1-qism: Cistanche Herba of Cistanoside oksidlovchi stressni bostirish orqali gipoksiyadan kelib chiqqan erkaklar reproduktiv zararini yaxshilaydi

Qo'shimcha ma'lumot uchun murojaat qiling: Tinatina.xiang@wecistanche.com

Fengqi Yan1*, Xiaoliang Dou1*, Guangfeng Zhu1*, Mingyuan Xia1, Yahui Liu3, Xiaozi Liu3, Guojun Vu2, He Vang1, Bo Zhang1, Qiuju Shao4, Yong Vang1

1Tang Du gospitali, urologiya boʻlimi, Toʻrtinchi harbiy tibbiyot universiteti, Sian 710038, Shensi, Xitoy;

2Urologiya va nefrologiya kasalxonasi, Sian xalq kasalxonasi, Sian 710100, Shensi, Xitoy;

3Tibbiyotning asosiy fanlari instituti, 4-harbiy tibbiyot universiteti, Sian 710032, Shensi, Xitoy;

4Radioterapiya bo'limi, Tang Du kasalxonasi, To'rtinchi harbiy tibbiyot universiteti, Sian 710038, Shensi, Xitoy. *Teng hissa qo'shuvchilar. 2020-yil 1-sentabrda olingan;

2021-yil 18-yanvarda qabul qilingan; EPub 2021-yil 15-may; 2021-yil 30-mayda chop etilgan

Abstrakt: Ko'payib borayotgan dalillar gipoksiyaning sababi ekanligini ko'rsatadierkaklarning bepushtligi, va gipoksiya bilan bog'liq bo'lishi mumkinoksidlovchi stress(OS). Cistanoside (Cis) - bu feniletanoid glikozid birikmasi bo'lib, undan olinishi mumkinCistanches Herbava turli biologik funktsiyalarga ega. Ushbu tadqiqot Cis ning reproduktiv zararga qarshi himoya ta'sirini o'rganishga qaratilgan gipoksiya bilan va o'ziga xos asosiy mexanizmlarni o'rganing. Hujayra va hayvonlar gipoksiyasining eksperimental modellari tuzildi va Cis ning turli xil kichik turlarining erkak jinsiy tizimiga himoya ta'siri ham in vitro, ham in vivo baholandi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, gipoksiya hujayra siklini to'xtatish va apoptoz faollashuvi orqali GC-1 hujayralarining hayotiyligini sezilarli darajada kamaytirdi, bu esa OS ortishi bilan bog'liq edi. Bundan tashqari, Cis in vitro va in vivo kuchli antioksidant ta'sir ko'rsatdi, antioksidant ferment faolligini sezilarli darajada tikladi va reaktiv kislorod turlari (ROS) darajasini pasaytiradi, shu bilan birga hujayra hayotiyligini oshiradi va apoptozni kamaytiradi. Muhimi, bu erda o'rganilgan Cis subtiplari (Cis-A. Cis-B, Cis-C va Cis-H) barchasi ma'lum antioksidant ta'sir ko'rsatdi, ular orasida Cis-B ta'siri eng muhim edi. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, Cis moyaklar va GC-1 hujayralarida antioksidant ferment faolligiga ta'sir qilish orqali gipoksiyadan kelib chiqqan OS ning zararli ta'sirini sezilarli darajada susaytiradi.

Kalit so'zlar: Sistanozid, gipobarik gipoksiya, erkaklar bepushtligi, oksidlovchi stress, reproduktiv himoya

Kirish

Hozirgi vaqtda dunyo bo'ylab reproduktiv yoshdagi qariyb 48,5 million (15 foiz) juftlik bepushtlikdan aziyat chekmoqda [1], ular orasida holatlarning 40-50 foizi ushbu kasallik bilan bog'liq.erkaklarning bepushtligi[2], atrof-muhit va turmush tarzi omillari bilan kuchli bog'liq bo'lgan holat. Dalillar shuni ko'rsatadiki, sutemizuvchilar moyakining past kislorod bosimiga moyilligi ba'zi shakllarning sababchi omilidir.erkaklarning bepushtligi[3]. Oldingi tadqiqotlarda ko'rsatilgandek, spermatogenez ta'sirida buziladi va kamayadigipobarik gipoksiya [4-7].

Asosiy mexanizmni o'rganish uchun tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ta'sir qilishgipobarik gipoksiyareaktiv kislorod turlarini (ROS) oshiradi

duction [8, 9].ROS erkaklarning reproduktiv tizimida muhim rol o'ynaydi. Past darajalarda ular spermatozoidlarning sig'imi, akrozo'r reaktsiyasi va spermatozoid-0otsitlar sintezi uchun zarurdir [10]. Biroq, haddan tashqari ROS spermatozoidlarning yadro/mitoxondrial DNK va plazma membranasiga zarar etkazishi mumkin.peroksidlovchi shikastlanish, bu esa o'z navbatida erkaklar bepushtligi xavfini oshiradigan asosiy etiologik omillardir [11,12]. Shunday qilib, gipoksiyadan kelib chiqqan ROS to'planishi erkaklar bepushtligining sabablaridan biri bo'lishi mumkin.

Cistanches Herba, koʻp yillik parazit dorivor oʻsimlik qurgʻoqchil hududlarda keng tarqalgan [13]va farmakologik faolligi [14-17] tufayli keng qoʻllaniladi. ning barcha samarali tarkiblari orasidaCistanches Herba, PhGs asosiy faol komponent sifatida qabul qilingan. Bugungi kunga qadar Cistanches oʻsimliklaridan 34 ta PhG ajratilgan [13]. Cistanches Herba-dan ajratilgan faol PhG bo'lgan Cistanoside (Cis), antioksidant ta'siri bilan e'tiborni tortdi.

Cis ning antioksidant ta'sirini va gipoksiyadan kelib chiqadigan ROS rolini hisobga olgan holdaerkaklarning bepushtligi, Cis gipoksiya sabab bo'lgan davolash uchun potentsial dori nomzodi hisoblanadierkaklarning bepushtligi. Biroq, kam sonli ma'ruzalarda gipoksiya bilan bog'liq kasalliklarni davolashda Cistanches Herba'dan olingan Cis ning antioksidant ta'siri ko'rib chiqildi.erkaklarning bepushtligiyoki signalizatsiya yo'llari bilan bog'liq. Ushbu tadqiqotda in vitro va in vivo gipoksiya eksperimental modellari tuzilgan va turli Cis ning ta'sir komponentlari baholangan.

Materiallar va uslublar

Hujayra madaniyati va reaktiv

Sichqoncha spermatogonia hujayra liniyasi GC-1spg (GC{1}}) American Type Culture Collection (ATCC) dan sotib olindi va DMEM (Invitrogen, AQSH) da 10 foiz homila sigir zardobi, 1 foiz qo‘shilgan holda yetishtirildi. L-glutamin (100 mM), penitsillin (100 U/ml) va streptomitsin (100 ug/mL) 37 gradusda namlangan inkubatorda 5 foiz CO, Cis (Cis-A, B, C, H) sotib olindi. Chengdu Gelipu Biotechnology Co., Ltd. (Xitoy).

Hujayra hayotiyligini tahlil qilish

Hujayra hayotiyligi hujayralarni hisoblash to'plami {{0}} tahlili (CCK-8) bilan tekshirildi. Qisqacha aytganda, GC{2}} hujayralari har bir quduqqa 1,5×103 da 96-quduq plastinkalariga ekilgan va 24 soat davomida 37 daraja haroratda ekilgan. Keyin hujayralar turli konsentratsiyalarda (20 foiz, 15 foiz, 10 foiz, 5 foiz) kislorod yoki turli konsentratsiyali (2 mkM, 0,2 mkM, 0,02 mM) Cis (Cis-A, Cis-B, Cis-) bilan ishlov berildi. C, Cis-H) talab qilingan vaqt uchun. Keyin supernatant tashlab yuborildi va CCK-8 to'plami (Dojindo Japan) yordamida hujayra hayotiyligi aniqlandi. Har bir quduqning absorbansi mikroplastinka o'quvchi (BioRad USA) yordamida 450 nm da o'lchandi. Nihoyat, hujayra hayotiyligi quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan: Hujayra hayotiyligi=(ODeksperimental guruh - ODblank guruhi)/ (ODcontrol guruhi - ODblank guruhi) × 100 foiz . Western blot tahlili To'plangan hujayralar yoki to'qimalar oqsillarni ajratib olish uchun RIPA buferida bir hil holga keltirildi (RIPA Beyotime China; Cocktail Roche Switzerland). Supernatantlar yig'ildi va oqsillar konsentratsiyasi BCA usuli (Beyotime) bilan sinovdan o'tkazildi. Har bir namunadan taxminan 40 ug ekstrakte qilingan oqsillar SDS-PAGE orqali ajratilgan va nitroselüloza (NC) filtr membranasiga (Beyotime China) elektrotransfer qilingan. NC filtri membranalari 5 foiz yog'siz sut bilan 1,5 soat davomida bloklandi va maxsus antikorlar bilan inkubatsiya qilindi (anti-PARP 1:1000, anti-Caspase-3 1:1000, anti-Bcl-2 1:1000, anti- Bax 1: 1000, anti-GAPDH 1: 1000; barcha antikorlar Cell Signaling Technology (AQSh) dan bir kechada 4 daraja haroratda sotib olingan. Keyin, barcha NC membranalari mos keladigan horseradish peroksidaza bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor bilan xona haroratida 1,5 soat davomida inkubatsiya qilindi va tasvirlash tizimi (Tannon, Xitoy) bilan tasvirlangan.

Hujayra siklini aniqlash

Hujayra siklini tahlil qilish uchun oqim sitometrik tahlili (FCM) o'tkazildi. Hujayralar 72 soat davomida turli sharoitlarda ishlov berildi va yig'ib olinadi. Keyin hujayralar PBS bilan yuvilib, 75 foizli etanolda mahkamlangan va propidiy yodid (PI) bilan bo'yalgan. Har bir namuna uchun 1 × 104 hujayra to'plangan va oqim sitometriyasi (FACS Calibur, BD Biosciences) orqali tahlil qilingan. Keyin G1/S/G2 fazali hujayralar nisbati va proliferatsiya indeksi [Faza(S plus G2)/Faz (G1 plus S plus G2) × 100 foiz] hisoblab chiqilgan.

Ki-67 bo'yalgan

Hujayralar konfokal idishda o'stirildi va 72 soat davomida gipoksiya yoki turli xil Cis subtiplari bilan davolandi. Barcha hujayralar 4 foizli paraformaldegid bilan biriktirilgach, ular Ki-67 antikori bilan inkubatsiya qilindi (1:200, Hujayra signalizatsiya texnologiyasi). Keyin barcha hujayralar mos keladigan CY-3-konjugatsiyalangan quyonlarga qarshi IgG antikori (1:200, Boster, Xitoy) va DAPI eritmasi (1,0 ug/ml, Beyotime) bilan inkubatsiya qilindi. Fluoressensiya Fluoview FV1000 konfokal mikroskopida (Olimp, Yaponiya) kuzatildi.

ROSni aniqlash

FCM DCFH-DA yordamida hujayra ichidagi ROS darajasini o'lchash uchun kiritilgan. To'xtatilgan hujayralar 6-quduq plastinkalariga ekilgan va turli muolajalardan o'tkazilgan. 72 soatlik davolanishdan so'ng hujayralar zardobsiz DMEMda 10 mkM DCFH-DA (Beyotime) bilan to'xtatildi. Keyin ROS tarkibi 488 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligi va 525 nm emissiya to'lqin uzunligi bilan Beckman Coulter Flow sitometriya tizimida floresan faollashtirilgan hujayralarni saralash orqali aniqlandi [18].

Lipid peroksidatsiyasini aniqlash (LPO)

LPO ni aniqlash uchun tiobarbiturik kislota reaktiv moddalari (TBARS) tahlili o'tkazildi. Barcha operatsion bosqichlar ko'rsatmalarga muvofiq amalga oshirildi (Sigma AQSh). Konsentratsiyalar standart sifatida malondialdegiddan foydalangan holda olingan 1,56×105/(M-sm) molyar so‘nish koeffitsienti yordamida hisoblangan. Natijalar nmol MDA ekvivalenti/mg protein sifatida ifodalanadi.

Ferment faolligini aniqlash

Ferment faolligi glutation reduktaza (GR), glutation peroksidaza (GPx) va superoksid dismutaza (SOD) kabi tahlil to'plamlari yordamida sinovdan o'tkazildi. Barcha operatsion bosqichlar taqdim etilgan ko'rsatmalarga muvofiq amalga oshirildi (Nan Jing Jian Cheng Bioengineering Institute China).

Hayvonlar va eksperimental protokol

Yetuk erkak Wistar kalamushlari (180-220 g, 8 vatt) Toʻrtinchi harbiy tibbiyot universitetining hayvonlar markazidan, Sian, Xitoydan olingan. Hayvonlardan foydalanish uchun ruxsat universitetning axloqiy qo'mitasidan olingan (Ma'lumot raqami: 20190506). Hayvonlar tajribasi laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha universitet ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi.

Barcha kalamushlarga tajriba boshlanishidan taxminan 1 hafta oldin moslashishga ruxsat berildi. Moslashtirgandan so'ng, kalamushlar tasodifiy ravishda har bir guruhda 5 ta hayvondan iborat 6 guruhga taqsimlandi. Nazorat guruhidagi kalamushlar normal bosim ostida (PO.: 20 foiz; havo bosimi: 101,3 kPa), modeldagi va Cis bilan ishlov berilgan guruhlardagi kalamushlar past bosimli kislorod kamerasida (ichki bosim 61,6 kPa) ko'tarildi. , dengiz sathidan 4000 metr balandlikka teng; PO: 14,55 foiz ) yuqori balandlikdagi gipoksik muhitni simulyatsiya qilish uchun. Barcha kalamushlar 22 ± 2 daraja va namlik sharoitida plastik qafaslarda avtomatik 12-soat yorug'lik/qorong'u tsikli bilan oziq-ovqat va suvdan erkin foydalanishlari mumkin edi. Modeldagi va Cis bilan davolash qilingan guruhlardagi kalamushlar gipobarik sharoitda qolishdi, lekin har 96 soatda normobarik sharoitga o'tkazildi, bu vaqtda ularga oziq-ovqat va suv berildi va qafaslar tozalandi. Gipobarikdan gipobarikgacha o'tishning davomiyligi taxminan 2 soat edi. Barcha davolash guruhlari 8 hafta davomida og'iz orqali gavaj orqali mos keladigan Cis (8 mg / kg / kun) bilan davolandi, nazorat va model kalamushlar esa teng hajmdagi suv bilan ishlov berildi.

8 hafta o'tgach, kalamushlar behushlik ostida qurbon qilindi. Moyaklar, epididimis va urug' pufakchalari ajratildi va tortildi va organ indeksi quyidagi formula bo'yicha hisoblandi: (organ / hayvon vazni)

t) ×100 foiz. Keyinchalik epididimisdagi spermatozoidlar yig'ilib, ularning harakatchanligi va akrozoma fermenti faolligi tekshirildi. Xuddi shunday, moyak to'qimalari gistopatologik tadqiqotlar va ROS, LPO va antioksidant ferment faolligini aniqlash uchun to'plangan.

Jonli sperma tezligini baholash

Epididimis jarrohlik qaychi bilan kesilgan va sperma suspenziyasi oddiy sho'r suvda tayyorlangan. Jonli sperma tezligini baholash uchun 5 uL sperma suspenziyasi teng hajmdagi eozin-Y dog'i bilan ehtiyotkorlik bilan aralashtiriladi. Keyin sperma yorug'lik mikroskopi ostida hisoblangan. Tirik spermatozoidlar soni bo'yalgan (o'lik sperma) va bo'yalmagan spermani (tirik sperma) hisoblash yo'li bilan baholandi.

Sperma akrozoma fermenti faolligini aniqlash

Sperma akrozoma fermenti faolligi tahlili sperma akrozoma fermentlarini baholash uchun ishlatilgan [19]. Har bir guruhdagi natijalar quyidagi formula yordamida hisoblab chiqilgan: Akrozoma fermenti faolligi (mIU)=(ODExperiment guruhi - ODBlank guruhi)/(247,5×10) × 106.

Statistik tahlil

Barcha miqdoriy ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalangan va SPSS 22.0 dasturi yordamida tahlil qilingan. Ikki guruh o'rtasidagi ma'lumotlarni solishtirish uchun Mustaqil Talabaning t-testidan foydalanildi. “P<0.05>< 0.01="" were="" considered="" statistically="" significant="">

Natijalar

Gipoksiyaning GC-1 hujayralariga ta'siri

Gipoksiyaning jinsiy hujayralarga ta'sirini aniqlash uchun biz birinchi navbatda 1, 3,5 va 7 kun davomida turli kislorod konsentratsiyasi (20 foiz, 15 foiz, 10 foiz, 5 foiz) bilan gipoksiya bilan davolashdan so'ng hujayralarning yashash qobiliyatidagi o'zgarishlarni tekshirdik. , mos ravishda. CCK{9}} tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, nazorat guruhi (20 foiz kislorod kontsentratsiyasi) bilan solishtirganda, gipoksiyaga duchor bo'lgan hujayralar hayotiyligi sezilarli darajada pasaygan (P).<0.01; figure="" 1a).="" moreover,="" their="" survival="" rate="" was="" inversely="" proportional="" to="" the="" oxygen="" concentration="" and="" further="" decreased="" with="" induction="" time.="" to="" avoid="" an="" excessive="" cytotoxic="" effect,="" a="" 10%="" oxygen="" concentration="" and="" 3-day="" induction="" time="" were="" selected="" as="" the="" hypoxic="" model="" criteria="" for="" subsequent="" in="" vitro="">

Keyinchalik, gipoksiya bilan davolash ostida GC-1 hujayralarining proliferatsiya o'zgarishini yanada baholash uchun FCM va immunofloressens bo'yash amalga oshirildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, gipoksiya G1 fazasida GC-1 hujayralarni to'xtatib qo'yishi va shu bilan hujayraning S fazasiga kirishini kamaytiradi va DNK replikatsiyasini inhibe qiladi. Shunday qilib, gipoksiya GC-1 hujayralarining proliferatsiya indeksini sezilarli darajada kamaytirdi (P).<0.01; figure="" 1b).="" positive="" ki-67="" staining="" is="" another="" specific="" biomarker="" of="" proliferating="" cells.="" therefore,="" we="" also="" examined="" the="" ratio="" of="" ki-67-positive="" cells="" with="" or="" without="" hypoxia="" treatment.="" compared="" with="" the="" control="" group,="" hypoxia="" treatment="" remarkably="" reduced="" ki-67-positive="" cells,="" as="" shown="" in="" figure="">

Keyinchalik, biz gipoksiya tomonidan qo'zg'atilgan GC-1 hujayra hayotiyligini inhibe qilish rejimini o'rganishni maqsad qildik. Adabiyotda xabar qilinganidek, kalamushlar gipo-barik gipoksik muhitga ta'sir qilganda ROS darajasi oshdi [8,20]. Shunday qilib, GC-1 hujayralaridagi endogen ROS darajalari FCM tahlili yordamida o'lchandi. Natijalar normal kislorod guruhiga nisbatan gipoksiya ostida ROS darajasini ko'rsatdi (P< 0.01;="" figure="" 1d).="" accumulated="" ros="" cause="" marked="" dna="" impairment,="" which="" in="" turn="" causes="" cell="" apoptosis="" pathway="" activation="" and="" might="" be="" the="" major="" etiological="" factor="" for="" the="" increased="" risk="" of="" male="" infertility="" [21,22].="" next,="" we="" detected="" the="" apoptotic="" activation="" effect="" of="" hypoxia="" on="" gc-1="" cells="" by="" tunelstaining.="" as="" shown="" in="" figure="" 1e,="" treatment="" with="" hypoxia="" resulted="" in="" an="" increase="" in="" tunel="" fluorescence="" compared="" with="" the="" control="" group,="" indicating="" an="" increase="" in="" apoptosis="" in="" the="" model="">

ROS sabab bo'lgan hujayra shikastlanishi odatda OT tomonidan sodir bo'lganligi sababli, biz GC-1 hujayralarining OSni qo'shimcha sinovdan o'tkazdik. 1F-rasmda ko'rsatilganidek, model guruhidagi GC-1 hujayralarining LPO darajalari sezilarli darajada edi.

nazorat guruhidagi GC-1 hujayralarining LPO darajalariga nisbatan oshgan. Ushbu topilmalar gipoksiyadan kelib chiqqan GC-1 hujayra shikastlanishi ROS to'planishi bilan qo'zg'atilgan OS bilan bog'liq bo'lishi mumkinligi taxmin qilinmoqda.

Cis ning gipoksiyadan kelib chiqqan GC-1 hujayra hayotiyligiga in vitro ta'siri.

Cis gipoksiyaning GC{0}} hujayra hayotiyligiga inhibitiv ta'sirini oldini olish yoki yo'qligini tekshirish uchun CCK-8 tahlili o'tkazildi. GC-1 xujayralari turli xil subtiplar (Cis-A, B, C, H） va kontsentratsiya diapazonlari (0,02 mkM, 0,2 mkM, 2 mM) Cis 72 soat davomida ishlandi. Taqqoslash DMSO guruhiga ega model guruhi DMSO GC{10}} hujayra hayotiyligini toʻgʻridan-toʻgʻri ragʻbatlantirmasligini koʻrsatdi (2A-rasm). Biroq, hujayra hayotiyligi sezilarli darajada tiklandi (P)< 0.05)="" with="" cis="" treatments.="" compared="" with="" the="" model="" group,="" cis-a,="" cis-b,="" cis-c,="" and="" cis-h="" all="" showed="" certain="" protective="" effects="" on="" hypoxia-induced="" damage="" to="" gc-1="" cell="" viability,="" and="" cis-b="" showed="" the="" most="" significant="" effect(figure="" 2a).="" the="" protective="" effects="" of="" cis="" at="" 0.2="" μm="" were="" significantly="" higher="" than="" the="" protective="" effects="" of="" cis="" at="" 0.02="" μm,="" while="" the="" difference="" between="" 2="" μm="" and="" 0.2="" um="" was="" not="" obvious,="" indicating="" that="" the="" restored="" gc-1="" cell="" viability="" induced="" by="" cis="" demonstrated="" a="" dose-dependent="" increase="" in="" the="" concentration="" range="" from="" 0.02-0.2="" μm="" （figure="" 2a）.="" therefore,="" according="" to="" the="" experimental="" needs,="" 0.2="" m="" cis="" was="" selected="" as="" the="" optimal="" concentration="" in="" the="" following="" in="" vitro="" experiments.="" to="" further="" confirm="" whether="" germ="" cells="" were="" indeed="" protected="" by="" cis,="" fcm,="" and="" ki-67="" staining="" were="" performed="" to="" assess="" the="" alteration="" of="" the="" proliferation="" of="" gc-1="" cells="" after="" treatment="" with="" cis.="" upon="" cis="" treatment,="" the="" proportion="" of="" gc-1="" cells="" in="" the="" g1="" phase="" was="" reduced.="" in="" contrast,="" more="" cells="" entered="" s-phase,="" suggesting="" that="" cis-treatment="" could="" increase="" the="" germ="" cell="" proliferation=""><0.01; figure="" 2b).="" the="" statistics="" for="" the="" gc-1="" cell="" cycle="" are="" shown="" in="" figure="" 2bb.="" the="" ki-67="" staining="" results="" also="" showed="" that="" cis-a,="" cis-b,="" cis-cand="" cis-h="" treatment="" significantly="" improved="" the="" ki-67-positive="" cell="" ratio="" of="" hypoxia-induced="" gc-1="" cells="" in="" vitro(figure="">

Cis mexanizmi in vitro mikrob hujayralarini gipoksiyadan himoya qiladi.

Cis ning GC-1 hujayralariga himoya ta'siri haddan tashqari ROSni olib tashlash bilan bog'liqligini tekshirish uchun har bir guruhda ROS darajasini aniqlash uchun DCFH-DA lyuminestsent bo'yoq ishlatilgan. Shakl 3A, 3B da ko'rsatilganidek, DMSO bilan davolash model guruhi bilan solishtirganda hujayra ichidagi ROS tarkibini yoki LPO darajasini o'zgartirmadi. Biroq, GC-1 hujayralarida ROS darajalari Cis bilan davolash qilingan guruhlarda sezilarli darajada kamaydi (3A-rasm). Bundan tashqari, Cisga ta'sir qilgan GC-1 hujayralarida LPO ning pasayishi ham kuzatildi (3B-rasm).

Cis mikrob hujayralarini gipoksik shikastlanishdan himoya qilish mexanizmini yanada o'rganish uchun apoptozni baholash uchun TUNEL bo'yash va Western blot tahlillari o'tkazildi. TUNEL bo'yash (3C-rasm) model va DMSO guruhlarida sezilarli apoptozni ko'rsatdi. Biroq, Cis bilan davolashda kamroq apoptotik hujayralar kuzatildi, bu Cis bilan davolash GC-1 hujayra apoptozini kamaytirganini ko'rsatdi. Bundan tashqari, molekulyar mexanizmni tasdiqlash uchun PARP, Caspase-3, Bax va Bcl-2 ifodasi o'lchandi. 3D-rasmda ko'rsatilganidek, kaspaza-3 va PARP gipoksiya ostida GC-1 hujayralarida faollashtirildi va bu faollashuv Cis bilan davolash orqali inhibe qilindi. Bundan tashqari, Bax/Bcl-2 nisbati model guruhida nazorat guruhiga qaraganda yuqoriroq edi va Cis bilan davolash Bax/Bcl-2 nisbatini kamaytirdi (3D-rasm). Ushbu ma'lumotlar Cisning gipoksiyadan kelib chiqqan oksidlovchi zararni susaytirish qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi va bu himoya ta'siri ROS to'planishini kamaytirish va Kaspaza bilan bog'liq apoptoz yo'li faollashuvini inhibe qilish orqali amalga oshirilishi mumkin.

OSni inhibe qiluvchi fermentativ mexanizm glutation reduktaza (GR), glutation peroksidaza (GPx) va superoksid dismutaza (SOD) [23] kabi erkin radikallarni tozalash vositalarini o'z ichiga oladi. OSni inhibe qiluvchi enzimatik mexanizm oldini olishda muhim rol o'ynaydioksidlovchi shikastlanishhujayralar va to'qimalarda [23]. GC-1 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan OSning Cis inhibisyonining potentsial mexanizmini yanada tasdiqlash uchun GR, GPx va SOD faolligi o'lchandi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, GR, GPx va SOD faolligi (P < 0.01,="" 3e-rasm)="" nazorat="" guruhlari="" bilan="" solishtirganda="" gipoksiya="" ostida="" sezilarli="" darajada="" kamaydi="" va="" cis="" bilan="" davolash="" ularning="" gcdagi="" faolligini="" sezilarli="" darajada="" tikladi{{6}="" gipoksiyaga="" uchragan="" hujayralar="">< 0.05,="" figure="" 3e),="" suggesting="" that="" these="" compounds="" could="" activate="" the="" powerful="" endogenous="" antioxidant="">

2-qism haqida ma'lumot olish uchun quyidagi havolani bosing
https://www.xjcistanche.com/news/part2-cistanoside-of-cistanche-herba-ameliorat-54370494.html