Formononetin JAK/STAT modulyatsiyasi va immunitetni muvozanatlash orqali otoimmün prostatitni yumshatadi: CP/CPPS va TCM Cistanche ekstrakti qo'shimchalari uchun ta'siri
Dec 10, 2025
Maqsad:Formononetin (FN) eksperimental otoimmun prostatitning (EAP) sichqoncha modelida JAK/STAT signalizatsiya yo'llari orqali T yordamchi 1 (Th1) hujayra differentsiatsiyasi va makrofag polarizatsiyasini qanday tartibga solishini o'rganish.
Usullari:Qirqta erkak semiz bo'lmagan diabetik (NOD) sichqonlari tasodifiy ravishda to'rt guruhga ajratildi: normal nazorat, EAP modeli nazorati, past dozali FN (LFN, 50 mg / kg) va yuqori dozali FN (HFN, 100 mg / kg). Oxirgi uchta guruhda EAP to'liq Freund yordamchisida (CFA) emulsiyalangan prostata antijenlarini (PAgs) teri ostiga yuborish orqali induktsiya qilingan. Modellashtirishdan so'ng, LFN va HFN guruhlari mos ravishda 50 yoki 100 mg / kg / kun da intragastrik FN ni oldi; normal va model nazorat karboksimetilselüloz natriy (CMC-Na) oldi. Davolash boshlanganidan keyin 42-kuni sichqonlar evtanizatsiya qilindi va to'qimalar yig'ildi. Prostata patologiyasi HE binoni bilan baholandi; Prostatadagi Th1 hujayralarining differentsiatsiyasi va makrofaglarning polarizatsiyasi immunofluoresans bilan ikki marta bo'yash orqali baholandi (interferon- [IFN-] bilan CD4; induksiyalangan azot oksidi sintaza [iNOS] va CD206). Taloqdagi Th1 hujayra va makrofaglar nisbati oqim sitometriyasi va sarum IFN- va o'simta nekroz omili (TNF-) darajalari Elishay tomonidan o'lchandi. Prostata to'qimalarida fosforlangan (p) -JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 va STAT1 Western blot usuli bilan aniqlandi.
Natijalar: Model nazorati bilan solishtirganda, ikkala FN dozasi glandular epiteliya hujayralarining yanada tartibli joylashishiga olib keldi, prostata yallig'lanish ko'rsatkichlarini sezilarli darajada kamaytirdi (P <0,05), Th1 hujayralari va M1 makrofag belgilarining ulushini kamaytirdi (P <0,05) va M2 makrofag belgilarini ko'paytirdi (P <0,05 prostatalarda). LFN va HFN guruhlarida sarum IFN- va TNF- darajalari sezilarli darajada kamaydi (P <0.05). Molekulyar darajada prostata to'qimalarida p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2 va p-STAT1/STAT1 nisbatlari sezilarli darajada kamaydi (P <0,05), bu FN JAK/STAT signalini modulyatsiyalash, immun yoki dam olish muvozanatini rag'batlantirish orqali EAPda terapevtik ta'sir ko'rsatishini ko'rsatadi.
Xulosa:FN JAK/STAT signalizatsiya yo'llarini inhibe qilish va Th1 differentsiatsiyasi va makrofag polarizatsiyasini tartibga solish orqali EAPni engillashtiradi. Ushbu topilmalar, an'anaviy xitoy tibbiyoti (TCM) qo'shimchalariga bo'lgan qiziqish ortib borayotgani bilan birga, immunitetni modulyatsiya qilish va tos a'zolaridagi og'riqlarni qo'llab-quvvatlash uchun Cistanche ekstrakti qo'shimchalari, qat'iy, tengdoshlar tomonidan ko'rib chiqilgan sharoitlarda keyingi tekshirishga loyiq ko'p maqsadli strategiyani taklif qiladi.
Kalit so‘zlar:formononetin;otoimmün prostatit; yallig'lanish reaktsiyasi; JAK/STAT signalizatsiya yo'llari; sichqonlar;TCM o'simlik Cistanche ekstrakti qo'shimchasi; immunomodulyatsiya
TCM o'simlik Cistanche ekstrakti qo'shimchasi
Mahsulotlar ro'yxatini tekshiring
Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Kirish
Surunkali prostatit/surunkali tos a'zolarining og'riq sindromi (CP/CPPS) erkaklarning 5-10% ga ta'sir qiladi va barcha prostatit holatlarining taxminan 90% ni tashkil qiladi. Ayniqsa, yosh va o'rta yoshli erkaklar orasida keng tarqalgan bo'lib, birinchi navbatda qorinning pastki qismida, perineum va tos mintaqasida og'riqlar bilan namoyon bo'ladi, ko'pincha pastki siydik yo'llarining belgilari va ba'zan erektil disfunktsiya bilan birga keladi. Hozirgi vaqtda birinchi darajali davolash usullari orasida nonsteroid yallig'lanishga qarshi dorilar (NSAID), antibiotiklar va adrenergik retseptorlari blokerlari alohida yoki kombinatsiyalangan holda mavjud. Biroq, yuqori takrorlanish darajasi ko'plab bemorlarning ushbu rejimlardan norozi bo'lishiga olib keladi. Shu sababli, yangi terapevtik aralashuvlar va CP/CPPS patogenezini chuqurroq o'rganish shoshilinch ravishda zarur.
CM o'ti Cistanche ekstrakti qo'shimchasi Foydasi
Ko'payib borayotgan dalillar to'plami immunitetning buzilishi CP/CPPS rivojlanishida hal qiluvchi rol o'ynashini ko'rsatadi. Bemorlarda odatda prostata to'qimalarida T-limfotsitlar va monotsitlarning keng infiltratsiyasi va prostata bezining sekretsiyasida leykotsitlarning ko'payishi kuzatiladi, ularda CD4+ T-limfotsitlar va makrofaglar ustunlik qiladi. Klinikadan oldingi ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, immunosupressiv strategiyalar CP / CPPSda yallig'lanish va og'riqni engillashtirishi mumkin. Shunday qilib, leykotsitlar infiltratsiyasini va yallig'lanishga qarshi javobni nishonga olish simptomlarni yo'qotish uchun samarali bo'lishi mumkin. Formononetin (FN), bir nechta TCM o'simliklaridagi asosiy bioaktiv izoflavon antioksidant va yallig'lanishga qarshi xususiyatlarga ega. FN CP/CPPSni yaxshilay oladimi yoki yo'qmi, noaniq qolmoqda. Bu erda biz sichqonchaning EAP modelida FN ning terapevtik ta'sirini baholadik. Integral yondashuvlarga klinik qiziqishning ortib borishi bilan bir qatorda, biz TCM o'tlaridan Cistanche ekstrakti qo'shimchalari tos a'zolaridagi og'riq sindromlarida immunomodulyator va yallig'lanishga qarshi yordam uchun o'rganilayotganligini ta'kidlaymiz; Ushbu tadqiqotning diqqat markazida bo'lmasa-da, ular FNni kengroq TCMga asoslangan terapevtik landshaftda kontekstuallashtiradilar.
Materiallar va usullar
Hayvonlar
6–7 haftalik erkak NOD sichqonlari Shanxay anʼanaviy xitoy tibbiyot universiteti (SUTCM) Eksperimental hayvonlar markazidan olingan (litsenziya SYXK [Hu] 2020-0009; sertifikat SCXK [Jing] 2021-0006). Hayvonlar 12 soat yorug'lik / 12 soat qorong'i davrlarda oziq-ovqat va suvga ad libitum kirish huquqiga ega bo'lgan. Barcha tartib-qoidalar SUTCMning hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish bo'yicha institutsional qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (Tasdiqlash raqami PZSHUTCM2301040003).
Reagentlar va dorilar
Formononetin (MedChemExpress, HY‑N0183); Freundning to'liq yordamchisi (CFA; Sigma-Aldrich, F5881); fosfat tamponlangan sho'r suv (PBS); sigir sarum albumini (BSA); o'ta sezgir ECL to'plamlari (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH va DAPI ga antikorlar (Hujayra signalizatsiya texnologiyasi, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9174, #51); RIPA buferi va BCA protein tahlili (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); HE binoni to'plami (Servicebio, GP1031); iNOS va CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC sichqonchaga qarshi CD3, FITC sichqonchaga qarshi CD4, pe sichqonchaga qarshi IFN‑ (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Asboblar
Elektroforez apparati (E11001, Bio-Rad); lazerli skanerlash konfokal mikroskop (LSM 780, Zeiss); CytoFLEX oqim sitometri (Bekman Koulter).
EAP modelini yaratish
Bir haftalik moslashishdan so'ng, sichqonlar to'rt guruhga (n=10) tasodifiy ajratildi: nazorat, model, FN past dozasi (50 mg / kg) va FN yuqori dozasi (100 mg / kg). EAP oldingi usullar bo'yicha induktsiya qilingan. Prostata antijenlarini (PAg) o'z ichiga olgan supernatant Sprague-Dawley kalamush prostata gomogenatidan tayyorlangan va 1:1 nisbatda CFA bilan aralashtiriladi. 0 va 28-kunlarda sichqonlar CFA (150 mkl/sichqoncha) bilan emulsiyalangan PAg (300 ug/sichqoncha; EAP guruhlari) yoki PBS (nazorat) ning ikkala orqa oyoq tagida, pastki orqa qismida va quyruq bazasida teri ostiga in'ektsiya oldi. FN guruhlari kunlik intragastrik FN (50 yoki 100 mg / kg) oldi; nazorat va model guruhlari hajmiga mos keladigan CMC-Na oldi. Tajriba 42-kuni yakunlandi, keyin insoniy evtanaziya.
HE prostata to'qimasini bo'yash
Prostata bezlari 4% paraformaldegidda mahkamlangan, suvsizlangan, kerosinga solingan va 5 mkm da kesilgan. Bo'limlar HE to'plami yordamida bo'yalgan va konfokal mikroskop bilan tasvirlangan. Yallig'lanish o'rnatilgan mezonlar asosida 0-3 ball bilan baholandi, 0 - yallig'lanish yo'qligini va 3 - yallig'lanish hujayralarining aniq infiltratsiyasini ko'rsatadi.
Th1 hujayralari va makrofaglar uchun oqim sitometriyasi
Bir hujayrali suspenziyalar 0,5% BSA bilan PBS da tayyorlandi va saqlangan. Yuzaki va hujayra ichidagi bo'yash APC anti-CD3, FITC anti-CD4 va PE anti-IFN-dan foydalangan holda standart protokollarga muvofiq amalga oshiriladi. Hujayralar 50 ng / ml PMA, 1 ug / ml ionomisin va 5 ug / ml brefeldin A bilan 37 gradusda 4 soat davomida rag'batlantirildi, so'ngra hujayra ichidagi 4 daraja 30 daqiqa davomida bo'yaldi. Ma'lumotlar CytoFLEX da olingan va FlowJo bilan tahlil qilingan.
Makrofaglar uchun immunofluoresans bo'yash
Ruxsat etilgan prostata bo'limlari deparafinizatsiya qilindi, antigen olishdan o'tkazildi va 30 daqiqa davomida 10% echki zardobi bilan bloklandi. Birlamchi antikorlar (iNOS, CD206) bir kechada 4 daraja haroratda qo'llanildi. PBS yuvilgandan so'ng, ftorofor bilan belgilangan ikkilamchi antikorlar qorong'ida 37 daraja haroratda 1 soat davomida qo'llanildi. Yadrolar xona haroratida 5 daqiqa davomida DAPI bilan bo'yalgan, so'ngra PBS yuvish va floresan mikroskop uchun o'rnatish.
Sitokinlarni o'lchash
Sarum IFN‑ va TNF‑ miqdori ishlab chiqaruvchilarning ko'rsatmalariga muvofiq Elishay to'plamlari yordamida aniqlandi.
Western Blot
Prostata to'qimalari RIPA buferida (proteaza va fosfataza inhibitörleri bilan) lizing qilindi. Protein konsentratsiyasi BCA tahlili bilan o'lchandi. Tegishli foizli jellar tayyorlandi; teng miqdorda oqsil elektroforezlangan va PVDF membranalariga o'tkazilgan. Birlamchi antikorlar (p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH; hammasi 1:1000) 4 gradusda bir kechada inkubatsiya qilindi, so‘ngra HRP-konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar bilan yuvib, inkubatsiya qilindi (h:15105). Tarmoqlar kengaytirilgan xemiluminesans orqali vizualizatsiya qilindi va tasvirga tushirildi. Nisbiy oqsil ifodasi densitometrik tahlil bilan hisoblab chiqilgan.
Statistik tahlil
Ma'lumotlar GraphPad Prism 9.0 yordamida tahlil qilindi. Bir tomonlama ANOVA bir nechta guruhlarni taqqoslash uchun ishlatilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida taqdim etiladi; P 0,05 dan kam yoki unga teng statistik ahamiyatga ega deb hisoblanadi.
Munozara
Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, formononetin gistopatologik yallig'lanishni yumshatadi, Th1 polarizatsiyasini bostiradi, makrofag fenotiplarini yallig'lanishga qarshi M1 dan pro-rezolyutsiya M2 ga o'tkazadi va EAP modelida prostata to'qimalarida JAK1 / 2-STAT1 fosforilatsiyasini pasaytiradi. Tizimli IFN- va TNF-ning kamayishi FN ning yallig'lanishga qarshi va immunoregulyatsion ta'sirini qo'shimcha ravishda tasdiqlaydi. Bu natijalar ishemiya-reperfuziya va ateroskleroz modellarida FN modulyatsiya qiluvchi JAK/STAT yo‘llari haqidagi oldingi hisobotlarga mos keladi, bu esa saqlangan yallig‘lanishga qarshi mexanizmlarni ta’kidlaydi. TCMning kengroq kontekstida integratsiyalashgan parvarish yo'llari ba'zida immunomodulyatsiya, charchoq va urogenital qo'llab-quvvatlash uchun tekshirilgan Cistanche (Rou Cong Rong) ekstrakti qo'shimchalari kabi botanikalarni o'z ichiga oladi. Garchi Cistanche ekstrakti bu erda sinovdan o'tkazilmagan bo'lsa-da, kelgusida nazorat qilinadigan tadqiqotlar FNni standartlashtirilgan TCM o'simlik Cistanche ekstrakti qo'shimchalari bilan JAK/STAT bilan bog'liq yallig'lanish va tos a'zolaridagi og'riqlar natijalari bo'yicha potentsial sinergiyani o'rganish uchun solishtirishi yoki birlashtirishi mumkin. Har qanday klinik tarjima dalillarga asoslangan standartlarga, sifat nazorati ostidagi manbalarga va xavfsizlik monitoringiga mos kelishi kerak.
Xulosa
Formononetin JAK/STAT signalizatsiyasini inhibe qilish va Th1 differentsiatsiyasi va makrofag polarizatsiyasini tartibga solish orqali eksperimental otoimmün prostatitni engillashtiradi. Ushbu topilmalar FN va potentsial qo'shimcha TCM strategiyalarini, masalan, Cistanche ekstrakti qo'shimchalari - CP/CPPS uchun immunomodulyatsion aralashuvlar sifatida, qat'iy, ekspertizadan o'tgan klinikadan oldingi va klinik tadqiqotlarda tasdiqlashni kutmoqda.
Ma'lumotnomalar
[1] He SL, Chjan ZJ, Vu JH va boshqalar. CP / CPPS bilan og'rigan bemorlarda erektil disfunktsiyaning psixologik alomatlarga ta'siri. Hunan Normal Universiteti (Tibbiyot fanlari) jurnali, 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Surunkali prostatit / surunkali tos og'rig'i sindromi: baholash va terapiyani ko'rib chiqish. Prostata saratoni va prostata kasalliklari, 2016, 19 (2): 132-138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B va boshqalar. CP / CPPS uchun akupunktur samaradorligi: randomizatsiyalangan sinov. Internal Medicine Annals, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco QK, Turk T, Jung JH va boshqalar. CP/CPPSni davolash uchun farmakologik bo'lmagan aralashuvlar. Tizimli sharhlarning Cochrane ma'lumotlar bazasi, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A va boshqalar. Surunkali bakterial prostatit va CP / CPPS diagnostikasi va davolash: konsensus yo'riqnomasi. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT va boshqalar. CP/CPPS uchun diagnostika va boshqaruv strategiyalari. Giyohvand moddalar va qarish, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Chjan M, Liang C. CP/CPPS: Boshqa otoimmun kasallikmi? Immunologiya va terapiya arxivi Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Surunkali tos og'rig'i sindromining immun vositachilari. Tabiat sharhlari Urologiya, 2014, 11 (5): 259-269.
[9] Appiya SM, Xan FU, Naveed M va boshqalar. CP/CPPS uchun aralashuvlar: Biz qayerdamiz va keyin nima bo'ladi? Yevropa farmakologiya jurnali, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Chjan Y, Chen Q va boshqalar. Formononetin JAK2/STAT3 orqali miya yarim ishemiya-reperfuziya bilan bog'liq yallig'lanishdan himoya qiladi. Biomeditsina va farmakoterapiya, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Vang J. Formononetin: Neyronlarni himoya qilish yo'li. Integrativ nevrologiyadagi chegaralar, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S va boshqalar. Formononetin ApoE-/− sichqonlarida KLF4-SRA o'zaro ta'siri orqali aterosklerozni susaytiradi. Teranostika, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D va boshqalar. Ichak mikroflorasi propionat orqali EAPda Th17/Treg farqlanishini modulyatsiya qiladi. Immunologiyadagi chegaralar, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L va boshqalar. EAP sichqonlarda o'rganish xotirasining buzilishi va neyroplastik o'zgarishlarni keltirib chiqaradi. Uyali va molekulyar neyrobiologiya, 2020, 40 (1): 99-111.
[15] Chjan Y, Feng R, Chen S va boshqalar. CXCR7 ning EAP shikastlanishi va fibrozga sababchi ta'siri. Xalqaro immunofarmakologiya, 2025, 144: 113368.
