Cistanche Tubulosa dan feniletanol glikozidlarining profilaktik ta'siri

Aloqa: Audrey Xu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping You va boshqalar

Abstrakt

Fon:Cistanchetubulosaimmunitetni tartibga solish uchun keng qo'llaniladigan an'anaviy xitoy o'simlik dorisidir.FeniletanoildglikozidlarBu zavoddan (CPhGs) birinchi navbatda samarali materiallar hisoblanadi. Ushbu tadqiqotning maqsadi CPhG ning kalamushlarda BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibroziga va jigar stellat hujayralarini o'z ichiga olgan tegishli molekulyar mexanizmlarga profilaktik va terapevtik ta'sirini baholash edi. Biejiarangan (BJRG), boshqa an'anaviy xitoy o'simlik dorisi ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan.

Usullari:In vivo tajribalarda 75 ta SD kalamush tasodifiy 6 guruhga bo'lingan: normal (distillangan suv bilan ishlangan), model (BSA bilan ishlov berilgan), ijobiy dori (BSA bilan ishlov berilgan va BJRG 600 mg / kg / kun) va BSA bilan ishlangan plyus CPhGs (125, 250 va 500 mg / kg / kun) guruhlari. Jigar va taloq indekslari, aspartat aminotransferaza (AST), alanin aminotransferaza (ALT), geksadesenik kislota (HA), laminin (LN), III prokollagen (PCIII), IV kollagen (IV-C), gidroksiprolin (Hyp) ning sarum darajalari. ) va transformatsiya qiluvchi o'sish omili 1 (TGF- 1) kalamush jigarida o'lchandi. Jigar fibrozining gistopatologik darajalari H&E va Masson trixromli bo'yash yordamida har bir guruh uchun baholandi. TGF- 1, kollagen I (Col-I) va kollagen III (Col-III) ning ekspressiyasi immunohistokimyoviy boʻyash usuli bilan aniqlandi. Ushbu ta'sirlar NF-kB p65 va Col-I ning ekspressiya darajasini aniqlash orqali real vaqt rejimida PCR tahlillari orqali in vitro baholandi. Col-I oqsilining ifodasi ham western bloting bilan tekshirildi.

Natijalar: Barcha doza guruhlari (125, 250 va 500 mg/kg/kun) CPhGs jigar va taloq indeksini sezilarli darajada kamaytirdi, ALT, AST, HA, LN ni kamaytiradi. , PCIII, IV-C sarum darajalari, TGF- 1 tarkibi (P < 0.01,="" p="">< 0.01="" va="" p="">< 0,01)="" va="" hyp="" mazmuni.="" cphgs="" shuningdek,="" jigar="" hujayralarining="" shishishini="" sezilarli="" darajada="" engillashtirdi="" va="" gepatotsitlar="" nekrozini="" va="" yallig'lanish="" hujayralari="" infiltratsiyasini="" samarali="" ravishda="" oldini="" oldi.="" immunohistokimyoviy="" natijalar="" shuni="" ko'rsatdiki,="" cphg'lar="" tgf-="" 1="" (p=""><0,01, p=""><0,01 va="" p=""><0,01), col-i="" va="" col-iii="" ifodasini="" sezilarli="" darajada="" kamaytirdi.="" cphglarning="" (100,="" 75,="" 50="" va="" 25="" ug="" ml)="" hsc-t6="" ga="" in="" vitro="" ta'siri="" cphg'lar="" nf-kb="" p65="" va="" col-i="" ning="" mrnk="" ifodasini="" sezilarli="" darajada="" kamaytirganini="" ko'rsatdi="" va="" cphg'lar="" ham="" col-i="" protein="" ifodasini="">

Xulosa:CPhG'lar jigar fibroziga qarshi sezilarli ta'sirga ega va jigar fibrozini davolash uchun gepatoprotektiv vositalar sifatida ishlatilishi mumkin.

Kalit so‘zlar:Jigar fibrozi,Cistanche tubulosa,Feniletanoildglikozid,Chemokin BSA, oldini olish va davolash

FeniletanoildglikozidichidaCistanchetubulosa

Fon

Jigar fibrozi - bu turli omillar ta'sirida surunkali gepatit patogenezida yuzaga keladigan jigarning og'ir shikastlanishiga yarani davolovchi javobdir. Bu omillar virusli infektsiya, spirtli ichimliklarni suiiste'mol qilish, xolestaz va metabolik va otoimmün kasalliklardir [1-3]. Hujayradan tashqari matritsaning (ECM) progressiv to'planishi va remodelingning pasayishi jigarning normal arxitekturasini buzadi, bu esa jigar fibroziga olib keladi [4]. Jigar fibrozi surunkali jigar kasalligida juda muhim va ko'pincha qaytarilmas siroz va kanserogenezga aylanadi. Hozirgi vaqtda jigar fibrozini davolashning usullari yoki samarali dorilari mavjud emas. Shuning uchun jigar shikastlanishining fibroz va saraton rivojlanishini susaytiradigan jigar fibroziga qarshi dori-darmonlarni topish juda muhimdir.

CistanchetubulosaW (Orobanchaceae oilasidan) Xitoyning Shinjon janubida keng tarqalgan parazit o'simlikdir [5]. Odamlar odatda buyraklarni jonlantirish, qonni oziqlantirish, ichakni bo'shatish va qarishni kechiktirish uchun foydalanadilar. U rasmiy ravishda Xitoy farmakopeyasiga kiritilgan [6].Cistanchetubulosatarkibida turli xil faol komponentlar mavjud. Bularga kiradiFeniletanoildglikozidlar(CPhGs), iridoidlar va polisaxaridlar. Ko'pgina faol komponentlardan biri sifatidaCistanchetubulosa, CPhGshave in vivo va in vitro tadqiqotlarida ishonchli antioksidant, charchoqqa qarshi, neyroprotektiv va yallig'lanishga qarshi ta'sir ko'rsatdi [7]. So'nggi yillarda CPhGlarning gepatoprotektiv ta'siri borligi haqida xabar berilgan. Ushbu ta'sirlar ostida yotgan potentsial mexanizmlar erkin radikallarni tozalash, jigar membranalarini himoya qilish, immunoregulyatsiya, apoptozni inhibe qilish, HBsAg va HBeAg ekspressiyasini inhibe qilish, HBV DNK replikatsiyasini inhibe qilish va boshqalar [8-11]. Biroq, adabiyotda kam sonli tadqiqotlar GPhClarning jigar fibroziga qarshi ta'sirini ko'rib chiqadi. Shu sababli, ushbu tadqiqot kalamushlarda sigir zardobidagi albumin (BSA) tomonidan qo'zg'atilgan gepatikfibrozdan foydalangan holda GPhCs ning jigar fibroziga qarshi ta'sirini o'rganishga qaratilgan. HSC-T6 hujayralarida tegishli molekulyar mexanizmlar o'rganildi.

Usullari

Kimyoviy moddalar va reagentlar

Gidroksiprolin to'plami (Ishqoriy gidroliz) (Lot: 20140616) Nankin Jiancheng biomuhandislik institutidan (Xitoy) sotib olindi. Rat TGF- 1 sendvichELISA to'plamlari (lot: 238240615) Lianke Biotech Co., Ltd.dan (Xitoy) xarid qilingan. Quyonga qarshi kollagen I antikori (lot: 140619), quyonga qarshi kollagen III antikori (lot: 980788 Vt) va quyonga qarshi TGF- 1 antikori (lot: 140619) Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD (lot) tomonidan taqdim etilgan. Xitoy). Oddiy qoʻy zardobi (ishchi suyuqlik) bilan oʻralgan (lot: WP141214), PV{11}}(lot: WK141225) va DAB toʻplami (lot: K136621D) Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (Xitoy) dan sotib olindi. Birlamchi antikorlarni aniqlash Invitrogen kompaniyasidan (AQSh) sotib olingan 2. Antikor eritmasi (Alk-Phos.Conjugated, Anti-quyon) va 2. Antikor eritmasi (Alk-Phos.Conjugated, Anti-sichqoncha) (lot: 272387) yordamida amalga oshirildi. .

Qoramol sarum albumini (BSA) (lot: SLBG8239V) Sigma (AQSh) dan sotib olindi. Foydalanishdan oldin BSA 18 g/L dan oddiy sho'r suvda tayyorlanadi, bakteriyalar filtrlash orqali olib tashlanadi va BSA 4 darajada saqlanadi. Freundning to'liq bo'lmagan yordamchisi qo'y junidan 1 g lipid (Lot: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Xitoy)) 2 g suyuq kerosin bilan aralashtirildi (Lot: 20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co. Ltd (Xitoy), bug'li avtoklavda sterillangan va 4 darajada saqlanadi.BJRG musbat preparati Biejiarangan tabletkalari sifatida Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd.(Xitoy) dan olingan. 600 mg/kg konsentratsiyada distillangan suv.

Feniletanoild glikozidichidaCistancheprofilaktik ta'sirga ega

O'simlik materiallari

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae oilasi) Xitoyning Shinjon viloyatining Minfeng viloyatidan sotib olingan. Material Shinjondagi Materia Medica Instituti, Uyg'ur Tibbiyotining asosiy laboratoriyasi tadqiqotchisi Jun Chjao tomonidan tasdiqlangan. Vaucher namunalari Shinjondagi Materia Medica Institutiga saqlangan.

CPhGlarni tayyorlash

Quritilgan va dilimlenmiş ildizpoyalariCistanchetubulosa(6.0 kg) ketma-ket uch marta reflyuks ostida 70% etanol bilan ekstraksiya qilindi va etanol ekstrakti olish uchun erituvchi ajratildi. Etanol ekstraktlari AB{3}} qatroni yordamida tozalandifeniletanoidglikozidlar(CPhGs). Hayvonlarni o'rganishda turli doza guruhlari uchun ishlatiladigan CPhG ning zaxira eritmalari (mos ravishda 5{3}}0 mg/kg, 250 mg/kg va 125 mg/kg) 0,5 foiz (5 g/l) karboksimetil tsellyulozada eritildi. natriy tuzi).

CPhGs miqdorini aniqlash

CPhG tarkibidagi ikkita komponentning (echinacoside va acteoside) tarkibi HPLC tomonidan ilgari xabar qilingan usuldan foydalangan holda aniqlangan (Zhang va boshq. 2004)[12]. HPLC UV detektori bilan jihozlangan Shimadzu LC-10AHPLC yordamida amalga oshirildi. HPLC ustuni Phenomenex Gemini ODS ustuni edi (250 × 4,6 mm, 5 mkm). Izokratik harakatlanuvchi faza metanol-asetonitril{8}} foiz sirka kislotasidan (15:10:75, v/v/v) tashkil topgan. Elutsiya 40 daqiqa davom etgan va oqim tezligi 0,6 ml/min da ushlab turilgan. Ustun harorati doimiy ravishda 30 darajada ushlab turildi. UVni aniqlash 334 nm da edi.

Hayvonlar va HSC-T6 hujayra liniyasi

[Grade SPF] sog'lom katta yoshli erkak Sprague-Dawley (SD) kalamushlari (180–220 g) Shinjon tibbiyot universiteti hayvonlar markazidan sotib olingan, Litsenziya №: SCXK (Yangi) 2011–0004. Kalamushlar o'ziga xos patogensiz (SPF) ovqat bilan oziqlangan. Hayvonlar ustida o'tkazilgan tajribalar bilan bog'liq barcha protseduralar Shinjon tibbiyot universitetining birinchi filiali kasalxonasining Hayvonlar etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Kalamushlar nazorat qilinadigan atrof-muhit sharoitida (25 daraja va 12 soat yorug'lik / qorong'u tsikl) qafaslarga joylashtirildi va standart kalamush granulalari oziq-ovqatlari va musluk suvidan erkin foydalanish imkoniyatiga ega edi. Davolanishdan oldin kalamushlar moslashtirildi.

HSC-T6 bo'lmagan kalamush jigar yulduzsimon hujayra liniyasi Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD kompaniyasidan olingan. (Uxan, Xitoy). HSC-T6 xujayralari Dulbecco modifikatsiyalangan Eagle's Medium (yuqori glyukoza) (DMEM, Pekin, Xitoy) 10 foizli xomilalik qon zardobi (Gibco, Janubiy Amerika), 100 IU/ml penitsillin va 100 ug/ml streptomitsin (Beijing, China) bilan to'ldirilgan. ) 5 foiz CO2 bilan namlangan inkubatorda 37 daraja haroratda.

BSA sabab bo'lgan jigar shikastlanishi va davolash

Yetmish beshta SD kalamush tasodifiy oltita guruhga bo‘lindi: Oddiy (distillangan suv bilan ishlangan), model (BSA bilan ishlov berilgan), ijobiy dori (BSA bilan ishlangan plyus BJRG 600 mg/kg/kun) , va BSA bilan davolash qilingan plyus CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/kun) guruhlari. BSA bilan davolash qilingan plyus CPhGs (125, 250, 5 00 mg/kg/kun) guruhlarda har bir guruhda 13 ta kalamush, boshqa guruhda esa har bir guruhda 12 ta kalamush bor edi. BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar shikastlanishi modeli immunologik hujumdan so'ng birlamchi sensibilizatsiyaga bo'linadi) [13]. Oddiy guruhdan tashqari, boshqa guruhlarga birlamchi sensibilizatsiya uchun 1-kun, 15-kun, 22-kun, 29-kun va 36-kunlarda 0,5 ml (9 mg/ml) BSAFreundning toʻliq boʻlmagan adjuvanti bilan koʻp marta teri ostiga inyeksiyalar kiritildi. Beshinchi in'ektsiyadan etti kun o'tgach, qon ratretinal vena pleksusi orqali olindi va sarum albumin antikorlari uchun sinovdan o'tkazildi. Sichqonlarning zardobida BSA antikori qo'sh agar diffuziya usuli bilan aniqlandi. Hujum in'ektsiyasi 0,4 ml BSAni normal sho'r suvda yuborish orqali amalga oshirildi, BSA antikorlari ijobiy kalamushlarda haftasiga ikki marta o'n marta kaudal tomir orqali o'tkazildi. In'ektsiya kontsentratsiyasi va vaqtlari 46-kunda 5.00, 5.50, 6.00, 6.50,7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 va 10.00 g/L edi. , mos ravishda 50-kun, 53-kun, 57-kun, 60-kun, 64-kun, 67-kun, 71-kun, 74-kun va 78-kun. Oddiy guruhda BSA o'rniga immunologik birlamchi (sensibilizatsiya) va ikkilamchi (hujum) in'ektsiyalari uchun oddiy sho'r suv ishlatilgan va boshqa shartlar model guruhidagi kabi edi.

Oddiy guruhga kuniga 10 ml/kg dozada distillangan suv og'iz orqali yuborildi. Model guruhiga og'iz orqali 10 ml / kg / kun 0,5 foizli CMC-Na eritmasi yuborildi. Ijobiy dori guruhi og'iz orqali 600 mg / kg / kun BJRG yuborildi. BSA bilan davolash qilingan plyus CPhGs (125,250 va 500 mg / kg / kun) guruhlari og'iz orqali mos ravishda 125, 250 va 500 mg / kg / kun CPhGs qo'llanildi. Kundalik dozalash kalamushlar oxirgi in'ektsiyadan keyin ikki hafta davomida davom etdi.

Tajriba davridan so'ng, kalamushlar 12 soat davomida 10% xloralgidratdan oldin och qoldirildi va keyin darhol evtanizatsiya qilindi. Darhol ishlatiladigan har bir ratanddan sarum namunalari yig'ildi. Jigarlar ikki maqsadda yig'ib olingan: (1) Hyp to'plamlari uchun suyuq azotda saqlash va (2) gistologik va immunohistokimyoviy tekshiruvlar uchun 10 foizli formaldegidda fiksatsiya qilish. Hayvonlarni o'rganishning butun davomiyligi 93 kun edi.

Feniletanoild glikozidichidaCistancheprofilaktik ta'sirga ega

Jigar va taloq indekslari

Jigar va taloq laparotomiya orqali ajratilib, 4 daraja normal sho'r suv bilan yuviladi. Ortiqcha suv filtr qog'ozi bilan singdirilgandan so'ng, tegishli indekslarni hisoblash uchun jigar va taloq tortildi: nisbiy organ og'irligi=organ massasi (g)/individual tana massasi (g) × 100 foiz [14].

Jigar fibrozining markerlarini tahlil qilish

CPhGlarning BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar shikastlanishiga qarshi himoya ta'siri ALT va AST (Mind ray avtomatik biokimyoviy analizator, A086A0182) o'lchash orqali baholandi. Jigar fibrozining rivojlanishi va davolash ta'siri HA, LN, PC III va IV-C (Chemiluminescence analizator, TaiGeKeXin, MP2808) ni tekshirish orqali aniqlandi.

Hyp kontent va TGF- 1 tahlili

Jigar to'qimalarida Hyp darajasi to'plam ko'rsatmalariga muvofiq spektrofotometrik usul bilan aniqlandi. Hyp darajasi Hyp (ug)/oqsil (mg) sifatida ifodalandi. Gip (ug/mg)=(O'lchangan OD - blank OD)/(standart OD blank OD)×5 (ug/ml) × 10/to'qimalarning nam og'irligi (ml/mg). TGF- 1 ning jigardagi kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchi ko'rsatmalariga muvofiq ELISA to'plamlari yordamida aniqlandi. CPhGlarning fibrozga inhibitiv ta'siri TGF- 1 ifoda darajalari bilan tasdiqlandi.

Histopatologik tekshirish

Chap lobning xuddi shu qismidagi jigar to'qimasi rezektsiya qilingan va 10 foizli formaldegid eritmasida mahkamlangan. Gistopatologik o'zgarishlarni yorug'lik mikroskopida kuzatish uchun to'qimalar an'anaviy H&E va Masson strikromli bo'yash bilan bo'yalgan. Immunogistokimyoviy bo'yash orqali jigar to'qimalarida I tip kollagen, III kollagen va TGF- 1 ifodasi tahlil qilindi [15].

Yarim miqdoriy immunohistokimyo xabar qilingan usullarga muvofiq amalga oshirildi [16, 17]. TGF- 1 musbat hujayralar uchun quyidagi tasniflardan foydalanilgan: "-" deyarli ifoda yo'qligini bildiradi, 20=l; "plyus" lezyon hududida alohida to'plangan ijobiy hujayralarni bildiradi, 21=2; "plyus plyus" shikastlangan hudud atrofida to'plangan kichik guruhlardagi ijobiy hujayralarni bildiradi, 22=4; " plus plus plus " 23=8 sifatida ifodalangan tarqalgan musbat hujayralarni bildiradi. Natijalar ierarxik integratsiyani ifodalaydi. Kollagen turi I va III turdagi kollagen xromogen darajasi va doirasi statistik tahlil uchun CRIga aylantirildi (xromogen daraja × xromogen diapazon). Xromogen daraja zaif "plyus", o'rtacha "plyus plyus" va kuchli "plyus plus plus" ga bo'linadi. Xromogen diapazon "plyus" ga bo'linadi, uning xromogen diapazoni < ko'rish="" 1/4;="" "="" plus="" plus="" ",="" uning="" xromogen="" koʻrish="" diapazoni/4-2/4;="" "="" plus="" plus="" plus="" ",="" uning="" xromogen="" koʻrish="" diapazoni="" 2/4-3/4;="" "plyus="" plus="" plus="" plus",="" uning="" xromogen="" diapazoni=""> 3/4. Blindedscoring ikki kishi tomonidan amalga oshirildi, bunda "plyus" 1; " plyus plyus" 2, " plus plus plus" 3 va " plus plus plus plus" 4. Har bir bo'lim uchun uchta mikroskop kuzatuv maydoni (kattalashtirish × 200) tasodifiy tanlangan, namunalarning o'rtacha darajasi yarim miqdoriy daraja.

Hujayra tajribalari

HSC-T6 xujayralari 96-quduq plastinkasiga qo'yildi. Dastlab, hujayralar 48 soat davomida 1{7}}% FBS o'z ichiga olgan DMEM bilan o'stirildi. Keyin hujayralarni 12 soat davomida och qoldirish uchun vosita FBSsiz DMEM bilan almashtirildi. Keyin hujayralar 24 soat davomida 5,0 ng/mLTGF- 1 (FBSsiz) bo'lgan DMEM bilan madaniyatlandi. Nihoyat, turli konsentrasiyalarda CPhG (100ug/ml, 50ug/ml va 25ug/ml), akteozid (6 ug/ml, 3 ug/ml va 1,5 ug/ml), andexinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, va 125ug/ml) plastinkada to'rt martalik quduqlarda olib borildi va 48 soat davomida inkubatsiya qilindi.

Haqiqiy vaqtda PCR tahlili

NF-kB, p65 va kollagenI ning mRNK ifoda darajasi real vaqtda PCR orqali aniqlandi. HSC-T6 hujayralarida mRNK ifodalarini aniqlash uchun hujayralar (4 × 105 hujayralar) 10% FBS bilan 3 ml DMEM bilan oltita teshikli plastinkalarga ekilgan va bir kechada 37 daraja va 5 foiz CO2 da inkubatsiya qilingan, shundan so'ng hujayra madaniyati muhiti serumsiz DMEMga o'zgartirildi. Keyinchalik, CPhG'lar (100 ug / ml, 50 ug / ml va 25 ug / ml), akteozid (6 ug / ml, 3 ug / ml va 1,5 ug / ml) va echinacoside (500 ug / ml, 250 ug) /ml va 125ug/ml) quduqlarga qo'shildi. CPhG yoki monomerik kompozitsiyalar bilan 48 soat inkubatsiyadan so'ng, umumiy RNK TRIzol reagenti (Invitrogen, AQSh) yordamida ekstraksiya qilindi va 15 soniya davomida xloroform bilan kuchli ajitatsiya qilindi. Xona haroratida 3 daqiqa o'tirgandan so'ng, lizat 12,000 × g da 15 daqiqa davomida 4 daraja santrifüj qilindi. Suvli fazadagi RNK izopropanol bilan cho'ktirildi va yuqori suvli faza yangi mikrosentrifuga naychasiga o'tkazildi. RNK 0,75 foiz etanol qo'shib cho'ktirildi, shundan so'ng mikrotsentrifuga trubkasi 12,{34}} × g haroratda 4 darajadan ko'p bo'lmagan 5 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Supernatant olib tashlandi va RNK xona haroratida 5-10 daqiqa davomida quritildi. Sichqoncha -aktin [GenBank: NM_031144.3], Kollagen I [GenBank: NM_ 053304.1] va NF-ni kuchaytirish uchun ishlatiladigan maxsus primerlar to'plami (Sangon, Shanxay, Xitoy) kB p65[GenBank: NM{46}}.2] genlari Batch Primer 3 yordamida ishlab chiqilgan. Oldinga (FW) va teskari (RV) primerlar quyidagicha edi: Kollagen I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA), NF-kB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -aktin (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGAATA GAG CAG GGA CAA CAC A). Natijalar ichki nazorat sifatida homekeepinggen-aktinning mRNKsiga normallashtirildi va mRNK darajasining nisbiy ko'rinishi sifatida taqdim etildi.

Reaksiyalar 8 mkL IQ SYBR GreenSupermix, 1 mkL 10 pM primer jufti, 8,5 mkl distillangan suv va 2,5 mkl cDNA bilan amalga oshirildi. Har bir polimeraza zanjiri reaktsiyasi quyidagi sharoitlarda amalga oshirildi: 3 daqiqa davomida 95 daraja, keyin 95 daraja 10 s 40 tsikl, 55 gradusda 30 s va 55 gradusda 10 s - 95 daraja uzaytirish, so'ngra bitta floresan o'lchash. Yakuniy natijalar nisbiy qiymatlar (2-DDCt) bilan tasvirlangan. Hisoblash va tahlil iQ5 Real-Time PCR Detection System tomonidan amalga oshirildi.

Western blot tahlili

Kollagen I (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya, Art №: ab34710) oqsillarni ifodalash darajalari Westernblotting tomonidan [bilan -aktin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, Xitoy) uy nazorati sifatida aniqlandi. Butun hujayrali ekstraktlar Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) (Thermo Scientific, AQSH) buferi yordamida 1 foizli Haltproteaz inhibitör kokteyli (Thermo Scientific, AQSh) va 1 foiz Halt fosfataza inhibitori kokteyllari (Thermo Scientific, AQSh) yordamida tayyorlangan. Protein kontsentratsiyasi Bredford usuli bilan o'lchandi va miqdori aniqlandi [18]. Protein (10-50 ug) 10 foizli SDS-PAGE jelida ajratildi va PVDF membranalariga (Millipore, AQSh) o'tkazildi. Membranalar xona haroratida 1 soat davomida 5 foiz BSA va asosiy antikorlar (Anti-Colla gen I) bilan bloklandi. antikor, 1:200 suyultirish yoki sichqoncha mAb -aktin, 1:5000 suyultirish) kechada 4 daraja inkubatsiya qilindi. Tegishli Alk-Phos. konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar xona haroratida inkubatsiya qilingan. Nihoyat, mavzular uch marta 1 × Tris-HClsaline bilan 0,1% Tween 20 bilan yuvildi va signallar skanerdan o'tkazildi va GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad) tomonidan vizualizatsiya qilindi. Qiziqarli oqsillarda densitometrik tahlil o'tkazildi va GEL DOCImage Studio dasturi (Bio-Rad) tomonidan -aktin darajasiga normallashtirildi. -aktin ichki nazorat sifatida ishlatilgan.

Statistik tahlil

Dispersiyaning normalligi va bir xilligini tekshirish uchun Shapiro-Uilk normallik testi va Levenning dispersiya bir xillik testi qo'llanildi. Bir xil bo'lmagan, normal taqsimlangan ma'lumotlarning statistik farqlarini aniqlash uchun Tukeyning post hoc testidan so'ng dispersiya tahlili (ANOVA) ishlatilgan. Kruskal-Wallis parametrik bo'lmagan testi odatda taqsimlanmagan yoki bir hil bo'lmagan ma'lumotlarni tahlil qilish uchun ishlatilgan. Natijalar o'rtacha ± SD sifatida ifodalangan. Muhimlik P < 0="" da="" o'rnatildi.05.="" barcha="" ma'lumotlar="" spss="" 16.0="" dasturi="" (shinjon="" tibbiyot="" universiteti)="" tomonidan="" tahlil="">

Natijalar

CPhGsCPhGlarni miqdoriy aniqlashCistanchetubulosaikkitadan iboratFeniletanoildglikozidlar, echinacoside va acteosid va ularning CPhGdagi tarkibi HPLC tahlili bilan aniqlandi (1-rasm) mos ravishda 42,71 ± 0,42 va 14,27 ± 0,18 foiz.

Jigar va taloq indekslari

1-jadvalda ko'rsatilganidek, model guruhining jigar va taloq indekslari sezilarli darajada oshgan [P < 0.01,p=""><0,05]. turli="" doza="" guruhlarida="" ijobiy="" bjrg="" va="" cphg="" dori="" vositalarining="" jigar="" va="" taloq="" indekslari="" model="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="" darajada="" kamaydi[pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" mos="" ravishda="" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024," pspleen="0.070]." jigar="" va="" taloq="" ko'rsatkichlari="" model="" guruhidagidan="" past="">

CPhGlarning ALT, AST faolligiga va jigar fibrozismarkerlariga ta'siri

Ushbu tadqiqotda AST va ALT jigar fermentlarining sarum darajasi model guruhida sezilarli darajada oshdi, bu BSA bilan qo'zg'atilgan jigar fibrozisi kalamushlarida gepatotsellyulyar zararni aks ettiradi. Biroq, tajribalar shuni ko'rsatdiki, BJRG (600 mg/kg) va CPhGs (125, 250 va 500 mg/kg) bilan davolash sezilarli darajada kamaygan. AST[PAST < 0,001,="" o'tgan="">< 0,001,="" o'tgan="">< 0,001,="" o'tgan="">< 0,001,="" mos="" ravishda]="" va="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," mos="" ravishda]="" jigar="" fibrozisratlarida.="">

Model kalamushlarda HA, LN, PC va IV-C darajalari sezilarli darajada oshdi [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{{39}="" 01,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0,001,="" mos="" ravishda].="" model="" guruhi="" bilan="" taqqoslaganda,="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023]," ln="" darajalari="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," mos="" ravishda],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26}="" }}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296" mos="" ravishda]="" va="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" kalamushlarda="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001]="" turli="" doza="" guruhlari="" (125,="" 250="" va="" 500="" mg/kg)="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" va="" cphg="" tomonidan="" sezilarli="" darajada="" kamaydi.="" )="">

Gip kontent va TGF- 1

Jigar to'qimalarida Hyplevelsni o'lchash orqali kollagen tarkibi ham aniqlandi. 4-jadvalda ko'rsatilganidek, model guruhidagi o'rtacha Hyp darajasi normal guruhga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi, ammo BJRG guruhida va turli xil CPhG dozalari guruhlarida u sezilarli darajada kamaydi.

Sichqonlarda model guruhining TGF{0}} jigardagi kontsentratsiyasi sezilarli darajada oshdi [P < 0.001].="" model="" guruhi="" bilan="" solishtirganda,="" tgf-="" 1="" musbat="" dori="" darajasi="" va="" turli="" cphg="" doza="" guruhlari="" sezilarli="" darajada="" kamaydi="" [p="" tgf-="" 1="">< 0,001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0,001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0,001,="" ptgf-="" 1="">< 0,001,="" mos="" ravishda].="" natijalar="" 4-jadvalda="">

Histopatologik tekshirish

H&E va Masson trikromi bilan bo'yalgan oddiy jigar to'qimalarining bo'limlarini kuzatishda aniq jigar lobullari va jigar sinusoidlari namoyon bo'ladi. Model kalamushlarda jigar to'qimalarining tuzilishi buzilgan, jigar to'qimalari va jigar sinusoidlari ko'p miqdorda biriktiruvchi to'qima bilan almashtirilgan. Shu bilan birga, davolash guruhida model guruhiga qaraganda ko'proq normal sitoarxitektura va kamroq biriktiruvchi to'qima aniqlandi.

H&E bo'yash

Oddiy guruhda anormal portal sohalari va jigar sinusoidlarisiz jigar lobulalarining strukturaviy yaxlitligi kuzatildi. Jigar kordlari tartibli tarzda joylashtirilgan, yadrosi dumaloq va tiniq edi. Yadrolar hujayraning markazida joylashgan bo'lib, ko'p sitoplazmaga ega. Faqat portal maydonida oz miqdorda tolali to'qimalar mavjud (2a-rasm).

Model guruhida lobulyar struktura jiddiy shikastlangan. Jigar hujayralari engil suvli degeneratsiyani ko'rsatdi, asosan balonli degeneratsiya va/yoki yog'li degeneratsiya. Yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasining shakllanishi, keng tolali to'qimalarning giperplaziyasi, ko'p sonli tolali septumning shakllanishi, bo'lingan lobulalar va jigar hujayralarining sezilarli darajada ko'payishi kuzatildi. jigar fibrozi (2b-rasm).

Model guruhi bilan taqqoslaganda, turli xil CPhGlarda yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasining kamayishi kuzatildi. Shuningdek, jigar hujayralarining nekrozi va yog'li degeneratsiyasi, shuningdek, fibrozning engillashishi kuzatildi. CPhGs kalamushlarda BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozi patologiyasini sezilarli darajada yumshatdi, jigar hujayralarining shishishini engillashtirdi va gepatotsitlar nekrozini va yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasini samarali ravishda oldini oldi, bu esa CPhGs BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozisiga himoya ta'sirini ko'rsatadi. (2c-f-rasm).

Massonning trikromli bo'yalishi

Oddiy guruhda jigar to'qimalari normal edi. Jigar portali maydonida kam sonli ko'kkollagen tolalari mavjud bo'lib, jigar to'qimasi an'anaviy tarzda tuzilgan (3a-rasm). Oddiy guruhdagi jigar to'qimasi bilan solishtirganda, tolali to'qima markaziy varaqchada ko'payib, jigar parenximasiga kengayadi. Kollagen tolalari cho'zilgan va bog'langan va butun lobulani o'rab olgan va markaziy venani o'rab olgan. Ushbu ta'sirlar, gepatotsitlar fibrozi, lobulyar struktura shikastlanishi, periportal fibroz va psevdolobul shakllanishi (3b-rasm) model yaratilganligini tasdiqlaydi.

Model guruhi bilan solishtirganda, ijobiy dori nazorat guruhidagi kollagen tolalari periferik portal hududidan biroz tashqariga cho'zilgan (3c-rasm). Model guruhi bilan taqqoslaganda, turli xil CPhG dozalari guruhlaridagi kollagen tolalari sezilarli darajada kamaydi, tolalar proliferatsiyasi inhibe qilindi va jigar parenximasidagi tolali to'qimalarning ko'payishi sezilarli darajada kamaydi. Ushbu natijalar CPhG'lar kalamushlarni BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozidan himoya qilishini ko'rsatdi (3d-f-rasm).

Immunogistokimyoviy bo'yash

Muhimi, kollagen turi I va III kollagenning ifodasi jigar fibrozining rivojlanishida muhim rol o'ynaydi va ularning hosil bo'lishi va jigar to'qimasida to'planishi jigar fibroziga qarshi samaradorlikning muhim belgilovchisi bo'lib xizmat qilishi mumkin. Natijalar 5-jadvalda umumlashtirilgan.

Kollagen I turi

Oddiy guruh I kollagen turini, asosan, qon tomirlari va portal maydonini ifoda etdi. Model guruhi portal sohalarida kollagen turi I tomir fibrozni yuqori darajada ifodalagan. Disse bo'shlig'ida I turdagi kollagen bo'yalishi chiziq yoki yamoqli taqsimot sifatida kuzatildi. Kollagen bilan qoplangan tolali septa psevdolobulani hosil qiladi. Ushbu tajribalarda BJRJ (600 mg/kg) va CPhGs ning turli dozali guruhlari (125, 250 va 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6] uchun kamroq tolali septa hosil bo'ldi. }}.001, PCol I=0.023 va PCol I=0.044, mos ravishda]. Yarim miqdoriy natijalar shuni ko'rsatdiki, ularning kollagen turi I ifodasi model guruhi bilan solishtirganda sezilarli darajada past bo'lgan (4-rasm).

III turdagi kollagen

III turdagi kollagen normal guruhda zaif ifodalangan va portal va jigar venalarini o'rab turgan periferik sohalarda uzluksiz tolalar o'rniga oz miqdorda mayda sariq rang ko'rsatilgan (5a-rasm). Model guruhida kollagen tolalari asosan portal va tolali to'qimalarda joylashgan kuchli ifodani ko'rsatadigan keng va qalin kordlarni ko'rsatdi (5b-rasm).

BJRJ ning kollagen tolalari (600 mg / kg) va CPhG ning turli dozalari (125, 250 va 500 mg / kg) filamentli bo'lib, markaziy vena va portal sohalarida tarqalgan. Model guruhi bilan solishtirganda, kollagen tolalari sezilarli darajada kamaydi, binoni och va ingichka bo'lib, immunohistokimyoviy bo'yash zaif musbat edi (5c-f-rasm). Bu yarim miqdoriy natijalar shuni ko'rsatadiki, musbat va turli doza guruhlarida ijobiy ifodalangan hujayralar [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010 va PCol III=0.037, mos ravishda] model guruhidagilardan farqli edi.

TGF- 1

Oddiy kalamush jigar hujayralarida TGIF- 1 kam ifodalangan. Ekspressiya oz sonli interstitsial hujayralar bilan chegaralangan (6a-rasm). Model guruhida TGF{2}} ifodasi portal sohasida, tolali bo'shliqlarda, jigar yulduzsimon hujayralarida, yallig'lanish hujayralarida, sinusoidal devorda va sitoplazmada keng tarqalgan. Muayyan portal maydoni jigarrang-sariq rangga ega bo'lgan kuchli ijobiy ifodani ko'rsatdi (6b-rasm)

BJRJ (600 mg/kg) va CPhGlarning turli doza guruhlari (125, 250 va 500 mg/kg) ning portal sohasida va tolali septalarida oz miqdorda ifoda bor edi. Ushbu guruhlardagi ijobiy bo'yash darajasi model guruhiga nisbatan sezilarli darajada kamaydi. Fibröz septa va yallig'lanish hujayralarining sitoplazmasidagi interstitsial hujayralardagi bo'yash kamaydi (6c-f-rasm). Yarim miqdoriy natijalar shuni ko'rsatdiki, BJRJ va CPhGlarning turli doza guruhlari [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" mos="" ravishda]="" model="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="">

Maqolada aytib o'tilganidek, TGF{0}} jigar fibrozining patofiziologiyasida muhim sitokin bo'lib, hujayradan tashqari matritsa ishlab chiqarishni rag'batlantiradi [19]. Model guruhida TGF- 1 darajasi jigar fibrozining og'irligiga mos ravishda oshganini ko'rsatdik. Jigardagi TGF- 1 ifoda darajalari sarum TGF- 1 darajalariga mos edi. Bu shuni ko'rsatadiki, CPhGlar ECM sintezi va parchalanishida ishtirok etib, TGF- 1 ifodasi tufayli jigar fibrozini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin.

I-toifa kollagen, III-toifa kollagen va TGF- 1 ifodasi jigar fibrozining patologik jarayonini aniqlashi mumkin. Davolash guruhlarida ularning ifoda darajalari sezilarli darajada kamaydi va CPhGlar kollagenaza faolligini yaxshilashi, jigar ECM sintezi va degradatsiyasining dinamik muvozanatini saqlab turishi, shu bilan jigar fibrozining shakllanishini kechiktirishi va oldini olishi mumkinligini ko'rsatdi.

HSC-T6 hujayralariga dori aralashuvidan keyin NF-kB p65 va kollagen I ifodasi

Jigar fibrozining signallarini tavsiflash uchun RT-PCR tahlili orqali jigarda ikkita asosiy tartibga soluvchi gen aniqlandi. Ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, nazorat guruhidagi tHSC-T6 hujayralarida NF kB va kollagen turi I mRNK darajasi past. Aksincha, TGF - 1 HSC-T6 hujayralarini NF-kB (P < 0.01)="" va="" col-i="" (p="">< 0,01)="" mrnk="" ni="" sezilarli="" darajada="" ko'tarish="" uchun="" induktsiya="" qildi.="" nazorat="" guruhidagilar.="" cphg="" ning="" turli="" konsentratsiyalari="" mavjud="" bo'lganda,="" 100="" ug/ml="" uchun="" nf-kb="" p65="" [p="" nf-kb="0.001," 75="" ug/ml="" uchun="" p="" nf-kb="0.002" natijalari="" ,="" 50="" ug/ml="" uchun="" p="" nf-kb="0.007" va="" 25="" ug/ml="" uchun="" p="" nf-kb="0,012" mos="" ravishda]="" va="" col-i="" [p="" col-i="" {{32]="" }}.006,="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019," mos="" ravishda]="" bu="" mrnklarning="" qisqargan="" ifodalarini="" koʻrsatdi="" (="">

HSC-T6 hujayralariga dori aralashuvidan keyin kollagen I darajasining Western blot tahlili

8-rasmda turli eksperimental guruhlarning HSC-T6 hujayralarida kollagen I oqsilining ifoda darajalari ko‘rsatilgan. Kollagen I oqsilining ifoda darajasi CPhG ning turli doza guruhlarida (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, va 25 ug/ml) TGF- 1 guruhi bilan solishtirganda.

Munozara

CPhGs an'anaviy xitoy o'simlik dorisi sifatida ishlatiladigan Cistanche ildizpoyasidan ajratilgan va tozalangan feniletanoid glikoziddir. So'nggi yillarda CPhGshad jigar shikastlanishlarini oldini olishda kuchli qobiliyatga ega ekanligi ko'rsatildi [20]. Shu sababli, biz CPhGlarning kalamushlarda BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozi tomonidan gepatit fibroziga inhibitiv ta'sir ko'rsatadimi yoki yo'qligini tekshirishni maqsad qildik. BJRG odatda Xitoyda jigar fibrozisi uchun terapevtik dori sifatida ishlatiladi. U toshbaqa qobig'idan qilingan. Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis va boshqalar Qi va qonni to'ldirish, charchoqni yo'qotish, tugunlarni yumshatish ta'siriga ega. Bundan tashqari, oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, u erta jigar fibrozini blokirovka qilish, yog 'saqlovchi hujayralar ko'payishini inhibe qilish va kollagen sintezini kamaytirishning aniq funktsiyasiga ega [21]. Shuning uchun BJRG ushbu tadqiqotda ijobiy dori sifatida ishlatilgan.

BSA in'ektsiyalari bilan qo'zg'atilgan kalamushlarda jigar fibrozining patologik o'zgarishlari inson portali sirrozidagiga o'xshaydi [22]. CPhGlar dozaga bog'liq ravishda jigar fibrozi darajasini engillashtirdi va HSC ning miofibroblastga o'xshash hujayralarga aylanishini inhibe qildi, sarum ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 va jigar indekslarining yuqori darajasini pasaytirdi va kollagen ekspressiyasini sezilarli darajada bostirdi. Jigar to'qimalarida I, kollagen III va TGF- 1.

Jigar fibrozining bosqichlari HA, LN va IV-C darajalari bilan bog'liq bo'lib, ular marker sifatida jigar fibrozi darajasini aniqlashda rol o'ynashi mumkin [23]. Xabar qilinishicha, HA hujayradan tashqari matritsaning asosiy manbai hisoblanadi. IV-C bazal membrananing asosiy elementi sifatida ko'p miqdorda sintezlanadi va jigar sirrozining oldingi bosqichlarida katta miqdorda to'planadi. Sarumdagi LN va IV-C darajalari bazal membrananing aylanish tezligining indekslari bo'lib, portal va sinusoidal kapillyarlarda fibroz darajasini ko'rsatadi [24]. PC III jigar fibrozi va erta tsirroz diagnostikasi belgisidir, ammo uning sezuvchanligi va o'ziga xosligi yuqori emas va ko'plab manbalarda offibrozning turli bosqichlari o'rtasida sezilarli farq yo'q [24, 25]. Ushbu tadqiqot xuddi shunday natijaga erishdi.

Bundan tashqari, H&E va Massonning trikromli bo'yalgan bo'limi kuzatuvlarida jigar lobullari va jigar sinusoidlari bilan ajralib turadigan normal jigar to'qimalari namoyon bo'ladi. Model guruhidagi jigar to'qimalarining tuzilishi buzilgan, jigar to'qimasi va jigar sinusoidi katta miqdordagi biriktiruvchi to'qima bilan almashtirilgan. Biroq, namunaviy guruh bilan solishtirganda davolash guruhlarida sezilarli yaxshilanish kuzatildi.

Eng muhimi, kollagen turi I va III kollagen ekspressiyasi jigar fibrozining rivojlanishida muhim rol o'ynaydi, ularning bloklanishi jigar fibrozining oldini olish va davolash mumkin. Shuning uchun jigar to'qimalarida I va III turdagi kollagenlarning paydo bo'lishi va to'planishi jigar fibroziga qarshi samaradorlikning muhim determinanti bo'lib xizmat qilishi mumkin. TGF- 1, shuningdek, jigar shikastlanishida muhim profibrogen sitokin bo'lib, ko'p farmakologik ta'sirga ega bo'lgan biologik faol [26]. To'qimalarning gomeostazini saqlab qolish uchun bu harakatlar o'rtasidagi muvozanat talab qilinadi. TGF 1 ning aberrant ifodasi jigar kasalliklari patogenezida ishtirok etadi [27, 28]. Ma'lumki, TGF- 1 jigar fibrozining dastlabki bosqichlarida ishtirok etadigan hal qiluvchi sitokindir. Oksidlovchi stress TGF- 1 ni qo'zg'atadi, natijada ikkinchisi ECM ishlab chiqarish va cho'kishni rag'batlantiradi [29]. Shuning uchun jigar fibroziga qarshi dori ishlab chiqarishning samarali strategiyalaridan biri bu anti-TGF- 1 agentlarini aniqlashdir. Immunogistokimyoviy tahlil shuni ko'rsatdiki, I-toifa kollagen, III-toifa kollagen va TGF- 1 ifodalari jigar fibrozining patologik jarayonini aniqlashi mumkin. Davolash guruhlarida kollagentip I, kollagen III va TGF- 1 ifodalari kamayadi, ular ayniqsa yuqori dozali CPhG davolash guruhida sezilarli darajada past bo'lgan va CPhGs samarali kollagen turi I, III kollagen turi ekanligini ko'rsatadi. , va TGF{14}} inhibitori. Taxminlarga ko'ra, CPhGs kollagenaza faolligini yaxshilaydi, ECM sintezi va degradatsiyasining dinamik muvozanatini saqlaydi, shu bilan jigar fibrozining shakllanishini kechiktiradi va oldini oladi.

CPhG'lar nafaqat kalamushlarda BSA tomonidan qo'zg'atilgan gepatikfibrozni yaxshilashi mumkin, balki in vitro HSC faollashuvini inhibe qilish bilan ham bog'liq bo'lishi mumkin. HSC faollashuvi fibrogenezning hal qiluvchi bosqichini ifodalaydi deb hisoblanadi. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatdiki, CPhGlarni 25 dan 100 ug / ml gacha yuborish HSCda NF-kB p65, kollagen I mRNK ifodasi va kollagen I proteini ifodasini sezilarli darajada susaytirdi.

NF-kB infektsiya yoki stimulga qarshi immunitet reaktsiyasini modulyatsiya qilishda muhim rol o'ynaydi [30]. Jigar hujayralarida NF-kB ning to'planishi yallig'lanish sitokinlari / vositachilarining to'planishiga olib kelishi mumkin, bu esa fibrozning rivojlanishiga olib keladi [31, 32]. Bundan tashqari, kollagen ham sezgir indeks bo'lib, fibroz darajasini aks ettiradi va tolali jigardagi umumiy oqsilning taxminan 50 foizini tashkil qiladi [33]. Natijada, biz jigar fibroziga qarshi molekulyar mexanizm NF-kB ekspressiyasining CPhG vositachiligida inaktivatsiyasi bilan bog'liqligini taxmin qildik, bunda foyda BSA bilan zararlangan jigar to'qimalarida immunotoksiklikni va yallig'lanish stressini susaytirishning sinergik roliga hissa qo'shadi, dismeliorativ funktsiyani tuzatishga yordam beradi.

Xulosa

Xulosa qilib aytganda, bizning tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatadiki, CPhGlar kalamushlarda BSA tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozining darajasini sezilarli darajada susaytiradi. Uning mexanizmi hech bo'lmaganda qisman CPhGlarning ECM tarkibiga inhibitiv ta'siri va ECM degradatsiyasini rag'batlantirishi va/yoki I tip kollagen, III kollagen sintezi va TGF ifodasini bevosita inhibe qilish bilan bog'liq bo'lishi mumkin{{0} }}. Shuning uchun biz CPhGlarni sog'liqni saqlash mahsulotlarida yoki inson jigari fibrozining oldini olish uchun klinik dori-darmonlarda qo'llash mumkinligini kutdik. CPhGlarning jigar fibroziga qarshi kuchli dori sifatida samaradorligini aniqlash uchun kelgusi tadqiqotlar talab etiladi.

Qisqartmalar

CPhGs: sistanxdan anol glikozidlar;

BSA: sigir zardobi albumini;

HSC-T6: jigar yulduzsimon hujayralari;

Gip: gidroksiprolin;

BJRG: CompoundBiejiarangan planshetlari;

TGF- 1: 1 o'sish omilini o'zgartirish;

ALT: Alanineaminotransferaza;

AST: aspartat aminotransferaza;

HA: gialuron kislotasi;

LN: Laminin; PC III: III turdagi prokollagen;

IV-C: IV turdagi kollagen;

NF-kB: faollashtirilgan B hujayralarining yadro omili kappa-engil zanjirni kuchaytiruvchisi;

RT-PCR: teskari transkriptaza-polimeraza zanjiri reaktsiyasi;

SDS-PAGE: Natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforezi.

Raqobatdosh manfaatlar

Mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar

Mualliflarning hissalari

TL, JZ, SPY, LM, MT va SLZ tajribalarni o'ylab topdi va loyihalashtirdi. SPY, TL va JZ ma'lumotlarni tahlil qildi. SPY va JZ qo'lyozmani yozdilar. TL, LM va JZ qo'lyozmani ko'rib chiqdi. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmani o'qib chiqdilar va tasdiqladilar.

Tasdiqlash

Ushbu tadqiqot Xitoy Milliy Tabiatshunoslik Jamg'armasi (81260624) tomonidan qo'llab-quvvatlandi. Mualliflar professor Tao Liuga ushbu maqolani yozishda taklif qilgan yaxshilanishlari uchun o'zlarining samimiy minnatdorchiliklarini bildiradilar.

Muallif tafsilotlari

1Toksikologiya boʻlimi, Shinjon tibbiyot universiteti, 393-son Xinyi yoʻli, Urumchi 830011Xinjon Uygʻur avtonom viloyati, Xitoy. 2Uygʻur tibbiyotining asosiy laboratoriyasi, Shinjon MateriaMedica instituti, Urumchi 830004, Xitoy. 3No. 140 Sinxua janubiy yo'li, Tyanshan tumani, Urumchi 830000Xinjang-Uyg'ur avtonom viloyati, Xitoy.

Tekshirish uchun shu yerni bosingCistanchetubulosamahsulotlar

Ma'lumotnomalar
1. Koen-Naftali M, Fridman SL. Surunkali jigar kasalligi bo'lgan bemorlarda yangi antifibrotik terapiyaning hozirgi holati. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Fridman SL. Jigar yulduzsimon hujayralari va jigar fibrozi. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
3. Ernandes-Xea V, Fridman SL. Jigar fibrozining patogenezi. Annu Rev Patol. 2011;6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Ko'rib chiqish maqolasi: sirozning qaytarilishi. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Xitoy fanlar akademiyasi. 23-nashr. Xitoy: Xitoy florasi tahririyati; 2013. p. 1–16.
6. Xitoy Xalq Respublikasi sanitariya vazirligining Xitoy farmakopeyasi komissiyasi. Xitoy farmakopeyasi, 1-qism. Xitoy: Kimyo sanoati nashriyoti; 2010. p. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Tadqiqot taraqqiyotifeniletanoidglikozidlardanCistanchetubulosa. Markaziy Janubiy Pharm. 2012;10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) ning Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii) glikozidlari tomonidan qo'zg'atilgan sichqonlarda reproduktiv toksiklikka ta'siri. J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Chjan P, Tan C, Ni H va boshqalar. Tamarix hohenackeri Bungedan olingan ACE va trombotsitlar agregatsiyasi inhibitörleri (mest o'simlik).HerbaCistanches) Shinjonda oʻsadi. Pharmacogn mag. 2014;10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P va boshqalar. Ekinakozid bilan boyitilgan ekstrakti yordamida sichqonlarda dekstran sulfat natriy qo'zg'atadigan kolitni yaxshilash.Cistanchetubulosa. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.
11. Vong HS, Ko KM. Herba Cistanches H9c2 kardiyomiyositlarida mitoxondriyal nafas olish natijasida hosil bo'lgan reaktiv kislorod turlari tomonidan hujayra glutation-qaytarilish aylanishini rag'batlantiradi. Pharm Biol. 2013;51(1):64–73.
12. Chjan SJ, Liu L, Yu JY. ARP: Herbie Cistanchesda echinacoside va acteosidni bir vaqtda aniqlash uchun RP-HPLC usuli. Chin Pharm J 2004; 39(10): 740-741.
13. Chju QG, Fang BW, Zhu QN, Vu HS, Fu QL. Sigir zardobidagi albumin tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozining immunitetini o'rganish. Chin J Pathol. 1993;22:121–2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. Cichorium glandulosum ekstraktlarining CCl4-induktsiyali jigar fibroziga ta'siri. Eron Qizil Yarim Oy Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Vang YH, Luo JF va boshqalar. Dodonaea viscosa dan klerodan diterpenoidlari va prenillangan flavonoidlar. J Asian Nat Prod Res. 2010;12(1):7–14.
16. Li WW, Song XW, Vang HW, Shen BS, Vang QC. Surunkali gepatit B bilan og'rigan bemorlarda NF-kB va jigar fibrozining patologik bosqichining korrelyatsiyasi. Chin J Immunol. 2013;29(3):251–4.
17. Chjan GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Chju ZJ. Panax notoginsengning umumiy saponinlarining kalamushlarda jigar fibroziga qarshi ta'siri. Acta Academiae Medicinae Militaris Uchinchi darajali. 2007;29:2212–4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, MacLennan CA va boshqalar. Membran antigenlari (GMMA) uchun umumlashtirilgan modullarning oqsil miqdorini aniqlash uchun kolorimetrik tahlillarni miqdoriy aminokislotalar tahlili bilan solishtirish. Mol biotexnol. 2015;57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. Jigar fibrozi patogenezida o'sish omilini- 1 o'zgartirish rolini tushunishdagi yutuqlar. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010;18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z va boshqalar. Akteozidning Bacillus Calmette-Guerin plus lipopolisakkarid tomonidan qo'zg'atilgan immunologik jigar shikastlanishiga himoya ta'siri. Planta Med. 2009;75(14):1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. Fufang Biejia Ruangan tabletkalarining in vivo va in vitroda jigar fibroziga ta'siri. Jahon J Gastroenterol. 2013;19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. Sichqonlarda immunologik induktsiyalangan jigar fibrogenezida o'sish omili 1 va uning retseptorini o'zgartirishning roli va ularga kordiseps polisaxaridining ta'siri. Chin J Gepatol. 1998;6:232–3.

23. Xu GG, Luo CY, Vu SM, Vang CL. Jigar bosqichlari o'rtasidagi bog'liqlikfibroz va sarum biokimyosi darajasi. HBPD INT. 2002;1:246–8.Siz va boshqalar. DARU Farmatsevtika fanlari jurnali (2015) 23:52 12 sahifadan 13-bet

24. Liu J, Vang JY, Lu Y. Jigar fibrozini tashxislashda sarum fibroz belgilari. ChinJ Intern Med. 2006;145:475–7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP va boshqalar. Jigar fibrozining tashxisida noinvaziv parametrlarning kombinatsiyasini dastlabki o'rganish. Chin J Gepatol. 2001;9:261–3.

26. Chen YL, Li ZY. TGF- 1, PDGF-BB, CTGF va fibrozli surunkali gepatit B o'rtasidagi munosabat. Chin J Diffic Compl Cas. 2010;9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D va boshqalar. Boswellia serrata va Salvia miltiorrhiza ekstraktlari TGF-beta1 pastga regulyatsiyasi orqali sichqonlarda DMN keltirib chiqaradigan jigar fibrozini kamaytiradi. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012;16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Xu YY va boshqalar. Gipenozidlarning kalamushlarda uglerod tetraklorid tomonidan qo'zg'atilgan jigar fibrozida TGF- 1/Smad yo'liga ta'siri. Intern J Integr Med. 2013;1:1–6.
29. Chjan BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Vang H. Ko'p gepatotoksik omillar tomonidan qo'zg'atilgan kalamush jigar fibroziga qarshi berberinning antioksidant mexanizmi bilan himoya qilish. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008;35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. Yadro omili kappa B signalizatsiya yo'li: metabolizmni yallig'lanish bilan birlashtirish. Trends Cell Biol. 2012;22(11):557–66.
31. Luedde T, Shvabe RF. Jigarni bog'laydigan shikastlanish, fibroz va gepatotsellyulyar karsinomada NF-kB. Nat Rev Gastroenterol Gepatol. 2011;8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabo G. Jigar kasalliklarida tollga o'xshash retseptorlar. Adv Clin Chem. 2013;59:155–201.
33. Vang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. Ko'k meva sharbatining parhez qo'shilishi metallotioninning jigar ifodasini kuchaytiradi va kalamushlarda jigar fibrozini susaytiradi. PLoS One. 2013;8, e58659.