturiy ta'minotni bashorat qilish VDAC1 ning N-terminal domeni (1 dan 25 gacha bo'lgan aminokislotalar) DsbA-L bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkinligini ko'rsatdi (4d-rasm). VDAC1 ning qaysi domenlari DsbA-L bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkinligini aniqlash uchun biz HA-VDAC1 uchun aminokislotalar 1- 75, aminokislotalar 76-1098 va to'liq genga ega uchta plazmid qurdik (4e-rasm). Anti-HA antikori DsbA-L ni aminokislotalar 1-75 va toʻliq genga ega VDAC1 boʻlgan guruhlarda choʻktirdi, lekin VDAC1 va aminokislotalarga ega plazmid 76-1098 bilan emas. Bu DsbA-L ning aminokislotalarga ega bo'lgan VDAC1 hududi bilan o'zaro ta'sir qilishini ko'rsatdi 1-75 (4f-rasm). VDAC1 ning qaysi hududlari DsbA-L bilan o'zaro ta'sir qilishini qo'shimcha tekshirish uchun biz BUMPT hujayralarini D9-13, 22-27, D39-45, {{59} bilan VDAC1 plazmidlarining HA-yorlig'i bilan transfektsiya qildik. }}, D9-13, 22-27, 39-45, 55-57. IP natijalari shuni ko'rsatdiki, anti-HA antikori DsbA-L ni faqat D39-45 va 55-57 plazmidlari bilan cho'kadi, D9-13 va 22-27 plazmidlari bilan cho'kadi (4g-rasmga qarang). ). Bu yana DsbA-L ning VDAC1 ning 9-13 va 22-27 aminokislotalari bilan o'zaro ta'sir qilishini ko'rsatdi. 4g-rasmda DsbA-L ning VDAC1 ning 9-13 va 22-27 aminokislotalari bilan qanday ta'sir qilishini ko'rsatadigan model mavjud (4g-rasm). Ushbu ma'lumotlarning umumiyligi shuni ko'rsatadiki, DsbA-L VDAC1 ning 9-13 va 22-27 aminokislotalari bilan o'zaro ta'sir qiladi.

Shakl 4. DsbA-L va VDAC1 o'rtasidagi ATP etishmovchiligi bo'lgan yoki bo'lmagan BUMPT hujayralari va buyrak I / R sichqonlari va bemorlarning buyraklari o'rtasidagi o'zaro ta'sir. (har bir guruh uchun a&b n=3) Butun yoki mitoxondrial lizat ATP kamayishi va tiklanishi bilan davolash qilingan BUMPT hujayralarida DsbA-L va VDAC1 ning oʻzaro koimmunopresipitatsiyasi uchun hamda I/R-induktsiyali AKI sichqonlari va bemorlarning buyraklarida ekstraksiya qilindi. (guruh uchun cn=3) DsbA-L ning funktsional domenlari va tuzilishi. (har bir guruh uchun dn=3) DsbA-L va VDAC1 o'zaro ta'sirining bashorat modeli. (guruh boshiga e-gn=3) Anti-HA immunoprecipitatlar HA uchun tahlil qilindi va keyin immunoblotting yordamida DsbA-L uchun aniqlandi.

Herba Cistanche

5. Mitoxondriyadagi DsbA-L yoki VDAC1 ning birgalikda lokalizatsiyasi va (i) ATP va (ii) sichqonlar va bemorlarning buyraklaridagi BUMPT hujayralarida DsbA-L va VDAC1 ning birgalikda lokalizatsiyasi

IP natijalarini tasdiqlash uchun biz birgalikda lokalizatsiya tahlilini o'tkazdik. Immunofloresan konfokal mikroskopiya DsbA-L yoki VDAC1 ning BUMPT hujayralarining mitoxondriyalarida va soxta sichqonlar va MCD bemorlarning buyraklarida lokalizatsiya qilinganligini va bu ta'sir ATP yo'qolgan BUMPT hujayralarida va sichqonlarning buyraklarida yanada kuchayganligini ko'rsatdi. va AKI bilan og'rigan bemorlar (5-rasm a, b, d, e, g va h). Qizig'i shundaki, immunofloresan konfokal mikroskopiya BUMPT hujayralarida DsbA-L va VDAC1 ning birgalikda lokalizatsiya signali va soxta sichqonlar va MCD bemorlarining buyraklari nisbatan zaif ekanligini tasdiqladi. Shu bilan birga, birgalikda lokalizatsiya signali ATP yo'qolgan BUMPT hujayralarida va sichqonlar va AKI bilan og'rigan bemorlarning buyraklarida sezilarli darajada oshdi (5-rasm c, f va i). Birgalikda bu ma'lumotlar DsbA-L va VDAC1 ning mitoxondriyadagi o'zaro ta'sirini qo'llab-quvvatlash uchun qo'shimcha dalillarni taqdim etadi.

Shakl 5. AKI sichqonlari va bemorlarning BUMPT hujayralari va buyraklarining mitoxondriyalarida DsbA-L va VDAC1 ning kolokalizatsiyasi. (a, d&g n=4 har bir guruh uchun) BUMPT hujayralarida mitoxondriyalarda DsbA-L ning lokalizatsiyasi ATP kamayishi va tiklanishi, sham va I/R guruhlaridagi sichqonlarning buyrak modeli, shuningdek, MCD va I/R bemorlar. (b, e&h n=4 har bir guruh) BUMPT hujayralarida mitoxondriyalarda VDAC1 ning lokalizatsiyasi, ATP kamayishi va tiklanishi, sham va I/R guruhlaridagi sichqonlarning buyraklari, shuningdek, MCD va I/ R. (guruh boshiga c, f&i n=4) DsbA-L va VDAC1 ning mitoxondriyalarda ATP kamayishi va tiklanishi boʻlgan yoki boʻlmagan BUMPT hujayralarida birgalikda lokalizatsiyasi, sham va I/R guruhlaridagi sichqonlarning buyraklari modeli shuningdek, MCD va I / R bemorlar.

6. VDAC{1}}vositalangan BUMPT hujayralari apoptozi ishemiya-reperfuzion

Keyinchalik, biz VDAC1 ning BUMPT hujayralarida I / R-induktsiyali apoptoz jarayonida ishtirok etganligini aniqlashga harakat qildik. Immunoblotting natijalari shuni ko'rsatdiki, VDAC1 ifodasi I/R 2-0 da induktsiya qilingan va I/R 2-2 da cho'qqisiga yetgan, bundan oldin I/R 2-0 da ko'rinadigan darajalarga asta-sekin pasaygan ( 6-rasm a va b). FCM tahlili shuni ko'rsatdiki, BUMPT hujayralarida I / R induktsiya qilingan apoptoz; bu ta'sir VDAC1 siRNKni qo'llash orqali susaytirildi (6c-rasm). Immunoblotting natijalari VDAC1 siRNKning I/R tomonidan ajralgan kaspaza-3 ifodasini sezilarli darajada yaxshilaganligini, mitoxondriyada Bax to'planishini va Cyt-c ning sitozolga ko'payishini aniqladi (6d-rasm). k). Aksincha, yuqoridagi o'zgarishlar VDAC1 plazmidining haddan tashqari ko'payishi bilan kuchaytirildi (6-rasm l-s). Bu maʼlumotlar birgalikda BUMPT hujayralarida VDAC1-I/R-induktsiyali apoptoz vositachiligini koʻrsatdi.

Shakl 6. BUMPT hujayralarida ajralgan kaspaza3, BAX va Cyt-c ning IR-induktsiyasi VDAC1 tomonidan vositachilik qilgan. VDAC1 ning siRNK yoki plazmidi BUMPT hujayralariga transfektsiya qilindi va keyin 2 soat davomida ATP kamayishi va 2 soat davomida tiklanishiga ta'sir qildi. (a) BUMPT hujayralarida VDAC1 va b-tubulinning immunoblot tahlili. (b) Ular orasidagi kulrang tasvirni tahlil qilish (c) BUMPT hujayralari apoptozining oqim sitometriyasini tahlil qilish. (d) Immunoblotlar parchalangan kaspaza3, VDAC1 va DsbA-L ifodasini va mitoxondriyal va sitozolik fraktsiyalarda BAX va Cyt-c ifodasini tahlil qildilar. b-tubulin va GAPDH mos ravishda butun lizat yoki sitozolik yukni nazorat qilish sifatida ishlatilgan. COX IV mitoxondriyalarni yuklashni nazorat qilish vositasi sifatida ishlatilgan. (ek) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. (i) BUMPT hujayralari apoptozining oqim sitometriyasi tahlili. (m) Immunoblotlar parchalangan kaspaza3, VDAC1 va DsbAL ifodasini hamda mitoxondriyal va sitozolik fraktsiyalarda BAX va Cyt-c ifodasini tahlil qiladi. b-tubulin va GAPDH mos ravishda butun lizat yoki sitozolik yukni nazorat qilish sifatida ishlatilgan. COX IV mitoxondriyalarni yuklashni nazorat qilish vositasi sifatida ishlatilgan. (ns) Ular orasidagi kul rangdagi tasvirni tahlil qilish. Har bir tajriba (a,c,d,l & m) o'xshash natijalar bilan mustaqil ravishda 6 marta takrorlandi. Ikki guruhli taqqoslash uchun ikki dumli Student t-testlari ishlatilgan. (b), Bir tomonlama ANOVA bir nechta guruhlarni taqqoslash uchun ishlatilgan. (e- k va n- s). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.# P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Cistanche ekstrakti

Xiaozjou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Sianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Chjan,a,b Luxiang Vang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h va Dongshan Zhang a,b *

Favqulodda tibbiy yordam bo'limi, Xitoy Xalq Respublikasi

b Shoshilinch tibbiy yordam va qiyin kasalliklar instituti, Ikkinchi Xiangya kasalxonasi, Markaziy Janubiy universiteti, Changsha, Hunan 410011, Xitoy Xalq Respublikasi

c Oftalmologiya kafedrasi, Xitoy Xalq Respublikasi

d Siydik chiqarish jarrohlik bo'limi, Xitoy Xalq Respublikasi

e Ko'krak jarrohligi bo'limi, Xitoy Xalq Respublikasi

f Xitoy Xalq Respublikasi, Ikkinchi Xiangya kasalxonasi umumiy jarrohlik bo'limi

g Sog'liqni saqlash bo'limi, Markaziy Janubiy universiteti, Changsha, Hunan, Xitoy Xalq Respublikasi

h Shenzhen xalq kasalxonasi, Jinan universitetining ikkinchi klinik tibbiyot kolleji, Janubiy fan va texnologiya universitetining birinchi filiali kasalxonasi, Shenzhen, Xitoy Xalq Respublikasi, Endokrinologiya bo'limi

1 Syaozjou Li va Jian Pan ushbu tadqiqotga teng hissa qo'shdilar